专利名称：高纯度氯化两面针碱的制备及其质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种天然药物领域，具体涉及一种高纯度氯化两面针碱的制备及其质量控制方法。
背景技术：
两面针(Zanthoxylum nitidum (Roxb.) DC.),属芸香科两面针植物的干燥根,是我国南方的特有植物，是《中华人民共和国药典》收载的常用中药，为广西大宗主产优势药材之一，具有良好的行气止痛、活血化瘀、祛风通络作用，是医药家首选常用之药物，广泛应用于中医处方、中成药及精细化工产品中。近年来年需求量日益增加，使用两面针药材作原料的产品有全国著名品牌“两面针中药牙膏”、“三九胃泰”、“金鸡胶囊”、“复方两面针含片”、“两面针镇痛片”、“正骨水”、“中华跌打丸”、“活络止痛丸”等多个品种。两面针为广西特色药材，其性味辛、苦、微温，小毒，具有祛风通络、胜湿止痛、消肿解毒等作用，现代研究证明两面针具有消肿止痛、抗菌等活性，对于心血管系统、神经系统以及平滑肌等都有显著的药理作用；同时又在抗癌方面有开发价值。广西两面针产业年销售收入曾达10多亿元，两面针产品已成为振兴地方经济的特色产业之一。氯化两面针碱是两面针活性成分之一，是《中华人民共和国药典》规定的指标性成分，氯化两面针碱作为两面针及其产品的化学对照品，是质量控制的技术关键，众多企业、科研和检验部门都需要高纯度的氯化两面针碱对照品，其市场需求很大，由于氯化两面针碱在两面针药材中的含量很低，提取分离技术要求很高、难度很大。本发明进行氯化两面针碱中药化学标准品制备及其质量控制技术，解决高纯度氯化两面针碱化学对照品的问题，对中药现代化的作用是显而易见的，具有重大的实际意义和学术价值。公开文献报道了许多氯化两面针碱提取的方法，如:1.题名阳离子树脂纯化两面针中氯化两面针碱作者卢凌春方琳乔龙盛京，广西医科大学药学院刊名时珍国医国药，2010,21 (11):2779 - 2781.`文摘目的筛选富集纯化氯化两面针碱的最佳树脂及最佳工艺。方法通过静态吸附-解吸的方法，以氯化两面针碱和总生物碱的吸附率和解吸率为指标，综合评判确定最佳纯化工艺。结果Ls006树脂对氯化两面针碱的分离效果最好。通过Ls006树脂分离纯化后，终产品中氯化两面针碱的纯度大于90%，保留率达到56.84%。结论采用Ls006阳离子树脂分离纯化两面针中氯化两面针碱，操作简单，纯化效果突出。
2.题名正交实验优选两面针的提取工艺作者雷鹏刘韶李新中戴智勇黄晓亮，中南大学湘雅学院刊名中医药导报，2005，11 (5):71-74.文摘采用正交实验法，以氯化两面针碱转移率为评价指标，对两面针的提取工艺进行优选。发现用水提取两面针，氯化两面针碱的转移率相当低，不到30%，而用乙醇提取，氯化两面针碱的转移率可达70%，故确定提取溶媒用乙醇。选择乙醇浓度、溶媒用量、提取时间3个因素，每个因素设3个水平。正交实验结果表明，最佳提取工艺条件为两面针药材用60%乙醇提取两次，第一次9倍量，提取2h，第二次7倍量，提取1.5h。3.题名两面针提取工艺研究作者吕洁卢晓慧黄韵然梁美宜周毅生，广东药学院刊名广东药学院学报，2011,27 (2):133 — 136.文摘目的优选两面针药材的最佳提取工艺。方法采用正交试验，以乙醇体积分数、乙醇用量、提取次数、和提取时间作为优选因素，以出膏率和氯化两面针碱转移率为综合指标，确定合理的醇提取工艺。结果最佳提取工艺条件是:乙醇体积分数是70%，乙醇用量为8倍，提取4次，每次1.5h。结论优化得到的提取工艺稳定可行，为生产提供了实验依据。题名两面针抗肿瘤有效成分的研究作者黄治勋李志和，广西医药研究所刊名化学学报，1980，38 (6):535 — 542.文摘两面针根用95%乙醇在60°C温提取四次，每次4h，过滤，合并滤液，减压回收乙醇得浸膏。此膏用5%乙酸反复捏溶，静置滤液，析出沉淀，减压滤去沉淀，沉淀用95%乙醇洗涤，得青黄色沉淀。将此沉淀溶于温水中，氨水氨化，氯仿萃取。回收氯仿，残留物溶于盐酸中，放置一段时间析出粗结晶。将粗结晶溶于热甲醇，活性碳脱色，水浴回流后趁热过滤，滤液置·于60°C保温瓶中结晶，析出黄色针状结晶。滤取结晶，经甲醇重结晶，得氯化两面针碱，得率为0.149%。题名两面针化学成分的研究1:具有抗癌活性生物碱的分离和生物碱丙的结构研究作者王馨玫刊名中山医学院学报，1980，
I(4):342.文摘用甲醇热回流提取，减压回收甲醇得浸膏。用氯仿反复研磨浸膏，所得沉淀用甲醇溶解，加盐酸至PH为2，放置后析出淡绿色针状结晶，为氯化两面针碱，得率为
0.2% — 0.3%ο目前虽然人们研究提取氯化两面针碱的方法较多，各种方法不一样，但是很多提取氯化两面针碱的方法存在着纯度低、收率低或生产成本高的不足之处，纯度均未达到中药化学对照品的要求，即纯度大于98%，且没有氯化两面针碱纯度与质量控制方法，无法满足高纯度氯化两面针碱化学对照品的需要。
发明内容
本发明的目的正是针对上述现有技术中所存在的不足而专门研制的一种高纯度氯化两面针碱的制备方法及质量控制方法，该制备方法不仅能提高氯化两面针碱纯度，且能降低生产成本，得到的氯化两面针碱纯度大于98%、质量好，可以作为化学对照品或标准品，保证质量控制。本发明是从芸香科花椒属植物两面针(Zanthoxylum nitidum (Roxb.) DC.)的干燥根中经提取、分离、精制、纯化而制得的氯化两面针碱，其化学名、分子式、结构式如下:
中文名:氯化两面针碱
化学名:2，3—二甲氧基一12 —甲基一(1,3)—苯并二恶茂并(5,6 — C)菲唳氯化物(2，3-dimethoxy-12-methyl-[I, 3]benzodioxolo[5, 6-c]phenanthridin-12_iumchloride)
英文名:Nitidine chloride 分子式=C21H18NO4Cl 结构式:
权利要求
1.一种高纯度氯化两面针碱制备方法，其特征在于:包括以下工艺过程:以粉碎后的两面针根为原料，加酸性乙醇溶液回流提取三次，第一次加酸性乙醇10 - 15倍量，加热回流2 — 5小时；第二次和第三次加酸性乙醇5 - 8倍量，分别加热回流2 - 5小时；合并酸醇提取液，回收乙醇，继续浓缩至稠膏状，用氯仿反复研磨，所得沉淀用甲醇溶解，加盐酸至pH调节为2 - 3，放置后析出淡黄绿色针状结晶，用甲醇重结晶，即可得到氯化两面针碱粗结晶，再用甲醇溶解，超声30 - 60分钟，加热至80 - 100°C，趁热过滤，滤液放冷，静置24小时重结晶，析出纯度90 - 95%淡黄色细针状结晶，再将粗结晶用制备高效液相色谱法分尚纯化，色谱柱为C 一 18柱，利用乙臆一 0.1% 二氟乙酸为流动相洗脱，流速为5 — 10 mL/min，检测波长为271nm，柱温为25 — 35 V ;收集氯化两面针碱组分，并对所收集的每一份洗脱液利用HPLC检测，合并保留时间相同而且纯度在90% - 98%之间和纯度大于98%以上的氯化两面针碱组分，减压浓缩，得到纯度90% - 98%之间以及大于98%以上的氯化两面针碱； 所述的酸性乙醇的盐酸重量含量为10 - 30%盐酸，乙醇重量含量为40 - 80%, pH=3 一4。
2.根据权利要求1所述的高纯度氯化两面针碱制备方法，其特征在于:所述的乙腈一0.1%三氟乙酸流动相洗脱重量配比为20:80 40:60。
3.根据权利要求1所述的高纯度氯化两面针碱制备方法，其特征在于:所述的HPLC检测为:色谱柱:C 一 18柱；流动相:乙腈:0.1%三氟乙酸；检测波长:271nm ;流速:0.6 mL/min 1.5mT,/mi η η
4.一种高纯度氯化两面针碱的质量控制方法，其特征在于:采用薄层色谱分析方法和HPLC分析方法。
5.根据权利要求4所述的高纯度氯化两面针碱的质量控制方法，其特征在于:所述的薄层色谱分析方法是:薄层板:硅胶G — 0.8%羧甲基纤维素钠，三种展开剂系统:系统(I)氯仿-甲醇比例(12:1 - 6:1);系统(2)氯仿-乙醇比例(10:1 - 5:1);系统(3)乙酸乙酯-乙醇比例(15:1 — 8:1),点样:在同一板上，按20mg、40mg、60mg、80mg、IOOmg不同的浓度梯度点样，置展开缸饱和15min,分别展开,展距:15cm,定位:喷以10%硫酸乙醇溶液,在105°C加热至斑点显色清晰，置紫外光(365nm)下检视，在薄层色谱中，三种展开剂系统，五个不同浓度的梯度点样，均为单一斑点，未见杂质斑点。
6.根据权利要求4和5所述的高纯度氯化两面针碱的质量控制方法，其特征在于:所述的HPLC分析方法:色谱条件:C - 18柱，4.6X 25cm ;流速:0.6-1.5ml/min ;进样量:，10 - 20ml ;面积归一化法定量；系统(I)流动相:乙腈:0.1%三氟乙酸溶液比例(33:67 —，20:80);检测波长:27Inm;系统(2)流动相:乙腈:0.1%三氟乙酸比例(33:67 - 20:80)；检测波长:254nm;系统条件(3)流动相:甲醇:0.1%三氟乙酸比例(50:50 — 30:70);检测波长:27 Inm ； 含量与纯度测定:精密称取于105°C干燥至恒重的对照品适量，加流动相制成每Iml含Img的溶液，在测定条件下，注入液相色谱仪，用两个流动相溶剂系统分别记录色谱图至主成分的出峰保留时间的2.5倍以上，用面积归一化法计算含量，结果测定对照品含量均在，98%以上.杂质检查，除溶剂峰外，杂质峰面积总和结果均小于2.0% ； 所述的峰纯度检测:取对照品适量，按系统(1)，在高效液相色谱仪上，用二极管阵列DAD检测器进行峰纯度检查，HPLC色谱图(>98%)，其色谱峰的紫外吸收光谱图、三维图谱以及5点光谱图完全重 合，表明为单一纯物质峰。
全文摘要
一种高纯度氯化两面针碱的制备及其质量控制方法，其特征在于是先将两面针根粉碎，用酸性乙醇加热回流提取，乙醇提取物经氯仿反复研磨，所得沉淀用甲醇溶解，盐酸调pH，重结晶，得到氯化两面针碱粗结晶，再用甲醇重结晶，进一步提高纯度，用反相硅胶C－18柱制备高效液相色谱法分离，对所收集的每一份洗脱液利用分析型高效液相色谱仪检测，合并保留时间相同而且纯度在90%～98%之间和98%以上的氯化两面针碱组分，减压浓缩，即可分别得到纯度在90%～98%之间的氯化两面针碱和纯度大于98%的氯化两面针碱组分，并采用薄层色谱分析方法和液相色谱分析方法进行质量控制。该方法不仅能提高氯化两面针碱纯度，而且能降低生产成本。
文档编号C07D491/056GK103087070SQ20121004070
公开日2013年5月8日 申请日期2012年2月22日 优先权日2012年2月22日
发明者刘布鸣, 黄艳, 赖茂祥, 莫建光, 柴玲, 林霄, 陈明生 申请人:广西壮族自治区中医药研究院