专利名称：番荔枝内酯衍生物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及番荔枝内酯衍生物和该衍生物的制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
在全球各种疾病死亡统计中，癌症仅次于心血管疾病列第二位，约占总死亡人口的13%。在我国10大死因统计中，恶性肿瘤死亡人数在城市列第一位，在农村列第四位。WHO最近发布的数据显示，我国已经成为世界第二大癌症高发国，每年新增220万名癌症患者，约占全球癌症病人总数的20%。因此，癌症是当前危害人类健康的重大疾病。传统的肿瘤化疗药物对肿瘤细胞无明显特异性，在杀灭肿瘤细胞的同时往往对正常细胞产生毒害，有严重的毒副作用。定向作用于肿瘤细胞而不进入正常、健康细胞的靶向抗肿瘤药物研究已成为当前临床应用和研发的主流，有十余种直接作用于肿瘤生长相关特异性蛋白的小分子靶向药物已被FDA批准上市，还有100余个正处在临床试验中。另外，以肿瘤生长必需的营养素为靶向输送工具的营养素-药物偶联物在靶向抗肿瘤药物研发上也愈来愈受到重视。研究表明，癌细胞因其快速生长的特点而需要大量的营养素，比如生物素(biotin)、叶酸(folic acid)、不饱和脂肪酸(unsaturated fatty acid)等。这些营养素进入细胞需要膜受体介导，因此这些受体在癌细胞表面有比正常细胞较高的表达水平。具有抗癌活性的化合物可以通过化学方法与生物素、叶酸或不饱和脂肪酸等分子偶联，产生新的药物或药物前体，定向输送到癌细胞中而对正常细胞的影响则大大降低。这种将本不具有靶向作用的抗肿瘤药物通过与营养素偶联改造成具有靶向输送的药物亦是当前靶向抗癌药物的研究重点。目前，国际上已设计、合成了多个抗肿瘤药物与生物素或叶酸偶联物，如喜树碱-生物素、Taxol-生物素、丝裂霉素-叶酸、去乙酰长春花碱-叶酸、喜树碱-叶酸、5-FU-叶酸等，大多数偶联物的靶向抗肿瘤作用已被证明。虽然至今尚无一个这类靶向抗肿瘤药物用于临床，但现有研究已证明了其良好发展潜力。番荔枝内酯成分是番荔枝科植物特有的一类天然化合物。这类化合物不仅抗肿瘤活性强，其中Bullatacin和Squamocin的体外抗肿瘤活性分别是Taxol的300和80倍,而且作用机理新颖、对MDR肿瘤有效，曾被认为是“明日抗癌之星”。但由于这类化合物对肿瘤细胞的选择性较差、毒性较高、安全系数较低，国际上针对该类化合物的新药研究与开发一直未能取得实质性进展，至今无一个这类化合物进入临床试验。因此将番荔枝内酯化合物与营养素偶联使其具有靶向传输性，能够获得更具实用性的新番荔枝内酯衍生物。
发明内容
本发明的目的在于开发出一种新的番荔枝内酯衍生物，另一目的是开发出这种番荔枝内酯衍生物的制备方法，又一目的是开发出这种番荔枝内酯衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
我们通过酯化或酰化反应将邻双四氢呋喃环型番荔枝内酯化合物Bullatacin或Squamocin与生物素直接偶联,或先将生物素和不同的Linker连接获得具有Linker的长臂生物素，然后将长臂生物素与Bullatacin、Squamocin分别偶联，得到不同的偶联物，最后用硅胶柱层析、高效液相色谱层析等方法分离纯化，得到新的番荔枝内酯衍生物，这些衍生物对癌细胞的生长具有抑制作用，从而实现了本发明的目的。本发明的番荔枝内酯衍生物，特征是其结构由通式(I)表示:
权利要求
1 .以下通式(I)表示的化合物
2.权利要求I所述的化合物的制备方法，其特征是包括以下的步骤 将番荔枝内酯Squamocin与生物素进行酯化反应得到粗产物，粗产物先通过硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂作为洗脱剂，以体积比98 2、97 3、96 4、95 5、93 7、90 10的梯度进行洗脱，合并氯仿-甲醇体积比97 3、96 4、95 5洗脱部分得到流份1，合并氯仿-甲醇体积比93 7、90 10洗脱部分得到流份2，将流份I用高效液相色谱仪分离纯化，按保留时间依次得到流份3和权利要求I所述的化合物3 ;将流份3再用高效液相色谱分离纯化，按保留时间依次得到权利要求I所述的化合物I、化合物2 ;将流份2静置，析出的沉淀为权利要求I所述的化合物5，流份2滤去沉淀的母液用高效液相色谱纯化得到权利要求I所述的化合物4。
3.权利要求I所述的化合物的制备方法，其特征是包括以下的步骤 将番荔枝内酯Bullatacin与生物素进行酯化反应得到粗产物，粗产物先通过硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂作为洗脱剂，以体积比98 2、97 3、96 4、95 5、93 7、90 10的梯度进行洗脱，合并氯仿-甲醇体积比97 3、96 4洗脱部分得流份1，用高效液相色谱分离，按保留时间依次得到权利要求I所述的化合物15和流份2，流份2再用硅胶柱层析，用体积比4 I的石油醚-异丙醇混合溶剂作为洗脱剂，将薄层层析板上石油醚-异丙醇体积比2 I展开时比移值为O. 35的流份合并为权利要求I所述的化合物13，比移值为O. 47的流份合并为权利要求I所述的化合物14。
4.权利要求I所述的化合物的制备方法，其特征是包括以下的步骤 (1)将生物素、N-羟基琥珀酰亚胺和6-氨基己酸进行酰化反应得到6-生物素酰胺基己酸； (2)将步骤⑴得到的6-生物素酰胺基己酸与番荔枝内酯Squamocin进行酯化反应得到粗产物，粗产物先通过硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂作为洗脱剂，以体积比97 3、.95 5、93 7,90 10的梯度进行洗脱，合并氯仿-甲醇体积比95 5洗脱部分得到流份1，合并90 10洗脱部分得到流份2，流份I和流份2再分别用高效液相色谱分离，按保留时间流份I依次得到权利要求I所述的化合物6、化合物7和化合物8 ;流份2依次得到权利要求I所述的化合物9、化合物10和化合物11。
5.权利要求I所述的化合物的制备方法，其特征是包括以下的步骤 (1)将生物素、N-羟基琥珀酰亚胺和6-氨基己酸进行酰化反应得到6-生物素酰胺基己酸； (2)将步骤(I)得到的6-生物素酰胺基己酸与番荔枝内酯Bullatacin进行酯化反应得到粗产物，粗产物先通过硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂作为洗脱剂，以体积比97 3、95 5、92 8的梯度进行洗脱，合并氯仿-甲醇体积比95 5洗脱部分得到流份1，合并92 8洗脱部分得到流份2，流份I和流份2再分别用高效液相色谱分离，按保留时间流份I依次得到权利要求I所述的化合物16，化合物17和化合物18 ;流份2依次得到权利要求I所述的化合物19和化合物20。
6.权利要求I所述的化合物的制备方法，其特征是包括以下的步骤 (1)将生物素与己二胺进行酰化反应得到6-生物素酰氨基己胺；将番荔枝内酯Squamocin和丁二酸酐进行酯化反应得到粗产物，粗产物用娃胶柱层析得到Squamocin28- 丁二酸酯； (2)将步骤(I)得到的6-生物素酰氨基己胺与Squamocin28-丁二酸酯进行酰化反应得到粗产物，粗产物先用硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂作为洗脱剂，以体积比97 3、95 5、93 7的梯度进行洗脱，合并氯仿-甲醇体积比95 5、93 7洗脱部分，再用高效液相色谱分离，得到权利要求I所述的化合物12。
7.权利要求I所述的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及番荔枝内酯衍生物及其制备方法和抗肿瘤的用途，特征是其结构由通式(1)表示，其中R1，R2和R3中的一个或两个基团或R4，R2和R3中的一个或两个基团分别为羟基，其余基团为生物素酰氧基，或6-生物素酰氨基己酰氧基，或4-氧-4-(6-生物素酰氨基己胺)丁酰氧基，并且当R1为上述基团时，R4为H，当R4为上述基团时，R1为H，共涉及20个化合物。该衍生物是通过酯化或酰化反应将番荔枝内酯Bullatacin或Squamocin与生物素直接偶联，或先将生物素和不同的Linker连接获得长臂生物素，然后与Bullatacin、Squamocin分别偶联，最后用硅胶柱层析、高效液相色谱层析分离纯化而获得，其抗肿瘤活性比其母体化合物Bullatacin或Squamocin更强。
文档编号C07D495/04GK103254212SQ20121004007
公开日2013年8月21日 申请日期2012年2月21日 优先权日2012年2月21日
发明者吴萍, 史敬芳, 蒋子华, 魏孝义 申请人:中国科学院华南植物园