专利名称：治疗乙肝的中药及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种用于治疗乙肝的中药及其制备方法。
本发明治疗乙肝的中药配伍为三七80份、郁金240份、蒺藜240份、姜黄80份、大黄(酒制)128份、黄芩160份、蜈蚣224份、山药720份、五味子64份。
制备本发明治疗乙肝的中药方法依次包括以下步骤(1).三七粉碎成细粉，备用；(2).五味子粉碎后，用90％乙醇加热回流提取3次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成浸膏，干燥，粉碎成细粉，备用；(3).蒺藜、郁金、姜黄、黄芩、蜈蚣、山药加水煎煮40分钟，滤过，滤液备用；(4).用上述工序(3)的药渣再加水煎煮30分钟后，加入大黄再煎煮二次，每次30分钟，合并煎液，滤过；(5).将工序(3)、(4)之滤液合并，浓缩至60℃时相对密度为1.20的清膏，干燥，粉碎，加入上述工序(1)、(2)所得的两种细粉混匀，制成临床上口服可接受的任何剂型。
本发明中药主要通过口服方式施用于患者。
本发明中药以三七为君药，其性甘微苦温，入肝、胃经，具有止血散瘀、消肿定痛的功能，且能祛瘀生新；郁金、姜黄、蒺藜为臣药，其中郁金性寒味苦能行气化瘀。姜黄性温味辛，能活血祛瘀。蒺藜性温味苦，能疏肝理郁，三者同伍，助君药以行气理郁，且活血化瘀之功倍增；黄芩、大黄、蜈蚣、五味子、山药为佐，其中黄芩性寒味苦，能清热燥湿，清解余热。酒制大黄，性寒味苦能缓其通腑导滞之性，扬其活血通络之效，并能助君药化瘀通络之力，且能与黄芩共凑清热解毒之功。蜈蚣其性温味苦能直达病所，搜风解毒，散结通络。五味子性温味酸，能敛阴养营，并防姜黄，蜈蚣辛燥伤阴之弊。山药性平味甘，能健脾补虚，益气养胃，且能防大黄、黄芩苦寒，伤脾胃运化之功，故山药健脾固本，使其后天生化有源，并能运化水湿。因此，本发明中药共奏化瘀通络，清解余毒之功，通过中国医药科学医药生物技术研究所做的动物实验进一步验证了本发明具有抗乙肝病毒、抑制乙肝病毒复制、诱生干扰素、保肝降酶的显著作用且无毒副作用，是一种较好的治疗乙肝的中药。(一)、抗乙肝病毒实验实验1一日龄北京雏鸭静脉注射鸭乙肝病毒，7天后开始给鸭口服本发明中药胶囊10天，观察药物对鸭血清鸭乙肝病毒DNA的影响，实验数据见表1和表2。
表1 本发明中药治疗鸭乙肝病毒感染的效果(T0给药前，T5、T10给药第5天、第10天P3停药第3天、ACV无环鸟苷)实验 组别给药 鸭DHBV感染鸭血清DHBV-DNA水平(OD值)及变化％批次 方案 数DNA T0T5T10P3I 0 5X±SD 0.36±0.14 0.52±0.09 0.62±0.18 0.85±0.42(病毒对照) 变化％-44.44％ -73.22％-133.33％1g/kg Bid X 5X+SD 0.44±0.21 0.53±0.26 0.53±0.24 0.74±0.36
10 P0变化％ -20.45％ -20.45％ -68.18％3g/kg 5 X±SD0.43±0.270.40±0.290.56±0.280.24±0.17变化％ 6.98％-30.23％ 44.19％5g/kg 5 X±SD0.61±0.180.15±0.040.22±0.030.25±0.04变化％ 75.41％ 63.93％ 59.02％ACV 50mg/kg Tid X 5 X±SD0.59±0.890.25±0.110.228±0.15 0.106±0.0610 1P变化％ 57.63％ 61.36％ 82.03％II0同上 5 X±SD0.58±0.060.67±0.110.67±0.180.44±0.24(病毒对照) 变化％ -15.52％ -15.52％ 24.14％1g/kg Bid X 5 X±SD0.59±0.100.51±0.170.48±0.170.46±0.1010 P0变化％ 13.56％ 18.64％ 22.03％3g/kg5 X±SD0.97±0.040.37±0.230.44±0.110.26±0.10变化％ 61.86％ 54.44％ 73.20％5g/kg5 X±SD0.72±0.100.30±0.220.40±0.160.23±0.15变化％ 58.33％ 44.44％ 68.06％III 0同上5 X±SD0.25±0.040.41±0.190.35±0.070.31±0.05(病毒对照) 变化％ -64.00％ -40.00％ -24.00％1g/kg Bid X 6 X±SD0.30±0.120.16±0.020.17±0.080.25±0.1210 P0 变化％ 46.67％ 43.33％ 16.61％3g/kg 5 X±SD0.51±0.170.29±0.030.22±0.050.26±0.10变化％ 43.14％ 56.86％ 49.02％5g/kg 5 X±SD0.43±0.070.28±0.090.19±0.090.19±0.13变化％ 34.88％ 55.01％ 55.81％表2上述三批实验平均值剂量组(g/kg) 实验批次 T5T10P31313.24 13.84 9.853317.33 27.02 55.475356.21 54.73 50.96从三批动物实验结果可见，大剂量组每天5g/kg口服，1天2次，10天，有非常显著的抑制鸭血清DHBV-DNA水平，用药第5天三批动物实验中，第一批动物抑制75.41％，第二批动物抑制58.33％，第三批动物抑制34.88％，第10天分别抑制63.93％，44.44％和55.81％，停药后3天抑制百分率分别为59.02、68.06、55.81，鸭血清DHBV-DNA比治疗前有显著下降，停药后也无反跳，统计学有非常显著意义，三批实验重复性好。中剂量组3g/kg也有一定效果，三批动物实验中，第一批动物抑制效果不明显，第二、第三批动物实验在服药后第5、10天和停药后3天也有显著抑制效果。每天服1g/kg，1天2次，10天无抑制作用为无效剂量。
结论本发明中药大中剂量在鸭体内能有效抑制乙肝病毒。实验27-17日龄DHBV感染血清DHBV-DNA阳性北京鸭处死取肝脏，做原代鸭肝细胞培养，加入不同浓度本发明中药。
(1).毒性试验加药第6天，观察细胞存活数目，计算药物对细胞的半数毒性和最大无毒浓度。实验数据见表3表3 本发明中药浸膏粉对鸭肝细胞的毒性药品 药物浓度(ug/ml) 细胞数目 死亡率 TD50(ug/ml)本发明中药10000++++ 01000 ++++ 0 ＞10000100 ++++ 00++++无环鸟苷 1000 + 75500 +++ 25 707.13250 ++++ 0125 ++++ 00++++本发明中药浸膏粉的最小有毒浓度及半数有毒浓度(TD50)大于10000ug/ml，无环鸟苷的半数有毒浓度为707.13ug/ml。
动物的急、慢性毒性实验测得口服本发明中药最大耐受量20g/kg，相当于人体临床本发明中药日用量的500倍，动物仍未发现异常反应，且用药后动物饮食正常，行为活泼，血常规、肝、肾、胃等病理切片，经统计学处理无显著性差异(P＞0.05)。
(2)对DHBV感染鸭肝细胞培养内DHBV-DNA的抑制作用在最小有毒浓度以下设4个剂量组3000ug/ml，1000ug/ml，333ug/ml，111ug/ml，可看出本发明中药对DHBV感染鸭原代肝细胞培养中DHBV的抑制作用。其实验数据见表4。表4本发明中药对DHBV感染鸭原代细胞培养中DHBV-DNA的抑制作用批次药物浓度(ug/ml) OD497抑制百分率ID50(ug/ml)13000 0.0990.031000 0.1880.653330.876.45 633.821111.0100 0.9323000 0.2776.921000 0.3074.363331.250 696.20 638.48±45.351111.169.090 1.1733000 0.2283.081000 0.2084.623331.2312.14 585.421111.5000 1.40阳性对照药 500 0.2054.57无环鸟苷 250 0.2152.27238.70125 0.3618.180 0.44实验表明本发明中药浸膏粉在浓度为3000ug/ml和1000ug/ml时有明显的抑制DHBV-DNA的作用，半数抑制浓度(ID50)为638.48/ug/ml，选择指数大于15.67(见表5)，较无环鸟苷高，说明本发明中药浸膏粉在DHBV感染鸭原代肝细胞培养中能较好地选择性抑制DHBV-DNA的合成，能有效地抑制鸭乙肝病毒DNA的复制。综合实验2列出表5。表5本发明中药在DHBV感染鸭细胞中的抗DHBV效果药品TD50ID50 SI(ug/ml) (ug/ml)本发明中药 ＞10000 638.48±45.35 15.67无环鸟苷 707.13 238.702.96结论本发明中药浸膏粉的最小有毒浓度及半数有毒浓度(TD50)大于10000ug/ml，半数抑制浓度(ID50)为638.4ug/ml，选择指数大于15.67能有效地抑制鸭乙肝病毒DNA的复制，无毒副作用。
三.本发明中药对人外周白细胞诱生干扰素的试验取新鲜人外周血分离血细胞，将白细胞悬液及不同浓度本发明中药1mg/ml、0.5mg/ml、0.1mg/ml孵育收集上清为干扰素粗品，测OD值以抑制50％病变浓度为有效浓度。实验数据见表6。表6实验批数 干扰素单位本发明药物浓度1mg/ml 0.5mg/ml0.1mg/mlI 1∶4 60％ 65.7％42.9％1∶8 51.4％57.1％28.6％1∶16 22.9％22.9％20％II 1∶4 65.5％62.1％1∶8 20.7％44.8％1∶16 27.6％31.1％实验结果表明在1mg/ml和0.5mg/ml浓度下能检测出诱生干扰素效果，有一定的诱生干扰素作用，以0.5mg/ml浓度最为适宜，可诱生干扰素6小时滴度80U±0单位/ml，说明本发明中药能诱生干扰素，可调节机体免疫功能。
四.对肝损伤的保护作用实验1.D-半乳糖胺试验昆明种小鼠18-22g，预先口服本发明中药浸膏粉3次，1小时后腹腔注射D-半乳糖胺800mg/kg，禁食16小时后，断头，测定血清谷丙转安酶(SGPT)及谷草转安酶(SGOT)，阳性对照组联苯双酯150mg/kg。结果见表7。表7 本发明中药浸膏粉对D-半乳糖胺引起小鼠肝损伤的保护作用组 别 SGPT u％±SD SGOT u％±SD正常对照 253±89581±101联苯双酯150mg/kg 1324±806**806±453**D-半乳糖胺对照 2444±982 1575±648本发明中药浸膏粉5g/kg 1442±830**761±514**本发明中药浸膏粉2.5g/kg1771±990**1256±556本发明中药浸膏粉1.25g/kg 2686±772**1338±398与对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01结果表明本发明中药2.5，5.0g/kg，对D-半乳糖胺所至小鼠肝损伤有保护作用。转氨酶明显降低。肝组织损伤明显减轻。
2.四氯化碳(CCl4)试验把上述试验1中的D-半乳糖对胺换成四氯化碳(CCl4)花生油溶液10ml/kg，试验结果见表8。表8 本发明中药浸膏粉CCl4小鼠肝损伤的保护作用组别 SGPT u％+SD SGOT u％±SD正常对照297±36 621±140CCl4对照 3467±1553 1632±502联苯双酯150mg/kg621±289**785±85**本发明中药浸膏粉5g/kg 632±316**809±92**本发明中药浸膏粉2.5g/kg 906±307**938±95**本发明中药浸膏粉1.25g/kg1725±935**1142±180与对照组比较**P＜0.01结果表明本发明中药1.25，2.5，5.0g/kg，对四氯化碳(CCl4)所至小鼠肝损伤均有保护作用，转氨酶明显降低，且有剂量效应关系，肝组织损伤明显减轻。
结论本发明中药具有保肝降酶作用。
由上所述可以看出本发明中药能搜风解毒、舒肝养胃、用于乙肝瘀血阻络、肝郁脾困、肝肾阴虚症，与现有技术相比，其显著的优点是该药品能诱生干扰素，可调节机体免疫功能，对乙肝及乙肝病毒持续携带者有良好的治疗效果，对于阻断肝病的慢性化发展，控制肝硬化、肝癌的发病率起到一定的防治作用，且药用安全，无毒副反应。
其制备方法依次包括如下步骤
(1).三七80g粉碎成细粉；(2).取五味子64g粉碎后，用90％乙醇加热回流提取3次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成浸膏，干燥，粉碎成细粉，备用；(3).蒺藜240克、郁金240克、姜黄80克、黄芩160克、蜈蚣224克、山药720克加水煎煮40分钟，滤过，滤液备用；(4).用上述工序(3)的药渣再加水煎煮30分钟后，加入大黄再煎煮二次，每次30分钟，合并煎液，滤过；(5).将工序(3)、(4)之滤液合并，浓缩至相对密度为1.20(60℃)的清膏，干燥，粉碎，加入上述工序(1)、(2)两种细粉混匀，制粒，干燥，装入胶囊，约制成1000粒。
本发明中药可以制成临床上口服可以接受的任何剂型，如固体剂型—片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂；膏状、流体状等。
权利要求
1.一种治疗乙肝的中药，其配伍为三七80份、郁金240份、蒺藜240份、姜黄80份、大黄(酒制)128份、黄芩160份、蜈蚣224份、山药720份、五味子64份。
2.一种制备权利要求1所述的治疗乙肝的中药方法，依次包括以下步骤(1).三七粉碎成细粉，备用；(2).五味子粉碎后，用90％乙醇加热，回流提取3次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成浸膏，干燥，粉碎成细粉，备用；(3).蒺藜、郁金、姜黄、黄芩、蜈蚣、山药加水煎煮40分钟，滤过，滤液备用；(4).用上述工序(3)的药渣再加水煎煮30分钟后，加入大黄再煎煮二次，每次30分钟，合并煎液，滤过；(5).将工序(3)、(4)之滤液合并，浓缩至60℃时相对密度为1.20的清膏，干燥，粉碎，加入上述工序(1)、(2)所得的两种细粉混匀，制成临床上口服可接受的任何剂型。
全文摘要
本发明公开了一种治疗乙肝的中药及其制备方法，该中药的配伍为三七80份、郁金240份、蒺藜240份、姜黄80份、大黄(酒制)128份、黄芩160份、蜈蚣224份、山药720份、五味子64份。本发明具有抗乙肝病毒、抑制乙肝病毒复制、诱生干扰素、保肝降酶的显著作用且无毒副作用，是一种较好的治疗乙肝的中药。
文档编号A61P1/00GK1435244SQ0311812
公开日2003年8月13日 申请日期2003年3月3日 优先权日2003年3月3日
发明者何述金 申请人:湖南新汇制药有限公司