专利名称：愈肝制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种愈肝制剂，用于治疗病毒性肝炎及肝病的口服药。
背景技术：
目前国内外病毒性疾病的发病率逐年增加，并出现艾滋病等新的免疫缺陷病。用于治疗这类疾病的药物品种大体分为两类类1.抗病毒药，2.免疫调节药，但都有其自身的问题，并且达不到治愈目的。因此研制出抗病毒效果好、副作用小的治疗药物，使医药界一个迫切的需要。
病毒性肝炎是一种世界性的常见病，我国属流行“重灾区”。据预测我国感染乙型肝炎者有1亿人以上，由乙型肝炎引起的肝功能不止常患者约3000万人，此外绝大部分肝癌患者有慢性肝炎病史，各种病毒性肝炎正严重的威胁着国人的健康，故慢性肝炎的治疗成为一个迫切需解决的重大问题。目前国内外用于病毒性肝炎及肝病治疗的药物品种大体分为三类(1)抗病毒药，主要有干扰素和几种核苷类似物，此类药物在停药后约6个月至1年内大部分病人会复发且药费昂贵；(2)免疫调节药，如转移因子、白细胞介素一2、胸腺肽等，此类药物治疗慢性肝炎疗效尚待肯定，药费昂贵且有副作用。(3)改善肝功能药，又称保肝药或抗肝细胞损伤药，如甘草甜素、联苯双酯、水飞蓟素等，复方甘草甜素制剂。
发明内容
本发明目的在于，根据国内外文献资料和中医、民族医专家多年的临床经验组成了以一枝蒿、贯叶金丝桃组成的治疗病毒性肝炎及肝病的复方愈肝制剂。该制剂采用分别对一枝蒿和贯叶金丝桃进行粉碎处理、提取、过滤、用喷雾干燥法制备浸膏，将一枝蒿浸膏进行脱色，洗脱浓缩后与贯叶金丝桃浸膏混合后采用常规方法制得口服固体剂型和液体剂型；该药经体内外抗病毒试验，其结果表明一枝蒿AR在5ug/ml对HBV DNA的平均抑制率为57.0±22.1％，其IC50为3.4±0.5ug/ml，阳性药1μM的拉米夫定(3TC)对HBV DNA的抑制率为67.2±16.4％。同时贯叶金丝桃的活性成分在治疗抑郁症、病毒性肝炎及肝病和艾滋病以及抗癌等方面具重要的利用前景。
本发明所述的愈肝制剂，含有一枝蒿、贯叶金丝桃，其中原料配比为一枝蒿为10-85％、贯叶金丝桃15-90％；该制剂的剂型为口服固体剂型和液体剂型。
愈肝制剂的制备方法，按下列步骤进行a、将一枝蒿10-85％粉碎，用医用乙醇回流提取3次，其中乙醇用量为占一枝蒿总量的4400％，减压回收乙醇，滤液至相对密度为0.9～1.30的浸膏，加石油醚，温度为30～60℃，脱脂至无色，残渣加醋酸乙酯萃取，减压回收醋酸乙酯得油状物，减压浓缩、真空干燥备用，其中一枝蒿有效部位酮酸和黄酮类含量为50-80％；b、将贯叶金丝桃15-90％粉碎，用医用乙醇回流提取3次，其中乙醇用量为占贯叶金丝桃总量的4400％，得贯叶金丝桃浸膏，干燥备用，其中贯叶金丝桃有效部位苯并二蒽酮类和黄酮类，含量为50-80％；苯并二蒽酮类包括金丝桃素、伪金丝桃素，异金丝桃素和它们的前体原金丝桃素；黄酮类包括槲皮素、金丝桃甙、阿曼托黄素、芦丁；c、将一枝蒿浸膏与贯叶金丝桃浸膏混合后采用常规方法制成口服固体剂型和液体剂型即可。
愈肝制剂作为制备治病毒性肝炎及肝病的应用。
本发明所述的愈肝制剂，大量临床资料表明，一枝蒿具有解毒、抗过敏、抗菌、抗病毒及保肝等功效。维吾尔医学临床用于肝炎、感冒、咽炎、扁桃体炎、眼炎的治疗。其中对肝炎和感冒的疗效更为显著。文献报道一枝蒿全草含有黄酮类、酮酸类、氨基酸类、甙类、多糖类、挥发油、多肽、生物碱等化合物，其中黄酮类含量为1.33％，其次是酮酸类。
贯叶金丝桃(HERBA HYPERICI PERFORAFI)为藤黄科植物贯叶金丝桃Hypericum peHoratum L.干燥的全草。夏季花盛开时，割取地上部分，晾干，切段，除去杂质。本品三级干热。功能与主治1 软化寒湿，通经利尿。用于寒性肿痛，小便不通，肺不利，腰腿疼痛，外敷可治烧伤及关节炎等。
该药材分布于中国新疆、中亚、欧洲等地，而我区是主要产区，而且新疆干燥少雨，日照充足、气温波动大，处于日照长、辐射强烈、紫外线丰富、水气量低，加之日温差大，夜间温度低，植物呼吸作用低微，所耗能量极少，因而光合作用有效积累高，相应活性成份也高。
本发明所述的愈肝制剂，该制剂体内外抗病毒试验为摘要为研究其抗乙型肝炎病毒的作用，本实验在乙型肝炎病毒基因转染的人肝癌细胞系2.2.15细胞中，研究其对细胞的毒性和对HBV DNA分泌的抑制效果。两次试验表明愈肝制剂320ug/ml开适2倍稀释，加入细胞培养8天，对细胞半数中毒浓度TC50为14.1ug/ml，最大无毒浓度TC0为5ug/ml。最大无毒浓度5ug/ml对HBV DNA的抑制率为54.1±9.7％，其半数抑制浓度IC50为3.57±0.53ug/ml。
目的为研究愈肝制剂抗乙型肝炎病毒的作用，本实验用愈肝制剂在乙型肝炎病毒转染的人肝癌细胞2.2.15细胞系培养中，检测其对乙型肝炎病毒HBV DNA的影响。
材料和方法一.药物愈肝制剂为棕褐色粉末。实验时用DMSO配成20mg母液4℃保存，使用时用2.2.15细胞培养液配成所需浓度。
二.2.2.15细胞乙型肝炎病毒(HBV)DNA克隆转染人肝癌细胞(Hep G2)的2.2.15细胞系，美国Mount Sinal医学中心构建，我室引进后自行传代培养。细胞用含胎牛血清10％，3％谷氨酚胺1％，G418 380μg/ml，卡那霉素50U/ml的Eagle’s MEM培养液，在37℃5％CO2温箱中培养，大约一周传代一次。
三.试剂及仪器放射性同位素α32P dCTP为亚辉生物医学工程公司，比活度111TBq/nmol；探针标记用的缺日标记试剂盒购自Promerga公司。酶标仪BIO-RAO 3550型；γ-计数仪为美国DPC公司产品。
四.实验方法1.药物对细胞毒性试验药物愈肝制剂为棕盒色粉末，用DMSO配成20mg/ml母液，使用时用2.2.15细胞培养液配成所需浓度，然后用培养液对倍稀释从320ug/ml加至2.5ug/ml加入96孔细胞培养板，每浓度3孔，每4天换同浓度药液，设无药物细胞对照组。以观察细胞病变为指标，8天显微镜下观察细胞病变，完全破坏为4；75％为3；50％为2；25％为1；无病变为0。计算每浓度药液平均细胞病变程度和抑制％。按Reed & Muench法计算半数有毒浓度(TC50)最大无毒浓度(TC0)2.药物对HBV DNA的抑制试验各浓度组药液的及细胞对照组的2.2.15细胞上清液按分子克隆实验技术方法提取其HBV DNA、各样品斑点杂交、放射自显影、测量各杂交点的A值后，计算抑制率。
3、选择指数(SI)SI＝TC50/IC50结果1.愈肝制剂在2.2.15细胞培养中的细胞毒性为观察愈肝制剂对乙型肝炎病毒基因转染的人肝癌2.2.15细胞的毒性，在接种2.2.15细胞后24小时，加对倍稀释药液，实验自320ug/ml开始320；160；80；40；20；10；5；2.5ug/ml，同时设正常细胞对照。4天换一次药液，维持8天，用显微镜观察细胞病变，按公式计算半数有毒浓度(TC50)和最大无毒浓度(TC0)见表1。TC50两批实验分另为14.1ug/ml，14.1ug/ml，平均半数有毒浓度(TC50)为14.1ug/ml，最大无毒浓度(TC0)为5ug/ml。
表1.愈肝制剂，2，3在2.2.15细胞培养内的毒性实验 实验 不同药物浓度mg/ml细胞病变 TC50TC0批次 方法320 160 80 40 20 10 5 2.5(ug/ml)1 CPE 444 4 1 1 0 014.15444 4 1 1 0 0444 4 1 1 0 0破环％ 100 100 100 100 25 25 0 02 CPE 444 4 1 1 0 014.15444 4 1 1 0 0444 4 1 1 0 0破坏％ 100 100 100 100 25 25 0 0两批平均 14.152.愈肝制剂在2.2.15细胞培养中对HBN DNA的抑制作用愈肝制剂5ug/ml；2.5ug/ml；1.25ug/ml，加入2.2.15细胞中培养，第8天对HBV DNA的抑制率愈肝制剂最大浓度5ug/ml对HBV DNA的抑制率为54.1±9.7％，其半数抑制浓度IC50为3.57±0.53ug/ml。选择指数SI为3.9。
表2.愈肝制剂在2.2.15细胞中第8天对HBV DNA的抑制作用实验批次药物浓度 A值(X±SD)HBV DNA(ug/ml) 抑制％IC50(ug/ml)I5 0.324±0.005**44.4 4.102.5 0.462±0.036 20.81.250.464±0.073 20.43TC 1μM0.200±0.019* 65.7细胞对照0.583±0.061II 5 0.273±0.068 63.8 3.042.5 0.451±0.023 40.31.250.594±0.099 21.33TC 1μM0.191±0.007 74.7细胞对照5 0.755±0.136结果3.55注试验组与照组比较 **P＜0.01，*P＜0.05结论1、愈肝制剂对2.2.15细胞培养的毒性愈肝制剂加入2.2.15细胞中培养8天，以细胞病变为指标，两批实验平均半数中毒浓度TC50为14.1ug/ml，最大无毒浓度TC0为5ug/ml。
2、愈肝制剂在2.2.15细胞培养内对HBV DNA的抑制作用愈肝制剂在2.2.15细胞中培养8天，最大无毒浓度5ug/ml对HBV DNA的抑制率为54.1±9.7％，阳性药1μM的拉米夫定(3TC)对HBV DNA的抑制率为70.2±4.5％。
表3.愈肝制剂对HBV DNA的抑制作用总结表细胞毒性 (ug/ml)HBVDNA HBVDNATC50 TC0 IC5.0ug/ml SI14.1 5 3.573.9
本发明所述的愈肝制剂组方中各味药材及其成分均有抗病毒的研究报道，制剂组方符合维医理论。前期基础研究已经证明愈肝制剂在临床上用于治疗病毒性肝炎及肝病等疾病效果明显。
具体实施例方式
实施例1a、取一枝蒿10％粉碎，用医用乙醇回流提取3次，其中乙醇用量为占一枝蒿总量的4400％，减压回收乙醇，滤液至相对密度为0.9的浸膏，加石油醚，温度为30℃，脱脂至无色，残渣加醋酸乙酯萃取，减压回收醋酸乙酯得油状物，减压浓缩、真空干燥备用，其中一枝蒿有效部位酮酸和黄酮类含量为50％，；b、将贯叶金丝桃90％粉碎，用医用乙醇回流提取3次，其中乙醇用量为占贯叶金丝桃总量的4400％，得贯叶金丝桃浸膏，干燥备用，其中贯叶金丝桃有效部位苯并二蒽酮类和黄酮类含量为80％；苯并二蒽酮类包括金丝桃素、伪金丝桃素，异金丝桃素和它们的前体原金丝桃素；黄酮类包括槲皮素、金丝桃甙、阿曼托黄素、芦丁；c、将一枝蒿浸膏与贯叶金丝桃浸膏混合后采用常规方法制得口服固体剂型和液体剂型即可。
该制剂作为制备治病毒性肝炎及肝病的应用。
实施例2a、将一枝蒿85％粉碎，用医用乙醇回流提取3次，其中乙醇用量为占一枝蒿总量的4400％，减压回收乙醇，滤液至相对密度为1.30的浸膏，加石油醚，温度为45℃，脱脂至无色，残渣加醋酸乙酯萃取，减压回收醋酸乙酯得油状物，减压浓缩、真空干燥备用，其中一枝蒿有效部位总酮酸和黄酮类含量为80％；b、将贯叶金丝桃15％粉碎，用医用乙醇回流提取3次，其中乙醇用量为占贯叶金丝桃总量的4400％，得贯叶金丝桃浸膏干燥备用，其中贯叶金丝桃有效部位苯并二蒽酮类含量为50％；苯并二蒽酮类包括金丝桃素、伪金丝桃素，异金丝桃素和它们的前体原金丝桃素；黄酮类包括槲皮素、金丝桃甙、阿曼托黄素、芦丁；c、将一枝蒿浸膏与贯叶金丝桃浸膏混合后采用常规方法制成口服固体剂型和液体剂型即可。
该制剂作为制备治病毒性肝炎及肝病的应用。
实施例3a、将一枝蒿75％粉碎，用医用乙醇回流提取3次，其中乙醇用量为占一枝蒿总量的4400％，减压回收乙醇，滤液至相对密度为1.0的浸膏，加石油醚，温度为40℃，脱脂至无色，残渣加醋酸乙酯萃取，减压回收醋酸乙酯得油状物，减压浓缩、真空干燥备用，其中一枝蒿有效部位总酮酸和黄酮类含量为70％；b、将贯叶金丝桃25％粉碎，用医用乙醇回流提取3次，其中乙醇用量为占贯叶金丝桃总量的4400％，得贯叶金丝桃浸膏，干燥备用，其中贯叶金丝桃有效部位苯并二蒽酮类和黄酮类含量为55％；苯并二蒽酮类包括金丝桃素、伪金丝桃素，异金丝桃素和它们的前体原金丝桃素；黄酮类包括槲皮素、金丝桃甙、阿曼托黄素、芦丁；c、将一枝蒿浸膏与贯叶金丝桃浸膏混合后采用常规方法制成口服固体剂型和液体剂型即可。
该制剂作为制备治病毒性肝炎及肝病的应用。
实施例4a、将一枝蒿25％粉碎，用医用乙醇回流提取3次，其中乙醇用量为占一枝蒿总量的4400％，减压回收乙醇，滤液至相对密度为1.30的浸膏，加石油醚，温度为55℃，脱脂至无色，残渣加醋酸乙酯萃取，减压回收醋酸乙酯得油状物，减压浓缩、真空干燥备用，其中一枝蒿有效部位总酮酸和黄酮类含量为55％；b、将贯叶金丝桃75％粉碎，用医用乙醇回流提取3次，其中乙醇用量为占贯叶金丝桃总量的4400％，得贯叶金丝桃浸膏，干燥备用，其中贯叶金丝桃有效部位苯并二蒽酮类和黄酮类含量为75％；苯并二蒽酮类包括金丝桃素、伪金丝桃素，异金丝桃素和它们的前体原金丝桃素；黄酮类包括槲皮素、金丝桃甙、阿曼托黄素、芦丁；c、将一枝蒿浸膏与贯叶金丝桃浸膏混合后采用常规方法制成口服固体剂型和液体剂型即可。
该制剂作为制备治病毒性肝炎及肝病的应用。
权利要求
1.一种愈肝制剂，其特征在于含有一枝蒿和贯叶金丝桃，其中原料配比为一枝蒿为10-85％、贯叶金丝桃15-90％；该制剂的剂型为口服固体剂型和液体剂型。
2.根据权利要求1所述的愈肝制剂的制备方法，其特征在于按下列步骤进行a、将一枝蒿10-85％粉碎，用医用乙醇回流提取3次，其中乙醇用量为占一枝蒿总量的4400％，减压回收乙醇，滤液至相对密度为0.9～1.30浸膏，加石油醚，温度为30～60℃，脱脂至无色，残渣加醋酸乙酯萃取，减压回收醋酸乙酯得油状物，减压浓缩、干燥备用，其中一枝蒿有效部位酮酸和黄酮类含量为50-80％；b、将贯叶金丝桃15-90％粉碎，用医用乙醇回流提取3次，其中乙醇用量为占贯叶金丝桃总量的4400％，得贯叶金丝桃浸膏，干燥备用，其中贯叶金丝桃有效部位苯并二蒽酮类和黄酮类，含量为50-80％；苯并二蒽酮类包括金丝桃素、伪金丝桃素，异金丝桃素和它们的前体原金丝桃素；黄酮类包括槲皮素、金丝桃甙、阿曼托黄素、芦丁；c、将一枝蒿浸膏与贯叶金丝桃浸膏混合后采用常规方法制成口服固体剂型和液体剂型即可。
3.根据权利要求1所述的愈肝制剂作为制备治病毒性肝炎及肝病的应用。
全文摘要
本发明涉及一种愈肝制剂，是根据中医、民族医专家多年的临床经验而制成的治疗病毒性肝炎及肝病的口服药。该制剂含有一枝蒿和贯叶金丝桃，采用分别对一枝蒿和贯叶金丝桃进行粉碎处理、提取、过滤、用喷雾干燥法制备浸膏，将一枝蒿浸膏进行脱色，洗脱、浓缩后与贯叶金丝桃浸膏混合采用常规方法制成口服固体剂型和液体剂型即可；该药经体内外抗病毒试验，其结果表明在治疗病毒性肝炎及肝病和艾滋病等方面具重要的利用前景；愈肝制剂在临床上用于治疗病毒性肝炎及肝病效果明显。
文档编号A61P1/00GK1572308SQ03159549
公开日2005年2月2日 申请日期2003年9月22日 优先权日2003年5月29日
发明者斯拉甫·艾白, 哈木拉提·吾甫尔 申请人:斯拉甫·艾白, 哈木拉提·吾甫尔