专利名称：一种粉尘螨口服液的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗呼吸系统过敏性疾病的口服药物，具体地说是提供一种粉尘螨口服液的制备方法。
背景技术：
50年来随着生活现代化变态反应性疾病，诸如哮喘、鼻炎、湿症的患病率在我国和全球持续急剧上升。哮喘防治策略分三个方面，变应原的回避、药物控制症状、免疫治疗调节机体敏感性。在美国和欧洲变应原特异性免疫治疗被认为是变态反应性疾病的病因疗法。国内外都有粉尘螨注射液治疗过敏性哮喘的报道，粉尘螨注射液作为免疫治疗的主要药物由上海医科大学研制的“准字”号药品已在国内使用，疗效显著。免疫治疗的机理主要是产生免疫耐受或阻断抗体，避免或减少变态反应发生。根据免疫学观点口服给药比皮下注射更易产生免疫耐受，舌下含服易被舌下丰富毛细血管吸收，口腔粘膜中的朗氏细胞能对变应原产生免疫性调节。免疫疗法由于疗程长(1-2年以上)，常年经常反复注射麻烦，必须要有相当的时间及人力、物力来保证，患者不易坚持，特别是哮喘间隙期易中断治疗，直接影响疗效，限制了它的推广。
发明内容
本发明目的是提供一种服用简便、疗效显著的治疗呼吸系统过敏性疾病的粉尘螨口服液的制备方法。
本发明的技术方案是以粉尘螨为原料按以下制备方法制成(1)粉尘螨灭活、清洗后，取含量在80％以上的螨材料去脂密封，(2)取去脂粉尘螨按重量份数1克螨材料加入80-150ml提取液提取，(3)常压过滤澄清液体，(4)除菌、过滤、分装。
螨材料使用丙酮去脂。
提取液是用30-50克氯化钠加入450-550ml蒸馏水配制而成。
粉尘螨口服液质量控制采用SDS-PAGE方法，对其的主要成人进行定性分析加以确定，采用My氏一凯氏微量定氮法对其主要成人即每毫升粉尘螨口服液中含量进行定量分析加以确定。粉尘螨口服液存放二年再用上述方法再进行定性、定量测定其结果无显著性差异。
一、粉尘螨口服液的药效学及急性毒性实验。
(一)粉尘螨口服液抗过敏作用的实验。
1.材料药品粉尘螨口服液，粉尘螨注射液规格均为1∶5000，天花粉为市售的。
动物及分组豚鼠为远交群品系，雌雄兼有。大白鼠Wistcl雌雄各半，均有江西医学院动物中心提供。动物分为四组，即一个对照组，三个给药组A小剂量组，口服液0.05ml；B大剂量组，口服液0.1ml；C注射液组，注射液0.1ml。
2.实验方法(1)离体回肠平滑肌过敏性收缩实验取体重180±15g豚鼠，在两后腿肌注各0.4ml的1mg/ml卵蛋白生理盐水，并腹腔注射1.0ml加以强化。一个月后，将致敏豚鼠击晕放备致死，取回肠末端一段，悬于DL-001型离体器官测定仪浴槽内恒温37℃的台式液中，并充以氧，描记回肠活动曲线，待基线稳定后进行抗原攻击。对照组加入1mg/ml卵蛋白液0.5ml。三个给药组均予先让动物接触粉尘螨液5分钟，然后再加入卵蛋白，观察结果。
(2)大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒实验A抗血清的制备 取健康大鼠，体重180+10g，抗原为天花粉溶于60％氢氧化铝凝胶液，浓度为5mg/ml，分别注射四足掌各0.1ml，注射后14天，断头取血，分离血清，置-40℃保存，临用前以生理盐水稀至1∶20备用。
B抗血清的接种和抗原攻击将1∶20的大鼠抗血清0.1ml注射于大鼠颅骨顶皮下组织，然后随机分成四组，即对照组生理盐水0.1ml，小剂量组口服液0.05ml，大剂量组口服液0.1ml，注射组注射液0.1ml，小时后分别给药。分钟后进行抗原攻击，由尾静脉注射天花粉伊文思兰液，再分钟后处死动物。
C颅骨骨膜的分离和肥大细胞观察大鼠颅骨骨膜分离及其肥大细胞计数观察参照谢氏报导的方法进行。
(3)大鼠被动皮肤过敏反应取健康大鼠40只，体重180±10g，乙醚麻醉后剪光背毛，将上述1∶20和1∶40抗血清分别皮内注射于鼠背部，每点0.1ml。然后将动物随机分成四组(即对照组，2个粉尘螨口服液组和粉尘螨注射液组)，按前述要求分别给药，一天一次，连续二天，小时后进行抗原攻击，即静脉注射内含天花粉1mg的0.5％伊文思兰液1ml，20分钟后断头处死动物，测定兰斑直径，并计算其抑制率。
(4)离体肺支气管灌流实验取体重250±20g豚鼠，每只肌注50％卵蛋白50mg，同时腹腔注射相同课题的卵蛋白。三周后切断动物颈动脉放血，迅速分离支气管，在肺上2cm左右剪断，连同心肺取出，置37℃含氧乐氏液中，将气管与三通管灌流装置连接，调节灌流速度为25ml/分钟。待稳定后依次给药，并记录每分钟的灌流量即20％卵蛋白液0.5ml；小计量组粉尘螨口服液0.05ml+卵蛋白液0.5ml，大剂量组粉尘螨口服液0.1ml+卵蛋白液0.5ml；注射液组粉尘螨注射液0.1ml+卵蛋白液0.5ml。并记录每分钟流出量。
3、试验结果(1)对致敏豚鼠离体回肠平骨肌过敏收缩的影响，粉尘螨口服液能显著性抑制回肠平滑肌过敏性收缩，且作用效果与粉尘螨注射液相同。(见表1)
表1 粉尘螨口服液对回肠收缩反应的影响组 别 剂量(ml) 回肠收缩(mm) 抑制率(％)卵蛋白对照组 22.2±2.1小剂量组卵蛋白+粉尘螨口服液0.05 16.5±2.0* 25.7大剂量组卵蛋白+粉尘螨口服液0.10 2.1±0.1** 90.5注射液组卵蛋白+粉尘螨注射液0.10 2.0±0.1** 91.0与对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01(2)粉尘螨口服液对大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒的影响粉尘螨口服液对大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒具有显著性抑制作用，其抑制程度与剂量呈正相关。与粉尘螨注射液作用效果相当。(见表2)表2粉尘螨口服液对肥大细胞脱颗粒的影响组别 剂量(ml) 未脱颗粒肥大 肥大细胞抑制率细胞数(个/mm)总数(个/mm)(％)生理盐水 0.10 182±29 256±35 29±4小剂量组粉尘螨口服液0.05 150±27* 263±32 43±4大剂量组粉尘螨口服液0.10 121±26**258±34 53±3注射液组粉尘螨注射液0.10 117±25**261±36 55±4与生理盐水比较*P＜0.05 **P＜0.01(3)粉尘螨口服液对大鼠被动过敏反应影响与生理盐水组比较，粉尘螨口服液能显著性降低大鼠在被动皮肤过敏反应中血管通透性，缩小皮内兰斑直径，作用效果与注射液基本相同(见表3)。
表3粉尘螨口服液对大鼠被动皮肤过敏反应的影响1∶20抗血清 1∶40抗血清组 别 剂量 -------------------------------------------(ml) 兰斑直径抑制百分率 兰斑直径 抑制百分率生理盐水0.10 11.3±1.1 10.1±1.2小剂量组粉尘螨口服液 0.05 7.4±0.7* 34.5 6.8±0.7 32.7大剂量组粉尘螨口服液 0.10 5.5±0.5**51.3 5.9±0.6** 41.6注射液组粉尘螨注射液 0.10 4.3±0.4**61.9 5.2±0.5** 48.5与生理盐水比较*P＜0.05 **P＜0.01
(4)粉尘螨口服液对致敏豚鼠肺支气管灌流的影响(见表4)表4致敏豚鼠肺支气管流量的变化灌流量(ml)组 别 剂量---------------------------------------------------------------------------1min 2min 3min 4min 5min6min卵蛋白对照组 6.41±0.78 5.96±0.85 5.76±0.83 5.38±0.89 5.15±0.75 4.99±0.80小剂量组卵蛋白+粉尘螨口服液0.05 7.45±0.74 7.56±0.72 7.59±0.84* 7.36±0.72* 7.80±0.83* 7.76±0.60*大剂量组卵蛋白+粉尘螨口服液0.10 8.91±0.59* 8.93±0.46* 8.90±0.82* 8.69±0.79* 8.73±0.68* 8.68±0.60*注射液组卵蛋白+粉尘螨注射液0.10 8.89±0.64* 8.98±0.59* 8.91±0.80* 8.72±0.78* 8.67±0.69* 8.70±0.70*与对照组比较*P＜0.05从表4结果，粉尘螨口服液能明显桔抗卵蛋白所臻的肺支气管灌流量的减少。
以上试验结果粉尘螨口服液用于临应治疗过敏性哮喘或其过敏性疾病提供了实验依据。
(二)粉尘螨口服液急性毒性试验1.口服给药(1)实验材料药物粉尘螨口服液(批号960310)由江西省肺科医院提供动物昆明种小白鼠，雌雄兼用。由江西省药品检验所动物房提供。
(2)方法与结果取健康小白鼠(雌雄各半)20只，体重20±1g，一次性灌胃给药0.5ml，观察一周，结果小白鼠均存活，其外观、行为、饮食、粪便、中枢神经系统、呼吸系统均未发现异常。
(3)结论粉尘螨口服液小白鼠灌胃给药，最大耐受量为25ml/kg，为人用剂量的23364倍(0.00107ml/kg日)，未出现毒性反应，认为口服给药是安全的。
2.皮下注射给药(1)实验材料动物小白鼠。NIH品系，由江西省药品检验所动物房提供。
药物粉尘螨口服液。(批号960310)由江西省肺科医院提供。
(2)方法结果取健康小白鼠20只(雌雄各半)，体重20±1g，一次性皮下注射给药0.5ml，结果小白鼠均健康存活，观察一周，其外观、行为、饮食、粪便、中枢神经系统、呼吸系统均未见异常。
(3)结论粉尘螨口服液小白鼠皮下注射给药25ml/kg，未出现明显毒性反应，成人口服量的23364倍(0.00107ml/kg日)认为该药具有较大安全性。
二、粉尘螨口服液治疗过敏性哮喘的临床应用1、对象和方法(1)对象选择1996年12月-1997年10月在江西肺科医院门诊符合哮喘诊断标准的过敏性哮喘67例。配对随机分成观察组35例，对照组32例。
(2)选择标准①经粉尘螨皮肤点刺试验阳性者；②年龄6-70岁。孕妇、有肝、肾、心脏疾病、糖尿病、肺内外结核、精神病及癫痫患者不入选。
(3)观察项目①治疗前FEV、IgE、胸部摄片、心电图、血及大小便常规；②治疗结束IgE、FEV、心电图、血及大小便常规。
(4)治疗方法患者按配对随机原则进入观察组及对照组。
观察组粉螨口服液I号1∶105、II号1∶104、III号1∶103、IV号1∶102(见表1)。
表1尘螨口服液用法服药时间 服药方法剂量第1-2周口 服 1-14滴/1-14天/I号第3-4周口 服 1-14滴/1-14天/II号第5-6周口 服 1-14滴/1-14天/III号第7周-第8个月 口 服 每周3次每次2滴/IV号第9个月-12个月 口 服 每周2次每次2滴/IV号对照组给予尘螨注射液(见表2)表2尘螨注射液用法月份 浓度 给药方法剂量(ml)1 1∶105皮下注射 0.1/第一周0.3/第二周 0.6/第三周 1.0/第四周2 1∶104皮下注射 0.1/第一周0.3/第二周 0.6/第三周 1.0/第四周3 1∶5×106皮下注射 0.1/第一周0.3/第二周 0.6/第三周 1.0/第四周4-8 1∶5×106皮下注射 1.0/每周一次9-12 1∶5×106皮下注射 1.0/每2周一次(5)治疗期一年(6)疗效判断标准临床控制哮喘症状完全缓解，即使偶然有轻度发作，不需用药即缓解。
显效哮喘发作较前有明显减轻，FEV1或PEF增值＞25％或变异率＜20％，仍需用皮质激素或支气管舒张剂，但用量为原来的1/3。
好转哮喘症状有所减轻，FEV1或PEF增值5-20％，仍需用皮质激素或支气管舒张剂，但用量大于原来的1/3。
无效临床症状、FEV1或PEF无改善或加重。
(7)药品供应粉尘螨口服液江西肺科医院提供(批号960310)粉尘螨注射液由上海医科大学红旗制药厂提供(沪药字 第2164号-04号)。
2、试验结果(1)临床疗效观察组临床控制率为54.3％(19/35)，显效率为22.9％(8/35)，好转率14.2％(5/35)，总有效率为91.4％(32/35)；对照组临床控制率为56.3％(18/32)，显效率为21.8％(7/32)，好转率为12.5％(4/32)，总有效率为90.6％(29/32)，两组差异无显著性(P＞0.05)(2)实验室检测疗效肺功能检测指标观察组和对照组FEV1治疗后平均增值55.2％及61.15％，差异无显著性P＞0.05(见表3)。
血IgE的变化两组患者治疗后IgE有明显下降。观察组下降74.3％，对照组下降73.5％，差异无显著性P＞0.05(见表3)。
表3两组患者治疗前后两项指标变化的比较治疗前 治疗后组别 例数 ----------------------- -----------------------FEV1(L) IgE(Iu/ml) FEV1(L) IgE(Iu/ml)观察组 35 1.74±0.46 594.6±336.82.7±0.64152.7±58.8对照组 32 1.79±0.48 597.4±328.82.89±0.84 158.3±87.7t值 0.2236 0.0134 0.3975 0.1281P值 P＞0.05 P＞0.05 P＞0.05 P＞0.05临床观察表明粉尘螨口服液，治疗过敏性哮喘(连续用药观察一年)总有效率91.4％；临床症状及体征明显改善，无一出现速发型过敏反应。
本发明提供的治疗呼吸系统过敏性疾病的粉尘螨口服液，具有服用简便、疗效显著、费用较低、便于推广应用。它与皮下注射相比，口服给药比皮下注射更易产生免疫耐受，舌下含服易被舌下丰富毛细管吸收，口腔粘膜能对变应原产生免疫性调节；粉尘螨口服液每支5ml携带方便，不受时间、地点的限制，即使出差、旅游均可按时服用；服用口感好，略带甜，咸味，易被患者接受；粉尘螨口服液动物实验表明具有显著的抗过敏作用，临床上用于治疗过敏性哮喘有效率大于90％；用口服液治疗与皮下注射治疗相比，每年费用大大减少。
实施例1粉尘螨口服液以粉尘螨为原料按以下方法制备
(1)粉尘螨灭活、清洗后，取含量80％以上的螨材料使用丙酮去脂，然后将去脂的螨材料密封，(2)取去指粉尘螨按重量份数1克螨材料加入80-150ml提取液提取，(3)常压过滤澄清液体，(4)除菌、过滤、分装。
提取液用30-50克氯化钠加入450-550ml蒸馏水配制而成。
实施例2粉尘螨口服液以粉尘螨为原料按以下方法制备(1)粉尘螨灭活、清洗后，取含量80％以上的螨材料使用丙酮去脂，然后将去脂的螨材料密封，(2)取去指粉尘螨按重量份数1克螨材料加入100ml提取液提取，(3)常压过滤澄清液体，(4)除菌、过滤、分装。
提取液用40克氯化钠加入460ml蒸馏水配制而成。
权利要求
1.一种粉尘螨口服液的制备方法，其特征按以下方法制成(1)粉尘螨灭活、清洗后，取含量80％以上的含螨材料去脂密封，(2)取去脂粉尘螨按重量份数1克螨材料加入80-150ml提取液提取，(3)常压过滤澄清液体，(4)除菌、过滤、分装。
2.根据权利要求1所述的粉尘螨口服液的制备方法，其特征在于螨材料使用丙酮去脂。
3.根据权利要求1所述的粉尘螨口服液的制备方法，其特征在于提取液是用30-50克氯化钠加入450-550ml蒸馏水配制而成。
4.根据权利要求1所述的粉尘螨口服液的制备方法，其特征在于1克螨材料加入最佳提取液为100ml。
全文摘要
本发明提供一种治疗呼吸系统过敏性疾病的粉尘螨口服液，以粉尘螨为原料按以下制备方法制成粉尘螨灭活、清洗后，去脂密封，取去脂粉尘螨按1∶100比例加提取液提取，随后常压过滤澄清液体，除菌、过滤、分装。该发明具有服用简便、口感好，疗效显著、临床上用于治疗过敏性哮喘有效率大于90％，它与皮下注射相比，口服给药比皮下注射更易产生免疫耐受，舌下含服易被舌下丰富毛细管吸收，口腔粘膜能对变应原产生免疫性调节；粉尘螨口服液每支5ml携带方便，不受时间、地点的限制，即使出差、旅游均可按时服用；费用较低，便于推广应用的优点。
文档编号A61K35/66GK1559449SQ20041002296
公开日2005年1月5日 申请日期2004年3月3日 优先权日2004年3月3日
发明者万义福, 李雷珍, 万钧 申请人:万义福