使用干扰素治疗严重急性呼吸综合征及其他病毒感染的制作方法

专利名称：使用干扰素治疗严重急性呼吸综合征及其他病毒感染的制作方法
本申请要求2003年5月23日提交的美国临时申请号60/473,134的优先权，其内容在此并入本申请中作为参考。
在本申请全文中提到了许多参考文献，这些参考文献其各自内容在此并入本申请中作为参考。
背景技术：
众所周知干扰素(IFN)是一个由多种真核细胞在暴露于各种刺激下分泌得到的细胞因子家族(Zoon KCHuman InterferonsStructure and Function.p.1-12.于Interferon 8.AcademicPress，London，1987；Walter等，Cancer Biotherm Radiopharm1998年6月；13(3)143-54；Pestka，S.，Biopolymers 2000；55(4)254-287；Pestka，S.，Methods in Enzymology，78，1981；Pestka，S.，Methods in Enzymology，79，1981；Pestka，S.，Methods in Enzymology，119，1986)。已根据干扰素的化学和生物特性对其进行分类。干扰素分为两类，称为I型干扰素和II型干扰素(Pestka，S.；Langer；J.A.；Zoon，K.C.；Samuel，C.E.AnnRev Biochem 1987，56，727-777；Pestka，S.，Biopolymers 2000；55(4)254-287)。也已知作为免疫干扰素的IFN-γ是唯一的II型干扰素，而I型人干扰素则由五类干扰素IFN-α、IFN-β、IFN-ω、IFN-κ和IFN-τ组成。仅有一种人IFN-β和一种人IFN-ω，但IFN-α家族存在多种。仅在有蹄类动物中发现IFN-τ；不存在人IFN-τ。IFN具有抗病毒、免疫调节和抗增殖活性。业已认识到干扰素的临床应用潜力。
Isaacs和Lindenmann发现了干扰素(Proc.Royal Soc.London，Ser B 147，258，1957)。对人白细胞干扰素纯化和鉴定的研究业已获得了来自正常或白血病(慢性骨髓性白血病或“CML”)供体白细胞的同型白细胞干扰素制备物(现称为IFN-αs)(Pestka，S.，Biopolymers 2000；55(4)254-287；Rubinstein，M.；Levy，W.P.；Moschera，J.A.；Lai，C.-Y.；Hershberg，R.D.；Bartlett，R.T.；Pestka，S.Arch Biochem Biophys 1981，210，307-318)。同型成纤维细胞干扰素(现称为IFN-β)也纯化均一(Friesen，H.-J.；Stein，S.；Evinger，M.；Familletti，P.C.；Moschera，J.；Meienhofer，J.；Shively，J.；Pes tka，S.Arch Biochem Biophys1981，206，432-450)。这些干扰素是具有能有效赋予其靶细胞抗病毒状态特征的蛋白家族。此外，干扰素可抑制细胞增殖、调节免疫应答并改变蛋白表达。这些特性提示白细胞干扰素在临床上可作为治疗剂用于治疗病毒感染和恶性肿瘤。
在过去几十年中，已生产、鉴定、纯化并克隆得到许多人和动物干扰素。一些干扰素制备物以粗制及纯化的形式已用于临床试验。业已克隆并表达得到几种重组IFN-α。然后通过不同方法纯化蛋白并配制为多种剂型用于临床应用。大多数临床应用的干扰素已经全世界多个管理机构批准，其为人α干扰素(Hu-IFN-α)的混合物或单一种。在一些国家中，Hu-IFN-β和γ也已批准用于临床试验，并在某些情况下也批准用于治疗应用。支持这些干扰素临床应用的主要论点是它们为正常个体所产生的天然分子。实际上，该具体论点是，所有为临床应用所制备的干扰素皆为其天然或重组产生的产品，代表了正常人所自然产生的干扰素。这对于大多数干扰素以及特定的生长因子、淋巴因子、细胞因子、激素、凝血因子及其他已制备的蛋白来说是正确的。
发明概述本发明提供了包含编码干扰素多肽至少一部分的多核苷酸的核酸，所述干扰素多肽包括示于SEQ ID NO2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86至少之一的氨基酸序列或其片段。因此，本发明的一方面提供了多核苷酸，所述多核苷酸包含选自由(a)编码包括这些SEQ ID NOs至少之一中的氨基酸序列的干扰素多肽的核苷酸序列；(b)编码示于这些SEQ ID NOs至少之一的多肽的生物学活性片段的核苷酸序列；和(c)与上述(a)或(b)中任何核苷酸序列至少之一互补的核苷酸序列组成的组的核苷酸序列。本发明另外的实施方案包括核酸，所述核酸包含具有与上述(a)、(b)或(c)中任一核苷酸序列至少95％同一性，更优选至少96％同一性，还更优选至少97％同一性，甚至更优选至少98％同一性，以及更优选至少99.25％同一性的核苷酸序列的多核苷酸；或在严格杂交条件下与上述(a)、(b)或(c)中多核苷酸杂交的多核苷酸，以及优选地与示于SEQ ID NO1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83或85至少之一的多核苷酸杂交的多核苷酸。所述片段包括干扰素多肽的生物学活性片段。SEQ ID NOs.1-26是猫干扰素序列。SEQ ID NOs.27-36是猕猴干扰素序列。SEQ ID NOs.37-86是人干扰素序列。
“严格杂交条件”规定为包括严格洗涤条件，本领域技术人员应能确定这样高的条件，例如低盐和高温。低盐的例子是0.1 X SSC。高温的例子是65-68℃。一个实施方案包括在42℃下在包含50％甲酰胺、5 x SSC(150mM NaCl、15mM柠檬酸三钠)、50mM磷酸钠(pH7.6)、5 x Denhardt氏溶液、10％葡聚糖硫酸酯及20μg/ml变性的已剪切鲑精DNA的溶液中温育过夜，接着在约65℃下在0.1 x SSC中洗涤滤纸。当在此使用时，“高严格”也指如下条件(i)在杂交后用低离子强度及在高温下洗涤，例如，在50℃下在0.1 x SSC和0.1％(w/v)SDS中洗涤；(ii)在杂交过程中使用这样的条件以致于杂交温度为比杂交的多核苷酸的双链解链温度低25℃，例如在65℃下在1.5xSSPE、10％(w/v)聚乙二醇6000、7％(w/v)SDS、0.25mg/ml断裂的鲱精DNA中杂交；或(iii)例如，在70℃下在0.5M磷酸钠，pH 7.2、5mM EDTA、7％(w/v)SDS(28)和0.5％(w/v)BLOTTO中杂交；或(iv)在杂交过程中使用诸如甲酰胺的变性剂，例如，在42℃下使用50％(v/v)甲酰胺、5 x SSC、50mM磷酸钠(pH 6.5)和5 x Denhardt氏溶液；或(v)例如，在42℃下使用50％(v/v)甲酰胺、5 x SSC、50mM磷酸钠(pH 6.8)、0.1％(w/v)焦磷酸钠、5 x Denhardt氏溶液、超声处理的鲑精DNA(50μg/ml)和10％葡聚糖硫酸酯。
就多肽、肽和蛋白的片段而论，它们可以是生物学活性片段，可以具有任何小于在此提供的序列标识符中所描述序列的全长的长度。在一个实施方案中，所述片段长度是至少10个氨基酸。在另一个实施方案中，所述片段长度是至少20个氨基酸。在其他实施方案中，所述片段长度可以是至少30、40、50、60、70、80、90或100个氨基酸。在另外实施方案中，所述片段长度可以是至少110、120、130、140、150、160或170个氨基酸。
就核酸片段而论，它们包括可用作为在此讨论的诊断探针和引物的那些。这样的序列可以是用于特异性识别在此所描述的干扰素核苷酸序列的那些。并且，它们可具有任何长度。例如，它们包括长度为至少约15个核苷酸、以及更优选地至少约20个核苷酸，仍更优选地至少约30个核苷酸和还更优选地至少约40个核苷酸的那些。当然，诸如那些长度为50-300个核苷酸的较大片段也可使用，依照本发明的内容，是相应于提供在此的SEQ ID NOs至少之一所示的核苷酸序列至少之一中如非全部则大多数的片段。就长度为至少20个核苷酸的片段来说，例如，意指来自提供在此的SEQ ID NOs至少之一所示的核苷酸序列至少之一中的包括20个或更多个连续碱基的片段。长度为50-300个核苷酸的片段，包括例如长度为约50、60、70、80、90或100个碱基的那些。它们也可包括长度为约110、120、130、140、150、160、170、180、190或200个碱基的片段。它们亦可包括长度为约210、220、230、240、250、260、270、280、290或300个碱基的片段。
与多核苷酸的“部分”杂交的多核苷酸包括与所提及多核苷酸的至少约15个核苷酸，以及更优选地至少约20个核苷酸、仍更优选地至少约30个核苷酸和还更优选地约30-70个核苷酸杂交的多核苷酸(DNA或RNA)，包括在所提及多核苷酸两端之间任何长度(如50个碱基)的多核苷酸。如上所讨论，它们被用作为诊断探针和引物，更详细的描述如下。
在另一方面，本发明提供了包含编码猫干扰素多肽至少一部分的多核苷酸的核酸，所述多肽包括SEQ ID NO2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26至少之一所示的氨基酸序列或其片段。因此，本发明的一方面提供了包含选自由(a)编码包括这些SEQ ID NOs至少之一中的氨基酸序列的猫干扰素多肽的核苷酸序列；(b)编码示于这些SEQ ID NOs至少之一的多肽的生物学活性片段的核苷酸序列；和(c)与上述(a)或(b)中所有核苷酸序列至少之一互补的核苷酸序列组成的组的核苷酸序列的多核苷酸。本发明另外的实施方案包括核酸，所述核酸包含具有与任一描述在此的核苷酸序列至少95％同一性，更优选至少96％同一性，还更优选至少97％同一性，甚至更优选至少98％同一性，以及更优选至少99.25％同一性的核苷酸序列的多核苷酸；或在严格杂交条件下与描述在此的多核苷酸杂交的多核苷酸，以及优选地与示于SEQ ID NO1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23或25至少之一的多核苷酸杂交的多核苷酸。
本发明进一步提供了包含编码猕猴干扰素多肽至少一部分的多核苷酸的核酸，所述多肽包括SEQ ID NO28、30、32、34、36至少之一所示的氨基酸序列或其片段。因此，本发明的一方面提供了包含选自由(a)编码包括这些SEQ ID NOs至少之一中的氨基酸序列的猕猴干扰素多肽的核苷酸序列；(b)编码示于这些SEQ ID NOs至少之一的多肽的生物学活性片段的核苷酸序列；和(c)与上述(a)或(b)中所有核苷酸序列至少之一互补的核苷酸序列组成的组的核苷酸序列的多核苷酸。本发明另外的实施方案包括核酸，所述核酸包含具有与任一描述在此的核苷酸序列至少95％同一性，更优选至少96％同一性，还更优选至少97％同一性，甚至更优选至少98％同一性，以及更优选至少99.25％同一性的核苷酸序列的多核苷酸；或在严格杂交条件下与上述(a)、(b)或(c)中多核苷酸杂交的多核苷酸，以及优选地与示于SEQ ID NO27、29、31、33或35至少之一的多核苷酸杂交的多核苷酸。
本发明也提供了包含编码人干扰素多肽至少一部分的多核苷酸的核酸，所述多肽包括SEQ ID NO38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86至少之一所示的氨基酸序列或其片段。因此，本发明的一方面提供了包含选自由(a)编码包括这些SEQ ID NOs至少之一中的氨基酸序列的人干扰素多肽的核苷酸序列；(b)编码示于这些SEQ ID NOs至少之一的多肽的生物学活性片段的核苷酸序列；和(c)与上述(a)或(b)中所有核苷酸序列至少之一互补的核苷酸序列组成的组的核苷酸序列的分离多核苷酸。本发明另外的实施方案包括分离的核酸，所述核酸包含具有与任一描述在此的核苷酸序列至少95％同一性，更优选至少96％同一性，还更优选至少97％同一性，甚至更优选至少98％同一性，以及更优选至少99.25％同一性的核苷酸序列的多核苷酸；或在严格杂交条件下与上述(a)、(b)或(c)中多核苷酸杂交的多核苷酸，以及优选地与示于SEQ ID NO37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83或85至少之一的多核苷酸杂交的多核苷酸。
在另一方面，任一编码干扰素多肽的本发明的核酸可包括，但不限于，就其本身而言编码完整多肽的氨基酸序列的那些；以及对于完整多肽和附加序列的编码序列，例如编码附加的分泌前导序列的那些，例如前蛋白、蛋白原或前蛋白原序列。
也提供了同时具有如下附加非编码序列的描述在此的核酸，所述附加非编码序列包括，例如，但不限于内含子和非编码的5′和3′序列，例如在转录、mRNA加工，包括剪接和多腺苷酸化信号，例如mRNA的核糖体结合和稳定性中起作用的转录的、非翻译序列；以及附加的编码序列，其编码附加的氨基酸，例如提供附加功能的那些。
因此，编码该多肽的序列可融合标记序列，例如编码便于融合多肽纯化的肽的序列。在本发明该方面的某些优选的实施方案中，标记氨基酸序列是六组氨酸肽，例如pQE载体(QIAGEN，Inc.，9259EtonAvenue，Chatsworth，Calif.91311)中提供的标记，其中许多标记可购买获得。举例来说，如Gentz等所描述的六组氨酸为融合蛋白的纯化提供了方便(Gentz等.(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA86821-824)。“HA”标记是另一种用于纯化的肽，其相应于来自流感血凝素蛋白的表位(Wilson等.(1984)Cell 37767)。其他融合标记的例子包括如下(1)MBP标记，是麦芽糖结合蛋白的一部分(载体购自RocheTM(载体实例命名pIVEX MBP)，New EnglandBiological(载体实例命名pMAL-p2X)；(2)HA标记，是人流感病毒血凝素的一部分(载体购自RocheJ(载体实例命名pIVEX HA-tag)，BD Biosciences(pCMV-HA)；(3)FLAG，是特殊的8氨基酸表位(载体来自Sigma Chemical Co.J载体实例命名gWiz/GFP)；(4)CBP标记，是钙调结合蛋白的一部分(载体购自StratageneJ载体实例命名pDual)；和(5)GFP，是绿色荧光蛋白的一部分(载体购自StratageneJ载体实例命名pDual)。其他用于创建融合蛋白的常用附加表位c-myc、GST、AU1、AU5、DDDDK、E表位、E2标记、Glu-Glu、S1、KT-3、T7附加表位、V5附加表位、VSV-G、BFP、CFY、YFP。如下所讨论，其他这样的融合蛋白包括在N-或C-末端融合至Fc的干扰素。
本发明也提供了包括本发明核酸的重组载体，以及包含该重组载体的宿主细胞，以及制备上述载体和宿主细胞的方法和通过重组技术使用它们生产干扰素多肽或肽的方法。
本发明进一步提供了一种干扰素多肽，包含选自(a)示于SEQ IDNO2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84或86至少之一的酸序列的干扰素多肽的氨基酸序列；和(b)示于这些SEQ ID NOs至少之一的多肽的生物学活性片段的氨基酸序列的氨基酸序列。本发明也包括具有与描述在此的那些多肽至少95％同一性，更优选至少96％同一性，还更优选至少97％同一性，甚至更优选至少98％同一性，以及更优选至少99.25％同一性的氨基酸序列的多肽。也提供了具有与描述在此的那些至少95％相似性，更优选至少96％相似性，还更优选97％相似性，甚至更优选至少98％相似性，以及更优选至少99.25％相似性的氨基酸序列的多肽。也提供了具有与描述在此的那些至少95％、96％、97％、98％或99.25％同源性的氨基酸序列的多肽。也提供了编码上述多肽的多核苷酸。
本发明该方面另外的实施方案涉及包含具有描述在此的氨基酸序列的干扰素多肽的表位承载(epitope-bearing)部分的氨基酸序列的肽或多肽。具有本发明干扰素多肽的表位承载部分的氨基酸序列的肽或多肽包括具有至少6或7个，优选至少9个，和更优选至少约30个氨基酸至约50个氨基酸的这样的肽的部分，尽管长达并包括上述本发明多肽的完整氨基酸序列的任何长度的表位承载多肽也包括于本发明中。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种特异性结合具有描述在此氨基酸序列的干扰素多肽的抗体。上述抗体可以是单克隆抗体。其也可以是抗原结合片段，例如Fab或Fab′片段。所述抗体可以是嵌合、人源化或全长人抗体。所述抗体可以是猫抗体或猕猴抗体。本发明进一步提供了用于分离特异性结合具有描述在此氨基酸序列的干扰素多肽的抗体的方法。如下所述上述抗体在治疗学上是有用的。
在另一方面，本发明进一步提供了一种猫干扰素多肽，包含选自(a)包括示于SEQ ID NO2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26至少之一的氨基酸序列的干扰素多肽的氨基酸序列；和(b)示于这些SEQ ID NOs至少之一的多肽的生物学活性片段的氨基酸序列的氨基酸序列。本发明也包括具有与描述在此的那些多肽至少95％同一性，更优选至少96％同一性，还更优选至少97％同一性，甚至更优选至少98％同一性，以及更优选至少99.25％同一性的氨基酸序列的多肽。也提供了具有与描述在此的那些至少95％相似性，更优选至少96％相似性，还更优选97％相似性，甚至更优选至少98％相似性，以及更优选至少99.25％相似性的氨基酸序列的多肽。也提供了具有与描述在此的那些至少95％、96％、97％、98％或99.25％同源性的氨基酸序列的多肽。也提供了编码上述多肽的多核苷酸。
在另一方面，本发明进一步提供了一种猕猴干扰素多肽，包含选自(a)包括示于SEQ ID NO28、30、32、34或36至少之一的酸序列的干扰素多肽的氨基酸序列；和(b)示于这些SEQ ID NOs至少之一的多肽的生物学活性片段的氨基酸序列的氨基酸序列。本发明也包括具有与描述在此的那些多肽至少95％同一性，更优选至少96％同一性，还更优选至少97％同一性，甚至更优选至少98％同一性，以及更优选至少99.25％同一性的氨基酸序列的多肽。也提供了具有与描述在此的那些至少95％相似性，更优选至少96％相似性，还更优选97％相似性，甚至更优选至少98％相似性，以及更优选至少99.25％相似性的氨基酸序列的多肽。也提供了具有与描述在此的那些至少95％、96％、97％、98％或99.25％同源性的氨基酸序列的多肽。也提供了编码上述多肽的多核苷酸。
在另一方面，本发明进一步提供了一种人干扰素多肽，包含选自(a)包括示于SEQ ID NO38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84或86至少之一的酸序列的干扰素多肽的氨基酸序列；和(b)示于这些SEQ ID NOs的多肽至少之一的生物学活性片段的氨基酸序列的氨基酸序列。本发明也包括具有与描述在此的那些多肽至少95％同一性，更优选至少96％同一性，还更优选至少97％同一性，甚至更优选至少98％同一性，以及更优选至少99.25％同一性的氨基酸序列的多肽。也提供了具有与描述在此的那些至少95％相似性，更优选至少96％相似性，还更优选97％相似性，甚至更优选至少98％相似性，以及更优选至少99.25％相似性的氨基酸序列的多肽。也提供了具有与描述在此的那些至少95％、96％、97％、98％或99.25％同源性的氨基酸序列的多肽。也提供了编码上述多肽的多核苷酸。
在另一方面，本发明进一步提供了包含任一描述在此的用于体外、离体和体内给予细胞或给予多细胞生物的干扰素多核苷酸或干扰素多肽的组合物。在本发明该方面某个特别优选的实施方案中，所述组合物包含用于在宿主生物中表达用以疾病治疗的干扰素多肽的干扰素多核苷酸。在这点上特别优选的是在人患者中表达以用于与内源性干扰素损失或缺乏相关的机能障碍的治疗。
本发明也提供了包含干扰素多肽的药物组合物和使用其的方法，例如，使用用以治疗或预防免疫系统相关的疾病，例如病毒感染、寄生虫感染、细菌感染、癌症、自身免疫性疾病、多发性硬化、淋巴瘤和变态反应。也提供了治疗需要干扰素多肽个体的方法。在某个优选的实施方案中，受试的药物组合物是一种用于给予非人动物，优选非人灵长类动物的兽用组合物。可用干扰素治疗的例示性疾病包括但不限于病毒感染。不受限制，干扰素疗法可用于治疗将受益于抑制干扰素敏感病毒复制的疾病。可根据本发明进行治疗的病毒感染包括严重急性呼吸综合征(SARS)、天花病毒、牛痘病毒、猴痘病毒、西尼罗河病毒、痘苗病毒、冠状病毒、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、其他的非甲型/非乙型肝炎、疱疹病毒、埃-巴二氏病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)、单纯性疱疹、人疱疹病毒6型(HHV-6)、乳头状瘤病毒、痘病毒、微小核糖核酸病毒、腺病毒、鼻病毒、人T嗜淋巴细胞病毒-1型和2型(HTLV-1/-2)、人轮状病毒、狂犬病、逆转录病毒包括人类免疫缺陷病毒(HIV)、脑炎、动脉炎病毒、线状病毒、呼肠孤病毒、乳多空病毒、肝脱氧核糖核酸病毒、星状病毒、柯萨奇病毒、正粘病毒科(流感病毒)、副粘病毒科、埃可病毒、肠道病毒以及呼吸道合胞体病毒。特别感兴趣的是SARS的治疗，据信SARS起因于名为SARS相关的冠状病毒的新冠状病毒(Peiris等，Lancet，April 19，2003；361(9366)1319-25；Ksiazek等，New England Journal ofMedicine，April 30，2003，PubMed ID#12690092；Drosten等，NewEngland Journal of Medicine，April 10，2003，PubMedID#12690091；Marra等，Science，May 1，2003出版，PubMedID#12730501。PubMed论文可通过ID#在http//www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi？CMD＝Search&DB＝PubMed)上进行访问。
本发明的方法也用于缓解各种免疫反应。描述在此的干扰素多肽可用于治疗SARS以及描述在此的病毒所引起的病毒感染。这些干扰素多肽也可用于预防目的，例如预防感染或使患者避免具有与该感染相关的症状。受益于上述预防性疗法患者包括具有升高的感染风险的那些，例如已暴露于病毒或业已为病毒所感染或暴露于病毒的个体的患者。
在一个实施方案中，干扰素可用作为抗病毒剂。在临床上，干扰素已用于治疗获得性免疫病症、病毒性肝炎(包括慢性乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎)、乳头状瘤病毒、疱疹、病毒性脑炎和预防鼻炎和呼吸道感染。
在另一个实施方案中，干扰素可用作为抗寄生虫药。干扰素可用于例如治疗小球隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)感染。还在另一个实施方案中，干扰素可用作为抗细菌剂。在临床上，干扰素业已用于抗细菌治疗。例如，干扰素可用于多重耐药肺结核的治疗。
在又一个实施方案中，干扰素可用作为免疫治疗方案的一部分。本发明的干扰素可在临床上用于免疫治疗或更准确地说，例如，预防阻止移植物对宿主的排斥反应，或减少自身免疫性疾病例如关节炎、多发性硬化或糖尿病的进展。
在另一个实施方案中，干扰素可用作为治疗变态反应方案的一部分。还在另一个实施方案中，干扰素可用作为疫苗佐剂。在预防性或治疗性疫苗接种下，干扰素可用作为佐剂或辅佐剂以增强或刺激免疫应答。
除用于通常动物治疗外，本具体发明特别涉及干扰素用于治疗灵长类动物的用途，作为兽用方案的一部分。在一个实施方案中，所述干扰素是猕猴干扰素。本具体发明也特别涉及干扰素用于治疗猫的用途，作为兽用方案的一部分。在一个实施方案中，所述干扰素是猫干扰素。
在某些实施方案中，干扰素用于治疗病毒感染的猫。例如，猫免疫缺损病毒(FIV)感染的需要支持治疗以维持正常健康的猫。干扰素可用作为FIV感染的猫治疗的一部分。同样地，干扰素亦可作为猫白血病病毒(FeLV)感染的猫治疗的一部分。猫白血病病毒(FeLV)是当今美国家养猫最主要的致命性传染病的病原体。
干扰素可用于治疗猫传染性粒细胞缺乏症。也称为猫传染性肠炎，猫“瘟热”和猫共济失调或动作失调症，猫传染性粒细胞缺乏症是一种高传染性的猫病毒性疾病，特征在于其突然发作、发热、食欲不振(厌食)、脱水、抑郁、呕吐、循环的白细胞数量减少(白细胞减少)，以及通常的高死亡率。子宫内(在子宫内)感染可引起流产、死产、新生儿死亡以及小脑发育不全(小脑发育不良)，已显示为2-3周大小的小猫动作失调(共济失调)。所有的猫家族(猫科)成员皆易为猫粒细胞缺乏症病毒(FPV)所感染，如Procyoniclae科中浣熊、长鼻浣熊和圈尾猫。
干扰素可用于治疗感染有猫传染性腹膜炎的猫。干扰素可用来治疗感染有狂犬病的猫。在其他指导猫护理的实施方案中，干扰素可用来治疗炎性气道病(IAD)。还在另一个实施方案中，干扰素可用来治疗狗或其他家养宠物(de Mari K，Maynard L，Eun HM，Lebreux B.VetRec.(2003)152105-8)。仍在其他实施方案中，干扰素科用来治疗农畜。在又一个实施方案中，干扰素可用来治疗人。本发明提供了一种治疗患严重急性呼吸综合征患者的方法，包括给予患者能有效降低其体中SARS相关冠状病毒颗粒浓度的适量干扰素，从而治疗患者。
本发明提供了一种治疗为选自冠状病毒、天花病毒、牛痘病毒(cowpox wirus)、猴痘病毒、西尼罗河病毒、痘苗病毒(vacciniavirus)、呼吸道合胞体病毒、鼻病毒、动脉炎病毒、线状病毒、微小核糖核酸病毒、呼肠孤病毒、逆转录病毒、乳多空病毒、疱疹病毒、痘病毒、肝脱氧核糖核酸病毒、星状病毒、柯萨奇病毒、副粘病毒科、正粘病毒科、埃可病毒、肠道病毒、心病毒、披膜病毒、棒状病毒、布尼亚病毒、沙粒病毒、博尔纳病毒、腺病毒、细小病毒和黄热病病毒的病毒感染的患者的方法，包括给予患者能有效降低其体中病毒颗粒浓度的适量干扰素多肽，从而治疗患者。
本发明涉及任何描述在此的治疗方法，也涉及用于防止患者患病或被感染的方法，或降低患者患病或被感染风险的方法，或保护患者免患与特定病毒相关之病症/状况，或防止患者具有与病毒感染相关的症状。例如，上述用于治疗病毒感染患者的方法也可用来防止患者被病毒感染，或用来降低患者病毒感染风险。
本发明提供了一种降低患者病毒感染风险的方法，包括给予患者干扰素多肽。在一个实施方案中，该方法包括防止患者被病毒感染。在一个实施方案中，该方法包括防止患者具有与病毒感染相关的症状。在一个实施方案中，该方法包括保护患者免患与特定病毒相关的病症/状况。通过阻止或减轻由感染所引起的病症/状况的严重程度可赋予该保护作用。在另一个实施方案中，所述保护作用也可通过减少感染传播给其他患者来赋予，可通过减轻其体中由感染所引起的病症/状况的严重程度来实现。在另一个实施方案中，通过使患者细胞变为对感染较不易感达到对风险的预防或降低。描述在此的方法和实施方案未必是互不相容的。所述病毒感染包括但不限于由冠状病毒、天花病毒、牛痘病毒、猴痘病毒、西尼罗河病毒、痘苗病毒、呼吸道合胞体病毒、鼻病毒、动脉炎病毒、线状病毒、微小核糖核酸病毒、呼肠孤病毒、逆转录病毒、乳多空病毒、疱疹病毒、痘病毒、肝脱氧核糖核酸病毒、星状病毒、柯萨奇病毒、副粘病毒科、正粘病毒科、埃可病毒、肠道病毒、心病毒、披膜病毒、棒状病毒、布尼亚病毒、沙粒病毒、博尔纳病毒、腺病毒、细小病毒和黄热病病毒所引起的那些感染。
本发明提供了一种治疗患流感(正粘液病毒)患者的方法，包括给予患者能有效降低其体中流感病毒颗粒浓度的适量干扰素多肽，其中所述干扰素多肽包括与描述在此的SEQ ID NOs至少之一具有至少95％同一性，更优选至少96％同一性，还更优选至少97％同一性，甚至更优选至少98％同一性，以及更优选至少99.25％同一性的氨基酸序列，从而治疗患者。
在此提及的干扰素多肽。例如在涉及治疗和/或预防的上下文中提及时，包括但不限于IFN-α多肽、IFN-β多肽、IFN-γ多肽以及IFN-ω多肽(Zoon KCHuman InterferonsStructure and Function.p.1-12.于Interferon 8.Academic Press，London，1987；Walter等，Cancer Biotherm Radiopharm 1998 June；13(3)143-54；Pestka，S.，Biopolymers 2000；55(4)254-287；Biopolymers2000；55(4)254-287；Pestka，S.，Methods in Enzymology，78，1981；Pestka，S.，Methods in Enzymology，79，1981；Pestka，S.，Methods in Enzymology，119，1986；Pestka，S.，Langer；J.A.，Zoon，K.C.，Samuel，C.E.Ann Rev Biochem 1987，56，727-777)。它们也包括但不限于人IFN、鼠IFN、猫IFN和猕猴IFN。
在描述在此的干扰素多肽的一个实施方案中，所述干扰素多肽包括与SEQ ID NO2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84或86之一具有至少95％同一性，更优选至少96％同一性，还更优选至少97％同一性，甚至更优选至少98％同一性，以及更优选至少99.25％同一性的氨基酸序列。也提供了具有与上述那些至少95％相似性，更优选至少96％相似性，还更优选97％相似性，甚至更优选至少98％相似性，以及更优选至少99.25％相似性的氨基酸序列的多肽。也提供了具有与描述在此的那些至少95％、96％、97％、98％或99.25％同源性的氨基酸序列的多肽。
在描述在此的干扰素多肽的一个实施方案中，所述干扰素多肽包括选自SEQ ID NO2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84和86的氨基酸序列。在描述在此的干扰素多肽的一个实施方案中，所述干扰素多肽为核酸所编码，该核酸包括选自SEQ ID NO1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83和85的核苷酸序列。在描述在此的干扰素多肽的一个实施方案中，所述干扰素多肽为核酸所编码，该核酸在高严格条件下与包括选自SEQ ID NO1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83和85的序列的核酸杂交。在描述在此的干扰素多肽的一个实施方案中，所述干扰素多肽为核酸所编码，该核酸在高严格条件下与互补于选自SEQ ID NO1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83和85的序列的核酸杂交。
本发明提供了一种预防患者患严重急性呼吸综合征的方法，包括给予患者干扰素多肽。本发明提供了一种降低患者患严重急性呼吸综合征风险的方法，包括给予患者干扰素多肽。
本发明也提供了一种预防患者患选自冠状病毒、天花病毒、牛痘病毒、猴痘病毒、西尼罗河病毒、痘苗病毒、呼吸道合胞体病毒、鼻病毒、动脉炎病毒、线状病毒、微小核糖核酸病毒、呼肠孤病毒、逆转录病毒、乳多空病毒、疱疹病毒、痘病毒、肝脱氧核糖核酸病毒、星状病毒、柯萨奇病毒、副粘病毒科、正粘病毒科、埃可病毒、肠道病毒、心病毒、披膜病毒、棒状病毒、布尼亚病毒、沙粒病毒、博尔纳病毒、腺病毒、细小病毒和黄热病病毒的病毒所致综合征的方法，包括给予患者适量的干扰素多肽。
本发明提供了一种预防患者患流感的方法，包括给予患者适量描述在此的干扰素多肽。本发明提供了一种降低患者为流感所感染风险的方法，包括给予患者适量描述在此的干扰素多肽。在描述在此方法的一个实施方案中，所述患者是人类。所述患者包括但不限于狗、猫、猴和农畜。
本发明提供了描述在此的干扰素多肽在制备用于任何描述在此的治疗、防止、预防和降低风险方法的药物中的应用。
本发明提供了一种药物包装，包括干扰素组合物和用于将组合物给予患者的用法说明书。该用法说明书可包括书写和/或图示的用法说明书。该用法说明书可用于任何描述在此的治疗、防止、预防和降低风险的方法。
本发明也涉及功能性拮抗剂，如其中一个或多个氨基酸残基不同于野生型干扰素，其抑制野生型干扰素的一种或多种生物活性。上述拮抗剂可用来治疗由内源性干扰素的异常过表达或其他激活作用所引起的病症。所述功能性拮抗剂可配制为药物制剂。
本发明也提供了一种用于鉴定能增强或抑制干扰素多肽生物活性的化合物的筛选方法，其包括将为干扰素多肽所增强的受体与候选化合物在干扰素多肽存在情况下接触，测定例如在候选化合物和干扰素多肽存在情况下的抗病毒活性，并将该活性与标准水平的活性进行比较，所述标准是在不存在候选化合物情况下受体与干扰素之间产生接触时被测定的。在该测定中，超过标准的活性增加表明该候选化合物是一种干扰素活性激动剂，而相对于标准的活性减少则表明该化合物是一种干扰素活性拮抗剂。
本发明另一方面涉及一种用于治疗需要增加的体内干扰素活性水平的动物的方法，包括给予上述动物一种包含治疗有效量的本发明的分离的干扰素多肽或其激动剂的组合物。
本发明又一方面是一种用于治疗需要减少的体内干扰素活性水平的动物的方法，包括给予上述动物一种包含治疗有效量的干扰素拮抗剂的组合物。优选供本发明之用的拮抗剂是干扰素特异性抗体。
所述剂量的给予可以是隔日给予，但优选一周一到两次。剂量通常通过注射给予至少24周。
剂量的给予可以是静脉内、皮下、肌内或任何其他可接受的全身性给予方法。根据护理临床医师的判断，给药量和治疗用法应该，当然，取决于所要治疗的患者的年龄、性别和病史，嗜中性粒细胞计数(如中性粒细胞减少的严重程度)，具体疾病症状的严重程度以及患者对治疗的耐受性，所述耐受性通过局部毒性和全身性副作用得到证实。在嗜中性粒细胞的初期筛选期间可确定给药剂量和频率。
也可使用本发明的受试干扰素组合物制备常规药物制剂。该制剂包括治疗有效量的干扰素多肽和药学上可接受的载体。例如，佐剂、稀释剂、防腐剂和/或增溶剂，如果需要，可用于本发明实践中。包含本发明那些的干扰素的药物组合物可包括具有一定范围pH和离子强度的各种缓冲液(如，Tris-HCl、醋酸盐、磷酸盐)的稀释剂、载体(如人血清白蛋白)、增溶剂(如，聚氧乙烯山梨聚糖或TWEENTM聚山梨醇酯)以及防腐剂(如硫柳汞、苯甲醇)。参见，例如US 4,496,537。
给予治疗上述疾病的干扰素组合物的治疗量取决于组合物的干扰素活性。其是一种能有效地显著影响正临床响应的量。就病毒感染治疗而论，正临床响应可通过患者体内病毒颗粒浓度的减少或更常见地通过感染症状的缓解得到指示。就预防性治疗而论，正临床响应可例如通过患者体内无病毒颗粒、患者体内病毒颗粒浓度减少或患者体内病毒颗粒浓度维持在低于超过则上述患者显示病毒感染症状的阈值浓度的浓度。本文使用的预防性治疗包括使患者免患由病毒所引起之疾病。
虽然在某些患者中临床剂量会引起一定程度的副作用，但是对于包括人的哺乳动物来说，最大剂量是不会导致临床上难以处理的严重副作用的最高剂量。对于本发明目的而言，上述临床上严重副作用是由于严重的流感样症状、中枢神经系统抑郁症、严重的肠胃道病症、脱毛症、严重的瘙痒症或皮疹而需要停止治疗的那些副作用。实际上白和/或红细胞和/或肝脏酶异常或贫血样症状也是存在剂量限度的。
毫无疑问，干扰素剂量可依所选择制剂而稍有变化。一般而言，然而，基于哺乳动物的病症，干扰素组合物是以约100,000至约几百万IU/m2每天的量来给予。上述所列范围是例示性的且本领域技术人员可基于临床经验和治疗效果确定所选择干扰素的最佳剂量。
药物组合物可以溶液、混悬液、片剂、胶囊、冻干粉等等的形式根据本领域众所周知的方法制备。也应考虑到上述组合物的给予应主要地通过肠胃外途径，尽管取决于技术人员的需要也可使用经口或吸入途径。
就诸如DNA或RNA的核酸而论，本文使用的术语“分离的”指分别与存在于大分子天然来源中的其他DNA或RNA分开的分子。该术语分离的也指当通过重组DNA技术制备时基本上不含细胞物质或培养基或当以化学方法合成时基本上不含化学前体或其他化学物的核酸或肽、多肽或蛋白。此外，“分离的核酸”旨在包括并非以片段形式天然存在且不能在天然状态下发现的核酸片段。
一种优选的用于测定提问序列(query sequence)和被检序列(subject sequence)之间最佳全局匹配的方法，也称为全局序列比对，可使用基于Brutlag等(Comp.App.Biosci.，6237-245(1990))算法的FASTDB计算机程序来测定。术语“序列”包括核苷酸和氨基酸序列。在序列比对中，提问和被检序列都是核苷酸序列或都是氨基酸序列。所述全局序列比对的结果以同一性百分数表示。在DNA序列的FASTDB检索中采用的用以计算同一性百分数的优选参数为矩阵＝Unitary，k-字节组(tuple)＝4，错配罚分＝1，连接罚分(JoiningPenalty)＝30，随机化组长度＝0，阈值＝1，空位罚分＝5，空位大小罚分＝0.05以及窗口大小＝500或以核苷酸碱基计的提问序列长度，以更小的为准。用于计算氨基酸比对的同一性和相似性百分数的优选参数是矩阵＝PAM 150，k-字节组＝2，错配罚分＝1，连接罚分＝20，随机化组长度＝0，阈值＝1，空位罚分＝5，空位大小罚分＝0.05以及窗口大小＝500或以氨基酸残基计的提问序列长度，以更短的为准。
可用本领域公知的多种序列比较算法和程序中的任何一种来评价蛋白和/或核酸序列同源性。上述算法和程序包括，但决不限于TBLASTN、BLASTP、FASTA、TFASTA和CLUSTALW(Pearson和Lipman，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85(8)2444-2448；Altschul等，1990，J.Mol.Biol.215(3)403-410；Thompson等，1994，Nucleic Acids Res.22(2)4673-4680；Higgins等，1996，MethodsEnzymol.266383-402；Altschul等，1990，J.Mol.Biol.215(3)403-410；Altschul等，1993，Nature Genetics 3266-272)。
在一个特别优选的实施方案中，使用本领域众所周知的基础局部比对搜索工具(“BLAST”)(参见，如Karlin和Altschul，1990，Proc.Natl.Acad Sci.USA 872267-2268；Altschul等，1990，J.Mol.Biol.215403-410；Altschul等，1993，Nature Genetics3266-272；Altschul等，1997，Nuc.Acids Res.253389-3402)评价蛋白质和核酸序列同源性。特别是，五种专用的BLAST程序被用来执行如下任务(1)BLASTP和BLAST3对蛋白序列数据库比较氨基酸提问序列；(2)BLASTN对核苷酸序列数据库比较核苷酸提问序列；(3)BLASTX对蛋白序列数据库比较提问的核苷酸序列(两条链)的六框整体翻译产物；(4)TBLASTN对翻译为所有六阅读框的核苷酸序列数据库(两条链)比较提问的蛋白序列；以及(5)TBLASTX对核苷酸序列数据库的六框翻译产物比较核苷酸提问序列的六框翻译产物。
BLAST程序通过鉴定在提问的氨基酸或核酸序列和优选从蛋白或核酸序列数据库中获得的受试序列之间类似的区段来确定同源序列，该类似的区段在本文中称为“高得分区段对”。高得分区段对优选通过打分矩阵来确定(即比对)，许多打分矩阵是本领域公知的。优选地，所使用的打分矩阵是BLOSUM62矩阵(Gonnet等，1992，Science2561443-1445；Henikoff和Henikoff，1993，Proteins 1749-61)。较少优选地，PAM或PAM250矩阵也可使用(参见，例如Schwartz和Dayhoff编，1978，Matrices for Detecting DistanceRelationshipsAtlas of Protein Sequence and Structure，WashingtonNational Biomedical Research Foundation)。
BLAST程序评价所鉴定的所有高得分区段对的统计显著性，以及优选地选择那些满足用户指定的显著性阈值的区段，例如满足用户指定的同源性百分数的区段。优选地，使用Karlin的统计显著性公式评价高得分区段对的统计显著性(参见，例如Karlin和Altschul，1990，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 872267-2268)。
上述算法使用的参数可根据所研究的序列长度和同源性程度进行调整。在一些实施方案中，参数可以是在没有用户使用说明的情况下算法所使用的缺省参数。
在某些实施方案中，使用了描述于Brutlag等的Comp.App.Biosci.6237-245，1990中的FASTDB算法。在上述分析中，参数可选自如下矩阵＝Unitary，k-字节组＝4，错配罚分＝1，连接罚分＝30，随机化组长度＝0，阈值＝1，空位罚分＝5，空位大小罚分＝0.05，窗口大小＝500或与探针杂交的序列的长度，以更短者为准。
使用上述方法和诸如FASTA的算法，并根据序列长度和所研究的同源性程度选择参数，例如在没有用户使用说明的情况下算法所使用的缺省参数，可获得具有与一种核酸所编码蛋白至少99.25％、至少98％、至少97％、至少96％、至少95％、至少90％、至少85％、至少80％或至少75％同源性的蛋白的编码核酸。在某些实施方案中，可使用“缺省”开口罚分(opening penalty)和“缺省”空位罚分以及诸如PAM 250(一种标准的打分矩阵参见Dayhoff等，于Atlas of ProteinSequence and Structure，Vol.5，Supp.3(1978))的打分矩阵确定同源性水平。
此外，也可使用Brutlag等.Comp.App.Biosci.6237-245，1990所描述的FASTDB算法确定多肽同源性的水平。在上述分析中，参数可选自如下矩阵＝PAM 0，k-字节组＝2，错配罚分＝1，连接罚分＝20，随机化组长度＝0，阈值＝1，窗口大小＝序列长度，空位罚分＝5，空位大小罚分＝0.05，窗口大小＝500或同源序列长度，以更短者为准。
本发明也包括具有较在此所述的序列为低的同一性程度的序列，但其具有足够的相似性以便能执行一种或多种相同的功能。相似性通过保守的氨基酸取代得到确定。上述取代是那些在多肽中用另一种相似特性的氨基酸取代所给定氨基酸的取代。保守取代可能是表型沉默的。一般视为保守取代的是在脂肪族氨基酸Ala、Val、Leu和Ile中一种为另一种所置换，羟基残基Ser和Thr的互换，酸性残基Asp和Glu的交换，酰胺残基Asn和Gln之间的置换，碱性残基Lys和Arg的交换以及芳香族残基Phy、Tyr之间的置换。涉及可能是表型沉默的氨基酸转变的指导见于Bowie等，Science 2471306-1310(1990)。
为确定两条氨基酸序列或两条核酸序列的同一性百分数，序列以最佳比较目的进行比对(如在第一及第二氨基酸或核酸序列的一方或两方中可导入空位用于最佳比对，以及对于比较目的而言，非同源的序列可忽略不计)。在一个优选的实施方案中，比对至少30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％或更多长度的对照序列用于比较目的。接着比较位于相应的氨基酸位置或核苷酸位置的氨基酸残基或核苷酸。当在第一序列中的一个位置为在第二序列中的相应位置的相同的氨基酸残基或核苷酸所占据时，则分子在该位置是同一的(本文所用的氨基酸或核酸“同一性”相当于氨基酸或核酸“同源性”)。两条序列之间的同一性百分数是为序列所共享的同一的位置数目的函数，对于两条序列的最佳比对而言要考虑到必须导入的空位的数目以及每个空位的长度。
可使用算术算法(Computational Molecular Biology，Lesk，A.M.，编，Oxford University Press，New York，1988；BiocomputingInformatics and Genome Projects，Smith，D.W.，编，AcademicPress，New York，1993；Computer Analysis of Sequence Data，Part1，Griffin，A.M.，和Griffin，H.G.，编.，Humana Press，NewJersey，1994；Sequence Analysis in Molecular Biology，vonHeinje，G.，Academic Press，1987；以及Sequence Analysis Primer，Gribskov，M.和Devereux，J.，编，M Stockton Press，New York，1991)来完成两条序列之间的序列比较和同一性及相似性百分数的确定。在一个优选的实施方案中，使用Needleman和Wunsch(J Mol.Biol.(48)444-453(1970))算法确定两条氨基酸序列之间的同一性百分数，该算法已并入GCG软件包的GAP程序中(获得自http//www.gcg.com)，使用了Blossom 62矩阵或PAM250矩阵，16、14、12、10、8、6或4的空位权重以及1、2、3、4、5或6的长度权重。在又一个优选的实施方案中，使用GCG软件包中的GAP程序(Devereux，J.，等，Nucleic Acids Res.12(1)387(1984))(获得自http//www.gcg.com)确定两条核苷酸序列之间的同一性百分数，使用了NWSgapdna.CMP矩阵和40、50、60、70或80的空位权重和1、2、3、4、5或6的长度权重。在另一个实施方案中，使用E.Myers和W.Miller(CABIOS，411-17(1989))的算法确定两条氨基酸或核苷酸序列之间的同一性百分数，该算法已并入ALIGN程序(2.0版)中，使用了PAM120权重残基表、12的空位长度罚分和4的空位罚分。
本发明的核酸和蛋白序列还可被用作为“提问序列”来执行对序列数据库的搜索，例如，用以鉴定其他家族成员或相关序列。可使用Altschul，等(J.Mol.Biol.215403-10(1990))的NBLAST和XBLAST程序(2.0版)进行上述搜索。可用得分＝100、字长＝12的NBLAST程序进行BLAST核苷酸搜索，以获得与本发明的核酸分子同源的核苷酸序列。可用得分＝50、字长＝3的XBLAST程序进行BLAST蛋白搜索以获得与本发明蛋白同源的氨基酸序列。对于比较目的而言，为获得空位比对，可使用Altschul等(Nucleic Acids Res.25(17)3389-3402(1997))中所描述的空位BLAST(Gapped BLAST)。当使用BLAST和空位BLAST程序时，可使用各自程序(如XBLAST和NBLAST)的缺省参数。
除非另有指定，本发明的实践将使用细胞生物学、细胞培养、分子生物学、转基因生物学、微生物学、重组DNA和免疫学的常规技术，其不超过本领域之技能。上述技术描述于文献中。参见，例如，Molecular Cloning A Laboratory Manual，第二版，Sambrook，Fritsch和Maniatis编(Cold Spring Harbor Laboratory Press1989)；DNA Cloning，Volumes I和II(D.N.Glover编，1985)；Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait编，1984)；Mullis等.US 4,683,195；Nucleic Acid Hybridization(B.D.Hames和S.J.Higgins编.1984)；Transcription And Translation.(B.D.Hames和S.J.Higgins编.1984)；Culture Of Animal Cells(R.I.Freshney，Alan R.Liss，Inc.，1987)；Immobilized Cells AndEnzymes(IRL Press，1986)；B.Perbal，A Practical Guide ToMolecular Cloning(1984)；专题论文，Methods In Enzymology(Academic Press，Inc.，N.Y.)；Gene Transfer Vectors ForMammalian Cells(J.H.Miller和M.P.Calos编，1987，ColdSpring Harbor Laboratory)；Methods In Enzymology，Vols.154和155(Wu等编)，Immunochemical Methods In Cell And MolecularBiology(Mayer and Walker，编，Academic Press，London，1987)；Handbook Of Experimental Immunology，Volumes I-IV(D.M.Weir和C.C.Blackwell，编，1986)；Manipulating the Mouse Embryo，(Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.，1986)。
在本文序列表所描述的核苷酸和氨基酸序列中，就核苷酸序列而论，“n”或“x”可指任何核苷酸，而就蛋白序列而论，“n”或“x”可指任何氨基酸。
本发明的其他特征和优点将显而易见于如下详述和权利要求中。
附图简述

图1显示了猫IFNα的抗病毒活性。
图2显示了猕猴IFNα的抗病毒活性。
图3显示了用于扩增人IFNα的PCR引物序列。
图4显示了用于鉴定每种人IFNα的引物对(详述于图3中)。
图5干扰素抑制SARS冠状病毒细胞病变效应。干扰素以剂量依赖性方式抑制SARS CoV细胞病变效应。该测定通过用SARS临床分离物(GZ50)感染猴肾FRhk-4细胞来进行。3的得分表示由于病毒引起所有的细胞病毒性致死(因此，干扰素没有保护)以及0的得分表示没有细胞被病毒杀死(干扰素完全保护)。参见实施例8。
图6干扰素抑制SARS CoV复制。IFN α2a和新型干扰素在抑制非洲绿猴细胞(Vero 76)中SARS CoV(Urbani)细胞病变效应中的效力。通过直接目测评价肝细胞或通过中性红染色肝细胞测定病毒抑制作用的IC50。参见实施例9。
图7干扰素抑制呼吸道合胞体病毒复制。在体外测试IFN对呼吸道合胞体病毒(RSV)B组的两种临床分离物和RSV A组的两种临床分离物复制的抑制能力。通过连续稀释IFN测定IC50，并对病毒蛋白进行免疫测定以测定50％抑制病毒复制的浓度。对于那些条延伸到图顶端的样品而言，所计算的IC50大于2500pg/ml，且在该测定中不易被测定。参见实施例10。
图8干扰素在保护人肺成纤维细胞抗流感病毒感染的效力。干扰素体外抑制流感病毒在人肺成纤维细胞中生长的效力。测定每种干扰素IC50，并将IFN α2a所得到的IC50值设为1。测定新型IFNαIC50/IFN α2a IC50比值。在该图中更大的数字就表示该干扰素较IFNα2a更有效。参见实施例11。
图9保护肝细胞抗黄热病病毒感染干扰素保护肝细胞抗YFV感染的效力，如丙型肝炎治疗模型，使用HepG2肝细胞进行测定。比色测定IC50。进行两次独立测定。参见实施例12。
图10在多种具有不同病毒攻击的细胞型中比较IFN α2a和新型IFN。在5种不同的细胞型和3种不同的病毒基础上测试IFN α2a和新型干扰素的效力。在所有情况下，将IFN α2活性设为1，以及如果IFN更有效则该值大于1，如果效力较小则小于1。参见实施例7和13。
发明详述I.例示的制剂在另一方面，本发明提供了包含干扰素、干扰素激动剂或干扰素拮抗剂的药物制剂。供本发明方法所用的干扰素、干扰素激动剂和/或干扰素拮抗剂可方便地用生物学上可接受的介质进行配制用于给药，所述介质例如水、缓冲盐水、多元醇(例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)或其合适的混合物。依照药剂师所周知的操作方法，可根据经验测定所选介质中活性成分的最佳浓度。本文使用的“生物学上可接受的介质”包括能适用于药物制剂所期望的给药途径的任一和所有溶剂、分散介质等等。本领域公知上述介质对药物活性物质的应用。除任何与本发明组合物活性不相容的常规介质或试剂之外，预计其可用于本发明的药物制剂中。合适的载体及包括其他蛋白在内的其剂型描述于例如教科书Remington氏药物学(Remington′sPharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，USA 1985)中。这些载体包括可注射的“沉淀成分”(depositformulations)。
本发明的药物制剂也可包括兽用组合物，如适合兽用的本发明组合物的药物制剂，如用于牲畜、非人灵长类动物或诸如狗和猫的家畜的治疗。
可再装载或生物可降解的装置也可提供导入的方法。在最近几年中对于包括蛋白质生物药剂的药物的受控递送而言，业已开发出多种缓释聚合物装置并在体内进行了测试。多种生物相容的聚合物(包括水凝胶)，包括生物可降解的和不可降解的聚合物，可用来制备用于在特定靶位持续释放的植入物。
本发明的制剂可经口、肠胃外、局部、鞘内/脑室内(ICV)、颅内给予、直接给予中枢神经系统(腔内)或经直肠给予。当然，它们是通过适合于各自给药途径的方式给予。例如，它们以片剂或胶囊形式给予，通过注射、吸入、洗眼剂、软膏剂、栓剂、控制释放膜片等，通过注射、输注或吸入给予；洗剂或软膏剂通过局部给予；以及栓剂通过直肠给予。在某些实施方案中，优选经口和局部给予。在一个实施方案中，干扰素直接递送至鼻咽粘膜。在一个实施方案中，干扰素直接递送至肺上皮。这可使这些细胞对病毒的抗性强于在全身给药中使用这些组织作为载体。既然这样，全身的干扰素可以是最小限度的，使得副作用最小或消除。
本文所用的短语“肠胃外给药”和“肠胃外给予”指不同于经肠或局部给药的给药方式，通常通过注射，和包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眼眶内、心内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下(subcuticular)、关节内、被膜下、蛛网膜下、脊柱内、和胸骨内注射及输注。
本文使用的短语“全身给药”、“全身给予”、“外周给药”以及“外周给予”指除直接给予至中枢神经系统、膀胱或其他人体隔室之外的化合物、药物或其他物质的给予，使得其能进入患者系统并因此经历新陈代谢和其他类似过程，例如皮下给予。
通过任何合适的给药途径这些化合物可给予人和其他动物以用于治疗，包括经口、经鼻、像通过例如喷雾，经直肠、阴道内、肠胃外、池内和局部，像通过粉剂、软膏剂或滴剂，包括经颊和舌下给药。
与所选择的给药途径无关，可以合适的水合形式使用的本发明的化合物，和/或本发明的药物组合物通过诸如描述如下的方法或通过其他本领域技术人员公知的常规方法配制为药学上可接受的剂型。
在本发明药物组合物中活性成分的实际剂量水平可改变，以便对于特定患者、组合物和给予方式所获得活性成分的量能有效地达到所期望的治疗响应，对患者应无毒性。
所选择剂量水平将取决于多种因素，包括本发明使用的特定化合物或其酯、盐或酰胺的活性、给药途径、给药时间、所使用的特定化合物的排出率、治疗的持续时间、与所使用的特定组合物联合使用的其他药物、化合物和/或物质、所要治疗的患者的年龄、性别、体重、状态、一般健康和之前的医疗史、以及医学领域众所周知的其他因素。
具有本领域普通技能之医师或兽医可容易地确定或开出有效量的所需药物组合物。例如，医师或兽医可开始以低于为达到所期望治疗效果所需的量的水平开出在药物组合物中所使用的本发明的化合物的剂量，然后逐渐地增加剂量直至达到所期望的效果。
一般而言，本发明化合物合适的日剂量可以是这样一种化合物的量，即能有效地产生治疗效果的最低剂量。上述有效剂量通常取决于以上所描述的因素。
如果需要，活性化合物的有效日剂量可以二、三、四、五、六或更多的亚剂量在一整天中以适当间隔分别给予，任选地，呈单位剂量形式。
术语“治疗”旨在也包括感染的预防、治疗、治愈和阻止传播。
接受该治疗的患者可以是任何有需要的动物或动物媒介(病毒源)，包括灵长类动物，特别是人，以及其他哺乳动物，例如马、牛、猪、啮齿类动物和绵羊；以及一般而言的家禽和宠物。
本发明的化合物可就这样或与药学上可接受的和/或无菌的载体以混合物的形式给予，也可与其他试剂联合给予。上述试剂的非限制性例子包括诸如青霉素类、头孢菌素类、氨基糖甙类和糖肽类的抗微生物剂。联合疗法因此包括了连续、同时以及以一种方式即当后继药物给予时，首先给予的一种药物其治疗效果并不完全消失的方式来分别给予活性化合物。
I1.药物组合物尽管本发明的化合物有可能单独给予，优选将化合物作为药物制剂(组合物)来给予。本发明的组合物可以任何便于人或兽医学使用的方式进行配制用于给药。在某些实施方案中，包括在药物制剂中的所述化合物本身可是有活性的，或为前药，如能在生理环境下转变为活性化合物。
因此，本发明的另一方面提供了药学上可接受的组合物，包含治疗有效量的一种或多种上述化合物，其与一种或多种药学上可接受的载体(添加剂)和/或稀释剂一起配制。如下所详述，本发明的药物组合物可专门配制为固体或液体形式用于给药，包括那些适合如下的(1)口服，例如，灌服剂(水或非水溶液或混悬液)、片剂、大丸剂、粉剂、颗粒、施用于舌的膏剂；(2)肠胃外给药，例如经皮下、肌内或静脉内注射，作为例如无菌溶液或混悬液；(3)局部施药，例如施用给皮肤的乳膏、软膏剂或喷雾剂；或(4)阴道内或直肠内给药，例如阴道栓剂、乳膏或泡沫剂。然而，在某些实施方案中，受试化合物可简单地溶解或悬浮在无菌水中。在某些实施方案中，药物制剂是非致热的，即无法升高患者体温。
在此使用的短语“治疗有效量”指在至少一个动物细胞亚群中能有效地产生某些所期望的治疗效果并因此在所治疗的细胞中阻断该途径的生物学结果、以合理的利益/风险比可适用于任何医学处理中的化合物、物质或包含本发明化合物的组合物的量。
本文使用的短语“药学上可接受的”指那些在医师正确判断范围内，适合于和人类和动物组织接触使用而无过度毒性、刺激、变态反应或其他问题或并发症、具有与之相称的合理利益/风险比的化合物、物质、组合物和/或剂型。
本文使用的短语“药学上可接受的载体”指药学上可接受的材料、组合物或载体，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料，涉及从一个器官或身体的一部分运送或运输受试激动剂到另一器官或身体的另一部分。在与剂型中其他成分相容的意义上，每个载体应当是“可接受的”且对患者无害。可作为药学上可接受载体的材料的一些实例包括(1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠盐、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)粉状西黄蓍胶；(5)麦芽；(6)白明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；(9)油剂，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油；(10)二醇类，例如丙二醇；(11)多元醇类，例如丙三醇、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯类，例如油酸乙酯和十二烷酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏(Ringer’s)溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲液；和(21)其他用于药物制剂中的无毒相容物质。
III.例示的剂型本发明的干扰素也可与其他分子、分子结构或化合物的混合物混合、包封、偶联或以其他方式结合，作为例如、脂质体、聚合物、受体靶向分子、经口、直肠、局部或其他剂型，用于帮助摄取、分配和/或吸收。受试干扰素也可以另外包括穿透增强剂、载体化合物和/或转染剂的剂型来提供。
本发明组合物也包含任何一种药学上可接受的盐、酯或上述酯的盐、或任何其他在给予包括人在内的动物时能提供(直接或间接)生物学活性代谢物或其残留物的化合物。因此，例如本发明公开也涉及药学上可接受的盐和其他生物等价物。
药学上可接受的碱加成盐是与金属或胺类形成的，例如碱金属和碱土金属或有机胺类。用作为阳离子的金属的例子是钠、钾、镁、钙等等。合适的胺的例子是N，N，-二苄基乙二胺，氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、二环己胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺以及普鲁卡因(参见，例如Berge等，″Pharmaceutical Salts，″J.of Pharma Sci.，1977，66，1-19)。通过常规方法将游离酸形式与足够量的所需碱接触形成盐来制备所述酸性化合物的碱加成盐。所述游离酸形式可通过常规方法将盐形式与酸接触并分离游离酸得到再生。游离酸形式与它们各自的盐形式在某些物理性质上稍有不同，例如在极性溶剂中的溶解度，但在别的方面对于本发明目的而言盐等同于它们各自的游离酸。本文使用的“药用加成盐”包括由本发明组合物的一种成分的酸形式所形成的药学上可接受的盐。这些包括胺的有机或无机酸式盐。优选的酸式盐是盐酸盐、醋酸盐、水杨酸盐、硝酸盐和磷酸盐。其他合适的药学上可接受的盐为本领域技术人员众所周知并包括多种无机和有机酸的碱式盐。
A.超分子复合物在某些实施方案中，所述剂型作为“超分子复合物”的一部分。为进一步举例说明，干扰素可与至少一种聚合物接触形成复合物，然后该复合物的聚合物在足以形成含有干扰素和多维聚合物网络的超分子复合物的条件下处理。该聚合物分子可以是线型或支化的。因此，一组两个或更多个聚合物分子可以是线型、支化或线型和支化聚合物的混合物。复合物可通过本领域公知的任何合适的方法制备。例如，复合物可通过用聚合物简单地接触、混合或分散干扰素来形成。复合物也可通过聚合单体来制备，所述单体可以是相同的或不同的，在表达构建体存在下能形成线型或支化的聚合物。复合物可用至少一种配体再修饰，以便例如指导表达构建体的细胞摄取或实现表达构建体的体内组织或细胞分布。复合物可采用任何合适的形式且优选采用颗粒形式。
在某些优选的实施方案中，用阳离子型聚合物配制受试干扰素。例示的阳离子型聚合物包括聚(L)赖氨酸(PLL)和聚氮丙啶(PEI)。在某些优选的实施方案中，用含有β-环糊精的聚合物(βCD-聚合物)配制受试的表达构建体。βCD-聚合物能与核酸及转染的培养细胞形成聚丛(polyplexes)。可合成βCD-聚合物，例如通过二氨基-环糊精单体A与二酰亚胺化物(diimidate)共聚单体B缩合合成。环糊精是环状多糖，包含天然存在的以α-(1，4)键合的D(+)-吡喃型葡萄糖单元。最常见的环糊精是α-环糊精、β-环糊精和γ-环糊精，它们分别包含6、7或8个吡喃型葡萄糖单元。例示的环糊精递药系统可容易地适用于受试干扰素的递送，描述于，例如Gonzalez等的PCT申请WO 00/01734和Davis的PCT申请WO 00/33885。
在某些实施方案中，超分子复合物聚集为微粒，例如，具有20-5000纳米(nm)平均直径的微粒制剂。在另一个实施方案中，微粒具有20-200nm的平均直径。在另一个实施方案中，粒子具有2-10微米的平均直径。颗粒大小在2-10微米例如可用于递送至肺。
B.其他阳离子的、非脂类制剂在某些实施方案中，干扰素提供于阳离子的、非脂类载体中并配制用于通过呼吸道的气溶胶递送。使用聚(氮丙啶)和诸如dsRNA及dsRNA-编码质粒的大分子的制剂可产生高水平的肺转染并在喷雾过程中稳定性增加。对于肺，PEI-核酸制剂也可具有高度特异性。
除用PEI配制干扰素之外，本发明也涉及使用环糊精-修饰的聚合物，例如环糊精-修饰的聚(氮丙啶)。在某些实施方案中，受试聚合物具有结构式
其中R每次出现时独立地，代表H、低级烷基、环糊精部分或 和m每次出现时独立地，代表从2-10,000的整数，优选从10-5,000，或从100-1,000。
在某些实施方案中，R代表环糊精部分，其为氮原子的至少约1％，更优选至少约2％，或至少约3％，以及至多约5％或乃至10％，如果没有环糊精部分，则所述氮原子应当是伯胺(即具有两次出现的代表H的R)。
在某些实施方案中，按重量计算环糊精部分占环糊精-修饰的聚合物组成的至少约2％、3％或4％、至多5％、7％或、乃至10％。
在某些实施方案中，在聚合物中按重量计算至少约2％、3％或4％、至多5％、7％、或乃至10％的氮丙啶亚基被环糊精部分所修饰。
具有对环糊精部分的衍生作用敏感的亲核氨基取代基的聚(氮丙啶)的共聚物也可用于制备在本发明的范围内的环糊精-修饰的聚合物。
例示的环糊精部分包括基本上由7-9个糖类部分组成的环状结构，所述糖类部分例如环糊精和氧化的环糊精。环糊精部分任选地包含在环状结构和聚合物主链之间形成共价键的连接部分，在该链中优选具有1-20个原子，例如烷基链，包括二羧酸衍生物(例如戊二酸衍生物、琥珀酸衍生物等)，以及杂烷基链，例如寡乙二醇链。
C.脂质体制剂在某些实施方案中，本发明提供了包含干扰素的组合物，该干扰素包封在脂质体中或以其他方式与脂质体结合。本文所用的脂质体指具有脂质外层的脂囊泡，一般形成一个或多个脂双层，包裹着含水内核。在一个优选的实施方案中，脂质体是由约20-80摩尔百分数的阳离子泡囊形成脂质组成的阳离子型脂质体，剩余部分是中性泡囊形成脂质和/或其他成分。本文所用的“泡囊形成脂质(vesicle-forminglipid)”指具有疏水和极性头基部分且自身在水中能单独自发地形成双层泡囊的任何两亲性脂质，例如磷脂类。一种优选的泡囊形成脂质是二酰基链脂质，例如磷脂，其酰基链长度一般在约14-22个碳原子之间，并具有不定的不饱和度。
阳离子泡囊形成脂质是一种在可使用的pH如pH 4-9处，其极性头基(head proup)具有净正电荷的脂质。典型实例包括磷脂，例如磷脂酰乙醇胺，其极性头基用诸如赖氨酸的阳电性部分衍生化，举例说明，例如用L-赖氨酸衍生的脂质DOPE(LYS-DOPE)(Guo，等，1993)。也包括在该类中的是糖脂类，例如具有阳离子极性头基的脑苷脂类和神经节苷脂类。
其他可使用的阳离子泡囊形成脂质是胆甾醇胺和相关的阳离子甾醇类。例示的阳离子脂质包括1，2-二油酰氧-3-(三甲基氨基)丙烷(DOTAP)；N-[1-(2，3，-双十四烷氧)丙基]-N，N-二甲基-N-羟乙基溴化铵(DMRIE)；N-[1-(2，3，-二油酰氧)丙基]-N，N-二甲基-N-羟乙基溴化铵(DORIE)；N-[1-(2，3-二油酰氧)丙基]-N，N，N-三甲基氯化铵(DOTMA)；3β[N-(N′，N′-二甲氨基乙烷)氨基甲酰基]胆甾醇(DC-Chol)和二甲基双十八烷基铵(DDAB)。
其他脂质体由中性泡囊形成脂质形成，所述中性泡囊形成脂质指不具有净电荷的泡囊形成脂质或其可包括小百分比的在极性头基中带负电的脂质。包括在该类脂质中的是磷脂类，例如磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)和鞘磷脂(SM)，以及胆甾醇、胆甾醇衍生物，和其他不带电的甾醇类。
上述脂质可从商业渠道获得或根据公布的方法制备。可包括在本发明中的其他脂质是糖脂类，例如脑苷脂类和神经节苷脂类。
在本发明一个实施方案中，干扰素-脂质体复合物包括具有亲水聚合物链表面涂层的脂质体，该涂层能有效地延长质粒/脂质体复合物的血循环时间。合适的亲水聚合物包括环糊精(CD)、聚乙二醇(PEG)、聚乳酸、聚乙醇酸、聚乙烯吡咯烷酮、聚甲基噁唑啉、聚乙基噁唑啉、聚羟基丙基(甲基丙烯酰胺)、聚甲基丙烯酰胺、聚二甲基丙烯酰胺和衍生的纤维素，例如羟甲基纤维素或羟乙基纤维素。优选的亲水聚合物链是聚乙二醇(PEG)，PEG链优选具有在500-10,000道尔顿之间的分子量，更优选在1,000-5,000道尔顿之间。亲水聚合物可溶于水和诸如氯仿的非水溶剂中。
涂层优选通过将在其头基用聚合物链衍生的磷脂或其他二酰基链脂质包括在泡囊形成脂质中来制备。制备上述脂质并以此形成聚合物包被的脂质体的例示方法业已描述于US 5,013,556和5,395,619中，其在此并入作为参考。
应当理解亲水聚合物可稳定地与脂质偶联，或通过不稳定的键合偶联，在血流循环期间或在目标部位定位后该键合允许聚合物包被的质粒-脂质体复合物脱出或“释放”亲水聚合物涂层。亲水聚合物特别是聚乙二醇(PEG)与泡囊形成脂质通过在响应刺激过程中有效地释放聚合物链的键连接的内容业已描述于例如WO 98/16202、WO 98/16201中，其在此并入作为参考，和Kirpotin，D.等(FEBS Letters，388115-118(1996)中。
在一个实施方案中，可释放的键是化学可释放的键，其通过给予合适的释放剂而裂解或在选择性的生理条件下被裂解，例如在酶或还原剂存在下。例如，酯和肽键合通过酯酶或肽酶裂解。二硫键通过给予还原剂裂解，例如谷胱甘肽或抗坏血酸，或通过体内存在的还原剂裂解，例如半胱氨酸，其存在于血浆和胞内。
其他可释放的键合包括pH敏感的键和暴露于葡萄糖、光或热下裂解的键。作为一个例子，亲水聚合物链可通过pH敏感的键连接到脂质体上，以及质粒-脂质体复合物被靶向至具有能有效裂解该键并能释放亲水链的pH的位置，例如肿瘤区。例示的pH敏感的键包括酰氧基烷基醚、缩醛和缩酮键。另一个可裂解的键的例子是二硫键，在此泛指含硫键。含硫键可合成以达到所选择的不稳定性程度，包括二硫键、混合的硫-砜键和硫-亚砜键。就这三种键而言，二硫键对硫解作用最不敏感而硫-亚砜键最敏感。
上述可释放的键可用来控制来自脂质体复合物的亲水聚合物链段的释放率。例如，一种十分不稳定的二硫键可用于靶向至血细胞或内皮细胞，因为这些细胞易接近且较短的脂质体血液循环寿命就足够了。在另一头，当靶位是肿瘤组织或其他器官时，可使用长寿的或稳定的二硫键，在此对于复合物要抵达所期望的靶位而言较长的脂质体血液循环寿命通常是需要的。
连接亲水聚合物链和脂质体的可释放的键在体内一般作为环境变化的结果而裂解，例如当脂质体抵达具有稍低pH的特定位置时，例如肿瘤组织区，或具有还原条件的位置时，例如含氧量低的肿瘤。体内还原条件也可经所给予的还原剂来实现，例如抗坏血酸、半胱氨酸或谷胱甘肽。该可裂解的键在响应诸如光和热的外部刺激过程中也可断裂。
在另一个实施方案中，所述脂质体复合物包括能有效地特异性结合至治疗所针对的靶细胞的亲合力部分或靶向配体。上述部分可连接到脂质体表面或亲水聚合物链的末端。例示的部分包括抗体、用于特异性结合至靶细胞表面受体的配体等等，描述于，例如PCT申请WOUS94/03103，WO 98/16202和WO 98/16201中。该部分也可以是疏水链段以利于复合物与靶细胞的融合。
用于缩合干扰素的聚阳离子缩合剂可以是多电荷阳离子聚合物，并优选是生物聚合物，例如亚精胺、精胺、聚赖氨酸、鱼精蛋白、总组蛋白、诸如H1、H2、H3、H4的特异性组蛋白片段以及其他的聚阳离子多肽，但也可包括生物相容的聚合物，例如多粘菌素B。应当理解这些聚阳离子缩合剂可以游离碱或盐形式使用，例如鱼精蛋白硫酸盐和聚赖氨酸氢溴酸盐。在一个优选的实施方案中，聚阳离子缩合剂是组蛋白，就本文而言包括总组蛋白和特定组蛋白片段。
在某些实施方案中，聚合物-脂质偶联物中的疏水链段是疏水多肽序列。优选地，该多肽序列由约5-80个，更优选地由10-50个，最优选地由20-30个非极性和/或脂肪族/芳香族氨基酸残基组成。这些序列在触发某些包膜病毒与宿主细胞的融合过程中是有活性的，所述病毒包括副流感病毒，例如仙台病毒、猿猴病毒-5(SV5)、麻疹病毒、新城鸡瘟病毒(NDV)和呼吸道合胞体病毒(RSV)。其他实例包括人逆转录病毒，例如人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)、AIDS病原体，其通过病毒包膜与宿主细胞的质膜融合而感染细胞。融合发生在生理学(即中性)pH下，随后将病毒遗传物质(核壳体)注射入宿主细胞的细胞质区室中。
D.配体导向的制剂在某些实施方案中，聚合的复合物，例如超分子复合物和本发明的脂质体可与一种或多种能有效结合到靶细胞上特定细胞表面蛋白或基质的配体结合，因此利于复合物和靶细胞的螯合，且在某些例子中，增强细胞对干扰素的摄取。仅用于举例说明，适合用于本发明的超分子复合物和脂质体靶向至特定的细胞型的配体实例列于下表1中。
表1
本发明也涉及受试的聚合物和脂质体复合物与促进该复合物胞转作用的配体的衍生作用。为进一步举例说明，一种聚合的复合物例如超分子复合物可共价连接到驱动该复合物易位通过细胞膜以便利于干扰素细胞内定位的内在化肽。在这点上，内在化肽单独地能以相对高的速率通过细胞膜，通过如胞转作用进行。该内在化肽如通过共价的侧基偶联至聚合物上。
在一个实施方案中，内在化肽源自果蝇antepennepedia蛋白或其同系物。业已证实了同源异型蛋白antepennepedia的60个氨基酸的同源结构域易位通过生物膜并能利于其所偶联的异源多肽易位。参见，例如Derossi等.(1994)J Biol Chem 26910444-10450；和Perez等.(1992)J Cell Sci 102717-722。近来，已证实了该蛋白小至16个氨基酸长的片段就足以驱动内在化作用。参见Derossi等.(1996)J Biol Chem 27118188-18193。本发明涉及一种用相对于未修饰的复合物足以增加所修饰复合物跨膜转运的antepennepedia蛋白(或其同系物)的至少一部分修饰的干扰素复合物，达到了统计学显著的量。
另一种内在化肽的例子是HIV反式作用子(TAT)蛋白。该蛋白看到上去可分为四个结构域(Kuppuswamy等.(1989)Nucl.Acids Res.173551-3561)。在组织培养中，纯化的TAT蛋白为细胞所吸收(Frankel和Pabo，(1989)Cell 551189-1193)，肽例如相应于TAT的残基37-62的片段在体外为细胞所快速吸收(Green和Loewenstein，(1989)Cell 551179-1188)。高碱性区介导了内在化作用并靶向内在化部分至细胞核(Ruben等，(1989)J.Virol.631-8)。包括存在于高碱性区的序列诸如CFITKALGISYGRKKRRQRRRPPQGS的肽或类似物偶联至聚合物以助于内在化作用并靶向那些复合物至胞内环境。
可制备另一种例示的跨细胞多肽，包括足以增加干扰素复合物的跨膜转运的黄蜂毒素部分(T.Higashijima等，(1990)J.Biol.Chem.26514176)。
可制备其他合适的内在化肽，使用了如组蛋白、胰岛素、转铁蛋白、碱性白蛋白、促乳素和胰岛素样生长因子I(IGF-I)、胰岛素样生长因子II(IGF-II)或其他生长因子的全部或部分。例如，已发现一胰岛素片段具有对毛细血管细胞上胰岛素受体的亲合力，并较胰岛素对血糖减少的效力更低，能通过受体介导的胞转作用进行跨膜转运，因此对于受试的跨细胞多肽而言可作为内在化肽。优选的生长因子衍生内在化肽包括EGF(表皮生长因子)衍生肽，例如CMHIESLDSYTC和CMYIEALDKYAC；TGF-β(β转化生长因子)衍生肽；衍生自PDGF(血小板衍生生长因子)或PDGF-2的肽；衍生自IGF-I(胰岛素样生长因子)或IGF-II的肽；和FGF(成纤维细胞生长因子)衍生的肽。
另一类易位肽/内在化肽具有pH依赖的膜结合性。对于一种在酸性pH下采取螺旋构象的内在化肽而言，该内在化肽获得了两亲性，如其具有疏水和亲水界面。更准确地说，在约5.0-5.5的pH范围内，内在化肽形成α-螺旋，两亲性结构有利于该部分插入到靶膜中。可发现一种α-诱导螺旋的酸性pH环境，例如，在细胞内体中所存在的低pH环境。上述内在化肽可用于帮助干扰素复合物的转运，通过细胞内吞机制吸收，从内体区室至细胞质。
其他优选的内在化肽包括载脂蛋白A-1和B；肽毒素，例如蜂毒肽、bombolittin、δ溶血素和摩西鱼毒肽(pardaxins)；抗菌肽，例如丙甲菌素；肽类激素，例如降钙素、促肾上腺皮质激素释放因子、β内啡肽、胰高血糖素、甲状旁腺激素、胰多肽；以及相应于众多分泌性蛋白信号序列的肽。此外，例示的内在化肽可通过连接能增强内在化肽在酸性pH下α-螺旋特性的取代基得到修饰。
又一类适合于本发明使用的内在化肽包括在生理学pH下“隐藏”但在靶细胞内体低pH环境下暴露的疏水结构域。刚一产生pH-诱导的解折叠和疏水结构域的暴露，该部分就结合到脂双层上并导致共价连接的复合物易位至细胞质中。上述内在化肽可仿造自鉴定于如假单胞菌外毒素A、网格蛋白或白喉毒素中的序列。
本文中孔道形成蛋白或肽也可作为内在化肽。孔道形成蛋白或肽可获得自或衍生自，例如C9补体蛋白、细胞溶解型T-细胞分子或NK-细胞分子。这些部分在膜中能形成环状构造，由此允许所连接的复合物通过膜转运并进入细胞内部。
仅内在化肽向膜的插入就足以将复合物易位通过细胞膜。然而，可通过将内在化肽与胞内酶的底物(即“辅助肽”)连接而改善易位。优选的是将辅助肽连接到内在化肽通过细胞膜伸出到细胞质面的一部分。辅助肽连接到易位/内在化部分或锚肽的一个末端是有利的。本发明的辅助部分可含有一个或多个氨基酸残基。在一个实施方案中，辅助部分可提供细胞磷酸化作用的底物(例如，辅助肽可含有酪氨酸残基)。
在这点上，例示的辅助部分应当是一种N-肉豆蔻酰转移酶的肽底物，例如GNAAAARR(Eubanks等，在Peptides.Chemistry andBiology中，Garland Marshall(编)，ESCOM，Leiden，1988，pp566-69)。在该构建体中，内在化肽应当连接到辅助肽的C-末端，因为对于辅助部分的活性而言N-末端甘氨酸是关键的。该连接到聚合物复合物的杂合肽是N-肉豆蔻酰化的且进一步锚定在靶细胞膜上，如其用来增加细胞膜上复合物的局部浓度。
合适的辅助肽包括是激酶底物的肽、具有单个正电荷的肽以及含有为膜结合糖基转移酶所糖基化的序列的肽。为膜结合糖基转移酶所糖基化的辅助肽可包括序列x-NLT-x，例如其中“x”可以是另一种肽、一种氨基酸、偶联剂或疏水分子。当该疏水三肽与微粒体小泡温育时，其穿过液泡膜，在腔侧糖基化，并由于其亲水性而陷入小泡中(C.Hirschberg等，(1987)Ann.Rev.Biochem.5663-87)。因此含有序列x-NLT-x的辅助肽能增强相应复合物的靶细胞保留度。
如上所述，内在化肽和辅助肽可分别独立地通过化学交联或通过非共价相互作用(如，使用链霉抗生物素蛋白-生物素偶联物、His6-Ni相互作用等)添加到干扰素复合物或脂质体上。在某些例子中，无结构(unstructured)的多肽接头可包括在肽部分和聚合复合物或脂质体之间。
也涉及的是上述内在化肽和辅助肽能直接与干扰素连接，例如通过共价键连接到蛋白主链上的羟基。在某些实施方案中，该键合对生理条件下的裂解敏感，例如通过暴露于酯酶或简单的水解反应。上述组合物可单独使用或在聚合的复合物或脂质体中配制。
E.可呼吸的干扰素本发明的另一方面提供了用于递送干扰素至呼吸道的气溶胶。所述呼吸道包括上气道，包括口咽和喉，之后的下气道，其包括气管，之后的伸至支气管和细支气管中的分叉。上气道和下气道被称为能传导的气道。之后末端细支气管分为呼吸作用的细支气管，之后其通往最后的呼吸区，肺泡或肺的深部。
在此，通过吸入给予可以经口和/或经鼻、气管内(穿孔或气管切开插管)、或通过诸如呼吸机的呼吸辅助设备。用于气溶胶递送的药用转置的实例包括计量吸入器(MDIs)、干粉吸入装置(DPIs)以及空气喷射喷雾器。可容易地适用于受试干扰素的递送的例示的吸入递药系统描述于，例如US 5,756,353；5,858,784；和PCT申请WO 98/31346；WO 98/10796；WO 00/27359；WO 01/54664；WO 02/060412中。其他可用于递送干扰素的气溶胶制剂描述于US 6,294,153；6,344,194；6,071,497和PCT申请WO 02/066078；WO 02/053190；WO 01/60420；WO 00/66206中。
在几分钟到几小时的一段时间内，人肺脏能除去或快速降解可通过水解作用裂解的沉积的气溶胶。在上气道中，纤毛上皮细胞有助于“黏膜纤毛的部分缺失(excalator)”，由此颗粒从呼吸道排放出口。Pavia，D.，″LungMucociliary Clearance″，于Aerosols and theLungClinical and Experimental Aspects，Clarke，S.W.和Pavia，D.，编.，Butterworths，London，1984。在肺的深部，在颗粒沉积不久之后肺泡巨噬细胞能吞噬它们。Warheit等.MicroscopyRes.Tech.，26412-422(1993)；和Brain，J.D.，″Physiologyand Pathophysiology of Pulmonary Macrophages″，于TheReticuloendothelial System，S.M.Reichard和J.Filkins，编.，Plenum，New.York，pp.315-327，1985。肺的深部或肺泡是用于干扰素全身递送的吸入的治疗性气溶胶的主要靶位。
在优选的实施方案中，特别是在希望进行的干扰素的全身性给药情况下，雾化的干扰素配制为微粒。具有0.5-10微米直径的微粒能穿过肺，透过大多数的天然屏障。小于10微米的直径是绕过喉所必需的；0.5微米或更大的直径是避免被呼出所必需的。
在某些优选的实施方案中，受试干扰素在超分子复合物中配制，如上所述，其具有0.5-10微米的直径，能聚集为具有0.5-10微米直径的颗粒。
在其他实施方案中，脂质体或超分子复合物中提供的受试干扰素(如上所述)可适当地配制用于肺部递药。
(i).用于形成微粒的聚合物除上述超分子复合物外，许多其他聚合物可用于形成微粒。在此所用的术语“微粒”包括微球(均一球体)、微囊(具有核和聚合物外层)和不规则形状的颗粒。
聚合物优选在预期干扰素释放的时间段内或不久之后是生物可降解的，通常在一年的范围内，更常见的是几个月，最常见的几天到几周。生物可降解可指微粒的分解，即形成微粒的聚合物的解离和/或聚合物自身的解离。其可由于如下原因而发生从被给予的颗粒所在的载体pH到所释放位置pH变化，象在二酮哌嗪类存在下；水解作用，象在聚(羟酸)存在下；通过微粒外的诸如钙离子的离子扩散，象在通过诸如藻酸盐的聚合物离子键合形成微粒的存在下；通过酶催化作用，象在许多多糖和蛋白的存在下。有时线性释放可能是最有用的，尽管在其他情况下脉冲释放或“批量释放”可提供更有用的结果。
代表性的合成材料是二酮哌嗪类，聚(羟酸)，诸如聚(乳酸)，聚(羟基乙酸)及其共聚物，聚酐，聚酯，诸如聚原酸酯类，聚酰胺，聚碳酸酯，聚烯烃类，诸如聚乙烯、聚丙烯，聚(乙二醇)，聚(环氧乙烷)，聚(对苯二甲酸亚乙酯)，聚乙烯系化合物，诸如聚乙烯醇、聚乙烯醚、聚乙烯酯、聚乙烯卤化物、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙酸乙烯酯和聚氯乙烯，聚苯乙烯，聚硅氧烷，丙烯酸和甲基丙烯酸的聚合物，包括聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸异丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸异癸酯)、聚(甲基丙烯酸月桂酯)，聚(甲基丙烯酸苯酯)，聚(丙烯酸甲酯)，聚(丙烯酸异丙酯)，聚(丙烯酸异丁酯)，聚(丙烯酸十八烷基酯)，聚氨酯及其共聚物，纤维素，包括烷基纤维素、羟烷基纤维素、纤维素醚、纤维素酯、硝基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟基丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丁基甲基纤维素、醋酸纤维素、丙酸纤维素、醋酸丁酸纤维素、醋酸邻苯二甲酸纤维素、羧乙基纤维素、三醋酸纤维素和硫酸纤维素钠盐，聚(丁酸)，聚(戊酸)以及聚(丙交酯-共聚-己内酯)。
天然聚合物包括藻酸盐以及其他多糖包括葡聚糖和纤维素、胶原、白蛋白和其他亲水蛋白、玉米蛋白和其他醇溶谷蛋白以及疏水蛋白、它们的共聚物和混合物。本文所用的其化学衍生物指化学基团的置换、添加，例如烷基、亚烷基、羟基化作用、氧化作用和其他为本领域技术人员所常规使用的修饰。
生物粘附聚合物包括描述于H.S.Sawhney，C.P.Pathak和J.A.Hubell Macromolecules，1993，26，581-587中的生物可蚀解的水凝胶、聚透明质酸、酪蛋白、明胶、明胶蛋白、聚酐、聚丙烯酸、藻酸盐、壳聚糖和聚丙烯酸酯。
为进一步举例说明，基质可由聚合物通过溶剂蒸发、喷雾干燥溶剂萃取和其他本领域技术人员公知的方法制备。开发用于制备用于药物递送的微球的方法描述于文献中，例如Mathiowitz和Langer，J.Controlled Release 5，13-22(1987)；Mathiowitz等，ReactivePolymers 6，275-283(1987)；和Mathiowitz等，J.Appl.PolymerSci.35，755-774(1988)所描述的。该方法的选择取决于聚合物的选择，所期望的大小、外部形态和结晶度，如Mathiowitz等，ScanningMicroscopy 4，329-340(1990)；Mathiowitz等，J.Appl.PolymerSci.45，125-134(1992)；和Benita等，J.Pharm.Sci.73，1721-1724(1984)所描述的。
在溶剂蒸发中，例如描述于Mathiowitz等，(1990)，Benita以及Jaffe的US 4,272,398中的，聚合物溶解于挥发性有机溶剂中。将以可溶形式存在或分散为细微颗粒的干扰素添加到聚合物溶液中，并将混合物悬于含有诸如聚(乙烯醇)的表面活性剂的水相中。搅拌所产生的乳浊液直至大部分的有机溶剂蒸发为止，留下固体微球。
一般而言，聚合物可溶解于二氯甲烷。可使用几种不同的聚合物浓度，例如，0.05-0.20g/ml。在用药物加载溶液后，将溶液悬浮在200ml的强烈搅拌的含1％(w/v)聚(乙烯醇)(Sigma Chemical Co.，St.Louis，Mo.)的蒸馏水中。搅拌4小时后，从聚合物中蒸发有机溶剂，所合成的微球用水洗涤并在冷冻干燥器中干燥过夜。
具有不同尺寸(1-1000微米，但是对于气溶胶应用而言要小于10微米)和形态的微球可通过可用于诸如聚酯和聚苯乙烯的相对稳定聚合物的方法来获得。然而，诸如聚酐的不稳定聚合物由于暴露于水可能降解。对于这些聚合物，可优选热熔性封装和去除溶剂。
在热熔性封装中，聚合物首先熔化，接着与干扰素固体颗粒混合，优选筛选至适当尺寸。将混合物悬源在诸如硅油的不可混溶的溶剂中并连续搅拌，加热至高于聚合物熔点5℃。一旦乳浊液稳定，将其冷却直至聚合物颗粒固化。通过倾析法用石油醚洗涤生成的微球以产生易流动粉料。用该方法可获得具有1-1000微米直径的微球。用该技术所制备的球体的外表面通常是光滑且致密的。该方法可使用水不稳定聚合物，但不限于使用具有1000-50000分子量的聚合物。
在喷雾干燥中，将聚合物溶解在诸如二氯甲烷(0.04g/ml)的有机溶剂中。将已知量的干扰素悬浮(如果不溶)或共溶解(如果可溶)在聚合物溶液中。然后喷雾干燥该溶液或分散液，可获得在1-10微米直径范围的微球，其形态取决于所选择的聚合物。
由诸如藻酸盐或聚膦嗪或其他二羧酸类聚合物的凝胶型聚合物制成的水凝胶微球可通过将聚合物溶解在水溶液中，悬浮要掺入混合物的物质，并将聚合物混合物挤出装备有氮气射流的微滴成型装置而制备得到。将所生成的微球注入缓慢搅动的离子硬化浴，描述于例如Salib等，Pharmazeutische Industrie 40-111A，1230(1978)。该系统的优点在于能通过用诸如聚赖氨酸的聚阳离子聚合物在制造后包被它们而进一步修饰微球的表面。例如，描述于Lim等，J.Pharm.Sci.70，351-354(1981)。例如，就藻酸盐而言，水凝胶可通过用钙离子进行藻酸盐的离子交联而得到，然后用诸如聚赖氨酸的聚阳离子在制造后交联该微粒的外表面。使用不同粒度的挤压机、聚合物流率和气体流率可控制微球粒度。
可通过将聚合物溶解在酸性溶液中并用三聚磷酸盐交联来制备壳聚糖微球。例如，羧甲基纤维素(CMC)微球可通过将聚合物溶解在酸性溶液中并用铅离子沉淀微球来制备。可制备藻酸盐/聚氮丙啶(PEI)以减少藻酸盐微囊上羧基的数量。
(ii).药物组合物微粒可悬浮在任何合适的药物载体中，例如生理盐水，用于患者给药。在最优选的实施方案中，微粒可以干燥或冻干形式贮藏直至给药前。它们可接着悬浮在足量的溶液中，例如用于以气溶胶用给药的水溶液，或以干粉给药。
(iii).靶向给药微粒可递送至特定细胞，特别是吞噬细胞和器官。派尔集合淋巴结中的吞噬细胞可以选择性地摄取经口给药的微粒。当由静脉内给药时网状内皮系统的吞噬细胞也摄取微粒。通过肺内巨噬细胞进行的微粒的胞吞作用可用于靶向微粒至脾脏、骨髓、肝脏和淋巴结。
微粒也可通过连接配体进行靶向，例如上述的那些，其特异性或非特异性结合至特定靶位。上述配体的实例也包括抗体和包括可变区的片段、外源凝集素和激素或其他带有靶细胞表面上受体的有机分子。
(iv).微粒的贮藏在优选的实施方案中，微粒通过冷冻干燥贮藏。剂量取决于所包封的干扰素的量、肺系中的释放速率和化合物的药物代谢动力学。
(v).微粒的递送微粒可使用多种方法递送，从直接给予鼻道中使得一些颗粒到达肺系，到使用粉末滴注装置，到使用导管或插管到达肺道。尽管那些使用碳氢化合物推进剂的干粉吸入装置不再使用以及那些依赖于患者呼吸吸入的干粉吸入装置能导致易变的剂量，但干粉吸入装置可购得。合适的推进剂的实例包括氢氟代烷(hydrofluoroalkane)推进剂，例如1，1，1，2-四氟代乙烷(CF3CH2F)(HFA-134a)和1，1，1，2，3，3，3-七氟代正丙烷(CF3CHFCF3)(HFA-227)、全氟乙烷、一氯氟甲烷、1，1-二氟乙烷、和它们的组合。
F.用于干扰素释放的医用装置涂层本发明的另一方面涉及带涂层的医用装置。例如，在某些实施方案中，本发明提供了一种具有附着于至少一个表面的涂层的医用装置，其中涂层包括受试聚合物基质和干扰素。上述涂层可施加于外科手术植入物，例如螺钉、板、垫圈、缝合线、假体锚、平头钉、U形钉、电导线、瓣膜、薄膜。所述装置可以是导管、可植入的血管通路口、血液贮藏包、血液管件、中枢静脉导管、动脉导管、血管移植物、主动脉内球囊泵、心脏瓣膜、心脏血管缝合线、人工心脏、起搏器、心室辅助泵、体外装置、血液过滤器、血液透析装置、血液灌流装置、血浆去除装置和适宜于在血管中布置的过滤器。
在本发明的某些实施方案中，用于形成聚合物的单体与干扰素合并并在单体溶液中混合产生均一的干扰素分散体。然后，利用常规涂覆方法将分散体施加于支架或其他装置，施加后使用诸如紫外灯的常规引发剂引发交联过程。在本发明的其他实施方案中，聚合物组合物与干扰素合并形成分散体。然后将该分散体施加到医用装置的表面上并对聚合物交联以形成固体涂层。在本发明其他实施方案中，用合适的溶剂将聚合物和干扰素合并以形成分散体，然后以常规方法将其施加到支架上。接着通过常规方法除去溶剂，例如加热蒸发，结果是聚合物和干扰素(共同形成持续释放的药物递送系统)保留在支架上作为涂层。可用一种类似的方法，其中将干扰素溶解在聚合物组合物中。
在本发明一些实施方案中，该系统包括相对刚性的聚合物。在其他实施方案中，该系统包括柔软且具延展性的聚合物。还在其他实施方案中，该系统包括具有粘性的聚合物。该聚合物的硬度、弹性、粘性和其他特性是广泛可变的，取决于该系统特定的最终物理形式，如下所详细讨论。
本发明系统的实施方案采用了许多不同的形式。在某些实施方案中，该系统由悬浮或分散在聚合物中的干扰素组成。在某些其他实施方案中，该系统由干扰素和半固体或凝胶聚合物组成，其适合于通过注射器注射到体内。在本发明的其他实施方案中，该系统由干扰素和柔软且具挠性的聚合物组成，其适合于通过合适的外科手术方法插入或植入体内。在本发明更进一步的实施方案中，该系统由硬的、固体聚合物组成，其适合于通过合适的外科手术方法插入或植入体内。在更进一步的实施方案中，该系统包括具有悬浮或分散在其中的干扰素的聚合物，其中干扰素和聚合物混合物在外科手术用的植入物例如螺钉、支架、起搏器等上形成涂层。在本发明特定的实施方案中，该装置由硬的、固体聚合物组成，其以外科手术用的植入物例如外科手术用螺钉、板、支架等或它们的某一部分的形式成形。在本发明其他的实施方案中，该系统包括以具有分散或悬浮于其中的干扰素的缝合线形式存在的聚合物。
在本发明的某些实施方案中，提供了一种包含具有表面例如外表面的基质和该外表面上涂层的医用装置。该涂层包含聚合物和分散在该聚合物中的干扰素，其中聚合物能透过干扰素或生物可降解以释放干扰素。在本发明的某些实施方案中，该装置包括悬浮或分散在合适的聚合物中的干扰素，其中干扰素和聚合物被涂覆在整个基质如外科手术用植入物上。上述涂覆可通过喷射涂覆或浸渍涂覆来获得。
在本发明的其他实施方案中，该装置包括干扰素和聚合物悬浮体或分散体，其中聚合物是刚性的，并形成要被插入或植入体内的装置的组成部分。例如，特别是在本发明的实施方案中，该装置是一种涂覆有悬浮或分散在聚合物中的干扰素的外科手术用螺钉、支架、起搏器等。在本发明的其他特定实施方案中，其中悬浮有干扰素的聚合物形成外科手术用螺钉的尖端或头部或其一部分。在本发明的其他实施方案中，干扰素悬浮或分散其中的聚合物涂覆在外科手术用植入物上，例如外科手术用管件(例如结肠造口术管件、腹腔灌洗管件、导管和静脉内管件)。还在本发明的另一个实施方案中，该装置是一种具有涂覆其上的聚合物和干扰素的静脉注射针头。
如上所讨论，本发明的涂层包含生物可蚀解的或非生物可蚀解的聚合物。生物可蚀解的聚合物相对非生物可蚀解的聚合物的选择是基于预期系统或装置的最终用途。在本发明的一些实施方案中，聚合物有利地是生物可蚀解的。例如，在系统是外科手术用可植入的装置例如螺钉、支架、起搏器等上的涂层时，聚合物有利地是生物可蚀解的。其中聚合物有利地是生物可蚀解的本发明的其他实施方案包括可植入的、吸入用的或可注射的在聚合物中的干扰素的悬浮体或分散体，其中没有利用到另外的元件(例如螺钉或锚)。
在本发明的一些实施方案中，其中聚合物渗透性和生物可蚀解性差，有利的是，该聚合物生物蚀解的速度较干扰素释放的速度足够地慢，从而该聚合物在干扰素业已释放后的较长的一段时间内仍保留在原位，但其最终被生物蚀解并被再吸收到周围组织中。例如，在装置是包含悬浮或分散在生物可蚀解聚合物中的干扰素的生物可蚀解缝合线时，有利的是，聚合物生物蚀解的速度足够慢，从而干扰素在约3至约14天的一段时间内以线性方式释放，但该缝合线存留约3周至约6个月的一段时间。本发明类似的装置包括包含悬浮或分散在生物可蚀解聚合物中的干扰素的外科手术用U形钉。
在本发明的其他实施方案中，聚合物生物蚀解的速度和干扰素释放的速度在相同的数量级也是有利的。例如，当系统包含悬浮或分散在聚合物中的干扰素，其中所述聚合物被涂覆在外科手术用工具例如整形外科用螺钉、支架、起搏器或非生物可蚀解的缝合线上时，该聚合物以这样一种速度生物蚀解是有利的，即使得直接暴露于周围体组织的干扰素表面积随时间过去基本上保持不变。
在本发明的其他实施方案中，聚合物载体对周围组织如血浆中的水是能渗透的。在这样的情况下，水溶液可渗透聚合物，从而接触到干扰素。溶解速度可取决于一组复杂的变量，例如生理学流体的聚合物渗透性、干扰素溶解性、pH、离子强度和蛋白组成等。
在本发明的一些实施方案中，聚合物是非生物可蚀解的。非生物可蚀解的聚合物特别能用于这样的系统，该系统包括一种旨在涂覆在适于永久或半永久地插入或植入体内的外科手术用植入物上或构成其组分的聚合物。其中聚合物有利地在外科手术用植入物上形成永久涂层的例示装置包括整形外科用螺钉、支架、假体关节、人造瓣膜、永久性缝合线、起搏器等。
存在着多种在经皮经管冠状动脉成形术后可使用的不同的支架。虽然许多支架在本发明中可使用，为简单起见，少数支架将描述于本发明例示的实施方案中。本领域技术人员可意识到许多支架可在本发明中使用。此外，如上所述，其他医用装置也可使用。
支架通常用作一种管状结构，留在管道腔中以减轻阻塞。一般来说，支架以非扩张的方式插入到腔中，然后自动扩张，或借助于原位的另一种装置扩张。一种典型的扩张方法是由于利用了导管包埋的血管成形术气囊，其在变窄的血管或体通道中膨大以便剪切并瓦解与血管壁组分相关的阻塞并获得扩大的腔体。
可用许多方法制造本发明的支架。例如，支架可制造自可用激光、放电铣削、化学腐蚀或其他方法进行机械加工的空心的或成型的不锈钢管。支架被插入体内并以非扩张的形式置于所期望的位置。在一个例示的实施方案中，通过气囊式导管可有效地在血管中产生扩张，其中支架的最终直径是所使用的气囊式导管直径的函数。
应当理解本发明的支架可配备形状记忆材料，包括例如适当的镍钛合金或不锈钢。
由不锈钢形成的结构可通过以预先确定的方式使不锈钢成形而自扩张，例如通过将其扭成麻花状结构。在该实施方案中，在支架业已成型后其可压缩以致占据的空间足够的小以使其能通过插入工具插入血管或其他组织中，其中插入工具包括合适的导管或易曲的杆。
一旦从导管露出，支架可成形以扩张为所期望的结构，在此扩张自动起动或为压力、温度的改变或电刺激而触发。
与支架的设计无关，优选所施加的干扰素具有足够的特异性和充足的浓度以在损伤区中提供有效剂量。在这点上，涂层中的“容器尺寸”优选定为能使干扰素以所期望的量充分地施加到所期望的位置。
在一个替代的例示性实施方案中，支架的整个内表面和外表面可涂覆有治疗剂量的干扰素。但是，应当着重指出涂覆技术可随干扰素的不同而改变。同样，涂层技术也可随组成支架或其他腔内医用装置的材料的不同而改变。
腔内医用装置包括持续释放的递药涂层。该干扰素涂层可通过常规的涂覆方法施加到支架上，例如浸渍涂覆、喷射涂覆和浸涂涂覆。
在一个实施方案中，腔内医用装置包括具有沿支架纵轴延伸的内部腔表面和相对外表面的长形可放射状扩张的管状支架。支架可包括永久的可植入支架、可植入的移植支架或临时支架，其中临时支架规定为一种在血管内可扩张且此后可从血管收回的支架。支架结构可包括螺管支架、记忆螺管支架、Nitinol支架、网状支架、脚手架型支架、套管支架、可渗透支架、具有温度传感器的支架、多孔支架等等。可依照常规方法展开支架，例如通过可膨胀的气囊式导管、通过自展开机械装置(在从导管释放后)、或通过其他适当的工具。长形可放射状扩张的管状支架可以是一种移植支架，其中该移植支架是在移植物内部或外面具有支架的复合装置。该移植物可以是一种血管移植物例如ePTFE移植物、生物学移植物或机织织物移植物。
干扰素可以多种方式添加入到或附着在支架上。在一个例示的实施方案中，干扰素直接添加到聚合的基质中并喷射到支架外表面上。随着时间的过去，干扰素从聚合的基质中流出并进入周围组织中。优选干扰素在支架上保留至少3天，至多约6个月，更优选在7-30天之间。
在某些实施方案中，本发明的聚合物包含任何干扰素能渗透的生物学上耐受的聚合物，当具有渗透性时，其不是干扰素从聚合物中释放速率的主要速率决定因素。
在本发明的某些实施方案中，聚合物是非生物可蚀解的。本发明中使用的非生物可蚀解的聚合物的例子包括聚(乙烯-共聚-醋酸乙烯酯)(EVA)，聚乙烯醇和聚氨酯，例如基于聚碳酸酯的聚氨酯。在本发明的其他实施方案中，聚合物是可生物可蚀解的。可在本发明中使用的可生物可蚀解的聚合物实例包括聚酐、聚乳酸、聚乙醇酸、聚原酸酯、聚烷基氰基丙烯酸酯或它们的衍生物和共聚物。本领域技术人员应意识到选择生物可蚀解或非生物可蚀解的聚合物取决于该系统最终的物理形式，如下所详述。其他例示的聚合物包括聚硅氧烷和衍生自透明质酸的聚合物。本领域技术人员应明白本发明的聚合物是在适合于赋予渗透性以便其在干扰素从聚合物释放过程中不成为主要的速度决定因素的条件下制备的。
此外，合适的聚合物包括天然存在的(胶原、透明质酸等)或是与体液及哺乳动物组织生物相容的且基本不溶于该聚合物所要接触的体液的合成材料。此外，合适的聚合物基本上阻止了分散/悬浮在该聚合物中的干扰素和体液中蛋白质成分之间的相互作用。在某些情况下应当避免使用快速溶解的聚合物或在体液中溶解度高的聚合物或能允许干扰素和蛋白质成分之间相互作用的聚合物，这是因为聚合物的溶解或与蛋白质成分的相互作用会影响药物释放的稳定性。
其他合适的聚合物包括聚丙烯、聚酯、聚乙烯-乙酸乙烯酯(PVA或EVA)、聚环氧乙烷(PEO)、聚环氧丙烷、多聚羧酸、聚烷基丙烯酸酯、纤维素醚、硅酮、聚(dl-丙交酯-共聚-乙交酯)、各种Eudragrits(例如NE30D、RS PO和RL PO)、聚烷基丙烯酸烷基酯共聚物、聚酯-聚氨酯嵌段共聚物、聚醚-聚氨酯嵌段共聚物、聚二噁烷酮、聚-(β-羟基丁酸酯)、聚乳酸(PLA)、聚己内酯、聚乙醇酸和PEO-PLA共聚物。
本发明的涂层可通过将一种或多种合适的单体和合适的干扰素混合，然后聚合单体形成聚合物系统来形成。这样，干扰素溶解或分散在聚合物中。在其他实施方案中，将干扰素在液体聚合物或聚合物分散体中混合，然后对聚合物进行进一步处理以形成本发明的涂层。合适的进一步处理方法可包括用合适的交联干扰素进行交联，进一步聚合该液体聚合物或聚合物分散体，用合适的单体进行共聚，用合适的聚合物嵌段进行嵌段共聚等。该进一步处理使干扰素陷入聚合物中以便干扰素悬浮或分散在该聚合物载体中。
许多非蚀解聚合物可用于与干扰素连接。在本申请中可用作为涂层的成膜聚合物可以是可吸收的或不可吸收的，且应是生物相容的，以最小化对血管壁的刺激。该聚合物可以是生物稳定或生物可吸收的，取决于所期望的释放率或所期望的聚合物稳定程度，但可优选生物可吸收的聚合物，这是因为不象生物稳定的聚合物，其在植入后不会存在很久，就不会引起任何不利的、长期局部反应。此外，生物可吸收的聚合物并不存在着在较长一段时间内由于能移除涂层的生物环境应力所引起的在支架和涂层之间失去附着的风险，以及在支架包封入组织后所进一步引入的问题。
可使用的合适的成膜生物可吸收聚合物包括选自如下的聚合物脂肪族聚酯、聚(氨基酸)，共聚(醚-酯)、聚草酸亚烷基酯、聚酰胺、聚(亚氨基碳酸酯)、聚原酸酯、聚噁酯(polyoxaesters)、聚酰氨酯、含有酰氨基的聚噁酯、聚(酐)、聚磷腈、生物分子及其混合物。对于本发明目的而言，脂肪族聚酯包括丙交酯(其包括d-乳酸，1-乳酸和内消旋丙交酯)、ε-己内酯、乙交酯(包括乙醇酸)、羟基丁酸酯、羟基戊酸酯、对-二噁烷酮、碳酸亚丙酯(及其烷基衍生物)、1，4-二氧杂环庚烷-2-酮、1，5-二氧杂环庚烷-2-酮、6，6-二甲基-1，4-二噁烷-2-酮的均聚物和共聚物及其共混聚合物。用于本发明目的的聚(亚氨基碳酸酯)包括描述于Kemnitzer和Kohn的Handbook ofBiodegradable Polymers，Domb，Kost和Wisemen编，HardwoodAcademic Press，1997，第251-272中。用于本发明目的的共聚(醚-酯)包括那些描述于Cohn和Younes的Journal of BiomaterialsResearch，Vol.22，993-1009页，1988和Cohn，Polymer Preprints(ACS Division of Polymer Chemistry)Vol.30(1)，498页，1989中的共聚酯-醚(如PEO/PLA)。用于本发明目的的聚草酸亚烷基酯包括US 4,208,511；4,141,087；4,130,639；4,140,678；4,105,034和4,205,399(在此并入作为参考)中的。聚磷腈、由L-丙交酯、D，L-丙交酯、乳酸、乙交酯、乙醇酸、对二噁烷酮、碳酸亚丙酯和ε-己内酯制成的二元-、三元-及更高阶混合的单体基聚合物例如由Allcock在The Encyclopedia of Polymer Science，Vol.13，31-41页，WileyIntersciences，John Wiley&Sons，1988中及由Vandorpe，Schacht，Dejardin和Lemmouchi在Handbook of Biodegradable Polymers，Domb，Kost和Wisemen编，Hardwood Academic Press，1997，161-182页中描述(其在此并入作为参考)。聚酐，来自形式为HOOC-C6H4-O-(CH2)m-O-C6H4-COOH的二酸，其中m是2-8的整数，及其与至多12个碳原子的脂肪族α-ω-二酸形成的共聚物。聚噁酯、聚噁酰胺(polyoxaamides)和含有胺和/或酰氨基的聚噁酯描述于如下一篇或多篇中US 5,464,929；5,595,751；5,597,579；5,607,687；5,618,552；5,620,698；5,645,850；5,648,088；5,698,213和5,700,583(其在此并入作为参考)。聚原酸酯，例如那些描述于Heller，Handbook of Biodegradable Polymers，Domb、Kost和Wisemen编，Hardwood Academic Press，1997，99-118页(在此并入作为参考)中的。用于本发明目的的成膜聚合生物分子包括天然存在的在人体内可酶催化降解的或在人体内水解不稳定的物质，例如纤维蛋白，纤维蛋白原、胶原、弹性蛋白和可吸收的生物相容的多糖，例如壳聚糖、淀粉、脂肪酸(及其酯)、葡糖-葡聚糖(glucoso-glycans)以及透明质酸。
合适的具有相对低的长期组织响应的成膜生物稳定聚合物，例如聚氨酯、硅酮、聚(甲基)丙烯酸酯、聚酯、聚烷基氧化物(聚环氧乙烷)、聚乙烯醇、聚乙二醇和聚乙烯吡咯烷酮，以及水凝胶，例如那些由交联的聚乙烯吡咯酮和聚酯所形成的水凝胶，也可使用。其他聚合物也可使用，如果它们能溶解、固化或聚合在支架上。这些聚合物包括聚烯烃，聚异丁烯和乙烯-α-烯烃共聚物；丙烯酸类聚合物(包括甲基丙烯酸酯)和共聚物，乙烯基卤化物聚合物和共聚物，例如聚氯乙烯；聚乙烯醚，例如聚乙烯甲醚；聚偏二乙烯卤化物，例如聚偏二氟乙烯和聚偏二氯乙烯；聚丙烯腈，聚乙烯酮；聚乙烯基芳族化合物例如聚苯乙烯；聚乙烯酯和例如聚醋酸乙烯酯；乙烯基单体彼此间以及和烯烃的共聚物，例如乙烯-甲基丙烯酸甲酯共聚物、丙烯腈-苯乙烯共聚物、ABS树脂和乙烯-乙酸乙烯酯共聚物；聚酰胺，例如尼龙66和聚己内酰胺；醇酸树脂；聚碳酸酯；聚甲醛；聚酰亚胺；聚醚；环氧树脂，聚氨酯；嫘萦；嫘萦-三醋酸酯，纤维素，醋酸纤维素、醋酸丁酸纤维素；赛璐玢；硝酸纤维素；丙酸纤维素；纤维素醚(即羧甲基纤维素和羟烷基纤维素)；以及它们的组合。用于本申请目的的聚酰胺也应包括形式为-NH-(CH2)n-CO-和NH-(CH2)x-NH-CO-(CH2)y-CO的聚酰胺，其中n优选是6-13的整数；x是6-12的整数；以及y是4-16的整数。上述所列是例示的而非限制。
用于涂层的聚合物可以是分子量足够高以致不像蜡状及不发粘的成膜聚合物。该聚合物也应附着到支架上，并且在支架上沉积后应当不是那么容易变形的，这样的变形能使其通过血流动力应力而被取代。聚合物分子量应足够高以提供足够的韧性，使得该聚合物在支架操作或扩张过程中不被擦掉，且在支架扩张过程中应当不会破裂。在某些实施方案中，该聚合物熔解温度超过40℃，优选超过约45℃，更优选超过50℃以及最优选超过55℃。
在涂层混合物中可通过将一种或多种治疗性干扰素与涂层聚合物混合来制备涂层。该干扰素可以液体、细碎粒固体或任何其他适当的外形存在。任选地，该化合物可包括一种或多种添加剂，如无毒的辅助物质，例如稀释剂、载体、赋形剂、稳定剂等。其他合适的添加剂可与该聚合物和干扰素一起配制。例如，选自之前描述所列的生物相容的成膜聚合物的亲水聚合物可添加到生物相容的疏水涂层中以改变其释放分布图(或疏水聚合物可添加到亲水涂层中来改变其释放分布图)。一个实例是添加选自聚环氧乙烷、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、羧甲基纤维素、羟甲基纤维素及它们的组合的亲水聚合物至脂肪族聚酯涂层中以改变其释放分布图。适当的相对含量可通过监测体外和/或体内治疗性干扰素的释放分布图来确定。
涂层厚度可决定干扰素从基质中流出的速度。实际上，干扰素通过经聚合物基质的扩散从基质中流出。聚合物是可渗透的，因此允许固体、液体和气体从中离开。聚合基质总的厚度在约1微米至约20微米或更大的范围内。应当着重地指出在聚合的基质附着到医用装置上之前可使用底漆层和进行金属表面处理。例如，酸洗、碱洗、盐化和聚对亚苯基二甲基沉积可用作为所述全面处理的一部分。
为进一步举例说明，聚(乙烯-共聚-乙酸乙烯酯)、聚甲基丙烯酸丁酯和干扰素溶液可以多种方法添加到支架中或支架上。例如，溶液可喷射到支架上或支架可浸入溶液中。其他方法包括旋转涂覆和RF等离子聚合。在一个例示的实施方案中，溶液喷射到支架上，然后干燥。在另一个例示的实施方案中，溶液可带一种极性的电荷且支架带相反极性的电荷。在该方法中，溶液和支架互相吸引。在使用这种类型的喷涂方法中，可减少浪费并能更精确地控制所要获得的涂层厚度。
在另一个例示的实施方案中，干扰素可掺入到成膜聚氟代共聚物中，该共聚物包含适量的选自聚合的偏二氟乙烯和聚合的四氟乙烯的第一部分，和不同于该第一部分的适量的第二部分，其是用第一部分共聚得到的，因此生产出聚氟代共聚物，该第二部分能提供聚氟代共聚物的韧性或弹性，其中第一部分和第二部分的相对含量都能有效地由此提供产生能有效地用于处理可植入的医用装置的涂层和膜。
在本发明一个实施方案中，本发明的管腔内医用装置的可扩张的管状支架的外表面包括本发明的涂层。具有涂层的支架外表面是组织接触表面并是生物相容的。“持续释放的干扰素递药系统涂覆的表面”和“涂覆的表面”同义，该表面为本发明的持续释放的干扰素递药系统所涂覆、覆盖或充满。递药系统的实例(控制释放、持续释放、缓释)业已描述于申请人的US系列申请10/193,654，公开为US2003/0017169，和PCT/US01/50355，如WO 02/053174所公开的，其内容在本申请中并入作为参考。
在一个可选的实施方案中，本发明管腔内医用装置的长形放射状可扩张管状支架的内腔表面或整个表面(即内外表面)具有涂覆的表面。具有本发明的持续释放的干扰素递药系统涂层的内腔表面也是流体接触的表面，而且是生物相容和血液相容的。
IV.干扰素多肽变体应当预计到本发明干扰素多肽的某些突变体形式(或变体)可作为激动剂或拮抗剂。虽然不希望受任何特定理论所限制，但是众所周知蛋白信号因子的突变体形式能结合合适的受体且仍不能激活该受体。上述突变体蛋白通过取代野生型蛋白并阻断正常的受体活化而作为拮抗剂。此外，众所周知相较于野生型蛋白，为了增加它们的活性，可对许多蛋白进行一种或多种氨基酸的取代。上述激动剂相较于野生型蛋白可具有例如，增加的半衰期，结合亲合力，稳定性或活性。存在着许多众所周知的用于获得具有所期望活性的突变体(或变体)的方法。
本领域中众所周知产生大量突变体/变体蛋白的方法。在一个实施方案中，本发明旨在使用通过组合诱变所产生的干扰素多肽。上述方法为本领域所公知，便于产生点突变体和截短突变体，且特别可用于鉴定在指定的分析中具有功能的潜在变体序列(如同系物)。筛选上述组合文库的目的在于产生例如可作为激动剂或拮抗剂的干扰素变体或同系物。因此，可产生相对于该蛋白天然存在型而具有增加效力的组合方法衍生的变体。同样地，通过本发明的组合方法可产生作为拮抗剂的干扰素变体，在此它们能模拟，例如，结合至其他细胞外基质成分(例如受体)上，还不会诱导任何生物效应，因此抑制了干扰素多肽或干扰素激动剂的作用。此外，通过本发明方法操纵干扰素的某些结构域能提供更适用于融合或嵌合蛋白中的结构域，例如，证实具有特定有用特性的结构域。
为进一步举例说明组合诱变技术的发展水平，注意Gallop等.(1994)J Med Chem 371233的评论文章描述了20世纪90年代早期组合文库技术的总体水平。特别是，Gallop等在第1239页″[s]creening the analog libraries aids in determining the minimumsize of the active sequence and in identifying those residuescritical for binding and intolerant of substitution″所陈述的。此外，Ladner等.PCT申请WO 90/02809、Goeddel等.US5,223,408和Markland等.PCT公开WO92/15679阐明了本领域技术人员可用于产生能进行快速筛选以鉴定具有特定活性的变体/片段的变体文库的具体技术。这些技术在本领域中作为例示并证明可产生相关变体/截短体的大文库，并无需试图过度的实验就可分离特定的变体。Gustin等.(1993)Virology 193653，和Bass等.(1990)ProteinsStructure，Function and Genetics 8309-314也描述了本领域中其他例示的技术，适用于产生本发明的干扰素多肽诱变变体。
实际上，在组合诱变领域中很清楚，干扰素蛋白的大规模诱变，对于哪个残基对生物功能起关键作用并没有任何的预见性，其能产生具有等效生物活性的大量变体。换句话说，上述方法可用来产生具有增强的活性或拮抗剂活性的变体阵列。实际上，组合技术通过高通量分析能筛选数以十亿计的不同变体，无需事先了解或知道关键残基。
V.抗体拮抗剂可以预计到某些抗体可作为干扰素拮抗剂。抗体可对特定表位具有特别的亲合性和特异性。抗体与其在蛋白上表位的结合可通过竞争性或非竞争性抑制该蛋白与其他为其自身功能所需的蛋白的相互作用而对抗该蛋白的功能。
具有干扰素拮抗剂活性的抗体可以和其他干扰素拮抗剂大致相同的方式得到鉴定。例如，可将候选抗体给予表达报道基因的细胞，能导致报道基因表达减少的抗体就是拮抗剂。
在一种变化中，本发明的抗体可以是单链抗体(scFv)，包含通过多肽接头连接的可变抗原结合域。单链抗体表达为单一的多肽链并可在细菌中表达，亦可作为噬菌体展示文库的一部分。这样，表达适当的scFv的噬菌体会具有干扰素拮抗剂活性。然后，可从噬菌体中回收编码单链抗体的核酸并用于产生大量的scFv。scFv文库的构建和筛选详尽地描述于许多文献中(US 5,258,498；5,482,858；5,091,513；4,946,778；5,969,108；5,871,907；5,223,409；5,225,539)。
G.人IFN-α等位基因和蛋白产物下表2举例说明了常见的人干扰素α家族基因/蛋白的等位基因并根据Pestka，S.(1983)Arch Biochem Biophys 2211-37；Diaz，M.O.，Pomykala，H.M.，Bohlander，S.K.，Maltepe，E.，Malik，K.，Brownstein，B.，和Olopade，O.I.(1994)Genomics 22540-52；以及Pestka，S.(1986)Meth.Enzymol 1193-14和Krause，C.D.，Lunn，C.A.，Izotova，L.S.，Mirochnitchenko，O.，Kotenko，S.V.，Lundell，D.J.，Narula，S.K.，和Pestka，S.(2000)J Biol Chem.27522995-3004的述评进行构建。
表2
注释ψ指假基因人干扰素-α基因和干扰素-α突变体的等位变体业已报道在下列申请中WO 2002/095067；WO 02/079249；WO 02/101048；WO 02/095067；WO 02/083733；WO 02/086156；WO 2002/083733；WO 03/000896；WO 02/101048；WO 02/079249；WO 03/000896；WO 2004/022593；WO 2004/022747；WO 03/023032；WO 2004/022593。也参见下列出版物(1)Kim等，Cancer Lett.2003 Jan 28；189(2)183-8；(2)Hussain等，J Interferon Cytokine Res.2000 Sep；20(9)763-8；(3)Hussain等，J Interferon Cytokine Res.1998Jul；18(7)469-77；(4)Nyman等，Biochem J.1998 Jan 15；329(Pt2)295-302；(5)Golovleva等，J Interferon Cytokine Res.1997Oct；17(10)637-45；(6)Hussain等，J Interferon CytokineRes.1997 Sep；17(9)559-66；(7)Golovleva，I.，Saha，N.，Beckman，L.Hum Hered.1997Jul-Aug；47(4)185-8；(8)Golovleva等，1997Apr；18(4)645-7；(9)Kita等，J InterferonCytokine Res.1997Mar；17(3)135-40；(10)Golovleva等，AmJ Hum Genet.1996Sep；59(3)570-8；(11)Hussain等，JInterferon Cytokine Res.1996Jul；16(7)523-9；(12)Linge等，Biochim Biophys Acta.1995Dec 27；1264(3)363-8；(13)Gewert等，J Interferon Cytokine Res.1995May；15(5)403-6；(14)Lee等，J Interferon Cytokine Res.1995Apr；15(4)341-9；(15)Kaluz等，Acta Virol.1994Apr；38(2)101-4；(16)Emanuel等，J Interferon Res.1993Jun；13(3)227-31；(17)Kaluz等，Acta Virol.1993Feb；37(1)97-100；(18)Shekhter等，Dokl Akad Nauk SSSR.1990；314998-1001；(19)Li等，Sci China B.1992Feb；35(2)200-6。
范例本发明现已概述，参考下列实施例应更易于理解，所述实施例包括于仅用于举例说明目的之本发明某些方面和实施方案，且并不意在限制发明。
实施例1猫IFNa克隆的分离通过使用标准方法进行PCR扩增来自猫肺细胞系(AKD)的基因组DNA，分离得到了猫IFNα克隆。分离得到9条不同的序列并命名为Fe-IFN-αA(SEQ ID NO9)、Fe-IFN-αB(SEQ ID NO11)、Fe-IFN-αC(SEQ ID NO13)、Fe-IFN-αD(SEQ ID NO15)、Fe-IFN-αE(SEQ IDNO17)、Fe-IFN-αF(SEQ ID NO19)、Fe-IFN-αG(SEQ ID NO21)、Fe-IFN-αH(SEQ ID NO23)和Fe-IFN-αI(SEQ ID NO25)。相应于这些中间每一个的氨基酸序列也提供如下Fe-IFN-αA(SEQ ID NO10)、Fe-IFN-αB(SEQ ID NO12)、Fe-IFN-αC(SEQ ID NO14)、Fe-IFN-αD(SEQ ID NO16)、Fe-IFN-αE(SEQ ID NO18)、Fe-IFN-αF(SEQ ID NO20)、Fe-IFN-αG(SEQ ID NO22)、Fe-IFN-αH(SEQ IDNO24)和Fe-IFN-αI(SEQ ID NO26)。
使用标准方法进行PCR。对基因组DNA进行两轮扩增。用于扩增猫序列的侧翼引物是5′引物5′-CTCTTCCTTCTTGGTGGCCCTG-3′3′引物5′-GTGATGAGTCAGTGAGAATCATTTC-3′实施例2猫IFNα的抗病毒活性使用细胞病变效应测定法(CPE)测定受试干扰素的抗病毒活性。简言之，将连续稀释的干扰素与测试细胞在37℃下温育1-4小时。接着添加病毒至细胞中并在37℃下温育16小时。存活细胞通过结晶紫染色的摄取进行目测，测定病毒感染的细胞约50％存活下的干扰素的稀释度。
图1概述了这些实验的结果，其描述了猫IFN-αA、IFN-αB、IFN-αC、IFN-αD、IFN-αE、IFN-αF、IFN-αG和IFN-αI各自具有的通过CPE测定的抗病毒活性。猫IFN-αH的活性在该实验中没有测定。在该具体实验中，测试细胞是AKD猫肺细胞以及病毒是水泡性口膜炎病毒(VSV)。
实施例3猕猴IFNα克隆的分离通过使用标准方法进行PCR扩增来自猕猴肾细胞系(LLCMK-2)的基因组DNA，分离得到了猕猴IFNα克隆。两个单独的引物对用于扩增序列。使用第一引物对，分离得到一条序列并命名为Rh-IFN-α4b(SEQID 29)。相应于Rh-IFN-α4b核酸序列的氨基酸序列在SEQ ID NO30中被指定。
使用标准方法进行PCR。对基因组DNA进行两轮扩增。用于扩增该猕猴序列的侧翼引物是5′引物5′-CTTCAGAGAACCTGGAGCC-3′3′引物5′-AATCATTTCCATGTTGAACCAG-3′通过使用标准方法和第二引物对进行的对来自猕猴肾细胞系(LLCMK-2)的基因组DNA的PCR扩增，分离得到三种另外的猴IFNα克隆Rh-IFN-αD1(SEQ ID NO31)、Rh-IFN-αD2(SEQ ID NO33)和Rh-IFN-αD3(SEQ ID NO35)。相应于这些中间每一个的氨基酸序列也提供如下Rh-IFN-αD1(SEQ ID NO32)、Rh-IFN-αD2(SEQ IDNO34)和Rh-IFN-αD3(SEQ ID NO36)。
使用标准方法进行PCR。对基因组DNA进行两轮扩增。用于扩增这些猕猴序列的侧翼引物是5′引物5′-AGAAGCATCTGCCTGCAATATC-3′3′引物5′-GCTATGACCATGATTACGAATTC-3′实施例4猕猴IFNα的抗病毒活性使用细胞病变效应测定法(CPE)测定受试干扰素的抗病毒活性。简言之，将连续稀释的干扰素与测试细胞在37℃下温育1-4小时。接着添加病毒至细胞中并在37℃下温育16小时。存活细胞通过结晶紫染色的摄取进行目测，测定病毒感染的细胞约50％存活下的干扰素的稀释度。
图2概述了实验的结果，其描述了猕猴IFN-α4b具有通过CPE测定的抗病毒活性。猕猴IFN-αD1、IFN-αD2和IFN-αD3的活性在该实验中没有测定。使用VSV感染的马-达氏牛肾内皮细胞(MDBK)或非洲绿猴肾细胞(Vero)作为测试细胞来进行该实验。
实施例5人IFN-α克隆的分离根据描述于US 5,789,551、5,869,293和6,001,589的方法分离得到18种人干扰素-α。简言之，通过使用标准方法的PCR分析人基因组DNA。在该分析中所用的引物描述于图3和4中。
使用该方法鉴定的18种人干扰素-α是hu-IFN-α001(SEQ ID No37)、hu-IFN-α002(SEQ ID No39)、hu-IFN-α003(SEQ ID No41)、hu-IFN-α004(SEQ ID No43)、hu-IFN-α005(SEQ ID No45)、hu-IFN-α006(SEQ ID No47)、hu-IFN-α007(SEQ ID No49)、hu-IFN-α008(SEQ ID No51)、hu-IFN-α009(SEQ ID No53)、hu-IFN-α010(SEQ ID No55)、hu-IFN-α011(SEQ ID No57)、hu-IFN-α012(SEQ ID No59)、hu-IFN-α013(SEQ ID No61)、hu-IFN-α014(SEQ ID No63)、hu-IFN-α015(SEQ ID No65)、hu-IFN-α016(SEQ ID No67)、hu-IFN-α017(SEQ ID No69)、hu-IFN-α018(SEQ ID No71)。相应于这些中间每一个的氨基酸序列也提供如下hu-IFN-α001(SEQ ID No38)、hu-IFN-α002(SEQ IDNo40)、hu-IFN-α003(SEQ ID No42)、hu-IFN-α004(SEQ ID No44)、hu-IFN-α005(SEQ ID No46)、hu-IFN-α006(SEQ ID No48)、hu-IFN-α007(SEQ ID No50)、hu-IFN-α008(SEQ ID No52)、hu-IFN-α009(SEQ ID No54)、hu-IFN-α010(SEQ ID No56)、hu-IFN-α011(SEQ ID No58)、hu-IFN-α012(SEQ ID No60)、hu-IFN-α013(SEQ ID No62)、hu-IFN-α014(SEQ ID No64)、hu-IFN-α015(SEQ ID No66)、hu-IFN-α016(SEQ ID No68)、hu-IFN-α017(SEQ ID No70)、hu-IFN-α018(SEQ ID No72)。
此外，使用优化的大肠杆菌密码子对hu-IFN-α001和hu-IFN-α012反向翻译(back translated)并命名为hu-IFN-α001-BT(SEQID No73)和hu-IFN-α012-BT(SEQ ID No75)。相应于这些中间每一个的氨基酸序列也提供如下hu-IFN-α001-BT(SEQ ID No74)和hu-IFN-α012-BT(SEQ ID No76)。
实施例6人IFNα变体的分离在构建含有以上详述的人IFNα的表达载体的过程中，产生了如下含有突变的克隆。可对这些IFNα变体活性进行测试。IFNα变体可含有沉默取代，因此具有与野生型IFNα相同的活性。换句话说，变体可含有改变该多肽活性的取代。该取代可能增加、提高或扩大活性，因此是一种IFNα激动剂。此外，该取代可能减少或干扰活性，因此是一种IFNα拮抗剂。
变体的核酸序列提供如下hu-IFN-α019(SEQ ID No77)、hu-IFN-α020(SEQ ID No79)、hu-IFN-α021(SEQ ID No81)、hu-IFN-α022(SEQ ID No83)和hu-IFN-α023(SEQ ID No85)。相应于这些中间每一个的氨基酸序列也提供如下hu-IFN-α019(SEQID No78)、hu-IFN-α020(SEQ ID No80)、hu-IFN-α021(SEQ IDNo82)、hu-IFN-α022(SEQ ID No84)和hu-IFN-α023(SEQ ID No86)。
实施例7人IFNα的抗病毒活性也使用CPE测定法测定人IFNα的抗病毒活性，细节概述如上。该测定法使用如下测试细胞和病毒组合MDBK测试细胞和VSV；人上皮鳞状细胞(HEP-2)和VSV；小鼠结缔组织成纤维细胞(L929)和EMC；人肺鳞状细胞(H226)和VSV；以及人肺成纤维细胞和流感病毒。
本领域技术人员可意识到或能确定，仅仅使用例行试验，可获得许多描述在此的本发明的特定实施方案的等价物。如下权利要求意在包括这些等价物。多种出版物被引用于本申请的全文中。这些出版物的内容在此并入本申请中作为参考。参见图10和更详尽阐明的实施例13。
实施例8干扰素对SARS冠状病毒细胞病变效应的抑制材料和方法为评价干扰素的抗-SARS-CoV活性，将在添加有10％胎牛血清(FBS，Invitrogen)的MEM培养基中的FRhk-4细胞(5×103/孔)接种在96孔细胞培养板中并培养过夜。然后将细胞与溶解于100□1MEM培养基的不同浓度的各种干扰素形式温育1小时。接着用SARS-CoV(GZ50株)感染它们并培养。在用SARS-CoV感染24小时后，所提供的细胞抗SARS-CoV病毒细胞病变效应的保护程度通过在相差显微镜下观察并记录细胞形态得到测定。每次试验平行进行三份并重复至少三次。未感染的细胞是扁平的，SARS-CoV感染的细胞变为有折射力的并拱起。SARS-CoV诱发细胞病变效应的程度分级为0(无CPE)；±1(弱的CPE)；±2(中度CPE)；±3(强CPE，没添加保护剂)。
在感染前16小时将细胞接种在96孔皿中。将来自感染细胞的条件培养基在含1％FBS的MEM中连续稀释10倍并用于感染细胞。每个稀释度使用10个孔，2个孔作为对照，没有病毒感染。在感染后24小时在相差显微镜下记录CPE，并根据标准方法计算病毒的感染效价(50％组织培养物感染剂量)。
结果参见图5。在体外在测定SAR CoV、GZ50分离物对FRhk-4猴肾细胞的细胞病变效应的抑制的试验中测试IFNα2a和新型干扰素的效力。如图X所见，20ng/ml浓度的IFNα2b不能完全抑制SARS冠状病毒杀死培养基中这些细胞的活性。IFN α012在保护这些细胞方面是更有效的，20ng/ml的浓度就能完全保护，IC50在0.8-0.16ng/ml之间。4ng/ml的IFN α023能更有效地给予完全保护，IC50在0.8-0.16ng/ml之间。
实施例9干扰素对SARS CoV复制的抑制作用材料和方法细胞和病毒非洲绿猴肾细胞(Vero 76)获得自美国典型培养物保藏中心(ATCC；Manassas，VA，USA)。该细胞用常规方法在补充5％热灭活胎牛血清(FBS；Hyclone Laboratories；Logan UT，USA)的极限必需培养基(MEM)中培养。对于抗病毒测定而言，将血清减至2％并添加终浓度为50μg/ml的庆大霉素到培养基中。
严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS CoV)，Urbani株(200300592)获得自CDC并用常规方法在Vero 76细胞中传代。
细胞病变效应(CPE)抑制测定。使用Barnard等.2001(Barnard，D.L.，Stowell，V.D.，Seley，K.L.，Hegde，V.R.，Das，S.R.，Rajappan，V.P.，Schneller，S.W.，Smee，D.F.，&Sidwell，R.W.2001，Antiviral Chemistry&Chemotherapy 12221-230)的实验方案。在该试验中，在不同浓度下(四个单一log 10或七个1/2log10稀释度)测试化合物一到两次，然后在同一培养板上通过中性红(NR)摄取试验利用分光光度计检验细胞生存力(见下)。将等体积的病毒(感染复数[MOI]＝0.001)和化合物添加到96孔组织培养板中的80-90％汇合的单层细胞中。然后在评估干扰素的孔中，在暴露于病毒前用干扰素预处理孔24小时。使用的MOI使得病毒对照中的100％细胞在3-5天内显示细胞病变效应(CPE)。该培养板在37℃下温育直至病毒对照中的细胞显示完全的病毒CPE，如通过光学显微镜所观察的。测定每种药物浓度对病毒CPE的抑制作用，平行重复三份，对于细胞毒性测定，平行重复两份。每块微量培养板上的6个孔留出作为未感染的、未处理的细胞对照，每块微量培养板上6个孔仅添加培养基中的病毒并作为病毒复制的对照。对于所测试的每组化合物，Alferon包括在内作为阳性对照药物。对于所有基于CPE的测定法而言，对于每一浓度，干扰素的50％有效浓度(IC50)可通过表示为未处理的、未感染的对照的百分数的CPE评级平均值的线性回归分析进行计算。
CPE抑制作用和化合物细胞毒性的中性红(NR)摄取测定法。该测定在上述相同的CPE抑制测试板上进行以检验抑制活性并通过目测观察细胞毒性。由我们所掌握的在目测和NR测定之间通常相关性大于95％(Barnard，D.L.，Stowell，V.D.，Seley，K.L.，Hegde，V.R.，Das，S.R.，Rajappan，V.P.，Schneller，S.W.，Smee，D.F和Sidwell，R.W.2001，Antiviral Chemistry&Chemotherapy12221-230)。该NR测定使用如Barnard等(Baniard，D.L.，Sidwell，R.W.，Xiao，W.，Player，M.R.，Adah，S和Torrence，P.F.(1999)Antiviral Research 41119-134)所描述的Cavenaugh等的改良方法(Cavenaugh，P.R.Jr.，Moskwa，P.S.，Donish，W.H.，Pera，P.J.，Richardson，D和Andrese，A.P.(1990)Investigational New Drugs 8347-354)来进行。
简言之，从培养板的每个孔中除去培养基，将0.034％NR添加到培养板的每个孔中并将该培养板在黑暗中于37℃温育2小时。从孔中除去NR溶液，漂洗并用Srenson氏柠檬酸盐缓冲液缓冲的乙醇萃取残留的染料。用酶标仪(microplate reader)(Bio-Tek EL 1309；Bio-Tek Instruments，Inc.，Winooski，VT)读取540nm/450nm处吸光度。吸光度数值表示为未处理对照的百分数，并如上所述计算IC50值。
结果参见图6。在体外另一种SARS CoV抑制作用的测定法中测试了IFNα2a和新型干扰素抑制SARS CoV的效力。在这些实验中使用了不同的病毒株-Urbani和细胞系-非洲绿猴肾细胞(Vero 76)。当通过中性红摄取测定时，在保护细胞方面，仅有IFN α012较IFN α2a更有效。目测证实了所有三种新型干扰素(IFN α003、α023和α012)都显示了较IFN α2a更有效，IFN α012被再次证明具有最高的抗病毒活性。
实施例10干扰素对呼吸道合胞体病毒复制的抑制作用材料和方法于平底96孔培养板中，在掺入5％胎牛血清(FBS)的Eagles MEM中培养人胚胎二倍体成纤维细胞至汇合。然后用不同的RSV临床分离物在低MOI(约0.01)下感染单层细胞，在室温下病毒处理吸附1小时。除去病毒，用PBS洗涤单层细胞并用含有连续稀释的各种干扰素的添加2％FBS的MEM和无药物对照替换PBS。在36℃下温育3天后，将细胞在0.05％戊二醛/PBS中固定并用5％BSA/PBS封闭1小时。洗涤后，添加稀释的小鼠单克隆抗体(与A和B亚型交叉反应)到单层细胞并在36℃下温育1小时。洗涤后，用蛋白-A-HRP偶联物在推荐浓度下于36℃与单层细胞温育1小时。洗涤后，添加底物并通过添加稀硫酸停止反应。测量450nm处吸光度。数据绘图并测定50％终点。
结果参见图7。在体外呼吸道合胞体病毒(RSV)感染模型中测试了IFN α2a和新型干扰素的效力。对于大多数分离物来说，除VS1511外IFN α012较IFN α2a更有效，而在所有测试的病毒株中IFN α023最有效。在该测试系统中IFN α003和α001效力并不高。
实施例11干扰素保护人肺成纤维细胞抗流感病毒感染的效力材料和方法为确定在该测定法中可用的合适的病毒滴度，进行病毒灵敏度测定。两排(duplicate rows)的100μl细胞以2.0E+5人肺成纤维细胞(HLF)/毫升的浓度在96孔微量滴定板上培养。将微量滴定板置于37℃和5.0％CO2下过夜。在第二天，分别对微量滴定板进行流感病毒滴度测定。对滴定板进行1∶2连续稀释，获得总共24份稀释液。然后将50μl的这些病毒稀释液添加到微量滴定板的细胞上并置于培养箱中过夜。在第三天，用结晶紫染色滴定板并干燥。为获得用于该测定的病毒工作稀释液，使用了其中出现100％细胞杀死的最后一个孔右边的终点3个孔。在该情况下，来自我们病毒工作母液的1∶20流感病毒稀释液被测定认为是最佳的稀释液。
为得到干扰素效价，首先将干扰素在90％DMEM、10％FBS中稀释到约8000U/ml。然后将10μl的该溶液添加到96孔微量滴定板上的190μl的培养基中。在该滴定板上进行2倍稀释，制备总共12份干扰素稀释液。一种已知浓度的人IFNαA实验室标准物在第一个孔中也稀释到1∶20并在该板上连续稀释。对HLF细胞计数并稀释到2.0E+5细胞/毫升的浓度。然后将100μl的这些细胞添加到每个孔中。接着将微量滴定板置于平台振荡器上振荡10分钟。然后将该滴定板置于培养箱(37℃，5.0％CO2)中过夜。在第二天，将流感病毒稀释到预定浓度，即1∶20，并添加50μl到每个孔中。再将滴定板置于培养箱中过夜。接着用结晶紫对滴定板染色并干燥。为测定干扰素效价，测定了其中出现50％杀死的终点。然后，将该终点与人IFN αA实验室标准物的终点进行比较。
结果参见图8。在体外流感病毒模型中测试了新型干扰素的效力，使用了WSN/A病毒株(H1N1)和正常的人肺成纤维细胞(HLF)。测定了病毒细胞病变效应50％抑制所需的IFN浓度并表示为相对功效。在该测定中，IFN α003等效于IFN α2a，而IFN α001效力较低。IFN α012是IFN α2a效力的20倍以上。
实施例12干扰素保护肝细胞抗黄热病病毒感染的效力材料和方法用HepG2细胞接种于PBS中1∶40稀释的0.1％I型胶原包被的平底96孔微量滴定板。在添加推定的抗病毒剂之前，培养细胞至分汇合(sub-confluent)单层。将平份重复六份的化合物添加到B2至G2孔中，并在该滴定板上制备3倍稀释液(B2-B10，C2-C10等)。没有化合物添加到第11列。
在存在细胞情况下温育化合物27小时。在B、C和D行中添加黄热病病毒株17D(原种6)到细胞中，每孔50μl以提供500pfu/孔。当出现充分杀死病毒感染的细胞时，通过在每孔中添加25μl/孔的XTT和PMS测量存活的细胞，并将滴定板在37℃下温育1小时。在封闭滴定板前，将滴定板冷却至室温持续10分钟，在450nm处用分光光度计分析滴定板吸光度。
结果参见图9。新型干扰素保护HepG2肝细胞不被黄热病病毒杀死的效力与IFN α2a进行比较。IFN α012较IFN α2a稍有效，而IFNα003和α023较IFN α2a明显更有效。因为YFV与丙型肝炎病毒特别相关，其可作为丙型肝炎测试的模型。
实施例13在用不同病毒攻击的多种细胞型中IFN α2a和新型IFNs的比较材料和方法抗病毒测定实验方案HEp-2细胞/VSV为确定用于该测定的合适的病毒滴度，首先进行病毒灵敏度测定。两排的100μl细胞以3.0E+5 HEp-2细胞/毫升的浓度在96孔微量滴定板上培养。将微量滴定板置于37℃、5.0％CO2下过夜。在第二天，分别对微量滴定板进行VSV滴度测定。对滴定板进行1∶2连续稀释，获得总共24份稀释液。然后将50μl的这些病毒稀释液添加到微量滴定板的细胞上并置于培养箱中过夜。在第三天，用结晶紫染色滴定板并干燥。为获得用于该测定的病毒工作稀释液，使用了其中出现100％细胞杀死的最后一个孔右边的终点3个孔。在该情况下，来自我们病毒工作母液的1∶150VSV稀释液被确定认为是最佳的稀释液。
为测定干扰素IC50，首先将干扰素在90％DMEM、10％FBS中稀释到约8000U/ml。然后将10μl的该溶液添加到96孔微量滴定板上的190μl的培养基中。在该滴定板制备上进行2倍稀释，以获得总共12份干扰素稀释液。一种已知浓度的人IFN αA实验室标准物在第一个孔中也稀释到1∶20并在该板上连续稀释。对HEP-2细胞计数并稀释到3.0E+5细胞/毫升的浓度。然后将100μl的这些细胞添加到每个孔中。接着将微量滴定板置于平台振荡器上振荡10分钟。然后将该滴定板置于培养箱(37℃，5.0％CO2)中过夜。在第二天，将VSV稀释到预定浓度，即1∶150，并添加50μl到每个孔中。再次，将滴定板置于培养箱中过夜。接着用结晶紫对滴定板染色并干燥。为测定干扰素效价，测定了其中出现50％杀死的终点。然后，将该终点与人IFN αA实验室标准物的终点进行比较。
H226细胞/VSV为确定用于该测定的合适的病毒滴度，首先进行病毒灵敏度测定。两排的100μl细胞以2.5E+5H226细胞/毫升的浓度在96孔微量滴定板上培养。将微量滴定板置于37℃、5.0％CO2下过夜。在第二天，分别对微量滴定板进行VSV效价测定。对滴定板进行1∶2连续稀释，获得总共24份稀释液。然后将50μl的这些病毒稀释液添加到微量滴定板的细胞上并置于培养箱中过夜。在第三天，用结晶紫染色滴定板并干燥。为获得用于该测定的病毒工作稀释液，使用了其中出现100％细胞杀死的最后一个孔右边的终点3个孔。在该情况下，来自我们病毒工作母液的1∶1000VSV稀释液被确定认为是最佳的稀释液。
为测定干扰素IC50，首先将干扰素在90％RPMI、10％FBS中稀释到约8000U/ml。然后将10μl的该溶液添加到96孔微量滴定板上的190μl的培养基中。在该滴定板上进行2倍稀释，以获得总共12份干扰素稀释液。一种已知浓度的人IFN αA实验室标准物在第一个孔中也稀释到1∶20并在该板上连续稀释。对H226细胞计数并稀释到2.5E+5细胞/毫升的浓度。然后将100μl的这些细胞添加到每个孔中。接着将微量滴定板置于平台振荡器上振荡10分钟。然后将该滴定板置于培养箱(37℃，5.0％CO2)中过夜。在第二天，将VSV稀释到预定浓度，即1∶1000，并添加50μl到每个孔中。再次，将滴定板置于培养箱中过夜。接着用结晶紫对滴定板染色并干燥。为测定干扰素效价，测定了其中出现50％杀死的终点。然后，将该终点与人IFN αA实验室标准物的终点进行比较。
HLF细胞/流感病毒为测定用于该测定的合适的病毒滴度，首先进行病毒灵敏度测定。两排的100μl细胞以2.0E+5HLF细胞/毫升的浓度在96孔微量滴定板上培养。将微量滴定板置于37℃、5.0％CO2下过夜。在第二天，分别对微量滴定板进行流感病毒滴度测定。对滴定板进行1∶2连续稀释，获得总共24份稀释液。然后将50μl的这些病毒稀释液添加到微量滴定板的细胞上并置于培养箱中过夜。在第三天，用结晶紫染色滴定板并干燥。为获得用于该测定的病毒工作稀释液，使用了其中出现100％细胞杀死的最后一个孔右边的终点3个孔。在该情况下，来自我们病毒工作母液的1∶20流感病毒稀释液被确定认为是最佳的稀释液。
为测定干扰素IC50，首先将干扰素在90％DMEM、10％FBS中稀释到约8000U/ml。然后将10μl的该溶液添加到96孔微量滴定板上的190μl的培养基中。在该滴定板上进行2倍稀释，以获得总共12份干扰素稀释液。一种已知浓度的人IFNαA实验室标准物在第一个孔中也稀释到1∶20并在该板上连续稀释。对HLF细胞计数并稀释到2.0E+5细胞/毫升的浓度。然后将100μl的这些细胞添加到每个孔中。接着将微量滴定板置于平台振荡器上振荡10分钟。然后将该滴定板置于培养箱(37℃，5.0％CO2)中过夜。在第二天，将流感病毒稀释到预定浓度，即1∶20，并添加50μl到每个孔中。再次，将滴定板置于培养箱中过夜。接着用结晶紫对滴定板染色并干燥。为测定干扰素效价，测定了其中出现50％杀死的终点。然后，将该终点与人IFN αA实验室标准物的终点进行比较。
L细胞/EMCV为确定用于该测定的合适的病毒滴度，首先进行病毒灵敏度测定。双份的100μl细胞以3.0E+5L细胞/毫升的浓度在96孔微量滴定板上培养。将微量滴定板置于37℃、5.0％CO2下过夜。在第二天，分别对微量滴定板进行EMCV滴度测定。对滴定板进行1∶2连续稀释，获得总共24份稀释液。然后将50μl的这些病毒稀释液添加到微量滴定板的细胞上并置于培养箱中过夜。在第三天，用结晶紫染色滴定板并干燥。为获得用于该测定的病毒工作稀释液，使用了其中出现100％细胞杀死的最后一个孔右边的终点3个孔。在该情况下，来自我们病毒工作母液的1∶2000EMCV稀释液被确定认为是最佳的稀释液。
为测定干扰素IC50，首先将干扰素在90％MEM、10％FBS中稀释到约8000U/ml。然后将10μl的该溶液添加到96孔微量滴定板上的190μl的培养基中。在该滴定板上进行2倍稀释，以获得总共12份干扰素稀释液。一种已知浓度的人IFN αA实验室标准物在第一个孔中也稀释到1∶20并在该板上连续稀释。对HEP-2细胞计数并稀释到3.0E+5细胞/毫升的浓度。然后将100μl的这些细胞添加到每个孔中。接着将微量滴定板置于平台振荡器上振荡10分钟。然后将该滴定板置于培养箱(37℃，5.0％CO2)中过夜。在第二天，将EMCV稀释到预定浓度，即1∶2000，并添加50μl到每个孔中。再次，将滴定板置于培养箱中过夜。接着用结晶紫对滴定板染色并干燥。为测定干扰素效价，测定了其中出现50％杀死的终点。然后，将该终点与人IFN αA实验室标准物的终点进行比较。
结果参见图10。测定了新型干扰素保护多种细胞系抗病毒攻击的效力。所述细胞系是牛细胞系、MDBK、鼠细胞系、L细胞和3种人细胞系HEP-2、H226和HLF。在所有人细胞系测试中IFN α012和α023优于IFN α2a(在HLF/Flu测定中IFN α023没有测试)。此外证实了IFN α012对鼠细胞的显著活性(是IFN α2a效力的约70倍)，而IFNα2a效力很低。较其他而言就有可能更愿在感染的鼠模型中使用该IFN。
在不同病毒/细胞对中这些IFN相对效力的差异表明所选择的IFN或所选择的IFN组合可能是治疗特定病毒感染的首选。例如，IFN α003较IFN α2a在保护HEP-2细胞抗VSV感染上明显更有效，而在HLF/Flu病毒测试中IFN α003效力类似于IFN α2a。
也应当指出虽然在本文所列的测定法中没有证实IFN α021和IFNα018具高效的抗病毒活性，但清楚另外的病毒/细胞组合对这些IFN可能是高响应的。换句话说，应当预计到这些IFN在某些允许调节内源性IFN活性的条件下可用作为IFN拮抗剂。
序列表<110>佩斯特卡生物医疗实验室公司<120>使用干扰素治疗严重急性呼吸综合征及其他病毒感染<130>PBLI-PWO-016<160>86<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>516<212>DNA<213>猫<220>
<221>CDS<222>(1)..(513)<223>
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Leu Leu Asp Lys Phe Cys Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu85 90 95Glu Ala Cys Val Met Gln Gln Glu Arg Val Gly Glu Thr Leu Leu Met100 105 110Asn Ala Asp Ser Thr Leu Ala Val Lys Lys Tyr Phe Arg Arg Ile Thr115 120 125Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val130 135 140Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gln Glu145 150 155 160Arg Leu Arg Arg Lys Glu165<210>37<211>570<212>DNA<213>智人<220>
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<400>37atg gcc ttg tcc ttt tct tta ctg atg gtc gtg ctg gta ctc agc tac 48Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met Val Val Leu Val Leu Ser Tyr1 5 10 15aaa tcc atc tgc tct ctg ggc tgt gat ctg cct cag acc cac agc ctg 96Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu20 25 30cgt aat agg agg gcc ttg ata ctc ctg gca caa atg gga aga atc tct144Arg Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg Ile Ser35 40 45cct ttc tcc tgc ttg aag gac aga cat gaa ttc aga ttc cca gag gag192Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Glu Phe Arg Phe Pro Glu Glu50 55 60gag ttt gat ggc cac cag ttc cag aag act caa gcc atc tct gtc ctc240Glu Phe Asp Gly His Gln Phe Gln Lys Thr Gln Ala Ile Ser Val Leu65 70 75 80cat gag atg atc cag cag acc ttc aat ctc ttc agc aca gag gac tca288His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Glu Asp Ser
85 90 95tct gct gct tgg gaa cag agc ctc cta gaa aaa ttt tcc act gaa ctt336Ser Ala Ala Trp Glu Gln Ser Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu100 105 110tac cag caa ctg aat gac ctg gaa gca tgt gtg ata cag gag gtt ggg384Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly115 120 125gtg gaa gag act ccc ctg atg aat gag gac tcc atc ctg gct gtg agg432Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg130 135 140aaa tac ttc caa aga atc act ctt tat cta aca gag aag aaa tac agc480Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser145 150 155 160cct tgt gcc tgg gag gtt gtc aga gca gaa atc atg aga tcc ctc tcg528Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser165 170 175ttt tca aca aac ttg caa aaa aga tta agg agg aag gat tga570Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys Arg Leu Arg Arg Lys Asp180 185<210>38<211>189<212>PRT<213>智人<400>38Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met Val Val Leu Val Leu Ser Tyr1 5 10 15Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu20 25 30Arg Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg Ile Ser35 40 45Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Glu Phe Arg Phe Pro Glu Glu50 55 60Glu Phe Asp Gly His Gln Phe Gln Lys Thr Gln Ala Ile Ser Val Leu65 70 75 80His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr GIu Asp Ser85 90 95Ser Ala Ala Trp Glu Gln Ser Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu
100 105 110Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly115 120 125Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg130 135 140Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser145 150 155 160Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser165 170 175Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys Arg Leu Arg Arg Lys Asp180 185<210>39<211>753<212>DNA<213>智人<220>
<221>CDS<222>(102)..(572)<223>
<400>39atagctagca tgcgcaaatt taaagcgctg attcagaaaa cctagaggcc gcggttcaag 60ttacccacct caggtagcct agtgatattt gcaaaatccc a atg gcc cgg tcc ttt 116Met Ala Arg Ser Phe1 5tct tta ctg atg gtc gtg ctg gta ctc agc tac aaa tcc atc tgc tct164Ser Leu Leu Met Val Val Leu Val Leu Ser Tyr Lys Ser Ile Cys Ser10 15 20ctg ggc tgt gat ctg cct cag acc cac agc ctg cgt aat agg agg gcc212Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Arg Asn Arg Arg Ala25 30 35ttg ata ctc ctg gca caa atg gga aga atc tct cct ttc tcc tgc ttg260Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu40 45 50aag gac aga cat gaa ttc aga ttc cca gag gag gag ttt gat ggc aac308Lys Asp Arg His Glu Phe Arg Phe Pro Glu Glu Glu Phe Asp Gly Asn55 60 65cag ttc cag aag act caa gcc atc tct gtc ctc cat gag atg atc cag356Gln Phe Gln Lys Thr Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Ile Gln70 75 80 85cag acc ttc aat ctc ttc agc aca gag gac tca tct gct gct tgg gaa404
Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Glu Asp Ser Ser Ala Ala Trp Glu90 95 100cag agc ttc cta gaa aaa ttt tcc act gaa ctt tac cag caa ctg aat452Gln Ser Phe Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn105 110 115aac ttg gaa gca tgt gtg ata cag gag gtt ggg gtg gaa gag act ccc500Asn Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro120 125 130ctg atg aat gag gac tcc atc ctg gct gtg agg aaa tac ttc caa aga548Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg135 140 145atc act ctt tat cta aca gag aag aaatacagcc cttgtgcctg ggaggttgtc 602Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys150 155agagcagaaa tcatgagatc cctctcgttt tcaacaaact tgcaaaaaag attaaggagg 662aaggattgaa acctggttca acatggaaat gatcctgatt gactaataca ttatctcaca 722ctttcatgat tcttccaatc gatcgcgcgc a 753<210>40<211>157<212>PRT<213>智人<400>40Met Ala Arg Ser Phe Ser Leu Leu Met Val Val Leu Val Leu Ser Tyr1 5 10 15Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu20 25 30Arg Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg Ile Ser35 40 45Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Glu Phe Arg Phe Pro Glu Glu50 55 60Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe Gln Lys Thr Gln Ala Ile Ser Val Leu65 70 75 80His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Glu Asp Ser85 90 95Ser Ala Ala Trp Glu Gln Ser Phe Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu100 105 110
Tyr Gln Gln Leu Asn Asn Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly115 120 125Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg130 135 140Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys145 150 155<210>41<211>755<212>DNA<213>智人<220>
<221>CDS<222>(103)..(672)<223>
<220>
<221>多种性质<222>(733)..(733)<223>n＝a，c ，，g，或t<400>41tatagctagc atgcgcaaat ttaaagcgct gatcagaaaa cctagaggcc gaagttcaag 60gttatccatc tcaagtagcc tagcaatatt tgcaacatcc ca atg gcc ctg tcc 114Met Ala Leu Ser1ttt tct tta ctg atg gtc gtg ctg gtg ctc agc tac aaa tcc atc tgt162Phe Ser Leu Leu Met Val Val Leu Val Leu Ser Tyr Lys Ser Ile Cys5 10 15 20tct ctg ggc tgt gat ctg cct cag acc cac agc ctg ggt aat agg agg210Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg25 30 35gcc ttg ata ctc ctg gga caa atg gga aga atc tct cct ttt tcc tgc258Ala Leu Ile Leu Leu Gly Gln Met Gly Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys40 45 50ctg aag gac aga cat gat ttc cga atc ccc cag gag gag ttt gat ggc306Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Arg Ile Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly55 60 65aac cag ttc cag aag gct caa gcc atc tct gtc ctc cat gag atg ttc354Asn Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Phe70 75 80cag cag acc ttc aat ctc ttc agc aca gag gac tca tct gct gct tgg402Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Glu Asp Ser Ser Ala Ala Trp85 90 95 100gaa cag agc ctc cta gaa aaa ttt tcc act gaa ctt tac cag caa ctg450Glu Gln Ser Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu105 110 115
aat gac ctg gaa gca tgt gtg ata cag gag gtt ggg atg gaa gag act498Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Met Glu Glu Thr120 125 130ccc ctg atg aat gag gac tcc atc ctg gct gtg agg aaa tac ttc caa546Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln135 140 145aga atc act ctt tat cta aca gag aag aaa tac agc cct tgt gcc tgg594Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp150 155 160gag gtt gtc aga gca gaa atc atg aga tct ctc tct ttt tca aca aac642Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser Phe Ser Thr Asn165 170 175 180ttg caa aaa ata tta agg agg aag gat tga aaactggttc aacatggcaa 692Leu Gln Lys Ile Leu Arg Arg Lys Asp185tgatcctgat tgactaatac attatctcac actttcatga ntcttccaat cgatcgcgcg 752cac755<210>42<211>189<212>PRT<213>智人<400>42Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met Val Val Leu Val Leu Ser Tyr1 5 10 15Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu20 25 30Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Gly Gln Met Gly Arg Ile Ser35 40 45Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Arg Ile Pro Gln Glu50 55 60Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu65 70 75 80His Glu Met Phe Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Glu Asp Ser85 90 95Ser Ala Ala Trp Glu Gln Ser Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu100 105 110
Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly115 120 125Met Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg130 135 140Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser145 150 155 160Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser165 170 175Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys Ile Leu Arg Arg Lys Asp180 185<210>43<211>759<212>DNA<213>智人<220>
<221>多种性质<222>(758)..(758)<223>n＝a，c，g，或t<220>
<221>CDS<222>(86)..(655)<223>
<400>43gtgcgcgcga tcgattcaga aaacctagag gccgaagttc aaggttatcc atctcaagta 60gcctagcaat atttgcaaca tccca atg gcc ctg tcc ttt tct tta ctt atg112Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met1 5gcc gtg ctg gtg ctc agc tac aaa tcc atc tgt tct cta ggc tgt gat160Ala Val Leu Val Leu Ser Tyr Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp10 15 20 25ctg cct cag acc cac agc ctg ggt aat agg agg gcc ttg ata ctc ctg208Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu30 35 40gca caa atg gga aga atc tct cct ttc tcc tgc ctg aag gac aga cat256Ala Gln Met Gly Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His45 50 55gat ttc cga atc ccc cag gag gag ttt gat ggc aac cag ttc cag aag304Asp Phe Arg Ile Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe Gln Lys60 65 70gct caa gcc atc tct gtc ctc cat gag atg atc cag cag acc ttc aat352Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn
75 80 85ctc ttc agc aca gag gac tca tct gct gct tgg gaa cag agc ctc cta400Leu Phe Ser Thr Glu Asp Ser Ser Ala Ala Trp Glu Gln Ser Leu Leu90 95 100 105gaa aaa ttt tcc act gaa ctt tac cag caa ctg aat gac ctg gaa gca448Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala110 115 120tgt gtg ata cag gag gtt ggg gtg gaa gag act ccc ctg atg aat gag496Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Glu125 130 135gac tcc atc ctg gct gtg agg aaa tac ttc caa aga atc act ctt tat544Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr140 145 150cta ata gag agg aaa tac agc cct tgt gcc tgg gag gtt gtc aga gca592Leu Ile Glu Arg Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala155 160 165gaa atc atg aga tcc ctc tcg ttt tca aca aac ttg caa aaa aga tta640Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys Arg Leu170 175 180 185agg agg aag gat tga aaactggttc aacatggcaa tgatcctgat tgactaatac695Arg Arg Lys Aspattatctcac actttcatga gttcttccaa tcagcgcttt aaatttgcgc atgctagcta 755tant 759<210>44<211>189<212>PRT<213>智人<400>44Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met Ala Val Leu Val Leu Ser Tyr1 5 10 15Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu20 25 30Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg Ile Ser35 40 45Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Arg Ile Pro Gln Glu50 55 60Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu65 70 75 80
His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Glu Asp Ser85 90 95Ser Ala Ala Trp Glu Gln Ser Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu100 105 110Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly115 120 125Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg130 135 140Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Ile Glu Arg Lys Tyr Ser145 150 155 160Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser165 170 175Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys Arg Leu Arg Arg Lys Asp180 185<210>45<211>756<212>DNA<213>智人<220>
<221>CDS<222>(105)..(674)<223>
<400>45atatagctag catgcgcaaa tttaaagcgc tgattcagaa aacctagagg ccgaagttca 60aggttaccca tctcaagtag cctagcaaca tttgcaacat ccca atg gcc ctg tcc 116Met Ala Leu Ser1ttt tct tta ctg atg gcc gtg ctg gtg ctc agc tac aaa tcc atc tgt164Phe Ser Leu Leu Met Ala Val Leu Val Leu Ser Tyr Lys Ser Ile Cys5 10 15 20tct cta ggc tgt gat ctg cct cag acc cac agc ctg ggt aat agg agg212Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg25 30 35gcc ttg ata ctc ctg gca caa atg gga aga atc tct cct ttc tcc tgc260Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys40 45 50
ctg aag gac aga cat gac ttt gga ctt ccc cag gag gag ttt gat ggc308Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Leu Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly55 60 65aac cag ttc cag aag act caa gcc atc tct gtc ctc cat gag atg atc356Asn Gln Phe Gln Lys Thr Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Ile70 75 80cag cag aec ttc aat ctc ttc agc aca aag gat tca tct gct gct tgg404Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp85 90 95 100gat gag agc ctc cta gac aaa ttc tac att gaa ctt ttc cag caa ctg452Asp Glu Ser Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Ile Glu Leu Phe Gln Gln Leu105 110 115aat gtc cta gaa gcc tgt gtg aca cag gag gtt ggg gtg gaa gag att500Asn Val Leu Glu Ala Cys Val Thr Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Ile120 125 130gcc ctg atg aat gag gac tcc atc ctg gct gtg agg aaa tac ttt caa548Ala Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln135 140 145aga atc act ctt tat ctg atg ggg aag aaa tac agc cct tgt gcc tgg596Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Met Gly Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp150 155 160gag gtt gtc aga gca gaa atc atg aga tcc ttc tct ttt tca aca aac644Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Phe Ser Thr Asn165 170 175 180ttg caa aaa gga tta aga agg aag gat tga aaactcattc aacatggaaa 694Leu Gln Lys Gly Leu Arg Arg Lys Agp185tgatcctcat tgattaatac atcatctcac actttcatga ttcttccaat cgatcgcgcg 754ca 756<210>46<211>189<212>PRT<213>智人<400>46Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met Ala Val Leu Val Leu Ser Tyr1 5 10 15Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu20 25 30Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg Ile Ser35 40 45
Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Leu Pro Gln Glu50 55 60Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe Gln Lys Thr Gln Ala Ile Ser Val Leu65 70 75 80His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser85 90 95Ser Ala Ala Trp Asp Glu Ser Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Ile Glu Leu100 105 110Phe Gln Gln Leu Asn Val Leu Glu Ala Cys Val Thr Gln Glu Val Gly115 120 125Val Glu Glu Ile Ala Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg130 135 140Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Met Gly Lys Lys Tyr Ser145 150 155 160Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser165 170 175Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys Gly Leu Arg Arg Lys Asp180 185<210>47<211>756<212>DNA<213>智人<220>
<221>多种性质<222>(1)..(755)<223>n＝a，c，g，或t<220>
<221>CDS<222>(86)..(655)<223>
<400>47tggcgcgcga tcgattcaga aaacctagag gccgaagttc aaggttatcc atctcaagta 60gcctagcaat atttgcaaca tccca atg gcc ctg tcc ttt tct tta ctt atg112Met Ala LeL Ser Phe Ser Leu Leu Met1 5gcc gtg ctg gtg ctc agc tac aaa tcc atc tgt tct cta ggc tgt gat160
Ala Val Leu Val Leu Ser Tyr Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp10 15 20 25ctg cct cag acc cac agc ctg ggt aat agg agg gcc tcg ata ctc ctg208Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Ser Ile Leu Leu30 35 40gga caa atg gga aga atc tct cct ttc tcc tgc ctg aag gac aga cat256Gly Gln Met Gly Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His45 50 55gat ttc cga atc ccc cag gag gag ttt gat ggc aac cag ttc cag aag304Asp Phe Arg Ile Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe Gln Lys60 65 70gct caa gcc atc tct gcc ttc cat gag atg atc cag cag acc ttc aat352Ala Gln Ala Ile Ser Ala Phe His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn75 80 85ctc ttc agc aca aag gat tca tct gct gct tgg gat gag acc ctc cta400Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu90 95 100 105gac aaa ttc tac att gaa ctt ttc cag caa ctg aat gac cta gaa gcc448Asp Lys Phe Tyr Ile Glu Leu Phe Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala110 115 120tgt gtg aca cag gag gtt ggg gtg gaa gag att gcc ctg atg aat gag496Cys Val Thr Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Ile Ala Leu Met Asn Glu125 130 135gac tcc atc ctg gct gtg agg aaa tac ttt caa aga atc act ctt tat544Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr140 145 150ctg atg ggg aag aaa tac agc cct tgt gcc tgg gag gtt gtc aga gca592Leu Met Gly Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala155 160 165gaa atc atg aga tcc ttc tct ttt tca aca aac ttg caa aaa gga tta640Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys Gly Leu170 175 180 185aga agg aag gat tga aaactcattc aacatggaaa tgatcctcat tgattaatac695Arg Arg Lys Aspatcatctcac actttcatga gttcttccaa tcagcgcttt aaatttgcgc atgctaggtn 755t 756<210>48<211>189<212>PRT<213>智人<400>48
Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met Ala Val Leu Val Leu Ser Tyr1 5 10 15Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu20 25 30Gly Asn Arg Arg Ala Ser Ile Leu Leu Gly Gln Met Gly Arg Ile Ser35 40 45Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Arg Ile Pro Gln Glu50 55 60Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Ala Phe65 70 75 80His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser85 90 95Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Ile Glu Leu100 105 110Phe Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Thr Gln Glu Val Gly115 120 125Val Glu Glu Ile Ala Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg130 135 140Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Met Gly Lys Lys Tyr Ser145 150 155 160Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser165 170 175Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys Gly Leu Arg Arg Lys Asp180 185<210>49<211>758<212>DNA<213>智人<220>
<221>多种性质<222>(757)..(757)<223>n＝a，c，g，或t
<220>
<221>CDS<222>(85)..(654)<223>
<400>49tgcgcgcgat cgattcagaa aacctagagg ccgaagttca aggttatcca tctcaagtag 60cctagcaata tttgcaacat ccca atg gcc ctg tcc ttt tct tta ctg atg 111Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met1 5gcc gtg ctg gtg ctc agc tac aaa tcc atc tgt tct ctg ggc tgt gat159Ala Val Leu Val Leu Ser Tyr Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp10 15 20 25ctg cct cag acc cac agc ctg ggt aat agg agg gcc ttg ata ctc ctg207Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu30 35 40gca caa atg gga aga atc tct cat ttc tcc tgc ctg aag gac aga cat255Ala Gln Met Gly Arg Ile Ser His Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His45 50 55gat ttc gga ttc ccc gag gag gag ttt gat ggc cac cag ttc cag aag303Asp Phe Gly Phe Pro Glu Glu Glu Phe Asp Gly His Gln Phe Gln Lys60 65 70gct caa gcc atc tct gtc ctc cat gag atg atc cag cag acc ttc aat351Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn75 80 85ctc ttc agc aca gag gac tca tct gct gct tgg gaa cag agc ctc cta399Leu Phe Ser Thr Glu Asp Ser Ser Ala Ala Trp Glu Gln Ser Leu Leu90 95 100 105gaa aaa ttt tcc act gaa ctt tac cag caa ctg aat gac ctg gaa gca447Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala110 115 120tgt gtg ata cag gag gtt ggg gtg gaa gag act ccc ctg atg aat gag495Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Glu125 130 135gac tcc atc ctg gct gtg agg aaa tac ttc caa aga atc act ctt tat543Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr140 145 150cta aca gag aag aaa tac agc cct tgt gcc tgg gag gtt gtc aga gca591Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala155 160 165gaa atc atg aga tcc ctc tcg ttt tca aca aac ttg caa aaa aga tta639Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys Arg Leu170 175 180 185agg agg aag gat tga aacctggttc aacatggaaa tgatcctgat tgactaatac694Arg Arg Lys Asp
attatctcac actttcatga gttcttccaa tcagcgcttt aaatttgcgc atgctagcta 754ccnc 758<210>50<211>189<212>PRT<213>智人<400>50Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met Ala Val Leu Val Leu Ser Tyr1 5 10 15Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu20 25 30Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg Ile Ser35 40 45His Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Glu Glu50 55 60Glu Phe Asp Gly His Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu65 70 75 80His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Glu Asp Ser85 90 95Ser Ala Ala Trp Glu Gln Ser Leu Leu Glu Ays Phe Ser Thr Glu Leu100 105 110Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly115 120 125Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg130 135 140Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser145 150 l55 160Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser165 170 175Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys Arg Leu Arg Arg Lys Asp180 185
<210>51<211>896<212>DNA<213>智人<220>
<221>多种性质<222>(1)..(896)<223>n＝a，c，g，或t<220>
<221>CDS<222>(63)..(632)<223>
<400>51atgctcgctg cgcaaattaa agcgctgatc tcaagtagcc tagcaatatt ggcaacatcc 60ca atg gcc ctg tcc ttt tct tta ctg atg gcc gtg ctg gtg ctc agc 107Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met Ala Val Leu Val Leu Ser1 5 10 15tac aaa tcc atc tgt tct ctg ggc tgt gat ctg cct cag acc cac agc155Tyr Lys Ser Ile Cys ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser20 25 30ctg ggt aat agg agg gcc ttg ata ctc ctg gca caa gtg gga aga atc203Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Val Gly Arg Ile35 40 45tct cat ttc tcc tgc ctg aag gac aga cat gat ttc gga ttc ccc gag251Ser His Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Glu50 55 60gag gag ttt gat ggc cac cag ttc cag aag gct caa gcc atc tct gtc299Glu Glu Phe Asp Gly His Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val65 70 75ctc cat gag atg atc cag cag acc ttc aat ctc ttc agc aca gag gac347Leu His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Glu Asp80 85 90 95tca tct gct gct tgg gaa cag agc ctc cta gaa aaa ttt tcc act gaa395Ser Ser Ala Ala Trp Glu Gln Ser Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu100 105 110ctt tac cag caa ctg aat gac ctg gaa gca tgt gtg ata cag gag gtt443Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val115 120 125ggg gtg gaa gag act ccc ctg atg aat gag gac tcc atc ctg gct gtg491Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val130 135 140agg aaa tac ttc caa aga atc act ctt tat cta aca gag aag aaa tac539Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr145 150 155agc cct tgt gcc tgg gag gtt gtc aga gca gaa atc atg aga tcc ctc587Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu
160 165 170 175tcg ttt tca aca aac ttg caa aaa aga tta agg agg aag gat tga632Ser Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys Arg Leu Arg Arg Lys Asp180 185aacctggttc aacatggaaa tgatctgtat tgactaatac atcgatcgcg cgcagatctn 692ctgttcgaat tccngatgag ctgcataatc ttttanggta atgcgttggt ccatacaacc 752ttcttagtac atgcaaccat ttnaccggca gangtaaaat agtcaacacg cacngngtta 812gatattatcc ttgcggngat agattaacgt ntgagcccaa aaaagaaacc cttacccaag 872aaccacttga ggaccncgtn gcct 896<210>52<211>189<212>PRT<213>智人<400>52Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met Ala Val Leu Val Leu Ser Tyr1 5 10 15Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu20 25 30Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Val Gly Arg Ile Ser35 40 45His Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Glu Glu50 55 60Glu Phe Asp Gly His Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu65 70 75 80His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Glu Asp Ser85 90 95Ser Ala Ala Trp Glu Gln Ser Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu100 105 110Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly115 120 125Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg130 135 140
Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser145 150 155 160Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser165 170 175Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys Arg Leu Arg Arg Lys Asp180 185<210>53<211>741<212>DNA<213>智人<220>
<221>多种性质<222>(1)..(741)<223>n＝a，c，g，或t<220>
<221>CDS<222>(66)..(635)<223>
<400>53gnnnnnnnna gngtgtgttn nttnnnngat ctntttgaaa tcccagcaat attggcaaca 60tccca atg gcc ctg tcc ttt tct tta ctg atg gcc gtg ctg gtg ctc agc 110Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met Ala Val Leu Val Leu Ser1 5 10 15tac aaa tcc atc tgt tct ctg ggc tgt gat ctg cct cag acc cac agc158Tyr Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser20 25 30ctg ggt aat agg agg gcc ttg ata ctc ctg gca caa atg gga aga atc206Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg Ile35 40 45tct cat ttc tcc tgc ctg aag gac aga cat gat ttc gga ttc ccc gag254Ser His Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Glu50 55 60gag gag ttt gat ggc cac cag ttc cag aag gct caa gcc atc tct gtc302Glu Glu Phe Asp Gly His Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val65 70 75ctc cat gag atg atc cag cag acc ttc aat ctc ttc agc aca gag gac350Leu His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Glu Asp80 85 90 95tca tct gct gct tgg gaa cag agc ctc cta gaa aaa ttt tcc act gaa398Ser Ser Ala Ala Trp Glu Gln Ser Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu100 105 110ctt tac cag caa ctg aat gac ctg gaa gca tgt gtg ata cag gag gtt446
Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val115 120 125ggg gtg gaa gag act ccc ctg atg aat gag gac tcc atc ctg gct gtg494Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val130 135 140agg aaa tac ttc caa aga atc act ctt tat cta ata gag agg aaa tac542Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Ile Glu Arg Lys Tyr145 150 155agc cct tgt gcc tgg gag gtt gtc aga gca gaa atc atg aga tcc ctc590Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu160 165 170 175tcg ttt tca aca aac ttg caa aaa aga tta agg agg aag gat tga635Ser Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys Arg Leu Arg Arg Lys Asp180 185aaactggttc aacatggaaa tgatctgtat tgactaatat cagcgctttg natttgcgca 695acggncatca aanttcaann nnaacncann nnnncnnnnn nnnnnc 741<210>54<211>189<212>PRT<213>智人<400>54Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met Ala Val Leu Val Leu Ser Tyr1 5 10 15Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu20 25 30Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg Ile Ser35 40 45His Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Glu Glu50 55 60Glu Phe Asp Gly His Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu65 70 75 80His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Glu Asp Ser85 90 95Ser Ala Ala Trp Glu Gln Ser Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu100 105 110
Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly115 120 125Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg130 135 140Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Ile Glu Arg Lys Tyr Ser145 150 155 160Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser165 170 175Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys Arg Leu Arg Arg Lys Asp180 185<210>55<211>756<212>DNA<213>智人<220>
<221>CDS<222>(104)..(673)<223>
<400>55tatagctagc atgcgcaaat ttaaagcgct gattcagaaa acctagaggc cgaagttcaa 60ggttatccat ctcaagtagc ctagcaatat ttgcaacatc cca atg gcc ctg tcc115Met Ala Leu Ser1ttt tct tta ctg acg gcc gtg ctg gtg ctc agc tac aaa tcc atc tgt163Phe Ser Leu Leu Thr Ala Val Leu Val Leu Ser Tyr Lys Ser Ile Cys5 10 15 20tct ctg ggc tgt gat ctg cct cag acc cac agc ctg ggt aat agg agg211Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg25 30 35gcc ttg ata ctc ctg gca caa atg gga aga atc tct cat ttc tcc tgc259Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg Ile Ser His Phe Ser Cys40 45 50ctg aag gac aga cat gat ttc gga ttc ccc gag gag gag ttt gat ggc307Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Glu Glu Glu Phe Asp Gly55 60 65cac cag ttc cag aag gct caa gcc atc tct gtc ctc cat gag atg atc355His Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Ile70 75 80cag cag acc ttc aat ctc ttc agc aca gag gac tca tct gct gct tgg403
Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Glu Asp Ser Ser Ala Ala Trp85 90 95 100gaa cag agc ctc cta gaa aaa ttt tcc act gaa ctt tac cag caa ctg451Glu Gln Ser Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu105 110 115aat gac ctg gaa gca tgt gtg ata cag gag gtt ggg gtg gaa gag act499Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr120 125 130ccc ctg atg aat gag gac tcc atc ctg gct gtg agg aaa tac ttc caa547Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln135 140 145aga atc act ctt tat cta aca gag aag aaa tac agc cct tgt gcc tgg595Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr ser Pro Cys Ala Trp150 155 160gag gtt gtc aga gca gaa atc atg aga tcc ctc tcg ttt tca aca aac643Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser Phe Ser Thr Asn165 170 175 180ttg caa aaa aga tta agg agg aag gat tga aacctggttc aacatggaaa 693Leu Gln Lys Arg Leu Arg Arg Lys Asp185tgatcctgat tgactaatac attatctcac actttcatga ttcttccaat cgatcgcgcg 753cac756<210>56<211>189<212>PRT<213>智人<400>56Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Thr Ala Val Leu Val Leu Ser Tyr1 5 10 15Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu20 25 30Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg Ile Ser35 40 45His Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Glu Glu50 55 60Glu Phe Asp Gly His Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu65 70 75 80His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Glu Asp Ser85 90 95
Ser Ala Ala Trp Glu Gln Ser Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu100 105 110Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly115 120 125Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg130 135 140Lys Tyr phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser145 150 155 160Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser165 170 175Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys Arg Leu Arg Arg Lys Asp180 185<210>57<211>878<212>DNA<213>智人<220>
<221>多种性质<222>(1)..(878)<223>n＝a，c，g，或t<220>
<221>CDS<222>(58)..(627)<223>
<400>57ttgacgcccc cttgttaccc ctcatcaacc agcccagcag catcttcggg attccca 57atg gca ttg ccc ttt gct tta atg atg gcc ctg gtg gtg ctc agc tgc105Met Ala Leu Pro Phe Ala Leu Met Met Ala Leu Val Val Leu Ser Cys1 5 10 15aag tca agc tgc tct ctg ggc tgt aat ctg tct caa acc cac agc ctg153Lys Ser Ser Cys Ser Leu Gly Cys Asn Leu Ser Gln Thr His Ser Leu20 25 30aat aac agg agg act ttg atg ctc atg gca caa atg agg aga atc tct201Asn Asn Arg Arg Thr Leu Met Leu Met Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser35 40 45cct ttc tcc tgc ctg aag gac aga cat gac ttt gaa ttt ccc cag gag249Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Glu Phe Pro Gln Glu50 55 60gaa ttt gat ggc aac cag ttc cag aaa gct caa gcc atc tct gtc ctc297
Glu Phe Asp Gly ASn Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu65 70 75 80cat gag atg atg cag cag acc ttc aat ctc ttc agc aca aag aac tca345His Glu Met Met Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asn Ser85 90 95tct gct gct tgg gat gag gcc ctc cta gaa aaa ttc tac att gaa ctt393Ser Ala Ala Trp Asp Glu Ala Leu Leu Glu Lys Phe Tyr Ile Glu Leu100 105 110ttc cag caa atg aat gac ctg gaa gcc tgt gtg ata cag gag gtt ggg441Phe Gln Gln Met Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly115 120 125gtg gaa gag act ccc ctg atg aat gag gac tcc atc ctg gct gtg aag489Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Lys130 135 140aaa tac ttc caa aga atc act ctt tat ctg atg gag aag aaa tac agc537Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Met Glu Lys Lys Tyr Ser145 150 155 160cct tgt gcc tgg gag gtt gtc aga gca gaa atc atg aga tcc ctc tct585Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser165 170 175ttt tca aca aac ttg caa aaa aga tta agg agg aag gat tga627Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys Arg Leu Arg Arg Lys Asp180 185aaactggttc atcatggaaa tgattcatca gcgctttaaa tttgcgcatg ctagctatag 687ttctagaggt cgaaattcac ctcgaaaagc aagctgatna accgatncaa ttnaaggctc 747cnttttggag cctttttttt ttggagattt tcaaccgtga aaaaantatt attcgcaatt 807ccagctaant cacctcgaaa gcaagcttga tnaanccgtt ccaattaaan gcttcctttg 867gaggcctttt t 878<210>58<211>189<212>PRT<213>智人<400>58Met Ala Leu Pro Phe Ala Leu Met Met Ala Leu Val Val Leu Ser Cys1 5 10 15Lys Ser Ser Cys Ser Leu Gly Cys Asn Leu Ser Gln Thr His Ser Leu20 25 30Asn Asn Arg Arg Thr Leu Met Leu Met Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser35 40 45
Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Glu Phe Pro Gln Glu50 55 60Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu65 70 75 80His Glu Met Met Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asn Ser85 90 95Ser Ala Ala Trp Asp Glu Ala Leu Leu Glu Lys Phe Tyr Ile Glu Leu100 105 110Phe Gln Gln Met Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly115 120 125Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Lys130 135 140Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Met Glu Lys Lys Tyr Ser145 150 155 160Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser165 170 175Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys Arg Leu Arg Arg Lys Asp180 185<210>59<211>869<212>DNA<213>智人<220>
<221>多种性质<222>(1)..(869)<223>n＝a，c，g，或t<220>
<221>CDS<222>(77)..(646)<223>
<400>59tttgaagtcc gttgcgcana ttcaaagcgc tgattacccc tcatcaacca gcccagcagc 60atcttcggga ttccca atg gca ttg ccc ttt gct tta atg atg gcc ctg gtg 112Met Ala Leu Pro Phe Ala Leu Met Met Ala Leu Val1 5 10gtg ctc agc tgc aag tca agc tgc tct ctg ggc tgt aat ctg tct caa160Val Leu Ser Cys Lys Ser Ser Cys Ser Leu Gly Cys Asn Leu Ser Gln
15 20 25acc tac agc ctg aat aac agg agg act ttg atg ctc atg gca caa atg208Thr Tyr Ser Leu Asn Asn Arg Arg Thr Leu Met Leu Met Ala Gln Met30 35 40agg aga atc tct cct ttc tcc tgc ctg aag gac aga cat gac ttt gaa256Arg Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Glu45 50 55 60ttt ccc cag gag gaa ttt gat ggc aac cag ttc cag aaa gct caa gcc304Phe Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala65 70 75atc tct gtc ctc cat gag atg atg cag cag acc ttc aat ctc ttc agc352Ile Ser Val Leu His Glu Met Met Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser80 85 90aca aag aac tca tct gct gct tgg gat gag acc ctc cta gaa aaa ttc400Thr Lys Asn Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Glu Lys Phe95 100 105tac att gaa ctt ttc cag caa atg aat gac ctg gaa gcc tgt gtg ata448Tyr Ile Glu Leu Phe Gln Gln Met Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile110 115 120cag gag gtt ggg gtg gaa gag act ccc ctg atg aat gag gac tcc atc496Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile125 130 135 140ctg gct gtg aag aaa tac ttc caa aga atc act ctt tat ctg atg gag544Leu Ala Val Lys Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Met Glu145 150 155aag aaa tac agc cct tgt gcc tgg gag gtt gtc aga gca gaa atc atg592Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met160 165 170aga tcc ctc tct ttt tca aca aac ttg caa aaa aga tta agg agg aag640Arg Ser Leu Ser Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys Arg Leu Arg Arg Lys175 180 185gat tga aaactggttc atcatggaaa tgattcatcg atcgcgcgca gatctcctgt 696Asptcgaattccg gatgagctgc ataatctttc anggtaatgc gttggtncat acaaccttct 756tagtacatgc aaccattata ccgncagagg taaaatagtc aacacgcacn gnggtagata 816ttatcccttg cggggataga ttaacgtntg acncaaaaag aaccattacn can 869<210>60<211>189<212>PRT<213>智人<400>60
Met Ala Leu Pro Phe Ala Leu Met Met Ala Leu Val Val Leu Ser Cys1 5 10 15Lys Ser Ser Cys Ser Leu Gly Cys Asn Leu Ser Gln Thr Tyr Ser Leu20 25 30Agn Asn Arg Arg Thr Leu Met Leu Met Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser35 40 45Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Glu Phe Pro Gln Glu50 55 60Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu65 70 75 80His Glu Met Met Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asn Ser85 90 95Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Glu Lys Phe Tyr Ile Glu Leu100 105 110Phe Gln Gln Met Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly115 120 125Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Lys130 135 140Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Met Glu Lys Lys Tyr Ser145 150 155 160Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser165 170 175Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys Arg Leu Arg Arg Lys Asp180 185<210>61<211>679<212>DNA<213>智人<220>
<221>多种性质<222>(1)..(679)<223>n＝a，c，g，或t<220>
<221>CDS<222>(81)..(650)
<223>
<400>61nttgttttnt nnnnagngaa nctttttgcn caaatccaag cgctgatctc aagtagccta 60gcaatattgg caacatccca atg gcc ctg tcc ttt tct tta ctg atg gcc gtg 113Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met Ala Val1 5 10ctg gtg ctc agc tac aaa tcc atc tgt tct ctg ggc tgt gat ctg cct161Leu Val Leu Ser Tyr Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro15 20 25cag acc cac agc ctg ggt aat agg agg gcc ttg ata ctc ctg gca caa209Gln Thr His ger Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln30 35 40atg gga aga atc tct cct ttc tcc tgc ctg aag gac aga cat gac ttt257Met Gly Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe45 50 55gga ttc ccc caa gag gag ttt gat ggc aac cag ttc cag aag gct caa305Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Gln60 65 70 75gcc atc tct gtc ctc cat gag atg atc cag cag acc ttc aat ctc ttc353Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe80 85 90agc aca aag gac tca tct gct act tgg gaa cag agc ctc cta gaa aaa401Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Thr Trp Glu Gln Ser Leu Leu Glu Lys95 100 105ttt ccc act gaa ctt aac cag cag ctg aat gac ctg gaa gcc tgc gtg449Phe Pro Thr Glu Leu Asn Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val110 115 120ata cag gag gtt ggg gtg gaa gag act ccc ctg atg aat gtg gac tcc497Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Val Asp Ser125 130 135atc ctg gct gtg aag aaa tac ttc caa aga atc act ctt tat ctg aca545Ile Leu Ala Val Lys Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr140 145 150 155gag aag aaa tac agc cct tgt gcc tgg gag gtt gtc aga gca gaa atc593Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile160 165 170atg aga tcc ttc tct tta tca aaa att ttt caa gaa aga tta agg agg641Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Lys Ile Phe Gln Glu Arg Leu Arg Arg175 180 185aag gaa tga aacctgtttc aacatggaaa tgatctgta679Lys Glu<210>62
<211>189<212>PRT<213>智人<400>62Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met Ala Val Leu Val Leu Ser Tyr1 5 10 15Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu20 25 30Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg Ile Ser35 40 45Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu50 55 60Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu65 70 75 80His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser85 90 95Ser Ala Thr Trp Glu Gln Ser Leu Leu Glu Lys Phe Pro Thr Glu Leu100 105 110Asn Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly115 120 125Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Val Asp Ser Ile Leu Ala Val Lys130 135 140Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser145 150 155 160Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser165 170 175Leu Ser Lys Ile Phe Gln Glu Arg Leu Arg Arg Lys Glu180 185<210>63<211>735<212>DNA<213>智人<220>
<221>CDS<222>(67)..(636)<223>
<400>63tatagctagc atgcgcaaat ttaaagcgct gatctcaagt agcctagcaa tattggcaac 60atccca atg gcc ctg tcc ttt tct tta ctg atg gcc gtg ctg gtg ctc 108Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met Ala Val Leu Val Leu1 5 10agc tac aaa tcc atc tgt tct ctg ggc tgt gat ctg cct cag acc cac156Ser Tyr Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His15 20 25 30agc ctg ggt aat agg agg gcc ttg ata ctc ctg gca caa atg gga aga204Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg35 40 45atc tct cct ttc tcc tgc ctg aag gac aga cat gac ttt gga ttc ccc252Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro50 55 60cag gag gag ttt gat ggc aac cag ttc cag aag gct caa gcc atc tct300Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser65 70 75gtc ctc cat gag atg atc cag cag acc ttc aat ctc ttc agc aca aag348Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys80 85 90gac tca tct gct act tgg gaa cag agc ctc cta gaa aaa ttt tcc act396Asp Ser Ser Ala Thr Trp Glu Gln Ser Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr95 100 105 110gaa ctt aac cag cag ctg aat gac ctg gaa gcc tgc gtg ata cag gag444Glu Leu Asn Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu115 120 125gtt ggg gtg gaa gag act ccc ctg atg aat gtg gac tcc atc ctg gct492Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Val Asp Ser Ile Leu Ala130 135 140gtg aag aaa tac ttc caa aga atc act ctt tat ctg aca gag aag aaa540Val Lys Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys145 150 155tac agc cct tgt gcc tgg gag gtt gtc aga gca gaa atc atg aga tcc588Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser160 165 170tcc tct tta tca aaa att ttt caa gaa aga tta agg agg aag gaa tga636Ser Ser Leu Ser Lys Ile Phe Gln Glu Arg Leu Arg Arg Lys Glu175 180 185aacctgtttc aacatggaaa tgatctgtat tgcgtattag tcaatacaga tcatttccct 696cgccaatatt gctaggctac ttgagatcga tcgcgcgca 735
<210>64<211>189<212>PRT<213>智人<400>64Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met Ala Val Leu Val Leu Ser Tyr1 5 10 15Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu20 25 30Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg Ile Ser35 40 45Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu50 55 60Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu65 70 75 80His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser85 90 95Ser Ala Thr Trp Glu Gln Ser Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu100 105 110Asn Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly115 120 125Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Val Asp Ser Ile Leu Ala Val Lys130 135 140Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser145 150 155 160Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Ser Ser165 170 175Leu Ser Lys Ile Phe Gln Glu Arg Leu Arg Arg Lys Glu180 185<210>65<211>661<212>DNA<213>智人<220>
<221>多种性质<222>(1)..(661)<223>n＝a，c，g，或t<220>
<221>CDS<222>(56)..(625)<223>
<400>65ntanctagca tgcgcaaatt taaagcgctg atcagcagca tccacaacat ctaca atg58Met1gcc ttg act ttt tat tta ctg gtg gcc cta gtg gtg ctc agc tac aag106Ala Leu Thr Phe Tyr Leu Leu Val Ala Leu Val Val Leu Ser Tyr Lys5 10 15tca ttc agc tct ctg ggc tgt gat ctg cct cag act cac agc ctg ggt154Ser Phe Ser Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly20 25 30aac agg agg gcc ttg ata ctc ctg gca caa atg cga aga atc tct cct202Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser Pro35 40 45ttc tcc tgc ctg aag gac aga cat gac ttt gaa ttc ccc cag gag gag250Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Glu Phe Pro Gln Glu Glu50 55 60 65ttt gat gat aaa cag ttc cag aag gct caa gcc atc tct gtc ctc cat298Phe Asp Asp Lys Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His70 75 80gag atg atc cag cgg acc ttc aac ctc ttc agc aca aag gac tca tct346Glu Met Ile Gln Arg Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser85 90 95gct gct ttg gat gag acc ctt cta gat gaa ttc tac atc gaa ctt gac394Ala Ala Leu Asp Glu Thr Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Ile Glu Leu Asp100 105 110cag cag ctg aat gac ctg gag tcc tgt gtg gtg cag gaa gtg ggg gtg442Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ser Cys Val Val Gln Glu Val Gly Val115 120 125ata gag tct ccc ctg atg tac gag gac tcc atc ctg gct gtg agg aaa490Ile Glu Ser Pro Leu Met Tyr Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys130 135 140 145tac ttc caa aga atc act cta tat ctg aca gag aag aaa tac agc tct538Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Ser150 155 160tgt gcc tgg gag gtt gtc aga gca gaa atc atg aga tcc ttc tct tta586Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu165 170 175tca atc aac ttg caa aaa aga ttg aag agt aag gaa tga gacctggtac 635Ser Ile Asn Leu Gln Lys Arg Leu Lys Ser Lys Glu180 185
aacacggaaa tgatcgatcg cgcgca 661<210>66<211>189<212>PRT<213>智人<400>66Met Ala Leu Thr Phe Tyr Leu Leu Val Ala Leu Val Val Leu Ser Tyr1 5 10 15Lys Ser Phe Ser Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu20 25 30Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser35 40 45Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Glu Phe Pro Gln Glu50 55 60Glu Phe Asp Asp Lys Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu65 70 75 80His Glu Met Ile Gln Arg Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser85 90 95Ser Ala Ala Leu Asp Glu Thr Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Ile Glu Leu100 105 110Asp Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ser Cys Val Val Gln Glu Val Gly115 120 125Val Ile Glu Ser Pro Leu Met Tyr Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg130 135 140LyS Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser1451 50 155 160Ser Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser165 170 175Leu Ser Ile Asn Leu Gln Lys Arg Leu Lys Ser Lys Glu180 185<210>67<211>661
<212>DNA<213>智人<220>
<221>CDS<222>(38)..(607)<223>
<400>67tgcgcgcgat cgatcagcag catccacaac atctaca atg gcc ttg act ttt tat55Met Ala Leu Thr Phe Tyr1 5tta ctg gtg gcc cta gtg gtg ctc agc tac aag tca ttc agc tct ctg103Leu Leu Val Ala Leu Val Val Leu Ser Tyr Lys Ser Phe Ser Ser Leu10 15 20ggc tgt gat ctg cct cag act cac agc ctg ggt aac agg agg gcc ttg151Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu25 30 35ata ctc ctg gca caa atg cga aga atc tct cct ttc tcc tgc ctg aag199Ile Leu Leu Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys40 45 50gac agc cat gac ttt gaa ttc ccc cag gag gag ttt gat gat aaa cag247Asp Ser His Asp Phe Glu Phe Pro Gln Glu Glu Phe Asp Asp Lys Gln55 60 65 70ttc cag aag gct caa gcc atc tct gtc ctc cat gag atg atc cag cag295Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln75 80 85acc ttc aac ctc ttc agc aca aag gac tca tct gct gct ttg gat gag343Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Leu Asp Glu90 95 100acc ctt cta gat gaa ttc tac atc gaa ctt gac cag cag ctg aat gac391Thr Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Ile Glu Leu Asp Gln Gln Leu Asn Asp105 110 115ctg gag tcc tgt gtg atg cag gaa gtg ggg gtg ata gag tct ccc ctg439Leu Glu Ser Cys Val Met Gln Glu Val Gly Val Ile Glu Ser Pro Leu120 125 130atg tac gag gac tcc atc ctg gct gtg agg aaa tac ttc caa aga atc487Met Tyr Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile135 140 145 150act cta tat ctg aca gag aag aaa tac agc tct tgt gcc tgg gag gtt535Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Ser Cys Ala Trp Glu Val155 160 165gtc aga gca gaa atc atg aga tcc ttc tct tta tca atc aac ttg caa583Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Ile Asn Leu Gln170 175 180aaa aga ttg aag agt aag gaa tga gacctggtac aacacggaaa tgatcagcgc 637Lys Arg Leu Lys Ser Lys Glu185
tttaaatttg cgcatgctag ctat 661<210>68<211>189<212>PRT<213>智人<400>68Met Ala Leu Thr Phe Tyr Leu Leu Val Ala Leu Val Val Leu Ser Tyr1 5 10 15Lys Ser Phe Ser Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu20 25 30Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser35 40 45Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Ser His Asp Phe Glu Phe Pro Gln Glu50 55 60Glu Phe Asp Asp Lys Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu65 70 75 80His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser85 90 95Ser Ala Ala Leu Asp Glu Thr Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Ile Glu Leu100 105 110Asp Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ser Cys Val Met Gln Glu Val Gly115 120 125Val Ile Glu Ser Pro Leu Met Tyr Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg130 135 140Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser145 150 155 160Ser Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser165 170 175Leu Ser Ile Asn Leu Gln Lys Arg Leu Lys Ser Lys Glu180 185<210>69<211>570
<212>DNA<213>智人<220>
<221>CDS<222>(1)..(570)<223>
<400>69atg gcc ttg tcc ttt tct tta ctg atg gtc gtg ctg gta ctc agc tac 48Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met Val Val Leu Val Leu Ser Tyr1 5 10 15aaa tcc atc tgc tct ctg ggc tgt gat ctg cct cag acc cac agc ctg 96Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu20 25 30cgt aat agg agg gcc ttg ata ctc ctg gca caa atg gga aga atc tct144Arg Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg Ile Ser35 40 45cct ttc tcc tgc ttg aag gac aga cat gaa ttc aga ttc cca gag gag192Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Glu Phe Arg Phe Pro Glu Glu50 55 60gag ttt gat ggc cac cag ttc cag aag act caa gcc atc tct gtc ctc240Glu Phe Asp Gly His Gln Phe Gln Lys Thr Gln Ala Ile Ser Val Leu65 70 75 80cat gag atg atc cag cag acc ttc aat ctc ttc agc aca gag gac tca288His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Glu Asp Ser85 90 95tct gct gct tgg gaa cag agc ctc cta gaa aaa ttt tcc act gaa ctt336Ser Ala Ala Trp Glu Gln Ser Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu100 105 110tac cag caa ctg aat gac ctg gaa gca tgt gtg ata cag gag gtt ggg384Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly115 120 125gtg gaa gag act ccc ctg atg aat gag gac tcc atc ctg gct gtg agg432Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg130 135 140aaa tac ttc caa aga atc act ctt tat cta aca gag aag aaa tac agc480Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser145 150 155 160cct tgt gcc tgg gag gtt gtc aga gca gaa atc atg aga tcc ctc tcg528Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser165 170 175ttt tca aca aac ttg caa aaa aga tta agg agg aag gat tga570Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys Arg Leu Arg Arg Lys Asp180 185<210>70<211>189<212>PRT
<213>智人<400>70Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met Val Val Leu Val Leu Ser Tyr1 5 10 15Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu20 25 30Arg Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg Ile Ser35 40 45Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Glu Phe Arg Phe Pro Glu Glu50 55 60Glu Phe Asp Gly His Gln Phe Gln Lys Thr Gln Ala Ile Ser Val Leu65 70 75 80His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Glu Asp Ser85 90 95Ser Ala Ala Trp Glu Gln Ser Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu100 105 110Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly115 120 125Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg130 135 140Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser145 150 155 160Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser165 170 175Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys Arg Leu Arg Arg Lys Asp180 185<210>71<211>679<212>DNA<213>智人<220>
<221>多种性质<222>(1)..(679)
<223>n＝a ，c，g，或t<220>
<221>CDS<222>(81)..(650)<223>
<400>71nttgttttnt nnnnagngaa nctttttgcn caaatccaag cgctgatctc aagtagccta 60gcaatattgg caacatccca atg gcc ctg tcc ttt tct tta ctg atg gcc gtg 113Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met Ala Val1 5 10ctg gtg ctc agc tac aaa tcc atc tgt tct ctg ggc tgt gat ctg cct161Leu Val Leu Ser Tyr Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro15 20 25cag acc cac agc ctg ggt aat agg agg gcc ttg ata ctc ctg gca caa209Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln30 35 40atg gga aga atc tct cct ttc tcc tgc ctg aag gac aga cat gac ttt257Met Gly Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe45 50 55gga ttc ccc caa gag gag ttt gat ggc aac cag ttc cag aag gct caa305Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Gln60 65 70 75gcc atc tct gtc ctc cat gag atg atc cag cag acc ttc aat ctc ttc353Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe80 85 90agc aca aag gac tca tct gct act tgg gaa cag agc ctc cta gaa aaa401Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Thr Trp Glu Gln Ser Leu Leu Glu Lys95 100 105ttt ccc act gaa ctt aac cag cag ctg aat gac ctg gaa gcc tgc gtg449Phe Pro Thr Glu Leu Asn Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val110 115 120ata cag gag gtt ggg gtg gaa gag act ccc ctg atg aat gtg gac tcc497Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Val Asp Ser125 130 135atc ctg gct gtg aag aaa tac ttc caa aga atc act ctt tat ctg aca545Ile Leu Ala Val Lys Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr140 145 150 155gag aag aaa tac agc cct tgt gcc tgg gag gtt gtc aga gca gaa atc593Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile160 165 170atg aga tcc ttc tct tta tca aaa att ttt caa gaa aga tta agg agg641Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Lys Ile Phe Gln Glu Arg Leu Arg Arg175 180 185aag gaa tga aacctgttte aacatggaaa tgatctgta679Lys Glu
<210>72<211>189<212>PRT<213>智人<400>72Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met Ala Val Leu Val Leu Ser Tyr1 5 10 15Lys Ser Ile Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu20 25 30Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg Ile Ser35 40 45Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu50 55 60Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu65 70 75 80His Glu Met Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser85 90 95ser Ala Thr Trp Glu Gln Ser Leu Leu Glu Lys Phe Pro Thr Glu Leu100 105 110Asn Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly115 120 125Val Glu Glu Thr Pro Leu Met Asn Val Asp Ser Ile Leu Ala Val Lys130 135 140Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser145 150 155 160Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser165 170 175Leu Ser Lys Ile Phe Gln Glu Arg Leu Arg Arg Lys Glu180 185<210>73<211>523<212>DMA
<213>智人<220>
<221>CDS<222>(14)..(514)<223>
<400>73agatcttctg atg tgc gac ctg ccg cag acc cac tcc ctg cgt aac cgt 49Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Arg Asn Arg1 5 10cgt gct ctg atc ctg ctg gct cag atg ggt cgt atc tcc ccg ttc tcc 97Arg Ala Leu Ile Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg Ile Ser Pro Phe Ser15 20 25tgc ctg aaa gac cgt cac gaa ttc cgt ttc ccg gaa gaa gaa ttc gat145Cys Leu Lys Asp Arg His Glu Phe Arg Phe Pro Glu Glu Glu Phe Asp30 35 40ggc cac cag ttc cag aaa acc cag gct atc tcc gtt ctg cac gaa atg193Gly His Gln Phe Gln Lys Thr Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met45 50 55 60atc cag cag acc ttc aac ctg ttc tcc acc gaa gac tcc tcc gcg gct241Ile Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Glu Asp Ser Ser Ala Ala65 70 75tgg gaa cag tcc ctg ctg gaa aaa ttc tcc acc gaa ctg tac cag cag289Trp Glu Gln Ser Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu Tyr Gln Gln80 85 90ctg aac gac ctg gaa gct tgc gtt atc cag gaa gtt ggt gtt gaa gaa337Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu95 100 105acc ccg ctg atg aac gaa gac tcc atc ctg gct gtt cgt aaa tac ttc385Thr Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe110 115 120cag cgt atc acc ctg tac ctg acc gaa aaa aaa tac tcc ccg tgc gca433Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala125 130 135 140tgg gaa gtt gtt cgt gct gaa atc atg cgt tcc ctg tcc ttc tcc acc481Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser Phe Ser Thr145 150 155aac ctg cag aaa cgt ctg cgt cgt aaa gac tga tgatctaga 523Asn Leu Gln Lys Arg Leu Arg Arg Lys Asp160 165<210>74<211>166<212>PRT<213>智人<400>74
Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Arg Asn Arg Arg Ala Leu Ile1 5 10 15Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp20 25 30Arg His Glu Phe Arg Phe Pro Glu Glu Glu Phe Asp Gly His Gln Phe35 40 45Gln Lys Thr Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Thr50 55 60Phe Asn Leu Phe Ser Thr Glu Asp Ser Ser Ala Ala Trp Glu Gln Ser65 70 75 80Leu Leu Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu85 90 95Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met100 105 110Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr115 120 125Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val130 135 140Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys145 150 155 160Arg Leu Arg Arg Lys Asp165<210>75<211>523<212>DNA<213>智人<220>
<221>CDS<222>(14)..(514)<223>
<400>75agatcttctg atg tgc aac ctg tcc cag acc tac tcc ctg aac aac cgt 49Cys Asn Leu Ser Gln Thr Tyr Ser Leu Asn Asn Arg1 5 10cgt acc ctg atg ctg atg gct cag atg cgt cgt atc tcc ccg ttc tcc 97
Arg Thr Leu Met Leu Met Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser Pro Phe Ser15 20 25tgc ctg aaa gac cgt cac gac ttc gaa ttc ccg cag gaa gaa ttc gac145Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Glu Phe Pro Gln Glu Glu Phe Asp30 35 40ggt aac cag ttc cag aaa gct cag gct atc tcc gtt ctg cac gaa atg193Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met45 50 55 60atg cag cag acc ttc aac ctg ttc tcc acc aaa aac tcc tct gca gct241Met Gln Gln Thr Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asn Ser Ser Ala Ala65 70 75tgg gac gaa acc ctg ctg gaa aaa ttc tac atc gaa ctg ttc cag cag289Trp Asp Glu Thr Leu Leu Glu Lys Phe Tyr Ile Glu Leu Phe Gln Gln80 85 90atg aac gac ctg gaa gct tgc gtt atc cag gaa gtt ggt gtt gaa gaa337Met Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu95 100 105acc ccg ctg atg aac gaa gac tcc atc ctg gct gtt aaa aaa tac ttc385Thr Pro Leu Met Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Lys Lys Tyr Phe110 115 120cag cgt atc acc ctg tac ctg atg gaa aaa aaa tac tcc ccg tgc gca433Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Met Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala125 130 135 140tgg gaa gtt gtt cgt gct gaa atc atg cgt tcc ctg tcc ttc tcc acc48lTrp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser Phe Ser Thr145 150 155aac ctg cag aaa cgt ctg cgt cgt aaa gac tga tgatctaga 523Asn Leu Gln Lys Arg Leu Arg Arg Lys Asp160 165<210>76<211>166<212>PRT<213>智人<400>76Cys Asn Leu Ser Gln Thr Tyr Ser Leu Asn Asn Arg Arg Thr Leu Met1 5 10 15Leu Met Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp20 25 30Arg His Asp Phe Glu Phe Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe35 40 45Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Met Gln Gln Thr50 55 60
Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asn Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr65 70 75 80Leu Leu Glu Lys Phe Tyr Ile Glu Leu Phe Gln Gln Met Asn Asp Leu85 90 95Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met100 105 110Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Lys Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr115 120 125Leu Tyr Leu Met Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val130 135 140Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys145 150 155 160Arg Leu Arg Arg Lys Asp165<210>77<211>501<212>DNA<213>智人<220>
<221>CDS<222>(1)..(501)<223>
<400>77tgt gat ctg cct cag acc cac agc ctg cgt aat agg agg gcc ttg ata 48Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Arg Asn Arg Arg Ala Leu Ile1 5 10 15ctc ctg gca caa atg gga aga atc tct cct ttc tcc tgc ttg aag gac 96Leu Leu Ala Gln Met Gly Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp20 25 30aga cat gaa ttc aga ttc cca gag gag gag ttt gat ggc aac cag ttc144Arg His Glu Phe Arg Phe Pro Glu Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe35 40 45cag aag act caa gcc atc tct gtc ctc cat gag atg atc cag cag acc192Gln Lys Thr Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Thr50 55 60ttc aat ctc ttc agc aca gag gac tca tct gct gct tgg gaa cag agc240Phe Asn Leu Phe Ser Thr Glu Asp Ser Ser Ala Ala Trp Glu Gln Ser65 70 75 80
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<210>81<211>501<212>DNA<213>智人<220>
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Tyr Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr115 120 125Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Ser Cys Ala Trp Glu Val Val130 135 140Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser Ile Asn Leu Gln Lys145 150 155 160Arg Leu Lys Ser Lys Glu16权利要求
1.一种治疗病毒感染的受试者或减少该受试者病毒感染风险的方法，包括给予受试者干扰素多肽从而治疗了病毒感染的受试者或减少了受试者病毒感染的风险，所述多肽包含与SEQ ID NO2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84或86之一具有至少95％同一性的氨基酸序列，且不是天然存在的干扰素等位基因，其中病毒选自严重急性呼吸综合征相关的冠状病毒、流感病毒、冠状病毒、天花病毒、牛痘病毒、西尼罗河病毒、痘苗病毒、呼吸道合胞体病毒、鼻病毒、动脉炎病毒、线状病毒、微小核糖核酸病毒、呼肠孤病毒、逆转录病毒、乳多空病毒、疱疹病毒、痘病毒、肝脱氧核糖核酸病毒、星状病毒、柯萨奇病毒、副粘病毒、正粘病毒、埃可病毒、肠道病毒、心病毒、披膜病毒、棒状病毒、布尼亚病毒、沙粒病毒、博尔纳病毒、腺病毒、细小病毒和黄热病病毒。
2.权利要求1的方法，其中干扰素多肽包含选自SEQ ID NO2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84和86的氨基酸序列。
3.权利要求1的方法，其中干扰素多肽为核酸所编码，该核酸包含选自SEQ ID NO1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83和85的核苷酸序列。
4.权利要求1的方法，其中干扰素多肽为核酸所编码，该核酸在高严格条件下与包含选自SEQ ID NO1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83和85的序列的核酸杂交。
5.权利要求1的方法，其中干扰素多肽为核酸所编码，该核酸在高严格条件下与和选自SEQ ID NO1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83和85的序列互补的核酸杂交。
6.权利要求1或2的方法，其中受试者是人类、非人灵长类动物、猫科动物、犬科动物或农畜。
7.权利要求1或2的方法，其中干扰素经鼻，经口，肠胃外，局部，经直肠，通过注射，吸入，洗眼剂，软膏剂，栓剂，控制释放膜片、输注或吸入给予。
8.权利要求1或2的方法，其中干扰素被给予至受试者的鼻咽粘膜或肺上皮。
9.权利要求1或2的方法，其中给予的干扰素多肽的量是能有效减少受试者中病毒颗粒浓度从而治疗受试者的量。
10.权利要求1或2的方法，其中给予的干扰素多肽的量是能有效阻止或减少受试者中病毒颗粒浓度增加从而预防性地治疗受试者的量。
11.一种药物包装，包括干扰素组合物和用于将组合物给予受试者的用法说明书，其中(i)该用法说明书是用于治疗病毒感染受试者或减少受试者病毒感染风险的，其中所述病毒选自严重急性呼吸综合征相关的冠状病毒、流感病毒、冠状病毒、天花病毒、牛痘病毒、西尼罗河病毒、痘苗病毒、呼吸道合胞体病毒、鼻病毒、动脉炎病毒、线状病毒、微小核糖核酸病毒、呼肠孤病毒、逆转录病毒、乳多空病毒、疱疹病毒、痘病毒、肝脱氧核糖核酸病毒、星状病毒、柯萨奇病毒、副粘病毒、正粘病毒、埃可病毒、肠道病毒、心病毒、披膜病毒、棒状病毒、布尼亚病毒、沙粒病毒、博尔纳病毒、腺病毒、细小病毒和黄热病病毒，和(ii)所述干扰素多肽包含与SEQ ID NO2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84或86之一具有至少95％同一性的氨基酸序列。
12.权利要求11的药物包装，其中干扰素组合物包含选自SEQ IDNO2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84或86的干扰素。
全文摘要
该发明提供了一种治疗患严重急性呼吸综合征(SARS)患者的方法，包括给予该患者能有效减少患者中SARS相关的冠状病毒颗粒浓度的量的干扰素多肽，从而治疗该患者。该发明也提供了治疗感染某些病毒的患者的方法和降低患者病毒感染风险的方法，包括给予该患者干扰素多肽。该发明进一步提供了一种治疗流感患者或降低患者流感病毒感染风险的方法，包括给予该患者干扰素多肽。
文档编号A61P31/22GK1832755SQ200480021166
公开日2006年9月13日 申请日期2004年5月21日 优先权日2003年5月23日
发明者S·佩斯特卡, T·B·拉瓦, W·A·克拉克 申请人:佩斯特卡生物医疗实验室公司