专利名称：抗癌活性成分丹皮酚衍生物的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种抗癌药物，尤其是涉及一种抗癌活性成分丹皮酚衍生物的制备方法。
背景技术：
癌症，已成为现代社会人类面临的主要杀手之一，由于环境污染、不良生活习惯以及各种压力导致了人类不得不与各种癌症作不懈的斗争。但迄今为止，人类使用的抗癌药物还不尽如人意，其治疗效果仍达不到人们的满意。据文献报道，目前公认的抗癌活性较强的药物紫杉醇对胃癌细胞株SGC-7901细胞有明显的抑制作用，且随培养基中紫杉醇浓度增加和培养时间的延长，抑制作用逐渐增强，紫杉醇对SCG-7901细胞的生长抑制率目前在34.7％--63.0％。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能更有效的抑制癌细胞的抗癌活性成分丹皮酚衍生物的制备方法。
为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案本发明所述的抗癌活性成分丹皮酚衍生物的制备方法，是由原料丹皮酚200-400g，分子式为C9H10O3；对氨基苯胂酸500g，分子式为C6H8O3NAS；按照下述步骤制备而成第一步、称取对氨基苯胂酸500g，溶于5-50L浓度为0.5-2Mol/L的盐酸溶液中，在0-5℃缓缓加入20-1000ml浓度为10-45％，W/V的亚硝酸钠溶液，在0-5℃时搅拌10分钟-3小时，滤过，沉淀物依次用稀盐酸和水洗涤，备用；第二步、称取丹皮酚200-400g和第一步制得的沉淀物溶于4-20L浓度为2-10％，W/V的氢氧化钠溶液中，于0-5℃搅拌；调节pH值至8-14，在0-5℃搅拌0.5-6小时，加稀盐酸调节pH值至1-3，0-5℃放置0.5-6小时；第三步、将第二步所得物滤过，用稀盐酸、水依次洗涤沉淀物后，分取沉淀物，加浓度为2-10％的氢氧化钠溶液溶解，滤过，在滤液中滴加稀盐酸调节pH值至1-3，于0-5℃放置0.5-6小时，滤过，所得沉淀物在50-100℃条件下干燥，重结晶，得合成物丹皮酚重氮胂酸盐，即2-甲氧基-4-羟基-5-乙酰基偶氮苯’-胂酸，分子式为C15H15O6N2As。
本发明所述的制备方法，可按照下述步骤制备而成
第一步、称取对氨基苯胂酸500g，溶于5L浓度为0.5Mol/L的盐酸溶液中，在0℃缓缓加入20ml浓度为10％，W/V的亚硝酸钠溶液，在0℃时搅拌3小时，滤过，沉淀物依次用稀盐酸和水洗涤，备用；第二步、称取丹皮酚200g和第一步制得的沉淀物溶于4L浓度为2％，W/V的氢氧化钠溶液中，于0℃搅拌；调节pH值至8，在0℃搅拌6小时，加稀盐酸调节pH值至1，0℃放置6小时；第三步、将第二步所得物滤过，用稀盐酸、水依次洗涤沉淀物后，分取沉淀物，加浓度为2％的氢氧化钠溶液溶解，滤过，在滤液中滴加稀盐酸调节pH值至1，于0℃放置6小时，滤过，所得沉淀物在50℃条件下干燥，重结晶，得合成物丹皮酚重氮胂酸盐，即2-甲氧基-4-羟基-5-乙酰基偶氮苯’-胂酸，分子式为C15H15O6N2As。
本发明所述的制备方法，也可按照下述步骤制备而成第一步、称取对氨基苯胂酸500g，溶于30L浓度为1.2Mol/L的盐酸溶液中，在3℃缓缓加入500ml浓度为30％，W/V的亚硝酸钠溶液，在3℃时搅拌1小时，滤过，沉淀物依次用稀盐酸和水洗涤，备用；第二步、称取丹皮酚300g和第一步制得的沉淀物溶于12L浓度为6％，W/V的氢氧化钠溶液中，于3℃搅拌；调节pH值至11，在3℃搅拌2小时，加稀盐酸调节pH值至2，3℃放置1小时；第三步、将第二步所得物滤过，用稀盐酸、水依次洗涤沉淀物后，分取沉淀物，加浓度为6％的氢氧化钠溶液溶解，滤过，在滤液中滴加稀盐酸调节pH值至2，于3℃放置3小时，滤过，所得沉淀物在70℃条件下干燥，重结晶，得合成物丹皮酚重氮胂酸盐，即2-甲氧基-4-羟基-5-乙酰基偶氮苯’-胂酸，分子式为C15H15O6N2As。
本发明所述的制备方法，还可按照下述步骤制备而成第一步、称取对氨基苯胂酸500g，溶于50L浓度为2Mol/L的盐酸溶液中，在5℃缓缓加入1000ml浓度为45％，W/V的亚硝酸钠溶液，在5℃时搅拌10分钟，滤过，沉淀物依次用稀盐酸和水洗涤，备用；第二步、称取丹皮酚400g和第一步制得的沉淀物溶于20L浓度为10％，W/V的氢氧化钠溶液中，于5℃搅拌；调节pH值至14，在5℃搅拌0.5小时，加稀盐酸调节pH值至3，5℃放置0.5小时；第三步、将第二步所得物滤过，用稀盐酸、水依次洗涤沉淀物后，分取沉淀物，加浓度为10％的氢氧化钠溶液溶解，滤过，在滤液中滴加稀盐酸调节pH值至3，于5℃放置0.5小时，滤过，所得沉淀物在100℃条件下干燥，重结晶，得合成物丹皮酚重氮胂酸盐，即2-甲氧基-4-羟基-5-乙酰基偶氮苯’-胂酸，分子式为C15H15O6N2As。
本发明的优点在于按照该方法制备的合成物丹皮酚重氮胂酸盐，通过药理实验结果表明，合成物丹皮酚重氮胂酸盐(2-甲痒基-4-羟基-5-乙酰基偶氮苯-4’-胂酸C15H15O6N2AS)可抑制人大肠癌细胞株HT-29、人肝癌细胞株HepG2和人胃癌细胞株BGC-823的细胞生长，且抑制作用与药物浓度及作用时间呈正相依赖关系，最高抑制率达92％；而且丹皮酚重氮胂酸盐的作用明显强于丹皮酚和对氨基苯胂酸的单独作用。且其抗癌作用和给药浓度相关，大剂量给药可诱使胃癌细胞凋亡，其凋亡率最高可达30％；而同时进行实验的合成原料丹皮酚和对氨基苯胂酸对人胃癌细胞株的生长抑制率最高分别为65％和78％。使得制备的丹皮酚重氮胂酸盐衍生物在抗癌活性上有了很大的提高。
图1为本发明所述合成物丹皮酚重氮胂酸盐的分子式结构图。
具体实施例方式
实施例1本发明所述的制备方法，是按照下述步骤制备而成第一步、称取对氨基苯胂酸500g，溶于5L浓度为0.5Mol/L的盐酸溶液中，在0℃缓缓加入20ml浓度为10％，W/V的亚硝酸钠溶液，在0℃时搅拌3小时，滤过，沉淀物依次用稀盐酸和水洗涤，备用；第二步、称取丹皮酚200g和第一步制得的沉淀物溶于4L浓度为2％，W/V的氢氧化钠溶液中，于0℃搅拌；调节pH值至8，在0℃搅拌6小时，加稀盐酸调节pH值至1，0℃放置6小时；第三步、将第二步所得物滤过，用稀盐酸、水依次洗涤沉淀物后，分取沉淀物，加浓度为2％的氢氧化钠溶液溶解，滤过，在滤液中滴加稀盐酸调节pH值至1，于0℃放置6小时，滤过，所得沉淀物在50℃条件下干燥，重结晶，得合成物丹皮酚重氮胂酸盐，即2-甲氧基-4-羟基-5-乙酰基偶氮苯’-胂酸，分子式为C15H15O6N2As。
实施例2本发明所述的制备方法，是按照下述步骤制备而成
第一步、称取对氨基苯胂酸500g，溶于30L浓度为1.2Mol/L的盐酸溶液中，在3℃缓缓加入500ml浓度为30％，W/V的亚硝酸钠溶液，在3℃时搅拌1小时，滤过，沉淀物依次用稀盐酸和水洗涤，备用；第二步、称取丹皮酚300g和第一步制得的沉淀物溶于12L浓度为6％，W/V的氢氧化钠溶液中，于3℃搅拌；调节pH值至11，在3℃搅拌2小时，加稀盐酸调节pH值至2，3℃放置1小时；第三步、将第二步所得物滤过，用稀盐酸、水依次洗涤沉淀物后，分取沉淀物，加浓度为6％的氢氧化钠溶液溶解，滤过，在滤液中滴加稀盐酸调节pH值至2，于3℃放置3小时，滤过，所得沉淀物在70℃条件下干燥，重结晶，得合成物丹皮酚重氮胂酸盐，即2-甲氧基-4-羟基-5-乙酰基偶氮苯’-胂酸，分子式为C15H15O6N2As。
实施例3本发明所述的制备方法，是按照下述步骤制备而成第一步、称取对氨基苯胂酸500g，溶于50L浓度为2Mol/L的盐酸溶液中，在5℃缓缓加入1000ml浓度为45％，W/V的亚硝酸钠溶液，在5℃时搅拌10分钟，滤过，沉淀物依次用稀盐酸和水洗涤，备用；第二步、称取丹皮酚400g和第一步制得的沉淀物溶于20L浓度为10％，W/V的氢氧化钠溶液中，于5℃搅拌；调节pH值至14，在5℃搅拌0.5小时，加稀盐酸调节pH值至3，5℃放置0.5小时；第三步、将第二步所得物滤过，用稀盐酸、水依次洗涤沉淀物后，分取沉淀物，加浓度为10％的氢氧化钠溶液溶解，滤过，在滤液中滴加稀盐酸调节pH值至3，于5℃放置0.5小时，滤过，所得沉淀物在100℃条件下干燥，重结晶，得合成物丹皮酚重氮胂酸盐，即2-甲氧基-4-羟基-5-乙酰基偶氮苯’-胂酸，分子式为C15H15O6N2As。
权利要求
1.一种抗癌活性成分丹皮酚衍生物的制备方法，其特征在于它是由原料丹皮酚200-400g，分子式为C9H10O3；对氨基苯胂酸500g，分子式为C6H8O3NAs；按照下述步骤制备而成第一步、称取对氨基苯胂酸500g，溶于5-50L浓度为0.5-2Mol/L的盐酸溶液中，在0-5℃缓缓加入20-1000ml浓度为10-45％，W/V的亚硝酸钠溶液，在0-5℃时搅拌10分钟-3小时，滤过，沉淀物依次用稀盐酸和水洗涤，备用；第二步、称取丹皮酚200-400g和第一步制得的沉淀物溶于4-20L浓度为2-10％，W/V的氢氧化钠溶液中，于0-5℃搅拌；调节pH值至8-14，在0-5℃搅拌0.5-6小时，加稀盐酸调节pH值至1-3，0-5℃放置0.5-6小时；第三步、将第二步所得物滤过，用稀盐酸、水依次洗涤沉淀物后，分取沉淀物，加浓度为2-10％的氢氧化钠溶液溶解，滤过，在滤液中滴加稀盐酸调节pH值至1-3，于0-5℃放置0.5-6小时，滤过，所得沉淀物在50-100℃条件下干燥，重结晶，得合成物丹皮酚重氮胂酸盐，即2-甲氧基-4-羟基-5-乙酰基偶氮苯’-胂酸，分子式为C15H15O6N2As。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是按照下述步骤制备而成第一步、称取对氨基苯胂酸500g，溶于5L浓度为0.5Mol/L的盐酸溶液中，在0℃缓缓加入20ml浓度为10％，W/V的亚硝酸钠溶液，在0℃时搅拌3小时，滤过，沉淀物依次用稀盐酸和水洗涤，备用；第二步、称取丹皮酚200g和第一步制得的沉淀物溶于4L浓度为2％，W/V的氢氧化钠溶液中，于0℃搅拌；调节pH值至8，在0℃搅拌6小时，加稀盐酸调节pH值至1，0℃放置6小时；第三步、将第二步所得物滤过，用稀盐酸、水依次洗涤沉淀物后，分取沉淀物，加浓度为2％的氢氧化钠溶液溶解，滤过，在滤液中滴加稀盐酸调节pH值至1，于0℃放置6小时，滤过，所得沉淀物在50℃条件下干燥，重结晶，得合成物丹皮酚重氮胂酸盐，即2-甲氧基-4-羟基-5-乙酰基偶氮苯’-胂酸，分子式为C15H15O6N2As。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是按照下述步骤制备而成第一步、称取对氨基苯胂酸500g，溶于30L浓度为1.2Mol/L的盐酸溶液中，在3℃缓缓加入500ml浓度为30％，W/V的亚硝酸钠溶液，在3℃时搅拌1小时，滤过，沉淀物依次用稀盐酸和水洗涤，备用；第二步、称取丹皮酚300g和第一步制得的沉淀物溶于12L浓度为6％，W/V的氢氧化钠溶液中，于3℃搅拌；调节pH值至11，在3℃搅拌2小时，加稀盐酸调节pH值至2，3℃放置1小时；第三步、将第二步所得物滤过，用稀盐酸、水依次洗涤沉淀物后，分取沉淀物，加浓度为6％的氢氧化钠溶液溶解，滤过，在滤液中滴加稀盐酸调节pH值至2，于3℃放置3小时，滤过，所得沉淀物在70℃条件下干燥，重结晶，得合成物丹皮酚重氮胂酸盐，即2-甲氧基-4-羟基-5-乙酰基偶氮苯’-胂酸，分子式为C15H15O6N2As。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是按照下述步骤制备而成第一步、称取对氨基苯胂酸500g，溶于50L浓度为2Mol/L的盐酸溶液中，在5℃缓缓加入1000ml浓度为45％，W/V的亚硝酸钠溶液，在5℃时搅拌10分钟，滤过，沉淀物依次用稀盐酸和水洗涤，备用；第二步、称取丹皮酚400g和第一步制得的沉淀物溶于20L浓度为10％，W/V的氢氧化钠溶液中，于5℃搅拌；调节pH值至14，在5℃搅拌0.5小时，加稀盐酸调节pH值至3，5℃放置0.5小时；第三步、将第二步所得物滤过，用稀盐酸、水依次洗涤沉淀物后，分取沉淀物，加浓度为10％的氢氧化钠溶液溶解，滤过，在滤液中滴加稀盐酸调节pH值至3，于5℃放置0.5小时，滤过，所得沉淀物在100℃条件下干燥，重结晶，得合成物丹皮酚重氮胂酸盐，即2-甲氧基-4-羟基-5-乙酰基偶氮苯’-胂酸，分子式为C15H15O6N2As。
全文摘要
本发明公开了一种抗癌活性成分丹皮酚衍生物的制备方法是按照下述步骤制备而成1.取对氨基苯胂酸500g溶于盐酸溶液中，在0－5℃缓缓加入亚硝酸钠溶液，在0－5℃时搅拌，滤过，所得沉淀物用稀盐酸、水依次洗涤，备用；2.取丹皮酚和第一步制得的沉淀物溶于氢氧化钠溶液中，于0－5℃搅拌；调节pH值至8－14，在0－5℃搅拌后，加稀盐酸调节pH值至1－3，0－5℃放置；3.将第二步所得物滤过，用稀盐酸、水依次洗涤沉淀物后，分取沉淀物，加氢氧化钠溶液溶解，滤过，在滤液中滴加稀盐酸调节pH值至1－3，于0－5℃放置，滤过，所得沉淀物干燥、重结晶得合成物丹皮酚重氮胂酸盐。本发明优点在于可抑制人大肠癌细胞株、人肝癌细胞株和人胃癌细胞株的细胞生长，最高抑制率达92％。
文档编号A61P35/00GK1772756SQ200510048489
公开日2006年5月17日 申请日期2005年11月3日 优先权日2005年11月3日
发明者张留记, 屠万倩, 侯惠鸣, 李向阳 申请人:河南省中医药研究院