专利名称：丹皮酚在制备皮肤美白及祛斑化妆品或皮肤美白及治疗色素沉着性疾病药物上的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种物质的新用途，具体涉及一种丹皮酚在制备皮肤美白及祛斑化妆品，或者在制备皮肤美白及治疗色素沉着性疾病的药物上的应用。
背景技术：
人体皮肤颜色主要由黑色素的显色决定，色素异常性疾病是一类常见的美容性皮肤病。目前治疗此类疾病的药物，如氢醌、熊果甙等，大多数是针对黑素合成过程的，在实际应用中起到一定的疗效，但总体效果不能令人满意，其原因可能是由于筛选这些药物的模型有缺陷。目前这方面的体外筛选模型主要包括细胞外蘑菇酪氨酸酶活性测定、细胞酪氨酸酶活性及黑素合成测定及整体动物模型。这些模型只能检测黑素合成过程，无法检测黑素沉着的其它环节，如黑素转运过程，同样无法模拟体内角质形成细胞对于黑素合成的影响过程；在药物筛选方面存在一定不足，有可能造成漏筛或假阳性结果出现。
黑色素在黑素细胞内的黑素小体中合成并以黑素小体为载体从黑素细胞转运到角质形成细胞内使皮肤显色。在表皮内，一个黑素细胞与大约36个角质形成细胞共同组成一个表皮黑素单位，黑素显色过程就是在许多个这样的表皮黑素单位中进行的，在表皮黑素单位中，角质形成细胞相对起主导作用；黑素显色过程涉及黑素合成、黑素运输及转运、黑素代谢多环节。每一环节对最终的黑素显色都起十分重要的作用。
为此，本申请的发明人在国内首次建立了角质形成细胞-黑素细胞共培养模型，并利用多种模型对一些化合物抗色素活性的筛选，结果发现，中药单体丹皮酚除可以明显地抑制酪氨酸酶活性，同时可明显地抑制黑素合成及黑素转运等多种黑素沉着的环节。用于皮肤美白和治疗皮肤色素沉着性疾病方面具有很大的市场前景。
丹皮酚目前用于治疗过敏性皮肤病，其在皮肤美白及治疗色素异常沉着性疾病方面未见报道。
发明内容
本发明将提供丹皮酚的一种新用途丹皮酚在制备皮肤美白及祛斑化妆品或在制备皮肤美白及治疗色素沉着性疾病的药物上的应用。无论从物质的组成还是从作用的机理方面讲，“制备皮肤美白及祛斑的化妆品”与“制备皮肤美白及治疗色素沉着性疾病的药物”均为同一个技术方案，是该方案在不同商品领域上的实现，所以技术实质为同一发明。
本发明的技术方案是丹皮酚在制备皮肤美白及祛斑化妆品或在制备皮肤美白及治疗色素沉着性疾病的药物上的应用，所制备化妆品或药物的基质载体中含有丹皮酚；外用。
以上所述的含有丹皮酚的化妆品或药物，可以是包括丹皮酚在内的两种或两种以上的美白皮肤、祛斑及治疗色素沉着性皮肤病的药物组成的复方；也可以是单方(这里的“单方”是指其中的丹皮酚是唯一的美白皮肤、祛斑及治疗色素沉着性皮肤病的药物，其他组分为敷料或者加有遮光剂或/和抗氧化剂)。均为外用，用于美白皮肤、祛斑及治疗色素沉着性皮肤病(如黄褐斑等)。
以上化妆品或药物中丹皮酚的质量浓度可以是0.1％～20％；本申请推荐的优化方案中丹皮酚的质量浓度为3％到10％。
以上所述的含有丹皮酚的化妆品或药物的剂型是指丹皮酚与基质载体混合形成酊剂或醑剂、或糊剂或软膏或乳膏剂或油剂或面膜或涂膜剂或凝胶剂或气雾剂或溶液剂(包括洗剂，搽剂)。
在上述剂型中可以加入的其他组分如遮光剂或/和抗氧化剂或/和其他(丹皮酚以外的)美白祛斑成分。
其中的抗氧化剂如维生素C或维生素E及其它们的衍生物或其他抗氧化剂，它们的用量采用现有技术中的常规用量(例如维生素E 0.1～2％，维生素E烟酸酯0.1～2％，或维生素C单磷酸酯镁1～8％)；其中的遮光剂如二氧化钛1～10％、肉桂酸酯类1～15％、氨基苯甲酸酯类1～8％、二苯甲酮类1～15％、褪黑激素1～5％或其他紫外线吸收剂。
所述的丹皮酚以外的美白祛斑成分如熊果苷1～5％、褪黑激素1～5％、氢醌1～4％，或其他美白祛斑成分。
所述遮光剂、抗氧化剂、其他美白祛斑成分均可以采用其中的一种或几种。
本申请具体推荐采用以下优化方案，所述化妆品或药物的配方为丹皮酚的质量浓度为5％，剂型为乳膏剂，含有二氧化钛8％及维生素E1％，基质载体为现有技术中的乳膏基质。也可以是在复方中含有该配方。
上述方案在治疗黄褐斑方面的作用效果及试验，具体如下一.基础实验研究
一)丹皮酚对黑素生成的影响。
1.药物的制备丹皮酚购自，纯度＞98％，采用DMSO(二甲基亚砜)溶解，贮存浓度为1M/L，实验时稀释成所需终浓度，其最高终浓度1mM/L中DMSO浓度是0.1％。
2.各种筛选模型的建立1)培养鼠B16F10黑素瘤细胞培养基为1640基础培养基+10％热灭活胎牛血清+1％抗生素/抗真菌溶液)，对数生长期细胞用于实验。
2)培养原代中国人表皮黑素细胞取自中国青少年包皮环切术后的包皮，取2到3代的黑素细胞用于试验。
3)培养原代中国人表皮角质形成细胞取自中国青少年包皮环切术后的包皮，取2到3代的角质形成细胞用于试验。
4)建立中国人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养的体外模型，黑素细胞与角质形成细胞共培养将培养好的黑素细胞和角质形成细胞按照1∶2混和接种，共同培养，其培养基为黑素细胞培养基和角质形成细胞培养基按1∶2混合而得。
3.实验方法1)B16F10细胞、人表皮黑素细胞、人表皮角质形成细胞以及共培养细胞增值率影响测定实验(MTT实验)数据以x±s表示，两组间比较采用独立样本的t检验。
2)黑素含量测定实验数据以x±s表示，两组间比较采用独立样本的t检验。
3)酪氨酸酶活性测定实验数据以x±s表示，两组间比较采用独立样本的t检验。
4)半定量RT-PCR检测人表皮黑素细胞酪氨酸酶mRNA数据以x±s表示，两组间比较采用独立样本的t检验。
5)Western-blot，化学发光法检测反应条带，凝胶成像仪进行光密度分析6)黑素转运研究实验分别单独培养人表皮黑素细胞和角质形成细胞，以CFDA-ester染黑素细胞，两种细胞共培养(按照前面描述方法)，于流式细胞仪下分析，黑素细胞只有CFDA阳性，具有由黑素细胞转运过来黑素小体的角质形成细胞则CFDA与藻红蛋白均阳性，统计处理后分析结果。
4.实验结果1)丹皮酚的MTT实验结果显示根据结果选取三个试验浓度50μmol/L，100μmol/L和200μmol/L。
2)各种实验结果如下①表1丹皮酚对共培养细胞中酪氨酸酶活性、黑素合成的影响(x±s，％)
对照组相应值设为100％，与对照组相比，#p＜0.05，##p＜0.01
表2丹皮酚对人表皮黑素细胞中酪氨酸酶活性、黑素合成的影响(x±s，％)
对照组相应值设为100％，与对照组相比，#p＜0.05，##p＜0.01表3丹皮酚对B16F10细胞中酪氨酸酶活性、黑素合成的影响(x±s，％)
对照组相应值设为100％，与对照组相比，#p＜0.05，##p＜0.01②丹皮酚对于人表皮黑素细胞中酪氨酸酶mRNA的影响表4丹皮酚对人表皮黑素细胞中酪氨酸酶mRNA的影响(x±s，％)
③丹皮酚对于人表皮黑素细胞中酪氨酸酶蛋白合成的影响表5丹皮酚对人表皮黑素细胞中酪氨酸酶蛋白表达的影响(x±s，％)
④丹皮酚对共培养细胞黑素转运的影响表6丹皮酚对共培养细胞黑素转运的影响
二.临床试验研究申请人制成10％丹皮酚霜，以基质作对照，对于丹皮酚美白和治疗黄褐斑的实际作用进行研究，治疗前经测试，10％丹皮酚霜无刺激反应。共有6名志愿者参加美白试验，3名黄褐斑患者参加治疗试验，其中男性2人，女性7人；每名志愿者均被告之每天外用10％丹皮酚霜早晚各一次，防晒，美白志愿者左右手自身对照(左手试验组，外擦10％丹皮酚霜；右手对照组，外擦基质)，黄褐斑组选取相邻两个黄褐斑，一个对照组，一个试验组，试验共2月，期间不得外用其它影响肤色的药物，随访三次(开始，1月后，2月后)记录分析结果如下(使用肤色测量仪测试结果，每次重复3次，1月后及2月后的结果与初始结果进行统计学分析t检验，p＜0.05为差异)一)美白组1月后，所有志愿者对照组N及e值均无差异，试验组1人e值有差异，2月后对照组N及e值仍无差异，试验组所有人e值均有差异，3人N值有差异，具体数据见表7。
二)黄褐斑治疗组1月后，所有志愿者对照组N及e值均无差异，试验组1人N值有差异，2月后对照组N及e值仍无差异，试验组所有人N及e值均有差异，结果见表8。
经过2月试验证明了丹皮酚对于美白和治疗色素沉着性疾病(如黄褐斑)均有效。
三.丹皮酚合并其它成分用于美白及治疗色素沉着性疾病的研究经过研究，我们发现外用含有丹皮酚的乳膏能明显减少皮肤的色素沉着，可用于皮肤美白及治疗色素沉着性皮肤病疾病。如在丹皮酚乳膏中加入一定量的遮光剂(紫外线吸收剂)如氨基苯甲酸类、肉桂酸酯类、氨基苯甲酸酯类、二苯甲酮类、褪黑激素和/或抗氧化剂如维生素E、维生素C或它们的衍生物，则有利于提高药物的稳定性和疗效；另外，经研究丹皮酚的酊剂、醑剂、糊剂、软膏、乳剂、油剂、面膜、凝胶、涂膜剂、气雾剂、溶液剂，均有很好疗效。
综上，申请人研究发现丹皮酚在可以抑制黑素生成以及黑素的转运，其机制是多方面的，既可以直接抑制酪氨酸酶活性，同时可以抑制其转运过程，因此丹皮酚具有美白和治疗色素沉着性疾病的作用。将丹皮酚应用在制备皮肤美白及祛斑化妆品或皮肤美白及治疗色素沉着性疾病的药物上，可以达到美白效果，在治疗色素沉着性疾病方面也有明确的效果。
具体实施例方式
下面非限制性的例举了本发明涉及的部分实施例。
实施例1，丹皮酚在制备皮肤美白及祛斑化妆品或治疗色素沉着性疾病药物上的应用，所制备的化妆品或药物中含有丹皮酚；用于美白以及治疗色素沉着性疾病(如黄褐斑)，有效质量浓度为5％。剂型为酊剂；基质载体酊剂基质。同时含有抗氧剂维生素E烟酸酯0.5％和遮光剂肉桂酸酯类15％。该药物或化妆品外用，用于皮肤美白、祛斑及治疗色素沉着性皮肤病。
实施例2，与实施例1基本相同，但是丹皮酚的质量浓度为10％。剂型为醑剂；基质载体为醑剂基质。同时含有抗氧剂维生素E2％及遮光剂二氧化钛5％。
实施例3，与实施例1基本相同，但是丹皮酚的质量浓度为5％。剂型为醑剂；基质载体为醑剂基质。抗氧剂为维生素E烟酸酯0.5％；遮光剂为氨基苯甲酸酯类8％。
实施例4，与实施例1基本相同，但是丹皮酚的质量浓度为8％。剂型为糊剂，载体基质为糊剂基质；抗氧剂为抗氧剂为维生素E烟酸酯1％，还含有遮光剂二氧化钛6％。
实施例5，与实施例1基本相同，但是丹皮酚的质量浓度为10％。剂型为软膏，载体基质为软膏基质；还含有遮光剂肉桂酸酯1％。
实施例6，与实施例1基本相同，但是丹皮酚的质量浓度为5％。剂型为乳膏剂，载体基质为乳膏基质；还含有二氧化钛8％及维生素E1％。
实施例7，与实施例1基本相同，但是丹皮酚的质量浓度为10％。剂型为油剂，载体基质为油剂基质；还含有遮光剂二苯甲酮8％及维生素E1％。
实施例8，与实施例1基本相同，但是丹皮酚的质量浓度为5％。剂型为涂膜剂，载体基质为膜剂基质。还含有褪黑激素1％。
实施例9，与实施例1基本相同，但是丹皮酚的质量浓度为8％。剂型为剂，载体基质为气雾剂基质。还含有维生素C0.5％及维生素E2％。
实施例10，与实施例1基本相同，但是丹皮酚的质量浓度为5％。剂型为凝胶剂，载体基质为凝胶基质；还含有遮光剂对氨基苯甲酸酯8％和维生素C1％。
实施例11，与实施例1基本相同，但是丹皮酚的质量浓度为5％。剂型为面膜，载体基质为面膜基质；还含有遮光剂对氨基苯甲酸酯8％和维生素E烟酸酯8％。
实施例12，与实施例1基本相同，但是丹皮酚的质量浓度为5％。剂型为溶液剂，辅料为溶液剂基质；遮光剂肉桂酸酯为1％；维生素E烟酸酯为0.1％。
实施例13，与实施例1基本相同，但是丹皮酚的质量浓度为5％。辅料与实施例12相同外，还可浸入载体无纺布中，还含有遮光剂对氨基苯甲酸酯5％、邻氨基苯甲酸酯3％和维生素E2％。
实施例14，与实施例6基本相同，但是丹皮酚的质量浓度为10％。
实施例15，与实施例6基本相同，但是丹皮酚的质量浓度为3％。还含有熊果苷5％实施例16，与实施例13基本相同，但是所用载体为纱布。
实施例17，丹皮酚的质量浓度为5％。剂型为乳膏剂。载体基质为乳膏基质。
实施例18，与实施例17基本相同，但是丹皮酚的质量浓度为0.1％。
实施例19，与实施例17基本相同，但是丹皮酚的质量浓度为0.01％。
实施例20，与实施例6基本相同，但是丹皮酚的质量浓度为3％；二氧化钛为1％。
实施例21，与实施例6基本相同，但是丹皮酚的质量浓度为20％；二氧化钛为1％。
实施例22，与实施例6基本相同，但是丹皮酚的质量浓度为8％；二氧化钛为10％。
实施例23，与实施例10基本相同，但是对氨基苯甲酸酯为1％。
实施例24，与实施例8基本相同，但是褪黑激素为5％。
实施例25，与实施例7基本相同，但是二苯甲酮为1％。
实施例26，与实施例7基本相同，但是二苯甲酮为15％。
实施例28，与实施例1基本相同，但是加有维生素C单磷酸酯镁1％。
实施例29，与实施例1基本相同，但是加有维生素C单磷酸酯镁8％。
实施例30，与实施例1基本相同，但是加有熊果苷1％。
实施例31，与实施例1基本相同，但是加有熊果苷5％。
实施例32，与实施例1基本相同，但是加有氢醌1％。
实施例33，与实施例1基本相同，但是加有氢醌4％。
实施例34，与实施例1基本相同，但是加有熊果苷1％、褪黑激素1％，和氢醌1％。
实施例35，与实施例1基本相同，但是只含有丹皮酚5％，不含遮光剂和抗氧化剂。
表7
#有差异的值。
表8
#有差异的值。
权利要求
1.丹皮酚在制备皮肤美白及祛斑化妆品或皮肤美白及治疗色素沉着性疾病药物上的应用，所制备的化妆品或药物的基质载体中含有丹皮酚；外用。
2.按照权利要求1所述的在丹皮酚制备皮肤美白及祛斑化妆品或皮肤美白及治疗色素沉着性疾病药物上的应用，其特征在于，所述的化妆品或药物，是包括丹皮酚在内的两种或两种以上美白皮肤、祛斑及治疗色素沉着性皮肤病的药物组成的复方；或是含有丹皮酚的单方。
3.按照权利要求1或2所述的在丹皮酚制备皮肤美白及祛斑化妆品或皮肤美白及治疗色素沉着性疾病药物上的应用，其特征在于，所述的化妆品或药物中丹皮酚的质量浓度为0.1％～20％。
4.按照权利要求3所述的丹皮酚在制备皮肤美白及祛斑化妆品或皮肤美白及治疗色素沉着性疾病药物上的应用，其特征在于，所述的化妆品或药物中的丹皮酚，与基质载体混合形成酊剂或醑剂或糊剂或软膏剂或乳膏剂或乳剂或油剂或面膜或凝胶剂或涂膜剂或气雾剂或溶液剂。
5.按照权利要求4所述的丹皮酚在制备皮肤美白及祛斑化妆品或皮肤美白及治疗色素沉着性疾病药物上的应用，其特征在于，在所述的剂型中还含有遮光剂和/或抗氧化剂中的一种或几种。
6.按照权利要求5所述的丹皮酚在制备皮肤美白及祛斑化妆品或皮肤美白及治疗色素沉着性疾病药物上的应用，其特征在于，所述的丹皮酚的质量浓度为3％～10％。
7.按照权利要求4或5或6所述的丹皮酚在制备皮肤美白及祛斑化妆品或皮肤美白及治疗色素沉着性疾病药物上的应用，其特征在于，基质载体中含有质量浓度，丹皮酚5％，二氧化钛8％及维生素E1％，剂型为乳膏剂。
8.按照权利要求4或5或6所述的丹皮酚在制备皮肤美白及祛斑化妆品或皮肤美白及治疗色素沉着性疾病药物上的应用，其特征在于，具体配方为质量浓度，丹皮酚5％，二氧化钛8％及维生素E1％，剂型为乳膏剂。
全文摘要
丹皮酚在制备皮肤美白及祛斑化妆品或皮肤美白及治疗色素沉着性疾病药物上的应用，所制备的化妆品或药物的基质载体中含有丹皮酚；外用；丹皮酚的质量浓度为0.1％～20％；优化方案为5％～10％。其中丹皮酚与基质载体混合形成酊剂或醑剂或糊剂或软膏剂或乳膏剂或乳剂或油剂或面膜或凝胶剂或涂膜剂或气雾剂或溶液剂。上述剂型中可加入的其他组分是遮光剂和/或抗氧化剂和/或丹皮酚以外的美白祛斑成分。丹皮酚可以直接抑制酪氨酸酶活性、黑素生成及黑素的转运，其机制是多方面的。将丹皮酚应用在制备皮肤美白及治疗色素沉着性疾病的化妆品或药物上，可以达到美白效果，在治疗色素沉着性疾病方面有明确的效果。
文档编号A61Q19/10GK1883444SQ20061004070
公开日2006年12月27日 申请日期2006年5月29日 优先权日2006年5月29日
发明者马鹏程, 陈志强, 解士海 申请人:中国医学科学院皮肤病研究所