专利名称：一种从丹皮中获得丹皮酚和芍药苷的制备方法
技术领域：
本发明属于医药领域，具体而言是涉及从中药丹皮中经过提取、精制，分步获得丹皮酚和芍药苷的制备方法。
背景技术：
目前，在全球范围内，中草药都有一定的市场，随着人们对健康要求认识水平的增高以及人口的老龄化，亚健康状态化，人们更加渴望回归自然，利用纯天然程度高的药物治疗、预防一些化学合成药物所不能解决得问题，因此天然植物药的应用超出它原来民族传统文化的背景。从天然药物中寻求副作用小、且物美价廉的药物成为世界各国医药企业所追逐的目标。欧共体对草药进行了统一立法，加拿大和澳大利亚等国草药地位已经合法化，美国政府也已起草了植物药管理办法，开始接受天然药物的复方混合制剂作为治疗药，这些为中药作为治疗药进入国际医药市场提供了良好的国际环境。另一方面，随着全球经济一体化进程的加快，特别是我国正式加入WTO，中国医药市场融入国际医药大市场的广度和深度将进一步加剧。面临强大跨国医药集团的激烈竞争以及日本、韩国、印度、泰国等亚洲国家传统医药产品和德国、法国等欧洲国家植物药的巨大冲击，我国传统中药产生的众多产品由于尚不能符合国际医药市场的标准和要求而被拒之门外。
丹皮，为毛莨科植物牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)的干燥根皮，分布河北、河南、山东、四川、陕西、甘肃等地。全国各地均有栽培，药材主产安徽、是我国传统常用中药材，其性微寒，味辛苦，凉，入心、肝、肾经，具有清热，凉血，和血，消瘀的功效。丹皮炮制最早见于我国梁代陶宏景所撰《集注》中，认为“皆促破，去心。”《本草纲目》等医书中记载“丹皮木心不入药，需去之。”丹皮酚和芍药苷是丹皮里两种主要的活性物质。现代医学研究证明丹皮酚具有抑菌抗炎、镇痛、解热、解痉、抗过敏、活血、化淤、增强免疫功能等作用，在医药、香料、化学领域具有广泛的用途，例如牙膏、香皂、浴液、生发液、医用消毒纸、妇女、婴儿卫生用品、食品添加剂、饲料添加剂等。芍药苷具有镇痛、镇静、保肝、抗炎、免疫调节、扩张血管、改善学习记忆行为等活性，可治疗类风湿性关节炎、肝炎和老年性相关疾病等。
目前，从丹皮中提取丹皮酚的专利、文献报道不多，为了提高得率，往往采用超临界等较为繁琐的方法，需要一定规模的仪器设备，限制了在工业生产中的应用。且目前没有方法报道从丹皮中同时获得丹皮酚和芍药苷两种物质，在一定程度上造成了原料的浪费，因此，建立一种能够从药材中同时获取这两种主要物质的方法尤为重要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从丹皮中获得丹皮酚和芍药苷的制备方法。
本发明的丹皮酚和芍药苷的制备方法，包括用水蒸气蒸馏法获得丹皮酚，药渣加醇水提取，提取液用大孔吸附树脂柱分离获得芍药苷这几个步骤。
本发明通过以下技术方案实现(1)丹皮饮片用水浸泡去除杂质，烘干，用水蒸气蒸馏法提取，收集蒸馏液，冷冻后融化即过滤，获得丹皮酚晶体；(2)药渣加醇水提取，提取液减压浓缩富集；(3)浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用水冲洗，再用0％-30％浓度含水乙醇纯化，再用20％-70浓度含水乙醇解析液洗脱，收集洗脱液并减压浓缩至无醇，冷冻干燥，即得芍药苷部分。
其中步骤(1)中，饮片浸泡时间为10-48小时，蒸馏液体积为8-15倍量，蒸馏液冷冻时间为4-10小时。优选丹皮饮片浸泡时间为15-36小时，蒸馏液体积为10-12倍量，蒸馏液冷冻时间为6-8小时。最佳为饮片浸泡时间为24小时，蒸馏液体积为12倍量，蒸馏液冷冻时间为8小时。
步骤(2)中，乙醇浓度为30％-95％，溶剂用量8-15倍量，加热提取1-3次，每次0.5-2小时。优选乙醇浓度为50％-80％，溶剂用量10-12倍量，加热提取1-2次，每次0.5-1小时。最佳乙醇浓度为70％，溶剂用量10倍量，加热提取2次，每次0.5小时。
步骤(3)中，纯化后洗脱体积为1-4个柱体积(BV)，解析后洗脱体积为3-6 BV。优选纯化液乙醇浓度为10％-20％，洗脱体积为2-3 BV，解析液乙醇浓度为30％-50％，洗脱体积为4-5柱体积。最佳为纯化液乙醇浓度为20％，洗脱体积为3 BV，解析液乙醇浓度为40％，洗脱体积为4 BV。
依本发明的方法制成的丹皮酚和芍药苷，可制成任何一种药剂学上所说的剂型，也可配合其他药物或组分一起制成制剂使用。
提取获得的丹皮酚和芍药苷与制剂允许的药物赋形剂或载体组合制备成制剂，其形式包括液体制剂、颗粒剂、片剂、气雾喷剂、冻干粉针剂、滴剂或胶丸。
本发明方法的有益之处为(1)通过本发明所述方法能从丹皮药材中分步得到丹皮酚和芍药苷，对药材进行了最大程度的利用。
(2)本方法能使用较为简单的方法获取纯度较高的丹皮酚，同时，芍药苷在纯化时选用D201型大孔树脂，有效地解决了其他树脂不能将丹皮中的鞣质与芍药苷分离的问题，大大提高了芍药苷的纯度。首次建立从丹皮中同时获得丹皮酚和芍药苷的方法。
(3)本发明所述方法以有效成分得率和浸膏得率为指标进行综合评价，避免了一味追求有效成分含量高，而造成浸膏得率很低，难以满足工业化生产的要求。
(4)本发明设计合理，低成本、易操作、稳定性好、适于产业化。
图1为丹皮酚230nm液相色谱图。
图2为芍药苷230nm液相色谱图。
具体实施例方式
本发明结合实施例作进一步的说明。下述各实施例仅用于说明本发明而并非对本发明的限制。
实施例一取丹皮饮片500kg，50℃干燥6小时，加水浸泡24小时，回流提取，收集蒸馏液至12倍量(6L)，-4℃冷冻8小时，取出融化后马上抽滤，不溶物即为丹皮酚。药渣加10倍量70％乙醇水溶液微沸状态加热回流提取2次，每次0.5小时，提取液过滤，合并，减压浓缩至1g/mL(生药量)，上D201大孔树脂(0.2-0.6g生药材/g湿树脂)。用4BV去离子水冲洗，弃去，继续用4BV 20％乙醇水溶液纯化，弃去，再用4BV 40％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至无醇，冷冻干燥，即得芍药苷部分。经液相测定，丹皮酚的药材提取率为2.06％，芍药苷的药材提取率是0.32％。
实施例二取丹皮饮片500kg，50℃干燥6小时，加水浸泡10小时，回流提取，收集蒸馏液至8倍量(4L)，-4℃冷冻4小时，取出融化后马上抽滤，不溶物即为丹皮酚。药渣加10倍量30％乙醇水溶液微沸状态加热回流提取1次，每次0.5小时，提取液过滤，合并，减压浓缩至1g/mL(生药量)，上D201大孔树脂(0.2-0.6g生药材/g湿树脂)。用2BV去离子水冲洗，弃去，继续用3BV 10％乙醇水溶液纯化，弃去，再用3BV 30％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至无醇，冷冻干燥，即得芍药苷部分。经液相测定，丹皮酚的药材提取率为1.89％，芍药苷的药材提取率是0.30％。
实施例三取丹皮饮片500kg，50℃干燥6小时，加水浸泡15小时，回流提取，收集蒸馏液至12倍量(6L)，-4℃冷冻6小时，取出融化后马上抽滤，不溶物即为丹皮酚。药渣加8倍量50％乙醇水溶液微沸状态加热回流提取2次，每次0.5小时，提取液过滤，合并，减压浓缩至1g/mL(生药量)，上D201大孔树脂(0.2-0.6g生药材/g湿树脂)。用3BV去离子水冲洗，弃去，继续用3BV 20％乙醇水溶液纯化，弃去，再用3BV 50％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至无醇，冷冻干燥，即得芍药苷部分。经液相测定，丹皮酚的药材提取率为1.92％，芍药苷的药材提取率是0.31％。
实施例四取丹皮饮片500kg，50℃干燥6小时，加水浸泡48小时，回流提取，收集蒸馏液至15倍量(7.5L)，-4℃冷冻10小时，取出融化后马上抽滤，不溶物即为丹皮酚。药渣加15倍量95％乙醇水溶液微沸状态加热回流提取3次，每次0.5小时，提取液过滤，合并，减压浓缩至1g/mL(生药量)，上D201大孔树脂(0.2-0.6g生药材/g湿树脂)。用3BV去离子水冲洗，弃去，继续用3BV 30％乙醇水溶液纯化，弃去，再用4BV 60％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至无醇，冷冻干燥，即得芍药苷部分。经液相测定，丹皮酚的药材提取率为1.98％，芍药苷的药材提取率是0.29％。
实施例五 丹皮酚及芍药苷的含量测定(1)实施例一中丹皮酚的含量测定(高效液相色谱法)色谱条件色谱柱Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；采用等度洗脱，流动相A相为水，流动相B相为乙腈；流动相A为55％、流动相B为45％等度洗脱；流速1.0mL·min-1；检测波长230nm；柱温30℃；进样量5μL。
供试品溶液的制备称取本品，用甲醇溶液溶解在容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。
测定方法精密吸取供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，结果参见图2，其中1表示丹皮酚。
(2)实施例一中芍药苷的含量测定色谱条件色谱柱Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；采用等度洗脱，流动相A相为水，流动相B相为乙腈；流动相A为85％、流动相B为15％等度洗脱；流速1.0mL·min-1；检测波长230nm；柱温30℃；进样量5μL。
供试品溶液的制备称取本品，用甲醇溶液溶解存容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。
测定方法精密吸取供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，结果参见图2，其中1表示芍药苷。
实施例六 滴丸的制备取实施例一的丹皮酚0.5g与10.5g聚乙二醇-6000混合均匀，加热熔融，化料后移至滴丸滴灌中，药液滴至6～8℃液体石蜡中，除油，制得滴丸300粒。
实施例七 冻干粉针剂的制备取降香油1.5g，加入到13ml饱和的羟丙基β-环糊精中，搅拌溶解，滤过，滤液低温干燥得降香油和羟丙基β-环糊精的包合物粉末。除上述降香油合羟丙基β-环糊精的包合物粉末外，再取实施例一的芍药苷0.5g、甘露醇5.5g、依地酸钙钠0.9g和蒸馏水2ml，上述组分混匀后，冷冻干燥，分装350支，即得。
实施例八 片剂的制备取实施例一中芍药苷适量与微晶纤维素混合均匀，加3％聚维酮乙醇溶液制软材，过18目筛制颗粒，60℃干燥1小时，整粒，加入滑石粉适量，混匀，压片，即得。
实施例九 胶囊的制备取实施例一中芍药苷与花生油按2∶18的比例水溶式不锈钢搅拌灌中，同时加入适量明胶和甘油混合，放出再用胶体磨磨浆，磨出的混合液搅拌，制成药液；将甘油与蒸馏水在40-50℃温度下搅拌混溶，再将甘油液温至80-90℃，取明胶加入其中混合搅拌，直至全部溶化成胶液，然后在60℃温度下使胶液静置4小时，用制板机制成胶板供制丸工序使用；将上述制成的药液和胶板送入压丸机制丸，然后在22-25℃温度下吹风4小时作滚筒定型，又在25-30℃温度下吹风干燥16-20小时，检选合格胶丸，用95％乙醇清洗，在25-30℃下吹风干燥4小时，即得。
实施例十 注射液的制备取实施例一中芍药苷适量用40℃注射用水溶解，加入适量药用载体等渗剂，调节溶液的pH值为7.0-8.0，加注射用水至全量，用超滤器超滤除热源，测定pH值后，用膜过滤，分装后，高压灭菌，检验、包装，即得。
权利要求
1.一种从丹皮中获得丹皮酚和芍药苷的制备方法，其特征是通过以下步骤实现(1)丹皮饮片用水浸泡去除杂质，烘干，用水蒸气蒸馏法提取，收集蒸馏液，冷冻后融化即过滤，获得丹皮酚晶体；(2)药渣加醇水提取，提取液减压浓缩富集；(3)浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用水冲洗，再用0％-30％浓度含水乙醇纯化，再用20％-70浓度含水乙醇解析液洗脱，收集洗脱液并减压浓缩至无醇，冷冻干燥，即得芍药苷部分。
2.根据权利要求1所述的从丹皮中获得丹皮酚和芍药苷的制备方法，其特征是步骤(1)中丹皮饮片浸泡时间为10-48小时，蒸馏液体积为8-15倍量，蒸馏液冷冻时间为4-10小时。
3.根据权利要求1所述的从丹皮中获得丹皮酚和芍药苷的制备方法，其特征是步骤(2)中醇水溶液提取两次，乙醇浓度为30％-95％，溶剂用量8-15倍量，加热提取1-3次，每次0.5-2小时。
4.根据权利要求1所述的从丹皮中获得丹皮酚和芍药苷的制备方法，其特征是步骤(3)中采用D201型大孔树脂。
5.根据权利要求1或4所述的从丹皮中获得丹皮酚和芍药苷的制备方法，其特征是步骤(3)中纯化后洗脱体积为1-4个柱体积，解析后洗脱体积为3-6柱体积。
6.根据权利要求1所述的从丹皮中获得丹皮酚和芍药苷的制备方法，其特征是提取获得的丹皮酚和芍药苷与制剂允许的药物赋形剂或载体组合制备成制剂，其形式包括液体制剂、颗粒剂、片剂、气雾喷剂、冻干粉针剂、滴剂或胶丸。
全文摘要
一种从丹皮中获得丹皮酚和芍药苷的制备方法，将丹皮饮片用水浸泡后，蒸馏法提取，获得丹皮酚晶体；再将药渣用醇水溶液提取，提取液减压浓缩富集；用大孔吸附树脂分离提取液，获得芍药苷。本发明从丹皮药材中分步得到丹皮酚和芍药苷，对药材进行了最大程度的利用。用D
文档编号A61K36/185GK101085728SQ20071006998
公开日2007年12月12日 申请日期2007年7月11日 优先权日2007年7月11日
发明者贺庆, 葛志伟, 程翼宇, 水文波, 窦静 申请人:浙江大学