专利名称：治疗乙型肝炎的药物制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及以三七人参三醇型皂苷Rg1、苦参碱为原料组方制备的药品，其剂型为片剂、软胶囊剂、硬胶囊剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、散剂、水针剂、冻干粉针剂。本发明所述制剂是由三七人参三醇型皂苷Rg1其含量不低于50％、苦参碱和余量的药用辅料制成。本发明所述制剂用于治疗乙肝病毒携带者及乙肝患者疗效显著。服用剂量小，安全、有效。
背景技术：
以提取物“三七人参皂苷Rg1、苦参碱”为原料组方，用于治疗乙肝病毒携带者及乙肝患者而制成的片剂、软胶囊剂、硬胶囊剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、散剂、水针剂、冻干粉针剂的药品尚未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种以三七人参皂苷Rg1、苦参碱为原料组方制成的片剂、软胶囊剂、硬胶囊剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、散剂、水针剂、冻干粉针剂，用于治疗乙肝病毒携带者及乙肝患者。本发明制剂服用剂量小，安全、有效。
本发明所述治疗乙肝病毒携带者及乙肝患者的药物制剂是由5～95％的以上药材提取物和余量的药用辅料制成。
本药物制剂在制成片剂、软胶囊剂、硬胶囊剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、散剂、水针剂、冻干粉针剂时，可选用的药用辅料包括淀粉、硬脂酸镁、羟丙基纤维素、羧甲基淀粉、蜂蜡、植物油、PEG6000、PEG4000、葡萄糖、液状石蜡、聚山犁酯、滑石粉等。
本发明制剂的相关研究一、对乙肝动物模型的药物抑制试验试验目的实验本发明制剂对麻鸭乙型肝炎动物模型乙肝病毒的抑制作用。
1、试验动物试验动物为江浙地区特有的鸭禽种系麻鸭，经过筛选确认为垂直传播(6)、DHBV DNA检测阳性的麻鸭。本实验选用十月龄雌性麻鸭，体重范围为900～1100克。
2、受试药物本发明制剂3、阳性对照药物贺普丁片，每片含拉米夫定100mg，英国褐兰素威康药业有限公司研制和生产。该产品是目前国内外公认并得到美国FDA和我国卫生部认可的抗乙肝病毒有效的药物，所以可以作为本发明制剂的对照药物。
4、受试药物的剂量和给药方法口服途径给药，用于观察本发明制剂抗乙肝病毒作用及改善鸭肝病理炎症的作用。
参考人和动物间体重和体表面积等效剂量比率折算，确定本发明制剂的给药剂量为20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg(以三七人参皂苷Rg1计)，因给药周期较长，故采用隔日给药一次以减少喂饲操作的刺激。实际每次给药量是60mg/kg、120mg/kg、240mg/kg。
5、试验分组本发明制剂为高、中、低三个剂量组，剂量分别为240mg/kg、120mg/kg、60mg/kg，均为口服途径给药，每周三次给药，连续给药12周。
贺普丁阳性对照组，剂量100mg/kg，亦为口服途径给药，每周三次给药，连续给药12周。
此外实验又设DHBV DNA(+)和(-)两个对照组。
6、观察指标实验组和对照组的麻鸭分别在给药前、给药后第四周、第八周、第十二周和停药后第二周是静脉采血，作血清的DHBV DNA水平的定量PCR检测。在停药后两周，各组麻鸭同时放血处死取肝脏，福尔马林固定液固定和2.5％戊二醛固定液保存，分别作鸭肝常规病理和电镜检查。
7、实验结果1)、各组麻鸭血清DHBV DNA含量变化实验结果发现，本发明不同剂量组麻鸭血清DHBV DNA含量用药后均有5-9只麻鸭出现DHBV DNA水平下降，各组DHBV DNA平均含量分别下降32.65％(高剂量240mg/kg组)、20.71％(中剂量120mg/kg组)和51.56％(低剂量60mg/kg组)，实验观察本发明制剂低、中剂量组各有1只动物血清出现DHBV DNA转阴，并且各有一只持续转阴至停药观察结束。
以上实验结果表明本发明有较好的抗病毒作用。可抑制麻鸭乙肝病毒DNA的复制，降低血清DHBV DNA含量。这种抗病毒作用不随本发明制剂的剂量增加而增强，反而有所减弱，可能与本发明的免疫调节作用有关。
同时发现，血清DNA含量在本发明制剂停药后第2周时仍能基本维持于停药时的水平，表明本发明有较好的持续抗病毒复制作用。各剂量组鸭肝病的光镜和电镜检查结果表明，本发明制剂有一定的病理改善作用，减轻鸭肝炎症程度，减少肝细胞脂肪变性的发生，未发现本发明制剂有明显的鸭肝病理毒性作用。
2)、麻鸭病理检查结果a、各组光镜病理检查结果光镜下DHBV(+)实验对照组出现较明显炎症改变，类似慢性迁延性肝炎的变化，主要表现为肝组织汇管区炎症和小叶实质炎症明显，肝细胞肿胀显著，窦细胞活跃，汇管区胆管增生，并有明显脂肪性变，贺普丁阳性对照组与病毒阳性对照组有一定的差异，其观测数据比病毒阴性对照组的还底，说明该有效药物同时能改善一般炎症。
由实验对比中可见，药物对病理炎症改善有效度由高到低依次为本发明高剂量组、中剂量组、低剂量组。
相对而言，病理观察发现本发明制剂有较好的药物疗效，其中本发明高剂量组比有效药物贺普丁对照组的稍好。
本实验各组均可见有肝脂肪变性，而药物治疗高剂量组则少见。
b、各组电镜病理检查结果(1)、DHBV DNA(-)对照组肝细胞排列整齐，核圆，有核仁。胞质中有线粒体，个别有轻度膨胀。粗面内质网丰富，糖元聚集大片，有较多脂滴。胆小管可见，结构好，附近有髓样小体。血窦结构完整，窦壁有枯氏细胞、淋巴细胞等。
(2)、DHBV DNA(+)对照组肝细胞结构尚好，排列整齐，核卵圆或有轻度变形，核仁明显。细胞中有线粒体，少数内质网轻度肿胀，糖元聚集，但有的切片也见糖元丢失，并见大量脂滴。胆小管结构好，微绒毛丰富，附近有脂褐素颗粒，窦壁完整，有枯氏细胞，其中含吞噬体，腔内有红细胞和淋巴细胞，也可见淋巴细胞向肝细胞侵润，并侵入肝细胞的现象，储脂细胞可见，但不多。
(3)、阳性药物贺普丁对照组肝细胞排列整齐，核圆，有核仁。胞质中有线粒体和粗面内质网，糖元聚集成片但有丢失现象，脂滴多，有些很大，胆小管结构好，其中一例有扩张。血窦壁完整，有一例有储脂细胞，窦上枯氏细胞较多，有吞噬体，腔内有淋巴等细胞，并见淋巴细胞向肝细胞侵润。
(4)、本发明制剂低剂量组肝细胞核圆，有核仁，线粒体、内质网丰富。糖元聚集，有的有丢失现象。脂滴特大、核成星月型。肝细胞间胆小管有不同程度扩张，有的结构尚好。血窦壁完整，枯氏细胞可见成不同程度的活跃状态。血窦中可见淋巴细胞，有向肝细胞侵润。
(5)、本发明制剂中剂量组肝细胞核圆，有核仁，部分结构好，线粒体有不同程度的肿胀，内质网和糖元丰富，糖元可见有丢失，脂滴较少。肝细胞间胆小管结构好，血窦壁完整，少量枯氏细胞，不活跃，未见有淋巴细胞及淋巴细胞侵润现象。
(6)、本发明制剂高剂量组肝细胞排列尚好，核圆，有核仁，胞质中有线粒体，内质网有不同程度肿胀和扩张，糖元也有丢失，脂滴少至中等。胆小管一般尚可。血窦壁完整，有少量枯氏细胞，其中有吞噬体，但不活跃。细胞间有淋巴侵润，但数量不多。
通过以上各剂量组鸭肝病理的光镜和电镜检查结果表明，本发明有一定的病理改善作用，减少鸭肝炎症程度，减少肝细胞脂肪变性的发生，未发现本发明有明显的鸭肝病理毒性作用。
二、长期毒性实验试验材料1、动物 Beagle犬，6-8月龄，18只，雌雄各半。
2、受试药 本发明制剂试验方法1、试验周期 临床用药拟定4周，犬长毒取3倍以上，定为连续口服给药14周，停药后观察2周。
2、动物分组和准备 动物但笼饲养，定量喂食，实验前先观察2周，并注射“害获灭”每只0.5ml。每只犬皮下注射六联弱毒疫苗1支(2ml)，每周依次，联系两周。进行2次心电图及尿液检查，外周血象和血液生化测定，选送指标正常范围内的犬作正式实验。按体重随机分组，每组6只，雌雄各半，将受试药粉碎后溶于150ml蒸馏水中灌胃给药，每天一次，连续14周。对照组无特殊处理。
观察指标
1、一般情况 观察记录动物的精神、活动、毛发、粪尿等情况，一日一次，每周称体重一次，用肛门电子体温计测量体温一次，根据体重情况调整给药量。
2、心电图 试验前、中、后和恢复期结束后做II导联心电图。
3、尿液检查 试验前、中、后和恢复期结束后分别用迪瑞F100尿分析仪器检测11项。
4、血液学检测 试验前、中、后和恢复期结束后均用日本光电5216-K血球计数仪测犬外周血象、包括白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞、红细胞、血红蛋白、红细胞面积、血小板。采用玻片挑丝法测定凝血时间。
5、血液生化指标 试验前、中、后和恢复期结束后均用国产photometer 4010生化仪检测血清总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)。用日本ERBA CHEM-5半自动生化仪器检测血清肌酐(Grea)，用意大利ARCOPO)全自动生化仪检测丙氨酸氨基转换酶(ALT)，天门冬氨酸氨基转换酶(AST)，尿素氮(BUN)，总胆红素(TP)，总胆固醇(T-cho)葡萄糖(GLU)，碱性磷酸酶(ALP)。
6、解剖时间 给药结束(14周)对照组、大、小剂量组各解剖4只，雌雄各半。恢复期2周后每组剩余的2只全部解剖。系统尸解并称重(心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、甲状腺、睾丸、子宫、脑、前列腺、胰腺、垂体)的重量。计算器官系数。
7、组织学检查 放血致死，解剖取出心心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、甲状腺、睾丸、子宫、脑、前列腺、胰腺、垂体、十二指肠、回肠、结肠、脑、骨髓、胸骨、淋巴结、膀胱、睾丸副腺、子宫卵巢、血管、肌肉、眼球、视神经、腮腺肉眼观察。并用10％甲醛固定，取材、脱水、透明，切片、HE染色、封片、光镜下作病理组织学检查。同时做胸骨骨髓涂片，固定，染色，镜下观察。
试验结果1、各组动物一般情况良好，活动正常、皮毛、二便无异常情况；体重均有所增加，体温在38-39度之间正常范围内。
2、给药前、中、后和恢复期尿液检查11项均在正常范围内变动。
3、心电图检测对照组与给药组比较，给药组药前与给药后比较无明显变化。
4、外周血象包括丙氨酸氨基转换酶(ALT)，天门冬氨酸氨基转换酶(AST)，尿素氮(BUN)，总胆红素(TP)，总胆固醇(T-cho)葡萄糖(GLU)，碱性磷酸酶(ALP)给药组与正常组相比无明显差异。
5、对主要脏器观察结构正常，未见明显肿大，充血，坏死等变化。主要脏器系数与对照组相比较无明显差异。病理切片检查未见药物引起的病理形态学方面改变。骨髓检查高剂量组粒细胞百分数明显高于对照组，巨核细胞总数给药组明显高于对照组P＜0.05这可能与给药增强机体免疫功能有关。
结果评价Beagle犬连续口服本发明制剂14周，恢复期2周，未见由于药物积蓄而引起实验犬产生毒性反应。在所给试剂剂量范围内是安全的。
具体实施例方式实施例1.取三七人参皂苷Rg1、苦参碱90份和药用辅料10份，混合均匀，压片即得；2.取三七人参皂苷Rg1、苦参碱50份和药用辅料50份，混合均匀，制成软胶囊即得；3.取三七人参皂苷Rg1、苦参碱30份和药用辅料70份，混合均匀，制成硬胶囊即得；4.取三七人参皂苷Rg1、苦参碱40份和药用辅料60份，混合均匀，制成颗粒即得；5.取三七人参皂苷Rg1、苦参碱70份和药用辅料30份，混合均匀，制成丸剂即得；6.取三七人参皂苷Rg1、苦参碱95份和药用辅料5份，混合均匀，制成散剂即得；7.取三七人参皂苷Rg1、苦参碱10份和药用辅料90份，混合均匀，按照常规工艺制成滴丸剂。
8.取三七人参皂苷Rg1、苦参碱5～95份，药用辅料95～5份，按照常规工艺制成冻干粉针剂。
9.取三七人参皂苷Rg1、苦参碱5～95份，药用辅料95～5份，按照常规工艺制成水针剂。
以上仅仅选录了部分代表性配方，实际上由于选择各药用辅料、用量及配比的不同，可选用的处方还很多。
权利要求
1.一种治疗乙肝病毒携带者及乙肝患者的药物制剂，其特征在于由三七人参三醇型皂苷Rg1其含量不抵于50％、苦参碱和余量的药用辅料制成，该制剂有较好的持续抗病毒作用，可抑制乙肝病毒DNA的复制，降低血清DHBV DNA含量。
2.根据权利要求1所述的治疗乙肝病毒携带者及乙肝患者的药物制剂，其剂型为片剂、软胶囊剂、硬胶囊剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、散剂、水针剂、冻干粉针剂。
全文摘要
本发明涉及以三七人参三醇型皂苷Rg
文档编号A61P31/20GK1823919SQ20051004868
公开日2006年8月30日 申请日期2005年12月9日 优先权日2005年12月9日
发明者代思炜 申请人:代思炜