一种黄芪药物组合物在制备治疗乙型肝炎药物中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，尤其设及一种黄巧药物组合物在制备治疗乙型肝炎药 物中的用途。
【背景技术】
[0002] 乙型病毒性肝炎简称乙肝，是由乙肝病毒（皿V)引起的、W肝脏炎性病变为主，并 可引起多器官损害的一种疾病。乙肝的危害巨大，长期的乙肝病毒复制可能导致患者肝脏 纤维化、肝硬化、肝腹水、肝癌等严重后果。
[0003] 乙肝治疗主要包括抗乙肝病毒治疗、提高免疫力和抗炎保肝等方式，其中抗乙肝 病毒治疗是最主要的治疗措施。抗乙肝病毒治疗能抑制或清除皿V，防止肝脏功能失代偿、 肝硬化、肝细胞癌及其并发症的发生，改善患者生活质量并延长其存活时间。目前临床抗病 毒治疗药物的种类繁多，主要有干扰素类、核巧类药物和中药组合物等。干扰素在皿V清除 方面的疗效有限，且存在价格昂贵、副作用较多、停药后容易反跳等缺点。核巧类药物包括 拉米夫定、阿德福韦醋、恩替卡韦和替比夫定等，在临床上获得了广泛的应用，但不能从根 本上清除病毒，并且长时间用药易引起病毒突变，导致耐药性的产生、停药后容易反跳等缺 点。中药组合物由于具有促进肝脏细胞的修复、增强免疫功能和抑制病毒复制等功能，因此 也被广泛应用于抗乙肝病毒治疗，且停药后的反跳情况较少，但现有的中药组合物往往起 效较慢。
[0004] 中国专利申请201310032574. 2公开了一种取自鲜蒲公英的抗乙肝病毒有效组分 组合物，其包括特定的多糖组分、酪酸组分和黄酬组分，该抗乙肝病毒有效组分组合物虽然 具有一定的抗乙肝病毒效果，但其制备步骤包括过树脂柱、洗脱等步骤，比较繁琐，不利于 产业化。
[0005] 黄巧性甘，微溫，归肺经，有补气升阳、益卫固表之功能。现代医学研究表明，黄巧 具有增强机体免疫功能、利尿和抗衰老等作用。中国专利申请201010182249.0公开了一 种增强免疫力或延缓衰老的中药组合物，包括黄巧、人参、构杞子、女贞子、山药、巧等、淫羊 蕾、桑甚、墨旱莲、灵芝、陈皮和甘草等制备原料。
【发明内容】
[0006] 为解决现有技术中存在的问题(核巧类药物停药后容易反跳，中药组合物起效较 慢)，本发明提供一种黄巧药物组合物在制备治疗乙型肝炎药物中的用途，通过黄巧药物组 合物与恩替卡韦的联合用药，可显著增强抗乙肝病毒的疗效，停药后不易发生反跳现象。此 夕F，本发明还提供一种含黄巧的中药组合物，单独使用该中药组合物可抗乙肝病毒，达到治 疗乙肝的效果。
[0007] 本发明提供一种黄巧药物组合物在制备治疗乙型肝炎药物中的用途，所述黄巧药物组 合物包含黄巧提取物，所述黄巧药物组合物的联用药物为恩替卡韦。
[0008] 优选地，所述黄巧药物组合物选自黄巧注射液或含黄巧的中药组合物。
[0009] 优选地，所述含黄巧的中药组合物包括如下重量份数的制备原料：黄巧9~15份、 黄连2~5份、丹参5~10份、陈皮2~5份和甘草2~5份。
[0010] 优选地，所述含黄巧的中药组合物包括如下重量份数的制备原料：黄巧12份、黄 连3份、丹参8份、陈皮3份和甘草4份。
[0011] 优选地，所述含黄巧的中药组合物的制备方法包括如下步骤： A)称取黄巧，切片，加入25~45%体积百分含量的乙醇溶液，加热回流提取2~3次，滤过， 合并滤液，减压浓缩至相对密度1. 10-1. 25的浸膏，保留滤渣； B)称取黄连、丹参、陈皮和甘草，与所述滤渣混匀后粉碎，加入50~75%体积百分含量的 乙醇溶液浸泡1~化，煎煮3~6h，滤过，收集滤液，减压浓缩至相对密度1. 10-1. 25的浸膏； C)将步骤A)得到的浸膏与步骤B)得到的浸膏混匀，采用真空带式干燥机将浸膏制成 干膏粉，即得含黄巧的中药组合物。
[0012] 更优选地，所述步骤C)中还包括将干膏粉与药学上可接受的附加剂混匀的步骤。
[0013] 此外，本发明还提供一种含黄巧的中药组合物，所述含黄巧的中药组合物包括如 下重量份数的制备原料：黄巧9~15份、黄连2~5份、丹参5~10份、陈皮2~5份和甘草2~5 份。
[0014] 所述含黄巧的中药组合物包括如下重量份数的制备原料：黄巧12份、黄连3份、丹 参8份、陈皮3份和甘草4份。
[0015] 相应地，本发明还提供含黄巧的中药组合物的制备方法，包括如下步骤： A)称取黄巧，切片，加入25~45%体积百分含量的乙醇溶液，加热回流提取2~3次，滤过， 合并滤液，减压浓缩至相对密度1. 10-1. 25的浸膏，保留滤渣； B)称取黄连、丹参、陈皮和甘草，与所述滤渣混匀后粉碎，加入50~75%体积百分含量的 乙醇溶液浸泡1~化，煎煮3~6h，滤过，收集滤液，减压浓缩至相对密度1. 10-1. 25的浸膏； C)将步骤A)得到的浸膏与步骤B)得到的浸膏混匀，采用真空带式干燥机将浸膏制成 干膏粉，即得含黄巧的中药组合物。
[0016] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明提供了黄巧药物组合物在制备治 疗乙型肝炎药物中的用途，通过黄巧药物组合物与恩替卡韦的联合用药，可显著增强抗乙 肝病毒的疗效，停药后不易发生反跳现象，防治复发。此外，本发明还提供一种含黄巧的中 药组合物，单独使用该中药组合物可抗乙肝病毒，达到治疗乙肝的效果，且不会出现明显的 反跳现象。
【附图说明】
[0017] 图1为PCR筛选的部分凝胶电泳图。
[0018] 图2为洗膜和放射自显影的操作流程图。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合附图和实施例对本发明做进一步详细说明。
[0020] 实施例一含黄巧的中药组合物 含黄巧的中药组合物包括如下重量份数的制备原料：黄巧12份、黄连3份、丹参8份、 陈皮3份和甘草4份。
[0021] 制备方法包括如下步骤： A) 称取黄巧，切片，加入30%体积百分含量的乙醇溶液，加热回流提取2次，滤过，合并 滤液，减压浓缩至相对密度1. 20的浸膏，保留滤渣； B) 称取黄连、丹参、陈皮和甘草，与所述滤渣混匀后粉碎，加入60%体积百分含量的乙 醇溶液浸泡化，煎煮化，滤过，收集滤液，减压浓缩至相对密度1. 20的浸膏； C) 将步骤A)得到的浸膏与步骤B)得到的浸膏混匀，采用真空带式干燥机将浸膏制成 干膏粉，干燥溫度为55°C，即得含黄巧的中药组合物。
[0022] 实施例二含黄巧的中药组合物 含黄巧的中药组合物包括如下重量份数的制备原料：黄巧15份、黄连5份、丹参6份、陈皮5份和甘草5份。
[0023]制备方法包括如下步骤： A) 称取黄巧，切片，加入40%体积百分含量的乙醇溶液，加热回流提取2次，滤过，合并 滤液，减压浓缩至相对密度1. 15的浸膏，保留滤渣； B) 称取黄连、丹参、陈皮和甘草，与所述滤渣混匀后粉碎，加入75%体积百分含量的乙 醇溶液浸泡比，煎煮化，滤过，收集滤液，减压浓缩至相对密度1. 20的浸膏； C) 将步骤A)得到的浸膏与步骤B)得到的浸膏混匀，采用真空带式干燥机将浸膏制成 干膏粉，干燥溫度为60°C，即得含黄巧的中药组合物。
[0024]实施例=含黄巧的中药组合物 含黄巧的中药组合物包括如下重量份数的制备原料：黄巧10份、黄连2份、丹参8份、陈皮3份和甘草3份。
[00巧]制备方法包括如下步骤： A) 称取黄巧，切片，加入30%体积百分含量的乙醇溶液，加热回流提取2次，滤过，合并 滤液，减压浓缩至相对密度1. 20的浸膏，保留滤渣； B) 称取黄连、丹参、陈皮和甘草，与所述滤渣混匀后粉碎，加入60%体积百分含量的乙 醇溶液浸泡化，煎煮化，滤过，收集滤液，减压浓缩至相对密度1. 20的浸膏； C) 将步骤A)得到的浸膏与步骤B)得到的浸膏混匀，采用真空带式干燥机将浸膏制成 干膏粉，干燥溫度为55°C，即得含黄巧的中药组合物。
[0026] 试验例一黄巧注射液联合恩替卡韦抗鸭乙肝病毒作用 试验动物：雄性一日龄龙岩麻鸭，购自花都神山解化场，体重约50克/只，常规饲养。 饲养环境：SPF级，溫度23°C~26°C，相对湿度60~80%，定时通风换气，每日约12小时光照。 饲料：宝鼎501小鸭饲料，购自穗屏企业有限公司饲料厂，符合饲料卫生标准。
[0027]主要试剂及仪器：NC膜购自Amersham公司柳BV质粒由广州中医药大学 热带病研究所病毒室提取保存；缺口翻译试剂盒购自promega公司；a-32p-dCTP由 Perki址ImerBoston，MA02118USA提供，产品批号为 20131101;Sep化dexG-50 购自 pHarmacia公司；XZ-4型旋片式真空累购自浙江临海市精工真空设备厂；酶联免疫检测仪 购自国营华东电子管厂；96孔杂交点样器购自美国Bio-rad公司；盖革氏计数器购自美国 S.E.International公司；先天性引物：根据Genebank公布的D皿V全序列设计的特异性 引物由英伟创津(上海)公司合成；PCR扩增化t购自广州瑞真生物技术有限公司；其他试剂 均为常规市售试剂。
[0028] 、PCR筛选先天性感染D皿V维鸭实验 将第一次采集的鸭血收集血清，用DNA提取液进行血清DNA提取，提取液组成：0. 2mol/L化0H，l%(w/v)SDS;取20化血清，加入60化提取液，混匀后室溫放置lOmin;再加入80yL 异丙醇，混匀后4°[，13000巧111离屯、7111；[]1，弃上清，再加入40%异丙醇，10000巧1]1离屯、5111；[]1 洗1次，然后用20yL去离子水溶解沉淀。用PCR方法扩增检测畑BV，结果W1. 5%琼脂电 泳判断。
[002引 PCR引物序列：上游引物：5'gatccactcctgggaaacaa3'，下游引物： 5>C3g曰C曰gcgtggct曰曰ttg曰3>0
[0030] 反应体系：25yL/ 管，DNAtemplate22yLdNTP2yL(100pm)primers 0. 5yLlOxbuffer2. 5yLTaq酶 0. 25yL补 &0 至 25yL总体积。
[0031] 扩增条件：阶段 1 :94°C5min;阶段 2 :94°C30s;阶段 3 :56°C45s;阶段 4 :72°C 45min;阶段5 :返回到阶段2, 29个循环；阶段6 :72°ClOmin。
[0032] 反应产物大小约为：598bp。所有PCR产物均W1. 5%琼脂糖电泳判断产，阳性为在