专利名称：：一种抗肝癌的壁虎藤梨根复方制剂的制作方法
技术领域：
：本发明属于中药领域，具体地说是涉及一种抗肝癌的壁虎藤梨根复方制剂。
背景技术：
：人类在探索治疗癌症药物的长期过程中发现，从自然界具抗癌作用的动物、植物和微生物中提取分离抗癌有效活性成分，是筛选抗癌药物最有效和最可行的研究方法。肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，因其恶性度高，病情发展快，治疗难度大，疗效差，人称"癌中之王"。藤梨根为猕猴桃科软枣猕猴桃的根，能清热解毒、开胃止痛。壁虎粉为壁虎科动物无蹼壁虎的全体，咸寒有小毒，能散结破血，解毒抗肿瘤，两者均属祛邪之药。藤梨根全株富含猕猴桃碱、根含熊果酸、齐墩果酸、琥珀酸、胡萝卜甙以及精氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丙氨酸、天门冬氨酸等并富含Fe、Cu、Mn、Se等元素成分(韦金育等，中越猕猴桃根提取物抗肿瘤作用的实验研究，广西中医药，2003，26(6):49)。壁虎粉中含有蛋白质、脂肪、组织胺类、氨基酸，还含有与马峰毒相似的有毒物质，近几年，其被广泛的应用于临床治疗多种疾病，特别是在治疗各种恶性肿瘤、结核病、骨髓病以及外科抗感染等多种疑难杂症，均有确切疗效。中药复方是中医的精华所在，从中药复方中分离得到其有效部位以及有效成份，能够有效的去除复方提取物中无效或有毒性的成份。中药的提取分离方法很多，常用的提取方法有水提、有机溶液或利用酸碱溶液提取、超临界流体提取等。浸提液需再进行分离，分离方法有萃取、分馏、沉淀、色谱柱(硅胶、氧化铝、聚酰胺、树脂、凝胶)等。在我国民间散落着很多的单、验方，这些药方在治疗癌症方面常常有良好的效果。
发明内容本发明的箱的在于利用大孔吸附树脂，将民间验方——藤梨根壁虎粉中的有效成份进行提取分离工作，从而得到一种具有明显抗肝癌细胞、且活性较高、毒性较低的壁虎藤梨根复方制剂。本发明的目的是通过如下的技术方案实现的本发明提供的抗肝癌的壁虎藤梨根复方制剂，是将米炒后壁虎干粉体和藤梨根一起进行水提取，将水提取液进行大孔吸附树脂分离而得到的，其具体制备方法包括如下步骤1)米炒壁虎粉的制备-将市售的壁虎粉和大米按照重量比36:1混合均匀，然后放入砂锅内进行翻炒，直至大米深黄色，去米，取出壁虎粉晾凉；2)壁虎粉和藤梨根水提取物的制备将步骤l)的壁虎粉和藤梨根按重量比l:39混合后，加入蒸馏水，加热回流进行浸提，得到壁虎藤梨根的水提取液；浸提时加入水的体积与壁虎藤梨根混合物的重量比例为1015ml:lg;回流提取时间优选36小时；回流提取次数优选13次；3)水提取物进行大孔吸附树脂分离首先将歩骤2)所得的壁虎藤梨根水提取产物，用水稀释510倍后缓慢倒入处理好的大孔吸附树脂(型号为AB—8)柱子中，吸附平衡。用纯水不断的洗脱柱子，洗脱56倍柱体积后，收集洗脱液；洗脱液在3045'C旋转蒸发除去溶剂，直至得到浅棕色膏状物，真空干燥24h，得到水提壁虎藤梨根的水洗脱部分，即为抗肝癌的壁虎藤梨根复方制剂；将本发明提供的抗肝癌的壁虎藤梨根复方制剂(水提壁虎藤梨根水洗脱部分)进行抑制肿瘤细胞实验，结果表明，该部分对肝癌细胞株Bel—7402具有抑制效果，在高浓度下抑制率可达到93.4%，表明其可以用于制备治疗肝癌的药物。具体实施例方式实施例l、制备壁虎藤梨根的水提取物I将市售的壁虎粉和大米按照质量比4:l混合均匀，然后放入炒锅内进行翻炒，直至大米深皿，去米，取出壁虎粉晾凉，得到米炒壁虎粉。分别称量315克藤梨根和45克壁虎粉，混合均匀。加入4500ml水，回流4小时，进行提取；回流浸提3次，合并浸提液，得到壁虎藤梨根的水浸提液。将水提取得到的壁虎藤梨根浸提液稀释5倍，缓慢倒入处理好的大孔吸附树脂柱中(AB—8)，不断用纯水洗脱，收集5个柱体积。将收集到的洗脱液在38C旋转蒸发，除去溶剂，直至得到棕色膏状物，真空干燥24h，得到水提壁虎藤梨根的水洗脱部分I。实施例2、制备壁虎藤梨根的水提取物II将市售的壁虎粉和大米按照质量比3:l混合均匀，然后放入炒锅内进行翻炒，直至大米深黄色，去米，取出壁虎粉晾凉，得到米炒壁虎粉。分别称量135克藤梨根和45克壁虎粉，混合均匀。加入1800ml水，回流3小时，进行提取；回流浸提2次，合并浸提液，得到壁虎藤梨根的水浸提液。将水提取得到的壁虎藤梨根浸提液稀释10倍，缓慢倒入处理好的大孔吸附树脂柱中(AB—8)，不断用纯水洗脱，收集6个柱体积。将收集到的洗脱液在3(TC旋转蒸发，除去溶剂，直至得到棕色膏状物，真空干燥24h，得到水提壁虎藤梨根的水洗脱部分II。实施例3、制备壁虎藤梨根的水提取物III将市售的壁虎粉和大米按照质量比6:l混合均匀，然后放入炒锅内进行翻炒，直至大米深黄色，去米，取出壁虎粉晾凉，得到米炒壁虎粉。分别称量405克藤梨根和45克壁虎粉，混合均匀。加入6750ml水，回流6小时，进行提取，得到壁虎藤梨根的水浸提液。将水提取得到的壁虎藤梨根浸提液稀释7倍，缓慢倒入处理好的大孔吸附树脂柱中(AB—8)，不断用纯水洗脱，收集6个柱体积。将收集到的洗脱液在45'C旋转蒸发，除去溶剂，直至得到棕色膏状物，真空千燥24h，得到水提壁虎藤梨根的水洗脱部分III。实施例4、水提壁虎藤梨根水洗脱部分细胞实验细胞株肝癌细胞株Bel—7402由上海细胞所提供筛选方法磺酰罗丹明B(SulforhodamineB，SRB)蛋白染色法；作用时间72小时实验单位国家新药筛选中心将实施树1得到的水提壁虎藤梨根纯水洗脱部分I进行抑制肿瘤的细胞实验。实验的方法为取对数生长期的肝癌细胞株Bel-7402接种于96孔培养板，将细胞置于37°C、5%(302培养箱中预贴壁24小时后，弃去上清液，加入不同浓度的壁虎藤梨根水洗脱部分。每个浓度设有三复孔。并设有相应浓度的生理盐水溶媒对照及无细胞凋零孔。肿瘤细胞在37'C，5%(:02条件下培养72小时，倾去培养液，依次加入SRB溶液和三羟甲基氨及甲垸(Tris)溶液，在515nm波长下酶标仪下测定各孔吸光度。并按下式进行计算，结果列于表l。细胞抑制率％=(对照細值—实魏。D值)x咖对照组OD值表l、水提壁虎藤梨根纯水洗脱部分对肝癌细胞株Bel-7402的抑制实验<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>上述结果表明，本发明提供的水提壁虎藤梨根纯水洗脱部分对肝癌细胞株Bd—7402具有很好的抑制效果，在高浓度下细胞抑制率达到93.36%。在该试验的前期阶段，尝试将水提壁虎藤梨根总提取物，进行体外细胞(细胞试验单位国家新药筛选中心)和体内动物试验(动物实验单位中国中医研究院西苑医院)。体外细胞试验表明，总提取物对肝癌细胞具有很强的针对性和较高活性。体内动物试验结果表明，该水提取物在小鼠体内同样具有生物活性，给药组的瘤重与肿瘤对照组比较显著降低(P<0.05)。总提取产物在体内具有生物活性，但存在喂药量偏大的弊端。于是将水提产物进行了进一步的大孔吸附树脂分离实验，经细胞试验证实，分离得到的纯水洗脱部分具有较高的生性，而且在对该部分中所含有效成分的进一步分离和鉴定工作中，发现其主要含^ll类和苷类物质。这类物质不仅水溶性极好而且具有很高的生理活性，很有希望开发成为新型的抗肿瘤新药。权利要求1、一种抗肝癌的壁虎藤梨根复方制剂，是将米炒后壁虎干粉体和藤梨根一起进行水提取，将水提取液进行大孔吸附树脂分离而得到的，其具体制备方法包括如下步骤1)米炒壁虎粉的制备将市售的壁虎粉和大米按照重量比3～6∶1混合均匀，然后放入砂锅内进行翻炒，直至大米深黄色，去米，取出壁虎粉晾凉；2)壁虎粉和藤梨根水提取物的制备将步骤1)的壁虎粉和藤梨根按重量比1∶3～9混合后，加入蒸馏水，加热回流进行浸提，得到壁虎藤梨根的水提取液；3)水提取物进行大孔吸附树脂分离首先将步骤2)所得的壁虎藤梨根水提取产物，用水稀释5～10倍后缓慢倒入处理好的大孔吸附树脂柱子中，吸附平衡。用纯水不断的洗脱柱子，洗脱5～6倍柱体积后，收集洗脱液；洗脱液在30～45℃旋转蒸发除去溶剂，直至得到浅棕色膏状物，真空干燥24h，得到水提壁虎藤梨根的水洗脱部分，即为抗肝癌的壁虎藤梨根复方制剂。2、如权利要求1所述的抗肝癌的壁虎藤梨根复方制剂，其特征在于所述歩骤2)中浸提时加入水的体积与壁虎藤梨根混合物的重量比例为1015ml:lg。3、如权利要求1所述的抗肝癌的壁虎藤梨根复方制剂，其特征在于所述歩骤2)中回流提取时间为36小时。4、如权利要求1所述的抗肝癌的壁虎藤梨根复方制剂，其特征在于所述歩骤2)中回流提取次数为13次。5、如权利要求1所述的抗肝癌的壁虎藤梨根复方制剂，其特征在于所述歩骤3)中的大孔吸附树脂柱子的型号为AB—8。6、权利要求1至5之一所述的抗肝癌的壁虎藤梨根复方制剂在制备抗肝癌药物中的用途。全文摘要本发明涉及一种抗肝癌的壁虎藤梨根复方制剂，其为将米炒后壁虎干粉体和藤梨根一起进行水提取，将水提取液进行大孔吸附树脂分离而得到的。将该抗肝癌的壁虎藤梨根复方制剂进行抑制肿瘤细胞实验，结果表明，该部分对肝癌细胞株Bel-7402具有抑制效果，在高浓度下抑制率可达到93.4％，表明其可以用于制备治疗肝癌的药物。文档编号A61K36/185GK101172120SQ20061011430公开日2008年5月7日申请日期2006年11月3日优先权日2006年11月3日发明者向俊锋,唐亚林,虹张,玮戴,烨管申请人:中国科学院化学研究所