专利名称：一种的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物及其制备方法。
背景技术：
18F-FDG显像原理FDG是葡萄糖的类似物，进入细胞后代谢为FDG-6-磷酸，但是，与葡萄糖-6-磷酸不同，前者不能进一步代谢而滞留在细胞内。因此，根据滞留在组织中的FDG，可以得到葡萄糖的代谢率。
肿瘤显像肿瘤细胞和正常组织细胞具有不同的糖代谢机制，在肿瘤细胞中由于葡萄糖转运mRNA的表达增加，葡萄糖转运蛋白Glut1和Glut3水平升高，己糖激酶水平升高，葡萄糖-6-磷酸酶水平下调等多因素的作用，使得18FDG与葡萄糖一样，在肿瘤细胞中的摄取增加。因此，用PET可以准确显示肿瘤部位的18FDG摄取明显高于正常组织。
脑代谢显像脂肪酸、葡萄糖等多种营养物质可以是心脏能量来源，而脑的代谢与心脏不同，它几乎全部以葡萄糖作为其能源物质。18FDG是葡萄糖的类似物，广泛用于脑代谢研究和肿瘤诊断等方面。18FDG/PET显像有助于多种神经疾病的诊断，从分子水平评价脑神经细胞的代谢，从而早期诊断疾病，主要用于癫痫、AD、HD等功能性疾病。
由于18FDG费用较高，需要医用回旋加速器和PET显像仪器，设备普及率不高(全国60余台)、半衰期较短(18F半衰期为108min)，不易普及，而99mTc价格低廉，方便易得，半衰期和能量均适宜(T1/2＝6.0h；γ150keV)，显像设备SPECT普及率较高(全国500台)，因此近年来临床上需要发展99mTc标记的葡萄糖类似物。杨大卫等人在《放射学》杂志2003年第226期第465-473页(David J.Yang，Chang-Guhn Kim，et alRadiology，2003，226465-473)公开了一种99mTc标记的葡萄糖类似物99mTc-EC-DG，EC-DG的结构如下 因此研制一种价格低廉、方便易得、半衰期和能量均适宜、更高的靶/非靶比值、设备普及并且肿瘤摄取高的葡萄糖衍生物配合物就成为本技术领域急待解决的问题。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种肿瘤摄取高的葡萄糖衍生物配合物-99mTc或188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物。
本发明的目的是通过以下技术方案达到的方案一一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物，其核中间体为[99mTcO]3+、[188ReO]3+、[186ReO]3+、[99mTcN]2+、[188ReN]2+、[186ReN]2+、[99mTc(CO)3(H2O)3]1+、[188Re(CO)3(H2O)3]1+或[186Re(CO)3(H2O)3]1+，其配位体结构通式如下(1)，配位体的数量为2
R＝methyl-、ethyl-、propyl-、isopropyl-、butyl-、isobutyl-方案二一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物，其核心为[99mTcN]2+、[188ReN]2+或[186ReN]2+，其共配体为99mTcN-PNP、188ReN-PNP或186ReN-PNP，其配位体为下述通式(1) R＝methyl-、ethyl-、propyl-、isopropyl-、butyl-、isobutyl-所述PNP为下述结构之一
本发明的另一目的是提供上述99mTc或188/186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备方法。
本发明的上述目的是通过以下技术方案达到的方案一一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备方法，其步骤如下(1)葡萄糖衍生物的合成
(2)[99mTcN]2+、[188ReN]2+、[186ReN]2+核中间体的制备西林瓶中加入SDH(丁二酰二酰肼，结构是NH2NHCOCH2CH2CONHNH2)和PDTA(1，2-丙二胺四乙酸)，其结构如下 再加入适量NaOH和去离子水使之溶解，用HCl调pH＝7.4；加入Na99mTcO4或Na188Re O4或Na186Re O4溶液后，迅速加入SnCl2溶液，室温下反应，得核中间体；(3)99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备调节步骤(2)所得核中间体的pH＝8.0，加入步骤(1)合成的葡萄糖衍生物的水-乙醇溶液，室温下反应，得99mTc或188/186Re标记的葡萄糖衍生物配合物。
方案二一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备方法，其步骤如下(1)葡萄糖衍生物的合成
(2)99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备在步骤(1)合成的葡萄糖衍生物中加入适量的水和乙醇制成溶液，加入Na99mTcO4或Na188ReO4或Na186ReO4，加入SnCl2溶液，调pH＝8.0～8.5，室温下反应20min，用0.2μm滤膜过滤，得[99mTcO]3+、[188ReO]3+、[186ReO]3+标记的葡萄糖衍生物配合物。
方案三一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备方法，其步骤如下(1)葡萄糖衍生物的合成
(2)[99mTc(CO)3(H2O)3]1+、[188Re(CO)3(H2O)3]1+或[186Re(CO)3(H2O)3]1+核中间体的制备将酒石酸钠钾和碳酸钠加入到西林瓶中，再迅速加入硼氢化钠，加水，压盖密封，通一氧化碳；加入Na99mTcO4或Na188Re O4或Na186Re O4溶液，在再80℃下反应，得核中间体；(3)99mTc或188/186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备调节步骤(2)所得核中间体的pH＝8.0，加入步骤(1)合成的葡萄糖衍生物的溶液，65～75℃反应，再冷却至室温，得99mTc或188/186Re标记的葡萄糖衍生物配合物。
方案四一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备方法，其步骤如下(2)葡萄糖衍生物的合成
(2)[99mTcN-PNP]2+、[188/186ReN-PNP]2+核中间体的制备西林瓶中加入SDH(丁二酰二酰肼，结构是NH2NHCOCH2CH2CONHNH2)和PDTA(1，2-丙二胺四乙酸)，其结构如下 再加入适量NaOH和去离子水使之溶解，用HCl调pH＝7.4；加入Na99mTcO4或Na188Re O4或Na186Re O4溶液后，迅速加入SnCl2溶液，
室温下反应，得核中间体；(3)99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备调节步骤(2)所得核中间体的pH＝7.5～8.0，加1入步骤(1)合成的葡萄糖衍生物的水-乙醇溶液和PNP，在80℃水浴下反应，得99mTc或188/186Re标记的葡萄糖衍生物配合物。
有益效果本发明合成的[99mTcO]3+、[188ReO]3+、[186ReO]3+、[99mTcN]2+、[188ReN]2+、[186ReN]2+、99mTcN-PNP、188ReN-PNP、186ReN-PNP、[99mTc(CO)3]1+、[188Re(CO)3]1+、[186Re(CO)3]1+的葡萄糖衍生物配合物具有一定的肿瘤摄取，可用于肿瘤诊断显像或治疗。其荷瘤鼠实验证明，比99mTc标记的葡萄糖类似物99mTc-EC-DG的肿瘤摄取更高，是具有良好应用前景的葡萄糖衍生物肿瘤显像剂。
下面通过具体实施方式
对本发明做进一步说明，但并不意味着对本发明保护范围的限制。
具体实施例方式
(一)、葡萄糖衍生物的合成化合物1的合成R＝methyl将0.0547mol甲胺和5mL甲醇加入到单口圆底烧瓶中，再将0.045mol葡萄糖加入，单口烧瓶上接装有冰盐混合物的冷阱，搅拌状态下加热至60℃，直至产生胶状物。加入30mL60℃热的乙醇，继续搅拌直至胶状物溶解然后又重新形成。此胶状物在室温条件下搅拌过夜。将20mL乙醇和0.161mol二硫化碳的混合物加入，加热，使体系低于50℃反应1小时。室温下静置一天，冰箱冷藏(-4℃)一天，得淡黄色晶体。过滤，用乙醇-水溶液重结晶，得白色晶体。
产物产率46％；产物元素分析结果实测值N 5.23，C 35.60和H 5.77％；理论值N 5.20，C35.67和H 5.61％；质谱分析MS(ESI)实测值291.9[M+Na]+，理论值291.9；H1-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)4.39(d，1H，J＝12.96Hz)，3.91(d，1H，J＝12.47Hz)，3.85(m，1H)，3.82(m，1H)，3.80(m，1H)，3.76(m，1H)，3.62(m，1H)，3.40(m，1H)，3.37(m，1H)，3.20(m，1H)，2.51(broad s，5H)；IR(KBr)3363，3252，2932，1519，1399，1301，1253，1125，1096，1026cm-1。化合物4的合成R＝isopropyl-将0.0547mol异丙胺和5mL甲醇加入到单口圆底烧瓶中，再将0.045mol葡萄糖加入，单口烧瓶上接冷凝管，搅拌状态下加热至60℃，直至产生胶状物。将30mL热的乙醇(60℃)加入，继续搅拌直至胶状物溶解然后又重新形成。此胶状物在室温条件下搅拌过夜。将20mL乙醇和0.161mol二硫化碳的混合物加入，加热，使体系低于50℃反应1小时。室温下静置一天，冰箱冷藏(-4℃)一天，得乳白色晶体。过滤，用乙醇-水溶液重结晶，得白色晶体。
产物产率41％；产物元素分析结果实测值N 4.80，C 40.51和H 6.42％；理论值N 4.71，C40.39和H 6.44％；质谱分析MS(ESI)实测值296.0[M-H]-，理论值296.0；
H1-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)4.24(d，1H，J＝13.27Hz)，4.15(d，1H，J＝12.68Hz)，3.93(s，1H)，3.86(s，1H)，3.78(m，1H)，3.65(d，1H，J＝8.65Hz)，3.59(d，1H，J＝10.53)，3.40(m，1H)，2.51(broad s，5H)，1.20(m，3H)，1.14(m，3H)；IR(KBr)3307，2966，2943，1490，1402，1368，1288，1236，1196，1083，1068，1039cm-1。
化合物6的合成R＝isobutyl-将0.0547mol异丁胺和5mL甲醇加入到单口圆底烧瓶中，再将0.045mol葡萄糖加入，单口烧瓶上接冷凝管，搅拌状态下加热至60℃，直至产生胶状物。将30mL热的乙醇(60℃)加入，继续搅拌直至胶状物溶解然后又重新形成。此胶状物在室温条件下搅拌过夜。将20mL乙醇和0.161mol二硫化碳的混合物加入，加热，使体系低于50℃反应1小时。室温下静置一天，冰箱冷藏(-4℃)一天，得乳白色晶体。过滤，用乙醇-水溶液重结晶，得白色晶体。
产物产率47％；产物元素分析结果实测值N 4.46，C 42.42和H 6.86％；理论值N 4.50，C42.42和H 6.80％；质谱分析MS(ESI)实测值310.1[M-H]-，理论值310.09；H1-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)4.18(d，1H，J＝13.21 Hz)，4.11(m，1H)，3.95(d，1H，J＝7.21Hz)，3.86(d，1H，J＝6.62Hz)，3.79(m，1H)，3.73(m，1H)，3.67(m，1H)，3.41(m，1H)，2.51(broad s，5H)，1.56(m，2H)，1.12(m，3H)，0.86(m，3H)；IR(KBr)3361，2962，2933，1488，1382，1316，1293，1236，1186，1078，1033cm-1。化合物2的合成R＝ethyl-
将0.0547mol乙胺和5mL甲醇加入到单口圆底烧瓶中，再将0.045mol葡萄糖加入，单口烧瓶上接冷凝管，搅拌状态下加热至60℃，直至产生胶状物。将30mL热的乙醇(60℃)加入，继续搅拌直至胶状物溶解然后又重新形成。此胶状物在室温条件下搅拌过夜。将20mL乙醇和0.161mol二硫化碳的混合物加入，加热，使体系低于50℃反应1小时。室温下静置一天，冰箱冷藏(-4℃)一天，得白色晶体。过滤，用乙醇-水溶液重结晶，得白色晶体。
产物产率44％；产物元素分析结果实测值N 4.76，C 38.29和H 5.67％；理论值N 4.94，C38.15和H 6.05％；质谱分析MS(ESI)实测值306.0[M+Na]+，理论值306.0；H1-NMR(500MHz，D2O)δ(ppm)4.69(s，1H)，4.04(s，2H)，3.78(m，1H)，3.76(m，1H)，3.72(m，1H)，3.62(m，1H)，3.56(m，1H)，3.52(m，1H)，1.15(t，3H，J＝7.18Hz)；IR(KBr)3300，2945，2938，1509，1428，1372，1323，1276，1241，1204，1123，1088，1031cm-1。
化合物3的合成R＝propyl-将0.0547mol丙胺和5mL甲醇加入到单口圆底烧瓶中，再将0.045mol葡萄糖加入，单口烧瓶上接冷凝管，搅拌状态下加热至60℃，直至产生胶状物。将30mL热的乙醇(60℃)加入，继续搅拌直至胶状物溶解然后又重新形成。此胶状物在室温条件下搅拌过夜。将20mL乙醇和0.161mol二硫化碳的混合物加入，加热，使体系低于50℃反应1小时。室温下静置一天，冰箱冷藏(-4℃)一天，得乳白色晶体。过滤，用乙醇-水溶液重结晶，得白色晶体。
产物产率51％；产物元素分析结果实测值N 4.85，C 40.37和H 6.59％；理论值N 4.71，C40.39和H 6.44％；质谱分析MS(ESI)实测值320.0[M+Na]+，理论值320.0；H1-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)4.44(d，1H，J＝13.39Hz)，4.34(d，1H，J＝12.77)，3.92(s，1H)，3.83(m，1H)，3.77(m，1H)，3.63(m，1H)，3.61(m，1H)，3.59(m，1H)，3.39(m，1H)，2.51(broad s，5H)，1.61(m，2H)，0.88(t，3H，J＝7.31)；IR(KBr)3323，2966，2944，1505，1462，1425，1375，1324，1292，1252，1201，1129，1079，1016cm-1。
化合物5的合成R＝butyl-时将0.0547mol丁胺和5mL甲醇加入到单口圆底烧瓶中，再将0.045mol葡萄糖加入，单口烧瓶上接冷凝管，搅拌状态下加热至60℃，直至产生胶状物。将30mL热的乙醇(60℃)加入，继续搅拌直至胶状物溶解然后又重新形成。此胶状物在室温条件下搅拌过夜。将20mL乙醇和0.161mol二硫化碳的混合物加入，加热，使体系低于50℃反应1小时。室温下静置一天，冰箱冷藏(-4℃)一天，得乳白色晶体。过滤，用乙醇-水溶液重结晶，得白色晶体。
产物产率49％；产物元素分析结果实测值N 4.37，C 42.61和H 6.69％；理论值N 4.50，C42.42和H 6.80％H1-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)4.21(d，1H，J＝13.28Hz)，4.07(m，1H)，3.89(d，1H，J＝7.19)，3.83(m，1H)，3.76(m，1H)，3.70(m，1H)，3.63(m，1H)，3.44(m，1H)，3.09(m，1H)，2.51(broad s，5H)，1.57(m，2H)，1.42(m，2H)，0.93(m，3H)；IR(KBr)3318，2957，2939，1491，1439，1375，1319，1289，1252，1197，1079，1016cm-1。
(二)葡萄糖衍生物配合物的制备实施例之一[99mTcO]3+或[188ReO]3+或[186ReO]3+核标记化合物的制备1.[99mTcO]3+核标记化合物的结构 R＝methyl-、ethyl-、propyl-、isopropyl-、butyl-、isobutyl-分别对应化合物1、2、3、4、5、6实施例1.1[99mTcO]3+核标记化合物12mg化合物1中加入0.5mL水和0.5mL乙醇制成溶液，加入0.3mL(10mCi/ml)新淋洗的Na99mTcO4，迅速加入0.2mlSnCl2溶液(1mg/mL，0.1NHCl)，调pH＝8.0～8.5，室温下反应20min，用0.2μm滤膜过滤，TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/硅胶)，计算标记率，标记率99.26％，HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为17.20min，99.94％。
实施例1.2[99mTcO]3+核标记化合物32mg化合物3中加入0.5mL水和0.5mL乙醇制成溶液，加入0.3mL(10mCi/mL)新淋洗的Na99mTcO4，迅速加入0.2mlSnCl2溶液(1mg/mL，0.1NHCl)，调pH＝8.0～8.5，室温下反应20min，用0.2μm滤膜过滤，TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/硅胶)，计算标记率，标记率大于99％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.60min，99.93％。
实施例1.3[99mTcO]3+核标记化合物62～3mg化合物6中加入0.5mL水和0.5mL乙醇制成溶液，加入0.3mL(10mCi/mL)新淋洗的Na99mTcO4，迅速加入0.2mlSnCl2溶液(1mg/mL，0.1NHCl)，调pH＝8.0～8.5，室温下反应20min，用0.2μm滤膜过滤，TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/硅胶)，计算标记率，标记率大于99％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.70min，86.0 3+核标记化合物22mg化合物2中加入0.5mL水和0.5mL乙醇制成溶液，加入0.3mL(10mCi/ml)新淋洗的Na99mTcO4，迅速加入0.2mlSnCl2溶液(1mg/mL，0.1NHCl)，调pH＝8.0～8.5，室温下反应20min，用0.2μm滤膜过滤，TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/硅胶)，计算标记率，标记率99.69％，HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.60min，99.93％。
3+核标记化合物42mg化合物4中加入0.5mL水和0.5mL乙醇制成溶液，加入0.3mL(10mCi/ml)新淋洗的Na99mTcO4，迅速加入0.2mlSnCl2溶液(1mg/mL，0.1NHCl)，调pH＝8.0～8.5，室温下反应20min，用0.2μm滤膜过滤，TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/硅胶)，计算标记率，标记率大于99％，HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.70min，99.51％。
3+核标记化合物52mg化合物5中加入0.5mL水和0.5mL乙醇制成溶液，加入0.3mL(10mCi/ml)新淋洗的Na99mTcO4，迅速加入0.2mlSnCl2溶液(1mg/mL，0.1NHCl)，调pH＝8.0～8.5，室温下反应20min，用0.2μm滤膜过滤，TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/硅胶)，计算标记率，标记率99.54％，HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.60min，99.35％。
2.[188ReO]3+或[186ReO]3+核标记化合物的结构 R＝methyl-、ethyl-、propyl-、isopropyl-、butyl-、isobutyl-分别对应化合物1、2、3、4、5、6实施例1.4[188Re O]3+核标记化合物12mg化合物1中加入0.5mL水和0.5mL乙醇制成溶液，加入0.3mL(10mCi/ml)新淋洗的Na188Re O4，迅速加入0.2mLSnCl2溶液(1mg/mL，0.1NHCl)，调pH＝8.0～8.5，室温下反应20min，用0.2μm滤膜过滤，TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/硅胶)，计算标记率，标记率99.26％，HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为17.10min，99.91％。
实施例1.5[188Re O]3+核标记化合物32mg化合物3中加入0.5mL水和0.5mL乙醇制成溶液，加入0.3mL(10mCi/mL)新淋洗的Na188Re O4，迅速加入0.2mLSnCl2溶液(1mg/mL，0.1NHCl)，调pH＝8.0～8.5，室温下反应20min，用0.2μm滤膜过滤，TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/硅胶)，计算标记率，标记率大于99％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.20min，99.87％。
实施例1.6[188ReO]3+核标记化合物62～3mg化合物6中加入0.5mL水和0.5mL乙醇制成溶液，加入0.3mL(10mCi/mL)新淋洗的Na188Re O4，迅速加入0.2mLSnCl2溶液(1mg/mL，0.1NHCl)，调pH＝8.0～8.5，室温下反应20min，用0.2μm滤膜过滤，TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/硅胶)，计算标记率，标记率大于99％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.30min，89.00％；17.90min，10.01％。
实施例之二[[99mTcN]2+或[188Re N]2+或[186Re N]2+核标记化合物的制备1.[99mTcN]2+核标记化合物的结构 R＝methyl-、ethyl-、propyl-、isopropyl-、butyl-、isobutyl-分别对应化合物1、2、3、4、5、61.1.[99mTcN]2+核中间体的制备西林瓶中加入5mgSDH(丁二酰二酰肼，结构是NH2NHCOCH2CH2CONHNH2)和5mgPDTA，即1，2-丙二胺四乙酸，其结构如下
再加入适量1N NaOH和去离子水使之溶解，用1N HCl调pH＝7.4。将Na99mTcO4溶液(0.3～0.5mL，1～20mCi)加入，迅速加入30μlLSnCl2溶液(1mg/mL，1N HCl)，室温下反应15min.TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率。标记率大于99％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。
2+核中间体的HPLC保留时间为3.00min。
1.2.[99mTcN]2+核标记化合物的制备调节上述99mTcN核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。
实施例2.1[99mTcN]2+核标记化合物1调节上述99mTcN核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物1的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率99.15％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.60min，99.79％。
实施例2.2[99mTcN]2+核标记化合物4
调节上述99mTcN核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物4的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率98.49％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.60min，14.24％；17.40min，85.52％。
实施例2.3[99mTcN]2+核标记化合物6调节上述99mTcN核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物6的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率98.67％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为23.60min，99.55％。
2+核标记化合物2调节上述99mTcN核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物2的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率99.46％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.60min，99.80％。
2+核标记化合物3调节上述99mTcN核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物3的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率99.58％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为17.20min，99.34％。
2+核标记化合物5调节上述99mTcN核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物3的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率99.31％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为18.10min，99.59％。
2.[188Re N]2+核标记化合物的制备[188Re N]2+核标记化合物的结构
R＝methyl-、ethyl-、propyl-、isopropyl-、butyl-、isobutyl-分别对应化合物1、2、3、4、5、62.1.[188ReN]2+核中间体的制备西林瓶中加入5mgSDH(丁二酰二酰肼，结构是NH2NHCOCH2CH2CONHNH2)和5mgPDTA，即1，2-丙二胺四乙酸，其结构如下 再加入适量1N NaOH和去离子水使之溶解，用1N HCl调pH＝7.4。将Na188Re O4溶液(0.3～0.5mL，1～20mCi/mL)加入，迅速加入30μlLSnCl2溶液(1mg/mL，1N HCl)，室温下反应15min.TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率。标记率大于99％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。[188ReN]2+核中间体的HPLC保留时间为3.20min。
2.2.[188ReN]2+核标记化合物的制备调节上述[188ReN]2+核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。
实施例2.4[188ReN]2+核标记化合物1调节上述[188Re N]2+核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物1的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率99.15％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.60min，99.35％。
实施例2.5[188ReN]2+核标记化合物4调节上述[188ReN]2+核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物4的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率98.49％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.60min，12.35％；17.10min，86.43％。
实施例2.6[188ReN]2+核标记化合物6调节上述[188ReN]2+核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物6的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率98.67％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为23.60min，99.55％。
实施例之三[99mTcN]3+或[188ReN]2+或[186ReN]2+核心与PNP、化合物(1～5)混配的99mTc配合物制备1.[99mTcN]2+-PNP配合物的结构 R1＝methyl-、ethyl-、propyl-、isopropyl-、butyl-、isobutyl-PNP＝PNP5，PNP6，L6 其中R＝methyl-、ethyl-、propyl-、isopropyl-、butyl-、isobutyl-分别对应化合物1、2、3、4、5、6。
实施例3.1[99mTcN]2+核心与PNP6、化合物1混配的99mTc配合物制备调节上述99mTcN核中间体的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物1的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2～3mg/mL)和2mgPNP6，在80℃水浴下反应10min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率大于99％。HPLC监测(HPLC梯度条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～5min30％B；5～25min30％B～90％B)。HPLC保留时间为17.10min，98.84％。
实施例3.2[99mTcN]2+核心与PNP6、化合物3混配的99mTc配合物制备调节上述99mTcN核中间体的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物3的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2～3mg/mL)和2mgPNP6，在80℃水浴下反应10min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率大于97％。HPLC监测(HPLC梯度条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～5min30％B；5～25min30％B～90％B)。HPLC保留时间为18.70min，98.84％。
实施例3.3[99mTcN]2+核心与PNP6、化合物6混配的99mTc配合物制备调节上述99mTcN核中间体的pH＝7.5～8.0，加入6mL化合物3的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2～3mg/mL)和1.8mgPNP6，在80℃水浴下反应10min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率大于96％。HPLC监测(HPLC梯度条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～5min30％B；5～25min30％B～90％B)。HPLC保留时间为19.10min，98.84％。
实施例3.4[99mTcN]2+核心与PNP5、化合物1混配的99mTc配合物制备调节上述99mTcN核中间体的pH＝7.5～8.0，加入6mL化合物1的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2～3mg/mL)和2.0mgPNP5，在80℃水浴下反应10min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率大于96％。HPLC监测(HPLC梯度条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～5min30％B；5～25min30％B～90％B)。HPLC保留时间为17.10min，98.84％。
实施例3.5[99mTcN]2+核心与PNP5、化合物3混配的99mTc配合物制备调节上述99mTcN核中间体的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物3的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2～3mg/mL)和2mgPNP5，在80℃水浴下反应10min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率大于97％。HPLC监测(HPLC梯度条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～5min30％B；5～25min30％B～90％B)。HPLC保留时间为18.40min，98.84％。
实施例3.6[99mTcN]2+核心与PNP5、化合物6混配的99mTc配合物制备调节上述99mTcN核中间体的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物6的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2～3mg/mL)和2mgPNP5，在80℃水浴下反应10min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率大于97％。HPLC监测(HPLC梯度条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～5min30％B；5～25min30％B～90％B)。HPLC保留时间为19.20min，98.84％。
2.[188ReN]2+-PNP或[186ReN]2+-PNP配合物的结构 R1＝methyl-、ethyl-、propyl-、isopropyl-、butyl-、isobutyl-PNP＝PNP5，PNP6，L6 其中R＝methyl-、ethyl-、propyl-、isopropyl-、butyl-、isobutyl-分别对应化合物1、2、3、4、5、6。
实施例3.7 2+核心与PNP6、化合物1混配的188Re配合物制备调节上述[188ReN]2+核中间体的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物1的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2～3mg/mL)和2.0mgPNP6，在80℃水浴下反应10min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率大于99％。HPLC监测(HPLC梯度条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～5min30％B；5～25min30％B～90％B)。HPLC保留时间为17.00min，98.67％。
实施例3.8[188ReN]2+核心与PNP6、化合物3混配的188Re配合物制备调节上述[188ReN]2+核中间体的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物3的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2～3mg/mL)和2.0mgPNP6，在80℃水浴下反应10min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率大于97％。HPLC监测(HPLC梯度条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～5min30％B；5～25min30％B～90％B)。HPLC保留时间为18.60min，98.55％。
实施例3.9[188ReN]2+核心与PNP6、化合物6混配的188Re配合物制备调节上述[188ReN]2+核中间体的pH＝7.5～8.0，加入6mL化合物6的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2～3mg/mL)和2.0mgPNP6，在80℃水浴下反应10min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率大于96％。HPLC监测(HPLC梯度条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～5min30％B；5～25min30％B～90％B)。HPLC保留时间为19.20min，98.74％。
实施例3.10[188ReN]2+核心与PNP5、化合物1混配的188Re配合物制备调节上述[188ReN]2+核中间体的pH＝7.5～8.0，加入6mL化合物1的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2～3mg/mL)和2.0mgPNP5，在80℃水浴下反应10min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率大于96％。HPLC监测(HPLC梯度条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～5min30％B；5～25min30％B～90％B)。HPLC保留时间为17.30min，98.17％。
实施例3.11[188ReN]2+核心与PNP5、化合物3混配的188Re配合物制备调节上述[188ReN]2+核中间体的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物3的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2～3mg/mL)和2mgPNP5，在80℃水浴下反应10min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率大于96％。HPLC监测(HPLC梯度条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～5min30％B；5～25min30％B～90％B)。HPLC保留时间为18.20min，98.26％。
实施例3.12[188ReN]2+核心与PNP5、化合物6混配的188Re配合物制备调节上述[188ReN]2+核中间体的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物6的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2～3mg/mL)和2mgPNP5，在80℃水浴下反应10min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率大于98％。HPLC监测(HPLC梯度条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～5min30％B；5～25min30％B～90％B)。HPLC保留时间为19.50min，99.16％。
实施例之四.[99mTc(CO)3(H2O)3]1+、[188Re(CO)3(H2O)3]1+或[186Re(CO)3(H2O)3]1+核标记化合物的制备1.[99mTc(CO)3(H2O)3]1+核标记化合物的结构 R＝methyl-、ethyl-、propyl-、isopropyl-、butyl-、isobutyl-分别对应化合物1、2、3、4、5、6。
1+核中间体的制备酒石酸钠钾20mg，碳酸钠4.7～4.9mg加入到10mL西林瓶中，再迅速加入7.4～7.5mg硼氢化钠，加1mL水，压盖密封，通一氧化碳30～40min。加入Na99mTcO4溶液(0.3～0.6ml，20mCi/mL)，再80℃反应40min.TLC监测(乙腈/聚酰胺体系)；HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。99mTc(CO)3核中间体的HPLC保留时间为13.90min，16.70min两组宽峰。
1+核标记化合物的制备将制备的[99mTc(CO)3(H2O)3]1+中间体用1N HCl和0.1N HCl调节pH＝8.0，加入到配体溶液中(2mg/mL)，65～75℃反应10min.冷却至室温。TLC监测(氯仿/甲醇＝9/1，聚酰胺)，计算标记率；HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。
实施例4.1[99mTc(CO)3(H2O)3]1+核标记化合物1将制备的[99mTc(CO)3(H2O)3]1+中间体用1N HCl和0.1N HCl调节pH＝8.0，加入到1mL化合物1的溶液中(2mg/ml)，65～75℃反应10min.冷却至室温。TLC监测(氯仿/甲醇＝9/1，聚酰胺)，计算标记率，标记率大于90％；HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.70min，12.52％；20.10min，87.25％。
实施例4.2[99mTc(CO)3(H2O)3]1+核标记化合物4将制备的[99mTc(CO)3(H2O)3]1+中间体用1N HCl和0.1N HCl调节pH＝8.0，加入到1mL化合物4的溶液中(2mg/mL)，65～75℃反应10min.冷却至室温。TLC监测(氯仿/甲醇＝9/1，聚酰胺)，计算标记率，标记率大于90％；HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.70min，86.60％；21.90min，13.20％。
实施例4.3[99mTc(CO)3(H2O)3]1+核标记化合物6将制备的[99mTc(CO)3(H2O)3]1+中间体用1N HCl和0.1N HCl调节pH＝8.0，加入到1mL化合物6的溶液中(2mg/mL)，65～75℃反应10min.冷却至室温。TLC监测(氯仿/甲醇＝9/1，聚酰胺)，计算标记率，标记率大于90％；HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.70min，93.07％；23.80min，6.46％。
2.[188Re(CO)3(H2O)3]1+或[186Re(CO)3(H2O)3]1+核标记化合物的结构 R＝methyl-、ethyl-、propyl-、isopropyl-、butyl-、isobutyl-分别对应化合物1、2、3、4、5、6
实施例4.4[188Re(CO)3(H2O)3]1+核标记化合物1的188Re配合物的制备(8)5mg氨基硼烷配合物加入到西林瓶中，压盖密封，通一氧化碳气体10-15min，加入4.5μLH3PO4(85％)和Na188Re O4的生理盐水溶液(0.3～0.5mL，1～10mCi/mL)，瓶盖插一个注射器以补偿气体膨胀，加热至60℃反应15min，调pH＝8.0，取0.2mL加入到化合物1的水溶液(2mg/mL)中，在60℃反应15min。测标记率，大于98％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.60min，10.75％；20.00min，88.17％。
实施例4.5[188Re(CO)3(H2O)3]1+核标记化合物4的188Re配合物的制备(8)5mg氨基硼烷配合物加入到西林瓶中，压盖密封，通一氧化碳气体10-15min，加入4.5μLH3PO4(85％)和Na188ReO4的生理盐水溶液(0.3～0.5mL，1～10mCi/mL)，瓶盖插一个注射器以补偿气体膨胀，加热至60℃反应15min，调pH＝8.0，取0.2mL加入到化合物4的水溶液(2mg/mL)中，在60℃反应15min。测标记率，大于95％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.60min，88.25％；21.70min，10.29％。
实施例4.6[188Re(CO)3(H2O)3]1+核标记化合物6的188Re配合物的制备(8)5mg氨基硼烷配合物加入到西林瓶中，压盖密封，通一氧化碳气体10-15min，加入4.5μLH3PO4(85％)和Na188ReO4的生理盐水溶液(0.3～0.5mL，1～10mCi/mL)，瓶盖插一个注射器以补偿气体膨胀，加热至60℃反应15min，调pH＝8.0，取0.2mL加入到化合物6的水溶液(2mg/mL)中，在60℃反应15min。测标记率为97.61％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.70min，92.76％；24.00min，7.17％。
(三)、99mTc标记化合物荷瘤鼠实验[99mTcO]3+核标记化合物1的荷EMT-6肿瘤小鼠体内分布实验(n＝3)荷EMT-6肿瘤小鼠于雌性BACB/C小鼠前左腋下植入2×106肿瘤细胞，生长约10天后肿瘤直径为13～15mm；1.标记2mg化合物1中加入0.5mL水和0.5mL乙醇制成溶液，加入0.5mL(10mCi/mL)新淋洗的Na99mTcO4，迅速加入0.3mLSnCl2溶液(1mg/mL，0.1NHCl)，调pH＝8.5，室温下反应20min，用0.2μm滤膜过滤，TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/硅胶)，计算标记率，标记率99.26％，HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为17.20min，99.94％。
2.动物实验将标记产物溶液用纯水稀释到0.3mCi/mL。取出0.1mL稀释后产物溶液，加入9.9mL生理盐水，混匀后取出0.1mL，作为标准溶液。荷EMT-6肿瘤小鼠尾静脉注射0.1mL产物溶液(约30μCi)，分别于注射后1、2、4h断颈处死，取肿瘤、血、心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、骨等组织，称重并测定放射性计数，计算ID％/g。
3+核标记化合物1配合物的荷瘤鼠生物分布
2+核标记化合物1的荷EMT-6肿瘤小鼠体内分布实验(n＝3)荷EMT-6肿瘤小鼠于雌性BACB/C小鼠前左腋下植入2×106肿瘤细胞，生长约10天后肿瘤直径为13～15mm；1.标记1.1.[99mTcN]2+核中间体的制备西林瓶中加入5mgSDH(丁二酰二酰肼，结构是NH2NHCOCH2CH2CONHNH2)和5mgPDTA，再加入适量1N NaOH和去离子水使之溶解，用1N HCl调pH＝7.4。将Na99mTcO4溶液(0.3～0.5mL，1～20mCi)加入，迅速加入30μlLSnCl2溶液(1mg/mL，1N HCl)，室温下反应15min.TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率。标记率大于99％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。[99mTcN]2+核中间体的HPLC保留时间为3.00min。
1.2.[99mTcN]2+核标记化合物1调节上述99mTcN核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物1的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率99.15％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.60min，99.79％。
2.动物实验将标记产物溶液用纯水稀释到0.3mCi/mL。取出0.1mL稀释后产物溶液，加入9.9mL生理盐水，混匀后取出0.1mL，作为标准溶液。荷EMT-6肿瘤小鼠尾静脉注射0.1mL产物溶液(约30μCi)，分别于注射后1、2、4h断颈处死，取肿瘤、血、心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、骨等组织，称重并测定放射性计数，计算ID％/g。
2+核标记化合物1配合物的荷瘤鼠生物分布
2+核标记化合物2的荷EMT-6肿瘤小鼠体内分布实验(n＝3)荷EMT-6肿瘤小鼠于雌性BACB/C小鼠前左腋下植入2×106肿瘤细胞，生长约10天后肿瘤直径为13～15mm；1.标记1.1.[99mTcN]2+核中间体的制备西林瓶中加入5mgSDH(丁二酰二酰肼，结构是NH2NHCOCH2CH2CONHNH2)和5mgPDTA，再加入适量1N NaOH和去离子水使之溶解，用1N HCl调pH＝7.4。将Na99mTcO4溶液(0.3～0.5mL，1～20mCi)加入，迅速加入30μlLSnCl2溶液(1mg/mL，1N HCl)，室温下反应15min.TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率。标记率大于99％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。[99mTcN]2+核中间体的HPLC保留时间为3.00min。
1.2.[99mTcN]2+核标记化合物2[99mTcN]2+核标记化合物2调节上述99mTcN核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物2的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率99.46％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.60min，99.80％。
2.动物实验将标记产物溶液用纯水稀释到0.3mCi/mL。取出0.1mL稀释后产物溶液，加入9.9mL生理盐水，混匀后取出0.1mL，作为标准溶液。荷EMT-6肿瘤小鼠尾静脉注射0.1mL产物溶液(约30μCi)，分别于注射后1、2、4h断颈处死，取肿瘤、血、心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、骨等组织，称重并测定放射性计数，计算ID％/g。
2+核标记化合物2配合物的荷瘤鼠生物分布
1+核标记化合物1的荷EMT-6肿瘤小鼠体内分布实验(n＝3)荷EMT-6肿瘤小鼠于雌性BACB/C小鼠前左腋下植入2×106肿瘤细胞，生长约10天后肿瘤直径为13～15mm；1.标记1.1.[99mTc(CO)3(H2O)3]1+核中间体的制备酒石酸钠钾20mg，碳酸钠4.7～4.9mg加入到10mL西林瓶中，再迅速加入7.4～7.5mg硼氢化钠，加1mL水，压盖密封，通一氧化碳30～40min。加入Na99mTcO4溶液(0.3～0.6ml，20mCi/mL)，再80℃反应40min.TLC监测(乙腈/聚酰胺体系)；HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。99mTc(CO)3核中间体的HPLC保留时间为13.90min，16.70min两组宽峰。
1.2.[99mTc(CO)3(H2O)3]1+核标记化合物6将制备的[99mTc(CO)3(H2O)3]1+中间体用1N HCl和0.1N HCl调节pH＝8.0，加入到1mL化合物6的溶液中(2mg/ml)，65～75℃反应10min.冷却至室温。TLC监测(氯仿/甲醇＝9/1，聚酰胺)，计算标记率，标记率大于90％；HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.70min，93.07％；23.80min，6.46％。
2.动物实验将标记产物溶液用纯水稀释到0.3mCi/mL。取出0.1mL稀释后产物溶液，加入9.9mL生理盐水，混匀后取出0.1mL，作为标准溶液。荷EMT-6肿瘤小鼠尾静脉注射0.1mL产物溶液(约30μCi)，分别于注射后1、2、4h断颈处死，取肿瘤、血、心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、骨等组织，称重并测定放射性计数，计算ID％/g。
1+核标记化合物6配合物的荷瘤鼠生物分布
(四)188Re标记化合物荷瘤鼠实验 3+核标记化合物1的荷EMT-6肿瘤小鼠体内分布实验(n＝3)荷EMT-6肿瘤小鼠于雌性BACB/C小鼠前左腋下植入2×106肿瘤细胞，生长约10天后肿瘤直径为13～15mm；1.标记[188Re O]3+核标记化合物12mg化合物1中加入0.5mL水和0.5mL乙醇制成溶液，加入0.3mL(10mCi/ml)新淋洗的Na188Re O4，迅速加入0.2mLSnCl2溶液(1mg/mL，0.1NHCl)，调pH＝8.0～8.5，室温下反应20min，用0.2μm滤膜过滤，TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/硅胶)，计算标记率，标记率99.26％，HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为17.10min，99.91％。
2.动物实验将标记产物溶液用纯水稀释到0.3mCi/mL。取出0.1mL稀释后产物溶液，加入9.9mL生理盐水，混匀后取出0.1mL，作为标准溶液。荷EMT-6肿瘤小鼠尾静脉注射0.1mL产物溶液(约30μCi)，分别于注射后1、2、4h断颈处死，取肿瘤、血、心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、骨等组织，称重并测定放射性计数，计算ID％/g。
3+核标记化合物1配合物的荷瘤鼠生物分布
2+核标记化合物1的荷EMT-6肿瘤小鼠体内分布实验(n＝3)荷EMT-6肿瘤小鼠于雌性BACB/C小鼠前左腋下植入2×106肿瘤细胞，生长约10天后肿瘤直径为13～15mm；1.标记1.1.[188ReN]2+核中间体的制备西林瓶中加入5mgSDH和5mgPDTA，再加入适量1N NaOH和去离子水使之溶解，用1N HCl调pH＝7.4。将Na188Re O4溶液(0.3～0.5mL，1～20mCi/mL)加入，迅速加入30μlLSnCl2溶液(1mg/mL，1N HCl)，室温下反应15min.TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率。标记率大于99％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；1～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。[188Re N]2+核中间体的HPLC保留时间为3.20min。
1.2.[188ReN]2+核标记化合物1调节上述[188Re N]2+核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物1的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率99.15％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.60min，99.35％。
2.动物实验将标记产物溶液用纯水稀释到0.3mCi/mL。取出0.1mL稀释后产物溶液，加入9.9mL生理盐水，混匀后取出0.1mL，作为标准溶液。荷EMT-6肿瘤小鼠尾静脉注射0.1mL产物溶液(约30μCi)，分别于注射后1、2、4h断颈处死，取肿瘤、血、心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、骨等组织，称重并测定放射性计数，计算ID％/g。
2+核标记化合物1配合物的荷瘤鼠生物分布
1+核标记化合物1的荷EMT-6肿瘤小鼠体内分布实验(n＝3)荷EMT-6肿瘤小鼠于雌性BACB/C小鼠前左腋下植入2×106肿瘤细胞，生长约10天后肿瘤直径为13～15mm；[188Re(CO)3(H2O)3]1+核标记化合物6的188Re配合物的制备(8)5mg氨基硼烷配合物加入到西林瓶中，压盖密封，通一氧化碳气体10-15min，加入4.5μLH3PO4(85％)和Na188ReO4的生理盐水溶液(0.3～0.5mL，1～10mCi/mL)，瓶盖插一个注射器以补偿气体膨胀，加热至60℃反应15min，调pH＝8.0，取0.2mL加入到化合物6的水溶液(2mg/mL)中，在60℃反应15min。测标记率为97.61％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.70min，92.76％；24.00min，7.17％。
1+核标记化合物6配合物的荷瘤鼠生物分布
对比99mTc-EC-DG99mTc-EC-DG的荷瘤鼠生物分布
对比可知[99mTcO]3+核标记化合物1配合物的肿瘤摄取高于99mTc-EC-DG，是一类潜在的良好的99mTc标记的葡萄糖衍生物肿瘤显像剂。
由于用于18FDG显像的PET显像仪器价格昂贵，设备普及率不高(全国60余台)，而18F需要医用回旋加速器制备，费用较高，同时18F半衰期较短(18F半衰期为108min)，其使用受到很大限制；而99mTc由99Mo/99mTc发生器制得，价格低廉，方便易得，半衰期和能量均适宜(T1/2＝6.0h，这为放射性药物的制备和在生物体内靶器官的浓集提供了充分的时间，同时可尽量减少病人所受辐射剂量；发射γ射线；射线能量为150keV，能量适宜)，显像设备SPECT普及率较高(全国500台)，因此近年来临床上需要发展99mTc标记的葡萄糖类似物。
权利要求
1.一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物，其核中间体为[99mTcO]3+、[188/186ReO]3+、[99mTcN]2+、[188/186ReN]2+、[99mTc(CO)3(H2O)3]1+、[188Re(CO)3(H2O)3]1+或[186Re(CO)3(H2O)3]1+，其配位体结构通式如下(1)，配位体的数量为2 R＝methyl-、ethyl-、propyl-、isopropyl-、butyl-、isobutyl-
2.一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物，其核心为[99mTcN]2+、[188ReN]2+或[186ReN]2+，其共配体为99mTcN-PNP、188ReN-PNP或186ReN-PNP，其配位体为下述通式(1) R＝methyl-、ethyl-、propyl-、isopropyl-、butyl-、isobutyl-所述PNP为下述结构之一
3.一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备方法，其步骤如下(1)葡萄糖衍生物的合成 (2)[99mTcN]2+、[88ReN]2+或[186ReN]2+核中间体的制备西林瓶中加入丁二酰二酰肼和1，2-丙二胺四乙酸，加入适量NaOH和去离子水使之溶解，用HCl调pH＝7.4；加入Na99mTcO4或Na188ReO4或Na186ReO4溶液后，迅速加入SnCl2溶液，室温下反应，得核中间体；(3)99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备调节步骤(2)所得核中间体的pH＝8.0，加入步骤(1)合成的葡萄糖衍生物的水-乙醇溶液，室温下反应，得99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物。
4.一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备方法，其步骤如下(1)葡萄糖衍生物的合成 (2)99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备在步骤(1)合成的葡萄糖衍生物中加入适量的水和乙醇制成溶液，加入Na99mTcO4或Na188ReO4或Na186ReO4，加入SnCl2溶液，调pH＝8.0～8.5，室温下反应20min，用0.2μm滤膜过滤，得[99mTcO]3+、[188ReO]3+、[186ReO]3+标记的葡萄糖衍生物配合物。
5.一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备方法，其步骤如下(1)葡萄糖衍生物的合成 (2)[99mTc(CO)3(H2O)3]1+、[188Re(CO)3(H2O)3]1+或[186Re(CO)3(H2O)3]1+核中间体的制备将酒石酸钠钾和碳酸钠加入到西林瓶中，再迅速加入硼氢化钠，加水，压盖密封，通一氧化碳；加入Na99mTcO4或Na188ReO4或Na186ReO4溶液，在再80℃下反应，得核中间体；(3)99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备调节步骤(2)所得核中间体的pH＝8.0，加入步骤(1)合成的葡萄糖衍生物的溶液，65～75℃反应，再冷却至室温，得99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物。
6.一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备方法，其步骤如下(1)葡萄糖衍生物的合成 (2)[99mTcN-PNP]2+、[188ReN-PNP]2+或[186ReN-PNP]2+核中间体的制备西林瓶中加入丁二酰二酰肼和1，2-丙二胺四乙酸，加入适量NaOH和去离子水使之溶解，用HCl调pH＝7.4；加入Na99mTcO4或Na188ReO4或Na186ReO4溶液后，迅速加入SnCl2溶液，室温下反应，得核中间体；(3)99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备调节步骤(2)所得核中间体的pH＝7.5～8.0，加入步骤(1)合成的葡萄糖衍生物的水-乙醇溶液和PNP，在80℃水浴下反应，得99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物。
全文摘要
本发明涉及一种
文档编号A61K51/04GK101020697SQ200610114499
公开日2007年8月22日 申请日期2006年11月10日 优先权日2006年11月10日
发明者朱霖, 刘锰, 刘亚静, 余媛 申请人:北京师范大学