专利名称：Tc、的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种葡萄糖衍生物配合物及其制备方法，特别涉及一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物及其制备方法。
背景技术：
葡萄糖是动物细胞的主要能量来源，葡萄糖代谢对于维持生物的正常生命功能起着重要作用。
目前，18FDG(18F-2-脱氧-2-氟-D-葡萄糖)这种正电子核素标记的葡萄糖类似物被广泛地用于肿瘤的诊断，在临床上具有重要意义。18FDG的肿瘤显像机理是由于肿瘤细胞与正常细胞相比，生长活跃，细胞异常增殖，对能量需求大，糖酵解加速，因此，肿瘤对葡萄糖及其类似物的摄取比正常细胞更高，18FDG可以与葡萄糖一样被肿瘤细胞膜上的葡萄糖转运蛋白GLUTs(glucose transporters)通过易化扩散的方式转运到细胞内，经HK(己糖激酶)磷酸化，在细胞内代谢为18FDG-6-PO4。但是，对于继续进行糖代谢的酶即磷酸己糖变构酶、葡萄糖脱氢酶及葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)来说，18FDG-6-PO4不是最适合的底物，因而18FDG-6-PO4既不能像葡萄糖-6-磷酸一样，在上述酶的作用下进入三羧酸循环，也不能经戊糖支路代谢，从而滞留在肿瘤细胞内可被探测到。
虽然18FDG在肿瘤诊断中显示出很高的特异性和敏感性，但是存在着费用较高、需要医用回旋加速器和PET显像仪器(设备不普及)、半衰期较短(18F半衰期为108min)等缺陷。
杨大卫等人在《放射学》杂志2003年第226期第465-473页(DavidJ.Yang，Chang-Guhn Kim，et alRadiology，2003，226465-473)公开了一种99mTc标记的葡萄糖类似物99mTc-EC-DG用于肿瘤的诊断。配位体EC-DG的结构是 但上述99mTc标记的葡萄糖类似物的缺点是肿瘤的绝对摄取值较低，同时肿瘤的摄取/血的摄取的比值较低，原因目前尚未确定。
因此研制一种价格低廉、方便易得、半衰期和能量均适宜、更高的靶/非靶比值、设备普及并且肿瘤摄取高的葡萄糖衍生物配合物作为肿瘤显像剂就成为本技术领域急待解决的问题。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种价格低廉、方便易得、半衰期和能量均适宜、更高的靶/非靶比值并且设备普及的用作肿瘤显像剂的葡萄糖衍生物配合物——99mTc或188/186Re标记的葡萄糖衍生物配合物。
本发明的目的是通过以下技术方案达到的方案一一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物，其核心为[99mTcO]3+、[188ReO]3+、[186ReO]3+、[99mTcN]2+、[188ReN]2+、[186ReN]2+、[99mTc(CO)3(H2O)3]1+、[188Re(CO)3(H2O)3]1+或[186Re(CO)3(H2O)3]1+，其配位体为下述通式(1)
方案二一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物，其核心为[99mTcN]2+、[188ReN]2+或[186ReN]2+，其共配体为99mTcN-PNP、188ReN-PNP或186ReN-PNP，其配位体为下述通式(1)
所述PNP为下述结构之一 本发明的另一目的是提供上述99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备方法。
本发明的上述目的是通过以下技术方案达到的方案一一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备方法，其步骤如下
(1)葡萄糖衍生物的合成 (2)[99mTcN]2+、[188ReN]2+、[186ReN]2+核中间体的制备西林瓶中加入SDH(丁二酰二酰肼，结构是NH2NHCOCH2CH2CONHNH2)和PDTA(1，2-丙二胺四乙酸)，其结构如下
再加入适量NaOH和去离子水使之溶解，用HCl调pH＝7.4；加入Na99mTcO4或Na188Re O4或Na186Re O4溶液后，迅速加入SnCl2溶液，室温下反应，得核中间体；(3)99mTc或188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备调节步骤(2)所得核中间体的pH＝8.0，加入步骤(1)合成的葡萄糖衍生物的水-乙醇溶液，室温下反应，得99mTc或188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物。
方案二一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备方法，其步骤如下(1)葡萄糖衍生物的合成
(2)[99mTcO]3+、[188ReO]3+、[186ReO]3+标记的葡萄糖衍生物配合物的制备在步骤(1)合成的葡萄糖衍生物的水溶液中加入Na99mTcO4、Na188Re O4或Na186Re O4溶液，迅速加入SnCl2溶液，调pH＝8.0～8.5，分别得[99mTcO]3+、[188ReO]3+、[186ReO]3+标记的葡萄糖衍生物配合物。
方案三一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备方法，其步骤如下(1)葡萄糖衍生物的合成
(2)[99mTc(CO)3(H2O)3]1+、[188Re(CO)3(H2O)3]1+或[186Re(CO)3(H2O)3]1+核中间体的制备将酒石酸钠钾和碳酸钠加入到西林瓶中，再迅速加入硼氢化钠，加水，压盖密封，通一氧化碳；加入Na99mTcO4或Na188Re O4或Na186Re O4溶液，在再80℃下反应，得核中间体；(3)99mTc或188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备调节步骤(2)所得核中间体的pH＝8.0，加入步骤(1)合成的葡萄糖衍生物的溶液，65～75℃反应，再冷却至室温，得99mTc或188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物。
方案四一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备方法，其步骤如下
(2)葡萄糖衍生物的合成 (2)[99mTcN]2+、[188ReN]2+或[186ReN]2+核心中间体的制备西林瓶中加入SDH(丁二酰二酰肼，结构是NH2NHCOCH2CH2CONHNH2)和PDTA(1，2-丙二胺四乙酸)，其结构如下
再加入适量NaOH和去离子水使之溶解，用HCl调pH＝7.4；加入Na99mTcO4或Na188Re O4或Na186Re O4溶液后，迅速加入SnCl2溶液，室温下反应，得核心中间体；(3)99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备调节步骤(2)所得核中间体的pH＝7.5～8.0，加入步骤(1)合成的葡萄糖衍生物的水-乙醇溶液(浓度50％)和PNP5或PNP6或L6之一，溶液与PNP5或PNP6或L6之间的重量比为1∶1，在80℃水浴下反应，得99mTc或188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物。
有益效果本发明的99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物价格低廉、方便易得、半衰期和能量均适宜(T1/2＝6.0h；γ；150keV)，且通过SPECT显像，设备普及率高。
本发明合成的[99mTcO]3+/[188/186ReO]3+、[99mTcN]2+/[188/186ReN]2+、99mTcN-PNP/188/186ReN-PNP(3)、[99mTc(CO)3(H2O)3]1+[188/186Re(CO)3(H2O)3]1+的葡萄糖衍生物配合物具有一定的肿瘤摄取，可用于肿瘤诊断显像或治疗。其荷瘤鼠实验证明，比美国正处于研发阶段的99mTc标记的葡萄糖类似物99mTc-EC-DG(6)的肿瘤摄取更高。而肝、肾和血液等非靶器官和组织的摄取更低，具有更好的靶/非靶比值(即靶器官与非靶器官的对放射性药物摄取的比值，对于肿瘤显像剂来说就是肿瘤与其他组织和器官对放射性药物摄取的比值，)，是具有良好应用前景的葡萄糖衍生物肿瘤显像剂。
下面通过具体实施方式
对本发明做进一步说明，但并不意味着对本发明保护范围的限制。
具体实施例方式
(一)、葡萄糖衍生物的合成化合物1的合成R＝H 将3.0g葡萄糖(0.015mol)加入到12.0mL水合肼(0.247mol)中，在氩气条件下室温反应20h，然后减压旋转蒸发至最小体积(减压旋转蒸发至体积不再减少)。冰盐浴条件下加入4mLCS2(0.067mol)和含有0.6gNaOH(0.015mol)的甲醇溶液，反应剧烈，放出气体，放热停止后，室温继续反应24h，减压旋转蒸发除去未反应的CS2；得浅绿色固体，抽滤，用甲醇重结晶，得浅黄色固体。
产物产率54％；产物元素分析结果实测值N 9.12，C 28.43和H 4.83％；理论值N 9.58，C 28.76和H 4.48％；质谱分析MS(ESI)实测值269.0[M-Na]-，理论值269.0；H1-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)7.17(d，1H，J1,2＝6.89Hz)，6.65(s，1H)，4.26(d，1H，J＝7.72Hz)，3.73(m，1H)，3.63(m，1H)，3.56(m，1H)，3.24(m，1H)，3.16(m，1H)，2.51(broad s，5H)；IR(KBr)3374，2930，1635，1412，1343，1250，1081，1049cm-1。
化合物2的合成R＝CH3- 化合物的制备方法将3.0g葡萄糖(0.015mol)加入到13.1mL甲基肼中，在氩气条件下室温反应24h，然后减压旋转蒸发至最小体积(减压旋转蒸发至体积不再减少)。冰盐浴条件下加入4mLCS2(0.067mol)和含有0.6gNaOH(0.015mol)的甲醇溶液，反应剧烈，放出气体，放热停止后，室温继续反应24h，减压旋转蒸发除去未反应的CS2得浅绿色固体，抽滤，用甲醇重结晶，得浅黄色固体。
产物产率51％；产物元素分析结果实测值N 8.97，C 31.61和H 4.72％；理论值N 9.14，C 31.37和H 4.94％；质谱分析MS(ESI)实测值283.0[M-Na]-，理论值283.0；H1-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)7.42(d，1H，J1.2＝6.92Hz)，4.22(d，1H，J＝7.78Hz)，3.75(m，1H)，3.68(m，1H)，3.54(m，1H)，3.27(m，1H)，3.17(m，1H)，2.54(s，3H)，2.51(broad s，5H)；IR(KBr)3392，2943，1616，1427，1374，1217，1154，1061cm-1。
化合物3的合成R＝CH3CH2- 化合物的制备方法将0.25mol乙基肼草酸盐加入到适量甲醇中，在搅拌下加入0.5mol三乙胺，30min后，加入3.0g葡萄糖(0.015mol)，氩气保护下室温反应24h，然后减压旋转蒸发至最小体积(减压旋转蒸发至体积不再减少)。冰盐浴条件下加入4mlLCS2(0.067mol)和含有0.6gNaOH(0.015mol)的甲醇溶液，反应较剧烈，待放热停止后，室温继续反应24h，减压旋转蒸发除去未反应的CS2得浅绿色固体，抽滤，用甲醇重结晶，得淡黄色固体。
产物产率46％；产物元素分析结果实测值N 8.57，C 33.52和H 5.72％；理论值N 8.74，C 33.74和H 5.35％；质谱分析MS(ESI)实测值297.0[M-Na]-，理论值297.0；H1-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)7.50(d，1H，J＝6.78Hz)，4.27(d，1H，J＝7.75Hz)，3.77(m，1H)，3.65(m，1H)，3.51(m，1H)，3.30(m，1H)3.19(m，1H)，2.71(m，2H)，2.51(broad s，5H)，1.32(t，3H，J＝7.14Hz)；IR(KBr)3390，2960，1589，1463，1375，1209，1131，1055cm-1。
化合物4的合成R＝CH3CH2CH2- 化合物的制备方法将0.25mol丙基肼草酸盐加入到适量甲醇中，在搅拌下加入0.5mol三乙胺，30min后，加入3.0g葡萄糖(0.015mol)，氩气保护下室温反应24h，然后减压旋转蒸发至最小体积(减压旋转蒸发至体积不再减少)。冰盐浴条件下加入4mlLCS2(0.067mol)和含有0.6gNaOH(0.015mol)的甲醇溶液，反应较剧烈，待放热停止后，室温继续反应24h，减压旋转蒸发除去未反应的CS2得浅绿色固体，抽滤，用甲醇重结晶，得淡黄色固体。
产物产率48％；产物元素分析结果实测值N 8.43，C 36.21和H 5.51％；理论值N 8.38，C 35.92和H 5.73％；质谱分析MS(ESI)实测值311.0[M-Na]-，理论值311.0；H1-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(7.58(d，1H，J＝6.88Hz)，4.19(d，1H，J＝7.70Hz)，3.81(m，1H)，3.69(m，1H)，3.55(m，1H)，3.29(m，1H)，3.13(m，1H)，2.69(t，2H，J＝7.21Hz)，2.51(broad s，5H)，1.66(m，2H)，1.03(t，3H，J＝7.32Hz)；
IR(KBr)3387，2925，1588，1461，1375，1214，1151，1076cm-1。
化合物5的合成R＝CH3(CH2)3- 化合物的制备方法将0.25mol丁基肼盐酸盐加入到适量甲醇中，在搅拌下加入0.5mol三乙胺，30min后，加入3.0g葡萄糖(0.015mol)，氩气保护下室温反应24h，然后40℃减压旋转蒸发至最小体积(减压旋转蒸发至体积不再减少)。冰盐浴条件下加入4mL CS2(0.067mol)和含有0.6gNaOH(0.015mol)的甲醇溶液，待反应放热停止后，室温继续反应24h，减压旋转蒸发除去未反应的CS2.得浅绿色固体，抽滤，用甲醇重结晶，得黄色固体。
产物产率48％；产物元素分析结果实测值N 8.22，C 38.17和H 5.81％；理论值N 8.04，C 37.92和H 6.08％；质谱分析MS(ESI)实测值325.0[M-Na]-，理论值325.0；H1-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(7.61(d，1H，J＝6.93Hz)，4.24(d，1H，J＝7.71Hz)，3.87(m，1H)，3.65(m，1H)，3.56(m，1H)，3.30(m，1H)，3.19(m，1H)，2.67(t，2H，J＝7.19Hz)，2.51(broad s，5H)，1.57(m，2H)，1.38(m，2H)，0.99(t，3H，J＝7.36Hz)；IR(KBr)3393，2939，1582，1471，1378，1201，1124，1049cm-1。
(二)葡萄糖衍生物配合物的制备实施例之一[99mTcN]2+或[188/186ReN]2+葡萄糖衍生物配合物的制备1.[99mTcN]2+葡萄糖衍生物配合物的结构 1.1.[99mTcN]2+核中间体的制备西林瓶中加入5mgSDH(丁二酰二酰肼，结构是NH2NHCOCH2CH2CONHNH2)和5mgPDTA(1，2-丙二胺四乙酸)，其结构如下
再加入适量1N NaOH和去离子水使之溶解，用1N HCl调pH＝7.4。将Na99mTcO4溶液(0.3～0.5mL，1～20mCi)加入，迅速加入30μl SnCl2溶液(1mg/mL，1N HCl)，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率。标记率大于99％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。[99mTcN]2+核中间体的HPLC保留时间为3.00min。
1.2.[99mTcN]2+葡萄糖衍生物配合物的制备调节上述99mTcN核中间体的pH＝8.0，加入1mL葡萄糖衍生物的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。
实施例1.1[99mTcN]2+核标记化合物1调节上述99mTcN核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物1的水溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC(薄层色谱)监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率99.82％。HPLC(高效液相色谱)监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.60min，99.82％(放射化学纯度)。
实施例1.2[99mTcN]2+核标记化合物2调节上述99mTcN核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物2的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率99.65％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.60min，放射化学纯度99.31％。
实施例1.3[99mTcN]2+核标记化合物3调节上述99mTcN核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物3的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率大于99％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为17.20min，放射化学纯度99.43％。
实施例1.4[99mTcN]2+核标记化合物5调节上述99mTcN核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物5的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率99.36％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为22.10min，放射化学纯度99.56％。
实施例1.5[99mTcN]2+核标记化合物4标记方法同上，将化合物5替换为化合物4。标记率99.57％，HPLC保留时间为18.10min，放射化学纯度99.26％。
2.[188/186ReN]2+核心标记化合物的结构 2.1.[188/186ReN]2+核中间体的制备西林瓶中加入5mgSDH(丁二酰二酰肼，结构是NH2NHCOCH2CH2CONHNH2)和5mgPDTA(1，2-丙二胺四乙酸)，其结构如下
再加入适量1N NaOH和去离子水使之溶解，用1N HCl调pH＝7.4。将Na188/186Re O4溶液(0.3～0.5mL，1～20mCi)加入，迅速加入30μlLSnCl2溶液(1mg/mL，1N HCl).室温下反应15min。TLC(薄层色谱)监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率。标记率大于99％。HPLC(高效液相色谱)监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。[188/186Re N]2+核中间体的HPLC保留时间为3.20min。
2.2.[188/186ReN]2+核标记化合物的制备调节上述[188/186ReN]2-核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC(薄层色谱)监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率。HPLC(高效液相色谱)监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。
实施例2.1[188/186ReN]2+核标记化合物1调节上述[188/186ReN]2+核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物1的水溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率大于99％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.60min，99.56％。
实施例之二[99mTcN]3+或[188/186ReN]2+核心与PNP、化合物(1～5)
混配的99mTc配合物制备1.[99mTcN]3+-PNP配合物的结构 R1＝H，CH3-，CH3CH2-，CH3(CH2)2-，CH3(CH2)3-PNP＝PNP5，PNP6，L6 实施例3.1[99mTcN]2+核心与PNP6、化合物1混配的99mTc配合物制备调节上述99mTcN核中间体的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物1的水溶液(2mg/mL)和1mgPNP6，在80℃水浴下反应10min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率大于99％。HPLC监测(HPLC梯度条件A相0.1％的三氟乙酸水溶液；B相0.1％的三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为21.50min。
实施例3.2[99mTcN]2+核心与PNP6、化合物2混配的99mTc配合物制备调节上述99mTcN核中间体的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物2的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)和2mgPNP6，在80℃水浴下反应10min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率99.16％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％的三氟乙酸水溶液；B相0.1％的三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为22.10min。
实施例3.3[99mTcN]2+核心与PNP6、化合物5混配的99mTc配合物制备调节上述99mTcN核中间体的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物5的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)和2mgPNP6，在80℃水浴下反应10min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率大于98％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为23.60min。
实施例3.4[99mTcN]2+核心与PNP5、化合物1混配的99mTc配合物制备调节上述99mTcN核中间体的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物1的水溶液(2～3mg/mL)和2mg PNP5，在80～90℃水浴下反应10min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率98.65％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为18.60min。
实施例3.5[99mTcN]2+核心与PNP5、化合物2混配的99mTc配合物制备调节上述99mTcN核中间体的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物2的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)和2mg PNP5，在80～90℃水浴下反应10min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率大于98％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为19.30min。
实施例3.6[99mTcN]2+核心与L6、化合物5混配的99mTc配合物制备调节上述99mTcN核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物5的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)和2mg L6，在80～90℃水浴下反应10min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率大于97％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为21.20min。
2.[188/186ReN]2+-PNP配合物结构 R1＝H，CH3-，CH3CH2-，CH3(CH2)2-，CH3(CH2)3-PNP＝PNP5，PNP6，L6 实施例3.7[188ReN]2+核心与PNP6、化合物1混配的188Re配合物制备调节上述[188ReN]2+核中间体的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物1的水溶液(2mg/mL)和1mgPNP6，在80℃水浴下反应10min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率大于98％。HPLC监测(HPLC梯度条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为21.20min。
实施例3.8[188ReN]2+核心与PNP5、化合物1混配的188Re配合物制备调节上述[188ReN]2+核中间体的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物1的水溶液(2～3mg/mL)和2mg PNP5，在80～90℃水浴下反应10min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率98.65％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为18.30min。
实施例之三.[99mTcO]3+或[188/186ReO]3+核标记化合物的制备[99mTcO]3+核标记化合物的结构 实施例4.1[99mTcO]3+核标记化合物1在1mL化合物1的水溶液(2～3mg/mL)中加入新淋洗的Na99mTcO4溶液(5～10mCi/mL)0.5mL，迅速加入0.4～0.5mLSnCl2溶液(0.1MHCl中加入10～12mg SnCl2)，调pH＝8.0～8.5，室温反应30min，测标记率，标记率99.37％；HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为2.60min，9％；16.60min，90％。(已知在此HPLC条件下，Na99mTcO4的保留时间是4.1min)。
实施例4.2[99mTcO]3+核标记化合物2在1mL化合物2的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)中加入新淋洗的Na99mTcO4溶液(5～10mCi/mL)0.5ml，迅速加入0.4～0.5mLSnCl2溶液(0.1MHCl中加入10～12mg SnCl2)，调pH＝8.0～8.5，室温反应30min，测标记率，标记率99.24％；HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为2.70min，10％；18.10min，89％。(已知在此HPLC条件下，Na99mTcO4的保留时间是4.1min)。
实施例4.3[99mTcO]3+核标记化合物5在1mL化合物5的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)中加入新淋洗的Na99mTcO4溶液(5～10mCi/mL)0.5mL，迅速加入0.4～0.5mLSnCl2溶液(0.1MHCl中加入10～12mg SnCl2)，调pH＝8.0～8.5，室温反应30min，测标记率，标记率99.16％；HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为2.70min，8％；23.20min，90％。(已知在此HPLC条件下，Na99mTcO4的保留时间是4.1min)。[188/186ReO]3+核标记化合物的结构 实施例4.4[188ReO]3+核标记化合物1在1mL化合物1的水溶液(2～3mg/mL)中加入新淋洗的Na188ReO4溶液(5～10mCi/mL)0.5mL，迅速加入0.4～0.5mLSnCl2溶液(0.1MHCl中加入10～12mg SnCl2)，调pH＝8.0～8.5，室温反应30min，测标记率，标记率大于99％；HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为2.70min，7.62％；16.60min，91.87％。(已知在此HPLC条件下，Na99mTcO4的保留时间是4.1min)。
实施例之四.[99mTc(CO)3(H2O)3]1+核标记化合物的制备1.[99mTc(CO)3(H2O)3]1+核标记化合物的结构
[99mTc(CO)3(H2O)3]1+核中间体的制备酒石酸钠钾20mg，碳酸钠4.7～4.9mg加入到10ml西林瓶中，再迅速加入7.4～7.5mg硼氢化钠，加1mL水，压盖密封，通一氧化碳30～40min。加入Na99mTcO4溶液(0.3～0.6mL，20mCi/mL)，再80℃反应40min.TLC监测(乙睛/聚酰胺体系)；HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。99mTc(CO)3核中间体的HPLC保留时间为13.90min，16.70min两组宽峰。
1+核标记化合物的制备将制备的[99mTc(CO)3(H2O)3]1+中间体用1N HCl和0.1N HCl调节pH＝8.0，加入到配体溶液中(2mg/mL)，65～75℃反应10min.冷却至室温。TLC监测(氯仿/甲醇＝9/1，聚酰胺)，计算标记率；HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。
实施例5.1[99mTc(CO)3(H2O)3]1+核标记化合物1将制备的[99mTc(CO)3(H2O)3]1+中间体用1N HCl和0.1N HCl调节pH＝8.0，加入到1mL化合物1的溶液中(2mg/mL)，65～75℃反应10min.冷却至室温。TLC监测(氯仿/甲醇＝9/1，聚酰胺)，计算标记率，标记率大于95％；HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为3.00min，99.90％。
实施例5.2[99mTc(CO)3(H2O)3]1+核标记化合物3将制备的[99mTc(CO)3(H2O)3]1+中间体用1N HCl和0.1N HCl调节pH＝8.0，加入到1mL化合物3的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)中，65～75℃反应10min.冷却至室温。TLC监测(氯仿/甲醇＝9/1，聚酰胺)，计算标记率，标记率大于94％；HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为3.40min，99.56％。
实施例5.3[99mTc(CO)3(H2O)3]1+核标记化合物5将制备的[99mTc(CO)3(H2O)3]1+中间体用1N HCl和0.1N HCl调节pH＝8.0，加入到1mL化合物5的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)中，65～75℃反应10min.冷却至室温。TLC监测(氯仿/甲醇＝9/1，聚酰胺)，计算标记率，标记率大于95％；HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为3.70min，99.34％。
2.[188/186Re(CO)3(H2O)3]1+核标记化合物的结构 实施例5.4[188/186Re(CO)3(H2O)3]1+核标记化合物1的188Re配合物的制备(5)5mg氨基硼烷配合物加入到西林瓶中，压盖密封，通一氧化碳气体10-15min，加入4.5μLH3PO4(85％)和Na188/186ReO4的生理盐水溶液(0.3～0.5mL，1～10mCi/mL)，瓶盖插一个注射器以补偿气体膨胀，加热至60℃反应15min，调pH＝8.0，取0.2mL加入到化合物1的水溶液(2mg/mL)中，在60℃反应15min。测标记率，大于95％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为3.2min，98.25％。
(三)、荷瘤鼠实验一、[99mTcN]2+核标记化合物1的荷EMT-6肿瘤小鼠体内分布实验(n＝3)荷EMT-6肿瘤小鼠于雌性BACB/C小鼠前左腋下植入2×106肿瘤细胞，生长约10天后肿瘤直径为13～15mm；1.标记调节99mTcN核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物1的水溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率99.92％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙睛溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为16.60min，99.79％。
2.动物实验将标记产物溶液用纯水稀释到0.3mCi/mL。取出0.1mL稀释后产物溶液，加入9.9mL生理盐水，混匀后取出0.1mL，作为标准溶液。荷EMT-6肿瘤小鼠尾静脉注射0.1mL产物溶液(约30μCi)，分别于注射后1、2、4h断颈处死，取肿瘤、血、心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、骨等组织，称重并测定放射性计数，计算ID％/g。
99mTcN-化合物1配合物的荷EMT-6肿瘤小鼠生物分布
对比99mTc-EC-DG的肺癌荷瘤鼠生物分布
二、[99mTcO]3+核标记化合物2的荷EMT-6肿瘤小鼠体内分布实验(n＝3)荷EMT-6肿瘤小鼠于雌性BACB/C小鼠前左腋下植入2×106肿瘤细胞，生长约10天后肿瘤直径为13～15mm；1.标记[99mTcO]3+核标记化合物2在1mL化合物2的水溶液(2～3mg/mL)中加入新淋洗的Na99mTcO4溶液(5～10mCi/mL)0.5mL，迅速加入0.4～0.5mLSnCl2溶液(0.1MHCl中加入10～12mg SnCl2)，调pH＝8.0～8.5，室温反应30min，测标记率，标记率99.37％；HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为2.60min，9％；16.60min，90％。(已知在此HPLC条件下，Na99mTcO4的保留时间是4.1min)。
2.动物实验将标记产物溶液用纯水稀释到0.3mCi/mL。取出0.1mL稀释后产物溶液，加入9.9mL生理盐水，混匀后取出0.1mL，作为标准溶液。荷EMT-6肿瘤小鼠尾静脉注射0.1mL产物溶液(约30μCi)，分别于注射后1、2、4h断颈处死，取肿瘤、血、心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、骨等组织，称重并测定放射性计数，计算ID％/g。
3+-化合物2配合物的荷EMT-6肿瘤小鼠生物分布
三、[188Re N]2+核标记化合物4的荷EMT-6肿瘤小鼠体内分布实验(n＝3)荷EMT-6肿瘤小鼠于雌性BACB/C小鼠前左腋下植入2×106肿瘤细胞，生长约10天后肿瘤直径为12～15mm；1.标记[188ReN]2+核标记化合物4调节上述[188ReN]2+核中间体的pH＝8.0，加入1mL化合物4的水溶液(2mg/mL)，室温下反应15min。TLC监测(乙腈/聚酰胺；生理盐水/聚酰胺)，计算标记率，标记率大于99％。HPLC监测(HPLC条件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留时间为18.50min，99.36％。
2.动物实验将标记产物溶液用纯水稀释到0.3mCi/mL。取出0.1mL稀释后产物溶液，加入9.9mL生理盐水，混匀后取出0.1mL，作为标准溶液。荷EMT-6肿瘤小鼠尾静脉注射0.1mL产物溶液(约30μCi)，分别于注射后1、2、4h断颈处死，取肿瘤、血、心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、骨等组织，称重并测定放射性计数，计算ID％/g。
2+核标记化合物4配合物的荷EMT-6肿瘤小鼠生物分布
对比可知99mTcN-化合物1配合物和[99mTcO]3+-化合物2配合物以及[188ReN]2+-化合物4配合物的肿瘤摄取都高于99mTc-EC-DG；而99mTcN-化合物1配合物和[99mTcO]3+-化合物2配合物以及[188ReN]2+-化合物4配合物的非靶组织和器官如血液、肝、肾的摄取则低于99mTc-EC-DG，具有更好的靶/非靶比值，是一类潜在的良好的99mTc标记的葡萄糖衍生物肿瘤显像剂。
相对于18FDG而言，由于用于制备18FDG的18F是由加速器制得，价格较高，而且用于显像的正电子发射断层扫描仪(PET)非常昂贵，普及率不高(全国60余台)。此外，18F半衰期短(T1/2＝109分钟)，对药物的制备和显像限制较多。与之对比，99mTc由99Mo/99mTc发生器制备，方便易得，价格低廉；SPECT显像设备价格相对较低，普及率高；同时99mTc的半衰期T1/2＝6.0h，这为放射性药物的制备和在生物体内靶器官的浓集提供了充分的时间，同时可尽量减少病人所受辐射剂量；发射γ射线；射线能量为150keV，能量适宜。)
权利要求
1.一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物，其核心为[99mTcO]3+、[188ReO]3+、[186ReO]3+、[99mTcN]2+、[188ReN]2+、[186ReN]2+、[99mTc(CO)3(H2O)3]1+、[188Re(CO)3(H2O)3]1+或[186Re(CO)3(H2O)3]1+，其配位体为下述通式(1) R＝H，CH3-，CH3CH2-，CH3(CH2)2-，CH3(CH2)3-(1)
2.一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物，其核心为[99mTcN]2+、[188ReN]2+或[186ReN]2+，其共配体为99mTcN-PNP、188ReN-PNP或186ReN-PNP，其配位体为下述通式(1) R＝H，CH3-，CH3CH2-，CH3(CH2)2-，CH3(CH2)3-(1)其中所述PNP为下述结构之一
3.一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备方法，其步骤如下(3)葡萄糖衍生物的合成 R＝H，CH3-，CH3CH2-，CH3(CH2)2-，CH3(CH2)3-(2)[99mTcN]2+、[188ReN]2+、[186ReN]2+核中间体的制备西林瓶中加入丁二酰二酰肼，再加入适量NaOH和去离子水使之溶解，用HCl调pH＝7.4；加入Na99mTcO4或Na188Re O4或Na186Re O4溶液后，迅速加入SnCl2溶液，室温下反应，得核中间体；(3)99mTc或188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备调节步骤(2)所得核中间体的pH＝8.0，加入步骤(1)合成的葡萄糖衍生物的水-乙醇溶液，室温下反应，得99mTc或188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物。
4.一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备方法，其步骤如下(1)葡萄糖衍生物的合成 R＝H，CH3-，CH3CH2-，CH3(CH2)2-，CH3(CH2)3-(2)[99mTcO]3+、[188ReO]3+、[186ReO]3+标记的葡萄糖衍生物配合物的制备在步骤(1)合成的葡萄糖衍生物的水溶液中加入Na99mTcO4、Na188ReO4或Na186Re O4溶液，迅速加入SnCl2溶液，调pH＝8.0～8.5，分别得[99mTcO]3+、[188ReO]3+、[186ReO]3+标记的葡萄糖衍生物配合物。
5.一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备方法，其步骤如下(1)葡萄糖衍生物的合成 R＝H，CH3-，CH3CH2-，CH3(CH2)2-，CH3(CH2)3-(2)[99mTc(CO)3(H2O)3]1+、[188Re(CO)3(H2O)3]1+或[186Re(CO)3(H2O)3]1+核中间体的制备将酒石酸钠钾和碳酸钠加入到西林瓶中，再迅速加入硼氢化钠，加水，压盖密封，通一氧化碳；加入Na99mTcO4或Na188Re O4或Na186ReO4溶液，在再80℃下反应，得核中间体；(3)99mTc或188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备调节步骤(2)所得核中间体的pH＝8.0，加入步骤(1)合成的葡萄糖衍生物的溶液，65～75℃反应，再冷却至室温，得99mTc或188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物。
6.一种99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备方法，其步骤如下(4)葡萄糖衍生物的合成 R＝H，CH3-CH3CH2-，CH3(CH2)2-，CH3(CH2)3-(2)[99mTcN]2+、[188ReN]2+或[186ReN]2+核心中间体的制备西林瓶中加入丁二酰二酰肼，再加入适量NaOH和去离子水使之溶解，用HCl调pH＝7.4；加入Na99mTcO4或Na188Re O4或Na186ReO4溶液后，迅速加入SnCl2溶液，室温下反应，得核心中间体；(3)99mTc、188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物的制备调节步骤(2)所得核中间体的pH＝7.5～8.0，加入步骤(1)合成的葡萄糖衍生物的水-乙醇溶液(浓度为50％)和PNP5或PNP6或L6，所述水-乙醇溶液与所述PNP5、PNP6或L6之间的重量比为1∶1，在80℃水浴下反应，得99mTc或188Re或186Re标记的葡萄糖衍生物配合物。
全文摘要
本发明涉及一种
文档编号A61K51/02GK101020696SQ200610114498
公开日2007年8月22日 申请日期2006年11月10日 优先权日2006年11月10日
发明者朱霖, 刘锰, 刘亚静, 余媛 申请人:北京师范大学