专利名称：治疗不孕不育症的中药制剂及制备方法和质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗不孕不育症的中药制剂及制备方法和质量控制方法，属于中药技术领域。
背景技术：
据资料报道，现有10～15％的育龄妇女由于种种原因而不能生育，且随着社会的发展，人们生活方式和生活环境的巨大变化，诸如生活节奏加快，精神压力加大，环境污染加剧等等，不能生育现象呈现增多的趋势。造成不孕症的原因有多种，女性主要有阴道、宫颈、子宫异常，卵巢异常，性传播疾病、生殖器结核，免疫性原因或重复性流产等多种因素；男性主要有精液精子异常、性功能障碍、生殖器官异常、内分泌异常等因素。目前市场上有多种治疗不孕不育症的药物，但其临床治疗效果普遍不够理想，尤其是免疫性原因引起的不孕不育症的治疗难度更大。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗不孕不育症的中药制剂及制备方法和质量控制方法。
本发明是这样构成的它是用冬虫夏草31g、淫羊藿93g、当归124g、制首乌93g、女贞子93g、三棱93g、补骨脂124g、枸杞子93g和桃仁93g制成的。
所述的中药制剂为胶囊剂、片剂或颗粒剂。
本发明所述治疗不孕不育症的中药制剂的制备方法为取80％量的淫羊藿、当归、制首乌、女贞子、三棱、补骨脂、枸杞子和桃仁，加6倍量70％的乙醇，回流1.5小时，滤过，滤液另置，滤渣加70％的乙醇4倍量，加热回流1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，溶液另置；滤渣加5倍量的水煎煮1.5小时，滤过，合并溶液，浓缩，烘干，干膏粉碎；再取冬虫夏草及剩余20％量的八味药材，粉碎成细粉；干膏和原生药粉混合制粒，烘干，整粒，按常规方法制成不同的制剂。
胶囊剂这样制备取80％量的淫羊藿、当归、制首乌、女贞子、三棱、补骨脂、枸杞子和桃仁，加6倍量70％的乙醇，回流1.5小时，滤过，滤液另置，滤渣加70％的乙醇4倍量，加热回流1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，溶液另置；滤渣加5倍量的水煎煮1.5小时，滤过，合并溶液，浓缩，烘干，干膏粉碎；再取冬虫夏草及剩余20％量的八味药材，粉碎成细粉；干膏和原生药粉混合制粒，烘干，整粒，填充胶囊，制成1000粒，即得。
片剂这样制备取80％量的淫羊藿、当归、制首乌、女贞子、三棱、补骨脂、枸杞子和桃仁，加6倍量70％的乙醇，回流1.5小时，滤过，滤液另置，滤渣加70％的乙醇4倍量，加热回流1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，溶液另置；滤渣加5倍量的水煎煮1.5小时，滤过，合并溶液，浓缩，烘干，干膏粉碎；再取冬虫夏草及剩余20％量的八味药材，粉碎成细粉；干膏和原生药粉混合制粒，烘干，整粒，压片，包衣，制成1000片，即得。
颗粒剂这样制备取80％量的淫羊藿、当归、制首乌、女贞子、三棱、补骨脂、枸杞子和桃仁，加6倍量70％的乙醇，回流1.5小时，滤过，滤液另置，滤渣加70％的乙醇4倍量，加热回流1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，溶液另置；滤渣加5倍量的水煎煮1.5小时，滤过，合并溶液，浓缩，烘干，干膏粉碎；再取冬虫夏草及剩余20％量的八味药材，粉碎成细粉；干膏和原生药粉混合制粒，烘干，制成1000g，即得。
本发明所述治疗不孕不育症的中药制剂的质量控制方法为所述质量控制方法包括性状对于胶囊剂，内容物为棕褐色颗粒，气香，味微苦；对于片剂药物显棕褐色，气香，味微苦；对于颗粒剂药物为棕褐色颗粒，气香，味微苦；鉴别(1)取本制剂0.5g，研细，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至3g，作为供试品溶液；另取何首乌对照药材0.25g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2005版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶II薄层板上使成条状，以苯∶乙醇＝2∶1为展开剂，展至约3.5cm，取出，晾干，再以苯∶乙醇＝4∶1为展开剂，展至约7cm，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑，再喷磷钼酸硫酸溶液，稍加热，立即置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑；(2)取本制剂0.5g，研细，加醋酸乙脂20ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙脂1ml使溶解，作为供试品溶液；另取补骨脂对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2005版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙烷∶醋酸乙脂＝4∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％氢氧化钾醇溶液，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的两个蓝白色荧光斑点；检查应符合中国药典2005版一部附录胶囊剂、片剂或颗粒剂项下有关的各项规定。
本发明方解肾主生殖，乃孕育之本，肝肾精亏，机体正气虚弱，加之饮食劳欲不结感染邪毒，致使阴阳气血失调，男女两“精”难于相搏不能成孕。方中淫羊藿、补骨脂合用以温补肾阳，强精益髓；辅以制首乌、当归、冬虫夏草滋补肺肾，养血柔肝，以增强主药补肾填精之功；佐以枸杞子、女贞子，补益肝1肾，滋阴养血，以平主药过温之性；使之三棱、桃仁以活血化瘀。全方温凉并用，消补兼施，使其补而不腻，温而不燥。诸药合用共奏补益肝肾，调和营血，活血化瘀之功。
本发明的功能主治本发明制剂具有补肝益肾，消热利湿，调和营血，活血化淤的功能。用于免疫性引起的不孕不育症。
为了验证本发明制剂具有良好的治疗效果，申请人进行了一系列试验研究，具体如下药效学试验一、本发明(抗免)胶囊与功能有关的主要药效学试验(一)本发明(抗免)胶囊对抗精子抗体阳性大鼠模型的影响1材料与方法1.1试验药物 抗免胶囊由遵义生殖医药研究所制剂室生产提供。强的松片由浙江仙琚药业生产。
1.2试剂Freund完全佐剂石蜡油与无水羊毛脂按2∶1加热混匀，使用前加入死卡介苗2mg/ml。AsAb(抗精子抗体)由福建三明市蓝波生物技术有限公司提供。
1.3动物 SD大鼠体重180～250g，共80只，其中雌性60只，雄性20只，由重庆第三军医大动物实验中心提供。
1.4方法 参考罗颂平法建立AsAb阳性大鼠模型，以人精子作为抗原免疫大鼠，使之产生抗人精子的AsAb。取22份正常人精液2000rpm离心30min，弃精浆，生理盐水洗涤两次，充分混匀，以生理盐水调配成3000×109/L，用注射器反复抽吸研磨；将已加佐剂的精子抗原注入雌性实验鼠双侧腹股沟皮下，每侧0.5ml；首次免疫14天后，取混合的人精子悬液(浓度为1×109/L)，在相同部位皮下注射0.5ml，每隔一周加强免疫一次，最多经4次免疫，所有免疫大鼠血清经ELISA检测证实抗精子抗体(AsAb)呈阳性反应。
将AsAb阳性雌鼠60只随机分成4组。大鼠于第4次免疫后1周开始给药或生理盐水每日1次，连续4周。服药2周后，将实验鼠与正常雄性SD大鼠按3∶1合笼2周，停药后第6天处死。各组大鼠均在首次免疫前、各次加强免疫后1周取血，分离血清20℃保存，采用ELISA法测定AsAb；若为阴性，则加强免疫。停药第6天处死大鼠，取子宫、卵称重，常规病理切片检查，比较各组大鼠受孕率及孕鼠平均着床点数。
实验结果表明抗免胶囊组大鼠受孕率、AsAb转阴率、子宫卵巢重量均高于强的松和生理盐水组。提示抗免胶囊有抑制AsAb、促进子宫、卵巢发育，提高受孕率的作用。
(二)本发明(抗免)胶囊对SD鼠血清抗精子抗体的影响
1材料与方法1.1试验药物 抗免胶囊由遵义生殖医药研究所制剂室生产提供。
成年SD鼠40只，雌、雄各半，体重180～250g。实验前雌雄分笼饲养。随机分抗免胶囊及对照组，每组20只(雌、雄各半)。
1.3实验方法1.3.1SD鼠血清AsAb阳性模型的建立取22份人正常精液，离心弃去精浆，用生理盐水洗涤两次，混合，配成浓度为3000×109/L的精子混悬液，加入福氏佐剂(无水羊毛脂10g、石蜡油20g，加热搅拌混匀)，使用前加死卡介苗(浓度为2mg/ml)混匀作为抗原(此时精子浓度为300×109/L)。分别给抗免胶囊组及对照组的SD鼠双侧腹股沟皮下注射0.5ml抗原作为首次免疫。14天后，再取18份人精液混合、离心、洗涤两次，调整精子浓度为1×109/L的混悬液，于相同部位皮下注射各0.5ml，进行加强免疫。
1.3.2给药及采血在首次免疫后一周开始给抗免胶囊的SD鼠灌胃，灌以抗免胶囊剂量为成人剂量的3倍；对照组灌以相同容量的清水；每天1次，连续4周。于免疫前及停药后第1天、第6天分别在乙醚麻醉下眼球采血，分离血清，20℃保存，统一测定血清AsAb的水平1.3.3SD鼠血清AsAb的测定采用浅盘凝集法。浅盘为国产的72孔微量血清筛选板。开始实验时，先于板内加入液体石蜡，待其将每个小孔均封住时(注意孔内勿留气泡)把剩余的石蜡油倒出。每小孔内加入不同稀释度(稀释度为1∶20，1∶40，1∶80，1∶160，1∶320，1∶640)的SD鼠血清2μl，精子悬液1μl(浓度30×109/L，活动率＞50％，无凝集)，室温下孵育60分钟，在倒置显微镜下观察结果。结果判读标准L活动精子的凝集数＞活动精子总数的10％为阳性。
结果表明抗免胶囊组SD鼠的血清AsAb阴性率明显高于对照组(P＜0.05)，说明具有抑制AsAb产生的作用。
药效学试验结果表明本发明药物制剂对治疗免疫性引起的不育不孕症有效。
二、急性毒性试验本发明胶囊混悬液一日二次，以16g/kg、合生药36.48g/kg、相当于临床拟用药量的300倍灌胃小鼠。连续观察7天，未见动物死亡和任何毒性反应，表明本发明胶囊无急性毒性反应。
本发明胶囊作为医院制剂，临床试用多年，通过临床疗效观察，有效率达96％。上千例病例中，均未见严重及明显的毒副作用。
三、临床资料遵义生殖医药研究所附院保存有抗免胶囊治疗免疫性不育不孕症临床病患的病历上千余份。
与现有技术相比，本发明制剂具有补肝益肾，消热利湿，调和营血，活血化淤的作用，临床用于免疫性引起的不孕不育症，其疗效显著，治愈率高，且无明显毒副作用，是一种安全、有效、质量可控的治疗不孕不育症的中药。
具体实施例方式本发明的实施例1冬虫夏草31g、淫羊藿93g、当归124g、制首乌93g、女贞子93g、三棱93g、补骨脂124g、枸杞子93g、桃仁93g取80％量的淫羊藿、当归、制首乌、女贞子、三棱、补骨脂、枸杞子和桃仁，加6倍量70％的乙醇，回流1.5小时，滤过，滤液另置，滤渣加70％的乙醇4倍量，加热回流1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，溶液另置；滤渣加5倍量的水煎煮1.5小时，滤过，合并溶液，浓缩，烘干，干膏粉碎；再取冬虫夏草及剩余20％量的八味药材，粉碎成细粉；干膏和原生药粉混合制粒，烘干，整粒，填充胶囊，制成1000粒，即得胶囊剂。本产品口服，一日3次，一次5粒。
本发明的实施例2冬虫夏草31g、淫羊藿93g、当归124g、制首乌93g、女贞子93g、三棱93g、补骨脂124g、枸杞子93g、桃仁93g取80％量的淫羊藿、当归、制首乌、女贞子、三棱、补骨脂、枸杞子和桃仁，加6倍量70％的乙醇，回流1.5小时，滤过，滤液另置，滤渣加70％的乙醇4倍量，加热回流1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，溶液另置；滤渣加5倍量的水煎煮1.5小时，滤过，合并溶液，浓缩，烘干，干膏粉碎；再取冬虫夏草及剩余20％量的八味药材，粉碎成细粉；干膏和原生药粉混合制粒，烘干，整粒，压片，包衣，制成1000片，即得片剂。
本发明的实施例3冬虫夏草31g、淫羊藿93g、当归124g、制首乌93g、女贞子93g、三棱93g、补骨脂124g、枸杞子93g、桃仁93g取80％量的淫羊藿、当归、制首乌、女贞子、三棱、补骨脂、枸杞子和桃仁，加6倍量70％的乙醇，回流1.5小时，滤过，滤液另置，滤渣加70％的乙醇4倍量，加热回流1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，溶液另置；滤渣加5倍量的水煎煮1.5小时，滤过，合并溶液，浓缩，烘干，干膏粉碎；再取冬虫夏草及剩余20％量的八味药材，粉碎成细粉；干膏和原生药粉混合制粒，烘干，制成1000g，即得颗粒剂。
本发明的实施例4本发明制剂的质量控制方法为
性状对于胶囊剂，内容物为棕褐色颗粒，气香，味微苦；对于片剂药物显棕褐色，气香，味微苦；对于颗粒剂药物为棕褐色颗粒，气香，味微苦；鉴别(1)取本制剂0.5g，研细，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至3g，作为供试品溶液；另取何首乌对照药材0.25g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2005版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上使成条状，以苯∶乙醇＝2∶1为展开剂，展至约3.5cm，取出，晾干，再以苯∶乙醇＝4∶1为展开剂，展至约7cm，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑，再喷磷钼酸硫酸溶液，稍加热，立即置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑；(2)取本制剂0.5g，研细，加醋酸乙脂20ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙脂1ml使溶解，作为供试品溶液；另取补骨脂对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2005版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙烷∶醋酸乙酯＝4∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％氢氧化钾甲醇溶液，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的两个蓝白色荧光斑点；检查应符合中国药典2005版一部附录胶囊剂、片剂或颗粒剂项下有关的各项规定。
权利要求
1.一种治疗不孕不育症的中药制剂，其特征在于它是用冬虫夏草31g、淫羊藿93g、当归124g、制首乌93g、女贞子93g、三棱93g、补骨脂124g、枸杞子93g和桃仁93g制成的。
2.按照权利要求1所述治疗不孕不育症的中药制剂，其特征在于所述的中药制剂为胶囊剂、片剂或颗粒剂。
3.如权利要求1或2所述治疗不孕不育症的中药制剂的制备方法，其特征在于取80％量的淫羊藿、当归、制首乌、女贞子、三棱、补骨脂、枸杞子和桃仁，加6倍量70％的乙醇，回流1.5小时，滤过，滤液另置，滤渣加70％的乙醇4倍量，加热回流1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，溶液另置；滤渣加5倍量的水煎煮1.5小时，滤过，合并溶液，浓缩，烘干，干膏粉碎；再取冬虫夏草及剩余20％量的八味药材，粉碎成细粉；干膏和原生药粉混合制粒，烘干，整粒，按常规方法制成不同的制剂。
4.按照权利要求3所述治疗不孕不育症的中药制剂的制备方法，其特征在于胶囊剂这样制备取80％量的淫羊藿、当归、制首乌、女贞子、三棱、补骨脂、枸杞子和桃仁，加6倍量70％的乙醇，回流1.5小时，滤过，滤液另置，滤渣加70％的乙醇4倍量，加热回流1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，溶液另置；滤渣加5倍量的水煎煮1.5小时，滤过，合并溶液，浓缩，烘干，干膏粉碎；再取冬虫夏草及剩余20％量的八味药材，粉碎成细粉；干膏和原生药粉混合制粒，烘干，整粒，填充胶囊，制成1000粒，即得。
5.按照权利要求3所述治疗不孕不育症的中药制剂的制备方法，其特征在于片剂这样制备取80％量的淫羊藿、当归、制首乌、女贞子、三棱、补骨脂、枸杞子和桃仁，加6倍量70％的乙醇，回流1.5小时，滤过，滤液另置，滤渣加70％的乙醇4倍量，加热回流1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，溶液另置；滤渣加5倍量的水煎煮1.5小时，滤过，合并溶液，浓缩，烘干，干膏粉碎；再取冬虫夏草及剩余20％量的八味药材，粉碎成细粉；干膏和原生药粉混合制粒，烘干，整粒，压片，包衣，制成1000片，即得。
6.按照权利要求3所述治疗不孕不育症的中药制剂的制备方法，其特征在于颗粒剂这样制备取80％量的淫羊藿、当归、制首乌、女贞子、三棱、补骨脂、枸杞子和桃仁，加6倍量70％的乙醇，回流1.5小时，滤过，滤液另置，滤渣加70％的乙醇4倍量，加热回流1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，溶液另置；滤渣加5倍量的水煎煮1.5小时，滤过，合并溶液，浓缩，烘干，干膏粉碎；再取冬虫夏草及剩余20％量的八味药材，粉碎成细粉；干膏和原生药粉混合制粒，烘干，制成1000g，即得。
7.如权利要求1、2或3所述治疗不孕不育症的中药制剂的质量控制方法，其特征在于所述质量控制方法包括性状对于胶囊剂，内容物为棕褐色颗粒，气香，味微苦；对于片剂药物显棕褐色，气香，味微苦；对于颗粒剂药物为棕褐色颗粒，气香，味微苦；鉴别(1)取本制剂0.5g，研细，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至3g，作为供试品溶液；另取何首乌对照药材0.25g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2005版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上使成条状，以苯∶乙醇＝2∶1为展开剂，展至约3.5cm，取出，晾干，再以苯∶乙醇＝4∶1为展开剂，展至约7cm，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑，再喷磷钼酸硫酸溶液，稍加热，立即置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑；(2)取本制剂0.5g，研细，加醋酸乙脂20ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙脂1ml使溶解，作为供试品溶液；另取补骨脂对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2005版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙烷∶醋酸乙酯＝4∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％氢氧化钾甲醇溶液，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的两个蓝白色荧光斑点；检查应符合中国药典2005版一部附录胶囊剂、片剂或颗粒剂项下有关的各项规定。
全文摘要
本发明提供了一种治疗不孕不育症的中药制剂及制备方法和质量控制方法，它是用冬虫夏草31g、淫羊藿93g、当归124g、制首乌93g、女贞子93g、三棱93g、补骨脂124g、枸杞子93g和桃仁93g制成的；与现有技术相比，本发明制剂具有补肝益肾，消热利湿，调和营血，活血化淤的作用，临床用于免疫性引起的不孕不育症，其疗效显著，治愈率高，且无明显毒副作用，是一种安全、有效、质量可控的治疗不孕不育症的中药。
文档编号A61K9/16GK1827151SQ200610200350
公开日2006年9月6日 申请日期2006年4月14日 优先权日2006年4月14日
发明者马静 申请人:遵义生殖医药研究所