含1-(2-甲基丙基)-1h-咪唑并[4,5-c][1,5]二氮杂萘-4-胺的水性凝胶制剂的制作方法

专利名称：：含1-(2-甲基丙基)-1h-咪唑并[4,5-c][1,5]二氮杂萘-4-胺的水性凝胶制剂的制作方法含1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并14，5-q[l，51二氮杂萘l胺的水性凝胶制剂相关申请的交叉参考本申请要求2005年2月4日提交的美国临时申请60/649932以及2005年7月12曰提交的美国临时申请60/698416的优先权，所有这些申请通过引用全文纳入本文。发明背景许多咪哗并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-稠合的环烷基咪唑并吡啶胺、1，2-桥接的咪唑并喹啉胺、噻唑并喹啉胺、噁唑并喹啉胺、噻唑并吡啶胺、噁唑并吡啶胺、咪唑并二氮杂萘胺、咪唑并四氢二氮杂萘胺和噻唑并二氮杂萘胺化合物显示强效免疫刺激、抗病毒和抗肿瘤(包括抗癌)活性，也是有用的疫苗佐剂，可用于治疗TH2-介导的疾病。这些化合物在下文中将总称为"IRM"(免疫反应调节剂)化合物。认为这些IRM化合物的免疫刺激活性的机制在很大程度上是因为诱导各种重要的细胞因子(例如，干扰素、白介素、肿瘤坏死因子等)引起免疫反应的提高。这些化合物能够刺激某些单核细胞/巨噬细胞来源的细胞因子快速释放，还能够刺激B细胞分泌抗体，这在IRM化合物的活性中起着重要的作用。对于这些化合物一种重要的免疫刺激反应是诱导千扰素(IFN)-a的产生，认为这在急性抗病毒和抗肿瘤活性中是非常重要的。而且，上调其它细胞因子，例如肿瘤坏死因子(TNF)、白介素-l(IL-l)、IL-6和IL-12也具有潜在的有益活性，认为有助于这些化合物的抗病毒和抗肿瘤性质。虽然IRM的一些有益作用是已知的，但是通过在特定部位局部应用IRM化合物来治疗特定病症而提供治疗效果的能力受到许多因素的限制。这些因素包括应用制剂的皮肤或粘膜组织的刺激、制剂的纤毛清除、制剂流失、IRM化合物在制剂中不溶解和/或降解、制剂的物理不稳定性(例如，组分分离、稠化、活性成分沉淀/聚集等)、渗透性差。因此，仍然需要新方法和制剂使该类化合物提供最大治疗优点。发明概述本发明涉及水性凝胶制剂、试剂盒以及使用方法。在本文中，"凝胶"指基本上不含油的组合物(因而不是乳膏或乳液)。优选地，本发明凝胶在室温下(即约20。C)的粘度至少为1000厘泊(cps)。优选地，本发明凝胶的粘度不大于50,000cps，更优选不大于30,000cps。由于游离碱在水中的低溶解性，某些11^不能容易地形成水性凝胶，尤其是1-(2-甲基内基)-1//-咪唑并[4，5乂][1，5]二氮杂萘4-胺。所以，通常采用共溶剂或是原位制备IRM盐。这就导致需要带负电荷的增稠剂，尤其是两种带负电荷的增稠剂来提供所需的粘度。在本发明优选的实施例中，带负电荷的增稠剂并非共价结合于l-(2-甲基丙基—1//-咪唑并[4,5-^][1，5]二氮杂萘~4~胺。在一个实施例中，水性凝胶包含水；1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4,5-01[1,5]二氮杂萘"4-胺；药学上可接受的酸；至少10重量％的可与水混溶的共溶剂；和含带负电荷的增稠剂(优选至少两种带负电荷的增稠剂)的增稠剂体系；其中，20。C下所述水性凝胶的粘度至少是1000厘泊的(cps)。在一个实施例中，通过以下方法制备水性凝胶，该方法包括组合以下成分水；1"(2-甲基丙基)一1//一咪唑并[4，5—c][l，5]二氮杂萘4—胺盐；至少10重量％的可与水混溶的共溶剂；和含带负电荷的增稠剂(优选至少两种带负电荷的增稠剂)的增稠剂体系；其中，20。C下所述水性凝胶的粘度至少是1000厘泊(cps)。本发明水性凝胶制剂能够为1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4，5-0][1，5]二氮杂萘4-胺提供所需的运载体，制造更容易，并且1-(2-甲基丙基>~1//-咪唑并[4，5-c][l,5]二氮杂萘一-胺的滞留时间(尤其是在粘膜组织上)增加。而且，本发明水性凝胶中使用带负电荷的增稠剂可减少药物全身接触，从而降低细胞因子的全身水平。这在优选治疗特定部位(例如，宫颈非典型增生)的许多病症中是有利的。在药物(无论是游离碱或盐的形式)水溶性差而使用较高水平共溶剂的情况下，需要使用带负电荷的增稠剂的组合(即，至少两种)。这就产生全身接触减少且物理稳定的水性凝胶。本发明还提供了本发明制剂的使用方法。在一个实施例中，本发明提供了将l-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4，5^][1,5]二氮杂萘~4~胺递送至对象粘膜组织的方法，该方法包括应用本发明水性凝胶。优选地，粘膜组织与选自下组的病症有关宫颈非典型增生、宫颈乳头状瘤病毒感染、低度鳞状上皮内病损、高度鳞状上皮内病损、不明诊断意义的非典型磷状细胞、宫颈上皮内瘤、特应性过敏反应、变应性鼻炎、瘤性病损和癌前病损。本发明还提供了包括桶型施加器(barreltypeapplicator)和本发明水性凝胶的试剂盒，水性凝胶位于独立容器中或预填充在桶型施加器中。当术语"包含"及其各种形式出现在说明书和权利要求书中时不具有限制的含义。文中，"一个"、"一种"、"这种"、"至少一种"和"一种或多种"可互换使用。因此，例如，水性凝胶含有"一种"防腐剂可解释为凝胶含有"一种或多种"防腐剂。同样在本文中，用端点列举的数字范围包括该范围内的所有数字(例如，l-5包括1、1.5、2、2.75、3、3.80、4、5等)。上面的发明概述不是要描述各个公开的实施方案或本发明的每种实施例。下面的描述更具体地举例说明了示例性的实施方案。在申请的不同段落处，还通过可以按照不同组合使用的实施例列表提供了指导。在各种情况下，所提到的列表仅作为代表性的例子而不能理解为是排他性的列表。附图简述图1是1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4,5-^[1,5]二氮杂萘4-胺乙磺酸盐单水合物结晶形式的典型X射线衍射图。图2是1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4，5-^][1，5]二氮杂萘一-胺乙磺酸盐单水合物结晶形式的典型固态l3CNMR谱。图3是l-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4，5-c)[l，5]二氮杂萘^-胺乙磺酸盐单水合物结晶形式的典型等温吸湿曲线。图4是l-(2-甲基丙基—1//-咪唑刑4，5-c][l,5]二氮杂萘4胺乙磺酸盐单水合物结晶形式的典型热分析图，显示了通过DSC和TGA获得的数据的叠加图。示例性实施方案的详细描述本发明提供了水性凝胶制剂、试剂盒以及使用方法。凝胶是基本上不含油的组合物(因而不是乳膏或乳液)。优选地，20。C下本发明凝胶的粘度至少为1000厘泊(cps)。优选地，本发明凝胶的粘度不大于50,000cps，更优选不大于30,000cps。在一个实施例中，水性凝胶包含水；1-(2-甲基丙基H^-咪唑并[4，5"C][1，5]二氮杂萘_4-胺；药学上可接受的酸；至少10重量％的可与水混溶的共溶剂；和含带负电荷的增稠剂的增稠剂体系(优选地，至少两种带负电荷的增稠剂，通常为不同电荷密度)；其中，20。C下水性凝胶的粘度至少为1000厘泊(cps)。在一个实施例中，由以下方法制备水性凝胶，该方法包括组合以下成分水；1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4，5-^1[1，5]二氮杂萘4-胺盐；至少10重量％的可与水混溶的共溶剂和含带负电荷的增稠剂(优选至少两种带负电荷的增稠剂，通常为不同电荷密度)的增稠剂休系其中，20。C下所述水性凝胶的粘度至少是1000厘泊(cps)。室温下，治疗水平(即治疗有效量)的免疫反应调节剂基本上完全溶解在制剂中。该量可有效治疗和/或预防特定疾病。一般，本发明水性凝胶制剂中存在的1《2-甲基内基)-1//-咪唑并[4,5-^[1，5]二氮杂萘4-胺的含量可有效提供所需的生理学作用，例如治疗目标疾病，防止疾病复发，或促进对抗疾病的免疫。在某些实施例中，有效治疗或抑制病毒感染的量指引起病毒感染的一种或多种表现降低的量，这些表现例如是^未处理对照动物相比的病毒载量、病毒产生速率、或死亡率。在某些本发明方法中，粘膜组织与选自下组的疾病有关宫颈非典型增生、宫颈乳头状瘤病毒感染、低度鳞状上皮内病损、高度鳞状上皮内病损、不明诊断意义的非典型磷状细胞、宫颈上皮内瘤、特应性过敏反应、变应性鼻炎、瘤性病损和癌前病损。在某些本发明方法中，粘膜组织位于宫颈上，相关病症选自宫颈非典型增生、高度鳞状上皮内病损、低度鳞状上皮内病损和存在高风险性HPV的不明诊断意义的,典型磷状细胞。在某些本发明方法中，粘膜组织位于宫颈上，相关病症是存在高风险性HPV的不明诊断意义的非典型磷状细胞。在某些本发明方法中，粘膜组织位于宫颈上，相关病症是宫颈乳头状瘤病毒感染。在特定情况下治疗有效的1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4,5乂][1,5]二氮杂萘4-胺的量将取决于诸如给药方案、应用部位、特定制剂和待治疗病症等因素。因此，限定具体给药量通常是不实际的；然而，本领域技术人员能够基于本文提供的指导、IRM领域可获得信息以及常规测试来确定合适的治疗有效量。在一些实施例中，本发明方法包括给予足够的制剂以提供给对象100ng/kg到50mg/kg剂量的1-(2-甲基丙基卜l^-咪唑并[4,5-c][l,5]二氮杂萘"4-胺，虽然在一些实施例中，可给予超出该浓度范围的1-(2-甲基丙基—1//-咪唑并[4，5<][1，5]二氮杂萘j胺来实施方法。在一些实施例中，方法包括给予足够的制剂以提供给对象10ug/kg到5mg/kg剂量，例如100ug/kg至Ulmg/kg剂量的1《2-甲基丙基)一1//一咪唑并[4，5-c][l，5]二氮杂萘4-胺。在本发明制剂的一些实施例中，以水性凝胶的总重量计，1_(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4,5^c][l，5]二氮杂萘4-胺的含量或浓度至少为0.0001重量。/。(wt。/。)，在另一些实施例屮，至少为0.001wt。/。，在另一些实施例中，至少为0.01wt。/。，在另一些实施例中，至少为0.1wt。/。。在--些实施例中，以水性凝胶的总重量计，1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4,5-c][l，5]二氮杂萘4一胺的含量不大于7wt。/。，在另一些实施例中，不大于5wt%，在另一-些实施例中，不大于3wt。/。，在另一些实施例中，不大于2wt。/。，在另一些实施例中，不大于lwt%。l-(2-甲基丙基)-lH咪唑并[4，5-c][l，5]二氮杂萘4-胺可以作为唯一的治疗活性成分或S其它治疗剂的组合形式存在于制剂中。其它治疗剂包括例如，抗生素，例如青霉素或四环素，皮质激素，例如氢化可的松或倍他米松，非甾体抗炎药，例如氟洛芬、布洛芬或萘普生，或抗病毒剂，例如阿昔洛韦或伐昔洛韦。在一些实施例中，上述制剂尤其适合应用一段时间，足以获得所需的治疗作用而不会产生不希望的l-(2-甲基丙基KlH-咪唑并[4,5"C][l，5]二氮杂萘4—胺的全身吸收。本发明IRM，1一2-甲基丙基HH-咪唑并[4，5-c][l,5]二氮杂萘^4-胺与药学上可接受的酸组合存在于凝胶制剂中。这些酸优选以相对于1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4，5-c][l,5]二氮杂萘4-胺的化学计量存在。nT使用许多药学上可接受的酸来形成1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4,5^][1,5]二氮杂萘-4—胺的盐。这些酸的例子参见Berge等，J.Pharm.Sciences,66，1—19(1977)所述。优选的药学上可接受的酸(例如，适合包含在本发明凝胶中或适用于形成本发明IRM的盐)包括例如，烷基硫酸、羧酸、氢卤酸(haloacid)、硫酸、磷酸、二羧酸、三羧酸及其组合。更优选的药学上可接受的酸包括醋酸、氢溴酸、D-葡糖酸、L-乳酸、甲磺酸、乙磺酸、丙酸及其组合。尤其优选的1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4,5<][1，5]二氮杂萘^4-胺的盐是垸基磺酸盐(例如，乙磺酸盐或甲磺酸盐)。盐可在凝胶制剂中原位制备。或者，可在结合入凝胶制剂之前釆用常规方法制备和分离盐。本文所述1-(2-甲基丙基HH-咪唑并[4，5"C][1,5]二氮杂萘4-胺及其盐包括任何药学上可接受的形式，例如异构体(例如非对映体和对映体)、溶剂合物、多晶型物等。具体地说，如果盐具有光学活性，则本发明具体包括使用各个盐的对映体以及对映体的外消旋组合。共溶剂木发明水性凝胶制剂包含可与水混溶的共溶剂。可与水混溶的共溶剂有助于盐形式免疫反应调节剂的溶解。共溶剂可以是单一组分或组合。合适的共溶剂的例子包括f丫LW'.醉、二丙二醇、己二醇、丁二醇、甘油、聚乙二醇(各种分子量，例如300或400)、卄醇单乙醚以及它们的组合。单丙二醇(即丙二醇)尤其优选用作共溶剂。在某些实施例中，以水性凝胶的总重量计，共溶剂(或共溶剂的组合)存在的量至少为10wt。/。，在另一些实施例中，含量大于25wt。/。，在另一些实施例中，至少为30wt%。在某些实施例中，以水性凝胶的总重量计，共溶剂(或共溶剂的组合)存在的量不大于90wt%，在另一些实施例中不大于80wt°/。，在另一些实施例不大于70wt%，在另一些实施例中不大于60wt%，在某些实施例中，以水性凝胶的总重量计，水存在的量至少为10wt%，在另一些实施例中至少为15wt%,在另一些实施例中至少为20wt%，在另一些实施例中至少为25wt%。在某些实施例中，以水性凝胶的总重量计，水存在的量不大于95wtc/。，在其它实施例中不大于90wt°/。，在其它实施例中不大于85wt%。带负电荷的增稠剂本发明水性凝胶制剂包含带负电荷的增稠剂，优选至少两种带负电荷的增稠剂(通常为不同电荷密度)。优选地，增稠剂是粘膜粘附性的。合适的带负电荷的增稠剂的例f-包括纤维素醚如羧甲基纤维素钠多糖树胶如黄原胶和丙烯酸与烯丙基蔗糖或烯丙基季戊四醇等交联形成的丙烯酸聚合物(即均聚物和共聚物)，例如在美国药典屮称为卡波姆的聚合物，和丙烯酸与二乙烯醇交联形成的丙烯酸聚合物，例如在美国药典中称为聚卡波非的聚合物。需要时可使用这些增稠剂的组合。在本发明的一些实施例中，带负电荷的增稠剂包括羧酸和/或羧酸根基团。这些试剂的例子包括羧甲基纤维素钠、黄原胶和丙烯酸聚合物。优选地，本发明某些实施例包含丙烯酸聚合物(即聚丙烯酸聚合物)与多糖树胶(例如，黄原胶)的组合。卡波姆是示例性的(优选的)丙烯酸聚合物。合适的卡波姆包括例如以商品名CARBOPOL销售的化合物(都得自Noveon，Inc.,Cleveland,Ohio,USA)。CARBOPOL聚合物具Yf—定的粘度范围。例如，0.5%的CARBOPOL971P或CARBOPOL941溶液的粘度为4,000—11,000cPs(pH7.5，25°C，布式粘度计，20rpm);0.5%的CARBOPOL934P或CARBOPOL974P溶液的粘度为29,400—39,400cPs(pH7.5,25°C,布式粘度i卜，20rpm);0.5%的CARBOPOL940或CARBOPOL980溶液的粘度为40,000-60,000cPs(pH7.5，25。C，布式粘度计，20rpm)。在某些实施例中，优选诸如CARBOPOL934P、CARBOPOL974P、CARBOPOL940和CARBOPOL980的卡波姆。尤其优选的卡波姆是CARBOPOL974P。在某些实施例中，希望具有相对较高交联的卡波姆。优选较高交联的卡波姆包括CARBOPOL974P、CARBOPOL940和CARBOPOL980。尤其优选的相对较高交联的卡波姆是CARBOPOL974P。合适的聚卡波非包括例如，以商品名NOVEON聚卡波非销售的化合物(都得自Noveon，Inc.,Cleveland,Ohio,USA)。优选的聚卡波非是NOVEONAA—1USP聚卡波非。市售具有不同水性粘度的各种级别的羧甲基纤维素钠。水性1。/。重量/体积(w/力溶液的粘度为5-13,000cps。例子包括羧甲基纤维素钠，高粘度，USP(CA194);羧甲基纤维素钠，中等粘度，USP(CA192);和羧甲基纤维素钠，低粘度，USP(CA193);它们者卩得自SpectrumChemicalsandLaboratoryProducts,Inc.,Gardena，CA，USA;以及AKUCELLAF3085(高粘度)、AKUCELLAF2785(中等粘度)和AKUCELLAF0305(低粘度)，它们都得自AkzoNobelFunctionalChemicals,Amersfoort，TheNetherlands。在某些实施例中，增稠剂体系包含多糖树胶和丙烯酸聚合物。优选地，多糖树胶与丙烯酸聚合物的重量比在1:20到20:1的范围内。在某些实施例中，重量比在1:10到10:1的范围内，在另一些实施例中，重量比在1:5到5:1的范围内，在另一些实施例中，重量比在1:3到3:1的范围内，在另一些实施例中，重量比在1:2到2:1的范围内。尤其优选重量比为1:2。本发明制剂中增稠剂体系存在的量足以使粘度到达至少1000厘泊(cps)，优选至少5000cps，更优选至少8000cps，最优选至少10000cps。对于粘度/剪切率，采用受控速度步进试验，在1和80s-1之间用16s-1为内插值，以装配有35mm2。锥体的HaakeRS系列流变仪测定了20±0.5°C时的粘度。实施例中显小的仿为16s-1吋的值。在某些实施例中，以水性凝胶的总重量计，增稠剂体系的含量或浓度至少为0.1wt%，在另一些实施例中，至少为0.5wt%，在另一些实施例中至少为1.0wt%，在另一些实施例中至少为1.5wt%。在某些实施例中，以水性凝胶的总重量计，增稠剂体系的含量不大于7wty。，在另一些实施例中不大于6wt。/。，在另一些实施例中不大于5wt°/。，在另一些实施例中不大于4wt%。pH调节剂和缓冲剂本发明水性凝胶制剂还包含药学上可接受的pH调节剂，以将制剂的pH值调节至所需的范围。通常，pH值至少为2，优选至少为3。通常，pH值不大于6，优选不大于5，更优选不大于4。pH调节剂可以是任何药学上可接受的酸或碱。合适的pH调节剂的例子包括盐酸、氢氧化钠、氨基丁三醇和氢氧化钾。需要时也可使用这些试剂的组合。本发明水性凝胶制剂还包含药学上可接受的缓冲剂以使制剂的pH值维持在所需的范围(优选2-6，更优选34)。缓冲剂可以是能提供一种或多种所需pH范围的任何药学上可接受的缓冲剂。合适的缓冲剂的例子包括含乳酸、酒石酸、柠檬酸和琥珀酸的缓冲剂。需要时也可使用缓冲剂的组合。缓冲剂还可用作张力调节剂。防腐剂本发明水性凝胶制剂还可包含防腐剂。防腐剂包括在组合物内抑制微生物生长(例如真菌和细菌生长)的一种或多种化合物。合适的防腐剂是水溶性的，包括季铵化合物(例如苯索氯铵)、苄索氯铵、对羟基苯甲酸酯(例如，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯)、硼酸、甲醛供体(例如，乙内酰脲)、异噻唑啉酮、有机酸(例如山梨酸)、醇(例如，苯乙醇、甲酚、三氯叔丁醇、苯甲醇)、氨基甲酸酯、氯己定以及它们的组合。优选地，防腐剂是对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯或其组合。某些可与水混溶的共溶剂如甘油或丙二醇也具有抗微生物性质。在某些实施例中，以水性凝胶的总重量计，防腐剂(或防腐剂的组合)存在的量至少为0.005wt。/。，在另一些实施例中，至少为0.01wt。/。，在另一些实施例中，至少为0.015wt。/。，在另一些实施例中，至少为0.02wt%。在某些实施例中，以水性凝胶的总重量计，防腐剂(或防腐剂的组合)存在的'、:;:不人r1.0wt。/。，在另-些实施例中，至多0.75wt。/。，在另一些实施例中，至多0.5wt%，/|二另-.些实施例中，不大于0.4wt%。螯合剂本发明水性凝胶制剂可还包含螯合剂。螯合剂是络合金属离子的化合物。合适的螯合剂的例子包括乙二胺四乙酸(EDTA)及其衍生物如二钠盐、乙二胺四乙酸二钠二水合物、以及它们的组合。优选地，螯合剂是乙二胺四乙酸二钠盐二水合物(依地酸二钠)。在某些实施例中，以水性凝胶的总重量计，螯合剂(或螯合剂的组合)存在的量至少为0.001wt%，在另一些实施例中，至少为0.01wt%，在另一些实施例中，至少为0.02wt%。在某些实施例中，以水性凝胶的总重量计，螯合剂(或螯合剂的组合)存在的量不大于2.0wt%，在另一些实施例中不大于1.5wt%，在另一些实施例中不大于1.0wt%。应用本发明水性凝胶制剂可用于治疗或预防粘膜组织相关疾病。在一些实施例中，本发明提供了尤其适合用作宫颈局部应用来治疗诸如宫颈非典型增生之类的宫颈疾病的方法，包括人乳头状瘤病毒(HPV)相关非典型增生、低度鳞状上皮内病损、高度鳞状上皮内病损、不明诊断意义的非典型磷状细胞(通常存在高风险性HPV)和宫颈上皮内瘤(CIN)。本发明还提供了治疗粘膜相关疾病的方法。或者说，本发明提供了治疗粘膜组织相关疾病的方法。在本发明方法中，本发明水性凝胶可每周一次或每周几次应用。例如，水性凝胶可每周两次，每周三次，每周五次，甚至是每天使用。在本发明方法中，本发明水性凝胶的应用可持续至少一周，至少两周，至少三周，至少一个月，至少两个月，至少三个月，或更多时间，视所需治疗方案而定。给定疾病或对象的实际给药(治疗)方案至少部分地取决于本领域已知的许多因素，包括但不限于，l-(2-甲基丙基HH-咪唑并[4，5-C][l，5]二氮杂萘4-胺的物理和化学性质，递送物质的性质，给药的1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4，5-c][l，5]二氮杂萘^-胺的量，对象免疫系统的状态(例如，受抑制、缺乏、受刺激)，给予1《2-甲基丙某)-1//-咪啤并|—4,5-c][l，5]二氮杂萘4-胺的方法，以及给予1《2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4,5-c][1，5].:氮杂蔡一-胺的物种。本发明方法可应用于任何合适的对象。合适的对象包括但不限于动物，例如但不限于人、除人之外的灵长类动物、啮齿动物、狗、猫、马、猪、绵羊、山羊、奶牛或鸟。本发明方法适用于多种医疗目的，包括治疗、预防(例如疫苗佐剂)或诊断。如本文所用，"治疗"疾病或对象包括治疗、预防和诊断处理。术语"打效量"(例如治疗或预防有效量)表示足以产生所需(治疗或预防)效果，如诱导细胞因子、抑制HT2免疫反应、抗病毒或抗肿瘤活性、降低或消除肿瘤细胞的化合物的量。在具体情况下治疗有效的1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4,5^|[1,5]二氮杂萘^-胺的量取决于给药方案、应用部位、特定制剂和待治疗疾病等因素。因此，限定具体给药量通常是不实用的；然而，本领域技术人员能够基于本文提供的指导、IRM领域可获得信息来确定合适的治疗有效量。^采片j本发明方法将1-(2-甲基丙基—1//-咪唑并[4,5^][1，5]二氮杂萘4-胺应用于粘膜组织来治疗粘膜相关疾病。如本文所用，"粘膜相关疾病"表示炎症、感染、肿瘤、或其它涉及粘膜组织或者足够接近粘膜组织、因而受到局部应用于粘膜组织的治疗剂影响的疾病。这些疾病的例子包括宫颈乳头状瘤病毒感染，宫颈非典型增生，包括人乳头状瘤病毒(HPV)相关非典型增生、低度鳞状上皮内病损、高度鳞状上皮内病损、不明诊断意义的非典型磷状细胞(通常存在高风险性HPV)、宫颈上皮内瘤(C1N)、特应性过敏反应、变应性鼻炎、瘤性病损和癌前病损。如本文所用，"粘膜组织"包括粘膜如口颊、牙龈、鼻腔、眼睛、气管、支气管、胃肠道、直肠、尿道、输尿管、阴道、宫颈和子宫粘膜。例如，可以用所述方法治疗口腔病损、阴道病损或肛门病损。也可以将该方法与疫苗粘膜应用联合使用。在一个实施例中，l-(2-甲基丙基—lH-咪唑并[4,5"C][l,5]二氮杂萘4-胺可应用于阴道或阴道上方粘膜组织，用于治疗宫颈非典型增生。在另一些实施例中，IRM可于—良肠粘膜组织，用于治疗例如肛管湿疣。木发明方法可以治疗的宫颈非典型增生优选包括非典型增生疾病，例如低度鳞状l.皮内病损、高度鳞状上皮内病损、不明诊断意义的非典型磷状细胞(通常存在高风险性hpv)和，';颈I-.皮内瘤(cin)。即使对妇女进行广泛筛査来检测前兆性细胞变化，在美国每年仍然大约有16,000个新病例被诊断为侵入性宫颈癌。而且，仅在美国就大约有3,000例宫颈癌导致的死亡，通常仅次于没有及时检测到原发性癌症病损的情况。巴氏试验(巴氏涂片)是自从1950年以来己被接受的筛查试验，用于检测异常宫颈细胞，包括炎症和非典型增生如宫颈癌。该筛査试验在工业化国家中被广泛采用，对宫颈癌相关死^率具有深远影响。异常的巴氏涂片有利于仔细观察疾病进程，具有破坏或切除癌性或癌前组织的治疗性介入的潜力。这些切除治疗是昂贵、不舒服的，伴随着2%-23%的失败率，对于较晚期的病损失败率更高。近来报道激光治疗后的失败率约为10%。最初认为宫颈癌的病原是疱疹病毒。但是，焦点从疱疹病毒逐渐转移至人乳头状瘤病毒(HPV)。对近来方法的改良的实验方法鉴定了HPV亚型的全病毒谱，结论是高风险HPV型(例如，HPV16、18和较少见的31、33、35、45)很可能是宫颈非典型增1-:和^续癌症的唯一起始因子(即致癌剂)。正常细胞到增生细胞的HPV转化机制与高风险某WMhpv编码的癌蛋白(E6和E7)有关，结合细胞中肿瘤抑制基因产物p53和Rb，导致细胞周期控制机制的瓦解，该机制中p53和Rb起着重要的作用。此外，这些分子方法的应用产生以下流行病学观察结果约93%的宫颈肿瘤分离得到HPV，进一步证实以下普遍接受的结论HPV感染是宫颈癌最重要的起始因子。性生活正常妇女接触HPV是普遍的，但在大多数接触妇女中不一定会导致非典型增生或癌症。潜伏持久病毒DNA的感染妇女的持久性非典型增生的发生率大概是能够根除该病毒的妇女的5倍。由于患有侵入性宫颈癌的患者常常显示针对病毒E6和E7蛋白的高抗体水平，说明抗体介导的免疫反应不能有效消除己有感染，因而表明细胞介导的免疫反应对HPV感染的重要性。由于肿瘤负荷的增加，该特定抗体反应很可能反映了广泛性抗原接触。与体液免疫反应的明显不合理作用相反细胞介导的免疫反应(Th-l型反应)似乎可以有效控制肿瘤进程。上皮内病损的消退伴随着〔04+T细胞、CD8+T细胞、天然杀伤细胞(NK)和巨噬细胞组成的细胞渗入。该炎性渗入通常伴随着肿瘤消退，与不能获得该炎性反应和经历疾病进程的妇女不同。此外，细胞介导的免疫缺损患者的宫颈癌发生率增加，而抗体产生缺损的患者没有显示相同的敏感性。可使用递送装置将本发明水性凝胶应用于粘膜组织。合适的装置包括桶型施加器汽颈帽、隔膜、以及固体基质如棉塞、棉头海绵、棉头拭子、泡沫海绵和栓剂。在--些实施例中，装覽可与水性凝胶制剂联用。在一个实施例中，可将含有1-(2-甲基内荜)-1//-咪唑并[4，5-cj[l，5]二氮杂萘^4-胺的凝胶置于宫颈帽凹形区域，然后直接放置到宫颈上。在另一个实施例中，可联合使用棉头或泡沫海绵与本发明水性凝胶。在一些实施例中，可使用施加器将装置和/或凝胶设置到粘膜组织上的适当位置。这些施加器的例子包括例如，通常由于插入棉塞或栓剂的纸板或塑料管施加器。优选的施加器是桶型施加器，它可以是预填充的，或与凝胶容器一起提供而由患者填充。实施例选择下面的实施例仅仅是为了进一步阐述本发明的特征、优点和其它细节。然而，应清楚明白，虽然实施例是为了上述目的，但是所用具体材料和含量以及其它条件和细节不应解释为对本发明范围的过度限制。制备1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4,5-c][l，5]二氮杂萘4-胺乙磺酸盐单水合物A部分氩气环境下，边连续搅拌边将1,5-二氮杂萘"4-醇(1.6千克(kg)，ll摩尔(mol))以每份160克(g)分份加入到发烟硝酸(16升(L))中，同时维持反应物的温度在45.5'C或更低。加入后将反应物在约45匸下搅拌23分钟，用2.25小时加热至回流，加热回流(90-95。C)5小时，然后冷却至室温过夜。然后使反应混合物冷却至7.5'C并缓慢加入水(16L)同时维持反应温度低于25'C。将所得混合物冷却至9'C并缓慢加入氢氧化铵(20L)以将混合物pH值调至6.2，同时维持温度低于15°C。将所得混合物搅袢10分钟并冷却至2.8'C。所得固体通过过滤分离，用冷水(2x2.2L，4'C)洗涤，25'C真空干燥并迮75°C卜"真空千燥47小时以提供.778leg3-硝基[I，5]二氮杂萘4-醇。B部分氩气环境下，将3-硝基[1，5]二氮杂萘-4-醇(1.778kg，9.30mol)的MiV-二甲基甲酰胺(DMF)溶液(16L)于17。C搅拌45分钟。缓慢加入三氯氧化磷(2.095kg，13.7mol)同时维持温度在约2(TC,然后将反应物于2(TC搅拌15.25小时。然后在55分钟内边连续搅拌边将反应混合物加入己经冷却至4.5'C的水(76L)中。加入期间，使混合物的温度不超过1(TC，且加入结束时的温度为9.5°C。将加入后得到的混合物搅拌IOO分钟问时从9.5'C冷却至2.5'C。有固体形成并通过过滤分离，用水(2x8L)洗涤，并用抽吸P燥以提供3.3kg4-氯-3-硝基[1，5]二氮杂萘。C部分将来自B部分的材料的二氯甲烷(26L)溶液加热至3PC，加入硫酸钠(2kg)和硫酸镁(500g)。将所得混合物搅拌1小时然后过滤。滤饼用二氯甲垸(5L)洗涤并将滤液转移到另一个装有额外的二氯甲浣(8L)的容器中。在氩气环境下边连续搅拌边将异丁胺(2.5L)加入滤液中，同时维持反应温度为17-24°C。将反应物在17-24'C的温度下搅拌13.5小时，然后在40'C减压浓缩至干燥。将所得固体与水(18L)混合，所得混合物在20-21'C搅拌3小时然后过滤。分离的固体用水(3x3L)洗涤，真空抽干并在75'C再真空干燥16.5小时以提供1.98kg<《2-甲基丙基)-3-硝基[l，5]二氮杂萘4-胺。将产品分成5个等分。D部分在Parr容器中装入甲苯(3.86L)、2—丙醇(386毫升(mL))、^—(2-甲基丙基)一3-硝基[1，5]二氮杂萘"4一胺(386g，1.56mol)和5%碳载铂(77.2g，50%w/w(重量百分比)，用水配制)。将容器密封并用氮气吹扫3次，同时搅拌反应混合物。然后将反应混合物在氢气压力(2.1xl()S帕斯卡(Pa)至4.1xl05Pa，30磅每平方英寸(psi)至60psi)下放置130分钟，同时维持温度在18'C和22'C之间。该反应被再重复4次，反应时间从120分钟到215分钟，反应温度为19-24°C。将5次反应的产物合并，用硫酸镁(2kg)处理，静置90分钟，并通过CELITE过滤剂层过滤。滤饼用1:1的甲苯/2-丙醇(4L)洗涤，再用甲苯(16L)洗涤，滤液在约40。C减压浓缩以提供1.59kg油状的A^-(2-甲基丙基)[1，5]二氮杂萘-3,4-二胺。以相同规模重复A-D部分以再提供1.236kg油状的W"(2-甲基丙基)[l,5]二氮杂萘—3,4—二胺。E部分氩气环境下，边连续搅拌边将乙酸二乙氧基甲酯(2.24L，13.7mol)加入^《2-甲基丙基)[l，5]二氮杂萘一3，4一二胺(2.826kg，13.07mol)的甲苯(32.5L)溶液，同时维持反应温度等于或低于30.3°C。将反应混合物在30.1-30.3t:的温度下搅拌40分钟，用45分钟加热至回流，加热回流(92.5-98.5'C)185分钟，并使其冷却至室温过夜。加入饱和的碳酸钾水溶液(6L)并将所得混合物在29.3-30.3。C下搅拌32分钟，然后静置53分钟。将有机组分分离并在55-65'C的温度下减压浓縮7小时。所得油状物在20'C下与庚烷(3L)—起研磨以形成固体，该固体通过搅动过滤分离，用冷的庚垸(1.5L,5'C)洗涤并风干以提供2.593kg1"2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4,5-0|[1，5]二氮杂萘。F部分在17.5-18。C的温度下将1"(2-甲基丙基)~^-咪唑并[4，5-c][l，5]二氮杂萘(2.593kg，11.46mol)的氯仿(2.8L)溶液搅拌1小时，然后分5次以约5分钟的间隔加入3-氯过氧苯甲酸(2.864g，70。/。纯，11.6mol)。加入过程中，反应温度从16.4。C升至26.1°C。加入后将反应混合物搅拌20小时，反应温度从26.rc降至17.5°C。然后将反应混合物与1%w/w的碳酸钠水溶液(4x3.2L，洗涤之间有30分钟间隔)一起搅拌30分钟。有机组分在4(TC减压浓縮。残余物(4.6kg)与二乙醚(7.5L)—起研磨68分钟，所得固体通过搅动过滤分离，用二乙醚(4.5L)洗涤，抽吸干燥以提供3.304kgl一2-甲基丙基)-5-环氧-1//-咪唑并[4，5-^|[1，5]二氮杂萘。G部分边连续搅拌边向来自F部分的物质的二氯甲垸(34L)溶液中加入氢氧化铵(28。/。)水溶液，同时维持反应温度等于或低于U.5。C。边连续搅拌边在1小时内分批加入对-甲苯磺酰氯(1.786kg，9.368mol)，同时维持反应温度为16.4-25。C。将反应物搅拌140分钟，再加入对-甲苯磺酰氯(180g，0.94mol)并将反应物再搅拌1小时。在反应混合物中加入水(21L)，将所得混合物搅拌30分钟并静置14.5小时。将有机组分分离并在40'C减压浓縮8.25小时。残余物(1.004kg)在乙腈(10.04L)中加热回流128分钟。使悬浮液冷却至2(TC，所得固体通过过滤分离，用冷的乙腈(1.4L，4'C)洗涤并风干以提供360g1-(2-甲基丙基)~1//-咪唑并[4，5-01[1,5]二氮杂萘~4-胺。剩下的含水组分中存在固体，通过过滤分离所述固体，用水(4x2000mL)洗涤并抽吸干燥，以提供1.925kgl-(2-甲基丙基)-咪唑并[4，5-c][l，5]二氮杂萘^4-胺。将2份固体合并，在90%w/w甲醇/水(22.85L)中加热回流310分钟，并使悬浮液冷却至24.TC过夜。所得固体通过过滤分离，用冷的90%w/w甲醇/水(1.5L，5'C)洗涤，并在75。C和lxio5Pa的真空烘箱中千燥5天以提供1.368kg淡黄色固体状的1~(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4,5-c][l，5]二氮杂萘一一胺。H部分边搅拌边将用2。/。(v/v)水/异丙醇(100mL)冲洗过的1~(2—甲基丙基)—咪唑并14，5-c][l,5]二氮杂萘U安(300g，1.24mol)加入含有2%(v/v)水/异丙醇(2000mL)的容器中，并将所得混合物加热至8rC。在约20分钟内在上述反应混合物中缓慢加入乙磺酸(151g，95%，1.37mol)在2。/。(v/v)水/异丙醇(600mL)中的溶液。加入过程中混合物变成澄清溶液，温度为81-82'C。用2%v/v水/异丙醇(320mL)冲洗加料漏斗；加料过程中温度降低但又回到回流温度。将所得溶液加热回流8分钟然后以0.2'C/分钟(234分钟57'C)的速率缓慢冷却至室温。然后以0.2'C/分钟的速率冷却所得浆液至0-5'C(即用130分钟将该浆液冷却21'C)。固体通过过滤分离，用冷的2%(Wv)水/异丙醇(400mL，3.5匸)冲洗和帮助转移。固体用冷的2。/。(v/v)水/异丙醇(300mL，3.5°C)洗涤，在约43。C和1.69xl。3pa至1.70x103Pa(169毫巴至170毫巴)下干燥23小时40分钟以提供455gl-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4，5-c][l,5]二氮杂萘4胺乙磺酸盐单水合物。在HamiltonBeach14速搅拌机中处理该材料以提供白色"絮状"固体，mp221.5°C一223.4。C。C13H15N5C2H603S*H20的分析计算值C,48.77;H，6.28;N，18.96。实测值C，48.70;H，6.25;N，18.96。该材料通过粉末X射线衍射分析、13CNMR谱、水吸附分析、热重分析和示差扫描量热法表征。粉末X射线衍射图和l3CNMR谱示于图1和2。DSC/TGA叠加图示于图3,等温吸湿曲线示于图4。测试方法在F面的实施例中，用以下常规测试方法获得了血清和阴道内细胞因子数据。在实际给药之前使大鼠连续2天适应套在颈上的项圈(collar)(LomirBiomedical,Malone,NY)。给大鼠套上项圈以防止药物被咽下。然后通过阴道给予动物50|aL凝胶。大鼠接受一次阴道内剂量，给药后在不同时刻采集样品。1卩以下实施例所述大鼠接受多次给药，在最后-次给药之后的不同时刻采集样品。通过心脏穿剌釆集血液。使血液在室温短暂凝结并通过离心从凝块分离血清。将血清储存于-2(TC直到用于分析细胞W于浓度。采集血液之后，将大鼠无痛处死，然后取出包括宫颈在内的阴道并将组织称重，放在密封的1.8mL冷冻管中并在液氮中急冻。然后将冷冻的阴道组织样品悬浮在1.0mL与蛋白酶抑制剂混合物组III(proteaseinhibitorcocktailsetIII)(Calbiochem，SanDiego，CA)混合的含有10。/。胎牛血清(Atlas，FortCollins,CO)、2mML—谷氨酰胺、青霉素/链霉素和2-巯基乙醇的RPMI培养基(Celox，St.Paul,MN)(RPMI完全培养基)巾。用TissueTearor(BiospecProducts,Bartlesville，OK)将组织匀浆约1分钟。然后在冷冻条件下将组织悬浮液在2000rpm离心10分钟以使碎片成团，收集上清液并储存十-20。C直到用于分析细胞因子浓度。用于大鼠肿瘤坏死因子"a(TNF)的ELISA试剂盒购自BDPharMingen(SanDiego，CA)，大鼠单核细胞趋化蛋白-1(MCP—1)ELISA试剂盒购自BioSourceIntl.(Camarillo，CA)。这两种试剂盒都按照制造商的说明操作。TNF禾ClMCP—1的结果都以pg/mL表示，并以每200mg组织归一化。基于用来形成标准曲线的最小值，TNFELISA的灵敏度为63pg/mL，MCP-lELISA的灵敏度为12pg/mL。实施例l-5用以下方法制备下表1所示的凝胶。步骤l:将对羟基苯甲酸酯溶于丙二醇或己二醇中。将乙磺酸水溶液加入到二醇溶液中。然后将l-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4，5-c[[l，5]二氮杂萘4-胺(药物)溶于该溶液中。步骤2:将依地酸二钠溶于水。如果使用，将卡波姆974P和黄原胶分散于溶液中。步骤3:将步骤1的溶液加入到步骤2的分散液中并搅拌。在混合物中加入20%氨基丁三醇溶液以使最终制剂的pH值达到4。将凝胶填充到合金铝试管中。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>采用上述测试方法确定实施例3的凝胶在单剂量给药后诱导细胞因子的能力。结果如下表2所示，其中，各值是5个动物的平均值士SEM(平均值的标准误差)。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>'载体(2.00%卡波姆974，30.00°/。丙二醇，0.15%对羟基苯甲酸甲酯，0.03%对羟基苯甲酸丙酯，0.05%伊地酸钠，0.58%20%氨基丁三醇溶液，和67.19%水)采用上述测试方法确定实施例3和5的凝胶在单剂量和多剂量给药后诱导细胞因子的能力。对于多剂量给药动物，一天一次、一周2次(星期一和星期四)阴道内给药，3周内共6次给药。所得结果如下表3所示，各值是5个动物的平均值±SEM。表3时间(小时)给药后凝胶给药细胞因子浓度TNF(pg/mL)MCP—1(pg/mL)血清组织血清组织0无<63222±7289±739±124'载体单剂量<63159±3876±1438±72实施例3单剂量<63693±10541±12323土764实施例3单剂量<63296±11096±12252±516实施例3单剂量<63314±4295±9718±12242载体单齐懂<63261±35105±14176±302实施例5单齐懂271±71665±101345±1051188±3594实施例5单剂量<63245±48614±101869±866实施例5单剂量<63216±15418±142778±1904'载体多剂量<6343士345士1225±42实施例3多剂量<63564±666±13341±464实施例3多剂量<631078±33348±13970±2646实施例3多剂量<63181士7285±121196±38442载体多剂量<6354±1465±977±312实施例5多剂量<63646±221125±42902±2594实施例5多剂量<63601±28693±311194±3986实施例5多剂量<63174±44174±471414±391'载体(2.00%卡波姆974，30.00%丙二醇，0.15%对羟基苯甲酸甲酯，0.03%对羟基苯帀酸丙酯，0.05%伊地酸钠，0.58%20%氨基丁三醇溶液，和67.19%水)'载体(1.00%卡波姆974，1.00%黄原胶，30.00%己二醇，0.15。/。对羟基苯甲酸甲酯，0.03%对羟基苯甲酸丙酯，0.05%伊地酸钠，和67.19%水)实施例6-8采用以下方法制备下表4所示的凝胶。步骤1:将对羟基苯甲酸酯溶于丙二醇中。然后将1《2-甲基丙基)~1//-咪唑并[4，5-c][l,5]二氮杂萘4-胺乙磺酸盐单水合物溶于该溶液中。步骤2:将依地酸二钠溶于水。将卡波姆974P分散于溶液中。步骤3:将步骤1的溶液加入到步骤2的分散液中并搅拌。在混合物中加入20%氨基丁三醇溶液以调节pH。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>实施例9和10采用实施例6~8的常规方法制备下表5所示的凝胶。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>采用上述测试方法确定实施例1、3、9和IO的凝胶在单剂量给药后诱导细胞因子的能力。结果如下表6所示，其中，各值是5个动物的平均值士SEM。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>'载体(2.00%卡波姆974，30.00%丙二醇，0.15%对羟基苯甲酸甲酯，0.03%对羟基苯甲酸丙酯，0.05。/。伊地酸钠，0.58。/。20。/。氨基丁三醇溶液，和67.19%水)实施例11-18釆用实施例6-8的常规方法制备实施例11、12和14的凝胶。釆用下述方法制备实施例13、15、16、17和18的凝胶。步骤1:将对羟基苯甲酸酯溶于丙二醇(约占用来实现凝胶最终wt。/。的总量的66重量％)。然后将1-(2-甲基丙基)~1//-咪唑并[4，5-^|[1，5]二氮杂萘一-胺乙磺酸盐单水合物溶于该溶液。步骤2:将依地酸二钠溶于水。加入剩余的丙二醇。加入卡波姆974P并继续混合直到卡波姆完全水合。步骤3:将步骤1的溶液加入步骤2的分散液中并混合。混合完全后测量pH值。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>采用上述测试方法确定实施例11-18的凝胶在单剂量给药后诱导细胞因子的能力，但对上述测试方法进行以下改动组织样品在3000rpm离心IO分钟，对于TNF所有样品以1:2稀释，对于MCP-1所有样品以1:4稀释，基于用来形成标准曲线的最小值，TNFELISA的灵敏度为31pg/mL。结果如下表8所示，各值是3个动物的平均值±SEM。<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>'给药之前采集的血样ND-没有检测采用上述测试方法确定实施例15、17和18的凝胶在单剂量给药后诱导细胞因子的能力。结果如下表9所示，其中，各值是6个动物的平均值±SEM。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>1载休(2.50%卡波姆974,60.00。/o丙二醇，0.15%对羟基苯甲酸甲酯，0.03%对羟基苯甲酸丙酯，0.05%伊地酸钠，禾口37.27%水)实施例19-23采用下述方法制备下表10所示的凝胶。步骤1:将对羟基苯甲酸酯溶于丙二醇(约占用来实现凝胶最终wt。/。的总量的66贯量％)。然后将1-(2-甲基丙基)~1//-咪唑并[4，5-cl[l,5]二氮杂萘4-胺乙磺酸盐单水合物溶于该溶液。步骤2:将依地酸二钠溶于水。加入剩余的丙二醇。依次加入卡波姆974P和黄原胶(如果使用)并继续混合直到增稠剂完全水合。步骤3:将步骤1的溶液加入步骤2的分散液中并混合。混合完全后测量pH值。表10<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>采用上述测试方法确定实施例19-23的凝胶在单剂量给药后诱导细胞因子的能力。结果如下表ll所示，其中，各值是4个动物的平均值±SEM。表11<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>实施例24-27采用实施例19-23的常规方法制备实施例24-26的凝胶。采用实施例6-8的常规方法制备实施例27的凝胶，但省去氨基丁三醇。表12<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>ND=没有检测采用上述测试方法确定实施例24-27的凝胶在单剂量给药后诱导细胞因子的能力。结果如下表13所示，其中，各值是6个动物的平均值士SEM。表13<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>实施例28-32采用实施例的常规方法制备实施例28-32的凝胶，但在步骤2加入卡波姆和黄原胶。表14<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>实施例33釆用下述方法制备下表15所示的凝胶。步骤h将依地酸二钠溶于水(约占用来实现凝胶最终^-%的总量的99%)。步骤2:将对羟基苯甲酸酯溶于丙二醇。然后将1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4，5-c][l,5]二氮杂萘-4-胺乙磺酸盐单水合物溶于该溶液。步骤3:在步骤1的溶液中依次加入卡波姆974P和黄原胶并混合，继续混合直到增稠剂完全水合。步骤4:将步骤2的溶液加入步骤3的分散液并混合。步骤5:将氨基丁三醇溶于水(20重量％的氨基丁三醇)，将该溶液加入到步骤4的凝胶中并混合。继续混合直到凝胶均匀。混合完全后测量pH值。表15<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>实施例34釆用下述方法制备下表16所示的凝胶。步骤1:将对羟基苯甲酸酯溶于丙二醇。然后将1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4,5-c][l,5]二氮杂萘-4-胺乙磺酸盐单水合物溶于该溶液。歩骤2:将依地酸二钠溶于水(约占用来实现凝胶最终wt-。/。的总量的一半)。歩骤3:在歩骤1的溶液中依次加入卡波姆974P、黄原胶、步骤2的溶液和水(约占用来实现凝胶最终Wt-n/。的总量的一半)并混合，继续混合直到增稠剂完全水合。步骤4:将氨基丁三醇溶于水(20重量％的氨基丁三醇)，将该溶液加入到步骤3的凝胶中并混合。继续混合直到凝胶均匀。混合完全后测量pH值。表16<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>。步骤1:将对羟基苯甲酸酯溶于丙二醇。分3份加入1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4,5-c][l,5]二氮杂萘-4-胺乙磺酸盐单水合物并混合。继续混合直到药物完全溶解。步骤2:将依地酸二钠溶于水(约占用来实现凝胶最终wt-。/。的总量的1/3)。步骤3:在步骤1的溶液中依次加入卡波姆974P、黄原胶、步骤2的溶液和水(约占用来实现凝胶最终wt。/。的总量的2/3)并混合，继续混合直到增稠剂完全水合。步骤4:将氨基丁三醇溶于水(20重量％的氨基丁三醇)，将该溶液加入到步骤3的凝胶屮并混合。继续混合直到凝胶均匀。混合完全后测量pH值。表17成分实施例35凝胶(％w/w)药物(乙磺酸盐单水合物)4.50卡波姆974P1.75黄原胶0.88丙二醇50.00对羟基苯甲酸甲酯0.15对羟基苯甲酸丙酯0.03伊地酸二钠0.05氨基丁三醇0.65纯化水41.99PH3.0粘度(cps)7100采用上述测试方法确定实施例34和35的凝胶在单剂量给药后诱导细胞因子的能力。结果如下表18所示，各值是6个动物的平均值±SEM。表18时间(小时)给药后凝胶细胞因子浓度TNF(pg/mL)MCP—1(pg/mL)血清组织血清组织1实施例34138±55930±303219±3345±222实施例34261±1601686±456153±34571±1494实施例3455±171515±17087±381153±1591实施例35390±180891士78246±2994±252实施例35218±611325±140530±265808±2064实施例35222±117954±145375±1731277±26541载体83±36513±98212±4190±33载体(1.75%卡波姆974，0.88%黄原胶，50.00%丙二醇，0.15%对羟基苯甲酸甲酯，0.03%对羟基苯甲酸丙酯，0.05%伊地酸钠，0.05氨基丁三醇，和47.09%水)实施例36采用实施例35的方法制备下表19所示的凝胶，但1《2-甲基丙基卜1//-咪唑并[4,5-c][l，5]::.氮杂萘4-胺乙磺酸盐单水合物分成2个独立部分加入。表19<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>采用上述测试方法确定实施例36的凝胶在单剂量给药后诱导细胞因子的能力。结果如下表20所示，其中各值是6个动物的平均值±SEM。表20<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>实施例37采用下述方法制备表21的凝胶。步骤1:将对羟基苯甲酸酯溶于丙二醇。然后将1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4，5-c][l，5]二氮杂萘-4-胺乙磺酸盐单水合物溶于溶液中。歩骤2:将依地酸二钠溶于水(约占用来实现凝胶最终wt-。/。的总量的2/5)。步骤3:在步骤1的溶液中依次加入卡波姆974P、黄原胶、步骤2的溶液和水(约占用来实现凝胶最终wt。/。的总量的3/5)并混合，继续混合直到增稠剂完全水合。步骤4:将氨基丁三醇溶于水(20重量％的氨基丁三醇)，将该溶液加入到步骤3的凝胶中并混合。继续混合直到凝胶均匀。混合完全后测量pH值。表21<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>这毕.提到的专利、专利文献和申请的全部内容通过引用全文纳入本文，这就如同分别将它们各l'l包括在内。本发明的各种修改和变化将是本领域技术人员显见的，且不背离本发明的范围和精神。应理解，本发明不限于这里列出的示例性实施方案和实施例，这些实施例和实施方案仅以举例的方式出现，本发明的范围仅由下面列出的权利要求限制。权利要求1.一种水性凝胶，其包含水；1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4，5-c][1，5]二氮杂萘-4-胺；药学上可接受的酸；至少10重量％的可与水混溶的共溶剂；和含有带负电荷的增稠剂的增稠剂体系；其中，20℃下所述水性凝胶的粘度至少为1000cps。2.通过--种方法制得的水性凝胶，所述方法包括对以下组分进行混合水；1-(2-甲基丙基)-1/Z-咪唑并[4，5-c][l，5]二氮杂萘"4-胺盐；至少10重量％的可与水混溶的共溶剂；和含有带负电荷的增稠剂的增稠剂体系；其中，20。C下所述水性凝胶的粘度至少为1000cps。3.如权利要求1所述的水性凝胶，其特征在于，所述药学上可接受的酸以相对于1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4，5-c][l，5]二氮杂萘4-胺的化学计量存在。4.如权利要求1所述的水性凝胶，其特征在于，1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4,5-c][l,5]二氮杂萘4-胺以盐的形式提供。5.如权利要求1或3所述的水性凝胶，其特征在于，所述药学上可接受的酸选自烷基磺酸、羧酸、氢卤酸、硫酸、磷酸、二羧酸、三羧酸以及它们的组合。6.如权利要求5所述的水性凝胶，其特征在于，所述酸选自醋酸、氢溴酸、D-葡糖酸、L-乳酸、甲磺酸、乙磺酸、丙酸以及它们的组合。7.如权利要求2或4所述的水性凝胶，其特征在于，1—(2-甲基丙基—1//-咪唑并[4，5-c][l，5]二氮杂萘4—胺盐是选自下组的酸的盐垸基磺酸、羧酸、氢卤酸、硫酸、磷酸、二羧酸、三羧酸以及它们的组合。8.如权利要求7所述的水性凝胶，其特征在于，1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4，5-cj[l，5]二氮杂萘"4-胺盐是选自下组的酸的盐醋酸、氢溴酸、D-葡糖酸、L-乳酸、丙酸以及它们的组合。9.如权利要求7所述的水性凝胶，其特征在于，1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4，5-c][l，5]二氮杂萘-4-胺盐是烷基磺酸盐。10.如权利要求9所述的水性凝胶，其特征在于，1-(2-甲基丙基》1//-咪唑并[4，5-c][l,5]二氮杂萘4-胺烷基磺酸盐是1-(2-甲基丙基HW-咪唑并[4，5-c][l,5]二氮杂萘"4-胺乙磺酸盐或1-(2-甲基丙基—lW-咪唑并[4，5-c][l,5]二氮杂萘4-胺甲磺酸盐。11.如权利要求1-10中任一项所述的水性凝胶，其特征在于，以水性凝胶的总重量计，1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4，5-^[1，5]二氮杂萘~4-胺存在的量至少为0.0001重量％。12.如权利要求1-11中任一项所述的水性凝胶，其特征在于，以水性凝胶的总重量计，所述可与水混溶的共溶剂存在的量大于25重量％。13.如权利要求12所述的水性凝胶，其特征在于，以水性凝胶的总重量计，所述可与水混溶的共溶剂存在的量至少为30重量％。14.如权利要求1-13中任一项所述的水性凝胶，其特征在于，以水性凝胶的总重量计，所述可与水混溶的共溶剂存在的量不大于90重量％。15.如权利要求1-14中任一项所述的水性凝胶，其特征在于，所述可与水混溶的共溶剂选自单丙二醇、双丙二醇、己二醇、丁二醇、甘油、聚乙二醇、二甘醇舉乙醚以及它们的组合。16.如权利要求15所述的水性凝胶，其特征在于，所述可与水混溶的共溶剂包含单丙二醇。17.如权利要求1-16中任一项所述的水性凝胶，其特征在于，所述增稠剂体系包含至少两种不同电荷密度的带负电荷的增稠剂。18.如权利要求1-17中任一项所述的水性凝胶，其特征在于，所述增稠剂体系包含至少两种选自下组的带负电荷的增稠剂纤维素醚、多糖树胶、丙烯酸聚合物以及它们的组合。19.如权利要求18所述的水性凝胶，其特征在于，所述增稠剂体系包含多糖树胶和丙烯酸聚合物。20.如权利要求19所述的水性凝胶，其特征在于，所述多糖树胶与丙烯酸聚合物的重量比为1:20到20:1。21.如权利要求1-16中任一项所述的水性凝胶，其特征在于，所述增稠剂体系包含至少两种带负电荷的增稠剂，各自包含羧酸和/或羧酸根基团。22.如权利要求21所述的水性凝胶，其特征在于，所述增稠剂体系包含至少两种选自下组的带负电荷的增稠剂羧甲基纤维素钠、黄原胶、丙烯酸聚合物以及它们的组合。23.如权利要求1-22中任一项所述的水性凝胶，其特征在于，以所述水性凝胶的总重量计，所述增稠剂体系存在的量至少为0.1重量％。24.如权利要求1-23中任一项所述的水性凝胶，其特征在于，以所述水性凝胶的总重量计，所述增稠剂体系存在的量不大于7重量％。25.如权利要求1-24中任一项所述的水性凝胶，其特征在于，以所述水性凝胶的总重量计，所述水存在的量至少为10重量％。26.如权利要求1-25中任一项所述的水性凝胶，其特征在于，以所述水性凝胶的总重量计，所述水存在的量不大于95重量％。27.如权利要求1-26中任一项所述的水性凝胶，其特征在于，所述水性凝胶还包含药学上可接受的pH调节剂。28.如权利要求27所述的水性凝胶，其特征在于，所述药学上可接受的pH调节剂选自盐酸、氢氧化钠、氨基丁三醇、氢氧化钾以及它们的组合。29.如权利要求1-28中任一项所述的水性凝胶，其特征在于，所述水性凝胶的pH值为2-5。30.如权利要求29所述的水性凝胶，其特征在于，所述水性凝胶的pH值为3-4。31.如权利要求1-30中任一项所述的水性凝胶，其特征在于，所述水性凝胶还包含防腐剂。32.如权利要求31所述的水性凝胶，其特征在于，所述防腐剂选自季铵化合物、苯索氯铵、对羟基苯甲酸酯、硼酸、异噻唑啉酮、有机酸、醇、氨基甲酸酯、氯己定以及它们的组合。33.如权利要求32所述的水性凝胶，其特征在于，所述防腐剂选自对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯及其组合。34.如权利要求31-33中任-项所述的水性凝胶，其特征在于，以所述水性凝胶的总重量计，所述防腐剂存在的量至少为0.005重量％。35.如权利要求31-34中任一项所述的水性凝胶，其特征在于，以所述水性凝胶的总重量计，所述防腐剂存在的量不大于1.0重量％。36.如权利要求1-35中任一项所述的水性凝胶，其特征在于，所述水性凝胶还包含螯合剂。37.如权利要求36所述的水性凝胶，其特征在于，所述螯合剂选自乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠盐、乙二胺四乙酸二钠盐二水合物以及它们的组合。38.如权利要求37所述的水性凝胶，其特征在于，所述螯合剂是乙二胺四乙酸二钠盐二水合物。39.如权利要求36-38中任一项所述的水性凝胶，其特征在于，以所述水性凝胶的总重量计，所述螯合剂存在的量至少为0.001重量％。40.如权利要求36-39中任一项所述的水性凝胶，其特征在于，以所述水性凝胶的总重量计，所述螯合剂存在的量不大于2.0重量％。41.如权利要求1-40中任一项所述的水性凝胶，其特征在于，前提条件是所述带负电荷的增稠剂并非共价结合于1-(2-甲基丙基)-1//-咪唑并[4,5-^][1，5]二氮杂萘"4-胺。42.—种将1-(2—甲基丙基)-咪唑并[4,5—c][l,5]二氮杂萘4-胺递送至对象粘膜组织的方法，所述方法包括将如权利要求1-40中任一项所述的水性凝胶应用f粘膜组织。43.如权利耍求42所述的方法，其特征在于，所述粘膜组织与选自下组的疾病有关宫颈非典型增生、宫颈乳头状瘤病毒感染、低度鳞状上皮内病损、高度鳞状上皮内病损、不明诊断意义的非典型磷状细胞、宫颈上皮内瘤、特应性过敏反应、变应性鼻炎、瘤性病损和癌前病损。44.如权利要求43所述的方法，其特征在于，所述粘膜组织位于宫颈上，相关病症选自宫颈非典型增生、高度鳞状上皮内病损、低度鳞状上皮内病损以及存在高风险性HPV的不明诊断意义的非典型磷状细胞。45.如权利要求44所述的方法，其特征在于，所述粘膜组织位于宫颈上，相关疾病是存在高风险性HPV的不明诊断意义的非典型磷状细胞。46.如权利要求43所述的方法，其特征在于，所述粘膜组织位于宫颈上，相关疾病是宫颈乳头状瘤病毒感染。47.如权利要求42-46中任一项所述的方法，其特征在于，采用选自下组的装置将水性凝胶应用于粘膜组织桶型施加器、棉塞、宫颈帽、隔膜、棉头拭子、棉头海绵、泡沫海绵和栓剂。48.如权利要求47所述的方法，其特征在于，所述装置是桶型施加器。49.如权利要求48所述的方法，其特征在于，所述桶型施加器是预填充的。50.—种试剂盒，所述试剂盒包含桶型施加器和如权利要求1-41中任一项所述的水性凝胶。51.如权利要求50所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括与施加器分离的包含水性凝胶的容器。全文摘要提供了包含1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4，5-c][1，5]二氮杂萘-4-胺的水性凝胶制剂形式的药物制剂。还提供了使用方法和试剂盒。文档编号A61K31/437GK101163475SQ200680003879公开日2008年4月16日申请日期2006年2月3日优先权日2005年2月4日发明者C·S·佩尔曼,D·Q·马,J·C·赫登斯杜姆,R·D·斯科维任斯基申请人:武田药品工业株式会社