专利名称：抗-MAdCAM抗体在治疗腹部疾病及热带口炎性腹泻中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及抗-MAdCAM抗体在制备用于治疗腹部疾病和/或热带口 炎性腹泻的药物中的用途。现有技术粘膜地址素细胞粘附分子(Mucosal addressin cell adhesin molecule, MAdCAM)是细胞粘附受体免疫球蛋白超家族的成员。其是借 助与在淋巴细胞表面的整联蛋白分子进行相互作用来参与向组织募集 淋巴细胞(需要时)的粘附分子之一。已表明，可抑制MAdCAM与其整联蛋白结合伴侣(oc4 P 7)结合的抗 体，例如抗-MAdCAM抗体(例如MECA-367;美国专利5403919号，美国专 利5538724)或抗-ou P 7抗体(例如Act-l;美国专利6551593),可抑制 白细胞向炎症性肠部的渗出，且因此有利于治疗炎症性肠病(IBD)。然而，诸如MECA-367等抗-MAdCAM抗体在人患者中不具治疗用途； MECA-367可结合小鼠MAdCAM，但对人MAdCAM分子未显示出多少亲和力。 此外，作为大鼠抗体，其会在人患者中引起免疫应答且因此不适合治 疗用途。曾阐述过针对人MAdCAM的小鼠单克隆抗体(WO 96/24673)，但 这些也有可能在人中具有免疫原性。最近，已研发出对人及灵长类 MAdCAM具有强特异性及亲和力的可用于治疗的完整人抗-人MAdCAM抗 体并阐述于W0 2005/067620中。已提出MAdCAM与0C4P7整联蛋白相互作用的抑制剂(例如阻断性抗 -MAdCAM抗体或抗ou P 7整联蛋白抗体，例如MLN02,其是人源化Act-l， 阐述于WO 01/078779)可用于治疗炎症性肠病(IBD)。然而，现已发现 包括MAdCAM阻断性抗体在内的这种相互作用抑制剂也可用于治疗腹部 疾病及热带口炎性腹泻。腹部疾病(亦称作麸质敏感性肠病或口炎性腹泻)是一种小肠病症。在英国、欧洲及美国，300人中就有1人受此病症影响。腹部疾病 是一种常见病症，且会影响到任何年龄的任何人。据认为其在男性中 更为常见，但有可能同样出现在男性及女性中。麸质是两种蛋白质(麦胶蛋白与麦谷蛋白)的混合物，存在于小麦、 大麦及黑麦中。其会与小肠发生反应，通过激活免疫系统从而攻击脆 弱的负责吸收营养物质及维他命的肠内膜来造成损伤。尽管该病症可 在任何年龄诊断出，但其常在断乳后饮食中引入谷物的儿童中得到诊 断。症状会很细微，且在作出诊断之前患者会在一定时间内无原因地 感到不适。初始症状通常包括变得易受刺激及感觉痛苦，伴随食欲不佳且无 法增重。大便(排便)会变得无力、松散且难闻。 一些儿童开始呕吐并 腹泻，因此常会对其作出"胃肠炎"的错误诊断。胃会发胀，且手臂 和腿的肌肉消瘦并变细。在成年人中，症状可能是类似的，包括伴随 面色苍白的体重减少、严重腹泻或伴随"排气"的便秘及腹胀。有一 半具有腹部疾病的成年人不会具有任何来自肠部的症状。其常会因为 以下原因去看医生极度疲惫、心理问题，如抑郁、骨痛且甚至有时 是骨折(由于骨头变细所致)、口腔溃疡或起泡、主要出现在肘部及膝 部的发痒性皮疹(称作疱疹样皮炎)。一些患有腹部疾病的女性很难怀孕，且会因此而得到诊断。复发 性流产(自然性流产)有时与腹部疾病有关。 一些女性在怀孕期间得到 诊断，因为其肠部无法吸收足够的铁及维他命来满足妊娠需要，从而 使其严重贫血。患有腹部疾病的母亲生下子宫内年龄小(子宫内生长迟 滞)的嬰儿的频率更高。若不经治疗，则腹部疾病会引起贫血、骨病且在较少情形下会引 起某些形式的癌症。目前最重要的治疗是避免所有含有麸质的食物。 这通常的结果是肠内膜损伤得以改善或甚至消失。然而，若在饮食中 重新引入麸质则会重新造成损伤。尽管腹部疾病不可预防，但坚持不含麸质的饮食会逆转小肠的损伤。此需要相当的自律。需要找到一种具有低风险副作用的如下药物 能够使患者食用正常饮食且可避免矿物质及维他命缺乏及其它与腹部 疾病有关的病症。热带口炎性腹泻是一种出现在热带及亚热带的消化问题。患有热 带口炎性腹泻的人们不能很好地吸收营养物质，尤其是维他命BU及叶酸。腹泻是热带口炎性腹泻的主要症状；食用大量脂肪性食物的人们 会较食用低脂肪饮食的人们经历更严重的腹泻。其它症状包括腹部绞 痛、恶心、减重、排气及消化不良。大约每1000000人口中就有l人受热带口炎性腹泻影响且出现在约 赤道北綷30。至赤道南炜30。之间。其在某些国家更常见，包括印度、 海地、古巴、波多黎各及多米尼加共和国。其在非洲、巴哈马群岛及 牙买加不常见或不存在。该病症给受影响国家的居民以及游客带来痛 苦，但通常其只会影响停留6个月或更长时间的游客。人们尚未确定热带口炎性腹泻的原因，但其很可能是因各种因素 的组合所致，该因素包括感染及营养不良，其会一起对小肠内膜造成 损伤，从而使小肠内膜无法吸收营养物质。热带口炎性腹泻的诊断会很复杂，是因为许多病症均具有类似症 状。实施大便及血液测试以排除其它的腹泻原因。如果此等测试呈阴 性且患者曾长时间生活在热带，则热带口炎性腹泻可能是引起该疾病 的原因。可以实施活体组织检查以检查绒毛从而鉴定小肠绒毛的典型 平整性。某些血液测试也会有助于热带口炎性腹泻的诊断。由于该疾病会 阻断某些维他命及矿物质的吸收，故会观察到低含量的白蛋白、钙或 维他命D、 A、 K及E。患者也会因维他命B12及叶酸缺乏而出现贫血。此 外，大便样本会展现过量的脂肪。治疗通常会是3至6个月的抗生素及叶酸(folic acid或folate)补 充物。缺乏维他命B12的人也会接受维他命补充物。发明内容本发明的一个方面是可特异结合MAdCAM的抗体在制备用于治疗腹 部疾病和/或热带口炎性腹渴的药物中的用途。本发明的另一个方面是 一种使用治疗有效量的抗-MAdCAM抗体治疗腹部疾病和/或热带口炎性 腹泻(优选是腹部疾病)的方法。本发明的另 一方面是抗-ct 4 p 7整联蛋白抗体在制备用于治疗腹部 疾病和/或热带口炎性腹泻(优选是腹部疾病)的药物中的用途。优选 地，该抗-ct4P7整联蛋白抗体是人源化Act-l，也称作MLN02。本发明 的另一方面是使用治疗有效量的抗-oc^ P 7抗体(优选是MLN02)治疗腹 部疾病和/或热带口炎性腹泻(优选是腹部疾病)的方法。本发明的另 一方面是MAdCAM- ot 4 P 7整联蛋白介导的粘附的抑制剂 在制备用于治疗腹部疾病和/或热带口炎性腹泻的药物中的用途。本发 明的另 一方面是使用治疗有效量的MAdCAM- ct 4 P 7整联蛋白介导的粘附 的抑制剂治疗腹部疾病和/或热带口炎性腹泻的方法。优选地，用于本发明的抗-MAdCAM抗体或其抗原结合部分可特异结 合MAdCAM。更优选地，至少该抗体的CDR序列是人CDR序列或人抗体的 抗原结合部分。优选地，该抗体是人抗体、进一步优选是人单克隆抗 体或其抗原结合部分、更优选是可作为MAdCAM拮抗剂的抗体或其抗原 结合部分。优选地，抗体或一部分具有至少一种以下性质(a) 结合人细胞；(b) 对MAdCAM具有较VCAM或纤连蛋白高至少IOO倍的选择性；(c) 以3xl(T1。 M或更低的Kd结合人MAdCAM;或(d) 抑制ct 4 p 7表达细胞对人MAdCAM的结合，(e ) 抑制淋巴细胞向胃肠淋巴组织的募集。优选地，抗体或抗原结合部分可抑制人MAdCAM对ot, P 7的结合，且 具有至少一种以下性质(a) 与参照抗体交叉竟争结合MAdCAM;(b) 与参照抗体竟争结合MAdCAM;(c) 与参照抗体结合相同的MAdCAM表位；(d) 以与参照抗体大体相同的L结合MAdCAM;(e) 以与参照抗体大体相同的解离速率结合MAdCAM; 其中该参照抗体选自单克隆抗体1.7.2、单克隆抗体1.8. 2、单克隆抗体6. 14.2、单克隆抗体6. 22. 2、单克隆抗体6， 34. 2、单克隆抗 体6. 67. 1、单克隆抗体6. 73. 2、单克隆抗体6. 77. 1、单克隆抗体7. 16. 6、 单克隆抗体7. 20. 5、单克隆抗体7. 26. 4、单克隆抗体9. 8. 2、单克隆抗 体6. 22. 2-mod、单克隆抗体6. 34. 2-mod、单克隆抗体6. 67. l-mod、单 克隆抗体6. 77. l-mod及单克隆抗体7. 26. 4-raod。在本发明的另一方面中，该抗-MAdCAM抗体的重链可变区、轻链可 变区或二者在氨基酸序列上与选自下述的单克隆抗体的对应区域具有 至少90%的同一性，该单克隆抗体选自单克隆抗体1.7.2、单克隆抗 体l. 8. 2、单克隆抗体6. 14. 2、单克隆抗体6. 22. 2、单克隆抗体6. 34. 2、 单克隆抗体6. 67. 1、单克隆抗体6. 73. 2、单克隆抗体6. 77. 1、单克隆 抗体7. 16.6、单克隆抗体7. 20. 5、单克隆抗体7. 26.4、单克隆抗体 9. 8. 2、单克隆抗体6. 22. 2-mod、单克隆抗体6. 34. 2-mod、单克隆抗体 6. 67. l-mod、单克隆抗体6. 77. 1-mod及单克隆抗体7. 26. 4-mod。优选地，该抗体选自 (a) 含有示于SEQ ID N0:2及SEQ ID NO: 4的氨基酸序列且不含信 号序列的抗体；(b) 含有示于SEQ ID N0:6及SEQ ID NO: 8的氨基酸序列且不含信 号序列的抗体；(c) 含有示于SEQ ID NO:10及SEQ ID NO: 12的氨基酸序列且不含 信号序列的抗体；(d) 含有示于SEQ ID N0:14及SEQ ID NO: 16的氨基酸序列且不含 信号序列的抗体；(e) 含有示于SEQ ID N0:18及SEQ ID NO: 20的氨基酸序列且不含 信号序列的抗体；(f) 含有示于SEQ ID N0:22及SEQ ID NO: 24的氨基酸序列且不含 信号序列的抗体；(g) 含有示于SEQ ID NO:26及SEQ ID NO: 28的氨基酸序列且不含 信号序列的抗体；(h) 含有示于SEQ ID NO:30及SEQ ID NO: 32的氨基酸序列且不含 信号序列的抗体；(i) 含有示于SEQ ID NO:34及SEQ ID NO: 36的氨基酸序列且不含 信号序列的抗体；(j)含有示于SEQ ID NO:38及SEQ ID NO: 40的氨基酸序列且不含 信号序列的抗体；(k)含有示于SEQ ID N0:42及SEQ ID NO: 44的氨基酸序列且不含 信号序列的抗体；(I)含有示于SEQ ID NO:46及SEQ ID NO: 48的氨基酸序列且不含 信号序列的抗体；(m)含有示于SEQ ID N0:52及SEQ ID NO: 54的氨基酸序列且不含 信号序列的抗体；(n)含有示于SEQ ID NO:56及SEQ ID NO: 58的氨基酸序列且不含 信号序列的抗体；(o)含有示于SEQ ID NO:60及SEQ ID NO: 62的氨基酸序列且不含 信号序列的抗体；(p)含有示于SEQ ID N0:64及SEQ ID NO: 66的氨基酸序列且不含 信号序列的抗体；及(q)含有示于SEQ ID N0:42及SEQ ID NO: 68的氨基酸序列且不含 信号序列的抗体。在本发明的另一方面中，该单克隆抗体或其一抗原结合部分选自 下列抗体(a) 重链包含参照抗体的重链CDR1、 CDR2及CDR3的氨基酸序列， 该参照抗体选自1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod、 6. 34.2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod及7. 26. 4-mod(b) 轻链包含参照抗体的轻链CDR1、 CDR2及CDR3的氨基酸序列，该参照抗体选自1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod及7. 26. 4-mod(c) 该抗体包含(a)的重链及(b)的轻链；及(d) 该(c)的抗体，其中该重链及轻链CDR氨基酸序列选自相同参 照抗体。在本发明的另一方面中，该单克隆抗体或抗原结合部分包含(a) 含有下述抗体重链可变区氨基酸序列的重链，所述抗体选自 1. 7. 2 (SEQ ID NO: 2); 1. 8. 2 (SEQ ID NO: 6); 6. 14. 2 (SEQ ID NO: 10); 6.22. 2 (SEQ ID NO: 14) ; 6. 34. 2 (SEQ ID NO: 18) ; 6. 67. 1 (SEQ ID NO: 22); 6. 73. 2 (SEQ ID NO: 26); 6. 77. 1 (SEQ ID NO: 30); 7. 16. 6 (SEQ ID NO: 34) ; 7. 20. 5 (SEQ ID NO: 38) ; 7. 26. 4 (SEQ ID NO: 42);及 9. 8. 2 (SEQ ID NO: 46); 6. 22. 2-mod (SEQ ID NO: 52); 6. 34. 2-mod (SEQ ID NO: 56); 6. 67. 1-mod (SEQ ID NO: 60); 6. 77. l-mod (SEQ ID NO: 64); 及7. 26. 4-mod (SEQ ID NO: 42);(b) 含有下述抗体轻链可变区氨基酸序列的轻链，所述抗体选自 1. 7. 2 (SEQ ID NO: 4); 1. 8. 2 (SEQ ID NO: 8); 6. 14. 2 (SEQ ID NO: 12); 6.22. 2 (SEQ ID NO: 16) ; 6.34. 2 (SEQ ID NO: 20) ; 6. 67. 1 (SEQ ID NO: 24); 6. 73. 2 (SEQ ID NO: 28); 6. 77. 1 (SEQ ID NO: 32); 7. 16. 6 (SEQ ID NO: 36) ; 7. 20. 5 (SEQ ID NO: 40) ; 7. 26. 4 (SEQ ID NO: 44);及 9. 8. 2 (SEQ ID NO: 48); 6. 22. 2-mod (SEQ ID NO: 54); 6. 34. 2-mod (SEQ ID NO: 58); 6. 67. l-mod (SEQ ID NO: 62) 、 6. 77. 1-mod (SEQ ID NO: 66); 及7. 26. 4-raod(SEQ ID NO: 68);或(c) (a)的重链及(b)的轻链。本发明的另 一方面是该抗-MAdCAM抗体的重链和/或轻链或其可变 区或其它抗原结合部分或编码前述任一分子的核酸分子及药学上可接 受的载体的用途。本发明的这方面包括任一上述抗体的片段(包括但不 限于Fab片段、F(abOs片段、单链Fv (scFv)片段)的用途。优选地，该抗-MAdCAM抗体是选自如WO 2005/067620中所述的1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的人抑制性抗-MAdCAM抗体。 优选地，该抗-MAdCAM抗体包含如下轻链，该轻链含有选自如W0 2005/067620中所示SEQ ID NO: 4、 8、 12、 16、 20、 24、 28、 32、 36、 40、 44、 48、 54、 58、 62、 66或68的氨基酸序列(含或不含信号序列) 或所述氨基酸序列中任一个的可变区或一个或多个来自所述氨基酸序 列的CDR。该抗-MAdCAM抗体优选包含如下重链，该重链含有选自如W0 2005/067620中所示SEQ ID NO: 2、 6、 10、 14、 18、 22、 26、 30、 34、 38、 42、 46、 52、 56、 60或64的氨基酸序列(含或不含信号序列)或可 变区氨基酸序列或一个或多个来自所述氨基酸序列的CDR氨基酸序列。 该抗-MAdCAM抗体优选是含有自上述序列中任一个的CDR1起始端至 CDR3末端的氨基酸序列的人抗-MAdCAM抗体。用于本发明的抗-MAdCAM 抗体也可是含有上述序列中任一个的一个或多个FR区的抗-MAdCAM抗 体。用于本发明的抗-MAdCAM抗体也可包括含有其中已进行一个或多 个修饰的上述氨基酸序列中的一个的抗-MAdCAM抗体。例如，该抗体中 具有化学反应性的半胱氨酸可由另一残基(包括但不限于丙氨酸或丝 氨酸)取代。该取代可发生在非典型半胱氨酸处或典型半胱氨酸处。该 取代可在抗体可变结构域的CDR或框架区或恒定结构域内进行。也可以进行氨基酸取代以消除抗体中潜在蛋白水解位点。这样的 位点可存在于抗体可变结构域的CDR或框架区或恒定结构域内。半胱氨 酸残基的取代及蛋白水解位点的去除会降低抗体产品中的异质性。可 形成潜在脱酰胺位点的天冬酰胺-甘氨酸对可通过改变两种残基中的 一种或两种来消除。进行氨基酸取代可用于本发明的抗体的可变区中 的潜在糖基化位点的加入或去除。可裂解掉用于本发明的抗-MAdCAM抗体的重链的C-末端赖氨酸。抗 -MAdCAM抗体的重链及轻链可视情况包含信号序列。用于本发明的12个优选抑制性人抗-MAdCAM单克隆抗体(1. 7. 2、1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6,67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7. 26. 4及9. 8. 2)详述于W0 2005/067620中(其全文以引用方 式引入本专利说明书中)。
具体实施方式
拔-#^^^#拔沐#类身及亚类该抗体可以是IgG、 IgM、 IgE、 IgA或IgD分子。优选地，该抗体属 于IgG类且属于IgG" lgG2、 lgG3或lgG4亚类。更优选地，该抗-MAdCAM 抗体是lgG2或lgG4亚类。更优选地，该抗-MAdCAM抗体与作为lgG2的抗 体l. 7. 2、 1. 8. 2、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod 、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod或与作为lgG4的6. 14. 2 、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1或9. 8. 2 (如W0 2005/067620 中所述)属于相同类别及亚类。抗-MAdCAM抗体所属类别及亚类可通过任一业内已知方法确定。一般而言，抗体的类别及亚类可使用对特定类别及亚类抗体具有特异性的抗体来确定。这样的抗体可商购获得。ELISA、 Western印迹分析以及其它技术均可确定该类别及亚类。或者，该类别及亚类可如下确定测定抗体的所有或一部分重链和/或轻链恒定结构域的序列；将其氨基酸序列与各种类别及亚类免疫球蛋白的已知氨基酸序列加以比较；并 将该抗体的类别及亚类确定为显示最高序列一致性的类别。參神遂举嫂及为、子逸脊^用于本发明的抗-MAdCAM抗体既表现出物种选择性也表现出分子 选择性。该抗-MAdCAM抗体可结合人、猕猴或狗的MAdCAM。其它的用于 本发明的抗-MAdCAM抗体不能结合诸如狨等新世界猴物种。人们可使用 业内熟知方法来确定抗-MAdCAM抗体的物种选择性。例如，人们可^f吏用 Western印迹分析、FACS、 ELISA或免疫组织化学来确定物种选择性。 在一个优选的实施例中，人们可使用免疫组织化学来确定物种选择性。用于本发明的可特异结合MAdCAM的抗-MAdCAM抗体对MAdCAM的选 择性高于VCAM、纤连蛋白或任何其它抗原，其高出至少10倍、优选高至少20、 30、 40、 50、 60、 70、 80或90倍、最优选高至少100倍。优选 地，该抗-MAdCAM抗体除对MAdCAM外不会对VCAM、纤连蛋白或任何其它 抗原展现任何明显的结合。人们可使用业内熟知方法根据本说明书的 教导确定抗-MAdCAM抗体对MAdCAM的选择性。举例而言，人们可使用 Western印迹分析、FACS、 ELISA或免疫组织化学来确定该选择性。 戎-^^^#戎#潜合船^^#,^力用于本发明的抗-MAdCAM抗体优选可以以高亲和力特异性地结合 MAdCAM。用于本发明的抗-MAdCAM抗体以3xl(T8 M或更低的Kd特异性地 结合MAdCAM，如由表面等离子共振(诸如BIAcore)所测量的。优选地， 抗体以lx10—8或更低或lxl(T9 M或更低的Kd特异性地结合MAdCAM。更优 选，抗体以lx10—1Q M或更低的L特异性地结合MAdCAM。用于本发明的 抗体以2. 66x10—"M或更低、2. 35x10—11 M或更低或9x10—12 M或更低的Kd 特异性地结合MAdCAM。优选地，该抗体以lxl(T11 M或更低的Ka特异性 地结合MAdCAM。优选地，该抗体以与选自如WO 2005/067620中所述的 1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的抗体大体相同的L特异性地 结合MAdCAM。与参照抗体具有"大体相同Kd，，的抗体具有是±100 pM、优选是 ±50 pM、更优选是±20 pM、进一步优选是土IO pM、 ±5 pM或± 2 pM 的L(在相同实验中与参照抗体的Kd相比)。优选地，该抗体以与含有一 个或多个如下可变结构域或一个或多个如下CDR的抗体大体相同的Kd 结合MAdCAM，该可变结构域或CDR来自选自下列的抗体如WO 2005/067620中所述的L 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. 1-mod、 6. 77. 1-mod或7. 26. 4-mod。优选地，该抗 体以与含有如下氨基酸序列的抗体或其可变结构域大体相同的Kd结合MAdCAM，该氨基酸序列选自下列之一如WO 2005/067620中所述的SEQ IDNO:2、 4、 6、 8、 10、 12、 14、 16、 18、 20、 22、 24、 26、 28、 30、32、 34、 36、 38、 40、 42、 44、 46、 48、 52、 54、 56、 58、 62、 64、 66或68(含或不含信号序列)。优选地，该抗体以与含有一个或多个如 下CDR的抗体大体相同的Kd结合MAdCAM，该CDR来自含有选自下列的氨 基酸序列的抗体如W0 2005/067620中所述的SEQ ID N0: 2、 4、 6、 8、 10、 12、 14、 16、 18、 20、 22、 24、 26、 28、 30、 32、 34、 36、 38、 40、 42、 44、 46、 48、 52、 54、 56、 58、 62、 64、 66或68。抗-MAdCAM抗体对MAdCAM的结合亲和力可通过任一业内已知方法 确定。在一个实施例中，该结合亲和力可通过竟争性ELISA、 RIA或表 面等离子共振(诸如BIAcore)测量。在一个更为优选的实施例中，该结 合亲和力是通过表面等离子共振测量。在一个进一步优选的实施例中， 该结合亲和力及解离速率是使用BIAcore测量。确定结合亲和力的实例 可参见W0 2005/067620。^-船c^^/戎琳^一表痴用于本发明的抗-MAdCAM抗体在活体外或活体内具有至少1天的半 衰期。优选地，该抗体或其部分具有至少3天的半衰期。更优选地，该 抗体或其部分具有4天或更长的半衰期。进一步优选地，该抗体或其部 分具有8天或更长的半衰期。用于本发明的抗体或其抗原结合部分也可 经衍生或修饰以使其具有更长的半衰期，如下文所论述。在另一优选 的实施例中，该抗体可含有点突变以增加血清半衰期，如WO 00/09560 中所述。抗体半衰期可通过本领域的技术人员所已知的任何方式测量。举 例而言，抗体半衰期可通过Western印迹分析、ELISA或RIA在一段适宜 时间内测量。抗体半衰期可在任何诸如灵长类等适宜动物(例如猕猴、 猴子或人)体内测量。^-船^^/戎谬识身^船^:^i/4在的婆定本发明还提供了与本专利中提供的人抗-MAdCAM抗体结合相同抗 原或表位的人抗-MAdCAM抗体的用途。此外，本发明提供了与人抗-MAdCAM抗体竟争或交叉竟争的人抗-MAdCAM抗体的用途。优选地，该人 抗-MAdCAM抗体是WO 2005/067620中揭示的1. 7. 2、 1.8.2、 6.14.2、6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9.8.2、 6. 22.2-mod、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. l-mod 、 6. 77. l-mod或 7.26. 4-mod。优选地，该人抗-MAdCAM抗体含有来自选自下列的抗体的 一个或多个可变结构域或一个或多个CDR: 1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. l-mod 、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod。优选地，该人抗-MAdCAM抗体含有选自W0 2005/067620 中SEQ ID N0:2、 4、 6、 8、 10、 12、 14、 16、 18、 20、 22、 24、 26、 28、 30、 32、 34、 36、 38、 40、 42、 44、 46、 48、 52、 54、 56、 58、 62、 64、 66或68(含或不含信号序列)的氨基酸序列中的一个或其可变 结构域中的一个。优选地，该人抗-MAdCAM抗体含有一个或多个来自选 自W0 2005/067620的SEQ ID NO: 2、 4、 6、 8、 10、 12、 14、 16、 18、 20、 22、 24、 26、 28、 30、 32、 34、 36、 38、 40、 42、 44、 46、 48、 52、 54、 56、 58、 62、 64、 66或68的氨基酸序列中的一个的抗体的CDR。人们可使用各种业内已知方法来确定抗-MAdCAM抗体是否与另一 抗-MAdCAM抗体结合相同抗原。举例而言，人们可利用已知抗-MAdCAM 抗体捕获抗原，将该抗-MAdCAM抗体上洗脱下抗原，并且随后测定测 试抗体是否会结合经洗脱的抗原。人们可如下确定抗体是否与另一抗 -MAdCAM抗体竟争使该抗-MAdCAM抗体在饱和条件下结合至MAdCAM上， 且随后测测量试抗体结合MAdCAM的能力。若测试抗体能够与抗-MAdCAM 抗体同时结合MAdCAM，则该测试抗体可结合不同于抗-MAdCAM抗体的 表位。然而，若该抗体不能同时结合MAdCAM，则该测试抗体可与该人 抗-MAdCAM抗体进行竟争。这个实验可使用ELISA或表面等离子共振或 优选为BIAcore实施。为测试抗-MAdCAM抗体是否与另一抗-MAdCAM抗体 交叉竟争，人们可双向使用上述竟争方法，即确定已知抗体是否阻断 测试抗体，并反之确定测试抗体是否阻断已知抗体。控^及重链《^炎y^本发明还提供了包含由人K基因编码的轻链可变区的抗-MAdCAM 抗体的用途。优选地，该轻链可变区是由人VK A2、 A3、 A26、 B3、 012或018基因家族编码。优选地，该轻链含有相对于种是人vk A2、 A3、 A26、 B3、 012或018序列的氨基酸取代不超过11个、不超过6个或不超 过3个。优选地，所述氨基酸取代是保守性取代。优选地，抗-MAdCAM抗体的VL含有与WO 2005/067620中所述的抗体 1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的VL的任一个或多个相同的相 较于种系(germline)氨基酸序列的突变。本发明包括与例示抗体采 用相同的人V k及人j k基因的抗-MAdCAM抗体的用途。该抗体可与一个 或多个所例示抗体含有一个或多个相同的相较于种系的突变，或该抗 体在一个或多个与一个或多个所列示抗体相同的位置可包含不同的取 代。举例而言，该抗-MAdCAM抗体的VL可包含一个或多个与抗体7. 16. 6 中存在的这些相同的氨基酸取代及另一与抗体7. 26. 4相同的氨基酸取 代。以此方式，人们可混合并匹配抗体结合的不同特征以改变(例如) 抗体对MAdCAM的亲和力或其自抗原的解离速率。可在与存在于抗体 1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. 1-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的任一个或多个VL中的相同位 置处进行突变，但保守氨基酸取代却不是用相同氨基酸进行的。举例 而言，若抗体l. 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9. 8. 2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod之一中相较于种系的氨基酸取 代是谷氨酸，则人们可保守性取代天冬氨酸。同样地，若氨基酸取代 是丝氨酸，则人们可保守性取代苏氨酸。抗-MAdCAM抗体的轻链可以含有与l. 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6.22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的 VL氨基酸序列相同的氨基酸序列。该轻链优选地含有与l. 7. 2、 1.8.2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod 或7. 26. 4-mod的轻链CDR区相同的氨基酸序列。该轻链可含有具有至少 一个l. 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的轻链CDR区的氨基酸序列。 该轻链可以含有具有来自使用相同V k及J k基因的不同轻链的CDR的 氨基酸序列。优选地，来自不同轻链的CDR是得自1. 7. 2、1. 8. 2、6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9. 8. 2 、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. 1—mod 、 6. 77. l-mod或 7.26. 4-mod。优选地，该轻链含有选自W0 2005/067620的SEQ ID N0: 4、 8、 12、 16、 20、 24、 28、 32、 36、 40、 44、 48、 54、 58、 62、 64、 66或68(含或不含信号序列)的氨基酸序列。优选地，该轻链含有由选 自W0 2005/067620的SEQ ID NO: 3、 7、 11、 15、 19、 23、 27、 31、 35、 39、 43、 47、 53、 57、 61、 65或67 (含或不含信号序列)的核苷酸序列 或编码其中具有1至11个氨基酸的插入、缺失或取代的氨基酸序列的核苷酸序列编码的氨基酸序列。优选地，该氨基酸取代是保守氨基酸取 代。该抗体或其部分可含有A轻链。本发明还提供包含人VH基因序列或源自人VH基因的序列的抗 -MAdCAM抗体或其部分的用途。该重链氨基酸序列可源自人VH 1-18、 3-15、 3-21、 3-23、 3-30、 3-33或4-4基因家族。优选地，相对于种 是人VH 1-18、 3-15、 3-21、 3-23、 3-30、 3-33或4-4基因序列，该重 链含有不超过15个、不超过6个或不超过3个氨基酸改变。公开于WO 2005/067620的SEQ ID NO: 2、 6、 10、 14、 18、 22、 26、 30、 34、 38、 42及46提供了用于本发明的12个抗-MAdCAM抗体的全长重 链的氨基酸序列。本说明书所涉及的所有SEQ IDNo是指实际公开于W0 2005/067620中的序列。优选地，该抗-MAdCAM抗体的VH与抗体l. 7. 2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6. 34.2、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6.22. 2—mod、 6. 34. 2—mod、 6. 67. l-mod、 6. 77， l一mod或7， 26. 4-mod的VH中任一个或多个含有相同的相较于种系氨基酸序列的突变。与上文 所述相类似，该抗体与一个或多个所例示抗体含有一个或多个相同的 相较于种系的突变。该抗体还可以在与一个或多个所例示抗体相同的 一个或多个位置含有不同取代。举例而言，该抗-MAdCAM抗体的VH可以 含有一个或多个与抗体7. 16. 6中所存在的氨基酸相同的氨基酸取代， 及与抗体7. 26. 4相同的另外的氨基酸取代。依此方式，人们可混合及 匹配抗体结合的不同特征以改变(例如)抗体对MAdCAM的亲和力或其自 抗原的解离速率。相较于种系的氨基酸取代可在与存在于参照抗体 1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6.67.1、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod中的任一个或多个VH中的相较于种系的取代 相同的位置进行，但该位置可用不同的残基取代，这就是相较于参照 抗体的保守取代。优选地，用于本发明的抗-MAdCAM抗体的重链含有与l. 7. 2、1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod 或7. 26. 4-mod的VH的氨基酸序列相同的氨基酸序列。更优选地，该重 链含有与1.7. 2、 1.8.2、 6.14.2、 6. 22， 2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9. 8. 2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的重链CDR区相同的氨基酸序 列。优选地，该重链含有来自1. 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 7 3. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 4、 7. 26. 4、 9. 8. 2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的重链的至少一 个CDR区的氨基酸序列，或该重链可含有具有来自不同重链的CDR的氨 基酸序列。优选地，该来自不同重链的CDR是得自1. 7. 2、1. 8. 2、6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9. 8. 2 、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. l-raod 、 6. 77. l-mod或 7.26.4-mod。优选地，该重链含有选自W0 2005/067620的SEQ ID NO: 2、 6、 10、 14、 18、 22、 26、 30、 34、 38、 42、 46、 52、 56、 60或64的氨基酸序列(含或不含信号序列)。该重链还可以含有由选自wo2005/067620的SEQ ID NO: 1、 5、 9、 13、 17、 21、 25、 29、 33、 37、 41、 45、 51、 55、 59或63的核苷酸序列或编码其中具有1至15个氨基酸 的插入、缺失或取代的氨基酸序列的核苷酸序列编码的氨基酸序列。 该取代优选是保守氨基酸取代。用于制备抗体的核酸、载体、宿主细胞及重组方法 用于制备此等抗体的核酸、载体、宿主细胞及重组方法阐述于WO 2005/067620中。经4汙生及标记的抗体可将本发明的抗体或抗体的部分衍生或连接至另一分子(例如，另 一个肽或蛋白质)。 一般而言，该抗体或其各部分可经衍生使得MAdCAM 结合不会受到衍生或标记的不良影响。因此，用于本发明的抗体及抗 体部分意欲包括本说明书所述的人抗-MAdCAM抗体的完整形式和经修 饰形式这二者。举例而言，用于本发明的抗体或抗体部分在功能上可 连接(通过化学偶联、基因融合、非共价键締合或其它方式)至一个或 多个其它分子实体，例如另一抗体(例如，双特异性抗体或双抗体)、 检测剂、细胞毒性剂、医药剂和/或可介导该抗体或抗体一部分与另一 分子締合的蛋白质或肽(例如链霉抗生物素蛋白核心区或聚组氨酸标 签)。可通过交联两个或两个以上的抗体(同类型或不同类型，例如，以 生成双特异性抗体)制备一种衍生的抗体。适宜交联剂包括这些具有通 过适宜的间隔子分隔的两个不同的反应性基团的异双功能试剂(例如， 间-马来酰亚胺苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯)或同双功能试剂(例 如，辛二酸二琥珀酰亚胺酯)。这些交联剂可自Pierce Chemical乂/^司， Rockford， III购得。另 一种类型的衍生抗体是标记的抗体。用于衍生本发明的抗体或 抗体部分的有用的检测剂包括荧光化合物，包括荧光素、异硫氰酸荧 光素、罗丹明、5-二甲基胺-l-萘磺酰氯、藻红素、镧系元素磷光体等。 抗体也可以用可用于检测的酶标记，例如辣根过氧化物酶、p-半乳糖苷酶、荧光素酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶及诸如此类。当用可检 测的酶标记抗体时，其是通过加入可供该酶使用以产生可检测反应产 物的额外试剂检测。举例而言，当存在试剂辣根过氧物酶时，加入过 氧化氢及二氛基联苯胺可以生成能够检测的有色反应产物。还可以用 生物素标记抗体并通过间接测量抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白结 合来加以检测。抗体可用诸如钆等/P兹性剂标记。抗体还可以用由二级 报告子(例如，亮氨酸拉链对序列、二级抗体结合位点、金属结合结 构域、表位标签)识别的预先确定的多肽表位标记。在某些实施例中， 标记物是通过各种长度的间隔子臂连接以降低潜在的空间位阻。抗-MAdCAM抗体也可以用经^t射性标记的氨基酸标记。;^射性标记既可用于i貪断目的也可以用于治疗目的。举例而言，；改射性标记可用于通过x-射线或其它诊断技术检测表达MAdCAM的组织。此外，放射性标记可作为毒素用于染病组织或表达MAdCAM的肿瘤的治疗。多肽标记物的实例包括但不限于以下放射性同位素或放射性核素--3H、 14C、 15N、 "s、 ，、 "TC、 mIn、 125工、131I。抗-MAdCAM抗体还可以用化学基团(诸如聚乙二醇(PEG)、甲基或乙 基或碳水化合物基团)衍生。这些基团可用于改善抗体的生物学特性， 例如，增加血清半衰期或增加组织结合。这种方法也可以应用于任何 抗原-结合片段或抗-MAdCAM抗体的抗体版本。药物组合物及套盒在另一方面中，本发明提供了含有抑制性人抗-MAdCAM抗体的组 合物和用这样的组合物治疗受试者的方法。在一些实施方案中，治疗 的受试者是人。在其它实施方案中，该受试者是畜类受试者。在一些 实施例中，该畜类受试者是狗或非人灵长类。治疗可以涉及单独或与药学上可接受的载体组合给药一种或多种 抑制性抗-MAdCAM单克隆抗体或其抗原-结合片段。抑制性抗-MAdCAM 抗体及包含它的组合物可与一种或多种其它治疗、诊断或预防性作用 剂联合给药。额外的治疗剂包括抗炎或免疫调节剂。这些作用剂包括 但不限于外用及口服皮质类固醇类，诸如强的松龙(prednisolone)、甲基强的+>龙、NCX-1015或布地奈德(budesonide);氨基水杨酸类， 诸如美色拉"秦(mesalazine)、 奥色拉漆(olsalazine)、 巴柳氮 (balsalazide)或NCX-456 ; 免疫调节剂类，诸如硫唑嘌呤 (azathioprine) 、 6-巯基嘌呤(6-mercaptopurine)、 氨曱蝶呤 (methotrexate)、 环孢菌素 (cyclosporin) 、 FK506 、 IL-10(Ilodecakin) 、 IL-ll (Oprelevkin) 、 IL-12、 MIF/CD74拮抗剂、 CD40拮抗剂，诸如TNX-100/5-D12、 OX40L拮抗剂、GM-CSF、吡美莫司 (pimecrolimus)或雷帕審素(rapamycin);抗一TNFot药剂类，i者^口英 夫利昔单抗(infliximab)、阿达木单抗(adal imumab) 、 CDP-870、奥 那西普(onercept)、依那西普(etanercept);消炎剂类，诸如PDE-4 抑制剂(罗氟司特(roflumilast)等)、TACE抑制剂(DPC-333、 RDP-58 等)及ICE抑制剂(VX-740等)以及IL-2受体拮抗剂，诸如达克力莫 (dacl izumab); 选择粘附分子拮抗剂类，诸如那他珠单抗 (natalizumab) 、 MLN-02或阿里卡福(alicaforsen);镇痛药类，包括 但不限于C0X-2抑制剂，诸如罗非考昔(rofecoxib)、伐地考昔 (valdecoxib)、塞来考昔(celecoxib) 、 P/Q-型电压敏感性信道(oc 25) 调节剂，诸如力口巴喷丁 (gabapentin)及普力口巴林(pregabalin) 、 NK-1 受体拮抗剂、大麻素受体调节剂及5类鸦片受体激动剂；以及抗赘瘤药、 抗肿瘤药、抗血管生成药或化疗剂。可将这类额外的作用剂包括在相 同的组合物中或分开给药。本说明书所用"药学上可接受的载体"意指任何及所有生理上兼 容的溶剂、分散介质、涂布剂、抗细菌剂及抗真菌剂、等渗剂及吸收 增强剂或吸收延迟剂诸如此类。药学上可接受的栽体的实例是水、盐 水、磷酸緩沖盐溶液、含有氯化钠的乙酸緩冲液、葡萄糖、甘油、聚 乙二醇、乙醇及诸如此类及其组合。在许多情况下，优选将等渗剂， 例如，糖、多元醇(例如，甘露醇、山梨醇)或氯化钠包括在组合物中。 药学上可接受的物质的其它实例是表面活性剂、润湿剂或少量辅助物 质，诸如润湿或乳化剂、保存剂或緩沖剂，其可增强抗体保存期或效 力。用于本发明的组合物可呈多种形式，举例而言，如液体、半固体 及固体剂型，诸如液体溶液(例如，可注射及可输注溶液)、分散液或 悬浮液、锭剂、丸剂、冻干饼、干粉、脂质体及栓剂。优选形式视期 望给药模式及治疗应用而定。典型优选组合物是呈可注射或可输注溶液形式，例如类似于用于人被动免疫的组合物。给药的优选模式是非 经肠(例如，静脉、皮下、腹膜内、肌内、皮内)给药。在优选的实施 方案中，该抗体是通过静脉内输注或注射给药。在另一个优选实施方 案中，该抗体通过肌内、皮内或皮下注射给药。需要时，该抗体可通 过泵、灌肠剂、栓剂或留置储液器或诸如此类给药。通常，治疗组合物必须无菌且在生产及储存条件下稳定。可将该 组合物调配成溶液、冻干饼、干粉、微乳剂、分散液、脂质体或其它适合高药物浓度的所要求的结构。无菌可注射溶液可通过下述来制备 将所需量的抗-MAdCAM抗体掺入含有上述一种成份或多种成份的组合 (视需要而定)的适宜溶剂中，随后进行无菌处理。如果为用于制备无 菌注射液的无菌粉剂，则优选制备方法是真空干燥和冷冻干燥，如此 可自其先前经无菌处理的溶液制成活性成份外加任何期望的额外成份 的粉剂。 一般而言，可通过将活性化合物掺入含有基本分散介质及所 需的选自上文所列举成份的其它成份的无菌媒剂中来制备分散液。举 例而言，可通过表面活性剂及所需粒度(在分散液的情形中通过表面活 性剂、磷脂及聚合物)保持溶液的所需特性。通过在组合物中掺入可延 迟吸收的药剂(例如单硬脂酸盐、聚合材料、油及明胶)可使可注射组 合物的吸收延长。本发明的抗体可通过多种业内已知方法给药，但对于许多治疗应 用而言，优选给药途径/方式是皮下、肌内、皮内或静脉内输注。本领 域的技术人员应了解，给药途径和/或方式会因所期望的结果而变化。在某些实施例中，可以用可防止抗体快速释放的载体制备该抗体， 例如受控释放调制物，包括植入体、经皮贴剂及微嚢化递送系统。可 使用生物可降解的生物兼容性聚合物，例如乙烯基乙酸乙烯酯、聚酸 酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯及聚乳酸。用于制备这种调制物的多种方法已获得专利权或通常已为本领域的技术人员所熟知。参见，举例而言,5^"a/72ed a/ f/ Co/^ro/Zed Ae/ease "eh>ery 5y"e迈s (J.R. Robinson编辑，Marcel Dekker公司，New York (1978))。在某些实施例中，本发明的抗-MAdCAM抗体可经口服给药，举例而 言，通过惰性稀释剂或可吸收食用的载体给药。还可将该化合物(及其它成份，需要时)封装入硬质或软质壳的明胶胶嚢中、压缩成锭片或直 接加入受试者饮食中。对于口服治疗给药而言，可将该抗-MAdCAM抗体 与赋形剂掺合在一起并以可吸收的锭剂、口含片、片剂、胶嚢、酏剂、 悬浮剂、糖浆、糯米纸嚢剂及诸如此类的形式使用。为通过非经肠之 外的途径给药本发明化合物，可能有必要用一材料涂覆该化合物或与 该化合物共同给药以防止其失活。本发明组合物可以包含"治疗有效量"或"预防有效量的本发明抗体或抗原结合部分。"治疗有效量"是指在所需时期内以所需剂量有效达成期望治疗效果的量。抗体或抗体一部分的治疗有效量会随 以下因素变化诸如疾病状态、个体年龄、性别及体重以及抗体或抗 体部分在该个体体内引发期望的反应的能力。治疗有效量还是其中抗 体或抗体部分的治疗有益作用大于其任何毒性或有害作用的量。"预 防有效量"是指在所需时期内以所需剂量有效达成期望预防效果的量。 通常，由于预防剂量是在患病之前或患病早期用于受试者中，故预防 有效量可少于治疗有效量。可对剂量方案加以调整以提供最佳期望反应(例如，治疗或预防反 应)。举例而言，可给药单次浓注剂、可经一段时间给药数个细分剂量或可根据治疗状况紧急程度所指示按比例降低或增加剂量。以剂量单元形式来调配非经肠组合物特别有利于方便给药及达成剂量一致性。本说明书所用剂量单元形式是指适于作为单位剂量供拟受治疗哺乳动 物受试者使用的物理分立单元；每一单元包括经计算可产生期望治疗 效果的预定量的活性化合物及所需医药载体的组合。本发明的剂量单元形式的规格取决于且直接依赖于下列因素(a)抗-MAdCAM抗体或其 部分的独特性质及想要达到的特定治疗或预防效果，及(b)业内调配该抗体以治疗个体敏感性的固有居限性。本发明的抗体或抗体一部分的治疗或预防有效量的例示性非限制范围是O. 025至50毫克/公斤、更佳是O. l至50毫克/公斤、更佳是O. 1 至25、 0. I至IO或O. l至3毫克/公斤。在一些实施方案中，调制物含有5 毫克/毫升抗体，存于含有20 mM乙酸钠，pH 5.5、 140 mM NaCl及O. 2 毫克/毫升聚山梨醇酯80的緩冲液中。在其它的实施方案中，对于(例 如)静脉内用途，调制物含有10毫克/毫升抗体，存在于2. 73毫克/毫升 三水乙酸钠、45毫克/毫升甘露醇、0. 02毫克/毫升二水EDTA二钠、0.2 毫克/毫升聚山梨醇酯80(用冰乙酸调节至pH 5. 5)中。在其它实施方案 中，对于(例如)皮下或皮内用途，调制物含有50毫克/毫升抗体、2.73 毫克/毫升三水乙酸钠、45毫克/毫升甘露醇、0. 02毫克/毫升二水EDTA 二钠、0. 4毫克/毫升聚山梨醇酯80(用冰乙酸调节至pH 5.5)。应注意 的是，剂量值会随待緩解病症的类型和严重性而变化。应进一步了解 对于任一特定受试者而言，应根据个体需要及给药組合物或监督组合 物给药的个人的专业判断随时调整具体剂量方案，且本说明书所述的 剂量范围仅为举例说明而非意欲限制所主张组合物的范围或应用。在一个实施方案中，该抗体以呈无菌水溶液形式的调制物给药， 该无菌水溶液的pH介于约5. 0至约6. 5之间且含有约l毫克/毫升至约 200毫克/毫升的抗体、约1毫摩尔至约100毫摩尔组氨酸緩沖液、约0. 01 毫克/毫升至约10毫克/毫升聚山梨醇酯80、约100毫摩尔至约400毫摩 尔海藻糖及约O. Ol毫摩尔至约l. O亳摩尔二水EDTA二钠。本发明的另 一方面提供含有本发明的抗-MAdCAM抗体或抗体一部 分或含有该抗体的组合物的套盒。除抗体或组合物外套盒可包含诊断 或治疗剂。套盒还可以包含用于诊断或治疗方法的使用说明。在优选 实施方案中，该套盒包含抗体或含有该抗体的组合物及可在下述方法 中使用的诊断剂。在另外一个优选的实施方案中，该套盒包含该抗体 或含有该抗体的组合物及一种或多种可在下述方法中使用的治疗剂。用于本发明的抗体可经由基因治疗给药给有此需要的患者。该疗法可在活体内或来自体内方式进行。在一个优选实施方案中，将编码 重链及轻链二者的核酸分子给药给患者。在一更优选的实施方案中，给药该核酸分子以使其稳定整合至B细胞的染色体上，因为该细胞可专 门产生抗体。在一个优选实施方案中，离体转染或感染前体B细胞并重 新植入有此需要的患者体内。在另一个实施方案中，使用已知可感染 感兴趣细胞类型的重组病毒体内感染前体B细胞或其它细胞。用于基因 治疗的典型载体包括脂质体、质粒及病毒载体。例示性病毒载体是逆 转录病毒、腺病毒及腺相关病毒。体内或离体感染后，可通过自经治达水平。在一个优选实施方案中，基因疗法包括给药编码抗-MAdCAM抗体重 链或其抗原结合部分的经分离的核酸分子及表达该核酸分子的步骤。 在另一个实施方案中，该基因疗法包括给药编码抗-MAdCAM抗体轻链或其一抗原结合部分的分离的核酸分子及表达该核酸分子的步骤。在一 个更佳方法中，该基因疗法包括给药编码本发明的抗-MAdCAM抗体重链 或其抗原结合部分的分离的核酸分子及编码本发明抗-MAdCAM抗体轻 链或其抗原结合部分的分离的核酸分子并表达该核酸分子的步骤。该 基因疗法还可以包括给药另 一抗炎剂或免疫调节剂的步骤。 抗-MAdCAM抗体对oc 4 P 7/MAdCAM依赖性粘附的抑制 本发明还提供了结合MAdCAM并抑制具有a4 p 7-整联蛋白的细胞对 MAdCAM或其它同源配体(诸如L-选择素)对MAdCAM的结合及粘附的抗 -MAdCAM抗体的用途。在一个优选实施方案中，该MAdCAM是人MAdCAM 且呈可溶形式或在细胞表面上表达。在另一优选实施例中，该抗-MAdCAM抗体是人抗体。在另一实施方案中，该抗体或其部分抑制0C4 |3 7与MAdCAM之间的结合，其中ICs。值不超过50nM。在一个优选的实施 方案中，该IC5。值不超过5 nM。在一更优选的实施例中，该ICs。值小于 5 nM。在一更优选的实施例中，ICs。值小于0. 05微克/毫升、0. 04微克 /毫升或0. 03微克/毫升。在另一优选实施例中，该IC5。值小于0. 5微克/ 毫升、0. 4微克/毫升或0. 3微克/毫升。该ICs。值可通过业内已知的任一方法测量。通常，I"值可通过ELISA或粘附分析测量。在一个优选的 实施方案中，该ICs。值是通过粘附分析使用天然表达MAdCAM的细胞或组 织或已经构建可表达MAdCAM的细胞或组织测量。除非本说明书另外定义，否则用于本发明的科学及技术术语具有 为业内普通技术人员通常所了解的含义。并且，除非上下文另有要求， 否则单个术语应包括复数形式且复数术语应包括单数形式。 一般而言， 用于本说明书的所述细胞及组织培养、分子生物学、免疫学、微生物 学、遗传学、蛋白质及核酸化学以及杂交的术语及技术是为业内熟知 且常用的。除非另有说明，否则本发明的方法及技术一般可根据业内 熟知的传统方法和如本发明说明书各处引用及论述的各种通用性及更 具体的参考文献中所述实施。参见例如，Sambrook等人，#o/eci//fl/" C7o/72./7^v 爿 Za6orator/ vl/a/7i/a/, 第二版,Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N-Y, (1989)及Ausubel等 人，Ci/_rre/7f /VWoco/s // #o_/ecw/ar Si.o/o^o Greene Publishing Associates (1992)， 及Harlow与Lane， J/z〃6ocT/w 爿"6or"or/ 舱/7i/a/， Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1990)，这些文献以引用方式引入本说明书中。酶促反应及纯化 技术依照制备商的说明书实施，或如业内习用方法实施，或如本说明 书所述实施。化学品合成、化学品分析、药物制备、调配及递送、及 患者的治疗采用标准技术。术语"多肽"涵盖天然或人工合成蛋白质、蛋白质片段及蛋白质 序列的多肽类似物。多肽可以是单体或聚合物。术语"经分离蛋白质"或"经分离多肽，，根据其起源或衍生自如 下蛋白质或多肽(l)不与原本在其天然状态下伴随其的天然结合组份 相结合，(2)不含来自相同物种的其它蛋白质；(3)可由来自不同物种 的细胞表达；或(4)在天然状态下不存在。因此，经化学合成或在不同 于多肽天然起源的细胞的细胞系统中合成的多肽是与其天然结合组份 "分离"的。也可通过分离利用业内熟知的蛋白质纯化技术使蛋白质 大体不含天然结合组份。当一样品的至少约60至75%展现单一种类多肽时，蛋白质或多肽是 "实质纯净"、"实质均一"或"经实质纯化"的。该多肽或蛋白质 可以是单体或多聚体。实质纯净多肽或蛋白质通常会占蛋白质样品的 约50%、 60%、 70%、 80%或90% W/W、更通常约95%，且优选地会是99% 以上纯度。蛋白质纯度或均一性可由业内熟知的多种方式展现，例如 进行蛋白质样品的聚丙烯酰胺凝胶电泳，随后在用业内熟知染剂染色 凝胶时目测单个多肽条带。对于某些目的而言，可通过HPLC或业内熟 知的其它方法进行纯化来提供更高的分辩力。如本说明书所用术语"多肽片段"是指具有氨基末端缺失和/或羧 基末端缺失的多肽，但其中剩余的氨基酸序列是与天然存在序列中相 应位置相同。在一些实施例中，片段是至少5、 6、 8或10个氨基酸长。 在其它实施例中，该片段至少14个氨基酸长，更佳至少20个氨基酸长， 通常至少50个氨基酸长，进一步优选至少70、 80、 90、 100、 150或200 个氨基酸长。本说明书所用术语"多肽类似物"是指包含与一氨基酸序列的一 部分具有实质一致性且具有至少一种以下性质的含有至少25个氨基酸 的片段的多肽(l)可在适合结合的条件下特异结合MAdCAM; (2)抑制 a 4 P 7整联蛋白和/或L-选择素结合MAdCAM的能力；或(3)降低活体外或 活体内MAdCAM的细胞表面表达的能力。通常，相对于天然存在序列多 肽类似物含有一保守氨基酸取代(或插入或缺失)。类似物通常至少20 个氨基酸长、优选至少50、 60、 70、 80、 90、 100、 150或200个氨基酸 长或更长，且常与全长天然存在的多肽一样长。"免疫球蛋白"是四聚体分子。在天然存在的免疫球蛋白中，每 一个四聚体由两对相同多肽链构成，每一对具有一个"轻"链(约25kDa)及一个"重"链(约50至70 kDa)。每条链的氨基末端部分包括一 主要负责抗原识别的具有约100至110或更多氨基酸的可变区。每条链 的羧基末端部分界定主要负责效应功能的恒定区。人轻链分类为K轻 链及X轻链。重链可分类为ia、 5、 y、 oc或e，且将抗体的同种型 分别定义为IgM、 IgD、 IgA及IgE。在轻链及重链中，可变区及恒定区是经由含有由约12或更多个氨基酸的"J"区连接，其中该重链还包括 含有由约10或更多个氨基酸的"D"区。尸w^/錢e/z"7 /歸加/柳Ch. 7 (Paul, W.编辑，第二版，Raven Press, N. Y. (1989))(出于所有目的，其全部内容以引用方式引入本说明书中)。每 个轻链/重链对的可变区形成抗体结合位点以使免疫球蛋白具有两个 结合位点。免疫球蛋白链展示具有相同的由三个超变区(亦称为互补决定区 或CDR)连接的相对保守的框架区(FR)的通用结构。来自每一对的两条 链的CDR通过框架区排列成直线以形成表位特异结合位点。自N-末端至 C-末端，轻链及重链皆包括结构域FR1、 CDR1、 FR2、 CDR2、 FR3、 CDR3 及FR4。氨基酸在各结构域中的分配符合Kabat的5^^/e/ ces o尸 i7^e//751 o尸/迈迈w3o/og/ca/ //7fere" (National Institutes of Health, Bethesda， Md. (1987及1991))或Chothia & Lesk /. A/o人196:901-917 (1987); Chothia等人，#a ， 342:878-883 (1989)的定义。"抗体"是指完整免疫球蛋白或指可与完整抗体竟争特异性结合 的其抗原结合部分。在一些实施例中，抗体是其抗原结合部分。抗原 结合片段是通过重组DNA技术或通过酶促或化学裂解完整抗体产生。抗 原结合部分尤其包括Fab、 Fab'、 F(ab02、 Fv、 dAb及互补决定区(CDR) 片段、单链抗体(scFv)、嵌合抗体、双抗体及含有至少免疫球蛋白一 部分的多肽(该免疫球蛋白一部分足以赋予该多肽以特异性抗原结合 能力)。Fab片段由VL、 VH、 CL及CH1结构域构成的单价片段；F(ab)2 片段含有在铰链区由二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；Fd片段由 VH及CH1结构域构成；Fv片段由抗体单臂的VL及VH结构域构成；而dAb 片段(Ward等人，^a^re， 341: 544-546 (1989))由VH结构域构成。本说明书所用称作(例如)1. 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6.77.2、 7.16.6、 7.20.5、 7. 26. 4或9. 8. 2的抗体是由具有相同名字 的杂交瘤生成的单克隆抗体。举例而言，抗体1,7. 2是由杂交瘤1.7. 2 产生的。称作6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的抗体是其序列以定点诱变修饰自其相应的母体的单克隆 抗体。单链抗体(scFv)是其VL及VH区经由能够使其成为单个蛋白质链的 合成连接子配对形成单价分子的抗体(Bird等人，Sc/e/7ce, 242: 423-426 (1988)及Huston等人，户roc. ^a〃. Jcad. 5W. MJ， 85:5879-5883 (1988))。双抗体是二价双特异性抗体，其中VH及VL结构 域表达在单一多肽链上，但是所用连接子太短因而不容许相同链上两 个结构域之间进行配对，从而迫使这样的结构域与另一链的互补结构 域配对并形成两个抗原结合位点(参见例如，Holliger， P.等人，户roc.5W. ,, 90:6444-6448 (1993); Poljak, R. J.等人， 5Y藩&re， 2:1121-1123 (1994))。可以共价或非共价方式将一个或 多个来自本发明抗体的CDR引入一个分子以使其成为可特异结合 MAdCAM的免疫粘附素。免疫粘附素可引入CDR作为较大多肽链的一部 分；可共价连接CDR以成为另一多肽链；或可以非共价方式引入CDR。 该CDR可以使免疫粘附素特异性结合至特定感兴趣的抗原。抗体可具有一个或多个结合位点。若存在一个以上的结合位点，则该结合位点可彼此相同或不相同。举例而言，天然存在的免疫球蛋 白具有两个相同的结合位点，单链抗体或Fab片段具有一个结合位点， 而"双特异性"或"双功能"抗体(双抗体)则具有两个不同的结合位 点。"分离的抗体"是如下抗体(l)不与原本在其天然状态下伴随其 的天然结合组份(包括其它天然结合的抗体)相结合，(2)不含来自相同 物种的其它蛋白质；(3)可由来自不同物种的细胞表达；或(4)在天然 状态下不存在。分离的抗体的实例包括已利用MAdCAM亲和纯化的抗-MAdCAM抗体、已由杂交瘤或其它细胞系在活体外产生的抗-MAdCAM抗体 及源自转基因哺乳动物或植物的人抗-MAdCAM抗体。本说明书所用术语"人抗体"意指其中可变区及恒定区序列抗体 是人序列的抗体。该术语涵盖具有源自人基因但为(例如)降低可能的 免疫原性、增加亲和力、消除可能会引起不期望的折叠的半胱氨酸或糖基化位点等已发生改变的序列的抗体。该术语涵盖这些在非人细胞 (其可能会赋予不具人细胞特征的糖基化)中重组产生的抗体。该术语 亦涵盖已在含有一些或所有人免疫球蛋白重链及轻链基因座的转基因 小鼠中饲养的抗体。在一方面中，本发明提供人源化抗体。在一些实施例中，该人源 化抗体是源自非人物种的抗体，该抗体重链及轻链的框架及恒定结构 域中某些氨基酸已接受突变以便避免或消除人体内的免疫反应。在一 些实施例中，人源化抗体可通过使来自人抗体的恒定结构域与来自非 人物种的可变结构域融合产生。如何形成人源化抗体的实例可见于美国专利第6， 054， 297号、第5，886，152号及笫5， 877， 293号。在一些实 施例中，本发明的人源化抗-MAdCAM抗体含有本发明的一个或多个人抗 -MAdCAM抗体的 一个或多个框架区的氨基酸序列。在另一方面中，本发明包括"嵌合抗体"的用途。在一些实施例 中，该嵌合抗体是指含有一个或多个来自 一个抗体的区域且含有一个 或多个来自一个或多个其它抗体的区域的抗体。在一个优选的实施方 案中， 一个或多个CDR源自本发明的人抗-MAdCAM抗体。在一个更佳实 施例中，所有CDR源自本发明的人抗-MAdCAM抗体。在另一个优选实施 例中，将该来自 一个以上的本发明的人抗-MAdCAM抗体的CDR在一嵌合 抗体中混合并配对。举例而言，嵌合抗体可含有来自第一个人抗 -MAdCAM抗体轻链的CDRl,该CDR1可与来自第二个人抗-MAdCAM抗体轻 链的CDR2及CDR3组合，且重链的CDR可源自第三个抗-MAdCAM抗体。此 外，框架区可源自相同抗-MAdCAM抗体、 一个或多个不同抗体(诸如人 抗体)或人源化抗体的框架区。"中和抗体，，、"抑制性抗体"或拮抗剂抗体是可抑制至少约20% 的ot 4 P 7或a 4 P广表达细胞或任何其它同源配体或同源配体表达细胞 结合MAdCAM的抗体。在一个优选的实施方案中，该抗体对a^7整联蛋 白或oup7表达细胞与MAdCAM结合的抑制至少为40y。、更佳60%、进一步 优选80%、 85%、 90°/。、 95%或100%。结合降低可通过本领域的技术人员 已知的任何方法测量，举例而言，如通过活体外竟争结合分析测量，测量a 4 P 7表达细胞对MAdCAM的结果降低的例子如实施例1所示。本领域的技术人员遵照本说明书的教导会很容易地制备抗体片段 或类似物。片段或类似物的优选氨基-及羧基-末端出现在功能结构域 边界区附近。可将核苷酸和/或氨基酸序列数据与公开的或专利所有序 列数据库进行比较藉此确定结构及功能结构域。优选地，用计算机化 比较方法来确定在其它具有已知结构和/或功能的蛋白质中出现的序 列基序或预期蛋白质构象结构域。鉴别可折叠成已知三维结构的蛋白 质序列的方法为人们所公知(Bowie等人，iWe細,253:164 (1991))。 术语"k。ff"指用于表征抗体自抗体/抗原复合体离解的解离速率 常数。术语"Kd"指特定抗体-抗原相互作用的离解常数。据称抗体在解 离常数《1 jaM、优选《100 nM且最优选《10 nM时可与抗原结合。术语"表位"包括能够特异结合结合免疫球蛋白或T-细胞受体或 以其它方式与一分子相互作用的任何蛋白质决定簇。表位决定簇通常 由分子的化学活性表面基团(例如，氨基酸或碳水化合物侧链)组成， 且其通常具有特异性三维结构特征以及特异性电荷特征。An表位可呈"线性"或"构象"形式。在线性表位中，蛋白质与相互作用分子(诸 如抗体)之间所有相互作用点均沿该蛋白质主要氨基酸序列以线性方式出现。在构象表位中，相互作用点交叉出现在蛋白质上彼此分开的 氨基酸残基上。如本说明书所用，20种公知氨基酸及其缩写遵循公知用法。参见 /迈/z/""o/og7 -」《5>/7^"2、(第2版，E.S. Golub及D.R. Gren编辑， Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991))，其以引用的方 式引入本专利说明书中。20种公知氨基酸的立体异构体(例如D-氨基 酸)、非天然氨基酸(例如a-， ot-二取代氨基酸、N-烷基氨基酸)、乳 酸、及其它非公知氨基酸也适用于本发明的多肽的组份。非公知氨基 酸的实例包括4-羟脯氨酸、Y-羧基麸氨酸、e-N,N，N-三曱基赖氨 酸、e-N-乙酰基赖氨酸、0-磷酸丝氨酸、N-乙酰基丝氨酸、N-甲酰基 曱硫氨酸、3-甲基组氨酸、5-羟基赖氨酸、s-N-甲基精氨酸、及其它类似氨基酸及亚氨基酸(例如，4-羟基脯氨酸)。在本说明书所用多肽 符号中，左手方向为氨基末端方向而右手方向为羧基末端方向，符合 标准用法及惯例。如本说明书所提及术语"多核苷酸"意指具有至少10个碱基长度 的核苷酸(或为核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸或任一类型核苷酸的经 修饰形式)聚合形式。该术语包括DNA的单链及双链形式。如本说明书所用术语"分离的多核苷酸"意指基因组来源、cDNA 来源、或合成来源或其某一组合的多核苷酸，根据其来源，该"分离 的多核苷酸"(l)并非与全部或一部分在天然状态下于其中可发现该 "分离的多核苷酸，，的多核苷酸相结合，(2)以可操作方式与一在天然 状态下其并未与其连接的多核苷酸相连接，或(3)未在天然状态中作为 较大序列的一部分出现。本说明书所提及术语"寡核苷酸"包括通过天然存在及非天然存 在寡核苷酸键结连接在一起的天然存在及经修饰核苷酸。寡核苷酸是 多核苷酸子集，其通常具有200碱基或更少的长度。寡核苷酸优选IO 至60碱基长且最优选12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、或20至40碱 基长。寡核苷酸通常是单链，例如对于探针；但寡核苷酸也可以是双 链，例如对于基因突变体的构造。本发明的寡核苷酸可以是有义链寡 核苷酸或反义链寡核苷酸。本说明书所提及术语"天然存在的核苷酸"包括脱氧核糖核苷酸 及核糖核苷酸。本说明书所提及术语"经修饰核苷酸"包括带有经修 饰或经取代糖基的核苷酸及诸如此类。本说明书所提及术语"寡核苷 酸键"包括如下寡核苷酸键，例如硫代磷酸酯基、二硫代磷酸酯基、 硒代磷酸酯基、二硒代磷酸酯基、苯氨基硫代磷酸酯基、苯氨基磷酸 酯基、砩酰胺酯基、及诸如此类。参见例如，LaPlanche等人，峁c/力c/^ 14:9081 (1986); Stec等人，/. J瓜Soc 106:6077 (1984); Stein等人，#wc/.爿c油紋，16: 3209 (1988); Zon等人，紐/-C露er / ri/g "e"'^ 6:539 (1991); Zon等人，組,wc/eo"Ves a/7d 細7喂w "rac〃c"场r瞎力，第87-108页(F. Eckstein编辑，Oxford University Press, Oxford England (1991)); Stec等人,美 国专利第5， 151， 510号；Uhlmann及Peyman ， Chemical Review， 90: 543 (1990)，上述参考文献及专利的揭示内容一引用方式引入本专 利说明书中。寡核普酸可视需要包括一用于检测的标记物。"以可操作方式连接的"序列既包括与感兴趣基因邻接的表达控 制序列也包括反式或远距作用以控制感兴趣基因的表达控制序列。本 说明书所用术语"表达控制序列"是指对于实现其所连接的编码序列 的表达及加工不可缺少的多核苷酸序列。表达控制序列包括适宜的转 录起始、终止、启动子及增强子序列；有效RNA加工信号，诸如剪接及 聚腺苷酸化信号；稳定胞质mRM的序列；增强转录效率的序列(即， Kozak—致序列)；增强蛋白质稳定性的序列；且需要时，包括可增强 蛋白质分泌的序列。该控制序列的性质视宿主生物而不同；在原核生 物中，该控制序列通常包括启动子、核糖体结合位点、及转录终止序 列；在真核生物中，该控制序列一般包括启动子及转录终止序列。术 语"控制序列，，意欲包括(最低限度)所有其存在对于表达及加工是必 不可少的组件且也可包括额外的其存在是有益处的组件，例如前导序 列及融合伴侣序列。本说明书所用术语"载体"欲指能够转运已与其连接的另一核酸 的核酸分子。 一类载体是"质粒"，其指其中可连接有额外DNA段的环 状双链DNA环。另一类载体是病毒载体，其中额外DM段可连接于病毒 基因组中。某些载体(例如，具有细菌复制起始点的细菌载体及附加型 哺乳动物载体)能够在其中并入此载体的宿主细胞中自主复制。其它载 体(例如，非附加型哺乳动物载体)可在并入宿主细胞后整合至宿主细 胞的基因组中，藉此与宿主基因组一起复制。此外，某些栽体能够引 导以可操作方式与其连接的基因的表达。本说明书将此等载体称作"重 组表达载体"(或简称为"表达载体，，)。通常，用于重组DM技术的表 达载体通常呈质粒形式。在本说明书中，由于质粒是最常用的载体形 式，所以"质粒"及"载体"可互换使用。然而，本发明欲包括可提 供等效功能的其它形式的表达栽体，例如病毒栽体(例如，复制缺陷型逆转录病毒、腺病毒及腺相关病毒)。本说明书所用术语"重组宿主细胞"(或简称为"宿主细胞")欲 指其中已引入重组表达载体的细胞。应了解，该术语不仅欲指特定受 试者细胞而且还指此细胞的子代。由于突变或环境影响可使后续各代 发生某些改变，因此，该子代实际上可能与母细胞不同但却仍涵盖于 本说明书所用术语"宿主细胞"的范围内。本说明书所提及术语"选择性杂交"意指可检测地且特异性地结 合。本发明多核苷酸、寡核苷酸及其片段在使可估计的与非特异性核 酸的可检测结合量最小化的杂交及洗涤条件下选择性杂交至核酸链 上。如业内所公知及本说明书所论述，可用"高严谨性，，或"高度严 谨"条件来实现选择性杂交条件。"高严谨性"或"高度严谨，，条件 的一个实例是使一多核苷酸与另一多核苷酸一起如下孵育的方法，其中可将一多核苷酸固定于固体(诸如膜)表面上，于含有6XSSPE或SSC、 50%曱酰胺、5X Denhardt试剂、0.5% SDS、 100微克/毫升变性片段化 鲑鱼精子DNA的杂交緩沖液中在42。C的杂交温度下孵育12至16小时，然 后在55。C下用含有1X SSC、 0.5% SDS的洗涤緩沖液洗涤两次。可参见 Sambrook等人，上述文献，第9. 50-9. 55页。就核苷酸序列范围而言的术语"百分比序列一致性，，指当就最大 一致性进行比对时两个序列中相同的残基。序列 一致性比较的长度可 超过一段含有至少约9个核苷酸的核酸序列、通常至少约18个核苷酸、 更通常至少约24个核苷酸、典型至少约28个核苷酸、更典型至少约32 个核苷酸、且优选地至少约36、 48或更多个核普酸。有多种可用来测 量核苷酸序列 一致性的不同的业内已知算法。举例而言，可使用FASTA、 Gap或Bestfit (该是Wisconsin Package Version 10. 3中的程序， Accelrys， San Diego， CA)来比较多核苦酸序列。包括(例如)程序 FASTA2及FASTA3的FASTA可提供查询与搜索序列之间最佳重迭区的比 对及百分比序列一致性(Pearson, f/7z/iz70/. ， 183: 63-98(1990); Pearson, , 132: 185-219 (2000); Pearson,〃ef力0(/; i"/3zjwo/. ， 266: 227—258 (1996); Pearson, /. #0/. A/o厶，276: 71-84 (1998);该文献以引用方式引入本专利说明书中)。除非 另有说明，否则可使用用于特定程序或算法的默认参数。举例而言，利用Gap以其Wisconsin Package Version 10. 3 (以引用方式引入本专一致性。除非另有说明，否则提及核苷酸序列也包括其互补部分。因此应 了解，提及具有特定序列的核酸分子也包括具有其互补序列的其互补链。在分子生物学业内，研究者可互换使用术语"百分比序列一致性"、 "百分比序列相似性，，及"百分比序列同源性，，。在本申请案中，此 等术语仅对核苷酸序列具有相同含义。当提及核酸或其片段时，术语"实质相似性"或"实质序列相似 性"表示，用适宜核苷酸插入或删除与另一核酸(或其互补链)进行最 优比对时，在至少约85%、优选至少约90%且更佳至少约95%、 96%、 97%、 98%或99%核苷酸碱基中具有核苷酸序列一致性，如上所述通过任一熟 知序列一致性算法(诸如FASTA、 BLAST或Gap)所测得。用于多肽时，术语"实质一致性"意指，当两个肽序列通过(例如) 程序GAP或BESTFIT利用默认空位加权进行最有比对时，二者具有至少 75%或80%序列一致性、优选具有至少90%或95%序列一致性、进一步优 选具有至少98%或99%序列一致性。优选地，不完全相同的残基位置因保守氨基酸取代而不同。"保守氨基酸取代"是其中一氨基酸残基由 另一具有有相似化学性质(例如，电荷或疏水性)的侧链(R基团)的氨基酸残基所取代这样的取代。 一般而言，保守氨基酸取代不会实质改变 蛋白质的功能性质。在其中两个或两个以上氨基酸序列因保守取代而 彼此不同的情况中，可上调百分比序列一致性或相似度以校正取代的 保守性质。用于进行此调整的方法为本领域的技术人员所熟知。参见 例如，Pearson, "/o入，24: 307-31 (1994)，该文献以引用方式引入本专利说明书中。具有有相似化学性质的侧链的各组氨基酸的实例包括l)脂肪族侧链甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨 酸及异亮氨酸；2)脂肪族羟基侧链丝氨酸及苏氨酸；3)含酰胺侧链 天冬酰胺及谷胺酰胺；4)芳香族侧链苯丙氨酸、酪氨酸及色氨酸； 5)碱性侧链赖氨酸、精氨酸及组氨酸；以及6)含硫侧链半胱氨酸 及曱硫氨酸。优选保守氨基酸取代基团是缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、 苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨 酸及天冬酰胺-谷胺酰胺。或者，保守取代是在Gonnet等人，Sc/e腳，256: 1443-45 (1992)(以引用方式引入本专利说明书中)中揭示的PAM250对 数相似度矩阵中具有正值的任何改变。"中度保守"取代是在PAM250 对数相似度矩阵中具有非负值的任何改变。多肽的序列相似性通常利用序列分析软件测量。蛋白质分析软件 使用分配给各种取代、缺失及其它修改(包括保守氨基酸取代)的相似 性量度匹配类似序列。举例而言，GCG含有诸如"Gap"及"BestfU" 等程序，可利用该程序以默认值确定紧密相关多肽(诸如来自不同物种 生物体的多肽)之间或野生型蛋白质与其一突变蛋白质之间的序列同 源寸生或序歹寸一致'〖生。参见例》口， Wisconsin package Version 10. 3。 也可以使用FASTA (Wisconsin package Version 10. 3中一程序)以默 认或推荐参数比较多肽序列。FASTA(例如，FASTA2及FASTA3)可提供查 询与搜索序列之间最佳重迭区的比对及百分比序列一致性(Pearson (1990); Pearson (2000))。当将本发明序列与含有大量来自不同生物 体的序列的数据库进行比较时，另一优选算法是计算机程序BLAST,尤 其是blastp或tblastn(使用默认参数)。参见例如，Altschul等人，/. #。7. S/o/. 215: 403-410 (1990); Altschul等人，肠/e/c 25:3389-402 (1997);该文献以引用方式引入本专利说明书中。进行同源性比较的多肽序列的长度一般会是至少约16个氨基酸残 基、通常至少约20个残基、更通常至少约24个残基、典型至少约28个 残基且优选多于约35个残基。当搜索含有来自大量不同生物体的序列 的数据库时，优选去比较氨基酸序列。本说明书所用术语"标记物"或"经标记"是指在抗体中掺入另 一分子。在一个实施例中，该标记物是可检测的标记物，例如，掺入 经放射标记的氨基酸或连接至具有可通过经标记抗生物素蛋白检测的 生物素基部分的多肽(例如，包含荧光标记物或具有可通过光学或比色 方法检测的酶促活性的链霉抗生物素蛋白)。在另一实施例中，该标记 或标记物可以是治疗剂，例如，药物共轭物或毒素。多种标记多肽及 糖蛋白的方法为业内所知且可使用。用于多肽的标记物实例包括但不限于以下各物放射性同位素或放射性核素(例如，3H、 14C、 15N、 35S、 9。Y、 "Tc、出ln、 I25l、 i3!l)、荧光标记物(例如，FITC、罗丹明、镧系 元素磷光体)、酶标记物(例如、过氧化物酶、p-半乳糖苷酶、荧光素 酶、碱性磷酸酶)、化学发光标记物、生物素基团、由二级报告子识别 的预先确定的多肽表位(例如，亮氨酸拉链对序列、二级抗体的结合位 点、金属结合结构域、表位标签)、磁性剂，诸如钆螯合物、毒素，诸 如百曰咳毒素(pertussis toxin)、 紫杉醇(taxol)、细胞松弛素 B(cytochalasin B)、短杆菌肽D (gramicidin D)、溴化乙锭(ethidium bromide)、吐根碱(emetine)、丝裂霉素(mitomycin)、表鬼桕毒素 (etoposide)、鬼臼瘗汾戒(tenoposide)、长春新碱(vincrist ine)、 长春碱(vinblastine)、 秋7Jc仙碱(colchicin)、 多柔比星 (doxorubicin)、 柔红霉素(daunorubicin) 、 二羟基蒽酉昆(dihydroxy anthracin dione)、 米托蒽硫(mitoxantrone)、 光辉霉素 (mithramycin)、 方欠线菌素D(actinomycin D) 、 l一去氛華酉同 (l-dehydrotestosterone)、糖皮质激素、普鲁卡因(procaine) 、 丁 卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛尔(propranolol)、 及噤呤霉素(puromycin)及其类似物或同系物。在某些实施例中，标记 物通过各种长度之间隔子臂添加以降低潜在的空间位阻。
权利要求
1.一种抗-MAdCAM抗体或其抗原结合部分的用途，其用于制备用来治疗腹部疾病和/或热带口炎性腹泻的药物。
2. 权利要求l的用途，其中该药物用于治疗腹部疾病。
3. 权利要求1或权利要求2的用途，其中该抗-MAdCAM抗体是人单 克隆抗体。
4. 权利要求3的用途，其中该抗体或部分具有至少一种以下性质(a) 结合人细胞；(b) 对MAdCAM具有较VCAM或纤连蛋白高至少100倍的选择性；(c) 以3xl0—" M或更低的Kd结合人MAdCAM;或(d) 抑制ou )3 7表达细胞对人MAdCAM的结合；(e) 抑制淋巴细胞向胃肠淋巴组织的募集。
5. 权利要求1至4中任一项的用途，其中所述抗体或抗原结合部分 抑制人MAdCAM对oc4 P 7的结合，且其中该抗体或其部分具有至少一种以 下性质(a) 与参照抗体交叉竟争结合MAdCAM;(b) 与参照抗体竟争结合MAdCAM;(c) 与参照抗体结合相同的MAdCAM表位；(d) 以与参照抗体大体相同的Kd结合MAdCAM;(e) 以与参照抗体大体相同的解离速率结合MAdCAM; 其中该参照抗体选自单克隆抗体1.7. 2、单克隆抗体1.8.2、单克隆抗体6. 14.2、单克隆抗体6. 22. 2、单克隆抗体6. 34. 2、单克隆抗体 6.67.1、单克隆抗体6. 73. 2、单克隆抗体6. 77. 1、单克隆抗体7. 16. 6、 单克隆抗体7. 20. 5、单克隆抗体7. 26.4、单克隆抗体9. 8. 2、单克隆抗 体6. 22.2-mod、单克隆抗体6. 34. 2-mod、单克隆抗体6. 67. l-mod、单克 隆抗体6. 77. l-mod及单克隆抗体7. 26. 4-mod。
6. 权利要求1至5中任一项的用途，其中该抗-MAdCAM抗体的重链 可变区、轻链可变区或二者在氨基酸序列上与选自下列的单克隆抗体的对应区域具有至少90%的同一性单克隆抗体1.7. 2、单克隆抗体1.8. 2、 单克隆抗体6.14. 2、单克隆抗体6. 22. 2、单克隆抗体6. 34. 2、单克隆抗 体6. 67. 1、单克隆抗体6. 73. 2、单克隆抗体6. 77. 1、单克隆抗体7. 16. 6、 单克隆抗体7. 20. 5、单克隆抗体7. 26.4、单克隆抗体9. 8. 2、单克隆抗 体6. 22.2-mod、单克隆抗体6. 34. 2-mod、单克隆抗体6. 67. 1-mod、单克 隆抗体6. 77. l-mod及单克隆抗体7. 26. 4-mod。
7.权利要求1至6中任一项的用途，其中该抗体选自(a) 含有示于SEQ ID N0:2及SEQ ID NO: 4的氨基酸序列但不含信号序 列的抗体；(b) 含有示于SEQ ID N0:6及SEQ ID NO: 8的氨基酸序列但不含信号序 列的抗体；(c) 含有示于SEQ ID NO:10及SEQ ID NO: 12的氛基酸序列但不含信号 序列的抗体；(d) 含有示于SEQ ID N0:14及SEQ ID NO: 16的氨基酸序列但不含信号 序列的抗体；(e) 含有示于SEQ ID N0:18及SEQ ID NO: 20的氛基酸序列但不含信号 序列的抗体；(f) 含有示于SEQ ID NO: 22及SEQ ID NO: 24的氨基酸序列但不含信号 序列的抗体；(g) 含有示于SEQ ID NO:26及SEQ ID NO: 28的氨基酸序列但不含信号 序列的抗体；(h) 含有示于SEQ ID NO:30及SEQ ID NO: 32的氨基酸序列但不含信号 序列的抗体；(i) 含有示于SEQ ID NO: 34及SEQ ID NO: 36的氨基酸序列但不含信号 序列的抗体；(j) 含有示于SEQ ID NO: 38及SEQ ID NO: 40的氨基酸序列但不含信号 序列的抗体；(k) 含有示于SEQ ID N0:42及SEQ ID NO: 44的氨基酸序列但不含信号 序列的抗体；(1) 含有示于SEQ ID NO: 46及SEQ ID NO: 48的氨基酸序列但不含信号 序列的抗体；On) 含有示于SEQ ID NO:52及SEQ ID NO: 54的氨基酸序列但不含信号 序列的抗体；(n) 含有示于SEQ ID NO:56及SEQ ID NO: 58的氨基酸序列但不含信号 序列的抗体；(o) 含有示于SEQ ID NO:60及SEQ ID NO: 62的氨基酸序列但不含信号 序列的抗体；(p) 含有示于SEQ ID N0:64及SEQ ID NO: 66的氨基酸序列但不含信号 序列的抗体；及(q) 含有示于SEQ ID N0:42及SEQ ID NO: 68的氨基酸序列但不含信号 序列的抗体。
8. 权利要求1至7中任一项的用途，其中重链C-末端的赖氨酸自该 抗-MAdCAM抗体裂解。
9. 权利要求1至8中任一项的用途，其中该单克隆抗体或其抗原结 合部分选自下列抗体(a) 重链包含选自于下列的参照抗体的重链CDR1、 CDR2及CDR3氨基酸 序列1. 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9. 8. 2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、6. 77. l-mod及7. 26. 4-mod(b) 轻链包含选自于下列的参照抗体的轻链CDR1、 CDR2及CDR3氨基酸 序列:1. 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9. 8. 2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. 1-mod及7. 26. 4-mod(c) 该抗体包含(a)的重链及(b)的轻链；及(d) (c)的抗体，其中重链及轻链CDR氨基酸序列选自相同的参照抗体。
10. 权利要求1至9中任一项的用途，其中该单克隆抗体或抗原结合 部分包含(a)含有选自下列的抗体的重链可变区氨基酸序列的重链1. 7. 2(SEQID NO: 2); 1. 8. 2 (SEQ ID NO: 6); 6. 14. 2 (SEQ ID NO: 10); 6. 22. 2 (SEQ ID NO: 14); 6. 34. 2 (SEQ ID NO: 18); 6. 67. 1 (SEQ ID NO: 22); 6. 73. 2 (SEQ ID NO: 26); 6. 77. 1 (SEQ ID NO: 30); 7. 16. 6 (SEQ ID NO: 34); 7. 20. 5 (SEQ ID NO: 38); 7. 26. 4 (SEQ ID NO: 42); 及9. 8. 2 (SEQ ID NO: 46); 6. 22. 2-mod (SEQ ID NO: 52) ;6. 34. 2-mod卿 ID NO: 56);6. 67. l-mod(SEQ ID NO: 60) ; 6. 77. 1-mod (SEQ ID NO: 64); 及7. 26. 4—mod (SEQ ID NO: 42);(b) 含有选自下列的抗体的轻链可变区氨基酸序列的轻链1. 7. 2 (SEQ ID NO: 4); 1. 8. 2 (SEQ ID NO: 8); 6. 14. 2 (SEQ ID NO: 12); 6. 22. 2 (SEQ ID NO: 16); 6. 34. 2 (SEQ ID NO: 20); 6. 67. 1 (SEQ ID NO: 24); 6， 73. 2 (SEQ ID NO: 28); 6. 77. 1 (SEQ ID NO: 32); 7. 16. 6 (SEQ ID NO: 36); 7. 20. 5 (SEQ ID NO: 40); 7. 26. 4 (SEQ ID NO: 44); 及9. 8. 2 (SEQ ID NO: 48); 6. 22. 2-mod (SEQIDNO: 54) ;6. 34. 2-mod (SEQID NO: 58);6. 67. 1-mod (SEQ ID NO: 62) ; 6. 77. 1-mod (SEQ ID NO: 66); 及7. 26. 4-mod(SEQ ID NO: 68);或(c) (a)的重链及(b)的轻链。
11. 一种抗-ouP7整联蛋白抗体或其抗原结合部分的用途，其用于 制备用来治疗腹部疾病和/或热带口炎性腹泻的药物。
全文摘要
本发明是关于抗-MAdCAM抗体在制备用于治疗腹部疾病和/或热带口炎性腹泻的药物中的用途。本发明还涵盖使用治疗有效量的抗-MAdCAM抗体治疗腹部疾病和/或热带口炎性腹泻的方法。
文档编号A61K39/395GK101227923SQ200680026974
公开日2008年7月23日 申请日期2006年6月28日 优先权日2005年7月8日
发明者G·C·伯吉斯 申请人:辉瑞有限公司