用于治疗功能性胃肠疾病、ibs和功能性消化不良的新的氮杂环丁烷化合物的制作方法

专利名称：用于治疗功能性胃肠疾病、ibs和功能性消化不良的新的氮杂环丁烷化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及式I新化合物，涉及包含所述化合物的药用组合物， 并涉及所述化合物在治疗中的用途。本发明还涉及式I化合物及其新 中间体的制备方法。
背景技术：
神经激肽，也称作速激肽，包含一类肽神经传递素，存在于外周 和中枢神经系统中。三种主要的速激肽为物质P(SP)、神经激肽 A(NKA)和神经激肽B(NKB)。对于三种主要的速激肽，已知有至少 三种受体类型。基于其促进激动剂SP、 NKA和NKB的相对选择性， 受体^L分为神经激肽l(NKO、神经激肽2(NK2)和神经激肽3(NKs)受 体。
需要口服活性的NK受体拮抗剂来治疗，例如呼吸、心血管、神 经、疼痛、肿瘤、炎症和/或胃肠疾病。为了提高这些治疗的治疗指 数，希望获得无毒性或毒性最小的化合物，并且对所述NK受体有选 择性。此外，认为所述药物必须具有良好的药动和代谢性质，以改善 治疗和安全性概况，例如较低的肝酶抑制性质。
众所周知，如果一种药物的血浆水平被同时给予的另 一种药物所 改变，则可能发生严重问题(例如毒性)。如果一种药物的代谢由于同 时给予的另 一种物质(具有肝酶^^']性质)而发生变化，那么可能会出 现这种现象一被称为药物相互作用。CYP(细胞色素P450) 3A4是人 肝脏中最重要的酶，因为大多数被氧化的药物经由这种酶进行生物转 化。因此，不希望使用对这种肝酶具有显著抑制程度的药物。现已发 现，本领域已知的许多NK受体拮抗剂，可将CYP3 A4抑制到某一 水平，因此，如果那些化合物以高剂量用于治疗，则还是可能存在风险。因而，需要具有改良药动性质的新NK受体拮抗剂。本发明提供 了具有低水平CYP3 A4酶抑制性质的化合物，因为在CYP3 A4抑制 分析中获得了比较高的IC5o值。所述测定CYP3 A4抑制的方法，描 述于Bapiro等，Drug Metab. Dispos. 29, 30-35 (2001)。
众所周知，某些化合物可对人的心脏复极化产生不良作用，在心 电图(ECG)上可观察到QT间期延长。在极端情况下，这种药物引起 的QT间期延长会导致一类心脏心律失常，叫做Torsades de Pointes (TdP; Vandenberg等，hERG K+ channels: friend and foe(hERG K+通道 朋友和敌人).Trends Pharmacol Sci 2001; 22: 240-246),最终导致心室 纤维颤动和猝死。这种病症中的主要事件是，通过这些化合物抑制了 延迟整流钾电流(IKr)的快组分。这些化合物与负载这种电流的通道蛋 白的孔形成的a亚单位相结合。孔形成的a亚单位^A类ether-a-go-go 相关基因(hERG)编码。由于IKr在心脏动作电位复极化中起着重要作 用，因此它的抑制作用减慢了复极化，并且表现为QT间期延长。虽 然QT间期延长本身并不关系到安全性，但其具有心血管不良反应的 风险，少数人会出现TdP，并恶化成为心室纤维颤动。
特别地，希望NK受体拮抗剂具有适当的药效和药动性质平衡， 使其可用于治疗。除具有足够且选择性的效能之外，NK受体拮抗剂 需要与相关的药动性质相平衡。因此，NK拮抗剂的必要条件有a)对 不同的NK受体有足够高的亲和性，b)药动性质(吸收、分布和消除 性质)，使药物可能作用于外周和中枢神经系统的靶向NK受体。例 如，NK受体拮抗剂需要具有足够高的代谢稳定性，c)对不同的离子 通道(例如hERG-编码的钾通道)有足够低的亲和性，以获得可耐受的 安全性，和d)低水平的肝酶(例如CYP3A4)抑制性，以防药物相互 作用。此外，为了增强NK受体拮抗剂的功效，对受体具有长期持久 竟争作用模式的NK拮抗剂是有益的。
EP 0625509、 EP 0630887、 WO 95/05377、 WO 95/12577、 WO 95/15961 、 WO 96/24582、 WO 00/02859、 WO 00/20003、 WO 00/20389、WO00/25766、 WO00/34243、 WO 02/51807和WO 03/037889公开了 哌咬基丁酰胺衍生物，其是速激肽拮抗剂。
"4-Ammo-2-(aryl)-butylbenzamides and Their Conformationally Constrained Analogues. Potent Antagonists of the Human Neurokinin-2 (NK2) Receptor(4-氨基-2-(芳基)-丁基苯甲酰胺及其构象限制的同类 物，人神经激肽-2(NK2)受体的有效拮抗剂)"，Roderick MacKenzie, A. 等，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2003), 13， 2211-2215 ， 公开了化合物A42-(3,4-二氯苯基)-4-(3-吗啉-4-基氮杂环丁烷-l-基)丁 基]-N-甲基苯甲酰胺，发现其具有功能性的NK2受体拮抗性质。
WO 96/05193、 WO 97/27185和EP 0962457公开了具有速激肽拮 抗剂活性的氮杂环丁烷基烷基内酰胺衍生物。
EP 0790248公开了氮杂环丁烷基烷基氮杂哌啶酮和氮杂环丁烷 基烷基氧杂哌啶酮，作为速激肽拮抗剂。
WO 99/01451和WO 97/25322公开了作为速激肽拮抗剂的氮杂 环丁烷基烷基哌啶衍生物。
EP 0791592公开了具有速激肽拮抗性质的氮杂环丁烷基烷基戊 二酰亚胺。
WO2004/110344 A2公开了双NK1，2拮抗剂及其用途。 本发明的一个目的是提供用于治疗的新神经激肽拮抗剂。另 一 目 的是4是供具有良好平^^的药动和药效性质的新化合物。 发明概述
本发明提供了通式(I)化合物及其药学上和药理学上可接受的盐， 和式I化合物及其盐的对映体。
其中，<formula>formula see original document page 12</formula>其中，
R为C广Ot烷基；环丙基；C广Ct曱氧基烷基；C广Ct乙氧基烷基; C广Ct羟基烷基；四氲呋喃-2-基；四氢呋喃-3-基；四氢吡喃-2-基；四 氢吡喃-3-基；或四氬吡喃-4-基；
或者Het为
Y为C广C3烷基；-CH2-0-CH2-;或-012-012-0-。 在本发明的一个实施方式中，R为C!-C4烷基；d-Ct甲氧基烷基； C广C4乙氧基烷基；Cj-Cj羟基烷基；四氢呋喃-2-基；四氢呋喃-3-基； 四氢吡喃-2-基；四氢吡喃-3-基；或四氢吡喃-4-基。在本发明的另一 实施方式中，R为C!-C3烷基。在另一个实施方式中，R为d-C3烷 基。在另一个实施方式中，R为环丙基。在本发明的另一个实施方式 中，R为C广C2曱氧基烷基。在本发明的另一个实施方式中，R为CVC2 乙氧基烷基。
在本发明的一个实施方式中，Y为CVC3烷基。在另一个实施方 式中，Y为-CH2-0-CH2-。
在本发明的另一个实施方式中，式I化合物为S-对映体。
本发明涉及如上所述的式I化合物及其盐。用于药用组合物的盐 是药学上可接受的盐，但是其它盐可用于生产式I化合物。
本发明化合物能够与各种无机酸和有机酸形成盐，这些盐也在本 发明的范围内。这些酸加成盐的例子包括乙酸盐、己二酸盐、抗坏 血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氬盐、丁酸盐、樟脑酸盐 (camphomte)、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环己基氨基磺酸盐、乙烷磺
其中,酸盐、延胡索酸盐、谷氨酸盐、乙醇酸盐、半硫酸盐、2-羟基乙基磺 酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、羟基马来酸
盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、曱烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、竭酸 盐、草酸盐、棕榈酸盐(palmoate)、过硫酸盐、苯基乙酸盐、磷酸盐、 苦味酸盐、三甲基乙酸盐、丙酸盐、查尼酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、 琥珀酸盐、氨基磺酸盐、磺胺酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐 (对-曱苯磺酸盐)和十一酸盐。
药学上可接受的盐可以用常》见方法由相应的酸制得。非药学上可 接受的盐可用作中间体，这也是本发明的另一个方面。
酸加成盐也可以是聚合盐，例如聚合磺酸盐。
可通过常规方法形成盐，例如通过游离碱态的产品与 一 当量或多 当量的适当酸在盐难溶于其中的溶剂或媒介中反应，或者在例如水的 溶剂中反应，通过真空或冷冻干燥除去溶剂，或者在适当的离子交换 树脂上将现有盐的阴离子交换为另 一种阴离子。
式I化合物具有一个或多个手性中心，应明白的是，本发明包括 所有的光学异构体、对映体和非对映异构体。式(I)化合物的形式可以 是单一的立体异构体，也就是说，单一的对映体(R-对映体或S-对映 体)和/或非对应异构体。式(I)化合物的形式也可以是外消旋混合物， 即，对映体的等摩尔混合物。
化合物可以作为构象异构体的混合物而存在。本发明的化合物包 括构象异构体的混合物和单一的构象异构体。
如本文所用的，术语"CrCt烷基"包括直链和支链的C广Ct烷基， 例如曱基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁 基。
如本文所用的，"d-C4羟基烷基"是含有1至4个碳原子和羟基 的幾基烷基。
如本文所用的，术语"d-C4曱氧基烷基"是包含1至4个碳原子 烷基链和甲氧基的甲氧基烷基。如本文所用的，术语"Q-C4乙氧基烷基，，是包含1至4个碳原子 烷基链和乙氧基的乙氧基烷基。 药物制剂
本发明的一个方面，提供了包含式I化合物(作为游离碱或其药 学上可接受盐的单一对映体、外消旋体或者其混合物)的药物制剂， 用于预防和/或治疗呼吸、心血管、神经、疼痛、肿瘤、发炎和/或胃 肠疾病。
本发明的药用组合物可用对于需治疗病情而言的标准方式来给 予，例如，经由口服、局部、肠胃外、口腔、鼻腔、阴道或直肠给药 或者经由吸入或吹入。为了这些目的，本发明化合物可以用本领域周 知的方法，制成例如片剂、小丸剂、胶嚢剂、水溶液或油溶液、悬浮 液、乳剂、霜剂、膏剂、凝胶剂、喷鼻剂、栓剂、吸入用的细粉或气 溶胶或气雾剂，以及肠胃外使用(包括静脉内、肌内或输液)的无菌水 溶液或油溶液或悬浮液或无菌乳剂。
除了本发明化合物之外，本发明的药用组合物还可包含，或者共 同给予(同时地或依次地)， 一种或多种可治疗这里所述一种或多种病 情的药物。
本发明药用组合物人用式I化合物的日用剂量，通常为0.01至 25毫克/千克体重。或者，式I化合物的日用给予剂量为0.1至5毫克 /千克体重。依照本领域周知的原则，该日用剂量可以根据需要分次 给予，给予化合物的精确量和给药途经取决于受治患者的体重、年龄 和性别以及受治的特定病情。
通常单位剂型包含约1毫克至500毫克的本发明化合物。例如供 口服给药的片剂或胶嚢，可含有多达250毫克(通常为5至100毫克) 的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施例中，对于吸入 给药，式(I)化合物或其药学上可4矣受盐的日给药剂量为5至100毫克， 单一剂量或分成两次至四次日用剂量。在其它实施例中，对于静脉内 或肌内注射或输液给药，可以使用包含至多10。/。w/w(通常为5%w/w) 式(I)化合物或其药学上可接受盐的无菌溶液或悬浮液。医疗和药物用途
本发明提供了治疗或预防病情(其中作用于NK受体的对速激肽 的拮抗作用是有益的)的方法，所述方法包括给予患者有效量的式 (I)化合物或者其药学上可接受的盐。本发明还提供了式(I)化合物或者 其药学上可接受盐在药物制备中的用途，所述药物用于可得益于作用 于NK受体的对速激肽的拮抗作用的病情。
式(I)化合物或者其药学上可接受的盐或溶剂化物可用于生产药 物，所述药物用于预防或治疗呼吸、心血管、神经、疼痛、肿瘤和/ 或胃肠疾病。
这些病患的例子包括哮喘、过敏性鼻炎、肺病、咳嗽、感冒、 发炎、慢性阻塞性肺病、气道反应性疾病、风渗、高血压、风湿性关 节炎、浮肿、血管新生、疼痛、偏头痛、紧张性头痛、精神病、抑郁 症、焦虑、阿尔茨海默症(Alzheimer's disease)、并奇神分裂症、亨廷顿 氏病(Huntington's disease)、膀胱运动过强、尿失禁、饮食疾病、躁狂 抑郁症、药物依赖、运动障碍、认知障碍、肥胖、应激病症、排尿障 碍、躁狂、轻度躁狂和攻击行为、双相障碍、肿瘤、癌、纤维肌痛、 非心源性胸痛、胃肠运动过强、胃哞喘、克罗恩氏病(Crohn'sdisease)、 胃排空障碍、溃疡性结肠炎、肠易激综合症(IBS)、炎性肠病(IBD)、 呕吐、胃哮喘、胃动力疾病、胃食管反流病(GERD)或功能性消化不 良。
药理学
用于FLIPR和结合分析的细胞转染和培养
用人NK2受体(在pRc/CMV中的hNK2R cDNA, Invitrogen)或人 NK3受体(在pcDNA 3.1/Hygro (+)/IRES/CD8中的hNK3R, Invitrogen 载体，经AstraZeneca EST-Bio UK, Alderley Park改良(Invitrogen vector modified at AstraZeneca EST-Bio UK, Alderley Park))稳定转染中国仓 鼠卵巢(CH0)K1细胞(来自 ATCC)。用阳离子液体试剂 LIPOFECTAMINETM (Invitrogen)转染细胞，用1毫克/毫升Geneticin (G418, Invitrogen)挑选hNK2R转染的细胞，用500微克/毫升Hygromycin (Invitrogen)挑选hNK3R转染的细胞。借助于荧光活化细 胞分选仪(FACS)来收集单个细胞克隆，测试其在FLIPR分析(见下) 中的功能性，在培养基中扩增，冻存起来供以后使用。用人NK!受 体稳定转染的CHO细胞来自AstraZeneca R&D, Wilmington USA。将 人NK!受体cDNA(得自肺组织的RNA-PCR)亚克隆至pRcCMV (Invitrogen)。用磷酸钓进行转染，用1毫克/毫升G418进行挑选。
用hNK!R、 hNK2R和hNK3R稳定转染的CHO细胞，在加湿培 养箱中5%C02T，在含Glutamax 1、 10%胎牛血清(FBS)、 1%青 霉素/链霉素(PEST)的Nut Mix F12 (HAM)中进行培养，对于hNK!R 和hNK2R表达细胞补充有200《鼓克/毫升的Geneticin,对于hNK3R 表达细胞补充有500微克/毫升的Hygromycin。细胞在T175烧瓶中 培养，在70至80。/。铺满时常规传代至20至25代。
评估所选试验化合物抑制人Niq/NK^/NKL受体活化的活性 (FLIPR分析)
用以下方法来评估本发明化合物抑制NK!/NK2/NK3受体活化的 活性(测量结果为细胞内CaZ Ki/NK2/NK3受体介导的增加)
将用人NId、 NKz或NK3受体稳定转染的CHO细胞注入黑壁/ 透明底的96孔平板(Costar 3904)，每孔3.5x104细胞，在37。C的C02 培养箱中的标准生长培养基里培养大约24小时。在FLIPR分析之前， 向各96孔平板细胞中加入Ca2+敏感性染料Fluo-3 (TEFLABS 0116)， 其在加栽培养基中浓度为4)LiM，加载培养基由Nut Mix F 12 (HAM) 及Glutamax I, 22mM HEPES, 2.5mM Probenicid (Sigma P-8761)和 0.04。/。PluronicF-127(SigmaP-2443)组成，在37。C的(302培养箱中暗 处保存1小时。然后用多管道吸管在分析緩冲液(Hanks平衡的盐溶液 (HBSS):包含20mM HEPES、 2.5mM丙磺舒Probenicid和0.1% BSA) 中将细胞洗涤三次，在最后洗涤结束时留下150微升。试验化合物在 检测緩冲液中的系列稀释液(最终的DMSO浓度保持在1 %以下)，用 FLIPR(荧光成像平板读数器)自动吸取至每个试验孔中，用FLIPR CCD照相机记录2分钟预培养期的荧光强度(激发光488nm，发射光530nm)。然后用FLIPR向已含200微升分析緩冲液(含有试验化合物 或载体)的每个孔中加入50微升物质P(NKi特异性)、NKA (NK2特异 性)或Pro-7-NKB (NK3特异性)激动剂溶液(最终浓度相当于大约EC60 浓度)，再连续检测荧光2分钟。测定的响应为激动剂加入后的峰值 相对荧光，从每种化合物10个点的浓度-响应曲线计算ICs。。然后用 下式将IC5o转化为pKB值
KB = IC50/1+ (用于分析的激动剂EC6o浓度/EC5Q激动剂)
pKB = -log KB
测定化合物对人NK,/NKyNK3受体的解离常数qa)(结合分析)
依照下面方法，由人NK、NK2或NK3受体稳定转染的CHO细 胞来制备膜
细胞用Accutase⑧溶液分离，通过离心收集在含5 % FBS的PBS 中，在PBS中洗涤两次，并以lx108细胞/毫升的浓度重新悬浮于 Tris-HCl 50 mM、 KC1 300 mM、 EDTA-N2 10 mM pH 7.4 (4。C)中。细 胞悬浮液用Ultra Turmx以12.000转/分钟(rpm)均匀化30秒。以 38.000xg离心均匀混合物(4。C)，并将颗粒重新悬浮于Tris-HC1(50 mM: pH7.4)中。重复一次均匀化，将均匀混合物在水上培养45分钟。再 次如上所述将均匀混合物离心，并重新悬浮于Tris-HC1(50 mM, pH 7.4)中。该离心步骤总共重复三次。最后一次离心步骤之后，将颗粒 重新悬浮于Tris-HC1(50 mM)中，并用Dual Potter, 10strokes均匀化 形成均匀溶液，取部分供蛋白质测定。将膜等分，于-8(TC冷冻至使 用。
在培养緩沖液(含有O.l %BSA、 40毫克/升枯草杆菌抗生素、完 全的不含EDTA的蛋白酶抑制剂鸡尾酒片20片/升(Roche)和3mM MnCl2的50 mM Tris緩沖液(pH 7.4 RT))中，以200微升/孔的最终分 析体积，在96孔微量滴定板(非结合表面平板，Corning 3600)中，于 室温下，进行进行放射配基结合分析。通过加入递增量的试验化合物， 绘制竟争结合曲线。将试验化合物溶解并连续稀释于DMSO中，分 析中DMSO的终浓度为1.5 % 。加入50微升无标记的ZD 6021(非选择性NK拮抗剂，终浓度为10pM)来测定非特异性结合。对于总的结 合，使用50微升的1.5。/。DMS0(终浓度)/培养緩冲液。在对hNK,r的 结合实验中，使用卩H-Sar, Met(02)-物质P](终浓度为4nM)。在对 hNK2r的结合实验中，使用[3H-SR48968](终浓度为3nM)。在对hNK3r 的结合实验中使用卩H-SR142801](终浓度为3nM)。将50微升放射配 基、3微升稀释于DMSO中的实验化合物和47微升培养緩沖液，与 5至10微克细胞膜在100微升i咅养緩冲液中混合，于室温在微板振 荡器上培养30分钟。
然后通过在Filtermat B(Wallac)上快速过滤来收集膜(0.1。/。 BSA 和0.3。/。聚乙蹄亚胺(Sigma P-3143)中预浸)，使用Micro 96收集器 (Harvester) (Skatron Instruments,挪威)进行。通过收集器(Harvester) 用冰冷的洗涤緩冲液(含3mM MnCl2的50mM Tris-HCl, 4。C时pH为 7.4)来洗涤过滤器，并在5(TC干燥30至60分钟。用微密封器 (Microsealer) (Wallac,芬兰)将Meltilex闪烁片(scintillator sheet)融在 过滤器上，在(3-液体闪烁计数器(1450 Microbeta, Wallac,芬兰)上对 过滤器计数。
用Cheng画Pmsoff等式(Biochem. Pharmacol. 22:3099-3108, 1973) 计算未标记配基的Ki值其中L为所用放射活性配基的浓度，IQ为 放射活性配基对受体的亲和力(通过饱和结合测定)。
使用Excel Fit将数据拟合四参数等式
Ki = IC50/(l+(L/Kd》
结果
总体而言，所测试的本发明化合物，证明在pKB8至9范围内对 NKi受体有统计学上显著的拮抗活性。对NK2受体，该pKB范围为7 至9。总体上，对NK3受体的拮抗活性在pKB7至9范围。
总体上，所测试的本发明化合物，证明在低浓度下有统计学上显 著的CYP3A4抑制作用。依照Bapiro等；Drug Metab. Dispos. 29， 30-35 (2001)测定的ICso值总体大于15 ^M。
对hERG的活性式I化合物对hERG编码的钾通道的活性测定，可依照Kiss L等 人Assay Drug Dev Technol. 1 (2003), 127隱35:"High throughput ion-channel pharmacology: planar-array-based voltage clamp(高通量离 子通道药理学基于平面阵列的电压夹)"。
总体上，所测试的本发明化合物，证明在低浓度下具有统计学上 显著的hERG活性。如上所述，测定的ICM)值总体上大于10 iliM。
代谢稳定性
式I化合物的代谢稳定性测定如下
生物转化的速度，可以测定为代谢物的形成速率或者母体化合物 的消失速率。实验设计包括用肝银支粒体(通常0.5毫克/毫升)培养低浓 度底物(通常l.O pM)，在不同时间点(通常0、 5、 10、 15、 20、 30、 40分钟)取出部分。试验化合物通常溶于DMSO中。培养混合物中 DMSO浓度通常为0.1%或更少，因为更多溶剂会大大降低某些 CYP450的活性。在lOOmM磷酸钾緩沖液中进行培养(pH为7.4， 37°C)。用乙腈或曱醇来终止反应。用HPLC-MS分析母体化合物。
考虑微粒体蛋白浓度和肝重，由计算的半衰期(t,/2)来估计内在清除率
Clint 。
总体而言，本发明化合物在高浓度时具有体外代谢稳定性，如上 检测的内在清除率值，通常低于40微升/分钟/毫克蛋白。 下表说明本发明化合物的性质
3曙溴-N-((2S)-2-(4-氟苯基)-4-(3-[(8aR)-6-氧代六氢p比咯并卩,2國a] p比噪-2(1H)-基]氮杂环丁烷-1-基} 丁基)-N-甲基-5-(三氟甲基)苯曱酰胺 二盐酸盐(实施例1)
<formula>formula see original document page 19</formula>
生物学评估
沙鼠脚踏(foottap)(NKl特异性实验模型)雄性Mongolian沙鼠(60至80克)购自Charles River，德国。 一到， 就将它们IO只一组，随意供给食物和水，养在温湿度控制的储存室 里。实验之前至少留7天让动物适应居住条件。每只动物只能使用一 次，实验之后立即通过心脏穿刺或服用致死过量戊巴比妥钠处死。
沙鼠用异氟烷麻醉。可能的CNS可渗透NK1受体拮抗剂，经腹 膜内、静脉内或皮下给予。用激动剂刺激之前，在各时间点(通常30 至120分钟)给予化合物。
用异氟烷使沙鼠轻微麻醉，在前自上的皮肤作一小切口。使用带 4毫米长针的Hamilton注射器，icv给予5微升lOpmol的ASMSP(选 择性的NK1受体激动剂)。夹住伤口，将动物放在小的塑料笼中，让 其醒过来。将笼子放在充满水的塑料管道上，该管道经由压力传感器 与电脑相连。记录后脚踏数(number of hind feet taps)。
粪粒产量(NK2特异性实验4莫型)
式I化合物的体内效果(NK2)，可如The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics (2001), pp. 559-564所述，使用沙鼠，通 过测量NK2受体激动剂导致的沙鼠粪粒产量来确定。
结肠直肠扩张模型
对沙鼠进行结肠直肠扩张(CRD)试验，如前对大鼠和小鼠的描述 (Tammpere A, Brusberg M, Axenborg J, Hirsch I, Larsson H, Lindstr6m E. Evaluation of pseudo-affective responses to noxious colorectal distension in rats by manometric recordings(通过压力计记录来评估大 鼠对有毒结肠直肠扩张的假情感反应).Pain 2005; 116: 220-226; Arvidsson S, Larsson M, Larsson H, Lindstrom E, Martinez V. Assessment of visceral pain-related pseudo-affective responses to colorectal distension in mice by intracolonic manometric recordings(通过 结肠内压力计记录来评估小鼠对结肠直肠扩张的内脏疼痛相关假情 感的反应).J Pain 2006; 7: 108-118)，稍作修改。筒而言之，实验之前 让沙鼠每天适应Bollmann笼30至60分钟，连续三天，以降低由于 约束应力的运动假象。在轻微异氟烷(Forene， Abbott Scandinavia AB， Solna,瑞典)麻醉期间，将具有连接导管的2厘米聚乙烯气i求(自制)插入远端结肠，气球底部距离肛门2厘米。用胶带将导管固定在尾巴 上。使气球与压力传感器(P-602, CFM-k33, 100 mmHg, Bronkhorst HI-TEC, Veenendal,荷兰)相连。实验开始前至少15分钟，让沙鼠在 Bollma皿笼子中从镇静状态恢复。
用定制恒压器(AstraZeneca， M6lndal，瑞典)来操纵充气和气球压 力控制。使用标准计算机上运行的定制计算机软件(PharmLab on-line 4.0)来控制恒压器并收集数据。所用的扩张范例包括80mmHg 12次重 复的阶段性扩张(phasic distension)。脉沖持续时间为每隔5分钟30秒。 在CRD范例之前腹膜内(i.p.)注射给予化合物或其各自的载体。每只 沙鼠在不同时候接受载体和化合物(试验之间至少相隔两天)。因此， 每只沙鼠作为其自身的载体对照。
用单独的釆样速率对模拟输入通道进行采样，对信号进行数字滤 波。以50个样品/秒的速率，对气球压力信号进行采样。使用1Hz高 通量滤波器，分离收缩导致的压力变化与恒压器产生的慢变化压力。 压力发生器和压力传感器之间的气流阻力进一步增强了动物腹部收 缩所产生的压力变化。使用定制计算机软件(PharmLab off-line 4.0)来 确定高通量过滤的气球压力信号大小。计算脉冲前30秒(即，基线响 应)和脉沖期间的高通量过滤的气球压力信号的平均整流值(ARV)。在 计算高通量过滤的气球压力信号大小时，每次脉沖第一秒和最后一秒 的信号不计，因为这些反映的是充气和放气期间恒压器产生的假信 号，而不是来自动物的信号。
制备方法
在另一方面，本发明提供了制备式(I)化合物或其盐的方法，所述 方法包括
a)式(III)化合物与式(IV)化合物反应<formula>formula see original document page 22</formula><formula>formula see original document page 23</formula>其中Het如前所述；L'是离去基； 其中，如有必要，任何其它官能团被保护，并
i) 除去任何保护基；
ii) 任选形成药学上可接受的盐。
保护基通常选自文献上或熟练化学家周知的适用于保护所述基 团的任何基团，可通过常规方法《I入或除去；例如见Protecting Groups in Organic Chemistry (有机化学中的保护基)；Theodora W. Greene 。选 择除去方法，以便在除去保护基的同时对分子中其它基团的影响最 小。
式(m)和(iv)化合物在还原性烷基化条件下进行反应。反应通常 在非极端温度下(例如o至40°C),在基本惰性的溶剂中(例如二氯甲 烷)进行。典型的还原剂包括硼氢化物(例如氰基硼氬化钠)。
式(ni)和(v)化合物在烷基化条件下进行反应。通常在式(v)化合 物中L是离去基，例如卣素或烷基磺酰氧基。反应通常在升高的温度
(例如30至130。C)下，在基本惰性的溶剂(例如DMF)中进行。
式(in)化合物为已知的，或者可以用常规方法来制备。式(iv)化 合物的制备方法例如，式(vii)化合物与式(vm)化合物在常规酰化条
件下进行反应<formula>formula see original document page 23</formula>
式(v)化合物的制备方法例如，式(vii)化合物与式(ix)化合物在常 规酰化条件下反应一H
OX)
其中L为前所述,
,其中
是酸或活化的酸衍生物。这种活化的酸衍生物是文献中周知的。 它们可以由酸原位形成，或者经制备、分离随后反应。通常L'是氯， 以形成酰基氯。酰化反应通常于非极限温度下，在非亲核石咸(例如N,N-二异丙基乙胺)存在下，在基本惰性溶剂(例如二氯曱烷)中进行。
式(VIII)化合物和式(IX)化合物是已知的，或者可用常规方法制备。
实施例 工作实施例
应强调的是，由于构象异构体的存在，本发明化合物的NMR光 语通常非常复杂。认为这是由于围绕酰胺键和/或芳基键緩慢旋转的 结果。以下缩写用于化合物NMR数据的表达s-单峰；d-双峰；t-三峰；qt-四峰；qn-五峰；m-多峰；b-宽的；cm-复杂多峰(可包括宽 峰)。
以下实施例将描述Cf旦不限制)本发明。
以下缩写用于实验中Boc(叔丁氧基羰基)，DIPEA(N,N-二异丙 基乙胺)，DMF(N,N-二曱基曱酰胺)，TBTU(N,N,N',N'-四曱基-O-(苯 并三唑-l-基)脲四氟硼酸盐)，THF(四氢呋喃)，IPA(2-丙醇)和RT(室温)。实施例1
3-溴-N-"2SV2-(4-氟苯基V4-U4(8aRV6-氧代六氢吡咯并『l,2-al 吡嗪-2(1 H)-基l氮杂环丁烷-1 -基} 丁基VN-曱基-5 三氟甲基)苯曱酰胺
二盐酸盐
向3-溴-N-[(2S)-2-(4-氟苯基)-4-氧代丁基]-N-甲基-5-(三氟曱基) 苯曱酰胺(见方法3; 106毫克，0.24毫摩尔)和(8aR)-2-氮杂环丁烷-3-基六氢吡咯并[l,2-a]吡溱-6(2H)-酮(见方法 1; 35毫克，0.18毫摩尔) 的甲醇(7毫升)溶液中，加入氰基硼氢化钠(73毫克，1.2毫摩尔)、氯 化锌(77毫克，0.56毫摩尔)在少量曱醇中的混合物。室温下搅拌反应 混合物15分钟，然后蒸发除去〖容剂。残余物在乙酸乙酯和NaHC03 水溶液之间分配，然后分离水溶液，再用乙酸乙酯萃取一次。蒸发除 去溶剂。用乙腈和0.1M乙酸铵水溶液的混合物通过反相色谱法来纯 化产物。将适当的部分合并，旋转蒸发浓缩。水性残余物用乙酸乙酯 萃取，有机溶液经MgS04干燥。蒸发除去溶剂后将残余物溶于少量 水中。加入几滴稀盐酸，冷冻干燥除去溶剂。获得白色粉末的标题化 合物68毫克(54%)。 NMR (500 MHz, CDC13): 1.7-4.8 (cm, 26H), 7.0-8.0 (cm, 7H); LCMS: m/z 626 (M+l)+。
实施例2
3-溴-N-(T2SV2-(4-氟苯基V4"3-『(8aSV6-氡代六氢吡咯并l"l,2-al 吡嗪-2nHV基l氮杂环丁烷-l-基i丁基VN-甲基-5-(三氟曱基)苯曱酰胺 二盐酸盐<formula>formula see original document page 26</formula>通过使用实施例1中所述同样的还原性烷基化方案来制备标题
化合物，但是使用(8aR)-2-氮杂环丁烷-3-基六氢吡咯并[1,2-a]吡溱 誦6(2H)-酮(见方法2)作为胺(产率，37%)。 & NMR (500 MHz, CDC13): 1.7-4.9 (cm, 26H)， 7.0-8.0 (cm, 7H); LCMS: m/z 626 (M+l)+。
3-溴-N"(2SV2-f4-氟苯基V443-(6-氡代八氢-2H-吡啶并[l,2-al吡 嗪-2-基)氮杂环丁烷-l-基l丁基卜N-曱基-5-(三氟曱基)苯曱酰胺二盐
酸盐<formula>formula see original document page 26</formula>向3-溴-N-[(2S)-2-(4-氟苯基)-4-氧代丁基]-N-甲基-5-(三氟曱基) 苯曱酰胺(见方法3; 100毫克，0.22毫摩尔)和2-氮杂环丁烷-3-基八 氪-6H-吡啶并[l,2-a]吡溱-6-酮(见方法4; 58毫克，0.28毫摩尔)的二 氯曱烷(3毫升)溶液中，加入DIPEA(116毫克，0.90毫摩尔)和三乙酰 氧基硼氢化钠(66毫克，0.31毫摩尔)。氮气下于室温搅拌反应混合物 2小时。溶液用NaHC03水溶液洗涤两次，有机溶剂经相分离柱干燥。 蒸发除去溶剂，产物经硅胶色谱法(氨饱和的曱醇-二氯曱烷1 %至10 %)纯化。将恰当的部分合并，i走转蒸发浓缩，然后将残余物溶于少 量乙腈/水中。加入几滴稀盐酸，冷冻干燥除去水。获得白色固体的 标题化合物114毫克(70%)。 }H NMR (500固z, CDC13): 1.4-3.8 (cm, 27H), 4.6 (d, 1H), 6.8-7.4 (cm, 6H), 7.7 (s, 1H); LCMS: m/z 640 (M+l)+。
实施例3实施例4
3隱溴-N-(T2SV2-(4-氟苯基V4"3-〖(9aR或9aS)-6-氧代八氬-2H-吡 啶并U.2-al吡嗪-2-基l氮杂环丁烷-l-基l丁基VN-曱基-5-f三氟曱基)苯
甲酰胺<formula>formula see original document page 27</formula>
向3-溴-N-[(2S)-2-(4-氟苯基)-4-氧代丁基]-N-甲基-5-(三氟甲基) 苯曱酰胺(见方法3; 267毫克，0.30毫摩尔)和方法5中所述2-氮杂 环丁烷-3-基八氢-6H-吡啶并[l,2-a]吡溱-6-酮的对映体之一(74毫克， 0.35毫摩尔)的二氯曱烷(3毫升)溶液中，加入DIPEA(150毫克，1.15 毫摩尔)和三乙酰氧基硼氢化钠(86毫克，0.41毫摩尔)。在氮气下室 温搅拌反应混合物2.5小时。溶液用NaHC03水溶液洗涤两次，有机 溶剂经相分离柱干燥。蒸发除去溶剂，产物经硅胶色谱法(氨饱和的 甲醇-二氯曱烷1%至10%)纯化。将恰当的部分合并，蒸发除去溶剂。 获得白色泡沫的标题化合物133毫克(68%)。 ^ NMR (400 MHz, CDC13): 1.2-3.8 (cm, 27H), 4.6 (d, 1H), 6.7-7.4 (cm, 6H)， 7.7 (s, 1H); LCMS:m/z640 (M+l)+。
3-溴-N-(T2S)-2-(4-氟苯基)-4-(3-f(9aR或9aS)-6-氧代八氢-2H-吡 啶并『1.2-a1吡嗪-2-基l氮杂环丁烷-1-基} 丁基VN-曱基-5-(三氟甲基)苯 曱酰胺
实施例5通过使用实施例4中所述同样的还原性烷基化方案来制备标题 化合物，但是使用方法6中所迷2-氮杂环丁烷-3-基八氬-6H-吡啶并 [1,2-a]吡嗪-6-酮的相反对映体作为胺(产率，67 % )。 ]H NMR (400 MHz: CDC13): 1.2-3.8 (cm, 27H), 4.5-4.6 (d, 1H), 6.7-7.4 (cm, 6H), 7.7 (s, 1H); LCMS: m/z640 (M+l)+。
3-溴-N-R2SV2"4-氟苯基)-4-『3-(4-乙酰基哌嗪-l-基)氮杂环丁烷 -1 -基l丁基卜N-曱基-5-f三氟甲基)苯曱酰胺
将3-溴-N-[(2S)-2-(4-氟苯基)-4-氧代丁基]-N-甲基-5-(三氟甲基) 苯曱酰胺(见方法3; 11.2克，25毫摩尔)溶于甲醇(50毫升)和三乙胺 (3.5毫升，25毫摩尔)中。将溶液和另一部分三乙胺(3.5毫升，25毫 摩尔)一起转移至装有l-乙酰基-4-氮杂环丁烷-3-基哌溱二盐酸盐的烧 瓶中(见WO 96/05193; 8.4克，32.6毫摩尔)。室温搅拌混合物45分钟， 然后用1小时分次加入三乙酰lL基硼氢化钠(8.0克，37.6毫摩尔)。 室温搅拌反应混合物45分钟。加入水(0.45毫升)，然后蒸发除去大 部分溶剂。将残余物溶于曱苯(56毫升)中，然后在加热至40。C的同 时，加入10%NaOH水溶液(55毫升)。在45。C剧烈搅拌该混合物5 分钟。分离除去水层，有机溶液留在通风橱中过夜。在尝试几次从不
实施例6同溶剂中使产物结晶之后，经硅胶色谱法纯化化合物(氨饱和的甲醇-二氯曱烷l%至10%)。 获得白色泡沫的标题化合物8.3克(54%)。H NMR (500 MHz, CDC13): 1.4-1.8 (cm, 2H), 2.0 (s, 3H), 2.1-3.8 (cm, 21H)， 6.8-7.4 (cm, 6H), 7.7 (s， 1H); LCMS: m/z 614 (M+l)+。 实施例7
3-澳-N-K2SV2-(4-氟苯基V4-『3-(4-丙酰基哌嗪-l-基)氮杂环丁烷 -1 -基l 丁基卜N-曱基-5一三氟曱基)苯甲酰胺二盐酸盐
F
将3-溴->1-[(28)-2-(4-氟苯基M-氧代丁基]-N-曱基-5-(三氟甲基) 苯甲酰胺(见方法3; 165毫克，0.4毫摩尔)和1-氮杂环丁烷-3-基-4-丙酰基哌唪(见方法7; 80毫克，0.41毫摩尔)溶于二氯曱烷(IO毫升) 和少量无水曱醇(0.2毫升)中。加入三乙酰氧基硼氢化钠(157毫克， 0.74毫摩尔)和DIPEA(143毫克，1.11毫摩尔)。室温搅拌反应混合物 2.5小时，然后用二氯甲烷稀释。溶液用NaHC03水溶液洗涤两次， 然后用盐水洗涤两次。通过相分离柱分离有机相后，蒸发除去溶剂。 产物经硅胶色谱法纯化(甲醇-二氯曱烷5:95)。将油状产物溶于2M的 盐酸中，然后冷冻干燥除去溶剂。获得白色固体的标题化合物120毫 克(48%)。 'H NMR (500 MHz， CDC13): 1.2-3.8 (cm, 28H), 6.8-7.8 (cm, 7H); LCMS: m/z 628 (M+l)+。
实施例8
3-溴-N-K2SV2-(4-氟苯基V443-(4-氡代六氢吡嗪并『2,l-cin,41噁 嗪-8nH)-基〗氮杂环丁烷-l-基l丁基卜N-甲基-5-(三氟甲基)苯曱酰胺<formula>formula see original document page 30</formula>
F
将8-氮杂环丁烷-3-基六氢吡嗪并[2,l-c][l,4]嗯嗪-4(3H)-酮盐酸 盐(见方法8; 43毫克，0.17毫摩尔)溶于甲醇(3毫升)和几滴水与乙酸 (0.2毫升)中。向前面溶液中加入3-溴-N-[(2S)-2(4-氟苯基)-4-氧代丁 基]-N-曱基-5-(三氟甲基)苯曱酰胺(见方法3; 80毫克，0.18毫摩尔) 的曱醇(l毫升)溶液和(聚苯乙烯基甲基)-三甲基铵氰基硼氢化物(4.2 毫摩尔/克，47毫克，0.25毫摩尔)。用微波单节加热将反应混合物于 120。C加热5分钟。过滤除去树脂，并用甲醇洗涤。蒸发浓缩滤出液。 用反相色语法纯化产物(乙腈-0.1M曱酸铵和0.1M甲酸的水溶液，10 %至50%)。蒸发后冷冻干燥，除去收集部分的溶剂。残余物在二氯 曱烷和NaHC03水溶液之间分配。通过相分离柱分离两相，然后蒸发 除去有机溶液的溶剂。得到标题化合物50毫克(44%)。 'HNMR(500 MHz, CD3OD): 1.5-1.7 (b, IH), 1.7-2.0 (cm, 3H), 2.2-4.2 (cm, 21H), 4.5 (d, 1H), 7.0-7.6 (cm， 6H), 7.9 (d, 1H); LCMS: m/z 642 (M+l)+。
实施例9
3-溴-N-(T2SV2-(4-氟苯基)-44344-f四氢呋喃-2-基羰基)哌嗪-l-基l 氣杂环丁烷-1 -基} 丁基VN-曱基-5 -(三氟曱基)苯甲酰胺
<formula>formula see original document page 30</formula>
使用实施例8所述同样的还原性烷基化方案来制备标题化合物， 但是使用l-氮杂环丁烷-3-基-4-(四氢呋喃-2-基羰基)哌溱(见方法9)作为胺(产率，60%)。 ，H NMR (500 MHz, CD3OD): 1.5-4.9 (cm， 30H), 7.0-8.0 (cm, 7H); LCMS: m/z 670 (M+l)+。 实施例10
3"fN-((2SV2-r4-氟苯基)-4-D-『4-(甲氧基乙酰基)哌嗪-l-基l氮 杂环丁烷-l-基l 丁基)-N-曱基-5-(三氟甲基)苯曱酰胺
F
使用实施例8所述同样的还原性烷基化方案来制备标题化合物， 但是使用l-氮杂环丁烷-3-基-4-(甲氧基乙酰基)哌溱(见方法IO)作为 胺(产率，68%)。 'HNMR(500顧z, CD3OD): 1,5-1.9 (cm, 2H), 2.2-3.6 (cm, 22H)， 3.7 (m, 1H)， 3.9 (t， 1H), 4.2 (s, 2H), 7.0 (d, 2H), 7.1 (t, 1H), 7.2- 7.3 (d, 1H), 7.3-7.6 (m, 2H), 7.9 (d, 1H); LCMS: m/z 644 (M+l)+。
实施例11
3-溴-N- V2-(4-氟苯基V4-3-(4-乙醇酰基哌嗪-1 -基)氮杂环丁 烷-l-基l丁基卜N-曱基-5一三氟曱基)苯曱酰胺
F
使用实施例8所述同样的还原性烷基化方案来制备标题化合物， 但是使用2-(4-氮杂环丁烷-3-基哌溱小基)-2-氧代乙醇(见方法ll)作 为胺(产率，50%)。 'HNMR (500 MHz, CD3OD): 1.6-1.9 (cm, 2H),2.2-3.6 (cm, 19H), 3.7 (m, 1H)， 3.9 (m, IH), 4.2 (s, 2H), 7.0 -7.6 (m， 6H), 7.9 (d， IH); LCMS: m/z 630 (M+l)+。 实施例12
3-溴-N-K2SV2"4-氟苯基V4-D-『(9aSV4-氧代六氢吡嗪并 『2、l-cl『l,41噁嗪-8nHV基l氮杂环丁烷-l-基i丁基VN-曱基-5"三氟甲
基)苯曱酰胺
向3-溴-N-[(2S)-2-(4-氟苯基)-4-氧代丁基]-N-曱基-5-(三氟曱基) 苯曱酰胺(方法3; 100毫克，0.22毫摩尔)和(9aS)-8-氮杂环丁烷-3-基 六氢吡。秦并[2,l-c][l,4]嚼溱-4(3H)-酮(见方法12;约0.20毫摩尔)的乙 醇(20毫升)溶液中，加入氰基硼氢化钠(125毫克，2.0毫摩尔)和氯化 锌(135毫克，0.99毫摩尔)的曱醇(IO毫升)溶液。室温搅拌反应混合 物10分钟，然后蒸发除去溶剂。残余物在乙酸乙酯(50毫升)和水(20 毫升)中分配。有机溶液用盐水洗涤，然后经Na2S04干燥。蒸发除去 溶剂，将残余物溶于乙腈(IO毫升)、乙酸(IOO毫克)和水(20毫升)的 混合物中。用乙腈和0.1M乙酸4妄水溶液的混合物通过反相色谱法来 纯化产物。将适当的部分合并，旋转蒸发浓缩。水性残余物用乙酸乙 酯萃取，有机溶液经Na2S04干燥。蒸发除去溶剂。获得标题化合物 80毫克(55 %)。 ！HNMR (400 MHz, CDC13): 0.9-3.8 (cm, 21.5H), 3.9 (d, 1H), 4.1-4.2 (qt, 2H), 4.4 (b, 0.5H), 4.5-4.6 (d, 1H), 6.6-7.5 (cm, 6H), 7.8 (s, IH); LCMS: m/z 642 (M+l)+。
实施例13
3-溴-N-(T2SV2"4-氟苯基V4"34(9aRV4-氣代六氢吡嗪并 『2,l-cl「l,41噁嗪-8nHV基l氮杂环丁烷-l-基i丁基)-N-曱基-5-(三氟甲
基)苯曱酰胺使用实施例12所述同样的还原性烷基化方案来制备标题化合 物，但是使用(9aR)-8-氮杂环丁烷-3-基六氢-吡嗪并[2,l-c][l,4]嗯嗪 -4(3H)-酮(见方法13)作为胺(产率，40%)。 ，H NMR (400 MHz, CDC13): 0.9-3.8 (cm, 21.7H), 3.9 (dd, 1H)， 4.0-4.2 (qt, 2H), 4.3-4.4 (b, 0.3H), 4.5-4.6 (d, 1H), 6.8-7.4 (cm, 6H), 7.7 (s, 1H); LCMS: m/z 642 (M+l)+。
实施例14
3-溴—N-『(7S)-443-『4-(环丙基羰基)哌嗪-l-基l氮杂环丁烷-l-基}_2-(4-氟苯基)丁基l-N-甲基-5-(三氟曱基)苯曱酰胺二盐酸盐
向3-溴-N-[(2S)-2-(4-氟苯基)-4-氧代丁基]-N-曱基-5-(三氟甲基) 苯甲酰胺(方法3; 450毫克，1.0毫摩尔)和l-氮杂环丁烷-3-基-4-(环 丙基羰基)哌嗪(见方法14;约0.9毫摩尔)的甲醇(50毫升)溶液中，加 入氰基硼氢化钠(250毫克，4.0毫摩尔)和氯化锌(270毫克，2.0毫摩 尔)的甲醇(30毫升)溶液。室温4觉拌反应混合物15分钟，然后蒸发除 去溶剂。残余物在乙酸乙酯(50毫升)和水(20毫升)中分配。有机溶液 用盐水洗涤，然后经Na2S04干燥。蒸发除去溶剂，将残余物溶于乙 酸乙酯中。通过硅胶色谱法来纯化产物，先用乙酸乙酯洗脱，然后用 乙酸乙酯、甲醇和三乙胺的(9:1:1)混合物洗脱。将适当的部分合并， 旋转蒸发浓缩，然后残余物用二氯曱烷共蒸发两次。将残余物溶于二氯甲烷中，向该溶液中加入HCl饱和的二乙醚(l毫升)。蒸发除去溶 剂，然后残余物与二氯曱烷共蒸发两次。获得标题化合物220毫克(30 %)。 & NMR (400 MHz, CDC13): 0.8-1.0 (cm, 4H)， 1.2-4.7 (cm, 24H), 6.9-8.0 (cm， 7H): m/z 640 (M+l)+。 实施例15
3-溴-N-『(2S)-4-『3"4-丁酰基哌嗪-l-基)氮杂环丁烷-l-基l-2-(4-氟 苯基)丁基l-N-曱基-5-(三氟曱基)苯曱酰胺二盐酸盐
向3Ji-N-[(2S)-2-(4-氟苯基)-4-氧代丁基]-N-甲基-5-(三氟曱基) 苯曱酰胺(方法3; 450毫克，1.0毫摩尔)和l-氮杂环丁烷-3-基-4-(环 丙基要 )哌嗪(见方法15;约0.9毫摩尔)的甲醇(50毫升)溶液中，加 入氰基硼氢化钠(250毫克，4.0毫摩尔)和氯化锌(270毫克，2.0毫摩 尔)的甲醇(30毫升)溶液。室温搅拌反应混合物15分钟，然后蒸发除 去溶剂。残余物在乙酸乙酯(50毫升)和水(20毫升)中分配。有机溶液 用盐水洗涤，然后经Na2S04千燥。蒸发除去溶剂，将残余物溶于乙 酸乙酯中。通过硅胶色谱法来纯化产物，先用乙酸乙酯洗脱，然后用 乙酸乙酯、曱醇和三乙胺的(9:1:1)混合物洗脱。将适当的部分合并， 旋转蒸发浓缩，然后残余物用二氯甲烷共蒸发两次。将残余物溶于二 氯甲烷中，向该溶液中加入HCl饱和的二乙醚(l毫升)。蒸发除去溶 剂，然后残余物与二氯曱烷共蒸发两次。获得标题化合物220毫克(30 %)。 & NMR (400 MHz, CD3OD): 0.8-1.0 (t， 3H), 1.5-1.6 (qt, 2H), 1.8-2.2 (cm, 3H), 2.4 (t, 2H)， 2.6-4.6 (cm， 20H), 7.0-7.6 (cm, 6H), 7.9 (d, 1H); LCMS: m/z 642 (M+l)+。
实施例163"^N4(2S)-2-(4-氟苯基)-4-『3-(4-异丁酰基哌嗪小基)氮杂环丁 烷-1 -基l 丁基VN-曱基-5-(三氟甲基)苯曱酰胺二盐酸盐oF使用实施例15所述同样的还原性烷基化方案来制备标题化合 物，但是使用l-氮杂环丁烷-3-基-4-异丁酰基哌。秦(见方法16)作为胺 (产率，29%)。 ^ NMR (400 MHz, CD3OD): 1.1 (d, 6H), 1.8-2.2 (cm, 3H), 2.6-4.6 (cm, 21H), 6.8-7.6 (cm, 6H), 7.9 (d, 1H); LCMS: m/z 642 (M+l)+。起始物料的制备上述实施例的起始物料，或者外购，或者使用标准方法由已知材 料而容易制得。例如，以下反应是一些起始物料的例子(而非限制)。 方法1(8aR)-2-氮杂环丁烷-3-基六氢吡咯并『U-al吡嗪-6(2H)-酮(a) (SaR)-2-[l-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-!3-基]六氢吡咯并[l,2-a〗 吡唤-6(2H)-酮将(8aR)-六氢吡咯并[l,2-a]吡溱-6(2H)-酮(见WO 03/066635; 0.17 克，1.2毫摩尔)、l-(二苯基曱基)氮杂环丁烷-3-基曱烷磺酸酯(见J. Org. Chem.; 56; 1991; 6729; 0.40克,1.3毫摩尔)和三乙胺(0.20毫升，1.4毫 摩尔)溶于乙腈中。用微波单节加热将混合物在150。C加热15分钟， 然后蒸发除去溶剂。残余物在乙酸乙酯和NaHC03水溶液之间分配， 水相进一步用乙酸乙酯萃取。有机相干燥后，蒸发除去溶剂。产物经硅胶色谱法純化(甲醇-二氯甲烷5:95)。获得浅黄色油状的 (8aR)-2-[l-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]六氢吡咯并[1,2-a]吡溱 画6(2H)誦酮0.23克(54%)。 'HNMR (500 MHz, CDC13): 1.5-1.6 (m, 2H), 1.7-1.8 (m, 1H), 2.1-2.2 (m, 1H), 2.3-2.4 (m, 2H), 2.6-2.7 (d， 1H), 2.8 (m, 1H), 2.8-2.9 (m, 3H), 3.0 (qn, 1H), 3.4 (t, 2H), 3.6 (m, 1H), 4.0 (d, 1H)， 4.4 (s, 1H), 7.2 (m, 2H), 7.2-7.3 (m， 4H), 7.4 (m, 4H); LCMS: m/z 362 (M+l)+。(b) (8aR)-2-氮杂环丁烷-3-基六氢吡咯并[l,2-a〗吡溱-6(2H)-酮 将(8aR)-2-[l-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]六氢吡咯并[l,2-a]吡 。秦-6(2H)-酮(0.23克，0.64毫摩尔)溶于乙酸(20毫升)中，向所得溶液 中加入氢氧化钇/碳(0.33克)。于室温氢气下(5巴)搅拌混合物48小时， 然后用Celite⑧过滤除去催化剂。蒸发除去溶剂，将残余物溶于乙醇 中。溶液经阳离子交换柱(Isolute SCX-2, IO克)过滤。柱子用乙醇洗 涤，然后产物用氨饱和的甲醇洗脱。蒸发除去溶剂，得到标题混合物 0.10克(84%) ,H NMR (500 MHz, CDC13): 1.5-1.6 (m， 2H), 1.8 (m, 1H), 2.1-2.2 (m, 1H), 2.3-2.4 (m, 2H)， 2.7 (d, 1H), 2.8-2.9 (m, 2H), 3.2 (qn， 1H), 3.5-3.7 (m, 4H), 4.0 (dd, 1H)。(8aSV2-氮杂环丁烷-3-基六氢吡咯并『l,2-al吡嗪-6〖2HV酮(a) (8aS)-2-[ 1 -(二苯基曱基)氮杂环丁烷-3-基]六氢吡咯并[1 ，2-a〗 吡溱-6(2H)-酮使用方法la中所述的N-烷基化反应方案来制备标题化合物，但 是使用(8aS)-六氢吡咯并[l,2-a]吡唤-6(2H)-酮(见WO 03/066635)作为 胺(产率，56%)。 ^NMR(500MHz,CDCl3): 1.5-1.6 (qn，2H), 1.7-1.8 (m, 2H), 2.1-2.2 (m, 1H), 2.3-2.4 (m, 2H), 2.6-2.7 (d， 1H), 2.8 (d, 1H), 2.8-2.9 (m, 2H), 3.0 (qn, 1H), 3.4 (t， 2H), 3.6 (m, 1H)， 4.0 (d, 1H), 4.4 (s，方法21H), 7.1-7.2 (t, 2H), 7.2-7.3 (t, 4H), 7.4 (t, 4H); LCMS: m/z 362 (M+l)(b) (8aS)-2-氮杂环丁烷-3-基六氢吡咯并[1 ，2-a]吡。秦-6(2H)-酮 使用方法lb中所述的氢化反应方案来制备标题化合物，但是使 用(8aS)-2-[ 1-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]六氢败咯并[1 ，2-a]他溱 -6(2印曙酮作为底物(产率，73%)。 'H NMR (500 MHz，CDCl3): 1.5-1.6 (m, 2H), 1.8 (m, 1H), 2.1-2.2 (m, 1H), 2.3-2.4 (m, 2H), 2.6-2.8 (d, 1H), 2.8-3.0 (m, 2H), 3.2-3.4 (m， 2H), 3.5-3.7 (m, 4H), 4.0 (dd, 1H)。3-溴-N-『(2S)-2-(4-氟苯基)-4-氣代丁基l-N-曱基-5-(三氟曱基)苯甲酰胺(a) 3-溴-N-[(2S)-2-(4-氟苯基)戊-4-烯-l-基]-N-曱基-5-(三氟甲基)苯曱酰胺向[(2S)-2-(4-氟苯基)戊-4-烯-l-基]曱基胺(见Bioorg. Med. Chem. Lett; 2001; 265-270; 0.54克，2.8毫摩尔)和3-溴-5-三氟甲基苯甲酸 (0.81克，3.0毫摩尔)的DMF(7毫升)溶液中，加入TBTU(0.96克，3.0 毫摩尔)和DIPEA(1.41克，10.9毫摩尔)。于室温氮气下搅拌反应混 合物过夜，然后在乙酸乙酯和NaHC03水溶液中分配。水相用乙酸乙 酯萃取三次。合并的有机溶液用水洗涤三次，然后经相分离柱干燥。 蒸发除去溶剂，产物经硅胶色谱法纯化(乙酸乙酯-庚烷10%至17%)。 获得3-溴-N-[(2S)-2-(4-氟苯基)戊-4-烯-l-基]-N-曱基-5-(三氟曱基)苯 曱酰胺0.86克(68%)。H NMR (500 MHz, CDC13): 2.1-3.8 (cm, 8H), 4.9-5.1 (m, 2H), 5.5-5.8 (m, 1H), 6.8-7.4 (cm, 6H)， 7.8 (s, 1H)。(b) 3-溴-N-[(2S)-2-(4-氟苯基)-4-氧代丁基]-N-曱基-5-(三氟甲基) 苯曱酰胺方法337氟苯基)戊-4-烯-l-基]-N-甲基-5-(三氟曱基) 苯甲酰胺(0.86克，1.9毫摩尔)的丙酮(45毫升)溶液中，加入Os04 (2.5%/叔丁基醇，0.49毫升，0.039毫摩尔)和4-甲基吗啉-4-氧化物(0.41 克，3.5毫摩尔)。于室温氮气下搅拌溶液过夜，然后加入NaHSO"39 %, 45毫升)水溶液。搅拌混合物2小时，用水稀释，然后用二氯曱 烷萃取两次。合并的有机溶液用相分离柱分离，蒸发除去溶剂。将残 余物(1.08克)溶于THF(18毫升)和水(4.5毫升)中，向所得溶液中加入 NalO4(0.73克，3.4毫摩尔)。室温氮气下搅拌混合物过夜。混合物在 二氯甲烷和水之间分配。水相用二氯甲烷萃取，然后合并的有机溶液 用盐水洗涤，并用相分离柱分离。蒸发除去溶剂，获得标题化合物 0.78克(90%)。 ]HNMR (500 MHz, CDC13): 2.4-4.4 (cm, 8H), 6.8-7.8 (cm: 7H), 9.8 (s, 1H); LCMS: m/z 447 (M-l)+。(a) 2-[l-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]八氢-6H-吡啶并[l,2-a]吡向l-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-酮(见Bioorg. Med. Chem. Lett.; 13; 2003; 2191-2194, 1.32克，5.6毫摩尔)和八氩-6H-吡啶并[l,2-a]吡溱 陽6-酮盐酸盐(Bioorg. Med. Chem.; 2004; 71-86; 1.30克，6.8毫摩尔)的 曱醇(10毫升)溶液中，加入乙酸(l毫升)。该溶液与(聚苯乙烯基甲基) 三甲基铵氰基硼氢化物(4.2毫摩尔/克，1.67克，8.8毫摩尔)混合，用 微波单节加热将混合物于120。C加热5分钟。过滤除去树脂后，蒸发 除去溶剂。产物用氨饱和的甲醇(2%)和二氯曱烷的混合物通过硅胶色 谱法纯化。获得油状的2-[l-(二苯基曱基)氮杂环丁烷-3-基]八氢-6H-吡啶并[l，2誦a]吡口秦-6画酮0.58克(28 %)。 JH NMR (500 MHz, CDC13): 1.4 (q, 1H), 1.7 (t, 2H), 1.8-2.0 (m, 3H), 2.3-2.4 (m, 1H)， 2.4-2.5 (d, 1H),方法42-氮杂环丁烷-3-基八氢-6H-吡啶并「l,2-al吡嗪-6-酉同2.7-2.8 (t, 3H), 3.0 (m, 3H), 3.4-3.6 (m, 3H), 4.5 (s, 1H), 4.6 (d, 1H), 7.2(m, 2H), 7.3 (m, 4H), 7.4 (m, 4H); LCMS: m/z 376 (M+l)+。 (b) 2-氮杂环丁烷-3-基八氢-6H-吡啶并[l,2-a]吡溱-6-酮 使用方法lb所述的氢化反应方案来制备标题化合物，但是使用2-[l-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]八氢-6H-吡啶并[l,2-a]吡溱-6-酮作为底物(产率，99%)。 LCMS:m/z210(M+l)+。 方法52-氮杂环丁烷-3-基八氢-6H-吡啶并『l,2-al吡嗪-6-酮的对映体之(a) (+)-2-[l-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]八氢-6H-吡啶并[l,2-a] p比。秦-6-酮2-[l-(二苯基曱基)氮杂环丁烷-3-基]八氢-6H-吡啶并[l,2-a]吡溱 -6-酮(见方法4a)的两种对映体，通过手性色谱法用Chimlcel⑧OD柱 (250x20毫米)分离。流动相为庚烷/异丙醇/三乙胺(70/30/0.1),进样量 为160毫克。样品在异丙醇中的浓度为20毫克/毫升。从448毫克外 消旋化合物中得到134毫克的(+)-2-[l-(二苯基曱基)氮杂环丁烷-3-基] 八氢-6H-吡啶并[l,2-a]吡。秦-6-酮，光学纯度超过99.9。/。e.e。通过在线 测量来确定旋光(+)的信号。LCMS: m/z 376 (M+l)+。(b) (+)-2-氮杂环丁烷-3-基八氢-6H-吡啶并[l,2-a]吡溱-6-酮 将(+)-2-[l-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]八氢-6H-吡啶并[l,2-a，，比溱-6-酮(138毫克,0.37毫摩尔)和曱酸铵(70毫克，l.l毫摩尔)溶于 乙醇(3毫升)中。加入氢氧化钯M袭(52毫克)，用微波单节加热将反应 混合物于120。C加热2分钟。过滤除去催化剂，蒸发除去溶剂。获得 标题化合物77毫克(100%)。 LCMS: m/z 210 (M+l)+。 方法62-氮杂环丁烷-3-基八氢-6H-吡啶并『l,2-al吡嗪-6-酮的相反对映氹(a) (-)-2-[l-(二苯基曱基)氮杂环丁烷-3-基]八氢-6H-吡啶并[l,2-a〗使用方法5中所述的条件，通过手性色谱法分离2-[l-(二苯基曱 基)氮杂环丁烷-3-基]八氢-6H-吡啶并[l,2-a]吡嗪-6-酮(见方法4a)的(-)-对映体。从448毫克外消旋化合物中得到138毫克的(-)-2-[l-(二苯基 曱基)氮杂环丁烷-3-基]八氢-6H-吡啶并[l,2-a]吡嗪-6-酮，光学纯度超 过99.9% e.e。通过在线测量来确定旋光(-)的信号。LCMS: m/z 376 (M+l)+。(b) 2-氮杂环丁烷-3-基八氢-6H-吡啶并[l,2-a]吡。秦-6-酮的相反对映体使用方法5b中所述的氢化反应方案来制备标题化合物，但是使 用(-)-2-[l-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]八氢-6H-吡啶并[l,2-a]吡唤 -6-酮作为底物(产率，100%)。 LCMS:m/z210(M+l)+。方法71 -氮杂环丁烷-3 -基-4 -丙酰基哌嗪(a) 1-[1-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3_基]哌嗪于6(TC氮气下搅拌l-(二苯基曱基)氮杂环丁烷-3-基甲烷磺酸酯 (见丄Org. Chem.; 56; 1991; 6729; 25克，78.6毫摩尔)、哌臻(67.7克， 0.79摩尔)和无水乙腈的混合物过夜。冷却混合物，在水和二氯甲烷 之间分配。有机层用水和盐水洗涤。溶液经Na2S04干燥，然后蒸发除去溶剂。残余物经硅胶柱色语法纯化(甲醇-二氯甲烷5:95)。获得 黄色油状的l-[l-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]哌嗪17.5克(72。/。)？H NMR (400 MHz, CDC13): 2.1-2.4 (m, 4H), 2.8-2.9 (m, 2H), 3.0 (m， 4H), 3.4-3.5 (m, 2H), 3.7-3.9 (m, 1H), 4.4 (s, 1H)， 7.2-7.4 (m, 10H); LCMS: m/z 308 (M+l) + 。
(b) l-[l-(二苯基曱基)氮杂环丁烷-3-基]-4-丙酰基哌嗪 室温下搅拌1-[1-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]哌嗪(250毫克，
0.81毫摩尔)、K2C03(146毫克，1.1毫摩尔)、丙酰基氯(98毫克，1.1 毫摩尔)和乙腈(6毫升)的混合物16小时。混合物经相分离柱过滤， 蒸发除去溶剂。将残余物溶于二氯甲烷，溶液用NaHC03水溶液洗涤。 有机相用相分离柱分离，然后蒸发除去溶剂。获得油状的l-[l-(二苯 基曱基)氮杂环丁烷-3-基]-4-丙酰基哌嗪216毫克(73%)。HNMR(500 MHz, CDC3): 1.1-1.2 (t, 3H), 2.2-2.4 (m, 6H), 2.9 (t, 2H)， 3.0 (m, 1H), 3.4-3.5 (m, 4H), 3.6 (b, 2H), 4.4 (s, 1H), 7.2 (m, 2H), 7.3 (m, 4H), 7.4 (m, 4H); LCMS: m/z 364 (M+l)+。
(c) 1-氮杂环丁烷-3-基-4-丙酰基哌嗪
将l-[l-(二苯基曱基)氮杂环丁烷-3-基]-4-丙酰基哌嗪(0.22克， 0.59毫摩尔)溶于乙醇(9毫升)和乙酸(0.2毫升)的混合物中，向所得溶 液加入氢氧化4巴/碳(83毫克)。于室温氢气下(5巴)搅拌混合物23小时， 然后通过相分离柱过滤催化剂，再用乙醇洗涤。蒸发除去溶剂，将残 余物溶于甲醇(l毫升)中。溶液经阳离子交换柱(Isolute SCX-2, 10克) 过滤。柱子用THF洗涤，然后产物用氨饱和的甲醇洗脱。蒸发除去 溶剂，得到油状的标题化合物0.13克(100%)。 ！H NMR (500 MHz, CD3OD): 1.1 (t, 3H), 2.3-2.5 (m, 6H), 3.4 (m， 1H), 3.6 (m, 4H), 3.9-4.0 (m， 4H)。
方法8
8-氮杂环丁烷-3-基六氢吡嗪并『2,l-cm,41Pl嗪-4(3H)-酮盐酸盐Ov^A^IV^ x HCI
(a) 4-氧代六氢吡嗪并[2,l-c][l,4]嗯嗪-8(lH)-羧酸叔丁酯
在0'C向3-(羟甲基)哌溱-1-羧酸叔丁酯(360毫克，1.7毫摩尔)的 二氯甲烷(10毫升)溶液中，加入三乙胺(505毫克，5.0毫摩尔)。将氯 乙酰氯(282毫克，2.5毫摩尔)溶于二氯甲烷(5毫升)中，在0。C将该溶 液逐滴加入前面的溶液中。在0。C下搅拌反应混合物1小时，然后在 室温下搅拌3小时。加入KHS04水溶液(1M, 5毫升)，然后经相分 离柱分离有机相。蒸发除去溶剂，将经硅胶色谱法纯化过的中间体酰 胺溶于DMF(2毫升)中。冷却的同时，在氮气下，将该溶液逐滴加入 到NaH(60毫克，2.5毫摩尔)的DMF悬浮液中。室温搅拌混合物48 小时，然后用乙酸乙酯稀释，然后加入(poredover)HCl(0.5M)水溶液。 用NaOH调整至pH 12,然后分离有机相。蒸发除去溶剂，产物经硅 胶色谱法纯化。获得4-氧代六氢吡嗪并[2,l-c][l,4]噁嗪-8(lH)-羧酸叔 丁酯90毫克(21%)。 NMR (500固z, s CDC13): 1.4 (s, 9H), 2.5-2.7 (m, 2H), 2.8 (m, 1H), 3.4-3.5 (m, 2H), 3.9-4.2 (m， 5H), 4.5 (d, 1H); LCMS: m/z257 (M+l)+。
(b) 六氢吡嗪并[2,1《][1,4]嗯嗪-4(3印-酮盐酸盐
向4-氧代六氢吡唤并[2,l-c][l,4]噁溱-8(lH)-羧酸叔丁酯(90毫克， 0.35毫摩尔)的乙腈(IO毫升)溶液中，加入浓HC1水溶液(3滴)。室温 搅拌混合物30分钟，然后蒸发除去溶剂。获得六氢吡。秦并 [2,l-c][l,4]嗨溱-4(3H)-酉同盐酸盐74毫克(100%)。 ！H NMR (500 MHz, CD3OD): 3.0-3.2 (m， 3H), 3.4-3.5 (m, 2H), 3.7-3.8 (m, 1H), 4.0 (m, 1H), 4.1 (m, 1H)， 4.2 (s, 2H), 4.7-4.8 (m, 1H); LCMS: m/z 157 (M+l)+。
(c) 8-[l-(二苯基甲基)]氮杂环丁烷-3-基]六氢p比嗪并[2,l-c][l,4]嗨 漆-4(3H)-酮
用实施例4a中所述的还原性烷基化方案来制备标题化合物，但 是使用六氢吡嗪并[2,l-c][l,4]嗨嗪-4(3H)-酮盐酸盐作为胺(产率，54%)。'HNMR(500MHz， CDC13): 1.7 (t, IH)， 1.8-1.9 (m, IH), 2.6 (d， IH) 2.7-2.8 (m, 2H), 2.9 (m, 2H), 3.0 (m, IH), 3.4 (m, 2H), 3.5 (m， IH), 3.6 (m, IH), 3.9 (dd, IH), 4.1-4.2 (m, 2H)， 4.4 (s, IH), 4.5-4.6 (d, IH); LCMS:m/z378 (M+l)+。
(d) 8-氮杂环丁烷-3-基六氢吡漆并[2,l-c][l,4]嗯口秦-4(3H)-酮盐酸
将8-[l-(二苯基甲基)]氮杂环丁烷-3-基]六氢吡嗪并[2,l-c][l,4]嗨 唤-4(3H)-酮(84毫克，0.22毫摩尔)溶于乙醇(4毫升)和乙酸(0.4毫升) 的混合物，向所得溶液加入少量氢氧化钯A友。于室温氢气下(5巴)搅 拌混合物24小时，然后用celite⑧过滤除去催化剂。蒸发除去溶剂， 残余物在甲苯和HC1(0.1M)水溶液之间分配。分离水溶液，冷冻干燥 除去溶剂。获得标题化合物53毫克(96%)。 NMR (500 MHz, D20): 3.0-3.3 (m, 3H), 3.6 (t, 2H), 3.8 (m, 1H), 4.1 (m, 1H), 4.2 (dd, 1H), 4.3 (s, 2H), 4.5-4.7 (m, 4H), 4.7-4.8 (m, 2H); LCMS: m/z 212 (M+l)+。
方法9
1 -氮杂环丁烷-3 -基-4-(四氢呋喃-2-基羰基)哌嗪
(a) l-[l-(二苯基甲基)]氮杂环丁烷-3-基]-4-(四氢呋喃-2-基羰基)
哌溱
用方法4a中所述的还原性烷基化方案来制备标题化合物，但是 使用l-(四氢呋喃-2-基羰基)哌嗪作为胺(产率，82%)。 ^ NMR (500 MHz, CD3OD): 1.9-2.0 (m, 3H), 2.0-2.1 (m, 1H), 2.2 (m, 1H), 2.3- 2.4 (m, 3H), 3.0 (m, 3H), 3.4 (t， 2H), 3.5-3.6 (m, 1H)， 3.6-3.7 (m, 1H), 3.8 (qt 1H), 3.9 (qt, 1H), 4.5 (s， 1H), 4.7 (t， 1H), 7.2 (t, 2H), 7.3 (t, 4H), 7.4 (t, 4H); LCMS: m/z 406 (M+l)+。
(b) l-氮杂环丁烷-3-基-4-(四氢呋喃-2-基羰基)哌溱将氢氧化4巴A友(0.15克)置于5毫升试管中，然后加入l-[l-(二苯 基曱基)]氮杂环丁烷-3-基]-4-(四氢呋喃-2-基羰基)哌嗪(0.66克，1.6毫 摩尔)、曱醇(4毫升)和乙酸(0.3毫升)的溶液。于室温氢气下(1.6巴) 搅拌混合物60小时，然后用Celite⑧过滤除去催化剂。蒸发除去溶剂， 粗品无需定量而用于下 一 步骤。LCMS: m/z 240 (M+l)+ 。
方法10
1 -氮杂环丁烷-3 -基-4-(曱氧基乙酰基)哌嗪
(a) l-[l-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]-4-(曱氧基乙酰基)哌嗪 向l-[l-(二苯基曱基)氮杂环丁烷-3-基]哌溱(见方法7a;615毫克，
2.0毫摩尔)的DMF(8毫升)溶液中，加入曱氧基乙酸(272毫克，3.0 毫摩尔)、DIPEA(310毫克，2.4毫摩尔)和TBTU(770毫克，2.4毫摩 尔)。室温搅拌反应混合物12小时，然后在二氯曱烷和NaHC03水溶 液之间分配。水相用二氯甲烷萃:f又两次，然后合并的有机溶液用盐水 洗涤，并经MgS04干燥。蒸发除去溶剂，产物经反相色谱法纯化， 用乙腈和0.1M乙酸铵水溶液的混合物作为流动相。获得l-[l-(二苯 基曱基)氮杂环丁烷-3-基]-4-(甲氧基乙酰基)哌嗪610毫克(80%)。 & NMR (500 MHz, CD3OD): 2.3-2.4 (m, 4H), 3.0 (m, 3H), 3.4 (s, 3H), 3.4 m, 2H), 3.5 (m, 2H), 3.6 (m, 2H), 4.1 (s, 2H), 4.5 (s, 1H), 7.2 (t, 2H), 7.3 (t, 4H), 7.4 (d, 4H); LCMS: m/z 380 (M+l)+。
(b) l-氮杂环丁烷-3-基-4-(甲氧基乙酰基)哌"秦
用方法9b中所述的氢化反应方案来制备标题化合物，但是使用 l-[l-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]-4-(曱氧基乙酰基)哌溱作为底物。 粗品无需定量而用于下一步骤。LCMS :m/z214(M+l)+。
方法11
2-(4-氮杂环丁烷-3-基哌嗪-l-基)-2-氧代乙醇<formula>formula see original document page 45</formula>
(a) 2-(4-[l-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]哌嗪-l-基)-2-氧代乙醇 用方法10a中所述的酰胺生成反应方案来制备标题化合物，但是
使用2-轻基乙酸作为羧酸(产率，54%)。 & NMR (500 MHz, CD3OD): 2.3-2.4 (m, 4H), 3.0 (m, 3H), 3.4 (m, 4H), 3.6 m, 2H), 4.1 (s, 2H), 4.5 (s, 1H), 7.2 (t， 2H), 7.3 (t, 4H), 7.4 (d, 4H); LCMS: m/z 366 (M+l)+。
(b) 2-(4-氮杂环丁烷-3-基哌溱-1 -基)-2-氧代乙醇
用方法9b中所述的氢化反应方案来制备标题化合物，但是使用 2-{4-[1-(二苯基曱基)氮杂环丁烷-3-基]哌嗪-1-基}-2-氧代乙醇作为底 物。粗品无需定量而用于下一步骤。LCMS:m/z200(M+l)+。
(9aS)-8-氮杂环丁烷-3-基六氢吡嗪并『2,l-cl『l,41嗯嗪-4(3H)-酮
(a) (3S)-3-(羟甲基)哌"秦-1-羧酸苯甲酯盐酸盐 将(2S)-2-(羟基甲基)哌溱-l,4-二羧酸4-苯曱酯l-叔丁酯(见WO
02/000631; 1.6克，4.6毫摩尔)溶于乙腈(25毫升)中，向所得溶液中加 入浓HCl(l毫升)。室温搅拌混合物过夜，然后蒸发除去溶剂。获得 无色油状的(3S)-3-(羟基甲基)哌溱-l-羧酸苯甲酯盐酸盐1.3克 (100%)。 ！HNMR (500 MHz, CD3OD): 3.1-3.4 (m, 5H), 3.7 (m, 1H), 3.8 (m, 1H), 4.2 (m, 2H), 5.2 (m， 2H), 7.2-7.4 (m, 5H); LCMS: m/z 251 (M+l)+。
(b) (3S)-4-(溴乙酰基)-3-(羟基甲基)哌溱-l-羧酸苯甲酯 将(3S)-3-(羟基曱基)哌溱-l-羧酸苯甲酯盐酸盐(0.83克，2.9毫摩
尔)溶于二氯曱烷(IO毫升)和DIPEA(1.5毫升，8.6毫摩尔)中。于0。C 逐滴加入溴乙酰氯(0.48克，3.0毫摩尔)。室温搅拌混合物1小时，然后加入水(10毫升)。通过相分离柱来分离相。收集有机溶液，蒸发除去溶剂。获得棕色油状的(3S)-4-(溴乙酰基)-3-(羟曱基)哌。秦-l-羧酸 苯甲酯1.1克(歸％)。 LCMS: m/z370 (M-l)-。(c) (9aS)-4-氧代六氢吡嗪并[2,l-c][l,4]嗯嗪-8(lH)-羧酸苯甲酯 将(3S)-4-(溴乙酰基)-3-(羟基甲基)哌嗪-l-羧酸苯曱酯(1.1克，2.9毫摩尔)溶于曱苯(25毫升)中，向所得溶液中加入碳酸钾(4.0克，28.8 毫摩尔)。将混合物加热至回流过夜，冷却至室温，然后过滤除去固 体。蒸发除去溶剂，产物经硅胶色谱法纯化(甲醇-二氯甲烷1%至10 %)。获得无色油状的(933)-4-氧代六氢吡嗪并[2,1《][1,4]嗨嗪-8(1印-羧酸苯甲酯0.19克(23 %)。 ！H NMR (500 MHz, CDC13): 2.6-3.0 (m, 3H), 3.4-3.6 (m, 2H), 4.0 (d, 1H), 4.1-4.3 (m, 4H)， 4.5 (d, 1H), 5.1 (s, 2H), 7.2-7.4 (m, 5H)。(d) (9aS)画六氢吡嗪并[2,l-c][l，4]嗨嗪-4(3H)-酮 将(9aS)-4-氧代六氢吡嗪并[2,l-c][l,4]嗯嗪-8(lH)-羧酸苯甲酯(0.19克，0.65毫摩尔)溶于乙醇(20毫升)中。将溶液转移至装有10% 钇碳(0.1克)、甲酸(0.1克，2.2毫摩尔)和曱酸铵(0.2克，3.17毫摩尔) 的25毫升小瓶中。用微波单节加热将混合物于12(TC加热5分钟。 过滤除去催化剂，(9aS)-六氢吡嗪并[2,l-c][l，4]嚼溱-4(3H)-酮的粗品溶 液无需纯化和定量而用于下一步骤。(e) (9aS)-8-[l-( 二苯基曱基)氮杂环丁烷-3-基]六氢吡溱并 [2,l-c〗[l,4]嗨口秦-4(3H)-酮向l-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-酮(见Bioorg. Med. Chem. Lett.; 13;5 2003; 2191-2194,约0.65毫摩尔)和(9aS)-六氢吡。秦并 [2，l誦c][l,4]嗨嗪-4(3H)-酮(0.65毫摩尔)的曱醇(IO毫升)溶液中，加入 M硼氢化钠(l"毫克，2.0毫摩尔)和氯化锌(135毫克，l.O毫摩尔) 的甲醇(20毫升)溶液。室温搅拌反应混合物15分钟，然后蒸发除去 溶剂。残余物在乙酸乙酯(50毫升)和水(20毫升)之间分配。有机溶液 用盐水洗涤，然后经Na2S04干燥。蒸发除去溶剂，将残余物溶于乙 腈(IO毫升)、乙酸(IOO毫克)和水(IO毫升)的混合物中。产物用乙腈和0.1M乙酸铵水溶液的混合物经反相色谱法纯化。合并适当的部分， 旋转蒸发浓缩。水性残余物用乙酸乙酯萃取，有机溶液经Na2S04干 燥。蒸发除去溶剂，获得(9aS)-8-[l-(二苯基曱基)氮杂环丁烷-3-基]六 氢吡嗪并[2,l-c][l,4]嗨嗪-4(3H)-酉同170毫克(69%)。 & NMR (400 MHz, CDC13): 1.6-1.7 (m, 1H), 1.8-1.9 (m， 1H), 2.6 (d， 1H), 2.7-2.8 (m, 2H), 2.8-2.9 (m, 2H), 3.0 (qn, 1H), 3.3-3.7 (m, 4H), 3.9 (dd, 1H), 4.0-4.2 (qt, 2H)， 4.4 (s， 1H), 4.5 (dd, 1H), 7.2 (t, 2H), 7.3 (m, 4H), 7.4 (m， 4H); LCMS: m/z 378 (M+l)+。(f) (9aS)-8-氮杂环丁烷-3-基六氢吡嗪并[2,l-c][l,4]噁嗪-4(3H)-酮 将^aS)-S-[l-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]六氢p比嗪并[2,l-c] [1,4]噁嗪-4(3H)-酮(85毫克，0.22毫摩尔)溶于乙醇(18毫升)中。将溶 液转移至装有乙醇(2毫升)、10%钯碳(0.1克)、甲酸(0.1克，2.2毫摩 尔)和曱酸铵(0,2克，3.17毫摩尔)的25毫升小瓶中。用微波单节加热 将混合物于12(TC加热5分钟。过滤除去催化剂，(9aS)-8-氮杂环丁烷 -3-基六氢吡溱并[2,l-c][l,4]噁"秦-4(3H)-酮的粗品溶液无需纯化和定 量而用于下一步骤。(9aRV8-氮杂环丁烷-3-基六氢吡嗪并『2,l-cin.41噁嗪-4(3HV酮(a) (2R)-2-(羟基曱基)哌口秦-l,4-二羧酸4-苯曱酯1-叔丁酯 将(2R)-4-[(苯甲氧基)羰基]-l-(叔丁氧基羰基)哌嗪-2-羧酸(1.4克, 3.9毫摩尔)溶于二甲氧基乙烷(IO毫升)中，向冷却的所得溶液中加入 N-甲基吗啉(0.4克，3.9毫摩尔)，然后逐滴加入氯曱酸异丁酯(0.54 克，3.9毫摩尔)。于0。C搅拌混合物20分钟，然后过滤混合物。将滤 出液转移至500毫升烧瓶中，然后再次冷却。加入溶于水(5毫升)中 的硼氢化钠(0.22克，5.9毫摩尔)，移除外部的冷却浴。搅拌反应混 合物直至其温度达到室温，这时加入水(120毫升)。混合物用乙酸乙方法13酯萃取三次，合并的有机溶液干燥后蒸发。产物经硅胶柱色谱法(乙酸乙酯-庚烷10%至70%)纯化。获得无色油状的(2R)-2-(羟基甲基) 哌嗪-l,4-二羧酸4-苯甲酯1-叔丁酯1.2克(84%)。 1HNMR (500 MHz, CDC13): 1.4 (s, 9H), 2.7-3.2 (b, 4H), 3.5 (b, 2H), 3.8-4.2 (m, 4H), 5.1 (m, 2H), 7.2- 7.4 (m, 5H); LCMS: m/z 349 (M國l)+。(b) (3R)-3-(羟基曱基)哌溱-l-羧酸苯曱酯盐酸盐用实施例12a中所述的水解反应方案来制备标题化合物，但是使 用(2R)-2-(羟基曱基)哌嗪-l，4-二羧酸4-苯甲酯l-叔丁酯作为底物(产 率，100%)。 ！HNMR (500 MHz, CD3OD): 3.1-3.4 (m,5H), 3.7 (m,lH), 3.8 (m, 1H), 4.2 (m, 2H), 5.2 (m, 2H), 7.2-7.4 (m, 5H); LCMS: m/z 251 (M+l)+。(c) (3R)-4-(溴乙酰基)-3-(羟基曱基)哌嗪-1 -羧酸苯甲酯用实施例12b中所述的酰化反应方案来制备标题化合物，但是使 用(3R)-3-(羟曱基)哌溱-1 -羧酸苯甲酯盐酸盐作为胺(产率，100%)。 LCMS: m/z370 (M-l)+。(d) (9aR)4-氧代六氢吡嗪并[2,l-c][l,4]嗯嗪-8(lH)-羧酸苯甲酯 用实施例12c中所述的环化反应方案来制备标题化合物，但是使用(3R)-4-(溴乙酰基)-3-(羟曱基)哌溱-l-羧酸苯甲酯作为底物(产率，17 %)。〗H NMR (500 MHz5 CDC13): 2.6-3.0 (m, 3H), 3.4-3.6 (m, 2H)， 4.0-4.3 (m, 5H), 4.6 (d, 1H), 5.1-5.2 (s, 2H), 7.2-7.4 (m, 5H); LCMS: m/z 291 (M+l)+。(e) (9aR)-六氢吡溱并[2,1 -c] [ 1,4]嗯嗪-4(3H)-酮用实施例12d中所述的还原性去保护反应方案来制备标题化合 物，但是使用(9aR)-4-氧代六氢吡嗪并[2,l-c][l,4]嗯溱-8(lH)-羧酸苯曱 酯作为底物。(9aR)-六氢吡嗪并[2,l-c][l,4]嗯溱-4(3H)-酮的粗品溶液 无需纯化和定量而用于下一步骤。(f) (9aR)-8-[l-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]六氢吡溱并 [2,l-c][l,4]嗨嗪-4(3H)-酮用实施例12e中所述的还原性烷基化反应方案来制备标题化合 物，但是使用(9aR)-六氢吡嗪并[2,l-c][l,4]嗯嗪-4(3H)-酮作为胺(产率，48, CDC13): 1.6-1.7 (t， 1H), 1.8 (dt, 1H), 2.5- 2.6 (d, 1H), 2.7-2.8 (m, 2H), 2.8-2.9 (m， 2H), 2.9-3.0 (qn， 1H), 3.3-3.4 (m, 2H), 3.5 (m, 1H)， 3.8-3.9 (dd, 1H)， 4.0-4.2 (qt， 2H), 4.2-4.3 (s, 1H), 4.4-4.5 (m, 1H), 7.1 (m， 2H), 7.2 (m, 4H), 7.4 (m, 4H); LCMS: m/z 378 (M+l)+。(g) (9311)-8-氮杂环丁烷-3-基六氢吡嗪并[2,1^][1,4]嗯嗪-4(3印-酮用实施例12f中所述的还原性去保护反应方案来制备标题化合 物，但是使用(9aR)-8-[l-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]六氢吡溱并 [2,l-c][l,4]嗯溱-4(3H)-酮作为底物。(％11)-8-氮杂环丁烷-3-基六氢吡 。秦并[2,l-c][l,4]嚼溱-4(3H)-酮的粗品溶液无需纯化和定量而用于下一 步骤。LCMS: m/z 212 (M+l)+。方法14l-氮杂环丁烷-3-基-4"环丙基羰基)哌嗪(1) 1-(环丙基羰基)-4-[1-(二苯基曱基)氮杂环丁烷-3_基]哌嗪用实施例7b中所述的酰化反应方案来制备标题化合物，但是使 用环丙基羰基氯作为酰化剂(产率，60%)。 ^NMR(400 MHz,CDCl3): 0.7 (m, 2H)， 0.9 (m, 2H), 1.6-1.7 (m, 1H) 2.2-2.4 (b， 4H)， 2.8-3.0 (m, 3H) 3.4 (t, 2H), 3.6 (b, 4H), 4.4 (s, 1H)， 7.2 (t, 2H), 7.2-7.3 (m, 4H), 7.4 (d, 4H); LCMS: m/z 376 (M+l)+。(b) l-氮杂环丁烷-3-基-4-(环丙基羰基)哌溱用方法12f中所述的还原性去保护反应方案来制备标题化合物， 但是使用l-(环丙基羰基)-4-[l-(二苯基曱基)氮杂环丁烷-3-基]哌唤作 为底物。1 -氮杂环丁烷-3 -基-4-(环丙基羰基)哌。秦的粗品溶液无需纯化 和定量而用于下一步骤。LCMS: m/z 210 (M+l)+。方法15l-氮杂环丁烷-3-基-4-丁酰基哌嗪(a) l-丁酰基-4-[l-(二苯基曱基)氮杂环丁烷-3-基]哌嗪 用实施例7b中所述的酰化反应方案来制备标题化合物，但是使用丁酰氯作为酰化剂(产率，50%)。 ^NMR(400MHz, CDC13): 0.9(t, 3H), 1.5-1.7 (m, 4H), 2.2-2.3 (m, 4H), 2.8-3.0 (m, 3H), 3.3 (b, 2H), 3.5 (b 2H), 3.6 (b, 2H), 4.4 (s， 1H), 7.1-7.2 (t, 2H), 7.3 (m, 4H)， 7.4 (d， 4H); LCMS:m/z378 (M+l)+。(b) l-氮杂环丁烷-3-基-4-丁酰基哌溱用方法12f中所述的还原性去保护反应方案来制备标题化合物， 但是使用l-丁酰基-4-[l-(二苯基曱基)氮杂环丁烷-3-基]哌嗪作为底 物。l-氮杂环丁烷-3-基-4-丁酰基哌溱的粗品溶液无需纯化和定量而 用于下一步骤。LCMS: m/z212(M+l)+。方法161 -氮杂环丁烷-3 -基-4-异丁酰基哌嗪o(a) l-[l-(二苯基曱基)氮杂环丁烷-3-基]-4-异丁酰基哌溱 用实施例7b中所述的酰化反应方案来制备标题化合物，但是使用异丁酰氯作为酰化剂(产率，59%)。HNMR(400MHz,CDCl3): 1.1 (d, 6H), 2.3 (m, 4H), 2.8 (qn, 1H), 2.9 (t, 2H), 3.0 (qn, 1H), 3.4 (t, 2H), 3.5 (b, 2H), 3.6 (b, 2H), 4.4 (s, 1H), 7.2 (t, 2H)， 7.3 (m, 4H), 7.4 (d, 4H); LCMS:m/z378 (M+l)+。(b) l-氮杂环丁烷-3-基-4-异丁酰基哌嗪用方法12f中所述的还原性去保护反应方案来制备标题化合物， 但是使用l-[l-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]-4-异丁酰基哌溱作为底物。l-氮杂环丁烷-3-基-4-异丁酰基哌溱的粗品溶液无需纯化和定量
而用于下一步骤。LCMS:m/z212(M+l)+。
权利要求
1.式(I)化合物及其药学上和药理学上可接受的盐，和式I化合物及其盐的对映体，其中，Het为其中，R为C1-C4烷基；环丙基；C1-C4甲氧基烷基；C1-C4乙氧基烷基；C1-C4羟基烷基；四氢呋喃-2-基；四氢呋喃-3-基；四氢吡喃-2-基；四氢吡喃-3-基；或四氢吡喃-4-基；或者Het为其中，Y为C1-C3烷基；-CH2-O-CH2-；或-CH2-CH2-O-。
全文摘要
本发明涉及新的氮杂环丁烷化合物，涉及包含所述化合物的药用组合物，以及所述化合物在治疗功能性胃肠疾病、IBS和功能性消化不良中的用途。所述化合物为神经激肽(NK)拮抗剂。本发明还涉及所述化合物的制备方法。
文档编号A61K31/397GK101316846SQ200680044232
公开日2008年12月3日 申请日期2006年9月27日 优先权日2005年9月29日
发明者R·伯格曼, S·冯昂格, S·霍尔姆奎斯特 申请人:阿尔比里奥公司