专利名称：高速逆流色谱法制备高纯度六驳碱的方法
技术领域：
本发明涉及用高速逆流色谱法(HSCCC)制备高纯度六驳碱的方法。
背景技术：
豆豉姜系樟科木姜子属植物山鸡椒("&^cw6eZ^ (Lour.) Pers)的 根及根茎。具有祛风散寒，理气止痛等功效。其中所含的生物碱六驳碱是 一个药理活性强的化合物，具有类士的宁的兴奋脊髓的作用。
六驳碱在自然界中存在量极低，且含有大量杂质，因此至今有大量研 究人员正在探索理想的分离纯化方法。Masao等人在文献Studies on the Alkaloids of Formosan Lauraceous Plants. V. Alkaloids of ZiAsea. cw6e6a Persoon中报道的提取六驳碱的方法如下豆豉姜22.38公斤用乙醇提取， 乙醇提取物用3%醋酸提取，浓縮至一定体积放置一夜后过滤，滤液用氯 仿提取，提取后酸性母液用氢氧化铵中和至析出固体，用氯仿提取出来， 提取液再用20/^氢氧化钠溶液振摇提取，其中的氢氧化钠提取液加入碳酸 铵至析出结晶，再用氯仿提取，用无水碳酸钾干燥得到褐色残渣。残渣的 丙酮溶液加入苦酮酸盐得红色结晶，过滤，用乙醇多次重结晶得到六驳碱 7.7克，收率仅为0.034%。但该方法操作步骤繁琐，反复引入酸碱和重结 晶，多次引起目标化合物化学变化和物理变化，过程中损失大，从而回收 率低。
高速逆流色谱技术(HSCCC)是近年发展起来的一种连续的无需任何 固体支持物的高效、快速的液液分配色谱分离技术，其原理是利用单向流 体动力学平衡现象来实现对化合物的高速分离的。在这样的动力平衡体系 中，两种互不混溶的溶剂相在转动螺旋管中单向地分布。高速逆流色谱仪 工作时，色谱仪中的螺旋管做行星运动，由于重力及螺旋管力的作用，固 定相移向螺旋管的入端，使得固定相得以保留，同时两相溶剂在螺旋管中 得以混合。由于不同溶质在两相中的分配系数不同，溶质在两相溶剂中进行分配平衡，从而使不同成分得以分离。高速逆流色谱技术操作简单易行， 无需对样品进行复杂的处理，且可以和灵敏度高的检测技术联用，方便快
捷准确。该技术应用范围很广，HSCCC中使用的两相溶剂体系组成可以 是任意的，故可以适用于各种化合物的分离。它无需固体载体HSCCC在 经过多次重复分离均可以实现较好的重现性以及得到较高的回收率。产品 纯度高，选择正确的溶剂体系，可以将样品分离后得到高于卯％纯度的产 品，适用于制备型分离。
但欲用HSCCC进行成功的分离，选择适宜的溶剂系统非常重要。不 同的溶剂系统，具有不同的上、下相之比，其粘度、极性、密度等性质相 差甚远，对相同的成分具有不同的溶解、分配能力，形成分配系数的差异， 对分离效果产生不同的影响。目前，溶剂体系的选择还没有一套完整的理 论依据。另外，在选定了溶剂体系后，有时需要对三个仪器运行参数(转 速，流动相流速，进样体积)进行设定。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服传统分离技术的缺陷，采用高速逆流 色谱技术(HSCCC)制备高纯度六驳碱的方法。该方法分离条件温和，分离 效率高，且分离时间短，能得到高纯度的六驳碱。
本发明的技术方案如下
高速逆流色谱法制备高纯度六驳碱的方法，包括制备构成固定相和 流动相的溶剂体系；调节流动相流速；调节主机转速；其特征在于，所述 溶剂体系由氯仿、甲醇和水组成，三种组分的体积比为2 4: 3: 2 2.5， 该溶剂体系的上相为固定相，下相为流动相。
在不破坏体系平衡的调节下，可在上述范围内任意调节氯仿甲醇 水的体积比，优选的体积比为4: 3: 2或4: 3: 2.5或3.5: 3: 2。
主机转速须控制在1.5 2.5ml/min范围内，优选2.0ml/min;流动相的 流速须控制在750 880rpm范围内，优选800rpm;恒温循环器的温度设置 在23 27。C内，优选25。C。
本发明的具体操作步骤如下
豆豉姜乙醇提取物用正丁醇萃取，正丁醇萃取部分用硅胶柱粗分一次，得到富集六驳碱的混合物，精确称取富集六驳碱的混合物，用流动相 溶解样品，用双泵等比例同时泵入流动相和固定相，当溶剂从管路出口流 出时，停止泵入固定相，设定流动相流速，同时启动主机电机，调节转速， 十几分钟后，管柱内溶剂达成动态平衡，管柱出口处只有流动相流出。通
过进样器注入样品，设定检测器的波长为280nm，在进样后约4小时至6小 时出现六驳碱峰，收集该流份，浓縮后得到纯六驳碱单体。
由于采用了合理的溶剂体系，控制主机转速和流动相流速等工艺条 件，用本发明方法可得到高纯度的六驳碱。且该分离纯化过程条件温和， 分离时间短，由于不引入酸碱，从而减少了化合物化学性质的变化，保持 化合物的稳定而减少损失，化合物不流失也不存在死吸附。
具体实施例方式
实施例1
豆豉姜5公斤用乙醇提取，乙醇提取物用正丁醇萃取，正丁醇萃取部 分用硅胶柱粗分一次，得到富集六驳碱的混合物15克。
精确称取富集六驳碱的混合物3.0克，用氯仿甲醇水(4: 3: 2)
溶剂系统的下相溶解样品，开启恒温循环器，设置温度为25t:，以该溶剂
系统的上相为固定相，下相为流动相，用双泵等比例同时泵入流动相和固 定相，当溶剂从管路出口流出时，停止泵入固定相，设定流动相流速为
2ml/min，同时启动主机电机，调节转速为800rpm，十几分钟后，管柱内 溶剂达成动态平衡，管柱出口处只有流动相流出。通过进样器注入样品， 设定波长为280nm，在进样后约4小时40分钟出现六驳碱峰，收集该流 份，浓縮后得到纯六驳碱1.4克，其中纯度大于99.5%，相对进样前收率 46.7%，相对药材收率为0.138%。
实施例2
精确称取实施例1中富集六驳碱的混合物2.4克，用氯仿甲醇水 (3.5: 3: 2)溶剂系统的下相溶解样品，开启恒温循环器，设置温度为 26°C，以该溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，用双泵等比例同时 泵入流动相和固定相，当溶剂从管路出口流出时，停止泵入固定相，设定流动相流速为1.5ml/min，同时启动主机电机，调节转速为750rpm，十几 分钟后，管柱内溶剂达成动态平衡，管柱出口处只有流动相流出。通过进 样器注入样品，设定波长为280nm，在进样后约5小时35分钟出现六驳 碱峰，收集该流份，浓縮后得到纯六驳碱l.O克，其纯度大于99.5%，相 对进样前收率40.4%，相对药材收率为0.121%。
实施例3
精确称取实施例1中富集六驳碱的混合物2.6克，用氯仿甲醇水 (4: 3: 2.5)溶剂系统的下相溶解样品，开启恒温循环器，设置温度为 27°C，以该溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，用双泵等比例同时 泵入流动相和固定相，当溶剂从管路出口流出时，停止泵入固定相，设定 流动相流速为2.5ml/min，同时启动主机电机，调节转速为880rpm，十几 分钟后，管柱内溶剂达成动态平衡，管柱出口处只有流动相流出。通过进 样器注入样品，设定波长为280nm，在进样后约5小时出现六驳碱峰，收 集该流份，浓縮后得到纯六驳碱1.1克。其纯度大于99.5%,相对进样前 收率42.3%，相对药材收率为0.127%。
实施例4
精确称取实施例1中富集六驳碱的混合物1.2克，用氯仿甲醇水
(2: 3: 2)溶剂系统的下相溶解样品，开启恒温循环器，设置温度为24
°c，以该溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，用双泵等比例同时泵
入流动相和固定相，当溶剂从管路出口流出时，停止泵入固定相，设定流
动相流速为2ml/min，同时启动主机电机，调节转速为800rpm，十几分钟 后，管柱内溶剂达成动态平衡，管柱出口处只有流动相流出。通过进样器 注入样品，设定波长为280nm，在进样后约5小时30分钟出现六驳碱峰， 收集该流份，浓縮后得到纯六驳碱0.5克，其纯度大于99.5%，相对进样 前收率41.7%，相对药材收率为0.125%。
实施例5
精确称取实施例1中富集六驳碱的混合物1.4克，用氯仿甲醇水(3: 3: 2.5)溶剂系统的下相溶解样品，开启恒温循环器，设置温度为
23°C，以该溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，用双泵等比例同时 泵入流动相和固定相，当溶剂从管路出口流出时，停止泵入固定相，设定 流动相流速为2.5ml/min，同时启动主机电机，调节转速为850rpm，十几 分钟后，管柱内溶剂达成动态平衡，管柱出口处只有流动相流出。通过进 样器注入样品，设定波长为280nm，在进样后约5小时出现六驳碱峰，收 集该流份，浓縮后得到纯六驳碱0.6克。其纯度大于99.5%，相对进样前 收率42.9%，相对药材收率为0.129%。
实施例6
精确称取实施例1中富集六驳碱的混合物l.O克，用氯仿甲醇水
(1.5: 1: 3)溶剂系统的下相溶解样品，开启恒温循环器，设置温度为
25°C，以该溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，用双泵等比例同时 泵入流动相和固定相，当溶剂从管路出口流出时，停止泵入固定相，设定 流动相流速为2.0ml/min，同时启动主机电机，调节转速为800rpm，十几 分钟后，管柱内溶剂达成动态平衡，管柱出口处只有流动相流出。通过进 样器注入样品，设定波长为280nm，在进样后约3小时出现六驳碱峰，但 与杂质峰交叠，分离度小，收集该流份，浓縮后得到纯六驳碱0.2克。其 纯度为80%，相对进样前收率20%，相对药材收率为0.06%。
权利要求
1.高速逆流色谱法制备高纯度六驳碱的方法，包括制备构成固定相和流动相的溶剂体系；调节流动相流速；调节主机转速；其特征在于，所述溶剂体系由氯仿、甲醇和水组成，三种组分的体积比为2～4∶3∶2～2.5，该溶剂体系的上相为固定相，下相为流动相。
2. 如权利要求1所述的制备高纯度六驳碱的方法，其特征在于，所述 流动相的流速为1.5 2.5ml/min。
3. 如权利要求1所述的制备高纯度六驳碱的方法，其特征在于，所述 主机转速为750 880rpm。
4. 如权利要求1所述的制备高纯度六驳碱的方法，其特征在于，所述溶剂体系的三种组分的体积比为4: 3: 2。
5. 如权利要求1所述的制备高纯度六驳碱的方法，其特征在于，所述 溶剂体系的三种组分的体积比为4: 3: 2.5。
6. 如权利要求1所述的制备高纯度六驳碱的方法，其特征在于，所述溶剂体系的三种组分的体积比为3.5: 3: 2。
全文摘要
本发明公开一种高速逆流色谱法制备高纯度六驳碱的方法，包括制备构成固定相和流动相的溶剂体系；调节流动相流速；调节主机转速；其特征在于，所述溶剂体系由氯仿、甲醇和水组成，三种组分的体积比为2～4∶3∶2～2.5，该溶剂体系的上相为固定相，下相为流动相。该方法分离条件温和，分离效率高，且分离时间短，能得到高纯度的六驳碱。
文档编号A61K36/185GK101293872SQ20071004016
公开日2008年10月29日 申请日期2007年4月28日 优先权日2007年4月28日
发明者翔 倪, 朱超兰, 杨培明, 许海燕, 佳 陈 申请人:上海医药工业研究院