专利名称：：波棱内酯及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种新化合物波棱内酯及其制备方法和用途，属于药物化学领域。
背景技术：
：波棱瓜/^^etos/^r附M柳cam/^erm^Val1为葫卢科波棱瓜属单属种植物，主要分布于中国西藏、云南，以及印度和尼泊尔。波棱瓜子系波棱瓜的干燥成熟种子，是一种常用藏药。波棱瓜子味苦，性寒，能清腑热，胆热，具有清热解毒、去火降热、助消化作用，用于治疗肝热、黄疸型传染性肝炎等症[提供出处中华人民共和国卫生部药品标准(藏药))[S].Vol.9.1995.64。目前，波棱瓜子提取报道的化合物有KaouadjiMourad等人报道的苯呋喃类化合物波棱醛(Herpetal)，波棱醇(Herpetoriol);木脂素类化合物木脂素二聚物(Herpetol)，木脂素三聚物(Herpetrione)，木脂素四聚物(Herpetetradione，Herpetetrone),木脂素五聚物(Herp印entol)等。中国专利申请CN1486691记载，从波棱瓜子中得到波棱素2-(4-Hydroxy-3-metho-xyphenyl)-6-5-(3-hydroxy陽4-methoxyphenyl)-4-hydroxymethyl陽3-tetrahydrofuranylmethyl-3-hydroxymethyl-4-methoxy-2，3-dihydrobenzofura)，所得到的波棱素可以制成药物用于治疗乙型肝炎病毒、化学物质导致的肝损伤及肝癌等疾病。
发明内容本发明的目的在于提供一种新化合物，其结构式为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>R为一CH2OH、一CHO、一COOH、一CH3、H2OCH—、RCOOH2C—、R、OOC一或r'ikx:h—;其中，r'-c,d的烷烃基。进一步地，所述化合物优选波棱内酯，即波棱内酯I(Herpetolidel)和波棱内酯II(Herpeto]ideII)。其结构式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>波棱内酯I<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>波棱内酯n。本发明还提供上述化合物的制备方法，包括以下步骤-a、醇提波棱瓜丑e/p"仍/^f"iH挑Wall的种子干燥、粉碎，用乙醇加热回流提取，回收乙醇得浸膏；b、萃取浸膏干燥后经石油醚脱油、乙酸乙酯萃取得乙酸乙酯提取物；C、层析取乙酸乙酯提取物进行硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，洗脱液浓度依次为石油醚，石油醚15:乙酸乙酯l，石油醚10:乙酸乙酯l，石油醚8:乙酸乙酯l，石油醚6:乙酸乙酯1，石油醚4:乙酸乙酯1，乙酸乙酯，收集石油醚6:乙酸乙酯l洗脱物，得波棱内酯I;d、石油醚6:乙酸乙酯1洗脱物再次硅胶柱层析，采用流动相石油醚-丙酮洗脱，洗脱液浓度为石油醚10:丙酮1，石油醚8:丙酮l，石油醚6:丙酮1，石油醚4:丙酮i，丙酮，收集洗脱物得波棱内酯II。本发明还提供了上述化合物在制备抗肝损伤、抗肿瘤药物中的用途。本发明提供了一种新的化合物，该化合物可用于制备抗肝损伤、抗肿瘤的药物，为临床提供了一种新的选择，也为揭示波棱瓜子治疗肝病作用物质基础，进一步扩大波棱瓜子临床应用范围和新药研究奠定了一定的基础。具体实施例方式实施例1本发明化合物的制备本发明提供的新化合物具体是采用以下方法提取制备的-a、醇提波棱瓜7/er/jeto5/7C附"附Cfl"rf&""OTWall的种子干燥、粉碎，用乙醇加热回流提取，回收乙醇得浸膏；为了提高回收乙醇效率、防止化学成分分解，干燥可以采用减压干燥。由于活性部位是乙酸乙酯提取物，采用醇提可以抑制水溶性杂质提出率，同时乙醇与其它有机试剂相比较具有毒性小、渗透力强、提取率高等优点，因此选择醇提。乙醇浓度可以是60%-95%,通常采用95%。由于乙醇提取物含油脂比较多，液-液萃取困难，乳化现象十分严重，加入的硅胶可以起到分散、吸湿作用，使乙醇提取物成固态，利于下一步提取。因此在干燥时可加硅胶拌匀并真空干燥。b、萃取浸膏干燥后经石油醚脱油、乙酸乙酯萃取得乙酸乙酯提取物，所采用的石油醚的沸程为6090'C，极性较低，回收时损失小，并且在水浴范围内，可以防止化学成分分解。从该提取物中分离出6个单体化合物。具体经以下步骤分离出两个新的香豆素类化合物c、层析取乙酸乙酯提取物进行硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，洗脱液浓度依次为石油醚，石油醚15:乙酸乙酯1，石油醚10:乙酸乙酯1，石油醚8:乙酸乙酯l，石油醚6:乙酸乙酯1，石油醚4:乙酸乙酯1，乙酸乙酯，收集石油醚6:乙酸乙酯l洗脱物，得化合物I(纯度98%以上)；白色粉末，紫外灯下观察为蓝色荧光，mp9596.5。C;d、石油醚6:乙酸乙酯l洗脱物再次硅胶柱层析，采用流动相石油醚-丙酮洗脱，洗脱液浓度为石油醚10:丙酮1，石油醚8:丙酮1，石油醚6:丙酮1，石油醚4:丙酮1，丙酮，收集洗脱物得化合物II(纯度98%以上)。淡黄色粉末，紫外灯下观察为黄色荧光，mpU2.5114'C。通过波谱和理化性质鉴定结构，化合物i、n为两个新的香豆素类化合物，分别命名为波棱内酯I(HerpetolideI)和波棱内酯II(HerpetolideII)。其结构式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>波棱内酯I8-hydroxy-l-hydroxymethyl-3，9-dimethoxy-6H-Dibenzo[b，dPyran-6-one1-羟甲基-8-羟基-3,9-二甲氧基-6H-二苯并[b,d]吡喃-6-酮OMe波棱内酯II(HerpetolideII)l-formoyl-8-hydroxy-3，9-dimethoxy-6H-Dibenzob，djPyran-6-onel-甲酰基-8-羟基-3，9-二甲氧基-6H-二苯并b，d吡喃-6-酮波棱内酯I和波棱内酯II'H-NMR和3C-NMR化学位移值见表1。表1波棱内酯I和波棱内酯I"H-NMR和3C-NMR化学位移值<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>波棱内酯I:C16H1406，相对分子质量302，白色粉末(石油醚/乙酸乙酯)，紫外灯下观察为蓝色荧光，mp9596.5°C。EI-MS(C16H1406):302[M+，84，32，47，57。(HRESI-MS)m/z:325.0682(IVT+Na),计算值是325.06827。UV入max(CH3OH)mn:205，227，260,303，335。IRv(KBr)cm1:3384.5(OH);1687.9(CO);16121453，900840(C6H6);13081013(C隱O)。iH-NMR(DMSO)S:9.983(1H，S)，8.02(IH，S)，7.58(1H，S)，7力5(1H，d，J=2.7Hz)，6.93(1H，d,J=2.7Hz)，5.73(H，t，J=5.1Hz)，4.89(2H,d，J=4.8Hz)，4.06(3H，S)，3.卯(3H，S)。13C-NMR(DMSO)S:140.1(C-1)，115.0(02),159.3(C-3)，101.4(C-4)，152.8(C-4a)，160.5(C-6)，113.6(C-6a),114.6(C-7)，147.1(C-8)，154.3(C-9)，109.7(C-10)，128.9(C-10a)，lll.l(C-lOb)，63.8(l-CH2OH)，56.2(3-OCH3)，56.0(9-OCH3)。波棱内酯II:CI6H1206，相对分子质量300，淡黄色粉末(石油醚/乙酸乙酯)，紫外灯下观察为黄色荧光，mpU2.5114。C。EI-MS(C16H1206):300[M+I，272，257，229，213，201，186，129，113。UVAmax(CH3OH)腿215，242,265，295，360。'H-画R(DMSO)S:10.51(1H，S)，10.32(1H，S)7.605(1H，S)，7.31(1H,d，J=6.8Hz)，7.30(1H，S)，7.29(1H，d，J-6.8Hz)，3.95(3H，S)，3.90(3H，S)。13C-NMR(DMSO)6:135.9(C-1)，114.7(C-2)，159.6(C-3)，106.7(C-4)，152.9(C-4a)，160.0(C-6)，113.8(C-6a)，114.2(C-7)，148.4(C-8)，154.2(C-9)，110.2(C-10)，126.5(C-10a)，112.4(C-10b)，192.6(1-COH)，56.6(3-OCH3)56.3(9-OCH3)。药理试验表明，波棱内酯I(HerpetolideI)和波棱内酯II(HerpetolideII)对化学物质导致的肝损伤有一定的保护作用，对肿瘤细胞的增殖有一定的抑制作用。试验例1波棱内酯I对鹿S0损伤大鼠肝细胞的保护作用。釆用体外培养法得到肝实质细胞。将肝实质细胞用DMEM分散，细胞计数不得少于2xl()S个/ml，细胞活力大于卯。/。。将分散的细胞加入96孔板，每空8(^1。实验共设置3组，除空白对照组外，包括造模组和给药组每空加入终浓度为8mmol/L的DMSO，造肝细胞损伤模型；给药组加入波棱内酯I，浓度为0.6mg/ml，放入二氧化碳孵箱中孵化24h。将细胞于37°C，5%C02孵箱培养24小时后，加入MTT50pl(0.25毫克/ml)，37°C,5。/。C02孵箱培养分别于4小时，吸净培养液后再加入DMSO150pl中止反应，充分震荡后用酶标仪测定OD值。并根据OD值计算细胞存活率。细胞存活率=药物处理细胞ODl/药物未处理细胞[ODxl00。/0。表l波棱内酯I对DMSO损伤肝细胞存活率的影响组别均值士标准差P值存活率(100%)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>与空白对照组比较，"★"表示p〈0.01:和造模空白组比较，"A"表示p〈0.01.实验结果表明，波棱内酯I能明显提高DMSO损伤肝细胞存活率。试验例2波棱内酯对人白血病细胞抹HL-60细胞的生长抑制作用。取对数生长期肿瘤细胞株接种在96孔培养板上进行培养。待贴壁后分别加入受试化合物波棱内酯I和波棱内酯n，培养72h，加入MTT。4h后，去除培养液，加入酸化异丙醇，振荡后在酶标仪570mn波长下测定吸光度(OD)。根据下式计算抑制率抑制率=(1-实验组OD值/对照组OD值)xl00X。实验结果表明，波棱内酯I和波棱内酯II对人白血病细胞株HL-60细胞的生长有一定程度的抑制作用，其ICso分别为7.26X10-5和8.78XIO.5mol/L。权利要求1、具有下式结构的化合物-<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>R为—CH20H、一CHO、—COOH、—CH3、H2C=CH—、RCOOH2C—、R、OOC—或R、HC-CH—;其中，R、dCt的烷烃基。2、根据权利要求1所述化合物，其特征在于R为-CH20H，所述化合物为波棱内酯I,其化学名为l-羟甲基-8-羟基-3，9-二甲氧基-6H-二苯并[b，d]吡喃-6-酮，结构式为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>3、根据权利要求1所述化合物，II，其化学名为l-甲酰基-8-羟基-3波棱内酯I。其特征在于R为-CHO，所述化合物为波棱内酯9-二甲氧基-6H-二苯并[b，d吡喃-6-酮，结构式为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>波棱内酯II。4、权利要求2或3所述化合物的制备方法，包括以下步骤a、醇提波棱瓜种子干燥、粉碎，用乙醇加热回流提取，回收乙醇得浸膏；b、萃取浸膏干燥后经石油醚脱油、乙酸乙酯萃取得乙酸乙酯提取物；C、层析取乙酸乙酯提取物进行硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，洗脱液浓度依次为石油醚，石油醚15:乙酸乙酯1，石油醚10:乙酸乙酯1，石油醚8:乙酸乙酯1，石油醚6:乙酸乙酯1，石油醚4:乙酸乙酯1，乙酸乙酯，收集石油醚6:乙酸乙酯1洗脱物即得波棱内酯I;d、石油醚6:乙酸乙酯1洗脱物再次硅胶柱层析，采用流动相石油醚-丙酮洗脱，洗脱液浓度为石油醚10:丙酮1，石油醚8:丙酮1，石油醚6:丙酮1，石油醚4:丙酮l，丙酮，收集石油醚6:丙酮l洗脱物即得波棱内酯II。5、根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于步骤b中浸膏干燥是将浸膏加入硅胶拌匀并真空干燥。6、权利要求1所述化合物在抗肝损伤、抗肿瘤方面的用途。全文摘要本发明涉及一种新化合物波棱内酯及其制备方法和用途。本发明提供的化合物可用于制备抗肝损伤、抗肿瘤的药物，为临床提供了一种新的选择，也为揭示波棱瓜子治疗肝病作用物质基础，进一步扩大波棱瓜子临床应用范围和新药研究奠定了一定的基础。文档编号A61K31/365GK101311173SQ20071004917公开日2008年11月26日申请日期2007年5月25日优先权日2007年5月25日发明者梅张,张洪彬,赟邓,陈胡兰申请人:成都中医药大学