专利名称：：依博素在制备治疗类风湿性关节炎的药物中的用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及依博素的新用途，具体地，是在制备类风湿性关节炎作用的药物中的用途。
背景技术：
：依博素是经研究发现的一种具有抗白细胞介素1受体活性的微生物多糖，为链霉菌的代谢产物，在国内外属首次报导，已申请并获得国家专利(专利申请号99110826.4)，该产生菌由中国医学科学院医药生物技术研究所分离自我国四川省峨嵋山土壤，经中国科学院微生物研究所对菌种进行分类鉴定，根据菌种形态，培养特征及分子生物学分类等研究确定其为唐得链霉菌。据研究结果显示，依博素是一种新型结构微生物胞外多糖，由8种单糖组成，其种类为鼠李糖、木糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、岩藻糖、半乳糖和半乳糖醛酸。该专利申请指出，依博素用于治疗可通过抑制IL-1活性得到缓解的疾病。同时在说明书中指出具体的疾病例如炎性疾病，败血性休克、风湿性关节炎、炎性肠疾病、急性或慢性骨髓白血病、胰岛素依赖性糖尿病、动脉粥样硬化、发热、病理性移植排斥反应，移植物抗宿主疾病等等。在说明书具体实施方式中，提供了依博素对小鼠叉角莱胶性足肿胀的抑制作用和对大鼠佐剂型关节炎模型中多发性关节炎的预防作用，说明依博素具有明显的抗炎作用。类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis，RA)是一种病因尚未明了的慢性异质性系统性疾病，属自身免疫性疾病。可能与感染、遗传和免疫机制紊乱等多种因素有关。主要表现为周围对称性的多关节慢性非特异性炎症。可伴有关节外的系统性损害，例如引起皮下类风湿结节、心包炎、心肌炎、肺纤维化、胸膜炎、脾肿大、肾淀粉样变、周围神经炎、动脉炎等多种病变，有时还可能侵犯眼睛，发生巩膜炎、虹膜炎。RA是一种T细胞介导性疾病，T细胞数量增加，使得巨噬细胞和成纤维细胞数增加，而后两者均与关节的破坏性病变有关。另外，细胞因子IL-1和TNF-ct可介导RA病人的关节破坏性病变。细胞因子释放也可导致成纤维细胞和滑膜细胞的增生，并产生具有破坏作用的金属蛋白酶(固P)，使B细胞、RF和免疫球蛋白生成增加。.综上可知，hIL-lra是治疗类风湿的一种，而依博素对类风湿的作用目前尚无相关文献报道。
发明内容本发明的技术方案是提供了依博素的新用途，具体地，是在制备具有类风湿性关节炎作用的药物中的用途。本发明提供了依博素在制备治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。本发明还提供了一种治疗类风湿性关节炎的药物组合物，它是含有有效量的依博素为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。其中，所述的药剂是口服制剂。本发明用于类风湿性关节炎作用的优点对治疗类风湿性关节炎的作用明显，而且毒副反应很低。具体实施例方式试验例1本发明药物类风湿性关节炎作用的试验一、实验目的试验依博素对n型胶原诱导大鼠关节炎形成的影响，考察其抗炎作用。二、实验动物Wistar大鼠，雄性，100±10g，按体重随机分组，正常对照组5只，其它各组各ll只，分为模型组、依博素三个剂量(62.5、125、250mg/kg)组、阳性对照药(地塞米松磷酸钠，Dexa)组。三、样品制备1.药物依博素(中国医学科学院医药生物技术研究所李元教授提供)，地塞米松磷酸钠(山西晋新双鹤药业有限责任公司产品)2.配制方法依博素以水溶解，配制成62.5、125和250mg/10mL;地塞米松磷酸钠以生理盐水溶解成O.1mg/10mL。3.给药剂量依博素为62.5、125和250mg/kg;地塞米松磷酸钠为0.1mg/kg，模型组10mL/kg。4.给药途径灌胃5.II型胶原(CII)乳剂的配制CII(购于Sigma公司)溶解于0.1moL/L醋酸中，浓度为4mg/mL，4°C过夜。将CII溶液滴加入等量冰冷的不完全弗氏佐剂中，充分乳化混合，制成CII乳剂，最终浓度为2mg/mL。四、实验方法1.II型胶原诱导的大鼠关节炎模型的建立大鼠于右后足跖皮内注射O.1mLCII乳剂致敏，对照组注射不含CII的不完全弗氏佐剂制成的乳剂。7天后于大鼠尾根部皮内注射0.1mL上述CII乳剂进行强化。致敏后第20天开始给药，至实验结束(第43天)。2.II型胶原诱导的大鼠迟发性变态反应在实验结束前24h，麻醉下于大鼠右耳皮内注射40L0.2mg/mL的CII乳剂，24h后处死大鼠，剪下左右耳廓，以8mm不锈钢铳子冲下左右耳片，称重，左右耳片重量差为其肿胀程度，与对照组比较，计算肿胀抑制率。3.II型胶原抗体的检测利用Chondrex公司的大鼠II型胶原抗体ELISA检测试剂盒检测各组大鼠血清中II型胶原抗体生成水平。4.II型胶原诱导大鼠关节炎模型中细胞因子的检测取II型胶原诱导的关节炎大鼠血清，利用服D公司的IL-1ELISA试剂盒检测IL-1的含量。5.ConA诱导的II型胶原大鼠关节炎模型脾细胞增殖的检测实验结束，无菌条件下取大鼠脾组织，以80和200目筛分离脾淋巴细胞，用含有或不含ConA(3mg/mL)的培养液培养细胞72h，在试验结束前6h加入3H-TdR，终浓度为0.5pCi/孑L，培养结束，用液闪仪检测细胞增殖。6、病理检查大鼠处死后，剪下大鼠踝关节以上胫骨部位，福尔马林固定，5%硝酸脱钙，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜检査踝关节病变程度。踝关节病变包括关节周围组织炎、关节滑膜炎(增生、脱落、炎症)、关节囊渗出、关节软骨损伤和关节纤维组织增生等病变。根据病变程度以半定量方法打分(0-3分)。并按各种病变的重要性乘以不同的加权数(软组织炎、滑膜炎、关节腔渗出和关节软骨损伤X1，纤维增生X3)。病变越严重，积分越高。求出每组动物积分平均值±标准差(mean±s)，经t检验进行比较。五、结果结果见表l5。依博素灌胃给药在中、高剂量时，对II型胶原诱导的大鼠迟发性变态反应的耳肿胀有明显的抑制作用，抑制率约为40%，对胸腺指数、脾脏指数无影响。对非注射侧和注射侧由n型胶原诱导的大鼠足肿胀无明显抑制作用。依博素在中、高剂量时对II型胶原诱导的大鼠关节炎模型血清中II型胶原抗体分泌和IL-1分泌有明显抑制作用。同时，依博素各剂量下对ConA刺激的脾细胞增殖均有明显的抑制作用。病理检査结果表明，依博素在250mg/kg剂量时非致炎侧和致炎侧踝关节病变不明显。病变总积分较模型组降低78.1%，统计学差异非常显著。依博素在125mg/kg剂量下致炎侧和非致炎侧踝关节炎症反应较轻，病变总积分较模型组降低62.9%，差异亦非常显著。六、结论依博素在剂量125、250mg/kg灌胃给药，对大鼠II型胶原性关节炎有明显的抑制作用。表l依博素对II型胶原诱导的大鼠关节炎踝关节肿胀的抑制作用(第43天)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>*尸〈0.05，***户<0.001，与模型组比较；糊户〈0.01，与对照组比较。括号内数值为肿胀抑制率(％)。.依博素在剂量62.5、125和250mg/kg时，对II型胶原性关节炎大鼠踝关节肿胀无明显的抑制作用。表2依博素对II型胶原诱导的大鼠关节炎模型血清IL-1分泌的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>**尸<0.01，***尸<0.001，与模型组比；##尸<0.01，与对照组比较。括号内数值为抑制率(％)。依博素在剂量125和250mg/kg下，明显抑制II型胶原诱导的关节炎大鼠血清中IL-1分泌水平，抑制率高达39.1%和65.3%，抑制IL-1分泌可能是依博素发挥抗炎免疫作用的机理之一。_表3依博素对II型胶原诱导的关节炎大鼠迟发性变态反应的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>2.括号内为抑制百分率。依博素在剂量125和250mg/kg下，对II型胶原诱导的关节炎大鼠血清中n型胶原玩体分泌有明显的抑制作用。表5依博素对ConA诱导的II型胶原大鼠关节炎模型脾细胞增殖的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>1.0.05，与对照组比较；*尸〈0.05，与模型组比较。2.括号内数值为脾细胞增殖抑制率(％)。依博素在剂量62.5、125和250mg/kg剂量下明显抑制由ConA诱导的II型胶原大鼠关节炎模型脾细胞增殖，抑制率分别为55.8、75.2和74.2%。权利要求1、依博素在制备治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。2、一种治疗类风湿性关节炎的药物组合物，它是含有有效量的依博素为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。3、根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于所述的药剂是口服制剂。全文摘要本发明提供了依博素的新用途，具体地，是在制备治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。本发明用于类风湿性关节炎作用的优点对治疗类风湿性关节炎的作用明显，而且毒副反应很低。文档编号A61K31/715GK101306007SQ20071004909公开日2008年11月19日申请日期2007年5月14日优先权日2007年5月14日发明者吴剑波,蓉姜,洋张,张宝华,彭红卫,曾裕建,元李,李好雨,李宝义,伟杨,石莲英,董兆勇,斌赵,郭连宏,陈春会申请人:中国医学科学院医药生物技术研究所;四川恒星生物医药有限公司