一种具有抗类风湿关节炎作用的铁包金多糖制剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药制药工程领域，涉及一种具有抗类风湿关节炎作用的多糖制剂， 特别是以铁包金为原料，提取出铁包金多糖并制成的中药制剂方法。
【背景技术】
[0002] 类风湿关节炎（RheumatoidArthritis，RA)是一种常见的以关节滑膜炎为特征的 慢性全身性自身免疫性疾病，滑膜炎持久反复发作，导致关节内软骨及骨的破坏，关节功能 障碍，终致残废。
[0003] 本病发病率很高，流行病学调查结果显示，国外类风湿关节炎的患病率约为1%，个 别地区甚至高达5%，国内则为0. 32-0. 38%。RA病因复杂多样，尚不明确，目前临床上所使用 的各种药物或方案疗法有的毒副作用大，有的治疗疗效效果差。因此，开发一种安全、有效 的用于治疗RA和改善症状的新药具有积极意义。
[0004] 铁包金Berchemialineate(L.)DC?是鼠李科植物老鼠耳的干燥根。生于低海拔 的山野、矮林、路旁、坡地及丘陵，分布于我国福建、台湾、湖南、广东、广西等地。多以茎根和 根入药，具有清热利湿、止咳等功效。已经有人对铁包金进行过相关的药理研究，发明人在 前期研究基础上，不断探索铁包金治疗类风湿关节炎的有效部分或有效成份，并将其制备 成治疗类风湿关节炎的中药制剂，经查新，未见用铁包金多糖研制治疗类风湿关节炎药物 的报道。
【发明内容】
[0005] 本发明人根据现代药理研究方法，依据类风湿关节炎相关的药效学研究指导原 贝1J，开展了一系列的治疗类风湿关节炎的研究工作，研究表明铁包金多糖具有抗类风湿关 节炎的作用。发明人将铁包金多糖制成多种制剂，并优化了多糖的制备方法。
[0006] 一、铁包金多糖的提取方法： 铁包金粗粉，加8-20倍水煎煮，滤液过滤，加聚酰胺脱色后滤过，滤液加澄清剂除杂， 滤液过S-8树脂，流出液浓缩，醇沉，收取沉淀物，即得。
[0007] 实施例一： 铁包金粗粉，加8倍量水煎煮2次，煎液过滤，加入聚酰胺脱色，过滤，滤液加入ZTC1+1 澄清剂除去杂质，取滤液过S-8树脂柱，将流出液浓缩，加入质量比为95%的酒精醇沉至含 醇量为60%，收取沉淀即得铁包金多糖。
[0008] 实施例二： 取铁包金粗粉，加20倍水，煎煮2小时，提取2次，提取液过滤，聚酰胺脱色2小时，过 滤，滤液加入ZTC1+1澄清剂除去杂质，滤液过S-8树脂，流出液浓缩，加入95%酒精至含醇 量为60%，收取沉淀物，即得含量>66%的铁包金多糖。
[0009] 二、铁包金多糖制剂的制备 具有抗类风湿关节炎(治疗类风湿关节炎）作用的铁包金多糖制剂的特征在于：以重量 计，铁包金多糖在中药制剂中所占的比例为0. 1%~99. 9%，余量为药剂辅料。
[0010] 铁包金多糖按常见的制剂制备方法，加入药剂辅料混匀，制成常见中药制剂。
[0011] 实施例一： 取铁包金多糖0.lg，置于混合器中，加入药用淀粉至l〇〇g，混匀，制成颗粒，装袋，即得 铁包金多糖颗粒剂。
[0012] 实施例二： 取铁包金多糖55g，置于混合器中，加入蔗糖粉至100g，混匀，制成颗粒，压片，即得铁 包金多糖片剂。
[0013] 实施例三： 取铁包金多糖99. 9g，置于混合器中，加入润滑剂至100g，混匀，分装，即得铁包金多糖 散剂。
[0014] 三、铁包金多糖的药理学试验 (一） 动物药理实验 对大鼠佐剂性关节炎的影响 取雄性大鼠5 0只，随机分成空白对照组（10ml蒸馏水/kg)，铁包金多糖高中低（0.5、 0. 25、0. 125g/kg)剂量组，阳性对照阿斯匹林（0. 2g/kg)组，每组10只。口服灌胃给药每天 1次，连续6d，末次给药后45min，测量左右后肢踝关节周长，于右后足内注射弗氏完全佐剂 致炎，致炎后第3天测量致炎右后足体积，以肿胀度（致炎前、后足体积差值）为指标，结果 见表1。
[0015] 表1对大鼠佐剂性关节炎的影响
与空白对照组比较：*K〇. 05; 01 结果表明，与白对照组比较，铁包金多糖大中小剂量组均可显著抑制右后足跖的肿 胀。显示较强的对抗佐剂性关节炎作用。
[0016] (二） 体外细胞实验 成纤维样滑膜细胞（fibroblast-likesynoviocytes,FLS)增殖是类风湿关节炎（RA) 的主要病理特征，过度增殖的FLS分泌细胞因子、趋化因子、粘附分子和蛋白酶等，在关节 破坏的发病机制中发挥重要作用。另外，FLS是炎性滑膜组织中数量最多的细胞类型，在炎 性条件下FLS类似肿瘤细胞样疯狂增长促进滑膜组织异常增生是RA炎症最重要的病理表 现，因此，FLS成为了近年来RA治疗研究的新热点，从滑膜组织中分离培养FLS成为研究药 物治疗及作用机制理想的体外细胞模型。
[0017] 1.佐剂性关节炎大鼠（AA)滑膜细胞的准备 模型的建立及细胞的分离： 取180-200g雄性Wistar大鼠，于右后足底注射0. 3ml弗氏完全佐剂，于造模后26天 取造模成功大鼠，处死后浸于75%乙醇液约8分钟后取出于超净工作台，局部碘伏及75%乙 醇消毒膝关节.从正中纵行切开皮肤.暴露膝关节，打开关节腔，继续向下分离，取位于关 节囊内层的滑膜组织。将滑膜组织在PBS中漂洗后，于小烧杯中剪成1_3左右大小，再以 含20%胎牛血清的DMEM培养液充分漂洗，至洗液清透后，吸取数小块均匀排列在培养瓶的 底壁上后翻转培养瓶，使瓶底朝上，置含5%C02的培养箱中37°C培养12-24h，使其贴壁，再 加入含20%胎牛血清的DMEM培养液，加入量为液体刚覆盖组织块，继续培养，每2天左右换 1次培养液，待有大量成纤维样细胞（FLS)长出组织块后去除组织块继续培养，取3-5代细 胞用于实验。
[0018] 2.MTT比色法检测药物对细胞增殖的作用 (1)实验方法：取处于对数生长期的滑膜细胞，经0. 25%胰酶消化后，反复吹吸使成单 细胞悬液，调整细胞浓度1X104个/ml，接种于96孔细胞培养板，每孔200y1，于37°C、 5%C02条件下培养48小时，各组加入20y1各浓度药物，每组8个孔，空白组加同体积含增 溶剂的PBS液，继续培养，分别于加药12h、24h、48h后加入MTT溶液（5mg/ml)20y1/孔，继 续培养4小时，弃上清液，加入二甲基亚砜（150y1/孔）室温震荡10分钟使结晶充分溶解 后，用酶标仪测于490nm波长处的0D值，记录实验结果。采用SPSS17. 0统计软件分析数据， 所得实验数据以均数土标准差（)表示，采用t检验作组间比较差异显著性。根据0D 值，代入公式：细胞抑制率（%) =1-细胞存活率=(1-用药组0D值/对照组0D值）X100%， 计算滑膜细胞存活率与细胞抑制率（IR)。
[0019] (2)实验结果 药物处理FLS不同时间细胞增殖活性的变化（n=8)
与空白对照组比较：*K〇. 05; 01 结果表明，与空白对照组相比，在药物干预12h、24h、48h时，铁包金多糖低剂量、 铁包金总黄酮低中剂量虽有抑制FLS增殖的趋势，但不明显，没有显示出统计学显著性 差异（/M). 05);铁包金多糖中高剂量和铁包金总黄酮的高剂量可明显抑制FLS的增殖 (K0. 05)，说明铁包金多糖及铁包金总黄酮组分均有抑制FLS增殖的作用。
【主权项】
1. 一种具有抗类风湿关节炎作用的铁包金多糖制剂，其特征在于：以重量计，铁包金 多糖在中药制剂中所占的比例为0. 1%~99. 9%，余量为药剂辅料，按常规制剂方法制成常 见药物剂型。2. 如权利要求项1所述的具有抗风湿关节炎作用的铁包金多糖制剂的原料铁包金多 糖的制备方法，其特征为：取铁包金粗粉，加8-20倍水煎煮，滤液过滤，加聚酰胺脱色后滤 过，滤液加澄清剂除杂，滤液过S-8树脂，流出液浓缩，醇沉，收取沉淀物，即得。3. 如权利要求项1所述的具有抗风湿关节炎作用的铁包金多糖制剂其特征在于：原料 铁包金多糖优化后的制备方法是取铁包金粗粉，加20倍水，煎煮2小时，提取2次，提取液 过滤，聚酰胺脱色2小时，过滤，滤液加入ZTC1+1澄清剂除去杂质，滤液过S-8树脂，流出液 浓缩，加入95%酒精至含醇量为60%，收取沉淀物，即得含量>66%的铁包金多糖。4. 如权利要求项1所述的具有抗风湿关节炎作用的铁包金多糖制剂，其特征在于该制 剂应用于治疗类风湿关节炎疾病。
【专利摘要】本发明涉及一种具有抗类风湿关节炎作用的铁包金多糖制剂的制备方法。该多糖系从药材铁包金中提取获得。以铁包金多糖为原料，然后采用药物制剂成型的常用方法，制备成临床使用的药物。药理实验结果表明，该制剂具有抗类风湿关节炎作用。
【IPC分类】A61K31/715, A61P29/00, A61P19/02, A61K36/72
【公开号】CN105055437
【申请号】CN201510418714
【发明人】吴玉强, 罗轶, 熊易
【申请人】广西中医药大学
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2015年7月16日