专利名称：：一种丹参总酚酸的制备方法及其在防治糖尿病及并发症中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种水溶性提取物丹参总酚酸的制备方法及其在制药领域的新用途。具体地说，即丹参的水溶性提取物丹参总酚酸的制备方法，以及该提取物在防治糖尿病及其并发症上的应用。
背景技术：
：丹参(RadixSalviae)，别名血生根、赤参、血参、红根。英文名RootofDan-Shen，为唇形科植物丹参(SalviamiltiorrhizaBunge)的干燥根及根茎，是著名的活血化瘀中药，神农本草经列为上品。丹参的化学成分主要分为脂溶性和水溶性两类。水溶性成分主要是丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸A、B、C、D、E、F、G等。这些成分多具有酚酸性结构，最早发现的丹参素化学名为P-3,4-二羟苯乳酸(D(+)(3，4-Dihydroxyphenyl)lacticacid)是各种丹酚酸的基本化学结构，丹酚酸A(salvianolicacidA)是一分子丹参素与两分子咖啡酸缩合而成；丹酚酸B(salvianolicacidB)为三分子丹参素与一分子咖啡酸缩合而成；丹酚酸C(salvianolicacidC)则为二分子丹参素縮合而成，丹参的脂溶性成分大多为共轭醌、酮类化合物，具有特征的橙黄色和橙红色。丹参素为丹参的主要活性成分，具有抗心肌缺血的作用，为治疗冠心病的主要成分，它能明显扩张冠状动脉，使其血流量显著增加；原儿茶醛为抗心绞痛的主要成分；总酚酸类成分具有很强的抗脂质过氧化和清除自由基等作用，并有缩小脑梗塞面积、减轻脑水肿的功效，离体研究发现其抗氧化作用极为明显。近年的研究进一步表明丹酚酸类的抗肝脏损伤、抗动脉粥样硬化及细胞凋亡以及改善记忆功能障碍等方面有着显著的活性，对艾滋病病毒具有抑制作用，实验表明，丹酚酸类成分在低浓度时可以抑制细胞病变、抑制病毒抗原表达和病毒的产生。其中含量最高的两个成分丹酚酸A(SalA)和丹酚酸B(SalB)活性最强，对脂质过氧化引起的细胞膜损伤有明显的保护作用(中国专利CN01110378,7)。糖尿病是现代疾病中的第二杀手，其对人体的危害仅次于癌症。糖尿病本身并不可怕，可怕的是糖尿病的并发症，糖尿病带来的危害，几乎都来自它的并发症。糖尿病的并发症包括急性并发症和慢性并发症，慢性并发症有糖尿病肾病、糖尿病眼病、糖尿病神经病变、糖尿病足、糖尿病心、脑大血管病变，主要是由于血糖长期异常，日积月累而引起的一种改变，包括大血管、微血管和神经病变，可使人们健康水平和劳动能力大大下降。甚至造成残废或过早死亡。预防糖尿病只是我们的第一道防线；当这道防线被击溃后，我们还有第二道防线，预防糖尿病并发症；还有第三道防线，降低糖尿病慢性并发症引起的残废和早亡。由于糖尿病本身及其合并症对人们的身心健康危害越来越大，因此，我们有必要寻找更好的药物和治疗方法来攻克这一世界难题。在我国，糖尿病肾病的发病率大约为40%。糖尿病肾病的发生是由多因素共同作用的结果糖代谢紊乱、肾脏血流动力学的改变、多种细胞因子以及遗传背景均起非常重要的作用。目前，糖尿病肾病的治疗措施包括控制血糖，控制血压，蛋白质摄入限制，控制血脂，透析，肾移植等。目前已有大量涉及丹参治疗糖尿病并发症的报道，中国专利CN1534010A在2004年公开了丹参水提物用于治疗高血压伴糖尿病肾病的用途，该提取物主要包含有丹参酚酸B、丹参素、原紫草酸三种丹参酚酸在内的丹参酚酸成分；中国专利CN1651433A在2005年公开了丹酚酸黄连素复合盐在防治糖尿病慢性并发症上的用途。丹参能改善糖、脂代谢，降低患者空腹血糖和糖化血红蛋白水平，有改善血管内皮、降低动脉粥样硬化的形成等功效(《中成药》Vol.27.No.12:附7-附8，2006)。丹参可清除自由基，抗脂质过氧化纠正6-keto-PGFla/TXB2失衡，抑制血小板活化和聚集，增加神经的血液灌注，改善神经缺氧缺血，长期应用可以有效地防治糖尿病神经病变和糖尿病其他慢性并发症的发生与发展(《中成药》Vol.28.No.5:701-702，2006)，同时丹参能改善2型糖尿病患者血管病变、神经病变和受损的血管平滑肌舒张功能，治疗ED，改善性功能。(《中成药》Vol.28N0.7:1084-1086，2006)。丹参可以使糖尿病肾病治疗组大鼠TGF-J31、CTGF、PAI-1等细胞因子的表达较糖尿病肾病模型组有明显下降，说明丹参可显著降低糖尿病肾病大鼠肾脏TGF-J31、CTGF、PAI-l等细胞因子的表达水平、减少ECM的沉积、縮小肾小球体积、减少尿白蛋白的排泄，从而起到较好的保护肾脏的作用。(《中西医结合学报》Vol.3，No.6:459-462，2005)。但是目前用于糖尿病并发症的丹参制剂大部分属于中药复方制剂、复盐制剂或丹参浸膏初提物及某一种单体，如丹酚酸A、丹酚酸B，治疗效果不甚明显；同时，缺乏目前临床上常用药物的比较数据。而本发明通过精制提取得到的丹参总酚酸，不仅含有较多的丹酚酸B，还含有接近相同比例的丹酚酸A，两者在该总酚酸中的比例高达90%。相比于其他提取物制剂，该总酚酸不仅能温和地降低血糖，而且可以通过改善血脂紊乱、降低血液流变性等机制，更好地发挥丹参防治糖尿病并发症的作用。
发明内容本发明通过精制提取得到的丹参总酚酸，更好地发挥了丹参总酚酸防治糖尿病并发症的作用，主要是糖尿病肾病、肝损伤及患者血液流变性的改变。本发明的丹参总酚酸提取工艺包括如下步骤(1)提取丹参粗粉，加410倍量的水或醇水溶液提取24次，每次1.02.O小时，滤过；(2)柱层析纯化总酚酸合并滤液离心(4000转/分钟)10分钟，取上清液过D1400型大孔吸附树脂柱，先用水洗至糖检测反应为阴性，改用1035%醇水溶液洗210倍柱体积；(3)用4080%醇水溶液洗脱，收集洗脱液，同时分析测定洗脱液中丹酚酸A和丹酚酸B的含量，当丹酚酸A:丹酚酸B=0.901.10:1时，收集该部分洗脱液，6(TC减压浓縮洗脱液至无醇味；(4)调PH值，有机溶剂萃取加盐酸调节PH值至35，用洗脱液12倍量体积的有机溶剂萃取24次，合并有机溶剂相；(5)浓縮干燥减压浓縮萃取液至浸膏状，6(TC真空干燥6小时，得黄色粉末，即丹参总酚酸。该工艺提取的丹参总酚酸中主要成分为丹酚酸A和丹酚酸B，两者的比例为丹酚酸A:丹酚酸B二O.901.10:1，两者在总提取物中含量高达90%。步骤(1)、(2)、(3)里的醇水溶液指的是甲醇、乙醇、丙醇、丁醇的水溶液，或它们的混合物。步骤(4)中所述的有机溶剂指的是乙酸酯类。可以是乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯或它们的混合物。用该提取工艺得到的丹参总酚酸结合药学上可以接受的辅料和(或)载体可制成各种制剂，如丹酚酸胶囊制剂、片剂、注射剂。经实验证明，相对于其他治疗糖尿病及并发症的药物，利用本发明制备的提取物制成的丹酚酸胶囊制剂具有更好的安全性和疗效。通过药理试验表明，给予高、中、低剂量丹酚酸胶囊能显著降低2型糖尿病大鼠低切、中切、高切的全血粘度，降低红血浆粘度、卡松粘度和红细胞电泳指数，改善血液流变性，有较强的活血化瘀作用；并通过改善2型糖尿病大鼠的血液流变性，来改善其糖代谢异常、改善脂代谢紊乱、改善肝肾功能、改善自由基代谢异常等作用，从而使2型糖尿病的并发症得到明显的改善，其肝、肾等组织得到保护作用，有效防止或延缓2型糖尿病的并发症进一步发展。利用本发明制备的提取物制成的丹酚酸胶囊制剂可以通过降低NO和N0S的产生，降低尿酸(UA)、肾小球肌酐清除率(Ccr)、U-TP排泄率、U-ALB排泄率和尿糖排泄率等药理作用防治糖尿病肾病。连续8周给予高、中剂量丹酚酸胶囊可明显降低在血清中ALT水平(P〈0.05，P〈0.01)，且呈现一定的剂量关系，高剂量丹酚酸胶囊在肝组织保护作用上强于阳性对照组；说明丹酚酸胶囊有改善肝功能的作用。与盐酸罗格列酮比较，丹酚酸胶囊虽然在降糖降脂作用弱于5mgkg—'盐酸罗格列酮，但在改善2型糖尿病大鼠的血液流变性、降低血小板聚集的作用，改善脂代谢和蛋白代谢、保护对肝、肾功能和防止或延缓2型糖尿病的并发症进一步发展均优于5mgkg—'盐酸罗格列酮，尤其是防止或延缓2型糖尿病的并发症，丹酚酸胶囊的治疗效果更佳。同时试验结果中各种指标的改善均优于目前市场上或文献报道试验中使用的各种丹参制剂。丹酚酸胶囊的安全药理性研究表明，该制剂具有良好的安全性，相关毒理学研究结果如下1、"丹酚酸胶囊"对小鼠骨髓嗜多染红细胞无微核诱发作用。2、丹酚酸胶囊长期毒性试验表明，SD大鼠连续六个月经口给予高达相当于大鼠有效剂量的30倍、人临床拟用剂量的168倍的"丹酚酸胶囊"对SD大鼠无明显的毒副反应，中毒靶器官和中毒剂量也未明显显示，毒副反应剂量为4.5g/(kg.d)，并呈可逆性，安全剂量为1.5g/(kg.d)，无毒(影响)剂量为0.5g/(kg.d)。3、根据丹酚酸胶囊大鼠、小鼠急性毒性试验结果表明健康清洁级SD大鼠和ICR小鼠分别单次经口(po)和腹腔注射(ip)给予丹酚酸胶囊，对大、小鼠经口给予丹酚酸胶囊的最大耐受量为(l).大鼠>15.0g/kg，(2).小鼠〉10.Og/kg;对大、小鼠腹腔注射(ip)给予丹酚酸胶囊的急性半数致死量(LD5U)及95%可信限值分别为(l).大鼠1.11(0.941.32)g/kg，(2).小鼠1.99(1.652.40)g/kg4、小鼠经口给予丹酚酸胶囊在高达46倍动物等效剂量条件下显示对个别小鼠精神神经系统有轻微影响，主要表现为自主活动数略增加。对犬心血管系统、呼吸系统和体温也无明显影响。对小鼠精神神经系统无明显影响；对犬心血管系统、呼吸系统和体温也无明显影响。5、根据丹酚酸胶囊长期毒性试验，Beagle犬连续九个月经口给予相当于犬等效剂量16倍的丹酚酸胶囊未见明显的不良反应，中毒靶器官和中毒剂量未明显显示，丹酚酸胶囊对Beagle犬的安全剂量大于0.8g/(kg.d)综上可见本发明具有以下优点1.本发明提出了一种新方法提取丹参总酚酸的新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域。2.本发明的丹参总酚酸提取物是从常用中草药中分离提取得到的，安全性高，药理作用强，有着很好的药用前景。3.本发明的化合物采用的提取技术所得的化合物有效成分含量高，原料来源广泛，适合大生产的工艺要求。4.用本发明的提取物制备的药物具有较明显的改善2型糖尿病并发症的作用，低剂量的情况下即具有一定的药效，并呈现一定的剂量关系。5.本发明的物质在改善大部分2型糖尿病并发症的作用上明显优于目前市场上常用的5mgkg—'盐酸罗格列酮。6.本发明的物质经过安全药理试验证明其具有良好的安全性。图说明1丹酚酸A对照品2丹酚酸B对照品3实施例l产品4实施例2产品5实施例3产品6实施例4产品高效液相含量测定图高效液相含量测定图高效液相含量测定图高效液相含量测定图高效液相含量测定图高效液相含量测定图具体实施例方式下面结合具体实施方式对本发明进行进一步说明。实施例l:丹参总酚酸的制备1、水提取(温浸法)丹参粗粉1000g，力卩8倍量水8(TC温浸3次，每次l.O小时，滤过。2、柱层析纯化总酚酸合并滤液离心(4000转/分钟)10分钟，取上清液过D1400型大孔吸附树脂柱，先用水洗至糖检测反应为阴性，改用20%乙醇洗脱10倍柱体积。(3)用50%的乙醇洗脱，收集洗脱液，同时分析测定洗脱液中丹酚酸A和丹酚酸B的含量，当丹酚酸A:丹酚酸B=0.901.10:1时，收集该部分洗脱液，6(TC减压浓縮洗脱液至无醇味；(4)调PH值，有机溶剂萃取加盐酸调节PH值至3，用洗脱液1.5倍量体积的有机溶剂萃取4次，合并有机溶剂相；附5、浓缩干燥减压浓縮萃取液至浸膏状，6CTC真空千燥6小时，得淡黄色粉末，即丹参总酚酸步骤(3)中洗脱液的含量测定方法同产物的含量测定方法，具体如下使用仪器类型高效液相色谱仪检测器紫外检测器仪器型号Agilent1100检测波长285nm柱型号KromasilKR100-7C18柱(250X4.6mm)梯度方法恒流积分方法面积归一法所得的丹参总酚酸中丹酚酸A和丹酚酸B的比例为0.99:1实施例2与实施例1基本相同，所不同的是提取过程为60%乙醇水溶液回流提取。具体方法如下丹参粗粉，加10倍量60%乙醇回流提取3次，每次1.5小时，滤过。所得的丹参总酚酸中丹酚酸A和丹酚酸B的比例为0.96:1实施例3与实施例l基本相同，所不同的是柱层析纯化总酚酸时用20%乙醇洗脱8倍柱体积。所得的丹参总酚酸中丹酚酸A和丹酚酸B的比例为0.96:1实施例4与实施例l基本相同，所不同的是调PH值，有机溶剂萃取时加盐酸调节PH值至5。所得的丹参总酚酸中丹酚酸A和丹酚酸B的比例为0.96:1实施例1-4的含量测定结果见表1表l:实施例l-4所得的丹参总酚酸的含量测定结果<table>complextableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>实施例5将实施例l中得到的丹参总酚酸浸膏粉末50g，加入淀粉100g，混合均匀，75%乙醇为润湿剂，混合均匀，湿法制粒，烘干、整粒，加入1%硬脂酸镁，填入胶囊壳即得丹酚酸胶囊。实施例6将实施例1中得到的丹参总酚酸浸膏粉末(丹酚酸胶囊)进行相关药效学试验，结果详见丹酚酸胶囊对2型糖尿病大鼠的影响，具体如下1、实验方法取体重为300土20g的雄性SD大鼠100只，用30mgkg—'的链尿佐菌素(STZ)尾静脉注射加高脂高糖饲料饲喂造成2型糖尿病大鼠模型，7天后筛选血糖在24-28iranol/L的糖尿病大鼠60只，按血糖值和体重随机分成5组，即模型对照组、高(200mgkg—'丹酚酸浸膏粉)、中(100mgkg—'丹酚酸浸膏粉)、低(50mgkg—1丹酚酸浸膏粉)剂量的丹酚酸胶囊组、阳性对照组(5mgkg—'盐酸罗格列酮)；每组12只，另取12只正常大鼠作正常对照组。高、中、低剂量组分别灌胃给予相应剂量丹酚酸胶囊，阳性对照组灌胃给予5mgkg—'盐酸罗格列酮，模型对照组和正常对照组灌胃给予生理盐水10ml，kg—嘴重，每日给药一次，连续给药8周，每周称大鼠体重、测定空腹血糖，隔周取血测定TC、TG、HDL-c、LDL-c、F丽、T-P、ALB、BUN、Crea、UA、AST、ALT和代谢试验取尿测定U-GLU、U-TP、U-ALB等生化指标，给药结束后，进行血液流变学、血小板聚集率及血清SOD、MDA、NO、NOS等指标测定和肝脏、肾脏等组织进行病理形态学分析，观察丹酚酸胶囊对大鼠2型糖尿病及其并发症的影响；并与阳性对照品盐酸罗格列酮5mgkg-'进行比较。2、实验结论2.1改善血液流变性对试验大鼠进行了血液流变学测定结果表明，2型糖尿病模型大鼠的血液粘滞性和红细胞流变性发生异常，在低切、中切、高切三种状态下的全血粘度增高，血浆粘度、卡松粘度、血小板聚集率、红细胞刚性指数和红细胞电泳时间均有不同程度升高，以上说明血液粘滞性和红细胞流变性发生变化；给予丹酚酸胶囊可显著降低2型糖尿病模型大鼠在低切、中切、高切三种状态下的全血粘度，可不同程度地降低血浆粘度、卡松粘度、血小板聚集率和红细胞电泳时间(见表2)，且呈现一定的剂量关系，高、中剂量丹酚酸胶囊明显强于阳性对照组；证明丹酚酸胶囊能改善2型糖尿病大鼠血液的"粘"、"浓"、"凝"、"聚"状态，具有的活血化瘀作用。表2丹酚酸胶囊对2型糖尿病大鼠血液流变性的影响(X±s)组别(药物与剂量)=2纟工细胞顿鹏血浆粘度，、聽大聚集率电泳时间高切中切低切(即as.s)卡松粘度(%)(mPa.s)(mPa.s)(mPa.s)正常对照组44.1119.484.925.7211.751.142.14±10.08±2.83±0.42±0.51±1.31±0.22±0.17模型对照组61.1123.105.967.0813.931.442.55±7.22"±2.49"±0.75"±0.92"±1.62"±0.10"±0.27"低剂量组57.0919.865.306.2812.561.252.38±11.59±2.13*±0.57*±0.69*土1.2CT±0.13"±0.20中剂量组53.0018.965.065.9711.941.262.26±8.62*±1.53"±0.4广±0.5(T±0.98"±0.12**±0.25*高剂量组49.6717.944.875.7611.821.232.21±10.63*士1.7广±0.52"±0.65w±1.33"±0.14"±0.2广阳性对照组58.1719.405.266.2312.461.292,38±7.54±1.88—±0.51*±0.63*±1.13'±0.14*±0.18注--与正常对照组比较，卞<0.05，"P<0.01;与模型对照组比较组，卞<0.05，，<0.01。2.2控制血糖本实验研究发现，2型糖尿病大鼠与正常对照组比较，血糖(GLU)和糖化血清蛋白(F丽)持续显著升高(P〈0.0D，虽然丹酚酸胶囊在降糖作用要弱于阳性对照组，但是连续给药8周，高、中剂量丹酚酸胶囊的糖尿病大鼠血糖和果糖胺明显降低(P〈0.01)，且呈现一定的剂量关系；同时能改善糖尿病大鼠精神萎靡，反应迟钝，毛竖无光泽，动作迟缓，尾部粘稠，多饮多尿等的症状，从而使糖尿病的血糖得到较好的控制，并使2型糖尿病并发症渐趋稳定和改善。2.3改善脂代谢紊乱2型糖尿病某些并发症肾病、脂肪肝、动脉粥样硬化、中风与脂代谢紊乱亦有密切关系，并且这种紊乱在2型糖尿病早期就己存在。本实验研究发现，糖尿病肾病大鼠总胆固醇TC、甘油三酯TG、低密度脂蛋白胆固醇(LDH-c)和TC/HDL-c比值显著升高(P〈0.01)，本研究结果显示，虽丹酚酸胶囊降脂作用要弱于阳性对照组，但是连续给药8周，高、中剂量丹酚酸胶囊可明显降低糖尿病大鼠血清甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和TC/HDL-c比值水平，且呈现一定的剂量关系(见表3)，说明对脂质代谢具有一定的改善作用。表3丹酚酸胶囊对2型糖尿病大鼠脂代谢紊乱的影响(第8周)(X士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注与正常对照组比较，AP<0.05，"P〈0.01;与模型对照组比较组，*P〈0.05，，〈0.01。2.4改善肾功能紊乱糖尿病肾病大鼠的血尿酸(UA)水平明显上升，同时肾小球肌酐清除率(Ccr)、U-TP排泄率、U-ALB排泄率和尿糖排泄率显著升高，本研究结果显示，连续8周给予高、中剂量丹酚酸胶囊可明显降低尿酸(UA)、肾小球肌酐清除率(Ccr)、U-TP排泄率、U-ALB排泄率和尿糖排泄率(P<0.05，P<0.01)，且呈现一定的剂量关系(见表4)，高、中、低丹酚酸胶囊与阳性对照组相当或强于阳性对照组；同时具有降低血肌酐的趋势，同时本研究发现给予丹酚酸胶囊后糖尿病大鼠的BUN有明显升高的趋势，且剂量越高BUN升高的趋势越明显，其升高原因可能是给予丹酚酸胶囊后促进糖尿病大鼠体内蛋白合成增加。表4丹酚酸胶囊对2型糖尿病大鼠肾功能紊乱的影响(第8周)(X±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注与正常对照组比较，AP<0.05,"P〈0.01;与模型对照组比较组，*P<0.05，**P<0.01。2.5改善肝功能2型糖尿病大鼠血清中ALT水平明显上升，连续8周给予高、中剂量丹酚酸胶囊可明显降低在血清中ALT水平(P<0.05，P〈0.01)，且呈现一定的剂量关系，高剂量丹酚酸胶囊在肝组织保护作用上强于阳性对照组；说明丹酚酸胶囊有改善肝功能的作用。2.6NO和NOS参与改善肾小球滤过率2型糖尿病大鼠血清NO和NOS生成显著高于正常对照组，表明糖尿病肾病大鼠的滤过率明显升高，与临床表现一致。连续8周给予高、中、低剂量丹酚酸胶囊的糖尿病大鼠能明显降低N0和N0S的产生(P〈0.05，P<0,01)(见表4)，提示糖尿病肾病大鼠的肾小球滤过状态的得到明显的改善作用。2.7改善自由基代谢异常糖尿病模型对照组大鼠血清中MDA水平显著升高，同时SOD水平显著下降，连续8周给予高、中剂量总酚酸胶囊具有显著降低血清MDA和升高SOD水平，且呈现一定的剂量关系(见表5)，高剂量丹酚酸胶囊在清除自由基和抗氧化作用上要强于阳性对照组，提示丹酚酸胶囊能改善自由基代谢异常，抑制自由基的脂质过氧化，保护抗氧化酶的活性，增强自由基的清除，保护细胞膜的稳定性，保护血管内皮的作用，使大鼠2型糖尿病的症状得到明显的改善作用。表5丹酚酸胶囊对2型糖尿病大鼠血清S0D、MDA、NO和NOS的影响(S±s)组别SODMDANONOS(药物与剂量)(Uml—')o(ymoll墨')(Uml—')正常对照组125.16±8.129.19±1.5625.68±4.6840.18±1.42模型对照组96.46±18.07"12.41±1.81"37.59±8.72"53.10±6.94"低剂量组106.76±20.1810.80±3.8036.84土12.5151.75±5.30中剂量组120.39±8.99**9.49±1.67**35.95±7.4544.33±2.8广高剂量组121.94±6.34**9.00±0.79**33.11±5.0847,10±3.50*阳性对照组120.41±4.73**9.52±1.04**27.61±8.04*44.85±7.24*注与正常对照组比较，&P<0.05,"P〈0.01;与模型对照组比较组，*P<0.05，"P<0.01。2.8改善糖尿病大鼠肝肾组织的病理学变化模型对照组大鼠肾脏大量肾小管上皮细胞空泡样变，肾小球体积显著增大，肾小球内细胞增多，基底膜增厚，且有细胞性新月体开始形成。与模型对照组相比，丹酚酸胶囊各给药组均有不同程度改善肾脏病理变化，低、中剂量组大鼠肾脏肾小球体积轻度增大，基底膜增厚较模型组轻，未见新月体形成。与阳性对照(罗格列酮)组相比，中剂量组丹酚酸胶囊对糖尿病大鼠肾脏的病理改变作用与阳性对照组相当，高剂量组大鼠肾脏对肾脏改善作用显著，优于阳性对照组。模型对照组大鼠肾脏部分肾小管上皮细胞空泡样变，肾小球体积增大，系膜增生，基底膜显著增厚，染色呈强阳性。与模型对照组相比，丹酚酸胶囊低剂量给药组大鼠肾脏PAS染色阳性物质减少，中、高剂量丹酚酸胶囊组PAS染色阳性物质减少显著，高剂量组大鼠肾脏基底膜轻微增生，PAS染色阳性物质接近正常。丹酚酸胶囊中剂量组大鼠肾脏PAS染色阳性物质略少于或相当于阳性对照(罗格列酮)组，基底膜均轻度增生，丹酚酸胶囊高剂量组大鼠肾脏PAS染色阳性物质较阳性对照组少，接近正常组。模型组大鼠肝脏大量肝细胞浊肿，细胞内大量细小脂滴，胞质呈网丝状，且部分肝细胞呈气球样变。丹酚酸胶囊各剂量组肝脏与模型对照组大鼠肝脏相比均有不同程度改善，肝细胞浊肿数目减少，脂滴空泡化减轻，与阳性对照(罗格列酮)组大鼠肝脏比较，丹酚酸胶囊中、高剂量组大鼠肝脏脂滴空泡化程度较轻。本发明所要求保护的具体技术方案，不限于上述实施例所表达的技术方案的具体组合。权利要求1、一种丹参总酚酸的制备方法及其在防治糖尿病及并发症中的应用，所述的丹参总酚酸的制备方法，包括如下步骤(1)提取丹参粗粉，加4～10倍量的水或醇水溶液提取2～4次，每次1.0～2.0小时，滤过；(2)柱层析纯化总酚酸合并滤液离心(4000转/分钟)10分钟，取上清液过D1400型大孔吸附树脂柱，先用水洗至糖检测反应为阴性，改用10～35％醇水溶液洗2～10倍柱体积；(3)用40～80％醇水溶液洗脱，收集洗脱液，同时分析测定洗脱液中丹酚酸A和丹酚酸B的含量，当丹酚酸A∶丹酚酸B＝0.90～1.10∶1时，收集该部分洗脱液，60℃减压浓缩洗脱液至无醇味；(4)调PH值，有机溶剂萃取加盐酸调节PH值至3～5，用洗脱液1～2倍量体积的有机溶剂萃取2～4次，合并有机溶剂相；(5)浓缩干燥减压浓缩萃取液至浸膏状，60℃真空干燥，得黄色粉末，即丹参总酚酸，其中丹酚酸A和丹酚酸B的总含量在90％以上，丹酚酸A∶丹酚酸B＝0.90～1.10∶1。2、权利要求1所述的丹参总酚酸的制备方法，步骤(1)、(2)、(3)中所述的醇水溶液指的是甲醇、乙醇、丙醇、丁醇的水溶液，或它们的混合物。3、权利要求1所述的丹参总酚酸的制备方法，步骤(4)中所述的有机溶剂指的是乙酸酯类。4、权利要求3所述的丹参总酚酸的制备方法，其中乙酸酯类可以是乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯或它们的混合物。5、由权利要求1所述的丹参总酚酸的制备方法得到的丹参总酚酸在防治糖尿病及并发症中的应用，所述的糖尿病指的是2型糖尿病。6、权利要求4所述的丹参总酚酸在防治糖尿病及并发症中的应用，其中所述的并发症指的是糖尿病肾病、糖尿病肝病及糖尿病引起的患者血液流变性的改变。全文摘要本发明涉及一种丹参总酚酸的制备方法及其在制药领域的新用途。本发明所述的丹参总酚酸的制备方法包括以下步骤丹参粗粉加水或醇水溶液提取；柱层析纯化总酚酸；醇水溶液洗脱，减压浓缩洗脱液；调节pH值，有机溶剂萃取；浓缩干燥，即得丹酚酸A和丹酚酸B总含量在90％以上的丹参总酚酸。药效和药理研究表明，利用本发明的丹参总酚酸，可以制备具有很好的防治2型糖尿病及其并发症的药物，包括糖尿病肾病、肝病及糖尿病引起的患者血液流变性的改变。研究表明，本发明的丹参总酚酸及其制剂药理作用强，安全可靠，具有很好的药用前景。文档编号A61K31/343GK101095720SQ200710070020公开日2008年1月2日申请日期2007年7月16日优先权日2007年7月16日发明者柴建国,王木兰,黎豫杭申请人:正大青春宝药业有限公司