专利名称：：白英总皂苷提取物及制备方法和用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及中药，具体涉及一种中药的提取物及其制备方法与在制备治疗胃炎、胃和十二指肠溃疡、银屑病的药物中的用途。
背景技术：
：中药白英始载于《神农本草经》，列为上品。也有别称白毛藤、蜀羊泉、排风藤等。白英己收载于《中华人民共和国药典》1977年版一部中。白英为茄科植物，资源丰富，其味甘、苦，性寒。有清热、解毒、祛风、利湿、化瘀等功效。用于治疗湿热黄疸、风湿关节痛、白带过多、水肿、淋病、丹毒、疔疮、癌瘤。现代研究表明，白英中的主要化学成分为甾体皂苷和生物碱苷类。其水提取物具有抗肿瘤作用，从其同属植物欧白英中提取得到的中性甾体皂苷则有抗真菌的作用。CN1634295A公布了一种具有消炎作用的白英总生物碱甾体的制备方法，CN1943676A公布了一种白英凝胶剂的制法及其在在治疗湿疹和真菌性皮肤病方面的应用。但是，关于白英总皂苷及其在制备治疗胃炎、胃和十二指肠溃疡、胃癌、银屑病的药物的用途，目前并无相关记载或报道。胃炎包括多种胃粘膜炎症，可以分为急性胃炎和慢性胃炎，慢性胃炎可分为浅表性胃炎、萎縮性胃炎、肠化生和典型增生。胃炎可能演变为胃癌，尤其是萎縮性胃炎、肠化生和典型增生阶段。胃炎主要采用对症治疗方法，包括根除幽门螺杆菌、保护胃粘膜等。消化性溃疡主要指发生于胃和十二指肠的慢性溃疡，主要釆用抑酸、保护胃粘膜和抗幽门螺杆菌治疗。银屑病是一种以表皮过度增殖、伴角化不全及真皮淋巴细胞浸润为特征的慢性皮肤病，涉及到天然免疫、血管新生、T细胞激活和外溢至皮肤、角质形成细胞增生等多个环节，主要治疗药物有皮质激素类、维甲酸类、维生素D衍生物等，虽然显示一定短期疗效，但不能达到治愈效果。
发明内容本发明要解决的技术问题在于研究一种白英总苷提取物及其制备方法，以及它在制备治疗胃炎、胃和十二指肠溃疡、胃癌、银屑病的药物的用途本发明提供了一种白英总苷提取物，其含有重量百分比为10%90%白英总皂苷，更优选的是其含有重量百分比为35%90%的白英总皂苷。本发明所述的白英总皂苷，含有一种或几种以下结构的甾体皂苷<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>R=3_<"arhamnopyranosyl-(1—2)-[P-D-glucopyranosyl-(1—3)]-P_D-glucuronopyranoside蜀羊泉苷CR二3-(9"P_D-Glucopyranosyl-(1—3)_0-D-galactopyranosideS-苦茄碱R=3——L—Rhamnopyranosyl—(1—2)—a—L—rhamnopyranosyl—(1—4)-p-D-glucopyranoside薯蓣皂苷。本发明的另一目的是提供了上述白英总皂苷的制备方法，该方法包括下列步骤1、提取将原药材经过粉碎后，用水、甲醇或乙醇，或含水醇类，用量为药材重量的4-10倍，室温或加热(包括回流)提取13小时，可重复提取13次，然后滤去药渣，滤液在常压或减压下浓縮至无醇味，得到浓缩液，静置备用；其中，提取用溶剂以50%95%乙醇为佳，乙醇用量为药材量的410倍，6倍为佳。2、分离上述提取液通过分离制备得到白英总皂苷，分离方法可采用以下两种方法之(1)正丁醇萃取法其制备步骤为浓縮液以正丁醇0.5倍量至3倍量萃取1-6次(V/V)，萃取后，蒸干，得浸膏，所得浸膏再加1-6倍量的石油醚洗涤，弃去洗涤液，固体干燥得白英总皂苷提取物；(2)大孔树脂层析法其制备步骤为浓縮液以石油醚0.5倍量至3倍量萃取l-6次(V/V)脱脂，所得水层上树脂柱，以水及稀醇(醇浓度<30%)洗涤，再用50-95%乙醇洗脱，收集洗脱液，浓縮，浓縮液干燥即得白英总皂苷；上述方法制得的白英总皂苷提取物，可进一步精制纯化以提高总皂苷含量。如上述b中所述浓縮液以正丁醇0.5倍量至3倍量萃取1-6次(V/V)，正丁醇萃取液再以酸(0.1%-1%的盐酸溶液)，碱(0.1%-1%的氢氧化钠或碳酸钠溶液)洗涤，并以水洗至中性，浓缩，干燥，可得到含量更高得白英总皂苷提取物。通过上述方法制备的白英总皂苷，为黑色或黄色固体，以紫外分光光度法可以测定其总苷含量为10%90%，优选的是其总苷含量为35%90%。本发明的又一目的是提供了上述白英总苷提取物在制药中的应用。本发明将用上述方法制得的白英总苷提取物进行了一系列的药理活性筛选评价，结果显示其有显著的抗炎、保护胃粘膜、抑制幽门螺杆菌、抗胃癌细胞增殖、抗角质形成细胞增殖等药理作用。1.白英总苷对大鼠胃粘膜的保护作用材料Wistar大鼠50只，体重160-180g，雄性，购自中科院上海试验动物中心，许可证号SCXK(沪)2003-0003。受试样品按实施例方法制备；西咪替丁(Cimetidine)，批号050801，购自上海衡山药业有限公司方法动物根据体重随机分组，白英总苷或阳性对照西咪替丁均用0.MC混悬，口服灌胃给药，连续3天，空白对照给予相同体积空白介质(0.5%CMC)。最后一次给药前禁食24小时，给药后1个小时给每只动物灌服(p.o)无水乙醇lml,l小时后处死动物，解剖取全胃以游标卡尺测量溃疡指数。结果:白英总苷对乙醇致大鼠急性胃损伤模型的作用剂量动物数始/终给药途径溃疡指数(mm)IR(%)空白对照2ml/只10/10p.0175.54±41.83西咪替丁300mg/kgX38/8p.042.81±19.08**75.62白英总苷200mg/kgX38/8p.011.59±10.76**93.40100mg/kgX38/8p.060.96土27.14**65.2850mg/kgX38/8p.089.91±58.20**48.78**:与Vehicle组相比，P<0.01结果显示给大鼠灌服乙醇可导致急性糜烂性炎症，表现为粘膜溃疡、出血等损伤症状。白英总苷对乙醇所致大鼠胃粘膜损伤具有明显保护作用。2.白英总苷对小鼠胃粘膜的保护作用材料ICR雄性小鼠32只，20-22g，中科院上海试验动物中心提供；白英总苷样品按实施例方法制备。方法动物适应l-2天。根据体重随机分组，禁食48小时后灌胃给予白英总苷或西咪替丁，空白对照给予等体积溶媒(0.5%CMC)，给药后l个小时给每只动物P.o无水乙醇O.lml，l小时后处死动物，解剖取全胃以福尔马林固定，计数出血点为溃疡指数。结果白英总苷对乙醇致小鼠急性胃损伤模型的作用剂量动物数始/终给药途径溃疡指数抑制率(%)空白对照0.2ml/只8/8p.034.63±18.08西咪替丁450mg/kgXl8/8p.09.00±6.39**74.01白英总苷300mg/kgXl8/8p.08.00±5.37**76.90150mg/kgXl8/8p.011.50±11.17林66.79**:与Vehicle组相比，P〈0.01;结果显示白英总苷对乙醇所致小鼠胃粘膜损伤(急性糜烂性炎症)具有明显抑制作用。3.白英总苷对幽门螺杆菌的抑制作用采用平板法，考察了白英总苷对幽门螺杆菌(H.Pylori)的抑制作用，结果显示模型MICtoATCC43504(ug/ml)甲硝唑H.Pylori128白英总苷H.Pylori256结果显示白英总苷对幽门螺杆菌有显著抑制作用，最小抑菌浓度胃256yg/ml。4.白英总苷对角叉菜胶所致大鼠足肿胀的抑制作用材料SD大鼠40只，雄性，体重130-150g，上海斯莱克实验动物责任有限公司提供，合格证SCXK(沪)2003-0003。受试样品按实施例方法制备。方法动物随机分成4组，即模型对照、阳性对照、受试样品给药高剂量组、低剂量组，受试样品用0.5%CMC混悬，口服给药。阳性对照-地塞米松为注射给药。各组动物均每天给药一次，连续4天，末次给药后1小时，注射1%角叉菜胶致炎，致炎前先用排水法测各组大鼠右后足跖的体积一次，然后在大鼠右后足跖中部皮下注射1%角叉菜胶0.lml致炎，以后每隔一小时测定足跖体积一次，大鼠致炎前及致炎后不同时间右后足跖体积的差直即为肿胀值，计算肿胀率及抑制率，以t检验法与模型对照组比较。结果10受试样品对角叉菜胶致大鼠炎症的影响(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>*P<0.05，**P<0.01与模型对照组比较，"0"表示致炎前测量结果，()内为肿胀率(％)，[]内为抑制率。.结果显示白英总苷对角叉菜胶所致大鼠足肿胀具有显著抑制作用，表明白英总苷具有抗炎作用。5.药物对鼠尾表皮颗粒细胞形成实验的影响材料ICR小鼠，26只，雌雄各半，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，许可证号SCXK(沪)2003-0003;全反式维甲酸(ATRA):镇江市瑞达化工有限公司产品，批号070429;白英总苷按实施例方法制备；配制受试药物及阳性对照ATRA均用少量DMSO溶解后，用乙醇稀释制成搽剂，浓度为0.5%;采用外涂鼠尾给药方式，每日一次，疗程为14天。方法将小鼠随机分组，雌雄各半。各组动物分别用相应药物涂抹尾部，空白对照组(Vehicle)给予同等容量的空白溶媒，每天1次，连续涂药14天后，次日处死小鼠。取距尾根部1.8-4cm处表皮，以10%甲酸固定后，进行组织切片及HE染色，光学显微镜下观察。观察指标①凡两个毛囊口之间的鳞片表皮有排列成行的颗粒层者计为有颗粒层形成的鳞片，计数每100个鳞片中有颗粒层的鳞片数；②计数鼠尾表皮100个鳞片中颗粒细胞数，颗粒细胞为表皮中扁平或菱形细胞所组成，胞浆内充满深嗜碱性，粗大，HE染色呈深蓝色透明的角质颗粒。对各组数据进行比较，并作统计学处理。结果受试药物对小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成及颗粒细胞数的影响J±s)有颗粒层的鳞片数~~颗粒细胞数/100个组别浓度动物数/100个鳞片_鳞片Vehicle/1013.2±2.015.7±1.5ATRA0.5%817.5±2.0**23.1±2.0**白英总苷0.5%816.5±3.0*23.8±2.4**注:与Vehicle组相比,*为p〈0.05,料为pO.Ol6、白英总皂苷对人永生化表皮细胞株HaCaT细胞的抗增殖作用材料和方法HACAT细胞购自中科院细胞生化研究所。全反式维甲酸(ATRA):镇江市瑞达化工有限公司产品，批号070429;白英总苷按实施例方法制备；将处于对数生长期的HACAT细胞以3XlOVml接种于含10%胎牛血清(GIBCO);lxl()SU丄-l青霉素，lxlCfug丄-l链霉素的RPMI1640培养基，在37°C、5%(302条件下培养72小时，SRB法检测受试药物及对照药物对细胞增殖的抑制活性。结果白英总皂苷对HACAT细胞增殖的抑制作用药物IC50(ug/ml)ATRA9.07白英总苷24.01角质形成细胞异常增生是银屑病的主要病理学变化之一，研究结果显示白英皂苷对角质形成细胞(HACAT)具有显著抑制活性，提示可用于银屑病的治疗。7.白英总皂苷对胃癌细胞的抗增殖作用材料和方法BGC-823细胞购自中科院细胞生化研究所。白英总苷按实施例方法制备；将处于对数生长期的BGC-823细胞以3XlOVml接种于含10%胎牛血清(GIBCO);1><10511丄-1青霉素，lxlQSug丄-l链霉素的RPMI1640培养基，在37'C、5%(302条件下培养72小时，SRB法检测受试药物对细胞增殖的抑制活性。结果白英总皂苷对BGC-823细胞体外增殖具有明显抑制作用，IC50:18.84ng/ml。上述研究表明白英总苷具有显著的抗炎、保护胃粘膜、抑制幽门螺杆菌、抗胃癌细胞增殖、抗角质形成细胞增殖等药理活性，可用于制备治疗胃炎、胃和十二指肠溃疡、胃癌、银屑病的药物。该白英总苷作为有效组分，通过与药用辅料按常规方法制成口服或非口服制剂，用于胃炎、胃和十二指肠溃疡、胃癌、银屑病的治疗。特别优选为口服固体制剂，可按常规方法与辅料制成片剂、胶囊、颗粒剂、丸剂等各种剂型。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。具体实施方式实施例h白英1000g，加入75。/。乙醇6L，加热回流提取l小时，滤渣再以75%乙醇提取两次，每次6L，加热回流l小时，过滤，合并滤液。滤液浓縮到一定程度，以正丁醇萃取(500mlX4)，正丁醇以水洗后浓缩干燥，所得固体以石油醚洗涤，过滤，回收固体，得白英总苷，得率为3.6%,测得其总苷含量为49.4%实施例2:白英1500g，加入50。/。乙醇7L，加热回流提取l小时，滤渣再以50%乙醇提取两次，每次5L，加热回流l小时，过滤，合并滤液。滤液浓縮到一定程度，以石油醚萃取，萃取后，水相上D101大孔树脂，依次用水、20%乙醇洗涤，而后用50%乙醇洗脱，洗脱液浓縮干燥，得白英总苷，测得其总苷含量为65.3%实施例3:白英1500g，加入纯水7L，加热回流提取l小时，滤渣再以纯水提取两次，每次5L，加热回流l小时，过滤，合并滤液。滤液浓縮到一定程度，以石油醚萃取，萃取后，水相上D101大孔树脂，依次以水-20%乙醇-50%乙醇-95%乙醇洗脱，收集50%乙醇洗脱部位，浓縮至无醇味，浓縮、干燥，即得白英总皂苷提取物，测得其总苷含量为59%。权利要求1、一种白英总皂苷提取物，其特征在于该提取物含有重量百分比为10％～90％的白英总皂苷，优选为35％-90％的总皂苷。2、根据权利要求l所述的白英总皂苷提取物，其特征在于该提取物具有以下结构的甾体皂苷中的一种或多种5-苦茄碱薯蓣皂苷3、一种如权利要求l所述的白英总皂苷提取物的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)提取将原药材经过粉碎后，用水、甲醇或乙醇，或含水醇，室温或加热或回流提取13小时，可重复提取13次，然后滤去药渣，滤液在常压或减压下浓縮至无醇味，得到浓縮液，静置备用。(2)分离a，正丁醇萃取法其制备步骤为浓缩液以正丁醇0.5倍量至3倍量V/V萃取1-6次，萃取后，蒸干，得浸膏，所得浸膏再加1-6倍量的石油醚V/V洗涤，弃去洗涤液，固体干燥得白英总皂苷提取物；或b，大孔树脂层析法其制备步骤为浓缩液以石油醚0.5倍量至3倍量V/V萃取卜6次脱脂，所得水层上树脂柱，以水及稀醇醇浓度<30%洗涤，再用50-95%乙醇洗脱，收集洗脱液，浓縮，浓縮液干燥即得白英总皂苷。4、根据权利要求3所述的白英总皂苷提取物的制备方法，其特征在于该方法步骤(1)提取中所述溶剂为水、甲醇或乙醇或含水醇；优选50%95%乙醇；溶剂用量为药材重量的410倍，优选6倍。5、根据权利要求3所述的白英总皂苷提取物的制备方法，其特征在于该方法步骤(2)所述树脂柱为D101大孔树脂柱、AB-8或HPD100大孔吸附树脂。6、一种如权利要求l所述白英总皂苷提取物在制备治疗胃炎、胃和十二指肠溃疡、胃癌或银屑病药物中的用途。7、根据权利要求6所述白英总皂苷提取物在制药中的用途，其特征在于所述药物为白英总皂苷提取物与药用敷料制成的口服、注射或经皮给药制剂。全文摘要本发明提供了一种白英总皂苷提取物，该提取物含有重量百分比为10％～90％的白英总皂苷。它是从中药白英通过提取、分离和精制等步骤得到的总甾体皂苷。经动物试验表明该提取物具有显著抗炎、抗肿瘤、抑制幽门螺杆菌、保护胃粘膜和抑制角质形成细胞增殖等药效作用，可用于制备治疗胃炎、胃和十二指肠溃疡、胃癌、银屑病的药物。文档编号A61K36/81GK101450144SQ200710171900公开日2009年6月10日申请日期2007年12月7日优先权日2007年12月7日发明者剑左,王作鹏,王晓川,斌胡,娜陈申请人:卡南吉医药科技(上海)有限公司