氨基-咪唑酮及其作为治疗认知缺损、阿尔兹海默病、神经变性和痴呆的药物的用途的制作方法

专利名称：氨基-咪唑酮及其作为治疗认知缺损、阿尔兹海默病、神经变性和痴呆的药物的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及如上所定义的式I化合物及其盐的用途。用于药物组合物的盐可为可药用盐，但其它盐也可用于制备式I化合物。
应该理解本发明还涉及式I化合物的任何以及所有互变异构形式。
本发明的化合物可用作药物。在一些实施方案中，本发明提供式I化合物或其可药用盐、互变异构体或体内可水解的前体，其用作药物。在一些实施方案中，本发明提供本申请所描述的化合物，其用作用于治疗或预防Aβ相关病理的药物。在其它一些实施方案中，Aβ相关病理为唐氏综合征、β-淀粉样血管病、脑淀粉样血管病、遗传性脑出血、与认知缺损相关的障碍、MCI(“轻度认知缺损”)、阿尔茨海默病、记忆丧失、与阿尔茨海默病相关的注意力缺陷症状、与阿尔茨海默病相关的神经变性、混合型血管起源的痴呆、变性起源的痴呆、早老性痴呆、老年性痴呆、与帕金森病相关的痴呆、进行性核上麻痹或皮质基质变性。
在一些实施方案中，本发明提供式I化合物或其可药用盐、互变异构体或体内可水解的前体，在制备用于治疗或预防Aβ相关病理的药物中的用途。在其它一些实施方案中，Aβ相关病理包括例如唐氏综合征和β-淀粉样血管病，例如但不限于脑淀粉样血管病、遗传性脑出血、与认知缺损相关的障碍例如但不限于MCI(“轻度认知缺损”)、阿尔茨海默病、记忆丧失、与阿尔茨海默病相关的注意力缺陷症状、与例如阿尔茨海默病那样的疾病相关的神经变性或包括混合型血管起源和变性起源的痴呆、早老性痴呆、老年性痴呆和与帕金森病相关的痴呆在内的痴呆、进行性核上麻痹或皮质基质变性。
在一些实施方案中，本发明提供抑制BACE活性的方法，其包括使BACE与本发明的化合物接触。BACE被认为代表主要的β-分泌酶活性，并且被认为是产生淀粉样-β-蛋白(Aβ)的限速步骤。因而，用抑制剂(例如本申请所提供的化合物)抑制BACE，这可用于抑制Aβ及其部分的沉积。由于Aβ及其部分的沉积与例如阿尔茨海默病那样的疾病关联，所以BACE就开发用于治疗和/或预防以下疾病的药物而言是重要的候选靶标Aβ相关病理，例如唐氏综合征和β-淀粉样血管病，例如但不限于脑淀粉样血管病、遗传性脑出血、与认知缺损相关的障碍例如但不限于MCI(“轻度认知缺损”)、阿尔茨海默病、记忆丧失、与阿尔茨海默病相关的注意力缺陷症状、与例如阿尔茨海默病那样的疾病相关的神经变性或包括混合型血管起源和变性起源的痴呆、早老性痴呆、老年性痴呆和与帕金森病相关的痴呆在内的痴呆、进行性核上麻痹或皮质基质变性。
在一些实施方案中，本发明提供用于治疗以下疾病的方法Aβ相关病理，例如唐氏综合征和β-淀粉样血管病，例如但不限于脑淀粉样血管病、遗传性脑出血、与认知缺损相关的障碍例如但不限于MCI(“轻度认知缺损”)、阿尔茨海默病、记忆丧失、与阿尔茨海默病相关的注意力缺陷症状、与例如阿尔茨海默病那样的疾病相关的神经变性或包括混合型血管起源和变性起源的痴呆、早老性痴呆、老年性痴呆和与帕金森病相关的痴呆在内的痴呆、进行性核上麻痹或皮质基质变性，所述方法包括将治疗有效量的式I化合物或其可药用盐、互变异构体或体内可水解的前体给予哺乳动物(包括人)。
在一些实施方案中，本发明提供用于预防以下疾病的方法Aβ相关病理，例如唐氏综合征和β-淀粉样血管病，例如但不限于脑淀粉样血管病、遗传性脑出血、与认知缺损相关的障碍例如但不限于MCI(“轻度认知缺损”)、阿尔茨海默病、记忆丧失、与阿尔茨海默病相关的注意力缺陷症状、与例如阿尔茨海默病那样的疾病相关的神经变性或包括混合型血管起源和变性起源的痴呆、早老性痴呆、老年性痴呆和与帕金森病相关的痴呆在内的痴呆、进行性核上麻痹或皮质基质变性，所述方法包括将治疗有效量的式I化合物或其可药用盐、互变异构体或体内可水解的前体给予哺乳动物(包括人)。
在一些实施方案中，本发明提供通过将式I化合物或其可药用盐、互变异构体或体内可水解的前体及认知和/或记忆增强药物给予哺乳动物(包括人)来治疗或预防以下疾病的方法Aβ相关病理，例如唐氏综合征和β-淀粉样血管病，例如但不限于脑淀粉样血管病、遗传性脑出血、与认知缺损相关的障碍例如但不限于MCI(“轻度认知缺损”)、阿尔茨海默病、记忆丧失、与阿尔茨海默病相关的注意力缺陷症状、与例如阿尔茨海默病那样的疾病相关的神经变性或包括混合型血管起源和变性起源的痴呆、早老性痴呆、老年性痴呆和与帕金森病相关的痴呆在内的痴呆、进行性核上麻痹或皮质基质变性。认知增强药物、记忆增强药物和胆碱酯酶抑制剂包括但不限于多奈哌齐(Aricept)、加兰他敏(Reminyl或Razadyne)、利凡斯的明(Exelon)、他克林(Cognex)和美金刚(Namenda，Axura或Ebixa)。
在一些实施方案中，本发明提供通过将式I化合物或其可药用盐、互变异构体或体内可水解的前体(其中各物质都由本申请所提供)及胆碱酯酶抑制剂或抗炎药物给予哺乳动物(包括人)来治疗或预防以下疾病的方法Aβ相关病理，例如唐氏综合征和β-淀粉样血管病，例如但不限于脑淀粉样血管病、遗传性脑出血、与认知缺损相关的障碍例如但不限于MCI(“轻度认知缺损”)、阿尔茨海默病、记忆丧失、与阿尔茨海默病相关的注意力缺陷症状、与例如阿尔茨海默病那样的疾病相关的神经变性或包括混合型血管起源和变性起源的痴呆、早老性痴呆、老年性痴呆和与帕金森病相关的痴呆在内的痴呆、进行性核上麻痹或皮质基质变性。
在一些实施方案中，本发明提供通过将本发明的化合物及非典型抗精神病药物给予哺乳动物(包括人)来治疗或预防以下疾病的方法Aβ相关病理，例如唐氏综合征和β-淀粉样血管病，例如但不限于脑淀粉样血管病、遗传性脑出血、与认知缺损相关的障碍例如但不限于MCI(“轻度认知缺损”)、阿尔茨海默病、记忆丧失、与阿尔茨海默病相关的注意力缺陷症状、与例如阿尔茨海默病那样的疾病相关的神经变性或包括混合型血管起源和变性起源的痴呆、早老性痴呆、老年性痴呆和与帕金森病相关的痴呆在内的痴呆、进行性核上麻痹或皮质基质变性或本申请所描述的任意其它疾病、障碍或病症。非典型抗精神病药物包括但不限于奥氮平(Olanzapine)(市售为Zyprexa)、阿立哌唑(Aripiprazole)(市售为Abilify)、利培酮(Risperidone)(市售为Risperdal)、喹硫平(Quetiapine)(市售为Seroquel)、氯氮平(Clozapine)(市售为Clozaril)、齐拉西酮(Ziprasidone)(市售为Geodon)和奥氮平/氟西汀(Olanzapine/Fluoxetine)(市售为Symbyax)。
在一些实施方案中，用本发明化合物治疗的哺乳动物或人类已经被诊断患有具体的疾病或障碍，例如本申请所描述的那些。在这些情况下，所治疗的哺乳动物或人类需要这种治疗。然而，诊断无需先前就进行。
本发明还包括药物组合物，所述药物组合物包含作为活性成分的一种或多种本发明化合物及至少一种可药用载体、稀释剂或赋形剂。
本申请所给出的定义意在阐明在本申请各处所使用的术语。术语“本申请”指整个申请。
本发明的多种化合物可按特定的几何异构形式或立体异构形式存在。本发明包括所有这些化合物，包括顺式和反式异构体、R和S对映异构体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体、它们的外消旋混合物和它们的其它混合物，这些都涵盖在本发明的范围内。额外的不对称碳原子可存在于取代基(例如烷基)中。所有这些异构体及它们的混合物都意图包括在本发明中。本申请所描述的化合物可具有不对称的中心。可将包含不对称取代原子的本发明化合物分离成光学活性形式或外消旋形式。如何制备光学活性形式是本领域众所周知的，例如通过拆分外消旋形式、通过从具有光学活性的起始原料合成，或使用光学活性试剂合成。如果需要，外消旋物质的分离可通过本领域所已知的方法来实现。烯烃、C＝N双键等的多种几何异构体也可存在于本申请所描述的化合物中，并且所有这些稳定的异构体都被预期在本发明中。对本发明化合物的顺式和反式几何异构体进行了描述，并且可将它们分离成异构体的混合物，或分离成分开的异构形式。结构的所有手性形式、非对映异构形式、外消旋形式和所有几何异构形式都意图包括在本发明中，除非具体指明了特定的立体化学或异构形式。
当将连接取代基的键显示成与连接环中两个原子的键交叉时，所述取代基可与环上任意原子连接。当列出取代基而没有指明所述取代基通过哪个原子来与给定结构式的化合物的其余部分连接时，所述取代基可通过所述取代基中的任意原子来连接。只要取代基、取代基的位置和/或变量的组合能得到稳定的化合物，那么这种组合就是允许的。
本申请所使用的术语“任选取代”指取代是任选的，因此就所指定的原子或基团而言可以是未取代的。在期望取代的情况下，这种取代指所指定原子或基团上的任意数目的氢被选自指定组的基团代替，条件为不能超过所指定原子或基团的正常化合价，并且取代的结果是得到稳定的化合物。例如，如果取代基是甲基(即CH3)，那么碳原子上的3个氢可被代替。所述取代基的实例包括但不限于卤素、CN、NH2、OH、SO、SO2、COOH、OC1-6烷基、CH2OH、SO2H、C1-6烷基、OC1-6烷基、C(＝O)C1-6烷基、C(＝O)OC1-6烷基、C(＝O)NH2、C(＝O)NHC1-6烷基、C(＝O)N(C1-6烷基)2、SO2C1-6烷基、SO2NHC1-6烷基、SO2N(C1-6烷基)2、NH(C1-6烷基)、N(C1-6烷基)2、NHC(＝O)C1-6烷基、NC(＝O)(C1-6烷基)2、C5-6芳基、OC5-6芳基、C(＝O)C5-6芳基、C(＝O)OC5-6芳基、C(＝O)NHC5-6芳基、C(＝O)N(C5-6芳基)2、SO2C5-6芳基、SO2NHC5-6芳基、SO2N(C5-6芳基)2、NH(C5-6芳基)、N(C5-6芳基)2、NC(＝O)C5-6芳基、NC(＝O)(C5-6芳基)2、C5-6杂环基、OC5-6杂环基、C(＝O)C5-6杂环基、C(＝O)OC5-6杂环基、C(＝O)NHC5-6杂环基、C(＝O)N(C5-6杂环基)2、SO2C5-6杂环基、SO2NHC5-6杂环基、SO2N(C5-6杂环基)2、NH(C5-6杂环基)、N(C5-6杂环基)2、NC(＝O)C5-6杂环基、NC(＝O)(C5-6杂环基)2。
本申请单独使用或用作后缀或前缀的“烷基”意在包括具有1至12个碳原子(或如果提供了碳原子的具体数目，那么指所述具体数目)的支链和直链饱和脂肪族烃基。例如，“C0-6烷基”表示具有0、1、2、3、4、5或6个碳原子的烷基。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基。在下标是整数0(0)的情况中，下标指示的基团指明所述基团可以不存在，即在基团之间有直接的键相连。
本申请单独使用或用作后缀或前缀的“烯基”意在包括具有2至12个碳原子(或如果提供了碳原子的具体数目，那么指所述具体数目)的含有链烯烃(alkene)或烯烃(olefin)的支链和直链脂肪族烃基。例如，“C2-6烯基”表示具有2、3、4、5或6个碳原子的烯基。烯基的实例包括但不限于乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-甲基丁-2-烯基、3-甲基丁-1-烯基、1-戊烯基、3-戊烯基和4-己烯基等。
本申请单独使用或用作后缀或前缀的“炔基”意在包括具有2至12个碳原子(或如果提供了碳原子的具体数目，那么指所述具体数目)的含有炔烃的支链和直链脂肪族烃基。例如，“C2-6炔基”表示具有2、3、4、5或6个碳原子的炔基。炔基的实例包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、3-丁炔基、-戊炔基、己炔基和1-甲基戊-2-炔基。
本申请所使用的“芳族”指具有一个或多个带有芳族特征(例如4n+2个离域电子)的不饱和碳环并且包括至多约14个碳原子的烃基。此外，“杂芳族”指具有一个或多个带有芳族特征(例如4n+2个离域电子)、含有碳和一个或多个杂原子(如氮、氧和硫)的不饱和环。
本申请所使用的术语“芳基”指5至14个碳原子所组成的芳族环结构。含有5、6、7和8个碳原子的环结构可以是单环芳族基团，例如苯基。含有8、9、10、11、12、13或14个碳原子的环结构可以是多环基团，例如萘基。芳族环可在一个或多个环位置取代有以上所描述的取代基。术语“芳基”也包括具有两个或多个环的多环环系，其中两个或多个碳为两个相邻环所共有(环为“稠环”)，其中至少一个环是芳族的，其它环例如可以是环烷基、环烯基、环炔基、芳基和/或杂环基。术语“邻”、“间”和“对”分别应用于1，2-、1，3-和1，4-二取代的苯。例如，名称“1，2-二甲基苯”和“邻-二甲基苯”具有相同的意义。
本申请所使用的“环烷基”指具有特定数目碳原子的饱和环基。这些可包括稠合的环或桥接的多环系统。优选的环烷基在其环结构中具有3至10个碳原子，更优选在其环结构中具有3、4、5和6个碳。例如“C3-6环烷基”表示例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基那样的基团。
本申请所使用的“环烯基”指环中具有至少一个碳-碳双键并且具有4至12个碳原子的含环烃基。
本申请所使用的“环炔基”指环中具有至少一个碳-碳三键并且具有7至12个碳原子的含环烃基。
本申请所使用的“卤代”或“卤素”指氟、氯、溴和碘。“抗衡离子”用于表示小的带负电或带正电的物质，例如氯离子、溴离子、氢氧根离子、乙酸根离子、硫酸根离子、甲苯磺酸根离子、苯磺酸根离子等。
本申请所使用的术语“杂环基”或“杂环的”或“杂环”指含有3至20个原子的饱和的、不饱和的或部分饱和的单环、二环或三环(除非另有说明)，其中1、2、3、4或5个环原子选自氮、硫或氧，除非另有说明，其可以通过碳或氮相连，其中-CH2-基任选被-C(O)-代替；以及除非有相反的说明，环氮或硫原子任选氧化形成N-氧化物或S-氧化物或环氮任选季铵化；其中环-NH任选被乙酰基、甲酰基、甲基或甲磺酰基取代；以及环任选被一个或多个卤素取代。应该理解的是，当杂环基中S原子和O原子的总数超过1时，这些杂原子不能彼此相邻。若所述杂环基为二环或三环，则至少一个环任选为杂芳族环或芳族环，条件是至少一个环是非杂芳族的。若所述杂环基为单环，则其一定不是芳族的。杂环基的实例包括但不限于哌啶基、N-乙酰基哌啶基、N-甲基哌啶基、N-甲酰基哌嗪基、N-甲磺酰基哌嗪基、高哌嗪基、哌嗪基、氮杂环丁烷基(azetidinyl)、氧杂环丁烷基(oxetanyl)、吗啉基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、二氢吲哚基、四氢吡喃基、二氢-2H-吡喃基、四氢呋喃基和2，5-二氧代咪唑烷基。
本申请所使用的“杂芳基”或“杂芳族”指具有至少一个环杂原子(例如硫、氧或氮)的芳族杂环。杂芳基包括单环系统和多环(例如具有2、3或4个稠合的环)系统。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基(即pyridinyl)、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基、呋喃基、喹啉基、异喹啉基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、吲哚基、吡咯基、噁唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、异噁唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、吲唑基、1，2，4-噻二唑基、异噻唑基、噻唑基、苯并噻吩基、嘌呤基、咔唑基、芴酰基(fluorenonyl)、苯并咪唑基、二氢吲哚基等。在一些实施方案中，杂芳基具有1至约20个碳原子，在其它实施方案中为约3至约20个碳原子。在一些实施方案中，杂芳基包含3至约14个、4至约14个、3至约7个或5至6个成环原子。在一些实施方案中，杂芳基或杂芳族基团具有1至约4个、1至约3个或1至2个杂原子。在一些实施方案中，杂芳基或杂芳族基团具有1个杂原子。
本申请所使用的短语“保护基”指临时的取代基，其保护具有潜在反应性的官能团，使之不会发生不期望的化学转化。所述保护基的实例包括羧酸的酯、醇的甲硅烷基醚及醛和酮的相应缩醛和缩酮。已经对保护基化学领域进行了综述(Greene，T.W.；Wuts，P.G.M.Protective Groups in OrganicSynthesis，3rd ed.；WileyNew York，1999)。
本申请所使用的“可药用”指这样的化合物、物质、组合物和/或剂型，它们在合理的医药判断范围内适用于与人类组织和动物组织接触，而没有过度的毒性、刺激性、变态反应或其它问题或并发症，这与合理的利益/风险比相称。
本申请所使用的“可药用盐”指所披露的化合物的衍生物，其中母体化合物通过制备其酸盐或碱盐来修饰。可药用盐的实例包括但不限于碱性残基(例如胺)的无机酸盐或有机酸盐、酸性残基(例如羧酸)的无机碱盐或有机碱盐等。可药用盐包括母体化合物的常规无毒性盐或季铵盐，其例如从无毒性无机酸或有机酸来制备。例如，所述常规无毒性盐包括从无机酸(例如盐酸)衍生的那些盐。
本发明的可药用盐可通过常规的化学方法从包含碱性或酸性部分的母体化合物来合成。通常，这些盐可通过以下方法来制备使游离酸形式或游离碱形式的这些化合物与化学计量的合适的碱或酸在水或有机溶剂或二者的混合物中反应；通常使用非水介质，如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。
本申请所使用的“互变异构体”指由于氢原子迁移而平衡存在的其它结构异构体，例如酮-烯醇互变，其中所得到的化合物具有酮和不饱和醇的性质。
本申请所使用的“稳定的化合物”和“稳定的结构”指化合物足够稳定，从而经受得住从反应混合物分离至有用的纯度和配制成有效的治疗剂。
本发明的化合物还包括水合物和溶剂化物。
本发明还包括同位素标记的本发明化合物。“同位素标记”或“放射性标记”的化合物是具有以下特征的本发明化合物其中一个或多个原子被原子质量或质量数不同于自然界中常见原子质量或质量数的(即天然存在的)原子代替或取代。可结合在本发明化合物中的合适放射性核素包括但不限于2H(也写作D，表示氘)、3H(也写作T，表示氚)、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、18F、35S、36Cl、82Br、75Br、76Br、77Br、123I、124I、125I和131I。结合在这些放射性标记的化合物中的放射性核素取决于所述放射性标记的化合物的具体应用。例如，就体外受体标记和竞争测定而言，结合有3H、14C、82Br、125I、131I或35S的化合物通常是最有用的。就放射性成像应用而言，11C、18F、125I、123I、124I、131I、75Br、76Br或77Br通常是最有用的。
应该理解的是，“放射性标记的化合物”是结合有至少一个放射性核素的化合物。在一些实施方案中，放射性核素选自3H、14C、125I、35S和82Br。
本申请所定义的抗痴呆治疗可应用为单独的疗法，或者应用为包括本发明化合物在内的常规化学疗法。这些化学疗法包括一种或多种以下种类的药剂乙酰胆碱酯酶抑制剂、抗炎剂、认知和/或记忆增强剂或非典型抗精神病药(atypical antipsychotic agent)。
这种联合治疗可通过各个治疗成分的同时、依次或分开给予来进行。这些组合产品使用本发明的化合物。
本发明的化合物可按以下方式来给予口服、肠胃外、口腔、阴道、直肠、吸入、吹入、舌下、肌内、皮下、局部、鼻内、腹膜内、胸内、静脉内、硬膜外、鞘内、脑室内和注射到关节中。
当针对具体患者确定最合适的个体给药方案和剂量水平时，剂量取决于给药途径、疾病的严重度、患者的年龄和体重及主治医师所通常考虑的其它因素。
本发明化合物用于治疗痴呆的有效量为足以对症缓解温血动物(特别是人)痴呆症状、减缓痴呆进展或降低痴呆症状患者恶化危险的量。
为了从本发明的化合物制备药物组合物，惰性可药用载体可以是固体或液体。固态制剂包括粉剂、片剂、可分散颗粒剂、胶囊剂、扁囊剂和栓剂。
固体载体可以是一种或多种物质，其也可作为稀释剂、矫味剂、增溶剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂或片剂崩解剂，其也可以是成囊材料。
在粉剂中，载体为微细粉碎的固体，其与微细粉碎的活性成分混合。在片剂中，活性成分与具有必要粘合性质的载体按合适的比例混合，然后压制成所期望的形状和大小。
为了制备栓剂组合物，首先将低熔点蜡(例如脂肪酸甘油酯和可可脂的混合物)熔化，然后例如通过搅拌，将活性成分分散于其中。然后，将熔化的均质混合物倾倒入合适尺寸的模具中，然后使其冷却和固化。
合适的载体包括碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、乳糖、蔗糖、果胶、糊精、淀粉、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。
在一些实施方案中，本发明提供式I化合物或其可药用盐，其用于对哺乳动物(包括人)进行治疗性处置(包括预防性处置)，其通常按照标准的药学实践来配制成药物组合物。
除本发明的化合物之外，本发明的药物组合物也可包含一种或多种对一种或多种本申请所述病症有治疗价值的药理成分，或与一种或多种对一种或多种本申请所述病症有治疗价值的药理成分联用(同时或依次给予)。
术语“组合物”意在包括活性成分或其可药用盐与可药用载体的制剂。例如，本发明可通过本领域已知的方法来配制成以下形式例如片剂、胶囊剂、水性溶液剂或油性溶液剂、混悬剂、乳剂、膏剂、软膏剂、凝胶剂、鼻喷雾剂、栓剂、用于吸入的微细粉碎的粉剂或气雾剂或雾化剂及用于肠胃外使用(包括静脉内、肌内或输注)的无菌水性溶液剂或油性溶液剂或混悬剂或无菌乳剂。
液态组合物包括溶液剂、混悬剂和乳剂。作为适于肠胃外给药的液体制剂的实例，可提及活性化合物的无菌水溶液或无菌水-丙二醇溶液。也可将液体组合物配制成水性聚乙二醇溶液。口服给药用的水性溶液剂可通过以下方法来制备将活性成分溶解在水中，并且根据需要来添加合适的着色剂、矫味剂、稳定剂和增稠剂。口服用的水性混悬剂可通过以下方法来制备将微细粉碎的活性成分与粘性物质(例如天然/合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和制药领域已知的其它助悬剂)一起分散在水中。
药物组合物可以是单位剂型。就这种形式而言，将组合物分成含有适量活性成分的单位剂量。单位剂型可以是包装制剂，所述包装包含分开量的制剂，例如包装在小瓶或安瓿中的片剂、胶囊剂和粉剂。单位剂型也可以是胶囊剂、扁囊剂或片剂本身，或可以是合适数目的任意这些包装形式。
可将组合物配制，用于任何适当的给药途径和方法。可药用载体或稀释剂包括在适于以下给药的制剂中所使用的那些物质口服给药、直肠给药、鼻给药、局部(包括口腔和舌下)给药、阴道给药或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、皮内、鞘内和硬膜外)给药。出于方便的原因，制剂可以是单位剂型，并且可通过药学领域公知的任意方法来制备。
就固体组合物而言，可使用常规无毒性固体载体包括例如药物级的甘露醇、乳糖、纤维素、纤维素衍生物、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等。可用于给药的液体组合物可例如通过以下方法来制备将以上所定义的活性化合物及任选的药物辅料在载体(例如水、盐水、葡萄糖水溶液、甘油、乙醇等)中溶解、分散等，由此形成溶液或混悬液。如果需要，待给药的药物组合物也可包含少量无毒性辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂等，例如乙酸钠、脱水山梨醇单月桂酸酯、三乙醇胺乙酸钠、脱水山梨醇单月桂酸酯、油酸三乙醇胺等。制备这些剂型的实际方法是本领域技术人员已知的，或对于本领域技术人员是显而易见的；例如参见Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，Pennsylvania，15 th Edition，1975。
可按各种方法来对本发明的化合物进行衍生。本申请所使用的化合物的“衍生物”包括盐(例如可药用盐)、任意复合物(例如与环糊精等化合物形成的包合物(inclusion complex)或螯合物，或与例如Mn2+和Zn2+等金属离子形成的配合物)、游离酸或游离碱、化合物的多晶型、溶剂化物(例如水合物)、前药或脂质体、偶联伴侣(coupling partner)和保护基。例如，“前药”指可在体内转化成生物活性化合物的任意化合物。
本发明化合物的盐优选为生理上充分耐受和无毒性的盐。盐的许多实例是本领域技术人员已知的。所有这些盐都在本发明的范围内，并且所涉及的化合物包括化合物的盐形式。
在化合物包含胺官能团的情况下，这些化合物可例如通过以下方法来形成季铵盐按照技术人员公知的方法，使所述化合物与烷化剂反应。这些季铵化合物在本发明的范围内。
含有胺官能团的化合物也可形成N-氧化物。本申请所涉及的含有胺官能团的化合物也包括N-氧化物。
在化合物包含若干胺官能团的情况下，可将一个或多个氮原子氧化形成N-氧化物。N-氧化物的具体实例为叔胺的N-氧化物或含氮杂环的氮原子的N-氧化物。
N-氧化物可通过以下方法来制备用氧化剂(例如过氧化氢或过酸(例如过氧羧酸))处理相应的胺，参见例如Advanced Organic Chemistry，by JerryMarch，4th Edition，Wiley Interscience，pages。更具体地，可通过L.W.Deady(Syn.Comm.1977，7，509-514)的方法来制备N-氧化物，在所述方法中，使胺化合物与间氯过氧苯甲酸(MCPBA)例如在惰性溶剂(例如二氯甲烷)中反应。
在化合物含有手性中心的情况下，化合物的各种光学形式(例如对映异构体、差向异构体和非对映异构体及外消旋混合物)都在本发明的范围内。
化合物可按多种不同的几何异构形式和互变异构形式存在，并且所涉及的化合物包括所有这些形式。为了避免疑问，在化合物可按几种几何异构形式或互变异构形式之一存在并且只具体描述或显示了一种形式的情况下，所有其它形式都仍然包括在本发明的范围内。
化合物的给药量随所治疗的患者而变化，并且化合物的给药量为每天约100ng/kg体重至100mg/kg体重，优选为每天10pg/kg至10mg/kg。例如，剂量可由本领域技术人员根据本申请所公开的内容和本领域的知识来容易地确定。因而，技术人员能够容易地确定组合物中化合物和任选添加剂、媒介物和/或载体的量，也可容易地确定在本发明的方法中所给药的量。
本发明的化合物已经显示出体外抑制β分泌酶(包括BACE)活性。已经显示的是，β分泌酶的抑制剂可用于阻断Aβ肽的形成或积聚，因此在治疗阿尔茨海默病和与Aβ肽水平提高和/或Aβ肽沉积相关的其它神经变性疾病中具有有益的作用。因此，相信本发明的化合物可用于治疗阿尔茨海默病和与痴呆相关的疾病。因此，预期本发明的化合物及其盐具有对抗年龄相关疾病(例如阿尔茨海默病及其它Aβ相关病理，例如唐氏综合征和β-淀粉样血管病)的活性。预期本发明的化合物最有可能作为单一的药物来使用，但也可与很多种认知缺陷增强药物联用。
制备方法 本发明还涉及游离碱形式的式(I)化合物或其可药用盐的制备方法。在下面对这些方法的描述中，应当理解，适当的时候，可按照有机合成领域的普通技术人员容易理解的方式加入合适的保护基，并随后从各反应物和中间体中除去保护基。使用这些保护基的常规操作以及合适的保护基的实例描述在，例如“Protective Groups in Organic Synthesis”，T.W.Greene，P.G.M.Wutz，3rd Edition，Wiley-Interscience，New York，(1999)中。应当理解，微波可用于对反应混合物进行加热。
中间体的制备 所述方法(其中除非另有说明，A、B、C、D、R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7如上文所定义)包括 (i)使式II的化合物重氮化以获得式III的化合物，其中卤素(halo)表示溴或氯。

反应可通过以下方式进行用亚硝酸处理适当的胺，接着所形成的重氮鎓盐用适当的卤化亚铜(如溴化亚铜(I)或氯化亚铜(I))，或用铜和氢溴酸或盐酸处理。反应可在合适的溶剂(如水)中，在-20℃至回流之间的温度进行。
(ii)对式III的化合物(其中卤素表示卤素如溴或氯)进行硼基化(borylation)，以获得式IV的化合物，其中R8表示氢、烷基或芳基，或两个R8可形成环状硼酸酯。

反应可通过以下方式进行 a)反应通过使用烷基锂(如丁基锂)或镁，和合适的硼化合物(如硼酸三甲酯或硼酸三异丙酯)来进行。反应可在合适的溶剂(如四氢呋喃、己烷或二氯甲烷)中，在-78℃至+20℃之间的温度进行；或者 b)可以在含有或不含有合适配体(如三环己基膦或2-(二环己基膦基)联苯)的合适钯催化剂(如三(二亚苄基丙酮)二钯(0)、[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)、四(三苯基膦)钯(0)、二苯基膦二茂铁二氯化钯或醋酸钯)以及合适的碱(如叔胺(如三乙胺或二异丙基乙胺)或乙酸钾)的存在下，使用合适的硼物质(如4，4，4’，4’，5，5，5’，5’-八甲基-2，2’-联-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷、二儿茶酚二硼烷(biscatecholatodiboron)或频哪醇硼烷(pinacolborane))进行反应。反应可在合适的溶剂(如二氧杂环己烷、甲苯、乙腈、水、乙醇或1，2-二甲氧基乙烷)或它们的混合物中，在20℃至+160℃之间的温度进行。
(iii)使式V的化合物(其中卤素表示卤素例如溴，R12为芳基或杂芳基)与式VI的化合物(其中R10为芳基或杂芳基)进行反应，以获得式VII的化合物
反应可通过以下方式进行用烷基锂(如丁基锂)或镁处理式V的化合物，接着加入式VI的化合物。反应可在合适的溶剂(如乙醚或四氢呋喃)中，在-78℃至回流之间的温度进行。
(iv)使式VII的化合物反应以获得式VIII的化合物。

反应可通过以下方式进行使用适当的还原剂(如硼氢化钠、氰基硼氢化钠或氢化铝锂)进行还原。反应可在合适的溶剂(如甲醇、乙醇、乙醚或四氢呋喃)中，在-78℃至回流之间的温度进行。
(v)使式VIII的化合物反应以获得式IX的化合物。

反应可通过以下方式进行在存在或不存在合适的碱(如碳酸氢钠)的情况下，用合适的硫代羰基转移剂(thiocarbonyl transfer agent)(如硫代碳酸O，O-二(吡啶-2-基酯)或硫光气)处理式VIII的化合物。反应可在合适的溶剂(如二氯甲烷或氯仿)中，在-78℃至回流之间的温度进行。
(vi)使式IX的化合物反应以获得式X的化合物。

反应可通过以下方式进行用合适的碱(如叔丁醇钾)在合适的溶剂(如四氢呋喃或乙醚)中，在-78℃至回流之间的温度处理适当的异硫氰酸酯和二硫化碳。
(vii)使式X的化合物反应以获得式XI的化合物。

反应可通过以下方式进行用适当的二胺(如1，3-二氨基丙烷、乙二胺或如Tetrahedron 1994，50(29)，8617和1995，51(10)，2875中描述的二胺)处理式X的化合物。反应可在合适的溶剂(如乙醇或甲醇)中，在0℃至回流之间的温度进行。
(viii)使式XI的化合物反应以获得式XII的化合物。

反应可通过以下方式进行用适当的氧化剂(如叔丁基氢过氧化物)和氨水处理适当的硫酮(如式XI的化合物)。反应可在合适的溶剂(如甲醇)中，在0℃至回流之间的温度进行。
(ix)使式XIII的化合物(其中E为式I中的环B、C或苯基)反应，以获得式XIV的化合物。

反应可通过以下方式进行用合适的路易斯酸(Lewis acid)(如三溴化硼)在合适的溶剂(如二氯甲烷)中，在-78℃至回流之间的温度处理所述甲醚。
(x)使式XIV的化合物(其中E为式I中的环B、C或苯基)反应，以获得式XV的化合物，其中R11为烷基。

反应可通过以下方式进行用合适的磺酰氯或酸酐(如甲磺酰氯、1-丙磺酰氯、环丙基磺酰氯或甲磺酸酐)在合适的碱(如三乙胺)的存在下处理适当的醇。反应可在合适的溶剂(如二氯甲烷)中，在0℃至回流之间的温度进行。反应可在合适的溶剂(如二氯甲烷)中，在0℃至回流之间的温度进行。
终产物的制备方法 本发明的另一目的是制备通式(I)的化合物及其盐的方法，其中除非另有说明，A、B、C、D、R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7如上文中所定义。当期望获得酸加成盐时，可用酸(如卤化氢，如盐酸)在合适的溶剂(如四氢呋喃、乙醚、甲醇、乙醇、氯仿或二氯甲烷或它们的混合物)中处理游离碱，反应可在-30℃至+50℃之间发生。
(a)使式XIV的化合物(其中卤素表示卤素如溴)反应获得式I的化合物。

方法(a)的反应可通过以下方式进行使合适的化合物如式XVI的化合物与适当的式IV芳基硼酸或芳基硼酸酯(其中R8表示氢、烷基或芳基，或两个R8可形成环状硼酸酯)偶联。可使用含有或不含合适配体(如三苯基膦、三叔丁基膦或2-(二环己基膦基)联苯)的合适钯催化剂(如[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)、四(三苯基膦)钯(0)、二苯基膦二茂铁二氯化钯、醋酸钯(II)或二(二亚苄基丙酮)钯(0))进行反应，或使用镍催化剂(如镍/碳或1，2-二(二苯基膦基)乙烷二氯化镍)以及锌和三苯基膦三(间磺酸钠)进行反应。在反应中可使用合适的碱，如氟化铯、烷基胺(如三乙胺)，或碱金属碳酸盐或氢氧化物或碱土金属碳酸盐或氢氧化物(如碳酸钾、碳酸钠、碳酸铯或氢氧化钠)，反应可在+20℃至+160℃之间的温度，在合适的溶剂(如甲苯、四氢呋喃、二氧杂环己烷、二甲氧基乙烷、水、乙醇或N，N-二甲基甲酰胺或它们的混合物)中进行。
一般方法 所用的原料是从商业来源得到的，或根据文献操作制备的。
使用配备带有Z梯度的4核探头的Bruker DPX400NMR光谱仪，或配备带有Z梯度的3mm流动注射SEI1H/D-13C探头的Bruker av400 NMR光谱仪(使用BEST 215液体处理器用来注射试样)在指定的氘代溶剂中记录400MHz(质子)的1H NMR光谱。化学位移以ppm的形式给出。单峰、双重峰、三重峰、四重峰、多重峰和宽峰的共振多样性(Resonance multiplicities)分别表示为s、d、t、q、m和br。
在由Waters Alliance 2795 HPLC、Waters PDA 2996二极管阵列检测器、Sedex 75 ELS检测器和ZMD单四极质谱仪组成的LC-MS系统上进行LC-MS分析。质谱仪配备有以正离子模式或负离子模式操作的电喷雾离子源(ES)。毛细管电压和锥电压分别设定为3.2kV和30V。质谱仪在m/z100-600之间扫描，扫描时间为0.7s。二极管阵列检测器在200-400nm之间扫描。将ELS检测器的温度调节到40℃，以及将压力设为1.9巴。对于分离，应用线性梯度，起始于100％A(A10mM乙酸铵/5％乙腈)，终止于100％B(B乙腈)。所使用的柱是X-Terra MS C8，3.0×50mm，3.5μm(Waters)，以1.0mL/min的流速运行。柱温箱(oven)温度设定为40℃，或 在由Waters Alliance 2795HPLC、Waters PDA 2996二极管阵列检测器、Sedex75ELS检测器和ZQ单四极质谱仪组成的LC-MS系统上进行LC-MS分析。质谱仪配备有以正离子模式或负离子模式操作的电喷雾离子源(ES)。毛细管电压和锥电压分别设定为3.2kV和30V。质谱仪在m/z100-700之间扫描，扫描时间为0.3s。二极管阵列检测器在200-400nm之间扫描。将ELS检测器的温度调节到40℃，以及将压力设为1.9巴。在X-Terra MS C8，3.0×50mm，3.5μm(Waters)上，以1mL/min的流速进行分离。应用线性梯度，起始于100％A(A10mM乙酸铵/5％乙腈，或8mM甲酸/5％乙腈)，终止于100％B(B乙腈)。柱温箱温度设定为40℃，或 在由Waters Alliance 2795 HPLC、Waters PDA 2996二极管阵列检测器、Sedex 85 ELS检测器和ZQ单四极质谱仪组成的LC-MS系统上进行LC-MS分析。质谱仪配备有以正离子模式或负离子模式操作的电喷雾离子源(ES)。毛细管电压和锥电压分别设定为3.2kV和30V。质谱仪在m/z 100-700之间扫描，扫描时间为0.3s。二极管阵列检测器在200-400nm之间扫描。将ELS检测器的温度调节到40℃，以及将压力设为1.9巴。在X-Terra MS C8，3.0×50mm，3.5μm(Waters)上，以1mL/min的流速进行分离。应用线性梯度，起始于100％A(A10mM乙酸铵/5％乙腈，或8mM甲酸/5％乙腈)，终止于100％B(B乙腈)。柱温箱温度设定为40℃，或 在配备有PDA(Waters2996)和Waters ZQ质谱仪的Water Acquity系统上进行LC-MS分析。柱Acquity UPLCTM BEH C8 1.7μm 2.1 x 50mm。柱温设定为65℃。对于LC分离，应用线性2分钟梯度，从100％A(A95％(0.01M乙酸铵/MilliQ Water)和5％乙腈)至100％B(5％(0.01M乙酸铵/MilliQWater)和95％乙腈)，以1.2mL/min的流速运行。PDA在210-350nm之间扫描，并提取254nm处的试样用于纯度测定。ZQ质谱仪用正/负切换模式的ES运行。毛细管电压为3kV，锥电压为30V，或 在由Waters试样处理器2777C、Waters 1525μ二元泵、Waters 1500柱温箱、Waters ZQ单四极质谱仪、Waters PDA2996二极管阵列检测器和Sedex85ELS检测器组成的LC-MS上进行LC-MS分析。质谱仪配备有以正离子模式或负离子模式操作的电喷雾离子源(ES)。质谱仪在m/z 100-700之间扫描，扫描时间为0.3s。毛细管电压和锥电压分别设定为3.4kV和30V。二极管阵列检测器在200-400nm之间扫描。将ELS检测器的温度调节到40℃，以及将压力设为1.9巴。对于分离，应用线性梯度进行分离，起始于100％A(A10mM乙酸铵/5％乙腈，或8mM甲酸/5％乙腈)，终止于100％B(B乙腈)。所使用的柱为Gemini C18，3.0mm x 50mm，3μm，(Phenomenex)，以1ml/min的流速运行。柱温箱温度设定为40℃，或 在由Waters试样处理器2777C、Waters 1525μ二元泵、Waters 1500柱温箱、Waters ZQ单四极质谱仪、Waters PDA2996二极管阵列检测器和Sedex85ELS检测器组成的LC-MS上进行LC-MS分析。质谱仪配备有大气压化学电离(APCI)离子源，所述离子源还配备有大气压光电离(APPI)装置。质谱仪以正离子模式(在APCI和APPI之间切换)扫描。质量范围设定为m/z120-800，使用0.3s的扫描时间。APPI反射器(repeller)和APCI电晕(corona)分别设定为0.86kV和0.80μA。此外，去溶剂化温度(300℃)、去溶剂化气体(400L/Hr)和锥气体(5L/Hr)对于APCI和APPI模式都是一致的。使用Gemini柱C18，3.0mm x 50mm，3μm，(Phenomenex)进行分离，并以1ml/min的流速运行。使用线性梯度，起始于100％A(A10mM乙酸铵/5％甲醇)，终止于100％B(甲醇)。柱温箱温度设定为40℃，或 在由Alliance 2690 Separations Module、Waters 2487 Dual 1吸收检测器(220和254nm)和Waters ZQ单四极质谱仪组成的Waters LC-MS上进行LC-MS分析。质谱仪配备有以正离子模式或负离子模式操作的电喷雾离子源(ESI)。毛细管电压为3kV，锥电压为30V。质谱仪在m/z97-800之间扫描，扫描时间为0.3s或0.8s。在Chromolith Performance RP-18e(100 x 4.6mm)上进行分离。应用线性梯度，起始于95％A(A0.1％甲酸(水溶液))，并且5分钟后终止于100％B(乙腈)。流速2.0mL/min。
GC-MS在由Agilent Technologies提供的GC-MS系统(GC 6890，5973NMSD)上进行化合物鉴定。所使用的柱是VF-5MS，ID 0.25mm×30m，0.25μm(Varian Inc.)。应用线性温度梯度，起始于40℃(保持1分钟)并且终止于300℃(保持1分钟)，25℃/分钟。质谱仪配备有化学电离(CI)离子源，以及反应物气体是甲烷。质谱仪配备有电子轰击(EI)离子源，并且电子电压设为70eV。质谱仪在m/z50-500之间扫描，并且扫描速度设为3.25扫描/秒，或 在由Agilent Technologies提供的GC-MS系统(GC 6890，5973N MSD)上进行化合物鉴定。质谱仪配备有SIM GmbH制造的直接进样探头(DirectInlet Probe，DIP)接口。质谱仪配备有化学电离(CI)离子源，以及反应物气体是甲烷。质谱仪配备有电子轰击(EI)离子源，并且电子电压设为70eV。质谱仪在m/z50-500之间扫描，并且扫描速度设为3.25扫描/秒。应用线性温度梯度，起始于40℃(保持1分钟)并且终止于300℃(保持1分钟)，25℃/分钟。所使用的柱是VF-5MS，ID 0.25mm x 30m，0.25μm(Varian Inc.)。
制备性HPLC在具有二极管阵列检测器的Waters自动纯化HPLC上进行制备性色谱。柱XTerra MS C8，19 x 300mm，10μm。使用乙腈/在MilliQWater中的0.1M乙酸铵的5％乙腈溶液的梯度。流速20mL/min。可供选择地，在半制备性Shimadzu LC-8A HPLC上进行纯化，其具有配备有Waters

柱(C18，5μm，100mm×19mm)的Shimadzu SPD-10A UV-可见光检测器。使用乙腈/在MilliQ Water中的0.1％三氟乙酸的梯度。流速10ml/min。可供选择地，使用另一种柱即Atlantis C18 19 x 100mm，5μm色谱柱。使用乙腈/在MilliQ Water中的0.1M乙酸铵的5％乙腈溶液的梯度。流速15mL/min，或 在配有自动进样器以及自动化馏分收集器(Waters 2767)、梯度泵(Waters2525)、再生泵(Waters 600)、补充泵(Waters 515)、Waters Active Splitter、柱切换(Waters CFO)、PDA(Waters 2996)和Waters ZQ质谱仪的WatersFractionLynx系统上进行制备性HPLC。柱XBridgeTM Prep C8 5μm OBDTM19 x 100mm，具有保护柱

Prep MS C8 10μm 19 x 10mm柱体。对于LC分离，应用从100％A(含有95％(0.1M乙酸铵的MilliQ Water)和5％乙腈)至100％B(100％乙腈)的梯度，流速为25mL/min。PDA在210-350nm之间扫描。ZQ质谱仪使用正离子模式的ES运行。毛细管电压为3kV，以及锥电压为30V。由混合触发即UV和MS信号确定馏分收集。
在Creator或Initiaror或Smith合成仪单模式微波腔中进行微波加热，在2450MHz产生连续辐射。
在Merch TLC-板(硅胶60F254)上进行薄层色谱(TLC)，斑点由UV显现。在Combi

CompanionTM上进行柱色谱，使用RediSepTM正相快速柱或使用Merck硅胶60(0.040-0.063mm)。
使用软件ACD/Name，8.0或9.0版本(Advanced Chemistry Development，Inc.(ACD/Labs)，Toronto ON，Canada，www.acdlabs.com，2004)对化合物进行命名。
实施例 接下来为本发明化合物的多个非限制性实施例。
实施例1 4-溴-1-氟-2-甲氧基苯
将氢溴酸水溶液(48％，2.41mL)加到4-氟-3-甲氧基苯胺(1.0g，7.1mmol)于水(10mL)中的溶液中，然后将得到的混合物在冰浴中冷却至0℃。历时15分钟滴加亚硝酸钠(538mg，7.8mmol)于水(5mL)中的溶液，同时维持温度在0至5℃之间。将得到的重氮鎓盐溶液加到预加热至75℃的溴化亚铜(I)(1.12g，7.8mmol)于水(5mL)中的混悬液中。充分摇动混合物，加入氢溴酸水溶液(48％，12.07mL)，然后将溶液在环境温度搅拌16h。加入过量的水，产物用乙醚萃取，合并的有机萃取液用饱和氯化钠水溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，然后真空蒸发溶剂，得到1.02g(70％收率)标题化合物1H-NMR(DMSO-d6)δ 7.36(dd，J＝7.78，2.26Hz，1H)，7.23-7.17(m，1H)，7.14-7.09(m，1H)，3.86(s，H)；MS(EI)m/z 204，206[M+1]。
实施例2 2-(4-氟-3-甲氧基苯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷
将无水1，2-二甲氧基乙烷(12mL)加到4-溴-1-氟-2-甲氧基苯(1.02g，5.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(228mg，0.25mmol)、三环己基膦(209mg，0.75mmol)、乙酸钾(732mg，7.5mmol)和4，4，4’，4’，5，5，5’，5’-八甲基-2，2’-联-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷(1.14g，4.5mmol)中，然后将得到的混合物在微波中在150℃照射1h。当冷却至环境温度时，将混合物过滤，然后真空蒸发溶剂，得到粗产物MS(EI)m/z 252[M+1]。
实施例3 3-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯酚
标题化合物是如实施例2中所述，从3-氯-5-甲氧基苯酚开始合成的，48％的收率。经柱色谱(使用二氯甲烷/乙腈(100/0至90/10)的梯度作为洗脱剂)进行纯化1H-NMR(DMSO-d6)δ 9.36(s，1H)，6.69(d，J＝2.3Hz，1H)，6.61(d，J＝2.0Hz，1H)，6.41(t，J＝2.4Hz，1H)，3.69(s，3H)，1.27(s，12H)；MS(ES)m/z251[M+1]+。
实施例4 甲磺酸3-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯酯
在0℃在氩气气氛下向搅拌的3-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯酚(0.12g，0.48mmol)于二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入三乙胺(0.058g，0.58mmol)，接着加入甲磺酰氯(0.071g，0.62mmol)。使反应混合物达到环境温度并搅拌18h，然后将得到的混合物真空浓缩至干。经柱色谱(使用二氯甲烷/乙腈(100/0至90/10)的梯度作为洗脱剂)进行纯化，得到0.050g(32％收率)标题化合物1H-NMR(CDCl3)δ 7.30(d，J＝2.3Hz，1H)，7.28(d，J＝2.0Hz，1H)，6.96(t，J＝2.4Hz，1H)，3.86(s，3H)，3.16(s，3H)，1.35(s，12H)；MS(ES)m/z 329[M+1]+。
实施例5 3-氯-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯酚
3-溴-5-氯苯酚(5g，19.9mmol，描述于Maleczka R.E.et.al.J.Am.Chem.Soc.2003，125，7792-7793中)、4，4，4’，4’，5，5，5’，5’-八甲基-2，2’-联-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷(6.06g，23.9mmol)、[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(487mg，0.6mmol)、乙酸钾(5.86g，59.7mmol)、1，2-二甲氧基乙烷(60mL)和水(4mL)分装入四个微波小瓶中，然后各自在微波中在150℃照射15分钟。当冷却至环境温度时，合并混合物，用盐水稀释，然后用乙醚萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥，然后真空浓缩。经柱色谱(使用0-5％乙腈/二氯甲烷的梯度作为洗脱剂)进行纯化，得到1.43g(28％收率)标题化合物1H NMR(DMSO-d6)δ 9.89(s，1H)，7.02(s，2H)，6.91(s，1H)，1.28(s，12H)；MS(ES)m/z 253[M-H]-。
实施例6 甲磺酸3-氯-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯酯
在0℃将甲磺酰氯(122μL，0.79mmol)滴加到3-氯-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯酚(200mg，0.79mmol)和三乙胺(0.4mL，3.14mmol)于无水二氯甲烷(1.5mL)中的混合物中。反应混合物在环境温度搅拌1h，用二氯甲烷(10mL)稀释，用水洗涤，经硫酸钠干燥然后真空浓缩得到0.200g(86％收率)粗制的标题化合物1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 7.75(d，J＝1.52Hz，2H)，7.57(d，J＝1.77Hz，2H)，7.41(t，J＝2.15Hz，1H)，3.18(s，3H)，1.35(s，12H)；MS(EI)m/z 332[M+1]。
实施例7 2-(3-氯-5-甲氧基苯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷
将3-氯-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯酚(200mg，0.79mmol)于四氢呋喃(无水，1.5mL)中的溶液滴加到氢化钠于四氢呋喃(无水，0.5mL)中的浆液中。将混合物搅拌10分钟，然后加入碘甲烷(147μL，2.36mmol)。将获得的混合物搅拌过夜。加入饱和氯化铵水溶液(1mL)，产物用二氯甲烷(20mL)萃取。有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥然后真空浓缩得到0.170g(90％收率)粗制的标题化合物1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 7.38(d，J＝1.26Hz，1H)，7.20(d，J＝2.02Hz，1H)，7.02-6.98(m，1H)，3.83(s，3H)，1.35(s，12H)；MS(EI)m/z 268[M+1]。
实施例8 1-(3-溴苯基)-1-吡啶-4-基甲胺
在氩气气氛下将丁基锂(2.5M的己烷溶液，10.20mL，25.40mmol)加到冷却的(-78℃)1，3-二溴苯(6g，25.40mmol)于无水乙醚(60mL)中的溶液中。将获得的混合物在-78℃搅拌1h。加入4-氰基吡啶(2.64g，25.40mmol)于无水乙醚(45mL)中的溶液，然后在-78℃继续搅拌20分钟。使反应混合物达到环境温度，加入无水甲醇(30mL)，然后将得到的混合物再搅拌45分钟。将溶液冷却至0℃，加入硼氢化钠(1.3g，34.0mmol)，然后将反应混合物在环境温度搅拌过夜。小心加入饱和氯化铵水溶液(40mL)，然后将混合物浓缩。水相用二氯甲烷(40mL)萃取两次，有机层经硫酸钠干燥并真空浓缩，产物经柱色谱(使用氯仿甲醇0-10％的梯度作为洗脱剂)进行纯化，得到4.22g(63％收率)标题化合物1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 8.56(dd，J＝4.55，1.52Hz，2H)，7.54(t，J＝1.77Hz，1H)，7.40(dt，J＝7.83，1.52Hz，1H)，7.33-7.24(m，3H)，7.20(t，J＝7.83Hz，1H)，5.15(s，1H)，1.78(br s，2H)；MS(ES)m/z 264，266[M+1]+。
实施例9 4-[(3-溴苯基)(异硫氰基)甲基]吡啶
将硫代碳酸O，O-二(吡啶-2-基酯)(183mg，0.79mmol；描述于Kim S.et al.Tetrahedron Lett.1985，26(13)，1661-1664中)一次性加到1-(3-溴苯基)-1-吡啶-4-基甲胺(100mg，0.38mmol)于二氯甲烷(2mL)中的溶液中。将混合物搅拌30分钟，然后用二氯甲烷(15mL)稀释，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩得到0.100g(86％收率)粗产物MS(ES)m/z 305，307[M+1]+。
实施例10 4-(3-溴-苯基)-4-吡啶-4-基-噻唑烷-2，5-二硫酮
在-78℃将4-[(3-溴苯基)(异硫氰基)甲基]吡啶(4.63g，15.19mmol)和二硫化碳(1.82mL，30.38mmol)于无水四氢呋喃(30mL)中的溶液滴加到搅拌的叔丁醇钾(2.56g，22.79mmol)于无水四氢呋喃(60mL)中的溶液中。使混合物达到环境温度，同时搅拌过夜。蒸发溶剂，然后将残余物溶于乙酸乙酯(100mL)中，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。经柱色谱(使用氯仿甲醇0-10％的梯度作为洗脱剂)进行纯化，得到4.95g(85％收率)标题化合物MS(ES)m/z382，383[M+1]+。
实施例11 8-(3-溴苯基)-8-(吡啶-4-基)-3，4，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6(2H)-硫酮
将4-(3-溴-苯基)-4-吡啶-4-基-噻唑烷-2，5-二硫酮(1.99g，5.22mmol)和1，3-二氨基丙烷(1.31mL，15.66mmol)于乙醇(40mL)中的混合物在70℃加热过夜。将混合物冷却至环境温度并真空浓缩。将残余物溶于二氯甲烷(40mL)中，用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。经柱色谱(使用氯仿甲醇0-10％的梯度作为洗脱剂)进行纯化，得到1.59g(79％收率)标题化合物1HNMR(400MHz，CDCl3)δ 8.89(s，1H)，8.64(dd，J＝4.55，1.77Hz，2H)，7.58-7.50(m，2H)，7.38-7.31(m，3H)，7.29-7.25(m，1H)，3.92(t，J＝6.06Hz，2H)，3.65(q，J＝5.64Hz，2H)，2.01-1.90(m，2H)；MS(ES)m/z 387，389[M+1]+。
实施例12 8-(3-溴-苯基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢-咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺
将8-(3-溴苯基)-8-(吡啶-4-基)-3，4，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6(2H)-硫酮(2.60g，6.7mmol)溶于甲醇(90mL)中。加入叔丁基氢过氧化物水溶液(70％，15mL，100.50mmol)和氨水(30％，30mL)，然后将得到的混合物在环境温度搅拌过夜。浓缩混合物，将残余物溶于二氯甲烷(90mL)，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。经柱色谱(使用氯仿(0.5％7M氨的甲醇溶液)甲醇0-10％的梯度作为洗脱剂)进行纯化，得到1.97g(80％收率)标题化合物1HNMR(400MHz，CDCl3)δ 8.52(d，J＝6.06Hz，2H)，7.66(t，J＝1.77Hz，1H)，7.46-7.36(m，4H)，7.16(t，J＝7.96Hz，1H)，3.72(t，J＝5.94Hz，2H)，3.61(ddd，J＝5.43，2.65，2.53Hz，2H)，1.92-1.82(m，2H)；MS(ES)m/z 370，372[M+1]+。
实施例13 3’-(6-氨基-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-8-基)-联苯-3-甲腈盐酸盐
将8-(3-溴-苯基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢-咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺(50mg，135μmol)、(3-氰基苯基)硼酸(26mg，176μmol)、[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(11mg，14μmol)和碳酸铯(132mg，370μmol)于1，2-二甲氧基乙烷:水:乙醇(6:3:1，3mL)中的混合物在微波中在130℃照射15分钟。当冷却至环境温度时，混合物用水稀释(3mL)，然后用二氯甲烷(20mL)萃取。有机萃取液经硫酸钠干燥，真空浓缩，然后经制备性HPLC纯化，得到乙酸盐形式的标题化合物，将其溶于无水甲醇中，然后用盐酸(1mL，1M的乙醚溶液)处理。真空蒸发溶剂得到25.6mg(45％收率)标题化合物1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 8.51(dd，J＝4.55，1.52Hz，2H)，7.87-7.67(m，1H)，7.61-7.55(m，2H)，7.51-7.40(m，7H)，3.65-3.57(m，4H)，1.92-1.83(m，2H)；MS(ES)m/z 393[M+1]+。
方法A 将8-(3-溴-苯基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢-咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺(50mg，135μmol)、相应的硼酸或硼酸酯(176μmol)、[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(11mg，14μmol)和碳酸铯(132mg，370μmol)于1，2-二甲氧基乙烷:水:乙醇(6:3:1，3mL)中的混合物在微波中在130℃照射15分钟。当冷却至环境温度时，将混合物过滤，然后真空除去溶剂。将残余物溶于二甲基亚砜(800μL)中，产物使用制备性HPLC进行纯化。
方法B 将8-(3-溴-苯基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢-咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺(100mg，280μmol)、相应的硼酸酯(352μmol)、[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(22mg，28μmol)和碳酸钾(224mg，1.62mmol)于四氢呋喃(无水，6mL)中的混合物在微波中在130℃照射2h。当冷却至环境温度时，加入二甲基亚砜(1mL)。将溶液真空浓缩，除去四氢呋喃，产物使用制备性HPLC进行纯化。
实施例14-37 如下表所示，实施例14-37是如方法A或方法B中所述合成的，收率是类似的。






实施例38 1-(3-溴苯基)-1-(呋喃-3-基)甲胺
将1，3-二溴苯(1.314mL，10.86mmol)溶于无水乙醚(25mL)中，然后冷却至-78℃。滴加正丁基锂(4.53mL，10.86mmol，2.5M的己烷溶液)，然后将混合物搅拌30分钟。加入呋喃-3-甲腈(3-furonitrile)(1.0g，10.86mmol)于无水乙醚(10mL)中的溶液，然后历时2h将混合物缓慢温热至0℃。加入无水甲醇(30mL)，在0℃保持30分钟后加入硼氢化钠(0.83g，21.7mmol)。将混合物在室温搅拌过夜。加入饱和氯化铵水溶液，然后将混合物用二氯甲烷萃取。合并有机相，经硫酸镁干燥并浓缩。柱色谱(使用从二氯甲烷至二氯甲烷甲醇99∶1的梯度洗脱)得到0.55g(20％收率)标题化合物1H NMR(DMSO-d6)δ7.59(t，J＝1.76Hz，1H)，7.53(t，J＝1.76Hz，1H)，7.48-7.46(m，1H)，7.40-7.36(m，2H)，7.26(t，J＝7.78Hz，1H)，6.37-6.36(m，1H)，4.95(s，1H)，2.24(br s，2H)。
实施例39 3-[(3-溴苯基)(异硫氰基)甲基]呋喃
在0℃将硫光气(0.20mL，2.6mmol)分批加到搅拌的1-(3-溴苯基)-1-(呋喃-3-基)甲胺(0.55g，2.18mmol)和饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)于二氯甲烷(20mL)中的溶液中。将混合物在0℃搅拌1h，然后在室温搅拌30分钟并收集有机相。水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到0.65g(定量收率)标题化合物1H NMR(DMSO-d6)δ7.74-7.72(m，1H)，7.69(t，J＝1.76Hz，1H)，7.61-7.56(m，2H)，7.45-7.40(m，2H)，6.53-6.52(m，1H)，6.45(s，1H)。
实施例40 4-(3-溴苯基)-4-(呋喃-3-基)-1，3-噻唑烷-2，5-二硫酮
在-78℃将3-[(3-溴苯基)(异硫氰基)甲基]呋喃(0.64g，2.18mmol)和二硫化碳(0.26mL，4.36mmol)于无水四氢呋喃(15mL)中的溶液滴加到搅拌的叔丁醇钾(0.42g，3.7mmol)于无水四氢呋喃(8mL)中的混合物中。加入后，使混合物达到室温并过夜。加入水、盐水和乙酸乙酯，然后收集有机相。水相用乙酸乙酯萃取，合并有机萃取液，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并蒸发，得到0.74g(91％)标题化合物1H NMR(DMSO-d6)δ 7.75-7.71(m，1H)，7.69-7.64(m，1H)，7.59-7.54(m，1H)，7.40-7.30(m，3H)，6.50-6.47(m，1H)。
实施例41 8-(3-溴苯基)-8-(呋喃-3-基)-3，4，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6(2H)-硫酮
将4-(3-溴苯基)-4-(呋喃-3-基)-1，3-噻唑烷-2，5-二硫酮(0.81g，2.18mmol)和1，3-二氨基丙烷(0.50g，6.54mmol)在乙醇(20mL)中加热至70℃，持续1.5h。将混合物冷却至室温并浓缩，残余物用乙酸乙酯稀释，然后用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。合并有机萃取液，经硫酸钠干燥并蒸发。经柱色谱(使用0-35％的乙酸乙酯/正庚烷洗脱)得到0.50g(61％收率)标题化合物1HNMR(DMSO-d6)δ 10.75(s，1H)，7.67(t，J＝1.76Hz，1H)，7.63-7.61(m，1H)，7.55-7.52(m，2H)，7.44-7.41(m，1H)，7.38-7.34(m，1H)，6.45-6.43(m，1H)，3.74-3.66(m，2H)，3.50-3.37(m，2H)，1.82-1.69(m，2H)；MS(ES)m/z 376，378[M+1]+。
实施例42 8-(3-溴苯基)-8-(呋喃-3-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺
将8-(3-溴苯基)-8-(呋喃-3-基)-3，4，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6(2H)-硫酮(0.50g，1.33mmol)溶于甲醇(12mL)和氨水(25％，4mL)中。加入叔丁基氢过氧化物(2.7mL，70％的水溶液，20mmol)，然后将混合物在30℃加热过夜。蒸发大部分甲醇，加入水，然后将混合物用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取液，用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥并蒸发。经柱色谱(使用0-6％[氨的甲醇溶液(7N)]/二氯甲烷洗脱)对粗产物进行纯化，得到0.38g(79％)标题产物1H NMR(DMSO-d6)δ 7.68(t，J＝1.88Hz，1H)，7.57-7.54(m，1H)，7.51(t，J＝1.76Hz，1H)，7.46-7.44(m，1H)，7.39-7.36(m，1H)，7.25-7.21(m，1H)，6.34-6.33(m，1H)，6.26(br s，2H)，3.53-3.48(m，2H)，3.38-3.35(m，2H)，1.71-1.61(m，2H)；MS(ES)m/z 359，361[M+1]+。
实施例43 8-(3’，5’-二氯联苯-3-基)-8-(呋喃-3-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐
将8-(3-溴苯基)-8-(呋喃-3-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺(70mg，0.19mmol)、[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(8mg，0.01mmol)、碳酸铯(186mg，0.57mmol)和(3，5-二氯苯基)硼酸(42mg，0.22mmol)溶于二甲氧基乙烷:乙醇:水(6:3:1)(4mL)中，然后在微波中在130℃加热20分钟。当冷却至环境温度时，将混合物过滤，然后经制备性HPLC纯化，得到28mg(30％收率)标题化合物1H NMR(DMSO-d6)δ 7.82(t，J＝1.76Hz，1H)，7.68-7.65(m，1H)，7.61-7.59(m，1H)，7.58-7.54(m，3H)，7.52-7.50(m，1H)，7.49-7.48(m，1H)，7.41-7.37(m，1H)，6.40-6.38(m，1H)，3.55-3.50(m，4H)，1.89(s，3H)，1.71-1.62(m，2H)；MS(ES)m/z 423，425[M-1]-。
实施例44 8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-(呋喃-3-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐
标题化合物是如实施例43所述，从8-(3-溴苯基)-8-(呋喃-3-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺和(2-氟吡啶-3-基)硼酸开始合成的，71％的收率1H NMR(DMSO-d6)δ 8.25-8.22(m，1H)，8.04-7.98(m，1H)，7.79-7.76(m，1H)，7.66-7.61(m，1H)，7.52(t，J＝1.76Hz，1H)，7.49-7.39(m，4H)，6.42-6.39(m，1H)，3.54-3.52(m，4H)，1.89(s，3H)，1.72-1.63(m，2H)；MS(ESI)m/z 374[M-1]-。
实施例45 1-(3-溴苯基)-1-(呋喃-2-基)甲胺
标题化合物是如实施例38所述，从呋喃-2-甲腈开始合成的，47％的收率1H NMR(DMSO-d6)δ 7.57(t，J＝1.76Hz，1H)，7.52-7.50(m，1H)，7.44-7.40(m，1H)，7.37-7.33(m，1H)，7.29-7.25(m，1H)，6.38-6.35(m，1H)，6.23-6.21(m，1H)，5.04(s，1H)，2.34(br s，2H)。
实施例46 2-[(3-溴苯基)(异硫氰基)甲基]呋喃
标题化合物是如实施例39中所述，从1-(3-溴苯基)-1-(呋喃-2-基)甲胺开始合成的，收率是定量1H NMR(DMSO-d6)δ 7.89(t，J＝1.63Hz，1H)，7.75-7.74(m，1H)，7.46-7.44(m，2H)，7.30-7.26(m，2H)，6.63(s，1H)，6.50-6.48(m，1H)。
实施例47 4-(3-溴苯基)-4-(呋喃-2-基)-1，3-噻唑烷-2，5-二硫酮
标题化合物是如实施例40中所述，从2-[(3-溴苯基)(异硫氰基)甲基]呋喃开始合成的，收率是定量1H NMR(DMSO-d6)δ 7.76-7.70(m，1H)，7.62-7.57(m，1H)，7.51-7.49(m，1H)，7.43-7.35(m，2H)，6.51-6.46(m，1H)，6.37-6.29(m，1H)。
实施例48 8-(3-溴苯基)-8-(呋喃-2-基)-3，4，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6(2H)-硫酮
标题化合物是如实施例41中所述，从4-(3-溴苯基)-4-(呋喃-2-基)-1，3-噻唑烷-2，5-二硫酮开始合成的，68％的收率。经柱色谱(使用0-45％乙酸乙酯/正庚烷洗脱)对粗产物进行纯化1H NMR(DMSO-d6)δ 10.84(s，1H)，7.71-7.69(m，1H)，7.67(t，J＝1.76Hz，1H)，7.61-7.58(m，1H)，7.56-7.53(m，1H)，7.42-7.38(m，1H)，6.44(dd，J＝3.39，1.88Hz，1H)，6.19-6.17(m，1H)，3.79-3.64(m，2H)，3.49-3.37(m，2H)，1.80-1.72(m，2H)；MS(ESI)m/z 376，378[M+1]+。
实施例49 8-(3-溴苯基)-8-(呋喃-2-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺
标题化合物是如实施例42所述，从8-(3-溴苯基)-8-(呋喃-2-基)-3，4，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6(2H)-硫酮开始合成的，78％的收率。经硅胶柱色谱(使用0-6％[氨的甲醇溶液(7N)]/二氯甲烷洗脱)对粗产物进行纯化1HNMR(DMSO-d6)δ 7.76(t，J＝1.76Hz，1H)，7.64-7.60(m，1H)，7.51-7.48(m，1H)，7.45-7.41(m，1H)，7.28-7.24(m，1H)，6.32-6.29(m，1H)，6.03-6.00(m，1H)，3.58-3.45(m，2H)，3.41-3.35(m，2H)，1.70-1.62(m，2H)；MS(ESI)m/z 359，361[M+1]+。
实施例50 8-(3’，5’-二氯联苯-3-基)-8-(呋喃-2-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐
标题化合物是如实施例43中所述，从8-(3-溴苯基)-8-(呋喃-2-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺开始合成的，52％的收率1HNMR(DMSO-d6)δ 7.89(t，J＝1.76Hz，1H)，7.74-7.70(m，1H)，7.63-7.60(m，2H)，7.58-7.57(m，2H)，7.51-7.50(m，1H)，7.44-7.40(m，1H)，6.32-6.30(m，1H)，6.05-6.03(m，1H)，3.59-3.49(m，4H)，1.90(s，3H)，1.70-1.63(m，2H)；MS(ES)m/z425，427[M+1]+。
实施例51 8-(呋喃-2-基)-8-(3’-甲氧基联苯-3-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐
标题化合物是如实施例43所述，从8-(3-溴苯基)-8-(呋喃-2-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺和(3-甲氧基苯基)硼酸开始合成的，55％的收率1H NMR(DMSO-d6)δ 7.86(t，J＝1.76Hz，1H)，7.62-7.59(m，1H)，7.55-7.51(m，2H)，7.40-7.35(m，2H)，7.14-7.10(m，1H)，7.08-7.06(m，1H)，6.96-6.92(m，1H)，6.33-6.31(m，1H)，6.07-6.05(m，1H)，3.81(s，3H)，3.57-3.53(m，4H)，1.89(s，3H)，1.71-1.63(m，2H)；MS(ES)m/z 387[M+1]+。
实施例52 1-(3-溴苯基)-1-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)甲胺
标题化合物是如实施例38所述，从2-甲基噻唑-4-甲腈开始合成的，5％的收率1H NMR(DMSO-d6)δ 7.57(t，J＝1.88Hz，1H)，7.40-7.34(m，2H)，7.27-7.23(m，2H)，5.10(s，1H)，2.57(s，3H)；MS(ESI)m/z 266，268[M+1]+。
实施例53 4-[(3-溴苯基)(异硫氰基)甲基]-2-甲基-1，3-噻唑
将硫代碳酸O，O-二(吡啶-2-基酯)(270ng，1.16mmol)加到搅拌的1-(3-溴苯基)-1-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)甲胺(165mg，0.58mmol)于二氯甲烷(5mL)中的溶液中。将混合物搅拌30分钟，用二氯甲烷稀释，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到0.19g(定量收率)标题化合物，其不经进一步纯化就使用1H NMR(DMSO-d6)δ 7.52-7.38(m，5H)，6.52(s，1H)，2.63(s，3H)。
实施例54 4-(3-溴苯基)-4-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)-1，3-噻唑烷-2，5-二硫酮
标题化合物是如实施例40所述，从4-[(3-溴苯基)(异硫氰基)甲基]-2-甲基-1，3-噻唑开始合成的，收率是定量的，并且粗产物不经进一步纯化就使用1H NMR(DMSO-d6)δ 7.50-7.46(m，1H)，7.43-7.37(m，2H)，7.36-7.32(m，2H)，2.63(s，3H)。
实施例55 8-(3-溴苯基)-8-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)-3，4，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6(2H)-硫酮
标题化合物如实施例41所述，从4-(3-溴苯基)-4-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)-1，3-噻唑烷-2，5-二硫酮开始合成的，42％的收率。经柱色谱(使用0-40％乙酸乙酯/正庚烷洗脱)对粗产物进行纯化1H NMR(DMSO-d6)δ 10.75(s，1H)，7.71(t，J＝1.88Hz，1H)，7.58-7.56(m，1H)，7.56-7.54(m，1H)，7.40-7.35(m，1H)，7.17-7.16(m，1H)，3.78-3.63(m，2H)，3.47-3.39(m，2H)，2.62(s，3H)，1.79-1.71(m，2H)；MS(ESI)m/z 405，407[M-1]-。
实施例56 8-(3-溴苯基)-8-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺
标题化合物是如实施例42所述，从8-(3-溴苯基)-8-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)-3，4，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6(2H)-硫酮开始合成的，57％的收率。经柱色谱(使用0-10％[氨的甲醇溶液(7N)]/二氯甲烷洗脱)对粗产物进行纯化1H NMR(DMSO-d6)δ 7.80(br s，1H)，7.67-7.61(m，1H)，7.43-7.39(m，1H)，7.27-7.22(m，1H)，6.96(br s，1H)，6.23(br s，2H)，3.58-3.45(m，2H)，3.43-3.35(m，2H)，2.55(s，3H)，1.72-1.61(m，2H)；MS(ESI)m/z 390，392[M+1]+。
实施例57 8-(3’，5’-二氯联苯-3-基)-8-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐
标题化合物是如实施例43所述，从8-(3-溴苯基)-8-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺开始合成的，42％的收率1HNMR(DMSO-d6)δ 7.96(t，J＝1.76Hz，1H)，7.76-7.72(m，1H)，7.62-7.59(m，4H)，7.43-7.39(m，1H)，6.99(s，1H)，3.60-3.55(m，4H)，2.56(s，3H)，1.88(s，3H)，1.72-1.62(m，2H)；MS(ESI)m/z 456，458[M+1]+。
实施例581-(3-溴苯基)-1-(噻吩-3-基)甲胺
标题化合物是如实施例38所述，从3-氰基噻吩开始合成的，12％的收率1H NMR(DMSO-d6)δ 7.60(t，J＝1.76Hz，1H)，7.43-7.40(m，1H)，7.39-7.36(m，2H)，7.31-7.29(m，1H)，7.27-7.23(m，1H)，7.02(dd，J＝5.02，1.25Hz，1H)，5.11(s，1H)；MS(ES)m/z 251，253[M+1]+。
实施例59 3-[(3-溴苯基)(异硫氰基)甲基]噻吩
标题化合物是如实施例53所述，从1-(3-溴苯基)-1-(噻吩-3-基)甲胺开始合成的，收率是定量的MS(ES)m/z 308，310[M-1]-。
实施例60 4-(3-溴苯基)-4-(噻吩-3-基)-1，3-噻唑烷-2，5-二硫酮
标题化合物是如实施例40所述，从3-[(3-溴苯基)(异硫氰基)甲基]噻吩开始合成的，收率是定量的1H NMR(DMSO-d6)δ 7.58-7.38(m，3H)，7.37-7.24(m，3H)，6.19-6.08(m，1H)。
实施例61 8-(3-溴苯基)-8-(噻吩-3-基)-3，4，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6(2H)-硫酮
标题化合物是如实施例41所述，从4-(3-溴苯基)-4-(噻吩-3-基)-1，3-噻唑烷-2，5-二硫酮开始合成的，44％的收率。经柱色谱(使用0-25％乙酸乙酯/正庚烷)对粗产物进行纯化1H NMR(DMSO-d6)δ 7.58-7.55(m，1H)，7.55-7.48(m，3H)，7.42-7.38(m，1H)，7.38-7.33(m，1H)，7.06(dd，J＝5.14，1.38Hz，1H)，3.74-3.69(m，2H)，3.49-3.42(m，2H)，1.80-1.73(m，2H)；MS(ES)m/z 390，392[M-1]-。
实施例62 8-(3-溴苯基)-8-(噻吩-3-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺
标题化合物是如实施例42所述，从8-(3-溴苯基)-8-(噻吩-3-基)-3，4，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6(2H)-硫酮开始合成的，80％的收率。经柱色谱(使用0-8％[氨的甲醇溶液(7N)]/二氯甲烷)对粗产物进行纯化1HNMR(DMSO-d6)δ 7.68(t，J＝1.76Hz，1H)，7.57-7.54(m，1H)，7.39-7.35(m，3H)，7.25-7.20(m，1H)，7.03-7.01(m，1H)，3.54-3.50(m，2H)，3.39-3.36(m，2H)，1.70-1.64(m，2H)；MS(ESI)m/z 373，375[M-1]-。
实施例63 8-(3’，5’-二氯联苯-3-基)-8-(噻吩-3-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐
标题化合物是如实施例43所述，从8-(3-溴苯基)-8-(噻吩-3-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺开始合成的，38％的收率1H NMR(DMSO-d6)δ7.84-7.82(m，1H)，7.68-7.64(m，1H)，7.61-7.59(m，1H)，7.58-7.53(m，3H)，7.41-7.36(m，3H)，7.08-7.06(m，1H)，3.56-3.52(m，4H)，1.89(s，3H)，1.73-1.64(m，2H)；MS(ES)m/z 439，441[M-1]-。
实施例64 8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-(噻吩-3-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐
标题化合物是如实施例43所述，从8-(3-溴苯基)-8-(噻吩-3-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺(2-氟吡啶-3-基)硼酸开始合成的，59％的收率1H NMR(DMSO-d6)δ 8.24-8.21(m，1H)，8.02-7.97(m，1H)，7.80-7.77(m，1H)，7.63-7.60(m，1H)，7.48-7.37(m，5H)，7.09(dd，J＝5.02，1.25Hz，1H)，3.55-3.52(m，4H)，1.89(s，3H)，1.73-1.65(m，2H)；MS(ESI)m/z 390[M-1]-。
实施例65 8-(3-溴苯基)-3，3-二氟-8-(吡啶-4-基)-3，4，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6(2H)-硫酮
将4-(3-溴-苯基)-4-吡啶-4-基-噻唑烷-2，5-二硫酮(1.76g，4.61mmol)和2，2-二氟丙烷-1，3-二胺二盐酸盐(4.75g，6.84mmol，描述于Nanjappan，P.et al.Tetrahedron，1994，50(29)，8617-8632中)分散于乙醇(55mL)中。一次性加入三乙胺(15.5mL)。将反应混合物用油浴加热至70℃，搅拌16h，使其冷却至室温，然后蒸发溶剂。残余物再溶于乙酸乙酯和水中，然后分离各相。有机相用水洗涤。合并的水层用乙酸乙酯萃取，合并有机馏分，经硫酸镁干燥，过滤然后真空蒸发。将残余物再溶于乙酸乙酯中，在25g硅胶上真空蒸发，然后经柱色谱(使用乙酸乙酯/庚烷(0-33％)洗脱)进行纯化。对纯馏分进行真空浓缩得到1.43g(73％收率)标题化合物。MS(ES)m/z 423，425[M+1]+。
实施例66 8-(3-溴苯基)-3，3-二氟-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺
将叔丁基氢过氧化物水溶液(70％，5mL)加到8-(3-溴苯基)-3，3-二氟-8-(吡啶-4-基)-3，4，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6(2H)-硫酮(1.41g，3.33mmol)、甲醇(20mL)和氨水(25％，10mL)的混合物中。将反应混合物在室温搅拌21h，然后真空蒸发。将残余物再溶于二氯甲烷中，用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤然后真空蒸发。经柱色谱(使用二氯甲烷/甲醇/6M氨的甲醇溶液(2000:0:1至2000:400:1)的梯度)对粗产物进行纯化。对纯馏分进行真空浓缩得到0.41g(30％收率)标题化合物。MS(ES)m/z 406，408[M+1]+。
实施例67 3，3-二氟-8-[3-(5-甲氧基吡啶-3-基)苯基]-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐
将8-(3-溴苯基)-3，3-二氟-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺(64mg，165μmol)、5-甲氧基吡啶-3-硼酸(51mg，330μmol)、[1，1’-二(二苯基膦基二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(15mg，16.5μmol)和碳酸铯(162mg，495μmol)于1，2-二甲氧基乙烷:水:乙醇(6:3:1，3mL)中的混合物在微波中在130℃加热15分钟。当冷却至环境温度时，将混合物用水稀释然后用二氯甲烷萃取。有机萃取液经硫酸钠干燥，真空浓缩，产物经制备性HPLC纯化，得到28mg(39％收率)标题化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ 8.49(dd，J＝4.60，1.46Hz，2H)，8.34(d，J＝1.69Hz，1H)，8.30(d，J＝2.68Hz，1H)，7.83(t，J＝1.53Hz，1H)，7.65-7.57(m，1H)，7.56-7.39(m，5H)，4.01(t，J＝12.37Hz，2H)，3.89(s，3H)，3.85(t，J＝12.95Hz，2H)，1.90(s，3H)；MS(ES)m/z 435[M+1]+。
实施例68 3，3-二氟-8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.75乙酸盐
标题化合物是如实施例67中所述，从(2-氟吡啶-3-基)硼酸开始合成的，89％的收率。1H NMR(DMSO-d6)δ 8.48(d，J＝5.02Hz，2H)，8.23(d，J＝4.52Hz，1H)，8.00(t，J＝9.03Hz，1H)，7.78(s，1H)，7.58(d，J＝7.28Hz，1H)，7.52-7.39(m，5H)，3.99(t，J＝12.30Hz，2H)，3.83(t，J＝12.67Hz，2H)，1.90(s，2H)；MS(ES)m/z423[M+1]+。
实施例69 3，3-二氟-8-(2’-氟-5’-甲氧基联苯-3-基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.25乙酸盐
标题化合物是如实施例67中所述，从(2-氟-5-甲氧基苯基)硼酸开始合成的，72％的收率。1H NMR(DMSO-d6)δ 8.49(br s，2H)，7.73(s，1H)，7.55-7.47(m，3H)，7.43-7.38(m，2H)，7.21(dd，J＝10.23，9.00Hz，1H)，6.97-6.89(m，2H)，3.99(t，J＝12.29Hz，2H)，3.82(t，J＝13.33Hz，2H)，3.77(s，3H)，1.90(br s，1H)；MS(ES)m/z452[M+1]+。
实施例70 3，3-二氟-8-(2’-氟-3’-甲氧基联苯-3-基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.75乙酸盐
标题化合物是如实施例67中所述，从(2-氟-3-甲氧基苯基)硼酸开始合成的，70％的收率。1H NMR(DMSO-d6)δ 8.48(d，J＝5.74Hz，2H)，7.70(s，1H)，7.59-7.46(m，3H)，7.42-7.37(m，2H)，7.27-7.09(m，2H)，7.00-6.86(m，1H)，3.99(t，J＝12.18Hz，2H)，3.86(s，3H)，3.85-3.78(m，2H)，1.89(s，2H)；MS(ESI)m/z452[M+1]+。
实施例71 3，3-二氟-8-[3-(5-氟吡啶-3-基)苯基]-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐
标题化合物是如实施例67中所述，从(5-氟吡啶-3-基)硼酸开始合成的，69％的收率。1H NMR(DMSO-d6)δ 8.65(s，1H)，8.58(d，J＝2.60Hz，1H)，8.49(d，J＝6.05Hz，2H)，7.93-7.86(m，2H)，7.68-7.55(m，2H)，7.50(dd，J＝4.63，1.42Hz，2H)，7.45(t，J＝7.77Hz，1H)，4.01(t，J＝12.33Hz，2H)，3.85(t，J＝12.83Hz，2H)，1.89(s，3H)；MS(ESI)m/z 423[M+1]+。
实施例72 3，3-二氟-8-(3’-甲氧基联苯-3-基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺1.25乙酸盐
将[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(23mg，27.1μmol)加到搅拌的并用氮气吹洗的(3-甲氧基苯基)硼酸(57mg，373μmol)、8-(3-溴-苯基)-3，3-二氟-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢-咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺(110mg，271μmol)和碳酸铯(263mg，0.807mmol)于1，2-二甲氧基乙烷(6mL)、水(3mL)和乙醇(1mL)中的混悬液中。将反应小瓶密封，加热至65℃然后搅拌48h。将反应混合物用水(4mL)和二氯甲烷(25mL)稀释，然后分离各相。有机层经硫酸镁干燥，过滤然后真空蒸发，接着经制备性HPLC进行纯化，得到26.7mg(23％收率)标题化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ 8.48(d，J＝4.29Hz，2H)，7.78(br s，1H)，7.59-7.43(m，5H)，7.37(t，J＝7.81Hz，1H)，7.16-7.00(m，2H)，6.93(d，J＝8.27Hz，1H)，4.01(t，J＝12.41Hz，2H)，3.89-3.77(m，5H)，1.90(s，4H)；MS(ESI)m/z434[M+1]+。
实施例73 3，3-二氟-8-[3-(5-氯-2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐
标题化合物是如实施例67中所述，从2-氟-5-氯吡啶-3-硼酸开始合成的，73％的收率。1H NMR(DMSO-d6)δ 8.49(br.s.，2H)，8.35-8.27(m，1H)，8.17(dd，J＝8.53，2.51Hz，1H)，7.81(d，J＝1.51Hz，1H)，7.62(d，J＝7.78Hz，1H)，7.54-7.43(m，4H)，4.00(t，J＝12.42Hz，2H)，3.83(t，J＝12.55Hz，2H)，1.91(br.s.，3H)。MS(ESI)m/z 457[M+1]+。
实施例74 3，3-二氟-8-(吡啶-4-基)-8-(3-(嘧啶-5-基)苯基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐
标题化合物如实施例67中所述，从嘧啶-5-硼酸开始合成的，87％的收率。1H NMR(DMSO-d6)δ 8.97(s，1H)，8.78(s，2H)，8.26(d，J＝5.52Hz，2H)，7.65(s，1H)，7.44(d，J＝7.66Hz，1H)，7.36(d，J＝8.27Hz，1H)，7.31-7.19(m，3H)，3.78(t，J＝12.56Hz，2H)，3.71-3.56(m，2H)，1.67(s，3H)。MS(ESI)m/z 406[M+1]+。
实施例75 N-叔丁亚磺酰基-3-溴-4-氟苯基-甲亚胺
将3-溴-4-氟-苯甲醛(2.2g，11mmol)、叔丁基亚磺酰胺(2.4g，20mmol)和四乙醇钛(9.1g，40mmol)于四氢呋喃(10mL)中的混合物在65℃加热12h。在硅胶上蒸发溶剂，然后经色谱(使用乙酸乙酯/庚烷(0-100％)的洗脱梯度)进行纯化，得到3.3g(96％)标题化合物。MS m/z(ES)308[M+1]+。
实施例76 1-(3-溴-4-氟苯基)-1-吡啶-4-基甲胺
在-105℃在氩气气氛下将叔丁基锂(1.5M的戊烷溶液，5mL，7.45mmol)加到THF(四氢呋喃)(25mL)中。历时10分钟加入4-碘吡啶(0.84g，4.09mmol)。加入N-叔丁亚磺酰基-3-溴-4-氟苯基-甲亚胺(1.14g，3.72mmol)于THF(20mL)中的溶液，将反应将混合物在-100℃搅拌1h，然后通过加入水(20mL)淬灭。将混合物在水和乙酸乙酯之间分配，有机层用硫酸钠干燥并浓缩。残余物再溶于甲醇(25mL)，加入盐酸(1M的乙醚溶液，3.8mL)，然后将混合物搅拌过夜。将混合物在饱和碳酸氢钠水溶液和二氯甲烷之间分配。有机层经硫酸钠干燥并真空浓缩。经快速色谱(使用甲醇(0.1％7N氨)/二氯甲烷(0-10％)进行梯度洗脱)进行纯化，得到0.321g(31％收率)标题化合物。MS(ESI)m/z282[M+1]+。
实施例77 4-[(3-溴-4-氟苯基)(异硫氰基)甲基]吡啶
将硫代碳酸O，O-二(吡啶-2-基酯)(0.285g，1.23mmol)加到1-(3-溴-4-氟苯基)-1-吡啶-4-基甲胺(0.230g，0.818mmol)于二氯甲烷(18mL)中的溶液中。将混合物在室温搅拌1h，然后用二氯甲烷(20mL)稀释。有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到0.252g(95％收率)标题化合物。MS(ESI)m/z324[M+1]+。
实施例78 4-(3-溴-4-氟-苯基)-4-吡啶-4-基-1，3-噻唑烷-2，5-二硫酮
在-78℃将4-[(3-溴-4-氟苯基)(异硫氰基)甲基]吡啶(0.252g，0.77mmol)和二硫化碳(0.1mL，1.64mmol)于无水四氢呋喃(6.1mL)中的混合物滴加到搅拌的叔丁醇钾(0.138g，1.23mmol)于无水四氢呋喃(6mL)中的溶液中。使混合物达到环境温度，同时搅拌过夜。蒸发溶剂，将残余物溶于氯仿-乙酸乙酯(1:1，30mL)中，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。经柱色谱(使用甲醇(0-10％)/氯仿洗脱)进行纯化，得到0.230g(70％收率)标题化合物。MS(ES)m/z400[M+1]+。
实施例79 3，3-二氟-3，4，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6(2H)-硫酮-4-(3-溴-4-氟苄基)吡啶
将4-(3-溴-4-氟-苯基)-4-吡啶-4-基-1，3-噻唑烷-2，5-二硫酮(0.230g，0.58mmol)、粗制的2，2-二氟丙烷-1，3-二胺二盐酸盐(0.63mmol，描述于Nanjappan，P.et al.Tetrahedron，1994，50(29)，8617-8632中)和二异丙基乙胺(0.84mL，4.9mmol)溶于乙醇(10mL)中。将反应混合物在70℃搅拌过夜。冷却至环境温度后，将混合物浓缩，再溶于二氯甲烷(30mL)中，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。经柱色谱(使用乙酸乙酯(0-100％)/庚烷洗脱)进行纯化，得到0.167g(65％收率)标题化合物。MS(ES)m/z 442[M+1]+。
实施例80 3，3-二氟-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺-4-(3-溴-4-氟苄基)吡啶
将叔丁基氢过氧化物(70％水溶液，0.9mL，5.6mmol)加到3，3-二氟-3，4，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6(2H)-硫酮-4-(3-溴-4-氟苄基)吡啶(0.167g，0.38mmol)和氨(30％水溶液，1.7mL)于甲醇(10mL)中的溶液中。将得到的混合物在室温搅拌过夜。然后将混合物浓缩，残余物再溶于二氯甲烷(30mL)中，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。经柱色谱(使用甲醇(0.1％7N氨)/二氯甲烷(0-10％)洗脱)进行纯化，得到0.086g(54％)标题化合物。MS(ES)m/z425[M+1]+。
实施例81 3，3-二氟-8-[4-氟-3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐
将3，3-二氟-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺-4-(3-溴-4-氟苄基)吡啶(0.020g，0.047mmol)、2-氟吡啶-3-硼酸(0.009g，0.061mmol)、[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(0.004g，0.005mmol)和碳酸铯(0.046g，0.141mmol)于1，2-二甲氧基乙烷:水:乙醇(6:3:1，1.5mL)中的混合物在微波中在130℃加热15分钟。冷却至环境温度后，将混合物浓缩，溶于二氯甲烷(10mL)中，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥然后真空浓缩。经制备性HPLC进行纯化，得到0.017g(82％)标题化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ 8.49(dd，J＝4.52，1.51Hz，2H)，8.31(d，J＝4.27Hz，1H)，7.99(s，1H)，7.72-7.61(m，2H)，7.51-7.45(m，3H)，7.32(t，J＝9.41Hz，1H)，3.99(t，J＝12.42Hz，2H)，3.82(t，J＝13.05Hz，2H)，1.90(s，3H)；MS(ES)m/z 441[M+1]+。
实施例82 3，3-二氟-8-(2’，6-二氟-3’-甲氧基联苯-3-基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐
标题化合物是如实施例81中所述，从2-氟-3-甲氧基-苯硼酸开始合成的，86％的收率。1H NMR(DMSO-d6)δ 8.50(d，J＝6.02Hz，2H)，7.69-7.56(m，2H)，7.48(d，J＝6.02Hz，2H)，7.31-7.21(m，3H)，6.95-6.80(m，1H)，4.01(t，J＝12.30Hz，2H)，3.88(s，3H)，3.83(t，J＝13.05Hz，2H)，1.90(s，3H)；MS(ES)m/z 470[M+1]+。
实施例83 3，3-二氟-8-[4-氟-3-(5-甲氧基吡啶-3-基)苯基]-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.5乙酸盐
标题化合物是如实施例81中所述，从5-甲氧基吡啶-3-硼酸开始合成的，79％的收率。1H NMR(DMSO-d6)δ ppm 8.49(d，J＝4.90Hz，2H)，8.34(d，J＝2.45Hz，1H)，8.24(s，1H)，7.76-7.68(m，1H)，7.63-7.53(m，1H)，7.48(d，J＝5.21Hz，2H)，7.43(br.s.，1H)，7.30(t，J＝9.50Hz，1H)，4.00(t，J＝12.10Hz，2H)，3.72-3.91(m，5H)，1.88(s，2H)；MS(ES)m/z 453[M+1]+。
实施例84 N-叔丁亚磺酰基-3-溴苯基-甲亚胺
将3-溴-苯甲醛(3.7g，20mmol)、叔丁基亚磺酰胺(2.4g，20mmol)和四乙醇钛(9.1g，40mmol)于四氢呋喃(10mL)中的混合物在65℃加热12h。在硅胶上蒸发溶剂，然后经色谱(使用乙酸乙酯/庚烷(0-100％)的洗脱梯度)进行纯化，得到4.9g(84％)标题化合物。MS m/z(ES)290[M+1]+。
实施例85 1-(3-溴苯基)-1-(3-氟吡啶-4-基)甲胺
二异丙基氨基锂(2M的四氢呋喃溶液，2.5mL，5.0mmol)用无水四氢呋喃(10mL)稀释，然后在氮气气氛下冷却至-78℃。滴加3-氟吡啶(0.43mL，5.0mmol)于无水四氢呋喃(1mL)中的溶液，将溶液在-78℃搅拌30分钟，然后加入N-叔丁亚磺酰基-3-溴苯基-甲亚胺(0.91g，3.1mmol)于无水四氢呋喃(1mL)中的溶液。5分钟后，通过加入氯化铵水溶液来淬灭反应。对水溶液进行后处理，用乙酸乙酯萃取，接着在硅胶上经色谱(使用乙酸乙酯/庚烷(1:1)作为洗脱剂)进行纯化，得到中间体亚磺酰胺(0.9g，2.33mmol)。在甲醇/乙醚(5mL)中用盐酸(1M的乙醚溶液，3当量)处理10分钟，真空浓缩，用乙酸乙酯和碳酸钾水溶液萃取，经碳酸钾干燥，然后真空蒸发得到0.60g(43％)标题化合物。MS m/z(APCI)282[M+1]+。
实施例86 4-[(3-溴苯基)(异硫氰基)甲基]-3-氟吡啶
在25℃将硫代羰基二咪唑(0.37g，2.1mmol)分批加到搅拌的1-(3-溴苯基)-1-(3-氟吡啶-4-基)甲胺(0.60g，2.1mmol)于二氯甲烷中的溶液中。搅拌2h后，将溶液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并蒸发，得到0.70g标题化合物，收率是定量的。MS m/z(APCI)324[M+1]+。
实施例87 4-(3-溴苯基)-4-(3-氟吡啶-4-基)-1，3-噻唑烷-2，5-二硫酮
在-78℃将4-[(3-溴苯基)(异硫氰基)甲基]-3-氟吡啶(0.70g，2.1mmol)和二硫化碳(0.27mL，4.4mmol)于无水四氢呋喃(5mL)中的混合物滴加到搅拌的叔丁醇钾(0.33g，2.9mmol)于无水四氢呋喃(25mL)中的溶液中。历时30分钟使混合物达到室温。真空浓缩，在乙酸乙酯和盐水之间萃取，经硫酸钠干燥，然后真空蒸发得到0.80g(95％)标题化合物。MS m/z(APCI)400[M+1]+。
实施例88 8-(3-溴苯基)-3，3-二氟-8-(3-氟吡啶-4-基)-3，4，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6(2H)-硫酮
将4-(3-溴苯基)-4-(3-氟吡啶-4-基)-1，3-噻唑烷-2，5-二硫酮(0.80g，2.0mmol)、2，2’-二氟-1，3-二氨基丙烷盐酸盐(0.38g，2.1mmol)和三乙胺(0.73mL，5.2mmol)在乙醇(10mL)中混合，然后加热至70℃，并持续12h。将混合物真空浓缩，残余物用乙酸乙酯稀释并首先用碳酸钠水溶液洗涤，然后用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，然后蒸发溶剂。在硅胶上经色谱(使用乙酸乙酯/庚烷(0-100％)进行纯化，得到0.50g(56％)标题化合物。MSm/z(APCI)443[M+1]+。
实施例89 8-(3-溴苯基)-3，3-二氟-8-(3-氟吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺
将8-(3-溴苯基)-3，3-二氟-8-(3-氟吡啶-4-基)-3，4，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6(2H)-硫酮(0.50g，1.1mmol)溶于甲醇(10mL)中，然后加入氢氧化铵(30％的水溶液，5mL)和叔丁基氢过氧化物(70％的水溶液，3.1mL，23mmol)。将反应混合物在40℃加热12h。真空浓缩，在乙酸乙酯和水之间萃取，经硫酸钠干燥，然后真空蒸发溶剂得到0.45g(93％)标题化合物。MSm/z(APCI)426[M+1]+。
实施例90 3，3-二氟-8-(3-氟吡啶-4-基)-8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺
将8-(3-溴苯基)-3，3-二氟-8-(3-氟吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺(0.10g，0.24mmol)溶于1，2-二甲氧基乙烷:水:乙醇(6:3:1，3mL)中，然后加入2-氟-3-吡啶基硼酸(0.067g，0.48mmol)和碳酸铯(0.23g，0.71mmol)。向溶液中通入氮气5分钟。加入[1，1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.020g，0.02mmol)，然后将反应混合物在微波炉中在氮气气氛下在130℃加热1h。真空浓缩，用乙酸乙酯和水对水溶液进行后处理，然后真空蒸发溶剂，接着经制备性HPLC纯化，得到0.009g(9％)标题化合物。1HNMR(CD3OD)δ 8.43(d，J＝3Hz，1H)，8.34(d，J＝5Hz，1H)，8.18(m，1H)，8.04(m，1H)，7.79(m，1H)，7.62(m，2H)，7.53(m，1H)，7.41(m，1H)，7.20(m，1H)，4.13-3.95(m，2H)，3.91-3.69(m，2H)。MS m/z(APCI)441[M+1]+。
实施例91 3，3-二氟-8-(3-氟吡啶-4-基)-8-(3-(嘧啶-5-基)苯基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺
标题化合物是如实施例90中所述(除了反应时间是30分钟)，从嘧啶-5-硼酸开始合成的，6％的收率。1H NMR(CD3OD)δ 9.16(s，1H)，9.07(s，2H)，8.42(m，2H)，7.89(s，1H)，7.77(d，1H)，7.70(d，1H)，7.61(m，1H)，7.24(m，1H)，4.16-3.97(m，2H)，3.95-3.74(m，2H)；MS m/z(APCI)424[M+1]+。
实施例92 2-甲氧基-6-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡嗪
将2-氯-6-甲氧基吡嗪(0.50g，3.46mmol)、二频哪醇二硼烷(0.966g，3.80mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.095g，0.10mmol)、三环己基膦(0.116g，0.42mmol)和乙酸钾(0.509g，5.19mmol)于1，2-二甲氧基乙烷(10mL)中的混合物在微波炉中在氮气气氛下在150℃处理3h。将反应混合物在水和乙醚之间分配，然后合并有机相，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到1.15g(定量收率)粗制的标题化合物，其不经进一步纯化就用于下一步。MS(CI)m/z 237。
实施例93 3，3-二氟-8-[3-(6-甲氧基吡嗪-2-基)苯基]-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐
标题化合物是如实施例67中所述，从2-甲氧基-6-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡嗪开始合成的，78％的收率。1HNMR(DMSO-d6)δ8.68(s，1H)，8.49(d，J＝5.02Hz，2H)，8.27(d，J＝14.05Hz，2H)，7.97(d，J＝7.53Hz，1H)，7.59-7.49(m，3H)，7.44(t，J＝7.65Hz，1H)，4.10-3.93(m，5H)，3.84(t，J＝12.67Hz，2H)，1.89(s，2H)；MS(ES)m/z 436[M+H]+。
测定 用以下测定中的至少一种对化合物进行试验 β-分泌酶 用于IGEN裂解测定、荧光测定、TR-FRET测定和BiaCore测定的酶描述如下 将人β-分泌酶(AA1-AA 460)的可溶部分在ASP2-Fc10-1-IRES-GFP-neoK哺乳动物表达载体中克隆。将所述基因与IgG1的Fc结构域(亲和标签)融合，然后在HEK293细胞中稳定克隆。将纯化的sBACE-Fc储藏于pH9.2的Tris缓冲液中并且具有95％的纯度。
IGEN裂解测定 将酶在40mM MES pH5.0中稀释至43μg/ml中。将IGEN底物在40mMMES pH5.0中稀释至12μM。将化合物在二甲基亚砜(在测定中二甲基亚砜的最终浓度为5％)中稀释至所期望的浓度。测定在来自Greiner的96孔PCR板(#650201)中进行。将化合物的二甲基亚砜(3μL)溶液和酶(27μL)加至板，然后预孵育10分钟。反应用底物(30μL)来启动。酶的最终稀释度为20μg/ml；底物的最终浓度为6μM。在室温(RT)反应20分钟后，反应通过以下方法来停止取出10μL的反应混合物，然后将其以1:25稀释在0.20M Tris pH8.0中。产物通过以下方法来定量将50μL稀释度为1:5000的新生表位抗体(neoepitope antibody)加至50μL稀释度为1:25的反应混合物(所有抗体和链霉抗生物素蛋白(streptavidin)涂覆的珠子稀释在PBS(包含0.5％BSA和0.5％吐温20)中)。然后，添加100μL的0.2mg/mL链霉抗生物素蛋白涂覆的珠子(Dynabeads M-280)和稀释度为1:5000的钌标记的山羊抗兔(Ru-Gar)抗体。将混合物在室温摇动下孵育2h后，在BioVeris M8分析仪中测量电化学发光(electro-chemiluminescene)。二甲基亚砜对照定义了100％活性水平，利用不含有酶(使用40mM MES pH5.0缓冲液来代替)定义了0％活性。
荧光测定 将酶在40mM MES pH5.0中稀释至52μg/ml。将底物(Dabcyl-Edans)在40mM MES pH5.0中稀释至30μM。将化合物在二甲基亚砜(在测定中二甲基亚砜的最终浓度为5％)中稀释至所期望的浓度。测定在Corning 384孔板(圆底、低容量、非结合性表面，Corning #3676)中进行。将酶(9μL)与1μL化合物的二甲基亚砜中溶液一起加至板，然后预孵育10分钟。添加底物(10μL)，然后反应在室温避光进行25分钟。酶的最终稀释度为23μg/ml；底物的最终浓度为15μM(Km为25μM)。产物的荧光在Victor II板读取器上利用标记的Edans肽方案来测量，激发波长为360nm，发射波长为485nm。二甲基亚砜对照定义了100％活性水平，利用不含有酶(使用40mM MES pH5.0缓冲液来代替)定义了0％活性。
TR-FRET测定 在反应缓冲液(乙酸钠，chaps，triton x-100，EDTA pH4.5)中将酶稀释至6μg/mL，将底物(Europium)CEVNLDAEFK(Qsy7)稀释至200nM。将化合物在二甲基亚砜(在测定中二甲基亚砜的最终浓度为5％)中稀释至所期望的浓度。测定在Costar 384孔板(圆底、低容量、非结合性表面，Corning #3676)中进行。将酶(9μL)与1μL化合物的二甲基亚砜溶液加至板，混合，然后预孵育10分钟。添加底物(10μL)，然后反应在室温避光进行15分钟。反应通过加入7μL乙酸钠(pH为9)来停止。产物的荧光在Victor II板读取器上来测量，激发波长为340nm，发射波长为615nm。酶的最终稀释度为2.7μg/ml；底物的最终浓度为100nM(Km为290nM)。二甲基亚砜对照定义了100％活性水平，利用不含有酶(使用反应缓冲液来代替)定义了0％活性。
BACE Biacore传感芯片的制备 将肽过渡态等构物(transition state isostere，TSI)或者乱序版本的肽TSI连接至Biacore CM5传感芯片的表面，从而在Biacore 3000仪器上测定BACE。CM5传感芯片的表面具有可用于偶联肽的4条不同通道。乱序的肽KFES-抑制素-ETIAEVENV(KFES-statine-ETIAEVENV)与通道1偶联，而TSI抑制剂KTEEISEVN-抑制素-VAEF(KTEEISEVN-statine-VAEF)与同一芯片的通道2偶联。将这两种肽以0.2mg/mL溶解在20mM乙酸钠(pH为4.5)中，然后溶液以14K rpm离心，从而除去任何颗粒。葡聚糖层上的羧基通过以下方法来活化以5μL/分钟的速率注射0.5M N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺和0.5M N-羟基琥珀酰亚胺的1:1混合物，持续7分钟。然后，将对照肽的储备溶液以5μL/分钟的速率注射到通道1中，持续7分钟，然后剩余的活化羧基通过以下方法来阻断以5μL/分钟的速率注射1M乙醇胺，持续7分钟。
BACE Biacore测定方案 将BACE在pH为4.5的乙酸钠缓冲液(不含二甲基亚砜的电泳缓冲液)中稀释至0.5μM，从而进行BACE Biacore测定。将稀释的BACE与二甲基亚砜或化合物的二甲基亚砜稀释液混合，二甲基亚砜的最终浓度为5％。将BACE/抑制剂混合物在室温孵育30分钟，然后以20μL/分钟的速率注射到CM5 Biacore芯片的通道1和2中。当BACE与芯片结合时，信号以响应单位(RU)来测量。与通道2上的TSI抑制剂结合的BACE产生某种信号。BACE抑制剂的存在通过与BACE结合由此抑制BACE与芯片上的肽TSI相互作用而使所述信号减小。与通道1的任何结合都是非特异性的，并且从通道2的响应值减去。将二甲基亚砜对照定义为100％，并且将化合物的作用报道为相对于二甲基亚砜对照的抑制百分比。
β-分泌酶全细胞测定 HEK293-APP695的产生 使用Lipofectamine转染剂，根据制造商提供的方案(Invitrogen)将编码人完整长度APP695的cDNA的pcDNA3.1质粒稳定转染到HEK-293细胞中。群落用0.1-0.5mg/mL的zeocin来选择。进行有限的稀释克隆，从而得到均质的细胞系。克隆利用自行开发的ELISA测定通过APP表达的水平和条件培养基中所分泌的Aβ的水平来表征。
HEK293-APP695的细胞培养 使稳定表达人野生型APP的HEK293细胞(HEK293-APP695)在37℃(5％CO2)在DMEM中生长，所述DMEM含有4500g/L葡萄糖、GlutaMAX和丙酮酸钠(补充有10％FBS、1％非必需氨基酸和0.1mg/mL选择性抗生素zeocin)。
Aβ40释放测定 在融合率为80-90％时收集HEK293-APP695细胞，然后以0.2x106细胞/mL的浓度(100mL细胞混悬液/孔)接种于黑色透明底96-孔聚-D-赖氨酸涂覆的板上。在37℃(5％CO2)过夜孵育后，将细胞培养基用含有青霉素和链霉素(分别为100U/mL和100μg/mL)的细胞培养基代替，所述的含有青霉素和链霉素的细胞培养基含有二甲基亚砜最终浓度为1％的试验化合物。在37℃(5％CO2)将细胞暴露于试验化合物中24h。将100μL细胞培养基转移至圆底聚丙烯96孔板(测定板)，以定量释放的Aβ的量。保存细胞培养板，用于如下所述进行ATP测定。向测定板的每个孔都添加50μL的初级检测溶液(含有0.5μg/mL的兔抗-Aβ40抗体和0.5μg/mL生物素化的单克隆鼠6E10抗体(在含有0.5％BSA和0.5％吐温20的DPBS中))，然后在4℃孵育过夜。然后，每个孔都添加50μL次级检测溶液，所述溶液包含0.5μg/mL钌标记的山羊抗兔抗体和0.2mg/mL链霉抗生物素蛋白涂覆的珠子(DynabeadsM-280)。将板在室温剧烈摇动1-2小时，然后板在BioVcris M8分析仪中测量电化学发光。
SH-SY5Y的细胞培养 使SH-SY5Y细胞在37℃(5％CO2)在含有GlutaMAX的DMEM/F-121:1(补充有1mM HEPES、10％FBS和1％非必需氨基酸)中生长。
sAPPβ释放测定 在融合率为80-90％时收集SH-SY5Y细胞，然后以1.5x106细胞/mL的浓度(100mL细胞混悬液/孔)接种于黑色透明底96孔组织培养板上。在37℃(5％CO2)孵育7h后，将细胞培养基用90μl含有青霉素和链霉素(分别为100U/mL和100μg/mL)的细胞培养基代替，所述的含有青霉素和链霉素的细胞培养基含有二甲基亚砜最终浓度为1％的试验化合物。在37℃(5％CO2)将细胞暴露于试验化合物中18h。使用来自Meso Scale Discovery(MSD)的sAPPβ微量板，以测量向细胞培养基中释放的sAPPβ，并且根据制造商提供的方案进行测定。简言之，将25μL细胞培养基转移至预先阻断的MSDsAPPβ微量板。保存细胞板，用于如下所述进行ATP测定。在室温摇动1小时期间，通过点样在微量板的孔中的抗体来捕获sAPPβ。多次洗涤后，向测定板中添加SULFO-TAG标记的检测抗体(25μL/孔，最终浓度为1nM)，然后将板在室温摇动下孵育1小时。多次洗涤后，向板中以150μl/孔添加读取缓冲液T(Read Buffer T)。在室温保持10分钟后，将板在SECTORTM图像仪中读取电化学发光。
ATP测定 如以上所指出，在从细胞培养板转移培养基用于Aβ40或sAPPβ测定后，将板用于分析细胞毒性，所述细胞毒性分析利用测量总细胞ATP的ViaLightTM Plus细胞增殖/细胞毒性试剂盒(Cambrex BioScience)来进行。根据制造商提供的方案进行测定。简而言之，向每个孔都添加50μL细胞溶解试剂。将板在室温孵育10分钟。添加100μL复溶的(reconstituted)ViaLightTMPlus ATP试剂2分钟后，在Wallac Victor21420多标记计数器中测量发光度(luminescence)。
hERG测定 细胞培养 使表达hERG的中国仓鼠卵巢K1(CHO)细胞(描述于Persson，Carlsson，Duker，& Jacobson，2005中)在F-12Ham培养基中在37℃在加湿的环境(5％CO2)中生长至半数融合，所述F-12Ham培养基含有L-谷氨酰胺、10％胎牛血清(FCS)和0.6mg/ml潮霉素(都来自Sigma-Aldrich)。使用前，单层利用预温热(37℃)的Versene 1:5000(Invitrogen)的3ml等份液来洗涤。吸出此溶液后，将烧瓶在孵育器中在37℃与另外2ml的Versene 1:5000一起孵育6分钟。然后，细胞通过轻轻敲击而与烧瓶底分开，然后将10ml的Dulbecco磷酸盐缓冲盐水(含有钙(0.9mM)和镁(0.5mM))(PBS；Invitrogen)加至烧瓶，然后将其吸到15ml离心管中，之后离心(50g，4分钟)。弃去所得到的上清液，然后将沉淀小心地重新悬浮于3ml的PBS中。将细胞悬浮液的0.5ml等份液取出，然后在自动化的读取器(Cedex；Innovatis)中确定活细胞的数目(基于锥虫蓝不相容法(trypan blue exclusion))，从而可用PBS调整细胞重新悬浮液的体积，以得到期望的最终细胞浓度。当涉及此参数时，引用测定中此时的细胞浓度。用于在IonWorksTM HT上调整电压偏移(voltage offset)的CHO-Kv1.5细胞以相同的方法来培养和制备，以供使用。
电生理学 此装置的原理和操作描述于(Schroeder，Neagle，Trezise，& Worley，2003)中。简言之，所述技术以384孔板(PatchPlateTM)为基础，其中利用抽吸来将细胞定位在使两个独立流体腔室分开的小洞上，并且使细胞保持在其上，由此在每个孔中试图进行记录。一旦进行了封闭，就将PatchPlateTM底侧上的溶液变成一种包含两性霉素B的溶液。此溶液可穿透在每个孔中覆盖洞的细胞膜片(patch of cell membrane)，由此使穿孔的全细胞膜片钳记录实际上得以进行。
使用β-Test IonWorksTM HT(来自Essen Instrument)。此装置不能对溶液进行温热，因此如以下那样在室温(约21℃)进行操作。在“缓冲液”位置的容器装有4ml的PBS，而在“细胞”位置的容器装有以上所描述的CHO-hERG细胞悬浮液。将含有待测试化合物(为其最终测试浓度的3倍)的96孔板(V形底，Greiner Bio-one)置于“板1”位置，而将PatchPlateTM钳夹到PatchPlateTM位置。将每块化合物板设计出12列，从而能构建10条由8个点连成的浓度-作用曲线；板上剩余的两列用媒介物(DMSO的最终浓度为0.33％)和最大阻断浓度之上的西沙必利(最终浓度为10μM)占据，媒介物用于定义测定基线，最大阻断浓度之上的西沙必利用于定义100％抑制水平。然后，IonWorksTM HT的射流头(F头)将3.5μl的PBS加至PatchPlateTM的每个孔，并且其底侧用“内部”溶液灌注，所述“内部”溶液具有以下组分(单位为mM)葡萄糖酸钾(K-Gluconate)100、KCl 40、MgCl2 3.2、EGTA 3和HEPES 5(所有都来自Sigma-Aldrich；使用10M KOH将pH调整为7.25-7.30)。在启动和脱泡后，电子头(E头)围绕PatchPlateTM移动，进行洞测试(即施加电压脉冲以确定在每个孔中的洞是否开放)。然后，F头将3.5μl的上述细胞悬浮液分配至PatchPlateTM的每个孔中，并且细胞有200秒的时间来到达在每个孔中的洞，并且将洞封闭。此后，E头围绕PatchPlateTM移动，以确定在每个孔中所得到的封闭电阻。接下来，将PatchPlateTM的底侧溶液变成“进入”溶液，所述“进入”溶液具有以下组分(单位为mM)KCl 140、EGTA 1、MgCl2 1和HEPES 20(使用10M KOH将pH调整为7.25-7.30)连同100μg/ml的两性霉素B(Sigma-Aldrich)。历时9分钟用于膜片打孔后，E头每次围绕PatchPlateTM的48个孔移动，以获得添加化合物前的hERG电流测量值。然后，F头将源于化合物板的每个孔的3.5μl溶液加至PatchPlateTM的4个孔(DMSO在每个孔中的最终浓度为0.33％)。这通过以下方法来实现从化合物板的最稀孔移动到化合物板的最浓孔，以使任何化合物遗留的影响最小化。孵育约3.5分钟后，E头围绕PatchPlateTM的全部384个孔移动，以获得添加化合物后的hERG电流测量值。以这种方式可得到非累积浓度-作用曲线，其中假如在足够百分比的孔中达到验收标准(参见以下)，那么每种浓度的试验化合物的作用都基于对1至4个细胞的记录。
添加化合物前和添加化合物后的hERG电流通过单一电压脉冲来引起，所述单一电压脉冲的组成为在-70mV保持20秒，以160毫秒的步幅变为-60mV(从而对泄漏进行评价)，以100毫秒的步幅变回为-70mV，以1秒的步幅变为+40mV，以2秒的步幅变为-30mV，最后以500毫秒的步幅变为-70mV。在添加化合物前和添加化合物后的电压脉冲之间不对膜电势进行任何钳夹。从电流值减去泄漏值，这基于对在电压脉冲方案开始时在+10mV步幅所引起的电流进行评价。以两种方式中的一种对IonWorksTM HT中的任何电压偏移进行调整。当确定化合物效力时，将去极化电压偏斜(depolarisingvoltage ramp)施加于CHO-Kv1.5细胞，并且记录到一个电压，电流轨迹(current trace)在此电压出现拐点(即在此时观察到通道由于偏斜方案而活化)。先前已经利用相同的电压指令在常规的电生理学中确定了出现上述现象的电压，并且发现其为-15mV(数据未显示)，因而可将此值用作参考点，将偏移电势(offset potential)录入到IonWorksTM HT软件中。当确定hERG的基础电生理性质时，任何偏移都通过以下方法来调整在IonWorksTM HT中确定hERG尾电流反转电势(reversal potential)，将其与在常规电生理学中所确定的值(-82mV)比较，然后在IonWorksTM HT软件中进行必要的偏移调整。电流信号在2.5kHz采集。
通过采用在-70mV初始保持时段的电流的40毫秒平均值(基线电流)，并且从尾电流响应的峰值减去所述平均值，借助IonWorksTM HT软件从减去泄漏值的轨迹自动测量扫描前和扫描后的hERG电流大小。在每个孔中引起的电流的验收标准为扫描前的封闭电阻>60MΩ，扫描前的hERG尾电流幅度>150pA，扫描后的封闭电阻>60MΩ。对hERG电流的抑制程度通过以下方法来评价就每个孔而言，扫描后的hERG电流值除以各自扫描前的hERG电流值。
结果 本发明化合物的典型IC50值在约1至约10,000nM的范围内。示例的最终化合物的生物学数据在下表1中给出。
表权利要求
1.游离碱形式的式I的化合物，或其可药用盐、溶剂化物或盐的溶剂化物
其中
A独立选自任选被一个或多个R1取代的5、6或7元杂环；
B独立选自任选被一个或多个R2取代的5或6元杂芳族环；
C独立选自苯基或5或6元杂芳族环基团，所述苯基或杂芳族环基团任选被一个或多个R3取代；
R1独立选自卤素、氰基、硝基、OR6、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C0-6烷基芳基、C0-6烷基杂芳基、C0-6烷基C3-6环烷基、C0-6烷基C3-6环烯基、C0-6烷基C3-6环炔基、C0-6烷基C3-6杂环基、NR6R7、CONR6R7、NR6(CO)R7、O(CO)R6、CO2R6、COR6、(SO2)NR6R7、NR6(SO2)R7、SOR6、SO2R6、OSO2R6和SO3R6，其中所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C0-6烷基芳基、C0-6烷基杂芳基、C0-6烷基C3-6环烷基、C0-6烷基C3-6环烯基、C0-6烷基C3-6环炔基和C0-6烷基C3-6杂环基任选被一个或多个基团D取代；或
两个R1取代基可与它们所相连的原子一起形成任选被一个或多个基团D取代的环或杂环；
R2、R3和R4独立选自卤素、氰基、硝基、OR6、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C0-6烷基芳基、C0-6烷基杂芳基、C0-6烷基C3-6环烷基、C0-6烷基C3-6环烯基、C0-6烷基C3-6环炔基、C0-6烷基C3-6杂环基、NR6R7、CONR6R7、NR6(CO)R7、O(CO)R6、CO2R6、COR6、(SO2)NR6R7、NR6(SO2)R7、SO2R6、SOR6、OSO2R6和SO3R6，其中所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C0-6烷基芳基、C0-6烷基杂芳基、C0-6烷基C3-6环烷基、C0-6烷基C3-6环烯基、C0-6烷基C3-6环炔基和C0-6烷基C3-6杂环基任选被一个或多个基团D取代；或
两个R2取代基、两个R3取代基或两个R4取代基可与它们所相连的原子一起形成任选被一个或多个基团D取代的环或杂环；
R5独立选自氢、氰基、OR6、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C0-6烷基芳基、C0-6烷基杂芳基、C0-6烷基C3-6环烷基、C0-6烷基C3-6环烯基、C0-6烷基C3-6环炔基、C0-6烷基C3-6杂环基、CONR6R7、CO2R6、COR6、SO2R6和SO3R6，其中所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C0-6烷基芳基、C0-6烷基杂芳基、C0-6烷基C3-6环烷基、C0-6烷基C3-6环烯基、C0-6烷基C3-6环炔基或C0-6烷基C3-6杂环基任选被一个或多个基团D取代；
D独立选自卤素、硝基、CN、OR6、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C0-6烷基芳基、C0-6烷基杂芳基、C0-6烷基C3-6环烷基、C0-6烷基C3-6环烯基、C0-6烷基C3-6环炔基、C0-6烷基杂环基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、NR6R7、CONR6R7、NR6(CO)R7、O(CO)R6、CO2R6、COR6、(SO2)NR6R7、NR6SO2R7、SO2R6、SOR6、OSO2R6和SO3R6，其中所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C0-6烷基芳基、C0-6烷基杂芳基、C0-6烷基C3-6环烷基、C0-6烷基C3-6环烯基、C0-6烷基C3-6环炔基或C0-6烷基杂环基任选被一个或多个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、硝基、氰基、OR6、C1-6烷基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氟甲氧基、二氟甲氧基和三氟甲氧基；
R6和R7独立选自氢、C1-6烷基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、C2-6烯基、C2-6炔基、C0-6烷基芳基、C0-6烷基杂芳基、C0-6烷基C3-6环烷基、C0-6烷基C3-6环烯基、C0-6烷基C3-6环炔基和C0-6烷基杂环基；或
R6和R7可一起形成含有一个或多个选自N、O和S的杂原子的5或6元杂环；
m＝0、1、2或3；
n＝0、1、2或3；
p＝0、1、2或3；
q＝0、1、2或3。
2.权利要求1的化合物，其中A为任选被一个或多个R1取代的6元杂环。
3.权利要求1或2的化合物，其中B为6元杂芳族环。
4.权利要求3的化合物，其中B为吡啶基。
5.权利要求1或2的化合物，其中B为5元杂芳族环。
6.权利要求5的化合物，其中B选自呋喃基、噻吩基和噻唑基。
7.权利要求1至6中任一项的化合物，其中R5为氢。
8.权利要求1至7中任一项的化合物，其中m为0。
9.权利要求1至7中任一项的化合物，其中m为2。
10.权利要求9的化合物，其中R1为卤素。
11.权利要求1至10中任一项的化合物，其中n为0。
12.权利要求1至11中任一项的化合物，其中q为0。
13.权利要求1至11中任一项的化合物，其中C为被一个或多个R3取代的苯基。
14.权利要求13的化合物，其中R3独立选自卤素、氰基、OR6、C1-6烷基和OSO2R6，其中所述C1-6烷基被一个或多个基团D取代；D为卤素以及R6为C1-6烷基。
15.权利要求1至14中任一项的化合物，其中C为嘧啶基。
16.权利要求1至15中任一项的化合物，其中C为被一个或多个R3取代的吡啶基。
17.权利要求16的化合物，其中R3独立选自卤素、氰基和OR6，以及R6为C1-6烷基。
18.权利要求1的化合物，其中
A为6元杂环；
B为任选被一个或多个R2取代的5或6元杂芳族环；
C独立选自苯基或5或6元杂芳族环基团，所述苯基或杂芳族环基团任选被一个或多个R3取代；
R3独立选自卤素、氰基、OR6，C1-6烷基和OSO2R6，其中所述C1-6烷基被一个或多个基团D取代；
R5为氢；
D为卤素；
R6为C1-6烷基；
m＝0；
n＝0；
p＝0、1或2；
q＝0。
19.权利要求1的化合物，其中
A为被一个或多个R1取代的6元杂环；
B为6元杂芳族环；
C为苯基或6元杂芳族环基团，所述苯基或杂芳族环基团被一个或多个R3取代；
R1为卤素；
R3选自卤素和OR6；
R5为氢；
R6为C1-6烷基；
m＝2；
n＝0；
p＝1或2；
q＝0。
20.权利要求1的化合物，其中
A为被一个或多个R1取代的6元杂环；
B为任选被一个R2取代的6元杂芳族环；
C为苯基或6元杂芳族环基团，所述苯基或杂芳族环基团任选被一个或多个R3取代；
R1为卤素；
R2为卤素；
R3选自卤素和OR6；
R4为卤素；
R5为氢；
R6为C1-6烷基；
m＝2；
n＝0或1；
p＝0、1或2；
q＝0或1。
21.游离碱形式的化合物或其可药用盐、溶剂化物或盐的溶剂化物，所述化合物选自
3’-(6-氨基-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢-咪唑并[1，5-a]嘧啶-8-基)-联苯-3-甲腈盐酸盐；
8-(3’-甲氧基联苯-3-基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.25乙酸盐；
8-[3-(5-甲氧基吡啶-3-基)苯基]-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.25乙酸盐；
8-(3’-氯联苯-3-基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.25乙酸盐；
8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.5乙酸盐；
8-(2’-氟-3’-甲氧基联苯-3-基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.25乙酸盐；
8-(2’-氟-5’-甲氧基联苯-3-基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.25乙酸盐；
3’-(6-氨基-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-8-基)-6-氟联苯-3-甲腈0.25乙酸盐；
甲磺酸3’-(6-氨基-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-8-基)-5-氯联苯-3-基酯0.5乙酸盐；
3’-(6-氨基-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-8-基)-4-氟联苯-3-甲腈0.25乙酸盐；
8-(3’-氯-2’-氟联苯-3-基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.25乙酸盐；
8-(吡啶-4-基)-8-[3’-(三氟甲基)联苯-3-基]-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.25乙酸盐；
8-[3’-(甲磺酰基)联苯-3-基]-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.25乙酸盐；
8-(3’，5’-二氯联苯-3-基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.25乙酸盐；
8-(3’-氯-5’-甲氧基联苯-3-基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.25乙酸盐；
8-(2’，3’-二氯联苯-3-基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.25乙酸盐；
8-[3-(5-氯-2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.25乙酸盐；
8-(3’-乙氧基联苯-3-基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.5乙酸盐；
8-(5’-氯-2’-氟联苯-3-基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.25乙酸盐；
8-(4’-氟-3’-甲氧基联苯-3-基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.25乙酸盐；
8-(吡啶-4-基)-8-(3-(嘧啶-5-基)苯基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.25乙酸盐；
8-[3-(5-氟吡啶-3-基)苯基]-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.25乙酸盐；
甲磺酸3’-(6-氨基-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-8-基)-5-甲氧基联苯-3-基酯0.25乙酸盐；
8-(2’，5’-二氯联苯-3-基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.25乙酸盐；
8-(3’-氯-4’-氟联苯-3-基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.25乙酸盐；
8-(3’，5’-二氯联苯-3-基)-8-(呋喃-3-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐；
8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-(呋喃-3-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐；
8-(3’，5’-二氯联苯-3-基)-8-(呋喃-2-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐；
8-(呋喃-2-基)-8-(3’-甲氧基联苯-3-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐；
8-(3’，5’-二氯联苯-3-基)-8-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐；
8-(3’，5’-二氯联苯-3-基)-8-(噻吩-3-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐；
8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-(噻吩-3-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐；
3，3-二氟-8-[3-(5-甲氧基吡啶-3-基)苯基]-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐；
3，3-二氟-8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.75乙酸盐；
3，3-二氟-8-(2’-氟-5’-甲氧基联苯-3-基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.25乙酸盐；
3，3-二氟-8-(2’-氟-3’-甲氧基联苯-3-基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.75乙酸盐；
3，3-二氟-8-[3-(5-氟吡啶-3-基)苯基]-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐，以及
3，3-二氟-8-(3’-甲氧基联苯-3-基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺1.25乙酸盐。
22.游离碱形式的化合物或其可药用盐、溶剂化物或盐的溶剂化物，所述化合物选自
3，3-二氟-8-[3-(5-氯-2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐；
3，3-二氟-8-(吡啶-4-基)-8-(3-(嘧啶-5-基)苯基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐；
3，3-二氟-8-[4-氟-3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐；
3，3-二氟-8-(2’，6-二氟-3’-甲氧基联苯-3-基)-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐；
3，3-二氟-8-[4-氟-3-(5-甲氧基吡啶-3-基)苯基]-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺0.5乙酸盐；
3，3-二氟-8-(3-氟吡啶-4-基)-8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；
3，3-二氟-8-(3-氟吡啶-4-基)-8-(3-(嘧啶-5-基)苯基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；以及
3，3-二氟-8-[3-(6-甲氧基吡嗪-2-基)苯基]-8-(吡啶-4-基)-2，3，4，8-四氢咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺乙酸盐。
23.一种药物组合物，其包含作为活性成分的治疗有效量的权利要求1至22中任一项的化合物及可药用赋形剂、载体或稀释剂。
24.权利要求1至22中任一项的化合物或其可药用盐，其用作药物。
25.权利要求1至22中任一项的化合物作为用于治疗或预防Aβ相关病理的药物的用途。
26.权利要求1至22中任一项的化合物作为用于治疗或预防Aβ相关病理的药物的用途，其中所述Aβ相关病理为唐氏综合征、β-淀粉样血管病、脑淀粉样血管病、遗传性脑出血、与认知缺损相关的障碍、MCI(“轻度认知缺损”)、阿尔茨海默病、记忆丧失、与阿尔茨海默病相关的注意力缺陷症状、与阿尔茨海默病相关的神经变性、混合型血管起源的痴呆、变性起源的痴呆、早老性痴呆、老年性痴呆、与帕金森病相关的痴呆、进行性核上麻痹或皮质基质变性。
27.权利要求1至22中任一项的化合物在制备用于治疗或预防Aβ相关病理的药物中的用途。
28.权利要求1至22中任一项的化合物在制备用于治疗或预防Aβ相关病理的药物中的用途，其中所述Aβ相关病理为唐氏综合征、β-淀粉样血管病、脑淀粉样血管病、遗传性脑出血、与认知缺损相关的障碍、MCI(“轻度认知缺损”)、阿尔茨海默病、记忆丧失、与阿尔茨海默病相关的注意力缺陷症状、与阿尔茨海默病相关的神经变性、混合型血管起源的痴呆、变性起源的痴呆、早老性痴呆、老年性痴呆、与帕金森病相关的痴呆、进行性核上麻痹或皮质基质变性。
29.抑制BACE活性的方法，其包括使所述BACE与权利要求1至22中任一项的化合物接触。
30.治疗或预防哺乳动物的Aβ相关病理的方法，其包括将治疗有效量的权利要求1至22中任一项的化合物给予所述患者。
31.权利要求30的方法，其中所述Aβ相关病理为唐氏综合征、β-淀粉样血管病、脑淀粉样血管病、遗传性脑出血、与认知缺损相关的障碍、MCI(“轻度认知缺损”)、阿尔茨海默病、记忆丧失、与阿尔茨海默病相关的注意力缺陷症状、与阿尔茨海默病相关的神经变性、混合型血管起源的痴呆、变性起源的痴呆、早老性痴呆、老年性痴呆、与帕金森病相关的痴呆、进行性核上麻痹或皮质基质变性。
32.权利要求30的方法，其中所述哺乳动物为人。
33.治疗或预防哺乳动物的Aβ相关病理的方法，其包括将治疗有效量的权利要求1至22中任一项的化合物和至少一种认知增强药物、记忆增强药物或胆碱酯酶抑制剂给予所述患者。
34.权利要求33的方法，其中所述Aβ相关病理为唐氏综合征、β-淀粉样血管病、脑淀粉样血管病、遗传性脑出血、与认知缺损相关的障碍、MCI(“轻度认知缺损”)、阿尔茨海默病、记忆丧失、与阿尔茨海默病相关的注意力缺陷症状、与阿尔茨海默病相关的神经变性、混合型血管起源的痴呆、变性起源的痴呆、早老性痴呆、老年性痴呆、与帕金森病相关的痴呆、进行性核上麻痹或皮质基质变性。
35.权利要求33的方法，其中所述哺乳动物为人。
全文摘要
本发明涉及具有以右结构式I的新颖化合物及其可药用盐、组合物和使用方法。这些新颖的化合物可用于治疗或预防认知缺损、阿尔茨海默病、神经变性和痴呆。
文档编号A61K31/519GK101506212SQ200780030470
公开日2009年8月12日 申请日期2007年6月12日 优先权日2006年6月14日
发明者斯蒂芬·伯格, 乔格·霍伦兹, 凯瑟琳娜·霍格丁, 卡林·科尔莫丁, 尼克拉斯·普洛贝克, 迪迪尔·罗蒂希, 费尔南多·塞格尔梅布尔 申请人:阿斯利康(瑞典)有限公司, 阿斯特克斯医疗公司