专利名称：：替奈普酶用于治疗急性缺血性中风的用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种用溶栓剂治疗中风的方法，更具体地，一种以特定的剂量给药方案施用替奈普酶(tenecteplase)来治疗急性缺血性中风(acuteischemicstroke)的方法。
背景技术：
：中风是对血管疾病所致急性脑损伤的通称。它对社会造成了严重的问题，每年在美国有大约500，000人由于中风而死亡或变成永久残疾。中风可以归为两大类出血性中风(正常血管漏出血液所致)和缺血性中风(供血不足所致脑缺血)；本申请关注后者。缺血性中风是工业化国家中所有死亡的大约三分之一的原因，而且是45岁以上成人严重的、长期的失能的主要原因。合乎道理的是，人们需要治疗急性缺血性中风的药物疗法。中风及中风后发生的一连串事件的机制已经得到了相当的认识；对神经元损伤和细胞死亡也有了更好的了解。缺血性中风的三种主要机制是血栓形成、栓塞和系统性灌注不足(伴有由此所致的缺血和低氧)。在这些中风类型的每一类中，由于对其供血不足而死亡的脑区域称为梗死。脑动脉壁上建成的血栓所导致的脑动脉阻塞通称为"脑血栓形成"。在脑栓塞中，阻塞脑动脉的闭塞物发生于循环的下游(例如，栓子被从心脏带到脑动脉)。由于难以分辨中风是由于血栓形成或是栓塞造成的，使用术语"血栓栓塞，，来涵盖这两种中风类型。系统性灌注不足可作为血液乳酸水平升高、血细胞比容降低、血压低、或心脏不能足够泵出血液的结果而发生。当中风症状持续少于24小时且患者恢复完全时，称患者经历了短暂性脑缺血发作(TIA)。TIA症状为言语、视觉、感觉或运动的暂时削弱。因为TIA往往被认为是全面中风的前奏，所以将罹患过TIA的患者作为使用例如抗凝剂(如香豆素和肝素)或抗血小板剂(诸如阿司匹林(aspirin)和噻氯匹定(ticlopidine))的预防性中风疗法的候选者。急性缺血性中风(AIS)是一种异质的疾病过程；对病程、恢复、失能或死亡的预测是困难的。该病通常是急性血栓栓塞性动脉闭塞病灶导致的。急性缺血性中风中动脉闭塞病灶的位置是相对异质的。溶栓剂，诸如重组组织纤溶酶原激活物(rtPA),已经用于治疗血栓栓塞性中风，其通过溶解导致缺血的血栓来发挥功能。事实上，静脉内rtPA(阿替普酶(alteplase)，ACTIVASE)是唯一已经批准用于治疗急性缺血性中风的药物。静脉内rtPA(0.9mg/kg，最大90mg),其中以推注给予10%的剂量，继以持续60分钟的输注，是缺血性中风发作3小时之内的推荐治疗方法。认为在急性中风之后如能尽可能早地施用这种药物(Gross等，A^wmswge^,36:1172-1177(1995);Ingall等，及roA:e,35:2418-2424(2004);TheATLANTIS,ECASS,andNINDSrt-PAStudyGroupInvestigators,丄a"cef,363:768-774(2004)),对于恢复，至少部分恢复缺血区域中的脑血流和维持神经元生活力是最有用的。然而，另外有证据表明在更晚的时间通过其它方法的施用是有效的，例如通过使用扩散加权和灌注MR成像技术和CT灌注技术(Tomsick,/Koc./wferv.i^^/o/.，15:S67陽S76(2004))。此外，对于不适合急性缺血性中风的静脉内治疗的患者，单独使用动脉内组织纤溶酶原激活物(tPA)或尿激酶或联合辅助气嚢血管成形术/支架术进行的基于导管的治疗已获得成功(Ramee等，泣rafe，35:el09-e111(2004))。还有人提出了缺血性中风患者中的静脉内和动脉内tPA联合再通方法(TheIMSStudyInvestigators,&油，35:904-912(2004》。溶栓，即在缺血性中风中症状发作数小时内用tPA溶解脑动脉血块，自1996年起已获准用于治疗急性缺血性中风。另外两种药剂，即尿激酶原(直接动脉内施用到M1或M2动脉血栓中)和静脉内安克洛酶(ancrod)(—种源自马来半岛颊窝毒蛇(pitviper)毒液的降血纤蛋白原剂)，已经显示了治疗效益，将来可能用于急性缺血性中风疗法。还有人考察了在家兔栓塞性中风模型中使用抗ICAM-l抗体继以tPA溶栓的效果(Bowes等，A^wra/.,119:215-219(1993))。虽然tPA(缺血后30分钟)和抗ICAM-1抗体(缺血后5分钟)各自单独地相对于对照改善了神经学结果，但是同时施用这两种化合物的组合并不比单独施用任一种化合物更有效。当推迟到栓塞后3小时溶栓时，tPA或所述组合均未能降低神经学损伤。在家兔中进行的实验也显示，tPA(缺血后30分钟)和一种抗CD18抗体(缺血后5分钟)各自单独地改善了神经学结果，尽管同时施用这两种化合物的组合并不比单独施用任一种化合物更有效(Bowes等，A^wra/ogy,45:815-819(1995))。抗ICAM-1抗体(缺血后15分钟)和tPA(缺血后2小时)的组合延长了tPA保持有效的缺血后持续时间。也就是说，该组合有效地将tPA的治疗窗扩展到了tPA在家兔中单独施用时的有效治疗窗以外。在使用tPA和糖蛋白1IB/IIIA受体抑制剂的大鼠中也观察到了该效果(Li等，Ocw/如'o",107:2837-2843(2003))。美国专利公布2002/0081294和US2004/0057951>开了共施用溶^r化合物和抗CD18抗体来增加哺乳动物诸如人类中梗死相关动脉中的血流(例如，冠状动脉堵塞的哺乳动物中的急性心肌梗死(AMI)或脑动脉阻塞导致的局灶性缺血性中风)。美国专利6,541，452公开了一种脑相关的tPA抑制剂及其治疗中风的用途。美国专利公布2004/0176347^^开了一种用于治疗脑缺血性疾病的药物组合物，其包含星形胶质细胞功能改善剂和溶栓剂，优选tPA,作为活性成分。替奈普酶(TNK，TNKASE,Genentech,Inc.,SouthSanFrancisco,CA)是一种被克隆并表达于中华仓鼠卵巢细胞中的人tPA基因工程变体(Keyt等,A^/.」cad"6^，91:3670-3674(1994))。另见Verstraete，Jw.JMed,109:52-58(2000)关于第三代溶栓药的一般概述。替奈普酶在美国已经获准用于对AMI患者的单次-推注(single-bolus)施用，并且已经对其进行工程改造以具有与阿替普酶相比更高的纤维蛋白特异性和更长的半衰期。在ASSENT-2双盲随机化试验中，在急性心肌梗死中比较单次推注的替奈普酶和前线载荷的(front-loaded)阿替普酶时，替奈普酶和阿替普酶的30曰死亡率相当。替奈普酶施用的方{更性可能有助于加快医院内外的治疗(VandeWerf等，丄朋c",354:716-722(1999))。这项ASSENT-2研究的结果表明，接受替奈普酶处理的75岁以上女性患者的总中风率和30日死亡率低于接受阿替普酶处理的患者，尽管差异在统计学上不显著。作者们得出结论，女性患者和75岁以上患者可能会更多地受益f依照根据体重调整的剂量给药方案给予的溶栓剂，例如替奈普酶(Vermeer,777ram6a^i^^arc/,103(S1):S101-S104September302001)。可能在治疗AMI中有用的其它溶栓药包括链激酶、尿激7酶、P可尼普酶(anistreplase)、阿替普酶、沙,普酶(samplase)、瑞替普酶(reteplase)、拉诺替普酶(lanoteplase)、葡激酶(staphylokinase)、虫它毒溶栓酶(fibrolase)、尿激酶原(prourokinase)、和吸血蝙蝠纤溶酶原激活物(Iqbal,C"m'ca/aw/772raw6ow'1s///ewostos/1s，6/1:1-13(2000》。替奈普酶的随"i方数据表明，其显示与阿替普酶相似的总体功效和耐受i普，一年随访之后的死亡率相当。就ASSENT-2中接受晚期治疗的患者的死亡率降低和非脑出血并发症的发生率降低而言，替奈普酶相比于阿替普酶明显具有优势(Dunn和Goa，JwJC"WomsrZVwgj,1(1):51-66(2001))。综述Callahan等，//eaWDrag,1/5:281-2卯(2001)称，r-PA和替奈普酶作为推注疗法给予时均能有效治疗AMI,这个特征可能有助于更早地启动治疗并降低治疗费用。后来的一项研究发现，溶栓药(瑞替普酶、替奈普酶、阿替普酶和链激酶)似乎具有相似的降低死亡率功效，而且GUSTO-I中加速的阿替普酶的表观效益与此一致(Dundar等，0/Af,96:103-113(2003))。在一项名为ASSENT-3PLUS的试验中发现，在院前设置中(prehospitalsetting)替奈普酶与低分子量肝素依诺肝素(enoxaparin,ENOX)或未分级的肝素联合有效治疗AMI。替奈普酶与ENOX的联合减少早期缺血事件，但需要在高龄患者中测试更低的ENOX剂量(Wallentin等，Ocw/加'o",108:135-142(2003);美国专利7,084,118)。在在夹血性中风的治疗中，Jonas等,^朋a/so/Ae7VewAcademySc/e"ce5，939:257-267(2001)公开了动物模型在评估神经元保护剂的失败和溶栓的成功中的预测价值。据称在动物中风模型中具有神经保护性的药剂在人类试验中均告失败。已经有报道称溶栓在动物和人类的中风中是有益的。在动物中，神经保护剂和溶栓剂对梗死大小的效果是时间依赖性的早期启动治疗的效果最好；而随着首次治疗时间延迟的增加，效益逐渐地-并且最终完全地-丧失。动物数据还显示，总的来说，与溶栓剂相比，神经保护剂的有益效果较弱，而且较快完全丧失。人类数据显示，遭受失败的神经保护剂试验的进入窗(entrywindow)远远超出了这些药剂在动物测试中看到的(任何)成功的窗口。与此相反，人类溶栓试验一致地将进入时间限制到这些药剂已在动物中显示有益效果的窗口中。在临床中风试验中，神经保护剂未能产生效益，因为它们的最佳效果太弱，而且根据动物模型可以预见它们的使用时间已过晚。在早期最佳有效性窗口(earlywindowofoptimaleffectiveness)中临床使用了在动物模型中效果强于神经保护剂的溶栓疗法，诸如替奈普酶和尿激酶，产生了有益结果。静脉内和动脉内溶栓用于急性缺血性中风治疗的领域正在快速发展。现代溶栓剂。已经研究了将数种第三代溶栓剂中的两种用于急性缺血性中风治疗，包括替奈普酶和瑞替普酶。依靠结构修饰，第三代溶栓剂的半衰期更长，对血栓基质的穿透更多。第一个前瞻性人类临床试验评估了动脉内瑞替普酶在16名不适合静脉内阿替普酶疗法的缺血性中风患者中的安全性和功效。在88%的患者中，经过治疗后观察到了接近完全或完全的再通。预计第三代溶栓剂的开发和利用将增加缺血性中风患者的再通率和临床恢复率(Qureshi等,Crew/Qp/wb"/"ve^ga/Zowa/Z)n/取3(12):1729-1732(2002》。例如，孟替普酶(monteplase),—种经过修饰的rtPA,在栓塞性中风大鼠模型中降低冲更死体积和出血性转变(hemorrhagictransformation)(Muramatsu,A^wra/og/ca/ie"arc/2,24:311-316(2002))。其它此类第三代药物包括拉诺替普酶、纤溶酶、或纤溶酶的截短形式(微纤溶酶(microplasmin))、带有非溶栓性相关的神经保护性治疗活性的直接作用性溶栓剂、重组吸血蝠(desmodusrotundus)唾液纤溶酶原激活物(rDSPA)a-l、和突变型纤维蛋白活4匕的人纤;容酶原(BB10153;BritishBiotechInc.)。Lapchak，(9;/m'o"ow/"ve幼'g加'o加/Dn^y,11:1623-1632(2002)对于这些药物发现和开发领域估l了综述。当前正在进行一项名为CLEAR中风研究的多中心、随机化、双盲顺序剂量升级临床试验，以评估依替巴肽(eptifibatide)与低剂量rtPA联合在三小时内治疗急性缺血性中风的安全性，依替巴肽是一种静脉内环状七肽，其选择性阻断血小板糖蛋白1Ib/IIIa受体。已经有人提出，替奈普酶在中风后可能具有神经保护性，因为它比阿替普酶的纤维蛋白特异性更高、对PAI-1有抗性、且其生物学半衰期更长(18分钟，相比于阿替普酶的10分钟)，这些特征可能导致中风患者中的脑出血比阿替普酶更少。在2000-2003年间收治的88名急性缺血性中风患者中进行了一项替奈普酶初步研究，使用了四种替奈普酶剂量等级0.1、0.2、0.4和0.5mg/kg。前三种等级没有症状性卢贞内出血(ICH)。在0.5mg/kg，13名患者中的2名出现症9状性ICH，并且ICH随剂量的增加而增加(8%-38%),其结果与早先急性缺血性中风试验中的阿替普酶组相似。目前正在一项急性缺血性中风患者的随机化、有对照、IIb期临床研究中对替奈普酶进行测试，该项研究使用0.1mg/kg替奈普酶、0.4mg/kg替奈普酶和0.9mg/kgrtPA。在一项早先的动物研究中，在栓塞性中风和外周出血(peripheralbleeding)的家兔模型中比较了替奈普酶和阿替普酶的活性。阿替普酶的输注或替奈普酶的推注施用导致了剂量依赖性的血块溶解。以毫克每千克为基础计，发现替奈普酶比阿替普酶的效力强一个数量级。与阿替普酶不同，替奈普酶在该模型中导致较少的系统性纤溶酶原激活和较少的出血性转变。替奈普酶没有延长模板出血时间(templatebleedingtimes)。作者称通过结合提高的纤维蛋白特异性和降低的血浆清除，有可能产生一种比野生型tPA更方便、更强效的溶栓剂(替奈普酶)。据作者称，出血性转变的显著减少可归因于使用该分子所见的系统性纤溶酶原保持(Thomas等，25:2072-2078(1994))。在另一项动物研究中，在家兔栓塞性中风模型中比较了0.6mg/kg或1.5mg/kg剂量的替奈普酶与野生型tPA。野生型tPA和替奈普酶都在大多数受试者中引起了溶栓，并且彼此没有区别。替奈普酶或tpA都没有影响出血的大小。在一个栓塞性中风模型中替奈普酶显示了与野生型tPA相似的再通率。tPA增加出血率，而与替奈普酶处理相关的出血与对照或tPA组相比没有统计学上的差异。作者提出替奈普酶显示了作为中风的替代性溶栓治疗方法的前景，但他们未能证明与野生型tPA相比安全性有所改善(Chapman等，^rafe,32:748-52(2001))。更近期的人类研究表明与动物研究有许多相似之处，不但体现在缺血后事件的性质，还体现在这些事件的时间过程(Callaway,CVre"A^wop/^nmco/ogv,2/3:277-294(2004))。在家兔中，栓塞性中风后六小时共施用NXY-059(100mg/kg)和替奈普酶(0.9mg/kg)能改善临床评价得分(Lapchak等，五x/en.mewto/vVew厂o/ogv,188:279-285(Aug.2004);Comwe"/1~188:195-199(Aug.2004》。Wagner和Jauch,五xpen'mewto/膽ro/，，188(2):195-199(2004);C画me"fo"~脸wra/.，188(2):279-85(2004)公开了溶栓剂诸如替奈普酶加上中枢神经系统(CNS)保护疗法诸如自由基清除剂NXY059和氮氧化物治疗急性中风的窗口。Lapchak等，五jcpen'wwto/Afewra/ogv,185:154-159(2004)公开了替奈普酶和阿替普酶在家兔中小血块栓塞性中风后的临床评价分数的比较。利用家兔小血块栓塞性中风模型(RSCEM)，对栓塞后l小时静脉给药的替奈普酶(0.1mg/kg-3.3mg/kg)和阿替普酶(0.9mg/kg-3.3mg/kg)进行剂量-效应谱分析。在别的研究中，在栓塞后3(或6)小时施用替奈普酶(0.9mg/kg)或阿替普酶(3.3mg/kg)以确定这些溶栓剂的治疗窗。这两组研究都在栓塞后24小时进行了行为分析，以便确定能在50%的家兔中产生神经学缺陷的有效中风剂量(P50)或血块量(mg)。该研究表明替奈普酶具有较宽的治疗性范围，治疗窗为至少3小时，并具有持续性的效果。此外，替奈普酶的安全性谱与阿替普酶的相似。替奈普酶对脑内出血(ICH)率的增加不会高于阿替普酶所导致的增加。然而，阿替普酶的治疗性范围和窗口比替奈普酶更有限。这些临床前研究提示，替奈普酶具有比阿替普酶更好的药理学谱，并支持在中风患者的随机化双盲临床试验中对替奈普酶进行进一步研究。另参见Araujo等，5bc/e(y/orA^wwcz'e"ce爿6^n3cf/f/"en37"y尸/""wer,Volume:2003，Page:AbstractNo.102.2(2003)Conference:33rdAnnualMeetingoftheSocietyofNeurosdence,NewOrleans,LA,USA,November08-122003。需要提供一种用于改善急性缺血性中风中临床结果的方法，诸如通过利用替奈普酶增加脑血流和/或P争低梗死大小。发明概述因而，要求保护本发明。在一个方面中，本发明提供一种用于治疗人类中急性缺血性中风的方法，包括以约0.05-0.5mg/kg的总剂量给人类施用替奈普酶，所述总剂量如下给予(a)约0.015-0.15mg/kg的初始推注剂量，继以约50-90分钟的时间段里量等于所述总剂量减去所述初始剂量的输注；或者(b)纯推注。方便的是，将替奈普酶以药学上可接受的配制剂，诸如本文中更详细说明的那些配制剂的形式来施用。优选的是，总剂量为约0.2-0.3mg/kg，更优选约0.25mg/kg。在该方法的一个实施方案中，总剂量以初始推注继以输注来给予。优选地，初始剂量为约0.08-0.12mg/kg,更优选约0.1mg/kg推注，并且/或者，输注时间段为约55-70分钟，更优选约60分钟。在一个特别优选的实施方案中，总剂量为约0.25mg/kg,以约0.1mg/kg的初始推注继以约60分钟里约0.15mg/kg的输注来给予。在另一个特别优选的实施方案中，在约60分钟时间里给人类施用总剂量为约0.25mg/kg的替奈普酶，如下给予l分钟里约0.1mg/kg的初始推注，继以约60分钟剩余时间(fortherestofabout60minutes)里约0.25mg/kg的输注。在该方法的另一个实施方案中，总剂量以纯推注给予。总剂量典型地为约0.05-约0.5mg/kg。在一个优选的实施方案中，总剂量为约0.25mg/kg。优选的是，在这两种方法中，在自急性缺血性中风发作起约15分钟到约20小时之间，更优选约45分钟到约6小时之间，仍更优选自急性缺血性中风发作起至多不超过约3小时的时间对人类施用替奈普酶。在一个优选的实施方案中，推注是静脉内推注，并且/或者，输注是连续输注。在这两种方法的一个优选实施方案中，它们进一步包括给人类施用有效量的第二药物，其中第一药物是替奈普酶。该第二药物优选是神经保护剂、溶栓剂、糖蛋白IIbIIIa拮抗剂、或抗CD18抗体。该第二药物可以在替奈普酶之前、之后或同时共施用给人类。这样的第二药物，例如，可以在缺血性中风发作后超过约3小时施用于哺乳动物(例如，自中风发作起约3-8小时内，优选约3-6小时内至少一次)。在另一个方面，本发明提供一种试剂盒，包括装有替奈普酶的容器；和关于使用替奈普酶来治疗人类中急性缺血性中风的说明，其通过以约0.05-0.5mg/kg的总剂量给人类施用替奈普酶来实现，所述总剂量如下给予(a)约0.015-0.15mg/kg的初始推注剂量，继以约50-90分钟的时间段里量等于所述总剂量减去所述初始剂量的输注，或者(b)推注。优选的是，总剂量为约0.2-0.3mg/kg，更优选约0.25mg/kg,初始推注为约0.08-0.12mg/kg。在所述试剂盒的一个实施方案中，总剂量以初始推注继以输注来给予。在一个优选的实施方案中，总剂量为约0.25mg/kg,以约0.1mg/kg的初始推注继以60分钟里约0.15mg/kg的输注来给予。在所述试剂盒的一个特别优选的实施方案中，总剂量为约0.25mg/kg,以约0.1mg/kg的初始推注，继以约60分钟里约0.15mg/kg的输注来给予。在所述试剂盒的另一个特别优选的实施方案中，在约60分钟里给予总剂量为约0.25mg/kg的替奈普酶，如下给予1分钟里约O.lmg/kg的初始推注，继以60分钟剩余时间里约0.25mg/kg的输注。在所述试剂盒的另一个实施方案中，总剂量以纯推注给予。本申请中的试剂盒优选进一步包括装有第二药物的容器，其中说明书包括联合替奈普酶使用第二药物来治疗人类中缺血性中风的说明，其通过给人类施用有效量的第二药物来实现。优选的第二药物是神经保护剂、溶栓剂、糖蛋白libIIIa拮抗剂、或抗CD18抗体。附图简述图l显示以1分钟里10%推注继以l小时剩余时间里90。/。输注给予0.9m/kg后，由模型预测的ACTIVASE⑧(阿替普酶)浓度中值。这些是一项1000名受试者的才莫拟(lOOO-subjectsimulation)的结果。人口统计状况(demographics)是基于一项先期AIS中风研究的观察结果。图2显示来自1000名受试者的模拟的模型预测药动学(PK)谱(model-predictedpharmacokineticprofiles)，比專交了才莫型予贞测的阿替普酶(ACTIVASE⑧)浓度中值和来自一个0.25mg/kg推注-输注方案的模型预测的替奈普酶(TNK)中值、第5和第95百分位的浓度。该模拟是基于以l分钟里的0.1mg/kg推注、l小时剩余时间里的0.15mg/kg施用的0.25mg/kgTNKase。TNK第5百分位是图上最下方的(实)线，TNK中值是与ACTIVASE中值线接近的点线，而TNK第95百分位是最上方的虚线。所述模型预测的阿替普酶浓度中值是基于以10%推注、l小时剩余时间里90。/。给予的0.9mg/kg(90mg/kg最大)(ACTIVASE中值是达到平台然后在60分钟后下降的那条实线)。图3显示来自1000名受试者的模拟的模型预测PKi普，比较了一个推注-输注方案的模型预测的阿替普酶(ACTIVASE)浓度中值和来自一个0.25mg/kg纯推注的方案的模型预测的替奈普酶(TNK)中值、第5百分位和第95百分位浓度。TNK第5百分位是图上最下方的(实)线，TNK中值是ACTIVASE中值线上方的点线，而TNK第95百分位是最上方的虚线。所述模型预测的阿替普酶浓度中值是基于以10%推注、1小时剩余时间里90%给予的0.9mg/kg(90mg/kg最大)(ACTIVASE中值是达到平台然后在60分钟后下降的那条实线)。优选实施方案的详述A.定义"中风，，在本申请中定义为中断(disrupt)向脑部供血至少24小时的脑血管意外(CVA)导致的神经学缺陷(neurologicdeficit)。中风可以采取不同的形式，包括出血性中风和缺血性中风，它们各自还可以进一步细分。因此，例如，出血性中风可能以具有ICH或虫朱网膜下腔出血(SAH)的神经学缺陷的突然发生为特征，而缺血性中风的亚型包括空洞性(lacunar)、血栓栓塞性(thromboembolic)和心栓塞性(cardioembolic)中风。术语"中风"在本申请中使用最广义，包括所有形式的中风，无论是否在本申请中具体列出。"短暂性脑缺血发作，，或"TIA，，在本申请中定义为向脑部供血的暂时中断，其在24小时内完全消解，通常持续数分钟到l小时。"急性缺血性中风"在本申请中定义为由血栓栓塞所引起的脑功能局部或全面扰乱的急性发生，其持续超过24小时或者导致死亡。急性局灶性缺血性中风是指由于对脑区域的供血中断而导致的脑损伤。本申请关注的急性缺血性中风通常是由任何一条或多条动脉的堵塞所引起的，所述动脉包括大脑主动脉(maincerebralarteries)(例如大脑中动月永、大脑前动脉、大脑后动脉、颈内动3永、推动脉或基底动脉)，以及次级动脉或小动脉。"动脉堵塞"(arterialobstruction)通常是阻塞初级和次级动脉或小动脉的单个栓塞或血栓或者多个血块颗粒。术语"脑室内出血"或"IVH"用于指脑室内部或周围的出血。IVH通常分为四级第l级出血发生在脑室的小区域中；第2级出血还发生在脑室内部；第3级脑室^皮血液扩大；第4级出血延伸到脑室周围的脑组织。"增加脑血流或减少梗死大小，，意思是通过诱导被处理哺乳动物的脑血流相对于未受处理的哺乳动物发生统计学或生理学上显著的增加和/或被处理哺乳动物的梗死大小相对于未受处理的哺乳动物发生统计学或生理学上显著的减少，来改善临床结果的行为，其中所述增加或减少是例如使用本领域公知的技术，诸如血管成像来加以测定的。优选的是，施用拮抗剂后2-4小时测定的脑血流相对于未受处理的哺乳动物增加至少30%,优选至少50%。理想的是，施用拮抗剂后48小时测量的梗死大小比未处理的哺乳动物少20%，优选少50%。"梗死"是指由于血栓或栓塞阻塞局部循环所致的组织或器官(例如心或脑)的坏死区域。梗死大小可以通过已知方法来测量。"梗死相关动脉"是这样的动脉，当其被血栓或栓塞至少部分阻断时，导致组织或器官(例如心或脑)中产生梗死。14"治疗"或"处理"指治疗性处理和预防性或防范性措施二者。需要治疗者包括已经患有病症者，也包括要预防病症者。本申请中优选的是已经被诊断为患有中风，特别是急性缺血性中风的个体的治疗。如本申请中使用的，术语"替奈普酶，，，又称TNK-tPA或"TNKASE"牌组织型纤溶酶原激活物变体，是指一种tPA变体，标称为T103N、N117Q、K296A、H297A、R298A、R299AtPA，可获自Genentech公司(SouthSanFranciscoCA)，其中野生型tPA的Thrl03被改变为Asn(T103N),野生型tPA的Asnll7被改变为Gln(N117Q),野生型tPA的Lys-His-Arg-Arg(SEQIDNO:l)296-299被改变为Ala-Ala-Ala画Ala(SEQIDNO:2)(KHRR296-299AAAA)。参见本申请的背景部分和美国专利5,612,029。"包装插页，，用来指通常包含在治疗产品的商品包装中的说明书，它含有关于下列内容的信息适应证、用法、剂量、施药、禁忌证、与包装产品联用的其它治疗产品、和/或有关此类治疗产品的使用的警告等等。"药物"(medicament)是用于治疗中风或其症状或副作用的活性药。"第二药物，，(secondmedicament)是可以添加来帮助第一药物即替奈普酶来治疗中风的药物。此类第二药物的实例包括但不限于阿司匹林，细胞间粘附分子(ICAM)-1和LFA-1拮抗剂包括抗体如恩莫单抗(enlimomab)(—种抗ICAM-1单克隆抗体)，和抗CD18及抗CDlla抗体，人抗白细胞抗体如Hu23F2G，糖蛋白IIbIIIa拮抗剂如依替巴肽(eptifibatide)(INTEGRELIN)(一种选择性阻断血小板糖蛋白IIb/IIIa受体的静脉内环状七肽)，直接凝血酶抑制剂，外部或局部超声，机械性血块回收或inaceration，纤维蛋白分解剂、神经元损伤愈合剂如碱性成纤维细胞生长因子(例如FIBLAS丁TM),神经保护剂如胞磷胆碱(citicoline)、镁、纟内美芬(nalmefene)、地佐环平(dizocilpine)、尼莫地平(nimodipine)、拉莫三口秦(lamotrigine)、西帕曲近(sipatrigine)、,贝鲁峻(lubeluzole)、美西4聿(mexiletine)、氯美。塞峻(clomethiazole)、钙和钠通道阻断剂、(3-氨基-3-羟基-5-甲基异a恶唑-4-丙酸拮抗剂、血清素激动剂、跨膜钾通道调控剂、抑制星形胶质细胞活化的药剂(例如ON02506)、抗氧化剂(例如MCI-186)、抗粘附单克隆抗体和抑制血小板聚集的拮抗剂和抗体如阿加曲班(argatroban)和阿昔单抗(abciximab)(REOPROTM)、苯妥英(phenytoin)、氮氧化物、CNS保护性疗法、自由基清除剂如替拉扎特(tirilazad)、反应性氧代谢物、和抗氧化剂，和除替奈普酶之外15的其它溶栓剂，如下文定义的，诸如例如酰化纤溶酶原-链激酶激活物复合体(APSAC)、单链尿激酶-纤溶酶原激活物(scu-PA)、来自蛇毒的凝血酶样酶(thrombin-likeenzymes)如安克洛酶(ancrod)(优选为静脉内，一种衍生自马来半岛颊窝毒蛇毒液的降纤溶酶原剂)、链激酶(例如SAKSTARTM)、尿激酶、阿尼普酶、阿替普酶、沙芦普酶、瑞替普酶、拉诺替普酶(SUN-9216;GeneticsInstituteInc.)、纤溶酶、截短形式的纤溶酶(微纤溶酶；ThromboGenicsLtd)、带有非溶栓相关的神经保护性活性的直接作用性溶栓剂，重组吸血蝠(desmodusrotundus)唾液纤溶酶原激活物(rDSPA)a-l(Schering/TeijinPharmaceuticals)、突变型纤维蛋白活化的人纤溶酶原(BB10153;BritishBiotechInc.)、葡萄球菌激酶、蛇毒溶栓酶(fibrolase)、尿激酶原(动脉内直接施用到M1或M2动脉血栓中)、孟替普酶(经过修饰的rtPA)、帕米普酶(pamiteplase)、替来激酶(tisokinase)、和吸血蝙蝠纤溶酶原激活物、星形胶质细胞功能改善剂如US2004/0176347中公开的，自i走捕获剂如NXY-059(cerovive)、氯吡格雷(clopidogrel)、n-曱基-右旋-天冬氨酸受体阻断剂、镇痉药、胱天蛋白酶3抑制剂、((叔丁亚氨基)曱基)-l，3-(苯二磺酸二钠-n-氧化物)、依布硒(ebselen)、谷胱甘肽过氧化物酶、去曱安替比林(norphenazone)、罗维玉朱单抗(rovelizumab)、乳月包素卩-内酉旨(lactacystinbeta-lactone)、tsukubaenolide、4—月舞醜甲基2-口底口定酸(4phosphonomethylpipecolicacid)、依利罗；也(eliprodil)、针对神经节芬脂GM1的抗体，和任何上述药物的生物学活性变体、盐和衍生物。"溶栓剂，，是破碎和/或溶解血栓的分子。示例性的溶栓剂包括链激酶、酰基化纤溶酶原-链激酶激活物复合体(APSAC)、尿激酶、单链尿激酶-纤溶酶原激活物(scu-PA)、来自蛇毒的凝血酶样酶如安克洛酶(Bell,W."Defibrinogenatingenzymes"于Colman等,(纟扁)//ewo^os7'51T7^om6os^Lippincott，Philadelphia(1987)p.886)、tPA、和上述每种药物的生物学活性变体。本发明可用的合适溶栓剂在例如美国专利5，770,425;5，770，426;5,612,029;5,520,911;5,736,134;5,728,567;5,714,145;5,840,564;5,616,486;5,411,871;5,520,913;5,262,170;和5,108，901中有公开。"共施用"在本申请中使用时，意思是在单独施用的替奈普酶的有效治疗窗中施用第二药物。如此，第二药物可以在替奈普酶之前、同时或之后施用。根据第二药物的类型，第二药物诸如抗CD18抗体的施用优选在替奈普酶施用开始的约1小时前乃至即将开始施用替奈普酶之前(1-15分钟之前)开始，更优选与替奈普酶的施用同时开始。共施用还涵盖在开始施用替奈普酶之后施用第二药物，例如约15-30分钟之后乃至约3小时之后。共施用包括以单个配制剂的形式施用，其中两种药物可以是但并非必须是物理上彼此分开的。单独施用替奈普酶的"有效治疗窗"意思是动脉阻塞导致梗死之后的这样一个时间段或者时间窗(timewindow)，在此期间单独施用替奈普酶时，相对于未^l妻受该替奈普酶的对照，有效地恢复所述动脉中血流的通畅(patency)。对于替奈普酶而言，有效治疗窗是物种依赖性的，但利用标准测试法评估替奈普酶相对于对照的效力可以容易地加以确定。术语"抗CD18抗体，，在本申请中使用时，是指结合CD18(优选人CD18)并抑制或实质性降低CD18的生物学活性的抗体。通常，所述抗体将阻断(部分地或完全地)在其细胞表面表达CD18亚基的细胞(例如嗜中性粒细胞)结合内皮的能力。抗CD18抗体的例子包括MHM23(Hildreth等(1983));M18/2(IgG2a;Sanches-Madrid等，￡w//wmw"o/.,13(3):202-208(1983));H52(美国典型培养物保藏中心(ATCC)保藏物HB10160);Masl91c和IOT18(VermotDesroches等，5"cam/.乂/柳mM"o/"33(3):277-286(1991));和NA-8(WO94/12214)。优选的抗体是结合MHM23或H52所结合的CD18表位的抗体。优选的是，所述抗体对CD18多肽有高度亲和力。在优选的实施方案中，所述抗体对CD18抗原的亲和力为大约4nM或更少。更优选的是，所述亲和力是大约3nM或更少，最优选大约lnM或更少。在某些实施方案中，所述抗体可结合CD18胞外结构域中与CDllb締合的区域，而且该抗体也可以解离a链和(3链(例如，该抗体可以解离CDllb和CD18复合物，正如MHM23抗体那样)。II.实施本发明的模式除了早期介入外，溶栓剂诸如替奈普酶治疗中风的结果，以及治疗后中风患者的存活和恢复，与溶栓疗法的施用方式密切关联。本发明提供了一种改良的替奈普酶治疗中风特别是急性缺血性中风的规程。本发明的治疗规程和剂量给药方案所导致的药动学谱提供最大的功效和安全性，如此反映了中风溶栓疗法中的一个显著进步。在一个方面中，本发明提供一种用于治疗人类中急性缺血性中风的方法，包括以约0.05-0.15mg/kg(优选约0.2-0.3mg/kg,更优选约0.25mg/kg)的总剂量给人类施用替奈普酶，所述总剂量如下给予约0.015-0.15mg/kg推注(优选约0.08-0.12mg/kg推注，更优选约0.1mg/kg推注)的初始剂量，继以约50-90分钟，更优选约55-70分钟，最优选约60分钟的时间段里总计约0.05-0.5mg/kg(优选约0.2-0.3mg/kg，更优选约0.25mg/kg)的剩余量的输注。例如，如果总剂量为约0.25mg/kg替奈普酶，那么初始推注剂量优选为约0.1mg/kg,后续输注为约0.15mg/kg。基于目前的实验，这是最优选的方案，其中后续输注在约60分钟里给予。然而，应当注意，最优选的剂量给药方案可以在规定的剂量给药范围内有所变化，这取决于多种因素，包括中风的具体类型和程度、患者的状况、中风发作后经过的时间、等等。替奈普酶的输注可以在推注剂量完成后立即进行，或者可以与推注剂量的完成相隔多至约30分钟，但优选的是在推注剂量完成后立即启动输注。优选的是，推注注射是静脉内注射，但其可以通过其它方式注射，诸如动脉内注射。优选的是，输注为经过静脉内、肌肉内、腹膜内、脑脊髓内、皮下、关节内、滑膜内或鞘内途径连续进行，但优选的输注为静脉内输注。在一个备选的方面中，通过以完全作为推注剂量的方式给予约0.05-0.15mg/kg，优选约0.2-0.3mg/kg，更优选约0.25mg/kg的总剂量的替奈普酶来治疗急性缺血性中风。优选的是，所述推注为静脉内推注。中风是一种严重的疾患，是美国第三位的致死原因。由于存活和恢复程度是诊断和介入时间的函数，在本发明的方法中，一旦急性缺血性中风疾患得到诊断或者神经学检查的急性缺陷提示急性缺血性中风疾患，则将尽可能快地给患者施用替奈普酶。急性缺血性中风的初始临床表现典型地包括下列的一项或多项(l)意识改变，诸如木僵或昏迷、意识错乱或精神激动、记忆丧失、癫痫发作(seizures)和/或谵妄；(2)剧烈或异常严重的头痛，伴随意识水平下降/神经学缺陷，和/或包括反常/严重的颈部或面部疼痛；(3)失语(语无伦次或言语理解困难)；(4)面神经无力或面部不对称；(5)—肢或多肢动作失调、虚弱、麻痹或感觉丧失；(6)共济失调(平衡不良、笨拙或行走困难)；C7)视力丧失；和(8)强烈眩晕、复视、单侧听力丧失、恶心、呕吐和/或畏光。上述一种或多种表现的存在可以是急性缺血性中风的初始征候，可以进行追踪鉴别诊断和神经学检查来加以核实。急性缺血性中风诊断可以使用神经学检查，以及任选的，神经影像技术诸如计算机体层摄影术(包括非对比(non-contrast)CT和灌注CT)和核磁共振成像(MRI)(包括扩散加权成像(diffiisionweightedimaging,DWI)和灌注成像(PI));血管影像(例如双重扫描(duplexscanning)和经颅多普勒超声和激光多普勒)；和血管造影术(例如计算机化数字减影血管造影术(DSA)和MR血管造影术)，以及其它侵入性或非侵入性技术。有数种可用于评估中风严重性的标准。包括Barthel指数(Mahoney和Barthel,Mar7/aw/Me&ca/JowmaZ，14:56-61(1965)),改良的Rankin标准(Rankin,Sco/.MW2:200-215(1957);vanSwieten等,及rafe，19:604-607(1988);Duncan等，5yrafe,31:1429-1438(2000)),Glasgow结果标准(Jennett和Bond,1(7905):480-4(1975);Teasdale,/脸wra.脸wraswrg.尸syc/n'a—,41:603-610(1978);Jennett等，丄a"cd，1:480-484(1995》，和美国国立卫生研究院中风标准(NIHSS)(Brott等，5Vrafe,20:864-870(1989))。本发明的方法适合用于治疗所有严重层次的急性缺血性中风。优选的是，从紧随中风发作之后到中风发作之后约24小时的任何时刻，以本申请所述的剂量和剂量给药方案使用替奈普酶至少一次。在某些实施方案中，对患者首次施用替奈普酶是在自中风发作起约15分钟(或者约30或45分钟)至约20小时(更优选约10小时，或约6小时，或3小时，或约90分钟，或约60分钟)。在一个特定的实施方案中，对于在与急性缺血性中风符合的体征和症状发作后3小时之内就医的患者，依照本发明用替奈普酶进行溶栓疗法。在本申请的方法中，可以与替奈普酶一起给患者施用有效量的第二药物(此处替奈普酶是第一药物)。所述第二药物可以是一种或多种药物，并可包括例如上文列举的那些。优选的此类药物包括神经保护剂、镇痉药、自旋捕捉剂、细胞间粘附分子(ICAM)-l和LFA-l拮抗剂诸如抗CDlla和抗CD18抗体、糖蛋白nbllla拮抗剂、神经元损伤愈合剂、抑制血小板聚集和粘附的抗体、以及人抗白细胞抗体，或除替奈普酶之外的溶栓剂。更优选的是神经保护剂、其它溶栓剂、糖蛋白libIIIa拮抗剂和抗CD18抗体。这些第二药物一般使用与此前使用的相同的剂量和施用途径，或者使用此前使用剂量的约1-99%。如果确实使用此类第二药物，优选的是，第二药物的用量低于若不存在替奈普酶时的用量，在替奈普酶初始剂量给药之后的后续剂量给药中尤为如此，以消除或减少其导致的副作用。在与替奈普酶推注剂量给药一起施用有效量的第二药物时，第二药物可以与任何次数的所述剂量给药一起施用。例如，可以只与一次所述剂量给药一起施用，或者与多于一次的所述剂量给药一起施用。在一个实施方案中，第二药物与初始推注剂量给药一起施用。在另一个实施方案中，第二药物与第一次和第二次剂量给药一起施用。在又一个实施方案中，第二药物与所有替奈普酶剂量给药一起施用。联合施用包括共施用(同时施用)，使用不同的配制剂或单个药物配制剂；和以任意次序的序贯施用，其中优选存在所有活性药剂同时发挥其生物学活性的时间段。优选的是，在初始暴露后，降低或消除所述药剂的量，以减少受试者对有副作用的药剂诸如泼尼松(prednisone)和环磷酰胺(cyclophosphamide)的暴露。此外，可以与替奈普酶一起使用INTERCOOLTm装置等装置和/或在33。C或类似温度^f吏用外加冰来治疗中风。如下制备替奈普酶的治疗用配制剂，即将具有期望纯度的替奈普酶与任选的生理学可接受载体、赋形剂或稳定剂混合，以冻干配制剂或水溶液的形式供贮存(《Remington'sPharmaceuticalSciences》，第16版，Osol,A.编，1980)。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，而且包括缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清清蛋白、明胶或免疫球蛋白；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖、海藻糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA;糖醇，诸如甘露醇或山梨醇；成盐相反离子，诸如钠；和/或非离子表面活性剂，诸如tweentm、PLURONICStm或PEG。活性成分还可包载于例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶嚢中(例如分别是羟曱基纤维素或明胶微胶嚢和聚(曱基丙烯酸曱酯)微胶嚢)、在胶状药物传递系统中(例如脂质体、清蛋白微球体、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶嚢)、或在粗滴乳状液中。此类技术公开于例如《Remington'sPharmaceuticalSciences》，第16版，Osol,A.编，1980。20用于体内施用的配制剂必须是无菌的。这可容易的通过在冻干和重建之前或之后使用无菌滤膜过滤来实现。可使用持续释放制剂。持续释放制剂的合适例子包括含有替奈普酶的固体疏水性聚合物半透性基质，该基质以定型产品的形式存在，如薄膜或4敖胶嚢。持续释放基质的例子包括聚酯、水凝胶(例如聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸西旨)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美国专利3，773,919)、L-谷氨酸和Y-乙基-L-谷氨酸酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物诸如LUPRONDEPOT(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林构成的可注射微球体)及聚-D-(-)-3-羟基丁酸。虽然诸如乙烯-乙酸乙烯和乳酸-乙醇酸等聚合物能够持续释放分子100天以上，但是某些水凝胶释放蛋白质的时间较短。当封装的抗体在体内长时间维持时，它们可能由于暴露于37。C的潮湿环境而变性或聚集，导致生物学活性损失和免疫原性可能改变。可根据相关机制来设计合理的稳定化策略。例如，如果发现聚集机制是经由硫-二硫化物互换而形成分子间S-S键，那么可通过修饰巯基、由酸性溶液冻干、控制含水量、采用适宜添加剂和开发特定的聚合物基质组合物来实现稳定化。持续释放的替奈普酶组合物还包括脂质体封装的替奈普酶。含有替奈普酶的脂质体是通过本领域已知的方法制备的，诸如Epstein等，尸rac.Ato/.」cadScz'."5^4,82:3688(1985);Hwang等，尸rac.A^/.」cad5W.L/iSL4，77:4030(1980);和美国专利4,485，045及4，544,545中描述的。一般而言，所述脂质体是小(约200-800埃)单层类型，其中脂质含量大于约30mol.。/。胆固醇，并对所选的比例进行调整以实现最优的替奈普酶疗法。美国专利5,013,556公开了具有延长的循环时间的脂质体。替奈普酶要使用的确切总剂量、多少通过推注施用而多少通过输注施用、或者是否仅使用推注将取决于例如下列因素待治疗的中风的确切性质、中风的严重程度和病程、施用替奈普酶是为了预防目的还是治疗目的、先前的疗法、患者的临床史及对替奈普酶的响应、及主治医师的裁量。该疗法的进程可通过本申请详细说明的常规技术和测定法来容易地加以监测。在本发明的另一个实施方案中，提供装有可用于改善中风临床结果的材料的制品和试剂盒。所述制品包括带有标签的容器。合适的容器包括例如瓶子、小管和试管。容器可以用多种材料诸如玻璃或塑料制成。容器装有对治疗本申请定义的中风有效的组合物，并可以具有无菌存取口(例如容器可以21是具有皮下注射针头可刺穿的塞子的静脉内溶液袋或小管)。组合物中的活性剂是替奈普酶。容器上的标签指示该组合物用于如上所述治疗中风，还可说明体内用途诸如上文所述的那些用途的指导。具体地，在一个实施方案中，所述试剂盒包括装有替奈普酶的容器，和关于使用替奈普酶来治疗人类中急性缺血性中风的说明，其通过以约0.05-0.5mg/kg的总剂量给人类施用替奈普酶来实现，所述总剂量如下给予(a)约0.015-0.15mg/kg的初始推注剂量，继以约50-90分钟的时间段里量等于所述总剂量减去所述初始剂量的输注；或者(b)推注。优选的是，总剂量为约0.2-0.3mg/kg,更优选约0.25mg/kg,而选项(a)下的初始剂量为约0.08-0.12mg/kg,更优选约0.1mg/kg。在所述试剂盒的一个实施方案中，总剂量以初始推注继以输注来给予。在一个优选的实施方案中，总剂量为约0.25mg/kg,以约0.1mg/kg的初始推注，继以约60分钟里约O.15mg/kg的输注给予。在所述试剂盒的另一个实施方案中，总剂量以推注给予。这些试剂盒任选地还包括装有第二药物的容器，其中说明书包括联合替奈普酶使用所述第二药物来治疗人类中缺血性中风的说明，其通过给人类施用有效量的所述第二药物来实现。示例性的第二药物和优选的第二药物在上文已指明。本发明的试剂盒还可包括另一容器，其装有药学可接受的緩沖剂，诸如磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和右旋糖溶液。其还可以包括从商业和用户立场上看需要的其它器材，包括其它緩冲剂、稀释剂、滤器、针头、注射器及记载了使用说明的包装插页。下面的实施例系为说明目的而非作为限制而提供。在此通过援引方式并入本说明书中所有引用文献的公开内容。实施例用于治疗急性缺血性中风的替奈普酶剂量给药方案的确定通过进行PK建模，建立了一套改善替奈普酶治疗AIS的安全性和功效的剂量给药方案。已经证明，对于ACTIVASE⑧(阿替普酶)(Gulba等《/^m,Co〃.Carafo/.,30〃:1611-1617(1997);Tanswell等，乂」肌Cb〃.Carafe/.,19/5:1071-1075(1992))和TNKase(替奈普酶)(Wang-Clow等，爿w.//ea"7:,141/1:33-40(2001);Tanswell等，C7/".尸/wrmacoh'"^，41/15:1229-45(2002))而言，溶栓剂的功效结果都与剂量和浓度相关。该观察结果提示，利用基于PK的方法进行溶栓剂的剂量选择会是适当的。此外，对一项家兔体内PK和药效学(PD)研究的PK分析提示，当比较曲线下面积(AUC)和达到50。/。血块溶解的时间(timeto50%clotlysis)时，阿替普酶和TNKase差不多是等功效的(Thomas等，^rafe，25/10:2072-2078(1994))。根据对接受阿替普酶和TNKase治疗的AMI患者的TIMI10B临床研究也推出了该结论，在此研究中不但发现阿替普酶和TNKase的功效和安全性结果是相似的，而且在关键治疗时间点30分钟和90分钟时阿替普酶和TNKase的浓度也是相似的。这些时间点之所以重要，是因为它们分别标志着阿替普酶输注速率的改变和阿替普酶输注的终止(Modi等，C7/".P/zamz.,40/5:508-515(2000))。由此得出结^仑，由于药物浓度和响应之间的关系，以及由于相似浓度下的相似功效，重现治疗期间(0-60分钟)阿替普酶的浓度时间曲线和暴露情况的TNKase给药方案会在AIS中产生相似的功效和可能更好的安全性。因而，使用阿替普酶急性心肌梗死(AMI)PK历史数据以及AMI和中风中的TNKase数据进行PK建模来提供合适的AISTNKase剂量。根据该PK建模，优选的方案是剂量为0.25mg/kg,以0.1mg/kg的初始推注，继以60分钟里0.15mg/kg的输注来给予。AIS剂量给药策略中TNKase剂量的第二选择是0.25mg/kg的推注。TNKase的剂量给药方案是利用旨在重现0.9mg/kgUSPI剂量给药(l分钟里10%推注和1小时剩余时间里90%)的相关治疗期中阿替普酶的暴露和浓度时间谱的建模-模拟方法得出的。这需要根据公开的PK参数和浓度建立阿替普酶结构和错误模型(PK模型)，并且从机构内部的AMI和AISPK数据构建TNKase人群PK模型(PPK模型)。所有计算是利用NONMEM建模软件包第5版(Beal,Boeckman，和SheinerNO画EMuser'sguide,1988-1992.1992.SanFrancisco,CA,UniversityofCalifornia,SanFrancisco)来进行的。据记载，阿替普酶遵循二隔室和三P鬲室PK(two-andthree-compartmentPK)(Seifried等,7Tzr細6os^&//aewostas7.s，61/3:497-501(1989);Tanswell等,爿/^"e/w/"e(/brac/2wg,41/12:1310-19(1991);Tanswell等,C//",泡画co/.77/^，46/2:155-62(1989);23Tanswell等，/Co〃egeo/Ca^/o/ogy.,19/5:1071-75(1992);Tebbe等，T7zeJomwg/o/Ca^/o/o^,64/8:448-53(1989》。选择了二隔室模型，因为它是文献中最新近记载的，而且使用的是更为常用的前线载荷剂量给药方案(Neuhaus等，j:Co〃.CaW/o/.,19/5:885-891(1992))。还使用了PK参数和30及90分钟时浓度的均值和标准偏差(Tanswell等，乂」w.Cb〃.Carafe/.,19/5:1071-75(1992))。虽然该模型是基于阿替普酶的AMI剂量给药方案的相关PK，但就用于模拟针对AIS的阿替普酶USPI剂量给药方案会达到的浓度而言，这些PK参数被认为是合理的近似(Genentech)。表l总结了最终用于模拟的阿替普酶PK模型参数。表l:阿替普酶PK参数<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>TNKasePPK模型是使用来自AMI试验TIMI10B(Modi等，见上文)和一项先期剂量升级AIS试验的患者个体血清浓度数据得出的。使用二隔室模型最好地描述了这些组合数据。表2总结了最终的模型结果。表2:TNKase(替奈普酶)最终模型估值<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>由于TNKasePK测定没有区分内源tPA和施用的TNKase，在模型中纳入了一个基线参数来记录内源tPA水平。根据下式纳入体重(WT)和年龄(AGE)作为关于清除率(CL)的协变量Cl广(^(『3}/81.8)037V碼/58)-0.200^是CL的群体估值，CLj是个体CL，WTj是个体体重，中值体重为81.8,而AGEj是个体年龄，中值年龄为58。然后使用所述TNKasePPK模型对候选剂量给药方案进行AIS剂量给药方案估计和模拟，以图产生与阿替普酶预测结果相似的浓度-时间谱和暴露。所述TNKase剂量给药方案的基础是阿替普酶USPI剂量给药方案在60分钟治疗期内的浓度-时间谱和暴露(图l)。策略是利用它作为TNKase剂量给药的近似目标。图l提示，10%阿替普酶推注导致了近似稳态的药物浓度，然后在剩余的60分钟内阿替普酶的浓度相当恒定。然后利用从2-60分钟以2分钟间隔获得的模型估计浓度中值的多个值计算有效浓度均值(计算机程序JMP版本5丄2003)(SASInstituteInc.)和AUC。基于观察到的时间-浓度谱，中风的第一个TNKase方案包括一次推注继以一次恒定输注。由下式得出达到有效浓度均值需要的推注剂量推^麻量=xCV效其中群体体积(populationvolume)CW=阿替普酶有效浓度均值阿替普酶有效浓度均值和TNKase^(群体体积)分别为约1800ng/mL和4072mL,需要大约0.1047mg/kg的TNKase推注剂量。阿替普酶暴露定义为AUC0-60分钟。在60分钟剂量给药期间内获得相似暴露所需要的TNKase剂量由下式得出其中^"C,rt,v。,e=0-60分钟治疗期内的阿替普酶AUC=TNKase群体清除率60分钟剂量给药期间内的阿替普酶AUC由下式计算阿替普酶AUOCV放x60分钟其中CVfO-60分钟的阿替普酶有效浓度均值阿替普酶的有效浓度均值大约为1800ng/mL,所得AUC为108,000ng*min/mL。在105mL/min的TNKase群体清除率(populationclearance)的条件下，维持与有效浓度相近的浓度和暴露所需要的总TNKase剂量为在l小时里施用0.16mg/kg。从算得的0.1047mg/kg推注剂量和60分钟里0.16mg/kg输注确定了一种更适用于临床的剂量，即0.1mg/kg推注和60分钟里0.15mg/kg输注，并且在1000名受试者的模拟中对其进行了测试。图2显示来自此方案的均值、第5百分位和第95百分位浓度，与阿替普酶的模型预测浓度相比较。使用计算机程序WinNonlin3.0版本2001(WinNonlin)计算了0-60分钟的治疗期间的AUC、60-120分钟的治疗后期间的AUC、及0-120分钟的总AUC,并总结于表3。表3:TNKase的AUC和浓度比较-0.25mg/kg推注/输注剂量给药方案<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>中值浓度阿替普酶0.25mg/kgTNKaseG2分钟19591934030分钟18241874060分钟18711877*八1^=曲线下面积根据这些结果，将下述TNKase剂量确定为AIS中合适的TNKase剂量给药方案以l分钟里的O.lmg/kg推注和1小时剩余时间里O.15mg/kg的输注来施用0.25mg/kg。如果能够改善结果，考虑确定别的剂量给药方案。在导致阿替普酶被批准用于中风的临床研究中，出血是限制剂量的毒性。然而，AMI文献提示，较高浓度的溶栓剂可改善血块溶解。在至少两项以前线载荷剂量给药方案施用阿替普酶的研究中都观察到了暴露与响应之间的这种关系，导致AMI中结果的改善(Gulba等，同上；Neuhaus等，同上)。由于TNKase的纤维蛋白特异性在理论上可容许提高剂量而又减少对纤维蛋白原的影响和随之而来的出血风险，考虑了0.25mg/kg的推注剂量给药方案。目的是施用更高的早期剂量以改善血块溶解(与AMI中阿替普酶观察到的结果一致)，而不改变纤维蛋白原或增加出血风险。这种推注方案还会降低推注-输注方案所观察到的、较晚时间点上的低水平暴露。图3显示来自所述0.25mg/kg推注方案的模型预测的阿替普酶浓度中值和模型预测的TNKase中值、第5百分位及第95百分位浓度。表4总结了AUC值并比较了关键时间点上的浓度。总的来说，从对0.25mg/kg推注的模拟观察到的暴露和浓度时间曲线提示这种用于纯推注治疗的方案是合适的。表4:TNKase的AUC和浓度比较-0.25mg/kg纯推注剂量给药方案阿^^酶__0.25mg/kgTNKaseAUC*%AUC*%%阿替普酶(中值)AUC(中值)AUCAUCAUC(0-60)1079418714019181130AUC(60-120)15487133324219215AUC(0-120)12342810017343310014127<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>综上，利用药动学建模和模拟确定了TNKase用于治疗急性缺血性中风的推注-输注及纯推注剂量给药方案。设计这些剂量给药方案以提供与阿替普酶施用于AIS患者时相比更好的替奈普酶安全性和功效。虽然已经结合优选的实施方案和具体的实际实施例对本发明做出了必要的描述，但本领域技术人员在阅读了上面的说明书之后将能够实现本文公开之主题的各种变化、等同物替换和改变，而不背离其精神和范围。因此，本发明可以与本文中具体描述的方式不同的方式来实施。因此，专利证书对其所给予的保护仅应被随附的权利要求及它们的等同物所限定。权利要求1.一种用于治疗人类中急性缺血性中风的方法，包括以约0.05-0.5mg/kg的总剂量给人类施用替奈普酶，所述总剂量如下给予(a)约0.015-0.15mg/kg的初始推注剂量，继以约50-90分钟的时间段里量等于所述总剂量减去所述初始剂量的输注；或者(b)推注。2.权利要求l的方法，其中所述总剂量为约0.2-0.3mg/kg。3.权利要求1或2的方法，其中所述总剂量为约0.25mg/kg。4.权利要求1-3中任一项的方法给予。5.权利要求1-4中任一项的方法注。6.权利要求1-5中任一项的方法7.权利要求1-6中任一项的方法8.权利要求1-7中任一项的方法9.权利要求1-8中任一项的方法予约0.1mg/kg的初始推注，继以约60分钟里约0.15mg/kg的输注。10.权利要求l-3中任一项的方法，其中所述总剂量以推注给予。11.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述替奈普酶是在自急性缺血性中风发作起约15分钟至20小时之间的时间施用给人类的。，其中所述总剂量以初始推注继以输注来，其中所述初始剂量为约0.08-0.12mg/kg推，其中所述初始剂量为约0.1mg/kg推注。,其中所述输注时间段为约55-70分钟。，其中所述输注时间段为约60分钟。,其中所述总剂量为约0.25mg/kg，如下给12.权利要求l-ll中任一项的方法，其中所述替奈普酶是在自急性缺血性中风发作起约30分钟至6小时之间的时间施用给人类的。13.权利要求1-12中任一项的方法，其中所述替奈普酶是在自急性缺血性中风发作起约30分钟至3小时之间的时间施用给人类的。14.权利要求1-13中任一项的方法，其中所述推注是静脉内推注。15.权利要求1-14中任一项的方法，进一步包括给人类施用有效量的第二药物，其中第一药物是替奈普酶。16.权利要求15的方法，其中所述第二药物是神经保护剂、溶栓剂、糖蛋白libIIIa拮抗剂、或抗CD18抗体。17.—种试剂盒，包括(a)装有替奈普酶的容器；和(b)关于使用替奈普酶来治疗人类中急性缺血性中风的说明，其通过以约0.05-0.5mg/kg的总剂量给人类施用替奈普酶来实现，所述总剂量如下给予(a)约0.015-0.15mg/kg的初始推注剂量，继以约50-90分钟的时间段里量等于所述总剂量减去所述初始剂量的输注；或者(b)推注。18.权利要求17的试剂盒，其中所述总剂量为约0.2-0.3mg/kg。19.权利要求17或18的试剂盒，其中所述总剂量为约0.25mg/kg。20.权利要求17-19中任一项的试剂盒，其中所述总剂量以初始推注继以输注来给予。21.权利要求17-20中任一项的试剂盒，其中所述初始剂量为约0.08-0.12mg/kg。22.权利要求17-21中任一项的试剂盒，其中所述总剂量为约0.25mg/kg，如下给予约0.1mg/kg的初始推注，继以约60分钟里约0.15mg/kg的输注。23.权利要求17-19中任一项的试剂盒，其中所述总剂量以推注给予。24.权利要求17-23中任一项的试剂盒，进一步包括装有第二药物的容器，其中所述说明包括联合替奈普酶使用第二药物来治疗人类中缺血性中风的说明，其通过给人类施用有效量的第二药物来实现。25.权利要求24的试剂盒，其中所述第二药物是神经保护剂、溶栓剂、糖蛋白libIIIa拮抗剂、或抗CD18抗体。全文摘要一种用于治疗人类中急性缺血性中风的方法，包括以约0.05-0.5mg/kg的总剂量给人类施用替奈普酶，所述总剂量如下给予(a)约0.015-0.15mg/kg的初始推注剂量，继以约50-90分钟的时间段里量等于所述总剂量减去所述初始剂量的输注；或者(b)推注。还描述了用于实施该方法的试剂盒。文档编号A61K38/16GK101505785SQ200780031811公开日2009年8月12日申请日期2007年8月1日优先权日2006年8月29日发明者彼得·库布勒申请人:健泰科生物技术公司