抱茎苦荬菜黄酮提取物及制备方法和应用的制作方法

专利名称：：抱茎苦荬菜黄酮提取物及制备方法和应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及抱茎苦荬菜中木犀草素-7-0-!3-D吡喃葡萄糖醛酸苷新的制备方法及其应用，公开了木犀草素-7-O-P-D吡喃葡萄糖醛酸苷含量25%—99.5%的抱茎苦荬菜提取物的制备方法，公开了木犀草素-7-O-p-D吡喃葡萄糖醛酸苷对照品新的制备方法及其在抱茎苦荬菜及含有其提取物的药物制剂中质量控制中的应用，还公开了该提取物在制备治疗冠心病、脑梗塞和骨折药物中的应用。
背景技术：
：抱茎苦荬菜为菊科植物苦荬菜属抱茎苦荬菜的二年生花期干燥全草，又名苦碟子。味苦、辛、性寒。功能止痛消肿、清热解毒，主治头痛、牙痛、胃痛、手术后疼痛，跌打伤痛、阑尾炎、肺脓肿、咽喉疼痛、痈肿疮疗等。对苦碟子药材的研究近几年有了很大的发展，据文献报道抱茎苦荬菜含有黄酮、腺苷、内酯等化学成分。药理研究表明黄酮类成分是其中的主要活性成分类别之一，化学研究表明抱茎苦荬菜黄酮类成分以木犀草素一7-0-p-D—葡萄糖醛酸苷、木犀草素7-0-(3-D葡萄糖苷、齐菜素7-0-卩-D葡萄糖醛酸苷、芹菜素7-0-p-D葡萄糖苷以及其它数种黄酮类成分含量较高。不同的提取方法得到的提取物由于包含不同的黄酮类化合物、不同的含量，其药理、药性存在很大差异。因此在保证药效的前提下，尽可能提高提取物—黄酮的纯度和明确提取物中主要黄酮类成分是技术难点。目前研究苦碟子有效成分的提取方法可归纳为以下几种1、先用水或醇提取，将回收溶剂后的提取物混悬于水中，分别用氯仿、醋酸乙酯、正丁醇提取，划分成几个提取部分。再用硅胶柱或高效液相半制备柱层析、分离成单组分物质。上述方法是试验室研究单一黄酮成分的常用分析方法，不适合医药工业化生产抱茎苦荬菜黄酮提取物。2、申请号200510082836.1的发明专利"木犀草素-7-0-P-D吡喃葡萄糖醛酸苷及其提取方法和用途"，公开了从抱茎苦荬菜药材中提取分离木犀草素-7-0-P-D吡喃葡萄糖醛酸苷的一种方法，先后采用钙-硫法得到粗黄酮提取物，再经过硅胶柱层析法和HPLC分离制备，得黄色无定型粉末。该制备方法仅仅适合实验室分析型工艺，获得的产品数量为毫微克级，且操作复杂，产品收率低，成本大，不适合工业化生产。除此之外，木犀草素-7-0-卩-D吡喃葡萄糖醛酸苷不属于新化合物，在2001年6月，沈阳药科大学博士论文《抱茎苦荬菜的化学成分和生物活性研究》报道了该化合物的提取分离和结构测定，且明确指出YoungHS等在1992年之前就从抱茎苦荬菜中分离和测定了木犀草素-7-0-P-D吡喃葡萄糖醛酸苷，属于已知化合物。同时，该专利公开了木犀草素-7-0-P-D吡喃葡萄糖醛酸苷的液相测定条件，存在以下不足用水制备对照品溶液，溶解度低，溶解缓慢，且易染菌和变质；流动相采用乙腈，成本高，毒性大；对柱温的要求高，需要4(TC,不利于常规液相仪操作。3、申请号200610072744.X的发明专利申请"苦碟子黄酮及其制备方法和含它的冻干粉针与质量控制方法"。公开了苦碟子提取物的制备方法，采用反复醇液调酸调碱处理法，由于黄酮类化合物在碱性溶液中不稳定，易发生氧化和开环反应，且苦碟子中的大量弱酸性黄酮类化合物在酸性溶液中不易析出，致使收率低，大量活性成分流失。同时，该专利虽然提供了提取物木犀草素7-0-卩-D—葡萄糖醛酸苷含量仅为8%左右，这一含量既未达到静脉注射用二类原料药的标准，即80%以上，也未达到口服用二类原料药的标准，即50%以上。4、申请号200410078168.0的发明专利"一种含有抱茎苦荬菜提取物的制剂及其制备方法"，公开了一种含黄酮成分不少于80,其中黄酮木犀草素7—0—葡萄糖醛酸不少于24，腺苷不少于O.18的抱茎苦荬菜提取物及制剂，采用的是提取液加絮凝剂或直接进行柱层析，一方面絮凝工艺操作复杂，产品收率低，且易带入非药物性杂质，另一方面，简单的水或醇处理的提取液进行柱层析，杂质含量多，影响分离效果，致使生产负荷大，而且成品含量低。本发明的抱茎苦荬菜提取物具有区别于上述专利涉及到提取物或制剂的显著特点是，指标性和活性成分木犀草素-7-0-卩-D吡喃葡萄糖醛酸苷含量高达25%一99.5%，制备方法采用了稀醇提取法，膜组件超滤法，pH梯度提取法、高温除杂质法、酸醇结晶法和低温冷藏重结晶法，从而得到本专利申请的抱茎苦荬菜提取物，制备工艺适合药品工业化生产所需条件。且该提取物有效剂量小，药理活性强，毒性小，经药理实验证明具有很强的治疗冠心病，心绞痛、脑梗塞和骨折疾病的作用，可制成各种固体和液体药物制剂。
发明内容本发明是为避免上述现有技术所存在的问题，提供一种高含量、高活性、低毒性和能够工业化批量生产的含有木犀草素一7-0-卩-D吡喃葡萄糖醛酸苷含量25%_99.5%的抱茎苦荬菜黄酮提取物，药理和化学研究表明该提取物活性成分明确，质量可控。本发明另一目的是提供该抱茎苦荬菜黄酮提取物及可用作标准品的木犀草素一7-0-(3-D葡萄糖醛酸苷的新制备方法。本发明又一目的在于提供所述提取物木犀草素-7-0-P-D葡萄糖醛酸苷的药物制剂。本发明目的还在于提供该抱茎苦荬菜上述提取物在治疗冠心病、心绞痛、脑梗塞和骨折疾病的应用。本发明目的是通过如下技术方案实现的一、提取工艺本发明目的所述含有木犀草素-7-O-p-D吡喃葡萄糖醛酸苷的抱茎苦荬菜提取物的制备方法，包括下述工艺步骤1、稀醇提取将抱茎苦荬菜药材，切段，用0-30%乙醇溶液加热提取2—3次，每次1一3小时，过滤，滤液浓縮至药材重量的0.5—2.0倍的浓縮液A。该提取工艺，釆用稀醇提取，有效地促进了药材中黄酮类化合物的溶出。2、醇沉淀将提取液，澄清板过滤，滤液加入乙醇，使含醇量70%—80%，静置过夜，过滤，减压浓縮，得浓縮液B。3、高温和冷藏处理将浓縮液B加水稀释至比重L10—1.30(25"C测)，过滤，滤液于0-C—l(TC放置48小时以上，过滤，滤液于灭菌柜中121。C加热0.5一1.5小时，室温下澄清板过滤，得滤液C。高温和冷藏处理后，冷藏除去了大量黑色粘稠状物质；高温加热，使得溶液中胶体类物质聚集和沉淀，产生大量淤泥状灰色沉淀，经TCL和HPLC检测，产生的沉淀不含有黄酮类化合物。4、超滤取滤液C，先后经过0.1p，6—8万和l.O万分子量的超滤膜组件进行超滤，将终级滤液减压浓縮，得到浓縮液D。该操作过程，进一步纯化了取滤液C，除去的棕黑色的大分子物质占溶液C固体物质的10%—40%，其中用盐酸一镁粉反应、TCL和HPLC方法，未检测到黄酮类化合物，且终级滤液颜色为浅黄色。5、大孔树脂除去游离的糖类和酚酸类化合物浓縮液D通过按常规方法处理过的大孔树脂柱，先用5%—10%乙醇洗脱2-10个柱体积，再用50%—70%乙醇洗脱1一10个柱体积，收集洗脱液，减压浓縮，得抱茎苦荬菜浓縮液E(l);或减压(或冷冻)干燥，得到含木犀草素-7-O-P-D吡喃葡萄糖醛酸苷含量为25.0%一80.0X的抱茎苦荬菜提取物E(2)。该分离过程，水洗脱除去溶液中游离的小分子糖类和酚酸类化合物，FeCl3试液和糖的理化显色反应阳性。6、根据抱茎苦荬菜中木犀草素-7-0-P-D吡喃葡萄糖醛酸苷的理化性质，主要采用以下操作方法中的一种或几种联用完成进一步纯化的(l)取抱茎苦荬菜浓縮液E(l)，反复经聚酰胺柱层析，先后用水和碱性乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，滤过，冷藏，过滤，沉淀再经30~70°/0浓度的乙醇、丙酮、甲醇或混合溶剂重结晶，得到浅黄色结晶性木犀草素-7-0-卩-D吡喃葡萄糖醛酸苷单体化合物，纯度98%以上。(2)取抱茎苦荬菜浓縮液E(1)或提取物E(2)，加Na2C03(或NaHC03)溶液调pH值至6.0—8.0，过滤，滤液用乙酸乙酯或正丁醇萃取2—5次，水层用盐酸溶液调pH值至1.0—5.0，用正丁醇萃取2-8次，合并正丁醇提取液，减压浓縮至干，再选用水或浓度为30—70°/。的乙醇、甲醇、丙酮或乙酸乙酯加热溶解，过滤，冷藏，待结晶完全后，过滤。重结晶2—5次，减压干燥，获得含木犀草素-7-O-P-D吡喃葡萄糖醛酸苷含量为80%—98.5%的抱茎苦荬菜提取物。(3)取抱茎苦荬菜提取物E(2)，加30%—80%乙醇提取，提取液减压浓縮，浓縮液于0'C—1(TC放置，待结晶析出彻底后，分离出结晶物，再选用浓度为30_70%的乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、盐酸、醋酸、硫酸和甲酸中至少一种加热溶解，冷藏，析晶，过滤，重复2-3次，获得含木犀草素-7-0-(3-D吡喃葡萄糖醛酸苷含量为80%_98.5%的抱茎苦荬菜提取物。(4)取抱茎苦荬菜浓縮液E(1)或提取物E(2)，加乙醇溶液使乙醇含量40%一80%，超声或加热使溶解，过滤，用盐酸、硫酸、甲酸、醋酸或磷酸溶液调节pH值1.0—5.0，冷藏、待结晶析出完全，过滤，沉淀用酸水和酸性醇洗涤1一3次，再用水或30—90%的乙醇洗涤至洗液近中性。用含乙醇溶液重结晶l一3次，得到含木犀草素-7-O-p-D吡喃葡萄糖醛酸苷含量为80%—98.5%的抱茎苦荬菜提取物。综上所述，我们采用了先进的，高效的，且能够工业化生产的制备工艺，使得本抱茎苦荬菜提取物活性成分明显提高，木犀草素-7-O-p-D吡喃葡萄糖醛酸苷含量为25.0%—98.5%，优于以前制备方法。二、化合物抱茎苦荬菜中木犀草素-7-O-P-D吡喃葡萄糖醛酸苷的结构测定及在抱茎苦荬菜提取物，含有抱茎苦荬菜提取物的药物制剂中质量控制中的应用。1、结构确证HPLC归一化法，含量在98.0%以上的单一化合物，浅黄色针片状结晶，Mg-HCl反应阳性，Molish反应阳性。酸水解TLC检出葡萄糖醛酸。UV图谱(图1):348.5、255.0、203.0。IR谱(图3):3600—3000(-OH和Ar-H特征吸收峰)，1740(-COOH)，1650(黄酮羰基吸收峰)，指纹区与木犀草素IR的类似。iH-NMR谱(图4):S13.0(1H，s)示醛酸苷的-COOH活泼氢，黄酮母核较低场的系统中的3个质子57.45(1H，dd)，S7.42(1H，d,)和56.88(1H，d，J=8.1)分别为B环的6'，2'和5'氢信号，较高场的两个质子56.81(1H，brs)和56.80(1H,brs)分别为A环的6，8位质子;S6.75(1H,s)为3位氢，55.26(1H，d，J=6.0)端基氢信号。在"C-NMR谱(图5)中，与木犀草素碳谱数据比较，确定母核为木犀草素，而苷元的C-7位向高场位移1.1,而C-6,C-8和C-10分别向高场位移0.5，0.7和1.7，从而说明葡萄糖醛酸连接在C-7位上。糖部分的6个与文献中甲基吡喃葡萄糖醛酸苷的化学位移基本一致，故鉴定化合物为木犀草素-7-O-P-D吡喃葡萄糖醛酸苷。2、木犀草素-7-O-p-D吡喃葡萄糖醛酸苷可作为控制含有抱茎苦荬菜及提取物的药品的质量标准含测指标为HPLC法，经过绘制浓度和峰面积标准曲线、加样回收、稳定性和精密度等实验，确定液相测定方法如下所示对照品溶液的制备精密称取对照品木犀草素-7-0-(3-D吡喃葡萄糖醛酸苷适量，加甲醇或乙醇溶液溶解制成每lml含0.3mg的溶液，即得，必要时超声l一2分钟。供试品溶液的制备取样品，用甲醇或乙醇提取或溶解，定容，即得供试品溶液。色谱条件用十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂；甲醇一0.2%磷酸溶液(45:55)为流动相；检测波长为348nm;流速1.0ml/min;柱温3(TC。测定法分别精密吸取对照品溶液2—10nl，供试品溶液2—10pl，分别注入液相色谱仪，测定，即得三、制剂学研究本抱茎苦荬菜提取物，木犀草素-7-0-卩-D吡喃葡萄糖醛酸苷含量为25.0%一98.5%，根据剂型和给药途径的不同，选择不同含量级别的抱茎苦荬菜提取物，加入相应药用辅料后可制成液体制剂或固体制剂，包括滴丸、片剂、胶囊剂、软胶囊、口服液、颗粒剂、粉针剂、注射液、输液及缓控释片剂、胶囊和颗粒。四、药理实验1、发明药物和异丙肾上腺素并用对小鼠减压缺氧保护作用的影响本实验以发明药物和异丙肾上腺素并用加重心脏负荷，增加心肌缺氧的比重，来观察药物对小鼠减压缺氧的保护作用。实验证明，在减压缺氧造成小鼠脑心缺氧综合证的情况下，用异丙肾上腺素来加重心脏的负荷，同样看到发明药物对小鼠缺氧具有保护作用。结果见表l。表1发明药物和异丙肾上腺素并用对小鼠减压缺氧保护的影响<table>complextableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>如表4所示，模型组大鼠MCA阻断6，24h后，可出现一定的神经症状，而发明药物4.0，2.0，1.0mg/kg却能显著改善这些异常的症状，降低评分，并呈一定的量效关系。表4发明药物对脑缺血损伤的保护作用<table>complextableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表5为图1所示样品紫外扫描图峰值参数<table>complextableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表6为图2所示样品液相色谱参数<table>complextableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>5、发明药物对家兔骨折愈合的影响研究资料表明，从X线片所见骨痂数量看，给药组第2W骨折端有少量连续性骨痂；第3W骨折端有桥样骨痂出现，骨折线近模糊；第4W骨折端新生骨痂变坚实，改建塑形，骨折线变模糊。骨性愈合时间，发明药物高、中剂量组较空白对照组提前8士ld;抗折强度，第2、4W发明药物高、中剂量组比空白对照组增加10.5士10/k，有显著统计学差异(PO.Ol)，以发明药物高、中剂量组为优。组织学观察，高、中剂量组成骨细胞明显增殖，出现大量成骨细胞聚集的时间，较空白对照组提前2w。综上所述，该发明药物具有对小鼠减压缺氧保护作用明显，对大鼠实验性血栓形成抑制作用显著，对大鼠血小板聚集抑制作用显著，对大鼠脑梗塞损伤的保护作用显著，对家兔骨折有明显的促进新生骨的再生而加速骨折愈合作用。本发明药物除对缺血性脑损伤有保护作用外，对动物实验性心肌缺血具有明显的保护作用，具有縮小心肌梗死范围和减轻病变程度的作用。实验还证实该药对骨折局部的微循环有明显的改善作用，局部血流量的大量增加可使骨痴生成所需的各种营养成分得到充分供应，有利于消肿止痛、促进骨痴生长和骨折愈合，且止痛作用优于对照组，因此该发明药物在治疗冠心病，心绞痛和骨折等疾病意义重大。图l为样品紫外扫描图。图2为木犀草素-7-0-p-D吡喃葡萄糖醛酸苷高效液相色谱图。图3为样品红外扫描图。图4为样品NMR-H图谱。图5为样品NMR-C。图谱。具体实施例方式下面通过实施例对菊科植物抱茎苦荬菜黄酮提取物提取方法及其制剂的制备方法作进一步详述。实施例1:取抱茎苦荬菜药材300kg，切段，用30%乙醇加热提取2次，每次2.0小时，过滤，滤液浓縮至药材重量的1.0倍的浓縮液，澄清板过滤，滤液加入乙醇，使含醇量75%，静置过夜，过滤，减压浓縮，浓縮液加水稀释至比重1.10—1.20(25°(3测)，过滤，滤液于2-3'C放置48小时，过滤，滤液于灭菌柜中121'C加热45min，室温下澄清板过滤，滤液先后经过0.1p，6—8万和1.0万分子量的超滤膜组件进行超滤，将终级滤液减压浓縮，浓缩液通过按常规方法处理过的大孔树脂柱，先用10.0%乙醇洗脱5个柱体积，再用70%乙醇洗脱4-6个柱体积，收集洗脱液，减压浓縮，得抱茎苦荬菜浓縮液，浓縮液反复经聚酰胺柱层析，先后用水和浓度为30—70%的碱性乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，滤过，冷藏，过滤，沉淀再经浓度为30—70%的乙醇、丙酮、甲醇或混合溶剂重结晶，减压干燥(6(TC以下)，得到浅黄色结晶性木犀草素-7-0-P-D吡喃葡萄糖醛酸苷单体化合物1160g，收率0.38%，HPLC测定含木犀草素-7-0-卩-D吡喃葡萄糖醛酸苷98.2%。实施例2:取抱茎苦荬菜药材300kg，切段，用水加热提取2次，每次2.0小时，过滤，滤液浓縮至药材重量的l.O倍的浓缩液，澄清板过滤，滤液加入乙醇，使含醇量75%，静置过夜，过滤，减压浓縮，浓縮液加水稀释至比重1.10—1.20(25'C测)，过滤，滤液于2-3。C放置48小时，过滤，滤液于灭菌柜中12rC加热45min，室温下澄清板过滤，滤液先后经过O.lp，6—8万和1.0万分子量的超滤膜组件进行超滤，将终级滤液减压浓縮，浓縮液通过按常规方法处理过的大孔树脂柱，先用10.0%乙醇洗脱5个柱体积，再用70%乙醇洗脱4-6个柱体积，收集洗脱液，减压浓縮，浓縮液加乙醇溶液使乙醇含量50%，超声或加热使溶解，过滤，用盐酸溶液调节pH值1.0—5.0，冷藏，待结晶析出完全，过滤，沉淀用30—70%的盐酸水和酸性醇洗涤2次，再用水或乙醇洗涤至洗液近中性。用含乙醇溶液重结晶2次，得到含木犀草素-7-O-P-D吡喃葡萄糖醛酸苷含量为80.5%的黄色抱茎苦荬菜提取物1625g，收率0.54%。实施例3:抱茎苦荬菜提取物片抱茎苦荬菜黄酮提取物30-100g糊精90g微品纤维素105g低取代羟丙甲纤维素I5g70%的乙醇溶液15ml硬脂酸镁lg制备过程抱茎苦荬菜黄酮提取物30—100g、糊精卯g、硬脂酸镁lg、低取代羟丙甲纤维素15g分别粉碎过80目筛将苦碟子黄酮提取物30—100g与糊精100g、低取代羟丙甲纤维素10g及70%的乙醇溶液15ml混合研磨，使均匀，制软材；再用20目筛制颗粒，干燥，整粒后加入5g低取代羟丙甲纤维素，混匀，再加入硬脂酸镁lg混匀，压1000片；检验合格后包装。实施例4:抱茎苦荬菜提取物滴丸抱茎苦荬菜黄酮提取物20-50gPEG400015gPEG600022g制备过程将15g聚乙二醇4000、22g聚乙二醇6000加热，再将熔融抱茎苦荬菜黄酮提取物20—50g加入其中，充分搅拌，使药物充分分散于基质中将上述药液转移至滴丸机上，70。C8(TC密闭保温1020分钟，用无水甲基硅油作冷却剂，10'C2(TC梯度冷却，用3060滴/分速度进行滴制，即得成型丸粒，再收集滴丸，用无水石油醚洗涤，即得成型九粒。再收集滴丸，用无水石油醚洗涤2次，晾干，包装即可。实施例5:抱茎苦荬菜提取物输液以制备含量为0.5(mg/ml)的抱茎苦荬菜黄酮输液制剂250ml瓶为例。将抱茎苦荬菜黄酮提取物加入到1000ml新鲜注射用水加热溶解后，加入5克外用活性炭，加热煮沸20分钟后过滤，滤液冷却至40'C以下，用新鲜注射用水稀释至5000ml，再用lmol/L的碳酸氢钠调PH为7.O左右，加入45克药用氯化钠及6g药用亚硫酸氢钠搅拌溶解，使之成为IL溶液中含O.4克苦碟子黄酮。测pH，含量合格后，无菌罐装到250ml输液瓶中，于115'C下热压灭菌30分钟，即得每瓶250ml溶液含0.125g抱茎苦荬菜提取物输液。实施例6:抱茎苦荬菜黄酮冻干粉针抱茎苦荬菜黄酮提取物干粉10—50g吐温80120g针用活性炭4g甘露醇400g泊络沙姆8g制备过程称取抱茎苦荬菜黄酮提取物干粉10—15g、吐温80120g、泊络沙姆8g将其熔融放入研钵中研磨使其充分分散，加入二氧化碳饱和过的新鲜注射用水到3500ml，加入甘露醇400g，在水浴(50—70'C)加入针用活性炭4g，边加入边搅拌，煮沸5—10分钟后，冷却至4(TC用垂熔滤器滤过。用新鲜注射用水稀释至4000ml，测PH和含量合格后，过0.45pm膜，再过0.22pm膜，灌装1000个西林瓶中，预冻，冷冻即得每瓶含10—50mg/瓶苦荬菜黄酮提取物冻干粉。实施例7:抱茎苦荬菜提取物注射液抱茎苦荬菜提取物2-5g碳酸氢钠12g焦亚硫酸钠2g注射用水1000ml制备过程取注射用水1000ml，煮沸，冷却至室温，备用。按处方取配置量20%的注射用水，加入抱茎苦荬菜提取物使溶解，分次缓慢加入碳酸氢钠并不断搅拌，待液面无气泡产生时，加入焦亚硫酸钠溶解，加剩余的注射用水至全量。用PH酸度计测定药液PH值应为5.5-8.0。若不在此范围内，可用硫酸氢钠调节。药液用3号垂熔玻璃滤斗滤过至澄明，灌封500支安瓶，100°C，30分钟灭菌，即得，每毫升含2-5mg/ml。实施例8:抱茎苦荬菜黄酮提取物胶囊剂抱茎苦荬菜提取物5—30g淀粉125g70%乙醇适量制备过程将淀粉、抱茎苦荬菜黄酮提取物混匀，过80目筛，加入适量的70%乙醇，制软材，再用20目筛制颗粒，干燥，整粒，装胶囊，共制成1000粒，每粒含抱茎苦荬菜黄酮提取物5-30mg即可。权利要求1、一种主要含有抱茎苦荬菜黄酮提取物，其特征是所述提取物木犀草素-7-O-β-D吡喃葡萄糖醛酸苷，含量为25.0％-99.5％。2、根据权利要求1所述抱茎苦荬菜黄酮提取物的制备方法，其特征在于继续纯化得到一单体化合物，经HPLC面积归一化法测定其纯度可达到98.0%以上，可作为含有抱茎苦荬菜及提取物的药品的质量标准检测项目。3、根据权利要求1所述含有木犀草素-7-0-卩-D吡喃葡萄糖醛酸苷的抱茎苦荬菜提取物的制备方法，其特征是按如下步骤操作-1)、提取将抱茎苦荬菜药材，切段，用0-30%乙醇溶液加热提取2—3次，每次1一3小时，过滤，滤液浓縮至药材重量的0.5—2.0倍的浓縮液A;2)、醇沉淀取浓縮液A,澄清板过滤，滤液加入乙醇，使含醇量50%—80%，静置过夜，过滤，减压浓縮，得浓縮液B;3)、冷藏和高温处理将浓縮液B加水稀释，过滤，滤液于0'C—10'C放置48小时以上，过滤，滤液于灭菌柜中121'C加热0.5—1.5小时，室温下澄清板过滤，得滤液C;4)、超滤取滤液C，先后经过0.1pm，6—8万和l.O万分子量的超滤膜组件进行超滤，将终级滤液减压浓縮，得到浓縮液D;5)、大孔树脂分离浓縮液D通过按常规方法处理过的大孔树脂柱，先用5%—10%乙醇洗脱2-10个柱体积，再用50%—70%乙醇洗脱I一IO个柱体积，收集洗脱液，减压浓缩，得抱茎苦荬菜浓縮液E(l);或减压(或冷冻)干燥，得到含木犀草素-7-0-!3-D吡喃葡萄糖醛酸苷含量为25%—80.0%的抱茎苦荬菜提取物E(2)。4、根据权利要求2所述的提取苦荬菜黄酮提取物的制备方法，其特征在于进一步分离纯化，主要采用以下操作方法中的一种或几种联用完成的1)取抱茎苦荬菜浓縮液E(l)，反复经聚酰胺柱层析，先后用水和20%-70%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，滤过，0-5。C放置24小时以上，过滤，沉淀再经乙醇或甲醇重结晶，得到浅黄色结晶性木犀草素-7-0-(3-D吡喃葡萄糖醛酸苷单体化合物，纯度98%以上；2)取抱茎苦荬菜浓縮液E(l)，用Na2C03、或NaHCCb调成弱碱性pH值7.0—9.0，过滤，滤液用正丁醇萃取2—5次，正丁醇萃取液弃去；萃取后碱液用盐酸调pH值至1.0—5.0，用正丁醇萃取2-8次，合并正丁醇提取液，减压浓縮至干，再选用0-60%乙醇溶液加热溶解，过滤，0-5℃冷藏，待结晶完全后，过滤，减压干燥，获得含木犀草素-7-0-β-D吡喃葡萄糖醛酸苷含量为80%—98.5%的抱茎苦荬菜提取物；3)取抱茎苦荬菜提取物E(2)，加30%—80%乙醇提取，提取液减压浓縮，浓缩液于0℃—10℃放置，待结晶析出彻底后，分离出结晶物，再选用水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、盐酸、醋酸和甲酸中的一种或数种加热溶解，0-5℃冷藏，析晶，过滤，获得含木犀草素-7-0-β-D吡喃葡萄糖醛酸苷含量为80%—98.5%的抱茎苦荬菜提取物；4)取抱茎苦荬菜浓縮液E(l)或提取物E(2)，加乙醇溶液使乙醇含量40%—80%，超声或加热使溶解，过滤，用酸(可选用盐酸，硫酸，甲酸，醋酸，磷酸)溶液调节pH值1.0—5.0，冷藏、待结晶析出完全，过滤，沉淀用酸水和酸性醇洗涤l-3次，再用水或醇洗涤至洗液近中性；用乙醇或甲醇重结晶l次，得到含木犀草素-7-O-β-D吡喃葡萄糖醛酸苷含量为80%—98.5%的抱茎苦荬菜提取物。5、根据权利要求1所述的一种含有抱茎苦荬菜黄酮提取物，其特征在于能作为控制含有抱茎苦荬菜提取物及提取物制备的药品的质量标准含测指标为高效液相色谱法；对照品溶液的制备精密称取对照品木犀草素-7-O-β-D吡喃葡萄糖醛酸苷适量，加甲醇或乙醇溶解制成每lml含0.3mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取样品，用甲醇或乙醇提取或溶解，定容，即得供试品溶液；色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；45:55配制的甲醇一0.2%磷酸溶液为流动相；检测波长为348nm;流速1.0ml/min;柱温30℃;测定法分别精密吸取对照品溶液2—10μl，供试品溶液2—10μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得。6、根据权利要求1或3或4所述抱茎苦荬菜提取物，加入相应药用辅料后可制成苦碟子滴丸、片剂、胶囊剂、软胶囊、颗粒剂、粉针剂、注射剂、输液及缓控释固体制剂。7、根据权利要求1所述一种抱茎苦荬菜黄酮提取物，其特征在于药物制剂主要用于冠心病、脑梗塞和骨折的治疗。全文摘要抱茎苦荬菜黄酮提取物及制备方法和应用，其特点是公开了木犀草素-7-O-β-D吡喃葡萄糖醛酸苷含量25％-99.5％的抱茎苦荬菜黄酮提取物的新的制备方法，公开了木犀草素-7-O-β-D吡喃葡萄糖醛酸苷对照品新的制备方法及其在抱茎苦荬菜及含有其提取物的药物制剂中质量控制中的应用，还公开了该提取物在制备治疗冠心病、脑脑梗塞和骨折药物中的应用。文档编号A61P19/00GK101343299SQ20081001264公开日2009年1月14日申请日期2008年8月6日优先权日2008年8月6日发明者吕志会,李志强,王学东,王淞林,马占芝申请人:沈阳双鼎制药有限公司