山茶种子中的三萜皂苷及其制备方法和医药用途的制作方法

专利名称：：山茶种子中的三萜皂苷及其制备方法和医药用途的制作方法
技术领域：
：本发明属于医药
技术领域：
，涉及山茶种子中的三萜皂苷及其制备方法和医药用途。
背景技术：
：山茶Camelliasinensis是山茶科山茶属植物，在我国大面积栽培，是一种优良的经济作物。其嫩芽一一茶叶的化学成分和生物活性有系统的研究报道。据已有的研究资料表明茶的化学成分有600种之多，其中的有机化合物达500种以上。它们合成和转化的生化反应途径有着互相联系、互相制约的关系。其生物活性涉及抗炎、抗过敏、抗氧化、清除自由基、降血糖、降血脂、胃肠促进、保肝、癌前损伤预防等多方面活性。近年来，随着茶园种植业采取无性扦插繁殖，大量的山茶种子作为副产物亟待进一步合理开发利用。《本草纲目》记载茶籽苦寒，有毒，治喘急痰嗽，去痰垢。在我们的前期研究中发现，茶种子中含有大量的皂苷类成分。茶种总皂苷是一种优良的表面活性剂，是新型化妆品和洗涤剂的原料。医疗方面有较好的保护胃粘膜、降血糖、降血脂、抗肿瘤、抗真菌、抗炎、抗过敏和抗血管扩张作用。山茶种子总皂苷的提取及利用其有效成分生产加工成制剂未有报道。
发明内容本发明的目的在于提供如通式(1)所示的山茶种子中的三萜皂苷类成分、及其制备方法和医药用途。本发明提供了山茶种子中的三萜皂苷，其为如下通式(1)中所表示的齐墩果垸衍生物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>通式(1)中，Rl为氢或羟基或酰氧基；R2为氢或酰氧基(酰基种类包括乙酰基、当归酰基、惕铬酰基、肉桂酰基)；R3为氢或酰氧基(酰基种类包括乙酰基、当归酰基、惕铬酰基、肉桂酰基)；R4为氢或酰氧基(酰基种类包括乙酰基、当归酰基、惕铬酰基、肉桂酰基)；R5为甲基或羟甲基或醛基或羧基或羧基甲酯；R6为氢或糖基(包括葡萄糖醛酸基、阿拉伯糖基、半乳糖基、葡萄糖基、木糖基及由它们组成的寡糖链)。其中新化合物是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>本发明还提供了山茶种子中三萜皂苷的制备方法，其制备方法如下(1)取干燥山茶种子搾油后所得茶子饼，加入提取溶剂浸泡，药材与提取溶剂的比例为l:5至1:12，于50~IO(TC条件下加热0.5~3小时，提取14次，合并各次提取液浓缩至药材量的2~10倍体积；(2)提取液经大孔树脂(HPD1QG或D1G1或AB-8等通用树脂)吸附，用03(W的稀醇洗去杂质，再用40%~100%醇液洗脱得山茶种子粗总皂苷(含量50%~70%);(3)所得山茶种子粗总皂苷加少量水溶解，经开口ODS柱色谱，用0~30財希醇洗去茶黄酮杂质，再用40%~90%醇液洗脱得山茶种子总皂苷(含量70%~95%);(4)所得山茶种子总皂苷经HPLC进一步分离纯化反相键合硅胶为固定相((:-18，C-30,C-8等)，以甲醇-水(含0.05%冰醋酸)体积比30~80%或乙腈-水(含0.05冰醋酸)体积比20%~70%或甲醇-乙腈-水(含0.05%冰醋酸)体积比2:50:48~16:20:64为流动相，示差或紫外(190~220nm)检测器检测，得到通式(1)中所示各种类型三萜皂苷类成分。本发明提供的山茶种子中三萜皂苷的制备方法，所述步骤(l)中的提取溶剂为水、甲醇、乙醇等，甲醇或乙醇的浓度为5%~95%;提取方法为煎煮法或加热回流提取法。本发明提供的山茶种子中三萜皂苷的制备方法，所述步骤(3)中醇液为不同浓度的甲醇或乙醇。本发明提供了山茶种子中三萜皂苷的医疗用途,如通式(1)中所示的山茶种子中的三萜皂苷类化合物具有胃粘膜保护、抗肿瘤、降血糖、降血脂等作用；可用于制备保护胃粘膜、抗肿瘤、降血糖、降血脂的药物或保健食品。本发明的优点如下(1)本发明的制备方法所得山茶种子总皂苷收率高、纯度高；(2)如上所示的32个化合物均为新化合物，是山茶种子的特有成分，可作为质量控制的指标；(3)本发明所得单体茶皂苷收率高、纯度高，结构明确，可进行目标性结构修饰，以进一步开发利用；(4)本发明所用原料为山茶种子搾油后的茶子饼，为工业废料，成本低、易得、有利于环保；(5)制备方法简便、易行，污染少，适宜于工业生产；(6)山茶种子总皂苷和单体茶皂苷生物活性多样、效果显著。图1为茶皂苷T1的^NMR图谱。图2为i皂苷Tl的^CNMR的图谱。图3为^皂眷T10的iHNMR图谱。图4为i皂苷T10的"CNMR的图谱。图5为桌皂苷T12的iHNMR的图谱。图6为^皂苷T12的"CNMR的图谱。图7为^皂吾T20的'HNMR的图谱。图8为茶皂苷T20的"CNMR的图谱。图9为恭皂苷T33的lHNMk的图谱。图10为茶皂苷T33的"CNMR的图谱。图11为泰皂苷T34的1HNMR的图谱。图12if茶皂吾T34的"CNMR的图谱。图1.3为籴皂苷T36的1HNMR的图谱。图14为套皂畚T36的。CNMR的图谱。具体实施例方式以下实施例对本发明作进一步详细的描述，本发明不受此限制。实施例1山茶总皂苷的制备取干燥山茶种子榨油后所得茶子饼10kg,去除杂质、灰尘。在中药提取罐中加入药材和IO倍量的水，加热至8(TC,提取两次，每次2小时，合并各次提取液浓缩至药材量的4倍体积。提取液经大孔树脂吸附，用20%乙醇洗去杂质，再用9(W乙醇洗脱得山茶种子粗总皂苷680克(含量60%)。所得山茶种子粗总皂苷力口5倍量水溶解，经开口ODS柱色谱(样品量填料l:10),用20%乙醇洗去茶黄酮杂质，再用85%乙醇洗脱得山茶种子总阜苦380克(含量85%)所得山茶种子总皂i经反相HPLC(岛津L6A)进一步分离纯化以ODS和C-30键合硅胶为固定相，分别以甲醇-水(含O.05%冰醋酸)体积比70:30为流动相，乙腈-水(含0.05冰醋酸)体积比40:60为流动相，甲醇-乙腈-水、含0.05%冰醋酸)体积比8:32:60为流动相反复分离，示差检测器检测'，得到通式(1)中所示各种类型三萜皂苷类成分。实施冽2山茶总皂苷的制备(1)取干燥山茶种子搾油后所得茶子饼6kg,去除杂质、灰尘。(2)在中药提取罐中加入药材和8倍量的95%乙醇，加热至8(TC,提取两次，每次1.5小时，合并各次提取液浓縮至药材量的2倍体积。(3)提取液经大孔树脂吸附，用30%乙醇洗去杂质，再用90%乙醇洗脱得山茶种子粗总皂苷770克(含量65%)。(4)所得山茶种子粗总皂苷加4倍量水溶解，经开口ODS柱色谱(样品量填枓l:12),用20%乙醇洗去茶黄酮杂质，再用90%乙醇洗脱得山茶种子总皂苷430克(含量87"。(5)所得山茶种子总皂苷经反相HPLC(岛津L6A)进一步分离纯化以ODS和C-30键合硅胶为固定相，分别以甲醇-水(含0.1%冰醋酸)体积比65:35为流动相，乙腈-水(含O.l冰醋酸)体积比33:67为流动相，甲醇-乙腈-水(含0.05%冰醋酸)体积比4:34:62为流动相反复分离，示差检测器检测，得到通式(1)中所示各种类型三萜皂苷类成分。实施冽3'考察山茶种子总皂苷对S180荷瘤小鼠肿瘤生长的影响实验动物8周龄雄性ICR小鼠，平均体重20克。由浙江大学实验动物中心提供。药物与瘤株山茶种子总皂苷按照权利要求书2中描述的方法制备；环磷酰胺(CTX)，200mg/支，上海华联制药有限公司生产，S180腹水瘤小鼠为浙江大学动物实验中心提供。S180腹水瘤细胞悬液的制备无菌条件下搡作，取接种10d的S180肉瘤腹水型荷瘤小鼠，消毒动物腹部皮肤，用5mL—次性无菌注射器穿入腹腔，吸取肿瘤细胞生长良好的腹水,所抽腹水放入无菌三角烧瓶内，放置于冰盒上。另取少量腹水进行细胞计数用生理盐水稀释IOO倍，取稀释液0.9mL加台盼兰(O.2%台盼兰生理盐水溶液)0.1mL，混匀，用细胞计数法分析肿瘤细胞总数及死细胞数(紫或蓝色，活细胞数应>95%)。腹水用生理盐水稀释，调整瘤细胞浓度为1xi07/mL(整个操作在冰盒上进行，以此来保持肿瘤细胞的活性)。昆明种小鼠移植S180肉瘤模型的建立取体重20g左右的昆明种小鼠，每鼠Q.2mL(肿瘤细胞数约为2x106个)接种于右前肢腋窝皮下，24h后称重，随机分成3组，分组情况为荷瘤对照组，环磷酰胺(CTX)组，山茶种子皂苷组组。计算瘤重及其他相关指标。荷瘤对照组移植肿瘤后，每日灌服O.4mL生理盐水。环磷酰胺(CTX)组每天]次，100mg/kg体重，腹腔注射，连续3d。山茶种子总皂苷剂量组每天按100mg/kg体重灌服1次，连续10d。指标的检测给药10d后停止给药,停药次曰处死小鼠，称取小鼠体重，解剖瘤体，称重。实验结果:见表1表1山茶种子总皂苷对S180荷瘤小鼠肿瘤生长的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>实施(列4釆用MTT法和SRB法，对单体茶皂苷体外抗肿瘤活性进行测试实验方法如下细胞培养取对数生长期的人体肿瘤细胞，以内含10%(v/v)胎牛血清(fetalbovineserum)的RPMI-1640培养液稀释为5x104个/L的细胞悬浮液，接种于96孔板中，100mL/孔，置于37°C、饱和湿度、5%C02培养箱中培养24h。添加试药用少量DMS0溶解样品后，用含10%(v/v)胎牛血清的RPMI-1640培养液稀释为10,20，30,40,50pm/L浓度梯度的样品溶液，将上述含药培养液加入96孔板中，放置于与细胞培养相同条件的培养箱中培养48h。结果测定采用MTT法测定MCF-7和HepG2瘤株实验结果。釆用SRB法测定K562和HL-60瘤株实验结果。实验结果见表2表2单体茶皂苷体外抗肿瘤活性测试结果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>实施例5.考察山茶种总皂苷对糖负荷大鼠血糖的影响实验动物雄性Wistar大鼠，体重130~150g,购自日本KiwaLaboratoryAnimalCo.Ltd.(Wakayama)。动物恒温(23±2°C)饲养，词料购自曰本MF.OrientalYeastCo.Ltd.(Tokyo)。实验前动物禁食2024小时，自由取水。实验方法取130~150g的雄性Wistar大鼠，禁食2024小时后，灌胃给与山茶种总皂苷，0.5小时后，灌胃给蔗糖(1.0g/kg),0.5小时后,眼底取血，离心分离血浆后采用葡萄糖氧化酶法测定血糖水平。实验结果表3中给出了山茶种总皂苷对糖负荷大鼠血糖水平的影响,山茶种总皂苷在100400mg/kg剂量能显著降低糖负荷大鼠血糖水平。表3山茶种总皂苦对糖负荷大鼠血糖的影响^入，剂量血糖水平(mg/dL)实验组--n-(mg/kg,;.0.)0.5hr1.0hr2.0hr4.0hr空白组—978.1±3.3**83.4±3.2**85.3±3.6**81.3±4.6**对照组—9195.6±3.4152.8±5.5128.7±3.6120.0±2.725189.7±1.9149.4±6.5127.4±4.3125.9±2.2山茶种子总皂苷组50186.7±5.1153.3±5.7129.5±2.8125.3±4.0100157.8士4.2"139.7±3.6142.5±3.3137.0±4.3*200了140.5±2.1**129.8士3.4"130.2±2.9131.8±4.6■7126.7±4.7**129.0±5.2**126.1±6.0131.4±6.8Valuesrepresentthemeans士S.E.M.Forstatisticalanalysis:one-wayanalysisofvariancefollowedbyDunnett,stestSignificantlydifferentfromthecontrolgroup,<0.05,<0.01.实施例6考察山茶种总皂苷对油负荷小鼠血浆中甘油三酯水平的影响.实验动物雄性DDY小鼠，体重2530g,购自日本KiwaLaboratoryAnimalCo.Ltd.(Wakayama)。动物恒温(23±2°C)饲养，饲料购自曰iMF.OrientalYeastCo.Ltd.(Tokyo)。实验前动物禁食20~24小时，自由取水。实验方法取2530g的雄性DDY小鼠，禁食2024小时后，灌胃给与山茶种总皂苷，0.5小时后，灌胃给橄榄油(5mL/kg)，2小时后，眼底取血，离心分离血浆后釆用WAKO试剂盒测定血浆中甘油三酯水平。实验结果表4中给出了山茶种总皂苷对油负荷小鼠血浆中甘油三酯水平的影响，山茶种总皂苷在400mg/kg剂量能显著降低油负荷小鼠血浆中甘油三酯水平。表4山茶种总皂苷对;由负荷小鼠血浆中甘油三酯水平的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>Valuerrepresentthemeans土S.E.M.Forstatisticalanalysis:one-wayanalysisofvariancefollowedbyDunnett，stestSignificantlydifferentfromthecontrolgroup,*/<0.05，<0.01.实施例7考察山茶种总皂苷对乙醇诱导的胃粘膜损伤的影响实验动物雄性SD大鼠，体重230250g,购自日本KiwaLaboratoryAnimalCo.Ltd.(Wakay纖)。动物恒温(23±2°C)饲养，饲料购自曰iMF.OrientalYeastCo.Ltd.(Tokyo)。实验前动物禁食24~26小时，自由取水。实验方法取230~250g的雄性SD大鼠，禁食2426小时后，灌胃给与茶种总皂苷(5°/。的阿拉伯胶混悬)，1小时后，灌胃给99.5%的乙醇(1.5mL)致胃粘膜损伤，1小时后，乙醚麻醉处死。取出大鼠胃部，抽出内容物后，注射10mL1.5y。的福尔马林溶液固定胃壁，反复用清水冲洗后展平，计算机扫描计算胃粘膜损伤率。实验结果结果如表5所示，山茶种总皂苷在2.520mg/kg剂量能显著减少乙醉引起的胃粘膜损伤。表5山茶种总皂苷对乙醇诱导的胃粘膜损伤的影响剂量胃粘膜损伤程度<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>Valuesrepresentthemeans±S.E.M.Forstatisticalanalysis:one-wayanalysisofvariancefollowedbyDunnett，stestSignificantlydifferentfromthecontrolgroup,*p<0.05，**p<0.01.实施例8考察山茶种总皂苷对吲哚美辛诱导的胃粘膜损伤的影响实验动物雄性SD大鼠，体重230250g，购自日本KiwaLaboratoryAnimalCo.Ltd.(Wakayama)。动物恒温(23±2°C)饲养，饲料购自曰本MF.OrientalYeastCo.Ltd.(Tokyo)。实验前动物禁食24~26小时，自由取水。实验方法取230250g的雄性SD大鼠，禁食2426小时后，灌胃给与山茶种总皂苷(5%的阿拉伯胶混悬)，1小时后，灌胃给吲哚美辛(20mg/kgP引哚美辛溶于5y。碳酸氢钠溶液，蒸馏水稀释后，加O.2M盐酸中和，1.5ml/rat)致胃粘膜损伤，4小时后，乙醚麻醉处死。取出大鼠胃部，抽出内容物后，注射10mL1.5"/。的福尔马林溶液固定胃壁，反复用清水冲洗后展平，扫描计算胃粘膜损伤率。实验结果实验结果如表6中所示，山茶种总皂苷在50~200mg/kg剂量能显著减少吲哚美辛引起的胃粘膜损伤。表6山茶种总皂苷对吲哚美辛诱导的胃粘膜损伤的影响剂量胃粘膜损伤水平<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>实施洌9考察分离得到的单体茶皂苷对乙醇诱导的胃粘膜损伤的保护作用。实验动物和试验方法同实施例7.实验结果如表7中所示，部分单体茶皂苷在剂量为5mg/kg水平，能显著抑制乙醇诱导的胃粘膜损伤，其效果好于阳性对照药奥美拉唑和曲丙酸酯盐酸盐。表7单体茶皂苷对乙醇诱导的胃粘膜损伤的保护作用<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>茶皂苷l5茶皂苷254華皂苷3茶皂苷4茶皂苷54築皂苷6茶皂苷7華皂苷8茶皂苷9茶皂苷10茶皂苷114茶皂苷12茶皂苷135茶皂苷145茶皂苷155、5对照组—6106奥美拉唑1562066对照组—6756曲丙酸酯盐酸±卜15063006102.4±12.237.073.6±21.5*54.784.8±9.9*47.946.4±16.7**71.436.4±11.8**77.6112.4士21.230.988.8±24.9*45.498.1±18.739.757.8±21.7**64.494.2±24.142.163.3±20.1**61.0104.8±10.235.576.4±8.7*53.069.1±21.6**57.5123.4±24.324.1159.2±21.0—卯.6±21.2**43.128.6±13.4**82.016.9±6.1**89.4148.4±9.8—87.2±7.4**41.251.0±4.0"65.530.5±8.3**79.4Valuesrepresentthemeans±S.E.M.Forstatisticalanalysis:one-wayanalysisofvariancefollowedbyDunnett，stestSignificantlydifferentfromthecontrolgroup,*p<0.05，**p<0.01.实施洌10单体茶皂苷T1的结构确证白色针晶(甲醇),mp219220°C，Lieb函ann陽Burchard反应阳性，Molish反应阳性。碱水解，检出有当归酸存在；酸水解，检测有葡萄糖醛酸，半乳糖，阿拉伯糖和木糖存在。IR(KBrpellet)vmax3453(OH)，1718(C=0),1649(C=0),1078(C-O)cm-l。[a]2D0=+6.5(c2.5,MeOH)。Pos.FAB隱MSm/z:1213[M+Na]+,Neg.FAB-MSm/z:1189[M-町，1057[M-H-132r，925[M-H陽2xl32]-,895[M画H-132-162]-。HRFABMSm/z:1213.5627(calcd.1213.5618forC57H9()026Na)。^画NMR,13C-NMR数据见表1，表2。H-NMR,"C-NMR见说明书附图l，图2。实施阅11单体茶皂苷T10的结构确证白色针晶(甲醇),mp220~221°C，Liebermann-Burchard反应阳性，Molish反应阳性。碱水解，检出有当归酸和乙酸存在；酸水解，检测有葡萄糖醛酸，半乳糖，阿拉伯糖和木糖存在。IR(KBrpellet)v丽3453(OH),1731(C=(〕)，1647(CO)，1080(C-O)cm"[ot]2D0=-10.0(c2.4,MeOH)。Pos.FAB誦MSw/z:1281[M+Na]+,Neg.FAB-MSw/z:1257[M-町，1125[M-H-132r,963[M-H-132-162]-。HRFABMS:1281.5886(calcd.1281.5880forC61H94027Na)。'H-NMR，13C-NMR数据见表1,表2。H-NMR,13C-NMR,见说明书附图3，图4。实施測12单体茶皂苷T12的结构确证白色针晶(甲醇)，mp223224°C,Liebermann-Burchard反应阳性，Molish反应阳性。碱水解，检出有当归酸存在；酸水解，检测有葡萄糖醛酸，半乳搪，阿拉伯糖和木糖存在。IR(KBrpellet)vmax3453(OH),1741(C=0),1085(C-O)cm"。[a]2D0=+7.9(c2.0，MeOH)。Pos.FAB画MSw/z:1197[M+Na]+,Neg.FAB-MSm/z:、1173[M誦H]-,1041[M-H-132]-。HRFABMS:1197.5657(calcd.1197.5669forC57H90O25Na)。^-NMR,"C漏NMR数据见表1,表2。^-NMR，"C-NMR见也明书附图5，图6。表l茶皂苷Tl,T10，T12的13C-NMR数据<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>Ac=acetyl,Ang=angeloyl;Xyl:y5-Z)-xylose;Ara:ot國丄-arabinose;GlcA:》墨Z)-glucuronicacid;Glc:"-D-glucose;Gal:々-Z)-galactose;表2茶皂苷Tl，T10,T12的^-NMR数据No.TlT10T1234.15Cm)3.20(dd-like)4.14(t-like)125.37(br.s)'5.39(br.s)5.38(br.s)164.84(br.s)5.61(br.s)4.61(br.s)182.92(dd-like)3.00(dd-like)3.04(dd-like)216.46(d,J=10.1)5.87(d,J=10.4)2.80,2.85(eachm)224.80(d，J=10.1)6.13(d，J=10.4)6.21(dd,J=5.5,12.6)233.77(d,J=10.4)，4.42(m)1.28(s)3.76(dd-like),4.39(m)241.07(s)U2(s)1.08(s)25O.卯(s)0.77(s)0.90(s)260.89(s)0.75(s)O.卯(s)271.80(s)1.49(s)1.83(s)283.68,3.96(eachd，J=10.4)3.46,3.59(eachd,J=10,4)3.55，3.70(eachd,J=l1.0)291.10(s)1,07(s)1.03(s)301.32(s)1.26(s)1.29(s)A21-Ang21-Ang22-Ang35.卯(dq-like)5.99(dq-like)5.92(dq-like)42.06(d，J=7.3)、2.06(d,J=7.3)2.09(d,J=7.0)1.98(s)1.98(s)1.96(s)16-Ac2.51(s)22-Ac2.04(s)GlcA:l'5.06(d，J=7.7)4.91(d，J=7.4)5.05(d，J=6.7)Gal-i"5.88(d,J=8.0)5.76(d,J=8,0)5.88(d,J=7.4)1681.678.341.7Ara73.173.373.0r"101.7101.7101.764.827,964.82",82.382.182.313.616.713.63,"73.373.873.416.215.616.24霄"68.368.368.316.916.7、16.9V"66.066,066.027.426.927.6Xyl66.063.763.6107.1106.9107.129.829.333.52""75.975.775.920.419.725.23，"i78.378.278.321-Ang21-Ang22-Ang4'"，70.870.770.8168.7167.8168.067.567.567.5129.6128.4129.5136.0138.1136.615.916.015.921.120.921.0222222223i"12345<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>实施(列13单体茶皂苷T20的结构确证白色粉末(甲醇)，mp196~198°C,Liebermann-Burchard反应阳性，Molish反应阳性。碱水解，检出有惕铬酸和乙酸存在；酸水解，检测有葡萄糖醛酸，半乳糖，阿拉伯糖和木糖存在。IR(KBrpellet)vmax3453(OH),1743(C=())，1085(C-O)cm"。[oc]2D0=+10.9(c3.0,MeOH)。Pos.FAB-MSw/二1253[M+Na]+,Neg.FAB-MS附/二1229[M國町，1097[M-H-132]-，1067[M-H-162]-，965[M画H國2x132]-,803[M國H-2xl32-162]國。HRFABMS:1253.557(calcd.1253.5567forC59H9Q027Na)。1H-NMR，"C-NMR数据见表3,表4,H-NMR，t-NMR见也明书附图7，图8。实施例14单体茶皂苷T33的结构确证白色粉末(甲醇)，mp217218°C,Liebermann-Burchard反应阳性,Molish反应阳性。碱水解，检出有当归酸和乙酸存在；酸水解，检测有葡萄糖醛酸，半乳糖，阿拉伯糖和木糖存在。IR(KBrpellet)vmax3453(OH),1718(C=0),1650(C=0),1080(C-O)cm"。[a]2D0=+25.1(c2.0,MeOH)。Pos.FAB-MS附/z:1283[M+Na]+,Neg.FAB-MS附/z:1259[M-H]-,1127[M-H-132]-，1097[M-H-162]-,995[M-H-2xl32]-，965[M-H-132誦162]-。HRFABMS:1283.5682(calcd.1283,5673forC60H92O28Na)。！H-NMR,13C-NMR数据见表3，表4。^-NMR,"C-NMR见i^日为书附图9,图10。实施例15单体茶皂苷T34的结构确证白色粉末(甲醇),mp218~219°C,Liebermann-Burchard反应阳性，Molish反应阳性。碱水解，检出有当归酸存在；酸水解，检测有葡萄糖醛酸，半乳糖，阿拉伯糖和木糖存在。IR(KBrpellet)v腿3453(OH)，1717(C=0)，1638(C=0),1080(C-O)cm-1。[a招=+10.0(c0.9,MeOH)。Pos.FAB國MSw/z:1225[M+Na]十，Neg.FAB-MSw/z:1201[M-町，1069[M-H-132],937[M画H画2xl32r,907[M-H誦132-162]-。HRFABMS:1225.5613(calcd.125.5618forC58H90O26Na)。'H-NMR，13C-NMR数据见表3,表4。^-NMR,"C-NMR见说明书附图11,图12。实施例16单体茶皂苷T36的结构确证白色粉末(甲醇)，mp225~226°C，Liebermann-Burchard反应阳性，Molish反应阳性。碱水解，检出有当归酸存在；酸水解，检测有葡萄糖醛酸，半乳糖，阿拉伯糖和木糖存在。IR(KBrpellet)v醒3453(OH),1717(C=0),1638(C=0),1080(C-O)cm國1。[a]2D0=-1.3(c1.0,MeOH)。Pos,FAB-MS附/z:1195[M+Na]+,Neg.FAB-MS柳/z:1171[M-H]—,1039[M-H-132]-，907[M誦H-2x132]-,877[M-H-132-162]-。HRFABMS:1195.5520(calcd.1195.5512forC57H88025Na)。^-NMR,〗3C-NMR数据见表3,表4。'H-NMR，"C-NMR见说明书附图13，图14。表3茶皂苷T20,T33,T34,T36的"C-NMR数据No.T20T33T34T36No.T20T33T34T36Ac=acetyl,Ang=angeloyl;Xyl:"-Z)-xylose;Ara:a--arabinose;GlcA:^-D-glucuronicacid;1234689101112131415161718192021222324252627282930COOCH3Ang/Tig12438.638.638.122-Ac26.126.125.2185,785.684.7253.853.8、55.028-Ac52.252.348.5120.921,020.3232.732.732.3GlcA40.440.340.21,47.047.146.82,36.436.536.03,23.823.823.64'123.8123.1123.15,142.7143.7142.56,41.741.741.6Gal34.635,131.6r67.570.171.02"47.044.844.23"40.240.944.84"47.147.447.35"36.132.131.76"81.241.7、41.5Ara71.173.072,4r'178.1178.1210.3"I12.212.311.216.016.115.84"，16.816.616.6V，27.327.527.0Xyl66.063.769.31，"129.733.533.42"，，20.225.225.23，'，'52.252.24""21-Ang21-Ang16-Ang5""168.5168,0167.2129.5129.5128.7136.1136.5138,015.915.815.921.021.021.3171.020.9170.720.7104.2104.7104.7104.378.278.478.578.384.184.384.384.170,870.971.070.877.477.277.277.4171.9172.0172.0171.9103.3103.3103.2103,373.773.673.673.775.475.675.775.470.570.670.770.576.576.476.476.662.061.761.862.1101.7101.6101.6101,782.382.482,482.373.373.373.373.368.368.368.368.366.066.466.066.0107.1107.1107.1107.175.976.076.075.978.278.278.278,370.870.870.870.867.567.567,567.5l丄l15.816.827.46;.729.520.232854234:432^32-436444377Glc:yff-D-glucose;Gal:yS-Z)-galactose;表4茶皂苷T20，T33，T34,T36的1H-NMR数据<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>Ac=acetyl,Ang=angeloyl,Xyl:p画Z)國xylose;Ara:ot隱丄-arabinose;GlcA:^隱D-glucuronicacid;Gal:^國Z)隱glucose;Glc:/國Z)-galactose;权利要求1、山茶种子中的三萜皂苷，其特征在于其为如下通式(1)中所表示的齐墩果烷衍生物通式(1)乙酰基惕铬酰基当归酰基肉桂酰基通式(1)中R1为氢或羟基或酰氧基；R2为氢或酰氧基；R3为氢或酰氧基；R4为氢或酰氧基；R5为甲基或羟甲基或醛基或羧基或羧基甲酯；R6为氢或糖基。2、根据权利要求l所述的山茶种子中的三薛皂苷，其特征在于所述酰氧基中的酰基为乙酰基、'当归酰基、惕铬酰基、肉桂酰基中的一种或多种。3、根据权利要求l所述的山茶种子中的三薛皂苷，其特征在于所述糖基为如下糖基中的一种或多种葡萄糖醛酸基、阿拉伯糖基、半乳糖基、葡萄糖基、木糖基及由它们组成的寡糖链基。4、一'-种如权利要求l所述的山茶种子中三薛皂苷的制备方法，其特征在于其制备方法如下(1)取干燥山茶种子榨油后所得茶子饼，加入提取溶剂浸泡，药材与提取溶剂的比例为l:5至1:12，于50~IO(TC条件下加热0.5~3小时，提取l-4次，合并各次提取液浓缩至药材量的2~10倍体积；(2)提取液经大孔树脂(HPD100或D101或AB-8等通用树脂)吸附，用0~30%的稀醇洗去杂质，再用40%~100%醇液洗脱得山茶种子粗总皂苦.'(3)所得山茶种子粗总皂苷加少量水溶解，经开口ODS柱色谱，用030財希醇洗去茶黄酮杂质，再用40%~90%醇液洗脱得山茶种子总皂苷；(4)所得山茶种子总皂苷经HPLC进一步分离纯化反相键合硅胶为固定相，以甲醇水或乙腈水为流动相，示差或紫外检测器检测，得到通式(1)中所示各种类型三萜皂苷类成分。5、损据权利要求4所述的山茶种子中三萜皂苷的制备方法，其特征在于所述步骤(1)中的提取溶剂为水、甲醇、乙醇中的一种。6、根据权利要求4所述的山茶种子中三萜皂苷的制备方法，其特征在于所沐步骤(l)中的提取方法为煎煮法或加热回流提取。7、根据权利要求4所述的山茶种子中三萜皂苷的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中醇液为甲醇或乙醇的溶液。8、楣据权利要求4所述的山茶种子中三萜皂苷的制备方法，其特征在于所述步骤(4)中反相键合硅胶为C_30~C4键合硅胶中的一种。9、根据权利要求4所述的山茶种子中三萜皂苷的制备方法，其特征在于所述步骤(4)中的流动相为30%~80%甲醇水或乙腈水，并且甲醇水或乙腈^中含0.01~0.5%冰醋酸。10、山茶种子中的三萜皂苷在制备保护胃粘膜、抗肿瘤、降血糖、降血脂的药杨或保健食品中的应用。全文摘要本发明属于医药
技术领域：
，提供了山茶种子中的三萜皂苷、及其制备方法和医药用途，如通式(1)中所示，其中R1为氢或羟基或酰氧基；R2为氢或酰氧基；R3为氢或酰氧基；R4为氢或酰氧基；R5为甲基或羟甲基或醛基或羧基或羧基甲酯；R6为氢或糖基；制备方法经脱脂、醇提取或水煎煮、大孔树脂脱糖脱色得粗总皂苷，再经开口ODS柱色谱和反复HPLC法分别制得山茶种子总皂苷和单体茶皂苷；本发明的山茶种子中的三萜皂苷类化合物具有胃粘膜保护、抗肿瘤、降血糖、降血脂等作用；用于制备保护胃粘膜、抗肿瘤、降血糖、降血脂的药物或保健食品。文档编号A61P3/06GK101392015SQ200810012419公开日2009年3月25日申请日期2008年7月22日优先权日2008年7月22日发明者鹏张,宁李,铣李,马忠俊申请人:沈阳药科大学