专利名称：：石榴皮和石榴籽提取物改善前列腺症状的新用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及医药领域，具体是天然植物提取物及其应用领域，尤其是涉及石榴(7^m'Mgr朋加wwLinn.)皮和石榴籽提取物用于制备抗前列腺增生和抗前列腺炎的药物、健康食品及食品添加剂的应用。
背景技术：
：前列腺增生，俗称前列腺肥大，是指由于前列腺实质细胞数量增多而造成前列腺器官的增大，是涉及到多种病因引起的细胞有丝分裂活动增强的结果，其特征表现为基质及上皮细胞的增生。前列腺增生是老年男性常见病之一，一般在40岁后开始增生的病理改变，50岁后出现相关症状。前列腺增生症的发病率随年龄增长而递增，但临床症状以60-70岁最明显。前列腺增生主要症状有排尿困难、尿频、排尿起始迟缓、尿线无力、尿间断或滴沥等，更甚者还可发生急性尿潴留、充盈性尿失禁，严重影响了老年男性的生活质量，甚至出现各种并发症，威胁病人的生命，成为影响我国老年男性健康的最重要的疾病之一。一般认为前列腺增生的机制与老年男性双氢睾酮在腺体内的积聚有关。前列腺炎是男性泌尿系统多发病、常见病，它并不是单一疾病，其病因有组织器官原发性或继发性，也与感染及炎症相关。其中，急性前列腺炎多为感染性疾病，而慢性前列腺炎视为感染或非感染因素作用下形成的以排尿异常等症状为特征的临床症状。由于非感染性前列腺炎的病因并不明确，因此可以认为引起前列腺炎症的因素种类繁多，作用机制复杂。近年来人们十分关注遗传因素、内分泌失调以及老化等与前列腺炎发病间的关系，也注意到应激负荷引起的身心疲劳以及特定工作造成的前列腺长期充血，都可能直接参与或影响到前列腺炎的发生。也有很多研究认为，微量元素Zn的缺乏及机体氧化应激状态对组织器官的损伤也可能是前列腺炎的发病机制之一。目前治疗前列腺增生的药物主要分为5a-还原酶受体抑制剂，al-肾上腺素能受体阻滞剂，缓退瘤等抗雄性激素类和醋酸甲地孕酮等促黄体释放激素类药物。这些药物在临床使用剂量上受到一定限制、在效果上也多局限于暂时性的缓解，而不能从根本上达到治疗目的。此外，5a-还原酶抑制剂临床上显示与性相关的副作用，a-受体阻滞剂多伴有心血管方面的副作用，并且费用均较。抗雄性激素类、促黄体释放激素类药物副作用大而很少使用。慢性前列腺炎患者使用抗菌药物易导致体内菌群失调免疫力下降，而且大多抗菌药物不能在前列腺组织及腺泡内达到有效治疗水平。至今为止的研究证明，炎症，肿瘤及衰老等疾病的发生与体内自由3基产生过多或清除自由基能力下降有着密切的关系。为此我们在致力于从抗活性氧自由基的天然产物中寻找和开发新的抗前列腺增生及抗前列腺炎的药物、健康食品、食品和食品添加剂。我们在研究中注意并确认石榴皮和石榴籽提取物的抗前列腺增生和抗前列腺炎作用效果,旨在开发其应用价值。石榴CP柳/cagrawa/wwLi皿.)属于石榴科(A/m'cacefle)石榴属CP柳/cfl)落叶灌木或小乔木植物的成熟果实，原产于巴尔干半岛至伊朗及其邻近地区，目前已在全世界的热带及亚热带地区广泛种植。中国引种石榴历史悠久并广为栽培。近年来，人们非常关心对天然产物生理活性的研究，对传统中草药及天然植物类所具有生物功能更是引人关注。现代医学研究认为，石榴皮内含有"石榴根皮碱"，对各种杆菌和皮肤其菌都有抑制作用。石榴皮含有较多的鞣质，有收敛杀菌效果，可治腹泻、痢疾，并可开胃、助消化。石榴皮富含儿茶素等多种多酚类化合物，具有清除氧自由基等很强的抗氧化作用。石榴籽油富含石榴酸，有很强的抗氧化能力，可抑制脂氧化酶、环氧化酶和花生四烯酸途径的关键酶，抵抗人体炎症和氧自由基的破坏。石榴皮和石榴籽提取物具有一定的抗炎、抗菌、抗肿瘤作用等已被人们所认识，但是对于石榴皮和石榴籽提取物抗前列腺增生和抗前列腺炎尚无任何应用方面的探讨。
发明内容本发明的目的在于提供石榴皮和石榴籽提取物的新用途。本发明所述的以石榴皮和石榴籽提取物为原料，用于制备抗前列腺增生和抗前列腺炎及缓解其临床症状的药物。所制备的药物可以长期服用，安全性高且无毒副作用。本发明所述的石榴皮和石榴籽提取物为原料，用于制备抗前列腺增生和抗前列腺炎及缓解其临床症状的食品和食品添加剂。所制备的食品和食品添加剂可以长期服用，安全性高且无毒副作用。在其应用产品中，所述的石榴皮和石榴籽提取物的使用量可占0.001100%的重量比。'本发明所述的石榴皮和石榴籽提取物是采用水或水与甲醇、乙醇等低级醇类、丙酮等极性溶剂的一种或两种以上的任意混合溶剂进行提取的。因为石榴皮和石榴籽提取物中富含黄酮、多元酚类物质和丰富的氨基酸、脂肪酸、多糖及微量元素等类营养成分，都属于中高极性化合物，一般用水或者不同浓度的低级醇类、丙酮等极性溶剂或任意混合溶剂来提取。在提取时可以适宜调整醇浓度用于提高石榴皮和石榴籽提取物中活性成分的回收率。在提取时，可因温度、方法及时间等条件的改变而影响提取物中活性成分的含量。但对于石榴皮和石榴籽提取物中活性成分的提取而言，上述提取方法及其任意组合都可达到本发明所述的提取物的回收。鉴于石榴皮和石榴籽提取物是以药物或健康食品及食品添加剂作为最终产品开发，故从安全性角度考虑提取溶剂应尽量选择含水乙醇为宜。提取时石榴皮和石榴籽与溶剂的比率没有特定限制，但一般考虑石榴皮和石榴籽与溶剂的比例以1:150范围为宜。本发明对提取温度没有特定限制，从室温到溶剂沸点温度都可适用。当然室温、常压以及在溶剂沸点范围内提取最为理想。提取时间从30秒到24小时都可以在一定程度上达到活性成分的回收目的。在提取石榴皮提取物和石榴籽提取物时，根据需要也可以在溶剂中添加碳酸氢钠、抗坏血酸钠盐等物质。这些提取方法不会影响石榴皮和石榴籽提取物本来具有的生物活性。本发明提供的石榴皮和石榴籽提取物固形剂使用量一般在0.001%至100%(W/W)，通常口服剂型添加浓度一般在0.1%至50%(W/W)范围较为适宜。作为食品添加剂的石榴皮提取物和石榴籽提取物随着加入量的增大，可能会出现苦涩和油腻的感觉。其解决办法可以根据市场需要及消费者的心理要求改换剂型，例如使用片剂、颗粒剂、胶囊剂等剂型。本发明提供的石榴皮和石榴籽提取物及其活性成分，可以用于各种口服剂型投放市场，用于抗前列腺增生和抗前列腺炎及缓解其临床症状。当然，石榴皮和石榴籽提取物也可以与常用的赋形剂等医药用载体结合做成制剂。必要时，还可以加入一些防腐剂、抗氧化剂、色素、甜味剂等制剂添加物。比较适宜的石榴皮和石榴籽提取物赋形剂，一般考虑有乳糖、蔗糖、甘露醇、淀粉、结晶纤维素等。润滑剂一般应采用硬脂酸镁、硬脂酸钙、滑石粉等。溶剂通常使用精制水、乙醇、丙二醇等。防腐剂一般采用氯丁醇、苄醇、二羟基乙酸等。抗氧化剂通常以亚硫酸盐、抗坏血酸等比较适宜。本发明提供的石榴皮和石榴籽提取物，可以将其溶液或粉末添加到制品中用于口服。石榴皮和石榴籽提取物也可与其他饮料原料结合制成一定的饮料制品，如石榴皮和石榴籽提取物饮料、碳酸饮料、果汁饮料、乳酸菌饮料、运动饮料、豆乳等。石榴皮和石榴籽提取物还可以考虑制成饼干、巧克力、糖果、口香糖、快餐点心、果冻点心、面包、豆腐、酸奶酪等日常食品。本发明提供的石榴皮和石榴籽提取物及其所含活性成分可以作为药物、健康食品、食品或食品添加剂，用于抗前列腺增生和抗前列腺炎及缓解其临床症状。本发明中，石榴皮和石榴籽提取物的给药剂量，可以根据使用者的相对健康状态、年龄、性别及体重等条件适当选择。成人平均体重以60公斤计算，一天口服石榴皮和石榴籽提取物一般可以考虑在l克至5克范围内，分次服用。当然5克以上也不存在副作用等问题。本发明以皮下注射丙酸睾酮致小鼠前列腺增生作为前列腺增生实验模型，以前列腺内注射角叉菜胶致大鼠前列腺炎作为非细菌性前列腺炎模型，以前列腺内注射金黄色葡萄球菌致大鼠前列腺炎作为细菌性前列腺炎模型，评价石榴皮和石榴籽提取物对前列腺增生小鼠模型前列腺重量及前列腺指数，血清睾酮(testosterone)的水平，血浆中抗氧化能力指数(oxygenradicalabsorbancecapacity,ORAC)，前列腺中丙二醛(malondialdehyde，MDA)水平，血浆中一氧化氮(NO)水平的影响。评价石榴皮提取物和石榴籽提取物对前列腺炎大鼠的前列腺卵磷脂小体密度和白细胞数，血浆中酸性磷酸酶(PACP)的活力，前列腺中丙二醛(MDA)、NO水平、Zn含量和抗氧化能力指数ORAC的影响。结果显示，石榴皮和石榴籽提取物对小鼠前列腺增生和大鼠前列腺炎有显著改善作用。根据上述实验可以证明本发明提供石榴皮和石榴籽提取物是一种安全、天然的药物、食品和食品添加剂，通过抗氧化、调节体内NO等作用，从而达到抗前列腺增生和抗前列腺炎的目的。此外，本发明也提示石榴皮和石榴籽提取物也可以作为抗氧化剂或抗氧化组成物原料，用于缓解及改善由前列腺增生和前列腺炎等引起炎症反应。由于本发明提供的石榴皮和石榴籽提取物是天然来源的物质，且民间具有长期食用的经验，适用于各个年龄阶段和健康状况的人群。因此，石榴皮和石榴籽提取物可以作为健康食品、食品添加剂而提供多种用途。虽然石榴皮和石榴籽提取物抗炎作用是已知的，但是石榴皮和石榴籽提取物显示出的抗前列腺增生和前列腺炎活性是本发明首次证实的。具体实施例方式本发明可以通过以下实施例进行详细说明，但并不仅仅局限于以下实施例。实施例一石榴皮提取物的制备取新鲜干燥的石榴皮，完全粉碎后加入10倍量70%乙醇80。C加热回流提取3小时，共提取3次，过滤后合并滤液，45°<:减压浓縮后冷冻干燥，即得回收率约为42.34%的石榴皮提取物用于本发明的下列实施例中。实施例二石榴籽提取物的制备取干燥石榴籽粗粉，以5倍量丙酮6(TC加热回流提取3小时，共提取3次，过滤后合并滤液，45°C减压浓縮后即得回收率约为14.54%石榴籽提取物用于本发明的下列实施例中。实施例三石榴皮和石榴籽提取物对体外对5-a还原酶的抑制作用丙酸睾酮30pM、NADPH30pM、酶的提取物6mg/ml，充分混合后加入实施例一和二制备的不同浓度的样品，37。反应10分钟，检测条件为340nm波长。选择15pg/ml非那雄胺组作为对照组评价石榴皮和石榴籽提取物对酶活性的相对抑制作用，(见附图l，2)实施例四石榴皮和石榴籽提取物对睾酮致前列腺增生小鼠前列腺湿重和前列腺指数(PI)的影响将小鼠随机分成空白对照组、睾酮诱发前列腺增生模型对照组、阳性药保列治组(19.47mg/kg)、石榴皮提取物低剂量组(250mg/kg)、石榴皮提取物高剂量组(500mg/kg)、石榴籽提取物低剂量组(进食量的0.12%)，石榴籽提取物高剂量组(进食量的1.2%)，每组IO只小鼠。空白组以外的各组小鼠每天皮下注射用橄榄油溶解的丙酸睾酮(7.5mg/kg)，连续注射12天，同时灌胃给药。空白和模型组给予同容量的水溶液，末次给药后空腹24小时，乙醚麻醉，剥离前列腺，称重，计算前列腺湿重及前列腺指数(PI)。实验结果实验数据以3±^表示，采用Studentt-test检验做统计学处理。结果显示，与正常对照组小鼠相比，睾酮诱发前列腺增生模型小鼠前列腺湿重和PI均有显著增加(PO.Ol)。与前列腺增生模型组相比，保列治组、石榴皮提取物高低剂量组、石榴籽提取物高低剂量组小鼠前列腺湿重和前列腺指数均有显著下降(PO.05或PO.01)，且与药物浓度呈量效关系(表l)。表1石榴皮和石榴籽提取物对睾酮致前列腺增生小鼠前列腺湿重和前列腺指数的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>"pO.01,与空白组相比；*p<0.05，**p<0.01，与睾酮模型对照组相比具有统计学意义。实施例五石榴皮和石榴籽提取物对睾酮致前列腺增生小鼠前列腺组织丙二醛(MDA)水平的影响实验动物、实验方法、实验分组及给药剂量均与实施例四相同。取前列腺组织样品，以生理盐水制成10%前列腺组织匀浆，10000转/分钟离心10分钟后取组织匀浆上清液测定其中丙二醛含量。测定原理利用丙二醛可与硫代巴比妥酸(TBA)縮和，形成红色产物，在532nm使用酶标仪(芬兰雷博MK3酶标仪)下测定。与正常对照组小鼠相比，前列腺增生模型小鼠前列腺组织匀浆中的丙二醛(MDA)水平显著升高(PO.Ol)，与前列腺增生模型组相比，保列治组、石榴皮提取物高低剂量组、石榴籽提取物高低剂量组能明显降低小鼠前列腺组织匀浆中的丙二醛(MDA)水平(P〈0.05或PO.01)，且石榴皮提取物组的下降与药物浓度呈量效关系(表2)。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>#、<0.01，与空白组相比；*p<0.05，**p<0.01，与睾酮模型对照组相比具有统计学意义。实施例六石榴皮和石榴籽提取物对睾酮致前列腺增生小鼠血清睾酮的影响实验动物、实验方法、实验分组及给药剂量均与实施例四相同。小鼠在乙醚麻醉条件下心脏采血，并置于肝素处理过的离心管中以5000rpm离心5分钟分离血浆。放射免疫方法测定小鼠血清睾酮的水平。实验结果证明，与正常对照组小鼠，睾酮致前列腺增生小鼠血清睾酮水平显著升高(PO.Ol)。睾酮致前列腺增生模型组小鼠相比，保列治组、石榴皮提取物高低剂量组、石榴籽提取物高低剂量组均能明显降低小鼠血清睾酮水平(PO.Ol)，且与药物浓度呈量效关系(表3)。表3石榴皮和石榴籽提取物对睾酮致前列腺增生小鼠血清睾酮水平的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>"pO.01，与空白组相比；**p<0.01，与睾酮模型对照组相比具有统计学意义。实施例七石榴皮和石榴籽提取物对睾酮致前列腺增生小鼠血浆抗氧化能力指数(ORAC)的影响实验动物、实验方法、实验分组及给药剂量均与实施例四相同。小鼠在乙醚麻醉条件下心脏采血后放入肝素处理过的离心管中，经5000转/分离心5分钟后分离血浆。3%高氯酸除蛋白后，12000转/分离心15分钟回收上清液用于ORAC分析。血浆抗氧化能力指数(ORAC)分析使用多功能荧光分析仪(TecanGenios,Austria),激发和发射波长分别为485nm和525nm，攻击荧光素(disodiumfluorescein)的氧化剂使用2，2'-azobis-2陽amidinopropane-dihydrochloride(AAPH;WakoPureChemicalIndustries,Ltd.Osaka,Japan)。实验结果以t检验做统计学处理，与正常对照组小鼠，睾酮致前列腺增生小鼠的血浆抗氧化能力指数显著降低，(P<0.05)，与睾酮致前列腺增生模型组小鼠相比，保列治组、石榴皮提取物高低剂量组、石榴籽提取物高低剂量组能升高小鼠的血浆抗氧化能力指数，即抗活性氧自由基的能力明显增强(P<0.01)，且具有一定的量效关系(表4)。表4石榴皮和石榴籽提取物对睾酮致前列腺增生小鼠血桨抗氧化能力指数(ORAC)的影响组别抗氧化能力指数(微摩尔TR0L0X当量/升)空白对照组431.63±83.86睾酮模型对照组271.40±43.53#睾酮+保列治组448.58±76.28**睾酮+石榴皮提取物低剂量组540.15±89.97"睾酮+石榴皮提取物高剂量组535.37±160.89**睾酮+石榴籽提取物低剂量组575.02±86.29**睾酮+石榴籽提取物高剂量组566.89±109.94**'pO.05,与空白组相比；**p<0.01，与睾酮模型对照组相比具有统计学意义。实施例八石榴皮和石榴籽提取物对睾酮致前列腺增生小鼠血浆中一氧化氮(NO)水平的影响实验动物、实验方法、实验分组及给药剂量均与实施例四相同。一氧化氮(NO)作为生物体内一种反应性极强的自由基，具有氧化和抗氧化的双重作用，兼有第二信使和神经递质的作用，同时又是一种效应分子，介导调节炎症反应、细胞毒效应以及免疫损伤等多种病理、生理过程。采用Griess法，利用1%对氨基苯磺酸，0.1。/。N-(l-萘基)-乙二胺，5%磷酸进行重氮、偶氮反应，生成红色产物，在550nm处比色测定，用亚硝酸钠作标准，最后换算成N03—浓度。实验结果证明，与正常对照组小鼠相比，睾酮致前列腺增生小鼠血浆NO水平显著升高(P<0.01)，与睾酮致前列腺增生模型组小鼠相比，保列治组、石榴皮提取物高低剂量组、石榴籽提取物高低剂量组能明显降低小鼠血浆NO水平(P<0.05)，且具有一定的量效关系(表5)。表5石榴皮和石榴籽提取物对睾酮致前列腺增生小鼠血浆NO水平的影响组别N0(毫克/毫升)空白对照组2.68±0.41睾酮模型对照组3.64±0.74#睾酮+保列治组2.87±0.43*睾酮+石榴皮提取物低剂量组3.36±0.61睾酮+石榴皮提取物高剂量组2.89±0.44*睾酮+石榴籽提取物低剂量组2.99±0.36*睾酮+石榴籽提取物高剂量组2.89±0.23*^0.05,与空白组相比；*p<0.05，与睾酮模型对照组相比具有统计学意义。实施例九石榴皮和石榴籽提取物对前列腺炎大鼠模型卵磷脂小体密度和白细胞数的影响将大鼠随机分成空白对照组、前列腺炎模型对照组、阳性药前列康组(500mg/kg)、石榴皮提取物低剂量组(250mg/kg)、石榴皮提取物高剂量组(500mg/kg)、石榴籽提取物组(进食量的0.12%)，石榴籽提取物组(进食量的1.2%)，每组8只大鼠。空白组以外的各组先灌胃给药7天后手术，取0.2ml用蒸馏水配成的P/。角叉菜胶直接注入前列腺背侧叶，然后缝合腹膜及皮肤，制备非细菌性前列腺炎模型。继续给药3天，末次给药40分钟后乙醚麻醉，仔细分离各叶前列腺，用电子天平称取前列腺重量，按4ul/mg加无菌生理盐水，匀浆，显微镜下记录卵磷脂小体密度和白细胞数。细菌性前列腺炎模型制备，取0.21!11用生理盐水配成的107个/1111金黄色葡萄球菌直接注入前列腺背侧叶复制细菌性前列腺炎模型，实验方法、实验分组均同上述非细菌性前列腺炎模型。实验数据以3f士s表示，实验结果采用Studentt-test检验做统计学处理。卵磷脂小体和白细胞是前列腺液检査中两个主要的方面。当前列腺发生炎症病变时，巨噬细胞大量吞噬卵磷脂小体，同时白细胞数增加。因此记录卵磷脂小体密度和白细胞数对诊断前列腺炎有重要的参考价值。实验结果证明，与正常对照组大鼠相比，前列腺炎模型大鼠前列腺卵磷脂小体密度均有显著下降(P<0.01)，白细胞数显著增加(PO.Ol)，与前列腺炎模型组大相比，前列康组、石榴皮提取物高低剂量组、石榴籽提取物高低剂量组大鼠前列腺卵磷脂小体密度均有显著升高(PO.Ol)，白细胞数显著减少(PO.Ol)，且具有一定的量效关系(表6)。表6石榴皮和石榴籽提取物对前列腺炎大鼠模型卵磷脂小体密度和白细胞数的影响H^j卵磷脂小体密度(级数)白细胞数(10s个/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>石榴籽提取物高剂量组3.25±0.38**2.80±0.52**4.30±0.21"12.42±3.70**"pO.01，与空白组相比；*p<0.05，**p<0.01，与前列腺炎模型对照组相比具有统计学意义实施例十石榴皮和石榴籽提取物对前列腺炎大鼠模型血清酸性磷酸酶活力的影响实验动物、实验方法、实验分组及给药剂量均与实施例九相同。末次给药40分钟后，大鼠在乙醚麻醉条件下心脏采i并静置1小时，而后，在4'C条件下以3000rpm离心15分钟分离血清并测定血清中前列腺酸性磷酸酶活性。血清前列腺酸性磷酸酶活性使用前列腺酸性磷酸酶测试盒测定。测定原理为前列腺酸性磷酸酶通过催化OL-萘酚磷酸盐水解产生ci-萘酚和无机磷酸盐，a-萘酚与重氮盐反应生成有色偶氮化合物，在530nm处比色测定并计算前列腺酸性磷酸酶的活性。实验结果以1L血清在37'C条件下与底物作用，每分钟产生l^miol的游离酚为一个活性单位。实验结果证明，与正常对照组大鼠相比，前列腺炎大鼠酸性磷酸酶均有显著升高(P<0.01)。与前列腺炎大鼠模型组相比，前列康组、石榴皮提取物高低剂量组、石榴籽提取物高低剂量组大鼠血浆酸性磷酸酶活力均有不同程度的降低(P<0.05)，且具有一定的量效关系(表7)。表7石榴皮和石榴籽提取物对前列腺炎大鼠模型血清酸性磷酸酶活力的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>实验动物、实验方法、实验分组及给药剂量均与实施例九相同。实验结果证明，与正常对照组大鼠相比，前列腺炎大鼠前列腺组织MDA水平均有显著升高(P<0.05)。与前列腺炎模型组大鼠相比，前列康组、石榴皮提取物高低剂量组、石榴籽提取物高低剂量组大鼠前列腺组织MDA水平均有显著降低(PO.05或PO.01)，且具有一定的量效关系(表8)。表8石榴皮和石榴籽提取物对前列腺炎大鼠模型前列腺组织MDA水平的影响组别丙二醛(MDA)(纳摩尔/毫克)非菌性细菌性空白对照组25.23±3.2226.04±3.93模型对照组50,80±10.37tt49.67±13.55tt前列康组26.05±8.34*27.73±16.09*石榴皮提取物低剂量组27.29±0.41*30.01±6.57*石榴皮提取物高剂量组21.49±3.13**22.47±8.36林石榴籽提取物低剂量组23.64±6.31*28.39±4.28*石榴籽提取物高剂量组18.86±6.83**20.90±3.90**Vc0.05，与空白组相比；*p<0.05，**p<0.01，与前列腺炎模型对照组相比具有统计学意义实施例十二石榴皮和石榴籽提取物对前列腺炎大鼠前列腺组织中NO水平的影响实验动物、实验方法、实验分组及给药剂量均与实施例九相同。实验结果证明，与正常对照组大鼠相比，非细菌性前列腺炎模型大鼠前列腺组织中N0水平显著升高(P〈0.01)，与非细菌性前列腺炎模型组大鼠相比，前列康组、石榴皮提取物高低剂量组、石榴籽提取物高低剂量组大鼠前列腺组织NO水平均有显著降低(P〈0.05或P〈0.01)。此外，与正常对照组大鼠相比，细菌性前列腺炎模型大鼠前列腺组织中N0水平显著降低(P〈0.05),与细菌性前列腺炎模型组大鼠相比，前列康组、石榴皮提取物高低剂量组、石榴籽提取物高低剂量组大鼠前列腺组织中N0水平均有显著升高(P〈0.05或P〈0.01)，且具有一定的量效关系(表9)。表9石榴皮和石榴籽提取物对前列腺炎大鼠前列腺组织中NO水平的影响HINO(毫克/毫升)非菌性细菌性空白对照组3.43±0.393.98±0.74模型对照组4.44±0.22##2.79±0.38##前列康组3.23±0.38*3.16±0.14*石榴皮提取物低剂量组3.76±0.263.41±0.25石榴皮提取物高剂量组3.89±0.583.61±0.23**石榴籽提取物低剂量组3.31±0.42*3.01±0.26石榴籽提取物高剂量组3.08土0.48林3.28±0.24*"pO.01，与空白组相比；*p<0.05，**p<0.01，与前列腺炎模型对照组相比具有统计学意义实施例十三石榴皮和石榴籽提取物对前列腺炎大鼠前列腺组织中中锌(Zn)含量的影响实验动物、实验方法、实验分组及给药剂量均与实施例九相同。实验方法是用剪刀将前列腺组织剪碎，按每100mg/mL添加生理盐水后置于冰浴中用组织匀浆机制成10%匀浆。匀浆在4'C条件下以3000rpm离心10min后，取匀浆上清液用蒸馏水稀释50倍后，使用TAS-990原子吸收分光光度计检测并采用标准曲线法计算前列腺组织匀浆中的Zn含量。实验结果证明，与正常对照组大鼠相比，前列腺炎大鼠前列腺组织中Zn的含量显著降低(PO.Ol)，与前列腺炎模型组大鼠相比，前列康组、石榴皮提取物高低剂量组、石榴籽提取物高低剂量组、大鼠前列腺组织Zn的含量均有显著升高(PO.05或PO.01)，且具有一定的量效关系(表10)。表10石榴皮和石榴籽提取物对前列腺炎大鼠前列腺组织中锌(Zn)含量的影响。组别锌(Zn)含量(微克/克前列腺湿重)非菌性细菌性空白对照组18.02±7.5417.28±2.37模型对照组2.90土1.97tt#3.34±0.5讲tt前列康组9.34±1.34*6.24±1.31*石榴皮提取物低剂量组9.25±1.15*5.38±2.16石榴皮提取物高剂量组10.17±1.06*7,97±17.53*石榴籽提取物低剂量组5.43±2.025.53±13.11石榴籽提取物高剂量组11.03±1.98*8.32±15.27*'pO.01,与空白组相比；*p<0.05，与前列腺炎模型对照组相比具有统计学意义实施例十四石榴皮和石榴籽提取物对前列腺炎大鼠前列腺组织中抗氧化能力指数(ORAC)的影响实验动物、实验方法、实验分组及给药剂量均与实施例九相同。实验结果证明，与正常对照组大鼠相比，前列腺炎大鼠前列腺组织中抗氧化能力指数显著降低(PO.Ol)。与前列腺炎模型组大鼠相比，前列康组、石榴皮提取物高低剂量组、石榴籽提取物高低剂量组大鼠前列腺组织抗氧化能力指数均有显著升高(P〈0.05或P〈0.01)，且具有一定的量效关系(表11)。表ll石榴皮和石榴籽提取物对前列腺炎大鼠前列腺组织抗氧化能力指数(ORAC)的影响Ml抗氧化能力指数(微克/克)13<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>实施例十五石榴皮和石榴籽提取物的体外抗氧化能力指数(ORAC)的活性体外抗氧化实验，是将不同浓度的石榴皮和石榴籽提取物直接添加在96孔酶标板中，观察样品抑制氧化剂AAPH对荧光素(disodiumfluorescein)的荧光衰减的延迟作用。如图3所示，石榴皮和石榴籽提取物在体外均能够延缓荧光物质被活性氧自由基淬灭的速度，具有抗活性氧自由基作用。石榴皮和石榴籽提取物的抗活性氧自由基作用可能来自于小分子多酚类化合物及石榴籽提取物中的石榴酸。本发明以皮下注射丙酸睾酮诱发小鼠前列腺增生作为前列腺增生实验模型、前列腺内注射角叉菜胶致大鼠前列腺炎作为非细菌性前列腺炎模型和前列腺内注射金黄色葡萄球菌致大鼠前列腺炎作为细菌性前列腺炎模型，评价石榴皮和石榴籽提取物抗前列腺增生和抗前列腺炎作用。结果显示不同剂量的石榴皮和石榴籽提取物可以有效降低前列腺组织匀浆的MDA水平，提高机体的抗氧化能力，调节NO水平。因此可以推测石榴皮和石榴籽提取物可以缓解并改善前列腺增生和前列腺炎引起的前列腺损伤等作用，其作用可能是通过抗氧化，防止过氧化损伤，减少过氧化脂质的生成等环节实现的。此外，本发明也提示石榴皮和石榴籽提取物可以作为抗氧化剂或抗氧化组成物原料，用于一些由于氧化应激引起的疾病的预防和辅助治疗。基于上述结果，确认本发明所述的石榴皮和石榴籽提取物的新用途的成立。根据上述实验可以证明本发明提供以石榴皮和石榴籽提取物是一种安全天然的通过抗氧化，从而达到抗炎作用，缓解及预防、改善和治疗前列腺增生和前列腺炎，用于制备可以长期服用的、安全无毒副作用的药物、食品添加剂、健康食品及其组成物。由于本发明提供石榴皮和石榴籽提取物是天然来源的物质，且民间有长期的食用经验，不仅适用于一般成年人，也适用于老年人、儿童及体力低下者。因此，以石榴皮和石榴籽提取物可以作为健康食品、食品添加剂提供多种用途。根据上述实验可以证明本发明提供的石榴皮和石榴籽提取物是一种安全性高的药物、食品和食品添加剂。图l石榴皮提取物体外对5-a还原酶的抑制作用横坐标为石榴皮提取物浓度(mg/ml)，实验数据以7±^表示，纵坐标为相对抑制率(％)。图2石榴籽提取物体外对5-a还原酶的抑制作用横坐标为石榴籽提取物浓度(mg/ml)，实验数据以i士^表示，纵坐标为相对抑制率(％)。图3石榴皮和石榴籽提取物的体外抗氧化能力指数(ORAC)的活性横坐标为时间(分钟)，纵坐标为相对荧光强度。其原理为荧光素钠在485nm光激发下，发射527nm荧光，可以被AAPH释放的过氧自由基氧化而使荧光特性消失。当抗氧化剂存在时，可与荧光素钠竞争氧化剂，减缓其荧光消退的速度。对照(-AAPH)表示不加入自由基产生剂AAPH时的荧光衰退曲线；对照(AAPH)表示加入自由基产生剂AAPH，但不加样品时的荧光衰退曲线；其他二条曲线分别为加入自由基产生剂AAPH后，再分别加入样品0.25mg/ml石榴皮提取物及0.25mg/ml石榴籽提取物时的荧光衰退曲线。权利要求1、以石榴皮和石榴籽提取物为有效成分用于制备抗前列腺增生、抗前列腺炎，缓解及改善其临床症状的药物的用途。2、以石榴皮和石榴籽提取物为有效成分用于制备抗前列腺增生、抗前列腺炎，缓解及改善其临床症状的健康食品及食品添加剂的用途。3、根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的石榴皮提取物含有多糖类及多酚类活性成分和石榴籽油含有不饱和脂肪酸类活性成分，每克石榴皮提取物中多糖及多酚类活性成分及石榴籽油含有不饱和脂肪酸类活性成分的含量应不少於5毫克。4、根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的石榴皮和石榴籽提取物是采用水或水与低级醇类、极性溶剂的一种或两种以上的任意混合溶剂进行提取的，也可以在溶剂中加入适量的酸或碱进行提取。5、根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的药物包括有效治疗剂量的石榴皮和石榴籽提取物，以及药学上可接受的载体。6、根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的石榴皮和石榴籽提取物在药物或健康食品或食品添加剂的各种制剂成品中使用量可占0.001100%的重量比。7、根据权利要求4所述的用途，其特征在于所述的石榴皮和石榴籽提取物在提取时，在溶剂中可添加碳酸氢钠和/或抗坏血酸钠盐。全文摘要本发明是提供一种以石榴(PunicagranatumLinn.)皮和石榴籽提取物为原料，制备抗前列腺增生和抗前列腺炎的药物，也可用于制备抗前列腺增生和抗前列腺炎的健康食品和食品添加剂。实验结果显示，石榴皮提取物和石榴籽提取物可以有效的改善前列腺增生小鼠的前列腺重量及前列腺指数、前列腺中丙二醛(MDA)水平、血清睾酮(testosterone)水平的升高，提高血浆中抗氧化能力，调节血浆中一氧化氮(NO)水平。而且，石榴皮和石榴籽提取物也可以改善前列腺炎大鼠的前列腺卵磷脂小体密度和白细胞数，血浆中酸性磷酸酶(PACP)的活力，同时可以调节前列腺中丙二醛(MDA)、NO水平。体外实验中，可以观察到石榴皮提取物和石榴籽提取物显示有很强的抗氧化作用。石榴皮提取物和石榴籽提取物具有安全性高、生物活性确切等特点。因此，石榴皮提取物和石榴籽提取物在药物或健康食品及食品添加剂的各种制剂成品中的使用量可占0.001～100％的重量比。文档编号A61P17/08GK101254223SQ20081002657公开日2008年9月3日申请日期2008年3月4日优先权日2008年3月4日发明者冯锦和,丽宝,徐真真,栗原博申请人:东莞市竟恒流通研究所