雷公藤二萜类内酯衍生物及其应用的制作方法

专利名称：：雷公藤二萜类内酯衍生物及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及雷公藤二碎类内酯衍生物及其在制备用于治疗增生性肿瘤疾病的药物中的应用。
背景技术：
：雷公藤(TripterygiumWilfordiiHookF)又称黄藤，属卫矛科雷公藤属植物，中国有四种，其中有三种入药，分别是主产于长江中下游地区的雷公藤，主产于长江流域及西南的昆明山海裳及主产于东北和日本的东北雷公藤。雷公藤最早收载于《神龙本草经》，其主要化学成分有二萜、三萜、倍半萜、生物碱等，近二十年来的研究表明它具有抗肿瘤、抗炎、免疫抑制、抗生育、抗菌等活性。雷公藤植物在民间用于治疗肿瘤已有多年历史，其中活性成分之—是雷公藤内酯醇。雷公藤内酯醇除了已得到广泛的抗胂瘤作用研究外，还曾经进入临床试验，用于治疗白血病，但是雷公藤内酯醇的毒副作用，限制了其在临床中应用。以往对雷公藤内酯醇的结构改造大多局限在水溶性基团的引进上，主体结构上并无根本性改动。当这类前药进入体内后，通过水解或代谢后仍然转变为雷公藤内酯醇在体内发挥药效作用，这就决定了它们不可能从根本上改善雷公藤内酯醇的毒副作用。由于以往对雷公藤内酯醇衍生物的抗肿瘤药效研究大多无特异性，因此抗胂瘤瘤谱不够明确。本发明的重点在于对雷公藤内酯醇构效关系的深入研究，对其结构进行不同于现有技术的改造和修饰，获得了一批新型结构的雷公藤二萜类内酯衍生物。所获得的该系列衍生物与先导化合物-雷公藤内酯醇及其它雷公藤二碎类内酯衍生物相比，其化学结构上有明显的实质性区别。国内外长期研究结果表明，活性雷公藤二碎类内酯化合物的毒副作用主要体现在生殖系统方面，而以往对该类化合物的抗肿瘤药效研究却从未针对生殖系统肿瘤进行过系统的药效学评价。本发明的具有新型结构的雷公藤二碎类内酯衍生物的体外药效学评价的结果表明，上述新型雷公藤二萜类内酯衍生物对生殖系统的肿瘤具有良好的肿瘤抑制活性，本发明将生殖系统肿瘤的治疗作为今后新药研发主要的适应症，有利于体现雷公藤二碎类内酯化合物在抗胂瘤作用上的特异性。
发明内容本发明提供通式(1)所示的雷公藤二碎类内酯衍生物、其光学异构体及其药学上可接受的盐及水合物(1)其中C5和C6以碳碳单键或碳碳双键相连；当C5和C6以碳碳单键相连时，P和Q分别表示连接在Cs位和C6位上的氢、氧、羟基、巯基、卤素、C1C6烷氧基、C1C6烷胺基或C1C6烷巯基；当Cs和C6以-炭石炭双键相连时，此时Cs除与Q、Q以及Cu)连接外无其他取代基团，P不代表任何取代基团，C6位上取代基Q则仅代表氢原子；C14XY表示C14位处的结构是C"CH20、C14=CH2、C14(OH)CH=CH2、C14(OH)CH2OH、C14(OH)CH3、C14(OH)CHCH20、C14(OH)CH(OH)CH2OHC14OS(。)OCH2、C14OS02OCH2_^C14(0)CH=CH2;W和Z分别表示连接在C,2位和C,3位上的氧、卣素、巯基、C1C6烷氧基、C1C6烷胺基或C1C6烷巯基；通式(1)中，连接X、Y、Z、W、P和Q的"——"可代表"一，，或者本发明还提供通式(l)所示雷公藤二碎类内酯衍生物在制备用于治疗肿瘤等增生性疾病的药物中的应用。有益效果已有的构效关系研究表明雷公藤内酯醇的C-14-P羟基是活性必需基团，而本发明所获得的不含游离C-14-P羟基的雷公藤二碎类内酯衍生物绝大多数仍然保持了良好的肿瘤抑制活性，因此本发明在保留雷公藤内酯醇生物活性的同时降低其毒性的研究方面做出了重要贡献，为寻找新型的抗肿瘤药物提供了有益的选择。由于活性雷公藤二碎类内酯化合物的毒副作用主要体现在生殖系统方面，本发明将生殖系统肿瘤的治疗作为新药研发主要的适应症，有利于体现雷公藤二萜类内酯化合物在抗肺瘤作用上的特异性。本发明的雷公藤二萜类内酯衍生物能够明显抑制多种体外培养的肿瘤细胞、特别是生殖系统肿瘤细胞的生长，抑制作用具有明显的剂量依赖性，表明上述化合物对多种类型肿瘤尤其是生殖系统肺瘤具有良好的研究和应用价值。具体实施方式本发明一个优选实施方案是通式(l)中Q4XY为(14S)-14，21-环氧结构，W与Z为分别连接在<:12和C,3位的a(S)构型的氧，P为a(R)构型的氢或羟基，Q为氢的雷公藤二萜类内酯衍生物，即如下通式(2)所示的化合物本发明另一个优选实施方案是通式(l)中CwXY为(14S)-14，21-环氧结构，W为P(R)构型的卤素，Z为a(R)构型的羟基，P为a(R)构型的氢或羟基，Q为氢的雷公藤二萜类内酯衍生物，即如下通式(3)所示的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>(3)本发明再一个优选实施方案是通式(l)中d4XY为(14S)-14,21-环氧结构，W与Z为分别连接在d2和C,3位的a(S)构型的氧，C5和C6以碳碳双键相连的雷公藤二辟类内酯衍生物，即如下通式(4)所示的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>(4)本发明又一个优选实施方案是通式(l)中C^XY为C14=CH2,W与Z为分别连接在Cu和(313位的a(S)构型的氧，P为a(R)构型的氬或羟基，Q为氢的雷公藤二萜类内酯衍生物，即如下通式(5)所示的化合物本发明又一个优选实施方案是通式(l)中C14XY为C"(OH)CHCH20，连接在Cw-位的羟基可以为(R)构型也可以为(S)构型，C2,-位可以为(R)构型也可以为(S)构型，W与Z为分别连接在Cu和Cn位的a(S)构型的氧，P为a(R)构型的氢或羟基，Q为氢的雷公藤二薛类内酯衍生物，即如下通式(6)所示的化合物<1"-^z9、2108o(6)本发明又一个优选实施方案是通式(l)中C14XY为C14(OH)CH=CH2,连接在dr位的羟基可以为(R)构型也可以为(S)构型，W与Z为分别连接在Cu和Cu位的a(S)构型的氧，P为a(R)构型的氢或羟基，Q为氢的雷公籐二碎类内酯衍生物，即如下通式(7)所示的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>本发明还有一个优选实施方案是通式(l)中W与Z为分别连接在Cu和Cu位的a(S)构型的氧，P为a(S)构型的氬，Q为氲，C14XY为C14(OH)CH2OH、C"OS(0)OCH2或d40S020CH2，C14—立的构型可以为(R)构型也可以为(S)构型的雷公藤二萜类内酯衍生物，即如下通式(8)所示的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>(8)本发明的雷公藤二萜类内酯衍生物的合成方法概括如下通式(1)所示的化合物主要是以雷公藤内酯酮(LLDT-1)为起始物。例如，如反应流程式(l)所示，以雷公藤内酯酮(LLDT-1)为起始物，在非质子极性溶剂中，于室温条件下，利用Corey亚曱基化试剂在C"处形成S和R构型的一对环氧化合物(14S)-14-脱羟基-14,21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-67)与(14R)-14-脱羟基-14,21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-69);将(14S)-14-脱羟基-14，21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-67)溶解于非质子极性溶剂中，于加热条件下，由二氧化硒氧化得到(511，148)-501-羟基-14-脱羟基-14，21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-68)，同时得到少量A^-脱氢化合物(14S)-A"-脱氢-14-脱羟基-14，21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-70);将(14S)-14-脱羟基-14,21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-67)溶解于非质子极性溶剂中，用氯化氢或吡啶盐酸盐开环氧得到(12R,13R,14S)-12p-氯-13a-羟基-14-脱羟基-14，21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT國76)。LLDT"68LLDT-70LI_DT-76反应流程式(l)例如，如反应流程式(2)所示，以雷公藤内酯酮(LLDT-1)为起始物，在非质子极性溶剂中，利用乙烯基溴化镁格氏试剂进攻雷公藤内酯醇的d4-位羰基得到(14S)-l邻-乙烯基表雷公藤内酯醇(LLDT-65)和(128，138，148)-1201-羟基-1301，1401-环氧-1邻-乙烯基表雷公藤内酯醇(LLDT-73);进一步以(14S)-1邻-乙烯基表雷公藤内酯醇(LLDT-65)为原料，在极性溶剂中与过氧试剂发生C21、(:22位环氧化反应得到(14S,21R)-14p-氧杂环丙基表雷公藤内酯醇(LLDT-74)和(14S,21S)-l邻-氧杂环丙基表雷公藤内酯醇(LLDT-75)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>反应流程式(2)例如，如反应流程式(3)所示，以雷公藤内酯酮(LLDT-1)为起始物，用Tamao格氏试剂进攻雷公藤内酯醇的<:14-位羰基得到含硅的中间体(14S)-l邻-异丙氧基二甲基硅曱基表雷公藤内酯醇(LLDT-81)，该中间体进行筒单萃取浓缩后，不经分离纯化直接溶解于质子极性溶剂与非质子极性溶剂的混合溶剂中，氧化水解脱硅得到(14S)-l邻-幾曱基表雷公藤内酯醇(LLDT-62);进一步以(14S)-14(3-羟曱基表雷公藤内酯醇(LLDT-62)为原料，在极性溶剂中，碱性条件下，利用二氯亚砜将邻二醇结构转化为五元环亚硫酸酯结构的(14S,硫S)-14a,21-乙二醇环亚硫酸酯雷公藤内酯醇(LLDT-77)和(14S，硫R)-14a，21-乙二醇环亚疏酸酯雷公藤内酯醇(LLDT-78);两者进一步在氧化条件下转化为同一饱和的环硫酸酯化合物(14S)-14a,21-乙二醇环硫酸酯雷公藤内酯醇(LLDT-79)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>反应流程式(3)例如，如反应流程式(4)所示，以雷公藤内酯酮(LLDT-1)为起始物，在非质子极性溶剂中，利用碘曱烷格氏试剂进攻雷公藤内酯醇的C14-位羰基得到(14S)-14P-曱基表雷公藤内酯醇(LLDT-71);进而再在非质子极性溶剂中用三氟乙酸酐脱水得到C,4位环外双键产物14-脱羟基-14-亚曱基雷7>藤内酯醇(LLDT-72)。反应流程式(4)此外，(14S)-14-脱羟基-14,21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-67)也可通过如下方式获得，如反应流程式(5)所示，以(14S)-l邻-羟曱基表雷公藤<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>内酯醇(LLDT-62)为原料，用磺酰化试剂将C21位的末端羟基磺酰化后得到(14S)-l邻-磺酰氧基曱基表雷公藤内酯醇(其中R为磺酰基)，在碱的作用下合环得到(14S)-14-脱羟基-14,21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-67)。反应流程式(5)本说明书中所用的术语具有如下意义"烷氧基"可为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、异戊氧基、叔戊氧基、新戊氧基、2-曱基丁氧基、1，2-二曱基丙氧基、1-乙基丙氧基、己氧基等，优选曱氧基和乙氧基；"烷胺基"可为曱胺基、乙胺基、丙胺基、异丙胺基、丁胺基、异丁胺基、仲丁胺基、叔丁胺基、戊胺基、异戊胺基、叔戊胺基、叔戊胺基、新戊胺基等一低级烷胺基，或二曱胺基、二乙胺基、二丙胺基、二丁胺基、二异丁胺基等二低级烷胺基，优选为甲胺基、乙胺基、二曱胺基和二乙胺基；"烷巯基，，可为曱巯基、乙巯基、丙巯基、异丙巯基、丁疏基、异丁巯基、仲丁巯基、dl丁巯基、戊巯基、异戊巯基、叔戊巯基、新戊巯基、2-曱基丁巯基、1，2-二曱基丙巯基、1-乙基丙巯基、己巯基等，优选曱巯基和乙巯基；"极性溶剂，，为例如乙酸乙酯、二氧六环、丙酮、^i丁醇等；"非质子极性溶剂"指例如二曱亚砜、N，N-二曱基曱酰胺、二氯曱烷、三氯曱烷、四氢呋喃、二氧六环、乙二醇双曱醚等；"质子极性溶剂"指例如曱醇、乙醇、丙醇、叔丁醇等；"加热条件"指室温以上至溶剂回流温度；"过氧试剂"为例如间氯过氧苯甲酸、过氧叔丁醇、双氧水等；"磺酰化试剂"指例如曱磺酰氯、乙磺酰氯、苯磺酰氯、对曱苯磺酰氯、三氟甲磺酰氯、三氟曱磺酸酐等；"药学上可接受的盐"具体地可列举与丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸等有机酸和天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸形成酯后再与无机碱形成的盐，如钠、钾、铝盐和胺盐，或与有才几碱形成的盐，如曱胺盐、乙胺盐、乙醇胺盐等，或与赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸等碱性氨基酸形成酯后的盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硝酸、磷酸等无机酸的盐，或与曱酸、乙酸、苦味酸、曱磺酸、乙磺酸等有机酸的盐；"光学异构体"的含义包括对映异构体、非对映异构体、光学异构体的混合物及纯光学异构体。"增生性疾病"的含义包括肺瘤，不典型增生，但不局限于肿瘤和不典型增生。"肿瘤"的含义包括良性肿瘤和恶性肺瘤。图1.本发明中的15个化合物，与雷公藤曱素、雷公藤表曱素相比，对人卵巢癌SK-OV-3细胞的生长抑制作用。图2.本发明中的15个化合物，与雷公藤甲素、雷公藤表曱素相比，对人乳腺癌MDA-MB-468细胞的生长抑制作用。图3.本发明中的15个化合物，与雷公藤曱素、雷公藤表曱素相比，对人前列腺癌PC-3细胞的生长抑制作用。实施例下面结合实施例对本发明作进一步阐释，但这些实施例绝不是对本发明的任何限制。所用仪器及主要实验材料如下Fisher-Johns显微熔点仪(温度未经校正)，JASCODIP-181旋光仪，Perkin-Elmer599B型和NicoleMagan750型红外光谱仪，BrukerAM-400型和VarianMercuryphis-400型核磁共振仪，MAT-711和MAT-95型质谱仪，H及200-300目柱层析硅胶(青岛海洋化工厂)，HSGF254TLC板(烟台市化工研究院)。实施例1(14S)-14-脱羟基-14,21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-67)IXDT-1IXDT-67将(CH3)3S01(59.6mg，0.27mmol)和NaH(60%,9.5mg，0.24mmol)以固体形式混合，氩气保护下加入2mL无水二曱亚砜，室温搅拌20min,向其中滴加溶有雷公藤内酯酮(LLDT-1)(53.7mg，0.15mmol)的无水二曱亚砜溶液(2mL)，搅拌反应。TLC检测原料转化完全，加入3mL水淬灭反应，乙酸乙酯萃取，有机层用水、饱和食盐水洗涤，无水疏酸钠干燥，减压蒸除溶剂，所得粗产物经柱层析纯化(洗脱剂乙酸乙酯:环己烷=1:5)，立体专一性地得到白色固体(14S)-14-脱羟基-14,21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-67)(47.5mg,0.13mmol，产率85%)。"H國画R(CDCl3,300MHz)34.67(s，2H)，3.88(d，/=3.1Hz,1H),3.52(d,■/=3.1Hz，1H)，3.40(d,/=5.5Hz,1H)，2.84(d，J=5.1Hz，1H);2.80-2.69(m，2H),2.39-2.24(m，1H),2.21-2.05(m,2H),1.91-1.78(m,2H),1.57(dd，《/=8.7，4.9Hz,1H),1.29-1.17(m,1H)，1.05(s，3H),0,86((!，/=6.9Hz，3H),0.80(d，《/=6.9Hz,3H);13C-NMR(CDC13,100MHz)3173.2(Cq),160.2(Cq)，125.2(Cq),69.9(CH2)，65.2(Cq)，65.0(Cq),58.4(Cq),56.8(CH)，55.9(CH),55.6(Cq),54.1(CH)，47,9(CH2)，40.4(CH),35.6(Cq)，30,2(CH2)，23,4(CH2),23.2(CH),19.8(CH3),17.6(CH3)，17.0(CH2)，13.5(CH3);IR(KBr)3427，3016,2981,2929,1745，1674，1442,1022cm";MS(EI，70eV)m/z(%)373([M+l]+,2),372(IVT,I),357(5)，343(21),91(100);HRMS(EI)calcdforC21H2406372.1573,found372.1578;Anal.(C21H2406)calcdC67.73,H6.50，foundC67.54，H6.62;[a]2D°-138(c0,109,CHC13);mp245画246。C.实施例2(14S)-14卩-羟曱基表雷公藤内酯醇(LLDT-62)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>在反应瓶中称量镁屑(108mg，4.5mL),氩气置换保护反应体系；将异丙氧基二曱基氯曱基硅烷(0.72ml，4.0mmol)溶于7mL无水四氢吹喃中，氩气保护下取lmL该溶液滴加入镁屑反应体系中，并加入两滴1，2-二溴乙烷，40。C搅拌下引发格氏反应，随后将剩余的硅烷试剂的四氢呋喃溶液逐滴滴入反应体系中，5min滴加完毕，此时反应体系呈暗灰色。回流该反应体系45min,随后冷却至0。C。将溶于无水四氬吹喃的雷公藤内酯酮(LLDT-1)(358mg，1.0mL)滴加入上述新鲜制备的格氏试剂中。室温下搅拌反应2小时，饱禾口氯化铵溶液淬灭反应，乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤，无水疏酸钠干燥，减压蒸出溶剂得一单一加成产物。该加成产物不经纯化直接于40。C下溶于5mL曱醇和8mL四氢呋喃的混合溶剂中，搅拌下依次加入KHC03(416mg，4.2mmol)、KF(464mg,4.9mmol)和H2O2(30%，1.1mL,9.71mmol)。40。C下反应，TLC(环己烷乙酸乙酯=1:1)检查原料消失后，碌l代硫酸納水溶液(50%)中止反应。反应混合物用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤，无水石克酸钠干燥。浓缩后的粗产物经柱层析纯化(洗脱剂乙酸乙酯环己烷=1:3)得白色固体(14S)-l邻-羟甲基表雷公藤内酯醇(LLDT-62)(273mg，0.70mmo1，产率70%)。^誦NMR(CDC13，300MHz)34.67(s，2H)，4.26(d,/=11.6Hz,1H)，3.88-3.79(m，2H),3.64(d,/=11.6Hz，1H)，3.46(d,/=3.3Hz，1H)，2.76-2.64(m，1H)，2.45(sept.，《/=6.9Hz，1H),2.37-2.24(m,1H)，2.23-2.04(m,2H)，1.89(t,/=14.3Hz,1H),1.55(dd，/=12.5,4.9Hz,1H),1.24-1.11(m,1H)，1.07(s,3H)，0.92(d,/=6.9Hz,3H),0.89(d,/=6.9Hz，3H);13C-NMR(CDC13，100MHz)<5173.2(Cq),160.2(Cq)，125.4(Cq),74.4(Cq)，70.0(CH2)，67.5(Cq)，65.3(Cq)，65.2(CH2),65.0(Cq)，56.5(CH)，56.1(CH),54.4(CH),40.3(CH),36.0(Cq),30.1(CH2)，25.5(CH),23.4(CH2)，20.9(CH3),18.6(CH3)，17.1(CH2),13.7(CH3);IR(KBr)3415,3361,2966,2927，2875，1755，1724，1672，1439，1074，1018cm";MS(EI，70eV)w/z(%)391([M+1]十，2),372(1),71(100);HRMS(EI)calcdforC21H2707391.1757,found391.1752;[a]2D0-116(c0.085,CHC13);mp237-239°C.实施例3(14S)-14-脱轻基-14,21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-67)和(14R)-14-脱羟基-14,21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-69)IXDT-1IXDT-67LXDT-69氩气保护下将(CH3)3S01(374mg，1.7mmol)和^BuOK(174mg,1.5mmol)溶于6mL干燥的二曱亚砜中，该混合体系于室温下搅拌20min。将溶解于6mL干燥二甲亚砜溶剂中的雷公藤内酯酮(LLDT-1)(360mg,1.0mmol)加入上述混合物中，室温下搅拌反应至底物转化完全，加入10mL水淬灭反应，乙酸乙酯萃取，有机层用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸出溶剂后将粗产物经柱层析纯化(洗脱剂乙酸乙酯:环己烷-1:5)。所得白色固体用半制备HPLC分离得到一对差向异构体(14S)-14-脱羟基-14，21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-67)(0.196g，0.53mmol,产率53%)和(14R)-14-脱羟基-14，21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-69)(0.126g,0.34mmol，产率34%)。(14R)-14-脱羟基-14，21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-69):tH-NMR(CDC13，300MHz)(54.79(dt,/=16.8，2.6Hz，1H)，4.60(dd,/=16.8，3.0Hz,1H)，3.81(d,/=3.0Hz,1H),3.53(d，《/=3.0Hz，1H),3.39(d，/=4.2Hz,1H),2.89(d,/=5.1Hz,1H),2,85(d，/=5.1Hz,1H)，2.81-2.72(m,1H),2.39-2.27(m,1H)，2.17(dt，《/=10.2,4.2Hz,1H),2.11-1.94(m，1H),1.94-1.81(m,2H)，1.47-1.29(m，2H)，0.96(s,3H)，0.89(d，《/=6.9Hz,3H)，0.77(d，/=6.9Hz,3H);13C-NMR(CDC13,100MHz)(5173.2(Cq)，161,6(Cq),125.4(Cq)，70.8(CH2)，65.9(Cq),64.6(Cq)，58.3(Cq)，57.2(CH),56.2(CH)，55.9(Cq),54.7(CH)，48.2(CH2),36.9(CH),36.1(Cq)，28.4(CH2)，26.9(CH2)，23.0(CH),21.7(CH3)，20.2(CH3),17.3(CH3),16.6(CH2);IR(KBr)3433，2947，2929,1768，1755，1689，1442,1029cm";MS(EI，70eV)m/z(%)372(M+,1),357(9),343(18)，325(34),259(100);HRMS(EI)calcdforC21H2406372.1573,found372.1586;[a]2D0-156(c0.135,CHC13);mp177-179°C.实施例4(14S)-14-脱羟基-14，21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-67)IXDT-62IXDT-80IXDT-67将(14S)-l邻-羟曱基表雷公藤内酯醇(LLDT-62)(0.50g,1.3mmol)溶于干燥的吡啶中(4.0mL)。将该溶液冷却至O"C后滴加入MsCl(0.61mL,7.7mmo1)。室温下搅拌反应10min，减压蒸出溶剂。残留物加水稀释，乙酸乙酯萃取，有机层用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩所得粗产品经柱层析纯化(洗脱剂乙酸乙酯:环己烷=1:2)得到一无色油状物(14S)-14-C-曱磺酰氧曱基表雷公藤内酯醇(LLDT-80)(0.3卯g，0.85mmol,产率65%)。将(14S)-14-C-曱磺酰氧曱基表雷公藤内酯醇(LLDT-80)(0.504g,1.1mmol)溶解于20mL曱醇溶剂中，加入K2C03(1.33g，9.6mmol)。室温下搅拌反应20min后减压蒸出溶剂，残留物加水稀释，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水疏酸钠干燥。粗产品经柱层析纯化(洗脱剂乙酸乙酯:环己烷=1:5)得到白色固体(14S)-14-脱羟基-14,21-环氧雷公籐内酯醇(LLDT隱67)(307mg，0.82mmol,产率75%)。(14S)-14-C-曱磺酰氧曱基表雷公藤内酯醇(LLDT-80):^-NMR(CDC13，300MHz)34.71-4,57(m，4H),3.80(d，/=3.2Hz,1H),3.77(d,J=5.6Hz,1H)，3.47(d,J=3.0Hz，1H),3.10(s,3H)，2.78-2,67(m，1H),2.54(sept,Hz,1H),2,37-2.26(m,1H),2.25-2.06(m，1H)，1.91(dd，《/=14.8，13.4Hz，1H)，1.59-1.51(m,1H),1.28-1.13(m，2H)，1.07(s,3H),0.92(d,/=8.2Hz,3H),0.89((!，/=8.2Hz,3H);13C-NMR(CDC13,100MHz)<5173.2(Cq),跳l(Cq)，125.4(Cq),74.5(Cq)，72.0(CH2)，69.9(CH2)，67.8(Cq)，65.1(Cq),63.3(Cq),55.9(CH)，55.4(CH)，54.0(CH),40.5(CH)，37.5(CH),36.0(Cq),29.7(CH2)，25.6(CH3)，23.5(CH2)，20.5(CH3),18.5(CH3),17.1(CH2),13.5(CH3);IR(KBr)3483,3024,2972，2937,1749，1674，1446，1354,1174cm";MS(EI，70eV)附/z(%)468(IVT)，450(3),432(1)，407(1),354(17)，111(100);HRMS(EI)calcdforC22H28S09468.1454，found468.1457;[a招-114(c0.530,Acetone),实施例5(5R，14S)-5a-羟基-14-脱羟基-14,21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-68)和(14S)-A、脱氢-14-脱羟基-14,21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT画70;)IXDT-67LXDT-68IXDT-70将(14S)-14-脱羟基-14，21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-67)溶解于8mL1,4-二氧六环中，加入Se02(111mg,1.0mmol)。反应体系在回流状态下反应24h，随后停止反应，将反应体系冷却至室温，硅藻土过滤，乙酸乙酯洗涤滤渣，减压除去溶剂。残留物用乙酸乙酯和饱和碳酸钠溶液处理，有机层用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩后的粗产品经柱层析纯化(洗脱剂CH2Cl2)得到白色固体(5R，14S)-5-羟基-14-脱羟基-14,21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-68)(38.8mg，0.1mmol，产率50。/。)和(14S)-A5'6-脱氬-14-脱羟基-14，21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-70)(7.4mg，0.02mmol,产率10%)。(5R,14S)-5a-羟基-14-脱羟基-14，21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-68):^誦NMR(CDC13，300MHz)34.92(dt,/=17.1,3.1Hz,1H),4.71(dd,/=17.1，1.5Hz,1H)，3.92(d,/=3.3Hz，1H)，3.63(d,/=3.3Hz，lH)，3.40(d,/=4.7Hz，1H),2.86(d，J=5.1Hz，1H)，2.79(d,/=5.1Hz，1H),2.41-2.06(m，4H)，1.95-1.74(m,2H)，1.29(dd,J=12.7，4.9Hz，1H),1.12(s，3H)，0,87(d，J=6.9Hz，3H),0.84(d,J=6.9Hz,3H);13C-NMR(CDC13,100MHz)3173.2(Cq),159.0(Cq)，128.0(Cq)，72.3(Cq),68.7(CH2),65.8(Cq),63.2(Cq)，58.4(Cq)，56.4(CH)，55.5(Cq),55.0(CH)，54.5(CH)，48.0(Cq),40.6(Cq)，31.0(CH2)，24.6(CH2)，23.4(CH)，19,7(CH3)，17.8(CH3),17.4(CH2),16.2(CH3);IR(KBr)3479,2956，1736，1668，1442,1037cm";MS(EI,70eV)w/z(%)389([M+l]+，2),373(2)，359(100)，341(18);HRMS(EI)calcdforC21H2507389.1601,found389.1606;[a招-120(c0.223，CHC13);mp233-235°C.(14S)-A"-脱氢-14-脱羟基-14，21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-70):化NMR(CDC13,300MHz)(56.03(d，J=4.1Hz，1H)，4.95(d，/=16.0Hz，1H),4.83(dd,/=16.0,2.5Hz，1H)，3.86(d，J=3Hz，1H)，3.56-3.48(m,2H),2.92(d,/=4.9Hz，1H)，2.87(d，《/=4.9Hz，1H)，2.51-2.39(m，1H)，2.37-2,20(m,1H)，1.90(sept.,J=6.9Hz,1H),1.52-1.34(m,2H)，1.29(s,3H)，0.92(d，/=6.9Hz,3H)，0.78(d,/=6.9Hz，3H);13C-NMR(CDC13,100MHz)<5173.0(Cq),153,1(Cq)，140.4(Cq)，126,9(Cq)，121.8(CH)，68.9(CH2)，65.1(Cq),64.4(Cq)，61.3(Cq)，56.6(CH),55.8(Cq)，54.2(CH),53.7(CH)，48.4(CH2)，37.2(Cq)，30.3(CH2),23.1(CH),22.8(CH3),20.3(CH3)，17.2(CH3)，17.1(CH2);IR(KBr)3433,2979,2927，1747，1657,1358,1024cm";MS(EI，70eV)附/z(%)370(IVT，13)，355(22)，341(91)，327(95)，115(100);HRMS(EI)calcdforC21H2206370.1416，found370.1404;[a]2D0-443(c0.174,Acetone);mp205-207°C.实施例6(MS)-l邻-曱基表雷公藤内酯醇(LLDT-71)LXDT-1IXDT-71在氩气保护下将10mL无水乙醚加入镁屑(264mg,11.0mmol)反应瓶中，将溶于5mL干燥乙醚的CH3I经恒压滴液漏斗滴加到反应体系中。加毕该暗灰色反应体系在室温下搅拌30min。取1.37mL该新鲜制备的CH3MgI格式试剂溶液，逐滴加入已溶解于8mL干燥四氢呋喃的雷公藤内酯酮(LLDT-l)(90mg,0.25mmol)中。室温下反应1.5h后停止反应，反应体系用饱和氯化铵溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤，无水^Fu酸钠干燥，浓缩后的粗产品经柱层析纯化(洗脱剂乙酸乙酯:环己烷=1:4)得到白色固体(14S)-14p-曱基表雷公藤内酯醇(LLDT-71)(70mg,0.19mmo1,产率73%)。'H-画R(CDC13，300MHz)(54.66(s,2H)，3.75(d,/=3,2Hz,1H)，3.74(s,1H)，3.42(d，《/=3.2Hz，1H),2.75-2.63(m，1H)，2.47(sept.，J=6.9Hz，1H)，2.34-2.22(m,1H)，2.21-2.03(m，2H),1.85(t，《/=14.1Hz,1H)，1.58-1.48(m,4H),1.24-1.10(m，1H)，1.03(s,3H)，0,94(d,J=6.9Hz，3H)，0.79(d，J=6.9Hz,3H);13C-NMR(CDC13，100MHz)3173.4(Cq),160.7(Cq),125.2(Cq)，74.3(Cq)，70.0(CH2)，68.8(Cq),64.9(Cq)，64.2(Cq)，57.1(CH)，55.1(CH),54.2(CH),40.4(CH)，36.0(Cq),29.7(CH2),25.5(CH),24.3(CH),23.8(CH2)，21.4(CH3),18.3(CH3)，17.1(CH2),13.5(CH3);IR(KBr)3506,2964，2875,1765,1678，1441,1375，1026cm";MS(EI,70eV)w/z(%)375([M+l]+，5)，357(7),345(8)，331(47)，71(100);HRMS(EI)calcdforC21H2706375.1808,found375.1824;[a]2D0-79(c0.080,CHC13);mp227-228°C.实施例714-脱羟基-14-亚曱基雷公藤内酯醇(LLDT-72)IXDT-71IXDT-72将MsCl(0.18mL，2.2腿ol)、千燥的Et3N(2.17mL,15.6mmol)和干燥的吡咬(2.4mL,29.6mmol)依次加入7mL干燥的CH2Cl2溶剂中。室温下，将(14S)-14p-曱基表雷公藤内酯醇(LLDT-71)(130mg,0.35mmol)溶解于5mL干燥的CH2Cl2中，加入上述的反应体系中，搅拌下向该反应体系滴加三氟醋肝(0.24mL,1.7mmol),室温下反应2h后加水中止反应。减压除去溶剂，残留物用乙酸乙酯萃取，有机层用水、饱和食盐水洗涤，无水^琉酸钠干燥。浓缩后的粗产品经柱层析纯化(洗脱剂乙酸乙酯:环己烷=1:5)得到淡黄色固体14-脱羟基-14-亚曱基雷公藤内酯醇(LLDT-72)(102mg，0.29mmol,产率82%)。!H-画R(CDC13，300画z)35.56(s,1H)，5.36(s，1H),4.67(s，2H),3.85(d，3.2Hz,1H)，3.54(d，/=3.2Hz,1H)，3.07(d，《/=5.3Hz，1H),2.82-2.70(m，1H)，2.44(sept"/=6,6Hz，1H),2.35-2.23(m,1H)，2.22-2.03(m，2H)，1.92(t,/=13.8Hz,1H),1.55(dd，/=12.5，4.5Hz，1H)，1.31-1.14(m,1H)，1.09(s，3H),0.95(d，/=6.6Hz，3H)，0.86(d，/=6.6Hz，3H);13C-NMR(CDC13,100MHz)3173.3(Cq),跳4(Cq)，140.5(Cq)，125.3(Cq)，116.2(CH2)，70.0(CH2),64.7(Cq),64.4(Cq)，63.1(CH)，60.0(Cq),56.2(CH)，55.3(CH)，40.4(CH),35.6(Cq),30.3(CH2),27.0(CH)，23.9(CH2)，18.7(CH3),17.1(CH2)，16.9(CH3),13.7(CH3);IR(KBr)3473，3033，2979，2945，2873,1751,1678,1633,1439,1390,1350,1072，1016cm-1;MS(EI,70eV)m/z(%)355([M-l]+，7),341(6),328(21),327(100);HRMS(EI)calcdforC21H2305355.1546,found355.1545;[a]2D0-106,1(c0.555，CHC13);mp227-229°C.实施例8(14S)-14P-乙烯基表雷公藤内酯醇(LLDT-65)IXDT-1IXDT-65将雷公藤内酯酮(LLDT-l)(650mg,1.8mmol)溶解于16mL无水四氢呋喃中，氩气保护下于0。C加入3.3mL乙烯基溴化4^格氏试剂(1M的THF溶液，1.8mmol)，于该温度下反应3h，饱和氯化铵溶液淬灭反应，乙酸乙酯萃取，有机层用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后的粗产品经柱层析纯化(洗脱剂乙酸乙酯:环己烷-l:2)得到白色固体(14S)-14P-乙烯基表雷公藤内酯醇(LLDT-65)(286mg,0.74mmol，产率41%)。^國NMR(CDC13,300MHz)(56.47(dd,/=17.6，11.1Hz,1H)，5.32(dd,/=16.8，11.1Hz,2H)，4.67(s，2H),3.81(d,J-3.2Hz,1H),3.75(d:/=5.8Hz，1H)，3.48(d，《/=3.2Hz，1H)，2.78-2.66(m,1H)，2.46-2.24(m，2H),2.23-2.04(m，2H)，1.89(t，/=14.7Hz,1H),1.57(dd，/=12.5,4.2Hz，1H),1.29-1.13(m，1H)，1.06(s,3H),0.87(d，《/=6.9Hz，3H),0.82(d，《/=6.9Hz,3H);13C-NMR(CDC13,100MHz)3173.3(Cq)，160.4(Cq)，139.0(CH)，125.4(Cq),115.1(CH2),77.0(Cq)，70.0(CH2),67.8(Cq)，65.0(Cq)，63.5(Cq)，56.8(CH),55.2(CH),54.4(CH),40.4(CH),36.1(Cq)，29.7(CH2)，25.1(CH)，23.8(CH2)，21.2(CH3),18.2(CH3),17.1(CH2),13.4(CH3);IR(KBr)3467，2968,2933,2873,1751,1674,1442,13851171，1020cm";MS(EI，70eV)m/z(%)387([M+l〗+，1)，343(13),325(17)，297(100);HRMS(EI)calcdforC22H2606386.1730,found386.1724;[a]2D2-104.8(c0.356,CHC13);mp191國193。C.实施例9(MS)-l邻-乙烯基表雷公藤内酯醇(LLDT-65)和(128，138，148)-1201-羟基-1301，1401-环氧-1邻-乙烯基表雷公藤内酯醇(LLDT國73)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula>将雷公藤内酯酮(LLDT-1)(650mg,1.8mmol)溶解于16mL无水四氬呋喃中，氩气保护，于室温下加入3.3mL乙烯基溴化镁格氏试剂(IM的THF溶液，1.8mmol)并于室温下搅拌反应2h，加入饱和氯化铵溶液中止反应，乙酸乙酯萃取，有机层用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后的粗产品经柱层析纯化(洗脱剂乙酸乙酯:环己烷=1:2)得到白色固体(14S)-14卩-乙烯基表雷公藤内酯醇(LLDT-65)(201mg,0.52mmol,产率29。/。)和(12S，13S,14S)-12a-羟基-13a，14a-环氧-14p國乙烯基表雷公藤内酯醇(LLDT-73)(139mg，0.36mg,产率20%)。(12S,13S,14S)-12a-羟基-13a，14a-环氧-14p-乙烯基表雷公藤内酯醇(LLDT國73):^國NMR(CDC13，300MHz)<55.88(dd,J=17.1，10.8Hz，1H),5.32(dd，《/=10,8,1.8Hz,1H),5.25(dd,/=17.1,2.1Hz,1H)，4.69(s，2H)，4.39(dd,J=10.8，1.8Hz，1H),3.49(d,/=2.7Hz,1H),3.42(d，/=5.7Hz，1H)，2.65-2.54(m，1H)，2.41-2.27(m，1H),2.21-1.90(m，3H)，1.69-1.55(m，1H)，1.74(sept"J=7.2Hz，1H),1.36-1.23(m,1H),1.09(d,/=7.2Hz，3H)，1.07(s,3H)，0.87(d,/=7.2Hz,3H);13C-NMR(CDC13,100MHz)3173.3(Cq),160.0(Cq),129.3(CH),125.5(Cq),119.4(CH2),70.3(Cq)，70.0(CH2)，68.4(Cq)，61.3(CH),60.8(Cq)，58.0(CH),57.7(Cq)，55.3(CH),40.2(CH),35.0(Cq),30.9(CH2)，29.3(CH)，22.4(CH2),17.6(CH3),17.4(CH3)，17.1(CH2),13.9(CH3);IR(KBr)3458，2966,2931,2873，1743，1676，1444，1390,1066,1022cm";MS(EI,70eV)m/z(%)386(M+，3)，371(4)，357(5)，339(8)，55(100);HRMS(EI)calcdforC22H2606386.1729，found386.1738;[a]2D5-690.265,Acetone);mp199-200°C.实施例10(14S，21R)-l邻-氧杂环丙基表雷公藤内酯醇(LLDT-74)和(148,218)-1邻-氧杂环丙基表雷公藤内酯醇(1^0丁-75)IXDT-65IXDT-74IXDT-75将(14S)-l邻-乙烯基表雷公藤内酯醇(LLDT-65)(97mg，0.25mmol)溶解于10mLCH2C12中，依次加入Na2HP0412H20(450mg，1.3mmol)和m-CPBA(70-75%,339mg，2.0mmol)。反应体系在室温下反应36h后加入饱和石克代辟b酸钠溶液淬灭，加水处理后用CH2Cb萃取，有机层用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后的粗产品经柱层析纯化(洗脱剂氯仿)得到白色固体(14S,21R)-l邻-氧杂环丙基表雷公藤内酯醇(LLDT-74)(32.2mg,0.08mmol,产率32。/0)和(14S,21S)-1邻画氧杂环丙基表雷公藤内酯醇(LLDT-75)(26.1mg，0.065mmol,产率26%)。(14S，21R)-14p-氧杂环丙基表雷公藤内酯醇(LLDT-74):^画NMR(CDC13，300MHz)<54.67(s,2H),3,84(d，3.0Hz,1H),3.70(d,J-5.7Hz，1H),3.61(dd，J=4.2,3.0Hz，1H)，3.52(d,/=3.0Hz,1H)，2,96(dd，《/=4.5,2.7Hz，1H),2.85(t,J=4.2Hz，1H),2.78-2.66(m,1H)，2.47-2.23(m,2H),2.21-2.04(m，2H)，1.84(t，J=13.5Hz,1H),1.55(dd,/=12.3,5.4Hz，1H)，1.29-1.14(m，1H),1.06(s,3H),1,00(d，/=6.9Hz,3H),0.87(d，6.9Hz，3H);13C-NMR(CDC13,100MHz)3173.3(Cq),160.4(Cq)，125.3(Cq)，71.8(Cq)，70.0(CH2)，69.3(Cq)，65.6(Cq)，62.9(Cq),55.6(CH)，55.3(CH)，54.2(CH)，53.6(CH)，43.9(CH2),40.5(CH)，36,0(Cq),30.1(CH2)，25.5(CH),23.5(CH2),20.6(CH3)，18.2(CH3)，17.1(CH2)，13.6(CH3);IR(KBr)3411,2964,2929，2875，1751,1680,1448,1248，1026cm-1;MS(EI，70eV)附/z(%)402(]VT，3)，385(1)，360(6),71(100);HRMS(EI)calcdforC22H2607402.1679,found402.1685;[a]2D3-98.2(c0,450，Acetone);mp256-258。C.(14S,21S)-l邻-氧杂环丙基表雷公藤内酯醇(LLDT-75):^-NMR(CDC13，300MHz)34.67(s，2H)，3.91(dd,J=3.9，3.0Hz,1H)，3.84(d,J=3.3Hz,1H)，3.63(d，《/=5.7Hz,1H)，3.47(d，/=3.3Hz,1H)，2.79(dd,/=3.0，2,7Hz,1H)，2.76-2.72(m,1H),2.70(t，/=3.9Hz,1H),2.42-2.24(m，2H)，2.22-2.04(m，2H)，1.90(t，/=14.1Hz),1.58(dd，J-12.6,5.7Hz，1H),1.26-1.13(m,1H),1.12(s,3H),0.93(d,7=6.9Hz，3H)，0.78(d，《/=6.9Hz，3H);13C-NMR(CDC13，100MHz)3173.3(Cq)，160.3(Cq)，125.4(Cq)，72.8(Cq),69.9(CH2)，66.3(Cq)，65.5(Cq),63.5(Cq)，55.1(CH)，55.0(CH)，53.5(CH)，52.8(CH)，42.0(CH2),40.5(CH)，36.2(Cq),29.7(CH2)，25.1(CH),23.6(CH2),20.7(CH3),17.8(CH3)，17.1(CH2)，13.5(CH3);IR(KBr)3464，2929,2252，1751,1674，1446，13卯，1090，1026cm";MS(EI，70eV)m/z(%)403([M+l]+,5),402(IVT，1),387(3),359(32),71(100);HRMS(EI)calcdforC22H2607402.1679,found402.1696;[a]2D5-116.7(c0.85,Acetone);mp165-167。C.实施例11(12R，13R，14S)-12p-氯-13a-羟基-14-脱羟基-14,21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-76)IXDT-67IXDT-76将(14S)-14-脱羟基-14，21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-67)溶解于6mL丙酮中，加入6mL盐酸溶液(1.67%，2.7mmol)。混合物在回流状态下反应7h。减压蒸出溶剂后所得残留物用水处理，乙酸乙酯萃取，有机层用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后的粗产品经柱层析纯化(洗脱剂乙酸乙酯:环己烷=1:3)得到白色固体(12R，13R,14S)-12卩-氯-13a-羟基-14-脱羟基-14,21-环氧雷公藤内酯醇(LLDT-76)(17.5mg，0.043腿ol，产率39%)。'H画丽R(CDC13,300MHz)34.69(s,2H)，4.16(d,5.4Hz，1H),3.75(d，/=5.7Hz，1H)，3.46((!，/=6.0Hz,1H)，2.90(d,/=4.9Hz,1H)，2.94-2.83(m,1H),2.78(d，/=4.9Hz，1H)，2.36-2.25(m,1H),2.21-2.04(m,2H),1.94-1.74(m,2H)，1.59(dd,J=12.5,5.1Hz,1H)，1.35-1.21(m，1H),1.03(s，3H)，0.99(d，J=2.3Hz,3H),0.96(d，/=2.3Hz，3H);13C-NMR(Acetone-d6,100MHz)(5173.7(Cq)，162.2(Cq),124.6(Cq)，76.6(Cq),70.7(CH2),69.928.8(CH)，23.1(CH2)，18.0(CH3)，17.4(CH2)，16.3(CH3),13.9(CH3);IR(KBr)3462,2933,2252,1743,1674,1439，1003cm";MS(EI,70eV)m/z(%)408(Nf，9),390(3),373(8),365(100);HRMS(EI)calcdforC21H25C106408.1339,found408.1339;[a]2D5-97.9(c1.15，Acetone);mp174扁175。C.实施例12(14S,硫S)-14a,21-乙二醇环亚硫酸酯雷公藤内酯醇(LLDT-77)和(14S,硫R)-14a，21-乙二醇环亚硫酸酯雷公藤内酯醇(LLDT-78)IXDT-62IXDT-77IXDT-78将(14S)-l邻-轻曱基表雷公藤内酯醇(LLDT-62)溶解于6mL无水CH2C12中,滴加干燥的Et3N(0.21mL,1.6mmol)。反应体系冷却到0°C，在氩气保护下将SOC12(0.3mL,1.2mmol)小心加入反应体系中，搅拌反应2h后，加入水中止反应，CH2Cl2萃取，有机层用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后的粗产品经柱层析分离纯化(洗脱剂乙酸乙酉旨:环己烷=1:5)得到白色固体(14S,硫S)-14a，21-乙二醇环亚硫酸酯雷公藤内酯醇(LLDT-77)(39.2mg,0.09mmol，产率43。/0)和(14S,硫R)-14,21-乙二醇环亚硫酸酯雷公藤内酯醇(LLDT-78)(30.5mg,0.07mmol,产率36%)。(14S，疏S)-14a，21-乙二醇环亚硫酸酯雷公藤内酯醇(LLDT-77):'H-NMR(CDC13，300MHz)<54.93(d，J=9.6Hz,1H),4.68(s，2H),4.58(d，J=9.6Hz,1H)，3.84(d，3.0Hz，1H),3.71(d,J=5.4Hz，1H)，3.61(d,J=3.0Hz，1H),2.78-2.67(m,1H),2.61(sept"J=6.9Hz,1H)，2.38-2.26(m，1H)，2.25-2.04(m，2H)，1.91(t,/=14.4Hz，1H),1.54(dd,/=12.3,4.5Hz,1H),1.28-1.13(m,1H),1.07(s，3H),0.95(d，《/=6.9Hz,3H),0.93((!，《/=6.9Hz,3H);13C-NMR(CDC13,100MHz)3173.1(Cq),159.8(Cq),125.5(Cq),91.9(Cq),74.1CCH2),69.9(CH2),65.1(Cq),64.9(Cq)，61.7(Cq)，56.5(CH),55.6(CH),55.5(CH),40,4(CH),35.8(Cq)，30.0(CH2),25.7(CH),23.3(CH2),20.6(CH3)，18.7(CH3)，17.1(CH2)，13.5(CH3);IR(KBr)3475,2972，2933,2875，1745,1680，1441,1219，1018cm";MS(EI，70eV)w/z(%)4362),407(1)，393(6)，241(100);HRMS(EI)calcdforC21H24S08436.1192,found436.1199;[a]2D5-97,0(c0.400,Acetone);mp269-271°C.(14S，硫R)-14a，21-乙二醇环亚硫酸酯雷公藤内酯醇(LLDT-78):^誦NMR(CDC13，300MHz)S4.80(d,/=9.6Hz,1H)，4.68(s，2H),4.58(d，/=9.6Hz，1H)，3.84(d,/=3.2Hz，1H)，3.79(d,/=5.4Hz,1H),3.53(d，/=3.2Hz，1H)，2.80-2,68(m，1H),2.38-2,26(m，1H)，2.25-2.01(m，3H)，1.96(t,J=14.4Hz，1H)，1.54(dd，《/=12.6,5.1Hz,1H)，1.28-1.15(m,1H),1.09(s，3H)，0.92(d,/=6.9Hz，3H),0.90(d,/=6,9Hz,3H);13C-NMR(CDC13，100MHz)<5173.1(Cq)，159.9(Cq)，125.3(Cq)，92.5(Cq)，74.1(CH2)，69.9(CH2),66.5(Cq),65.0(Cq)，61.0(Cq),58.3(CH)，55.4(CH),54.7(CH),40.4(CH),35.7(Cq)，30.2(CH2)，25.7(CH),23.3(CH2)，20.5(CH3),18.2(CH3),17.0(CH2)，13.4(CH3);IR(KBr)3435,2970,2933,2877,2254，1755,1674,1444，1346,1223，1020cm";MS(EI,70eV)m/z(%)436(M+,7)，421(9),71(100);HRMS(EI)calcdforC21H24S08436.1192,found436.1182;[a]2D5-96.9(c0.425，Acetone);mp160-162°C.实施例13(14S)-14a,21-乙二醇环硫酸酯雷公藤内酯醇(LLDT-79)LLDT-77或LLDT-78LLDT-79将(14S，硫S)-14a，21-乙二醇环亚硫酸酯雷公藤内酯醇(LLDT-77)或(14S，硫R)-14a，21-乙二醇环亚硫酸酯雷公藤内酯醇(LLDT-78)(40mg:0.092mmol)溶解于4mL乙腈中，依次加入高碘酸钠(31mg,0.14mmo1)，RuCl33H20(6mg,0.028mmol)和1mL水，室温下才觉拌反应15min,减压蒸出溶剂，浓缩物用水稀释后用乙酸乙酯萃取，水、饱和食盐水洗涤有才M目，无7jc硫酸钠干燥，浓缩后的粗产品经柱层析纯化(洗脱剂乙酸乙酯:环己烷=1:4)得到白色固体(14S)-14a，21-乙二醇环硫酸酯雷公藤内酯醇(LLDT-79)(36mg，0.079mmol,产率86%)。^-NMR(CDC13，300MHz)34.92(d，《/=10.2Hz,1H)，4.74-2.63(m,3H),3.87(d，《/=2.8Hz,1H)，3.83(d,J=5,4Hz，1H)，3.65(d，/=2.8Hz，1H)，2.79-2.68(m,1H)，2.51(sept，7=6.6Hz,1H),2.39-2,06(m:3H)，1.98(t，《/=13.8Hz，1H),1.53(dd,J-12.2，5.1Hz，1H)，1.29-1.13(m，1H),L09(s，3H),0.99(d，/=6.6Hz,3H)，0.97(d,/=6.6Hz,3H);13C-NMR(CDC13，100MHz)3172.9(Cq),159,4(Cq),125.6(Cq)，91.3(Cq),73.4(CH2),69.9(CH2),66.3(Cq),65.2(Cq)，61.9(Cq)，58.3(CH)，55.7(CH),55.5(CH)，40.3(CH),35.7(Cq)，30.2(CH2)，25.5(CH)，23.2(CH2),20.4(CH3)，18.3(CH3)，17.0(CH2),13.4(CH3);IR(KBr)3442,2970,2941,1749,1676，1441，1394，1217,1001cm-1;MS(EI，70eV)m/z(%)452(M+，8)，437(10),423(10),111(100);HRMS(EI)calcdforC2iH24S09452.1141,found452.1169;[《國107(c0.275,CHC13);mp205墨207。C.药效学评价试验例以下试验例中，受试样品由本发明化学合成实施例提供，以先导化合物雷公藤内酯醇(LLDT-2)作为阳性对照。试验例1本发明的15个化合物对体外培养的人卵巢癌SK-OV-3细胞的生长抑制作用。方法人卵巢癌SK-OV-3细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养基(Gibco，美国)培养，培养条件为37。C、5%C02。月中瘤细胞0.7x104/孔接种于96-孔板，24小时后，加入贮备液为二曱基亚砜配制(1(T2M)、生理盐水稀释的各化合物，使培养基中终浓度为io-4、IO'5、io-6、l(T7、1(T8M,作用72小时。弃去培养液，用10%冷三氯醋酸固定细胞。用磺酰罗丹明B(SulforhodamineB，SRB)溶液染色。洗去未结合SRB后，Tris溶解与蛋白结合的SRB，酶标仪在560nm波长下测定OD值。按下列公式计算细胞生长抑制率抑制率-(OD值对亂-OD值给g)/OD值对照孔xl00。/。。结果判定标准无效1(T5M<50%;有效1(T5M^50%。结果在本发明的15个化合物中，11个化合物LLDT-65、LLDT-67、LLDT画68、LLDT-69、LLDT國70、LLDT-71、LLDT-72、LLDT-74、LLDT國75、LLDT-76、LLDT-78剂量依赖性地抑制体外培养的人卵巢癌SK-OV-3细胞生长，显示其具有有效的体外抗肿瘤作用。具体结果见表1及附图1。表l.化合物对人卵巢癌SK-OV-3细胞的生长抑制作用.<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>试验例2本发明的15个化合物对体外培养的人乳腺癌MDA-MB-468细月包的生长抑制作用。方法人乳腺癌MDA-MB-468细胞用含10%胎牛血清的1640培养基(Gibco，美国)培养，培养条件为37。C、5%C02。肿瘤细胞0.7x104/孔接种于96-孔板，24小时后，加入用二甲基亚石风配制(10-2M)、生理盐水稀释的化合物，使培养基中各化合物的终浓度为10-4、10-5、10-6、10-7、10-8M,作用72小时。弃去培养液，用10%冷三氯醋酸固定细胞。用磺酰罗丹明B(SulforhodamineB，SRB)溶液染色。洗去未结合SRB，Tris溶解与蛋白结合的SRB,用酶标仪在560nm波长下测定OD值。按下列公式计算细胞生长抑制率抑制率-(OD值对照孔-OD值给药孔)/OD值对照孔x100。/。。结果判定标准无效1(T5M<50%;有效10-5M250%。结果在本发明的15个化合物中，9个化合物LLDT-65、LLDT-67、LLDT-68、LLDT-69、LLDT-70、LLDT画72、LLDT陽74、LLDT-75、LLDT-76剂量依赖性地抑制体外培养的人乳腺癌MDA-MB-468肿瘤细胞的生长，显示其具有有效的抗肿瘤作用。具体结果见表2及附图2。表2.化合物对人乳腺癌MDA-MB-468细胞的体外生长抑制作用.<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>试验例3本发明的15个化合物对体外培养的人前列腺癌PC-3细胞的生长抑制作用。方法人前列腺癌PC-3细胞用含10%胎牛血清的F-12培养基(Gibco，美国)培养，培养条件为37°C、5°/。C02。肿瘤细胞0.7xl04/孔接种于96-孔板，24小时后，加入用二曱基亚砜配制(10-2M)、生理盐水稀释的化合物，4吏培养基中各化合物的终浓度为10-4、10-5、10-6、10-7、10-8M,作用72小时。弃去培养液，用10%冷三氯醋酸固定细胞。用磺酰罗丹明B(SulforhodamineB,SRB)溶液染色。洗去未结合SRB,Tris溶解与蛋白结合的SRB,用酶标仪在560nm波长下测定OD值。最后用以下列公式计算细胞生长抑制率抑制率=(OD值对照孔-OD值给药孔)/OD值对照孔x100。/。。结果判定标准无效1(T5M<50%;有效1(T5M^50%。结果在本发明的15个化合物中，11个化合物LLDT-65、LLDT-67、LLDT-68、LLDT-69、LLDT-70、LLDT-71、LLDT國72、LLDT-74、LLDT國75、LLDT-76、LLDT-78剂量依赖性地抑制体外培养的人前列腺癌PC-3肿瘤细胞的生长，提示它们可能具有抗肿瘤作用。具体结果见表3及附图3。表3.化合物对人前列腺癌PC-3细胞的生长抑制作用.<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>本发明着重对雷公藤内酯酮的C-14官能团进行化学结构修饰和改造，获得了具有全新化学结构的雷公藤二萜类内酯衍生物。已有的构效关系研究表明雷公藤内酯醇的C-14-P羟基是活性必需基团，而本发明所获得的不含游离C-14-P羟基的雷公藤二萜类内酯衍生物绝大多数仍然保持了良好的肿瘤抑制活性，能够明显抑制多种体外培养的肿瘤细胞的生长，包括对人卵巢癌SK-OV-3细胞的生长抑制、对人乳腺癌MDA-MB-468细胞的生长抑制及对人前列腺癌PC-3细胞的生长抑制等，并且抑制作用具有明显的剂量依赖性，表明上述化合物对多种类型肿瘤尤其是生殖系统肿瘤具有良好的研究和应用价值。以上的化合物合成实施例及药效学评价试验例仅仅是举例说明本发明提供的化合物的结构及其合成方法与药理实验结果，但对本领域的技术人员来说可以对此作出种种修改和变化，而不背离本发明的精神和范围，所附的权利要求书覆盖本发明范围内的所有这些修改。产业上利用的可能性本发明以雷公藤内酯酮为起始物，提供了新型雷公藤二萜类内酯衍生物及相关的合成方法。本发明的雷公藤二萜类内酯衍生物，除少部分化合物在体外抗肿瘤实验中无效外，其它化合物均能明显抑制多种体外培养的肿瘤细胞的生长，抑制作用具有明显的剂量依赖性，表明上述化合物对多种类型肿瘤均有效。本发明的雷公藤二萜类内酯衍生物可用于制备预防和/或治疗肿瘤等增生性疾病的药物，具有良好的用于治疗包括前列腺癌、人卵巢癌、乳腺癌、肝癌、粒细胞性白血病、结肠癌、阿霉素敏感的乳腺癌、阿霉素抗药的乳腺癌等增生性疾病的肿瘤的应用前景。权利要求1.式(1)所示雷公藤二萜类内酯衍生物、其光学异构体及其药学上可接受的盐及水合物id="icf0001"file="S2008100358919C00011.gif"wi="60"he="55"top="55"left="79"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中C5和C6以碳碳单键或碳碳双键相连；当C5和C6以碳碳单键相连时，P和Q分别表示连接在C5位和C6位上的氢、氧、羟基、卤素、巯基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷胺基或C1～C6烷巯基；当C5和C6以碳碳双键相连时，此时C5除与C4、C6以及C10连接外无其他取代基团，P不代表任何取代基团，C6位上取代基Q则仅代表氢原子；C14XY表示C14位处的结构是id="icf0002"file="S2008100358919C00012.gif"wi="14"he="7"top="202"left="105"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>、C14＝CH2、C14(OH)CH＝CH2、C14(OH)CH2OH、C14(OH)CH3、id="icf0003"file="S2008100358919C00013.gif"wi="27"he="7"top="222"left="95"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>、C14(OH)CH(OH)CH2OH、id="icf0004"file="S2008100358919C00014.gif"wi="55"he="8"top="242"left="28"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>或C14(O)CH＝CH2；W和Z分别表示连接在C12位和C13位上的氧、羟基、卤素、巯基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷胺基或C1～C6烷巯基；在上式中，连接X、Y、Z、W、P和Q的“——”代表“id="icf0005"file="S2008100358919C00021.gif"wi="5"he="1"top="40"left="149"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>”或者“id="icf0006"file="S2008100358919C00022.gif"wi="5"he="1"top="40"left="170"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>”2、如权利要求1所述的雷公藤二萜类内酯衍生物，其中，C14XY为(14S)-14,21-环氧结构，W与Z为分别连接在(312和Cu位的a(S)构型的氧，P为a(R)构型的氢或羟基，Q为氢，即如下通式(2)所示的化合物(2)。3、如权利要求1所述的雷公藤二碎类内酯衍生物，其中，C14XY为(14S)-14,21-环氧结构，W为P(R)构型的卣素，Z为a(R)构型的羟基，P为a(R)构型的氢或羟基，Q为氬，即如下通式(3)所示的化合物4、如权利要求1所述的雷公藤二萜类内酯衍生物，其中，C14XY(3)。为(14S)-14，21-环氧结构，W与Z为分别连接在C,2和Cu位的a(S)构型的氧，C5和C6以碳碳双4建相连，即如下通式(4)所示的化合物(4)。5、如权利要求1所述的雷公藤二萜类内酯衍生物，其中，C"XY为C14=CH2，W与Z为分别连接在<:12和C,3位的a(S)构型的氧，P为a(R)构型的氢或羟基，Q为氢，即如下通式(5)所示的化合物(5)。6、如权利要求1所述的雷公藤二萜类内酯衍生物，其中，C"XY为c14(oh)chch2o，连接在C!4-位的羟基为(R)构型或(S)构型，C2广位为(R)构型或(S)构型，W与Z为分别连接在d2和C,3位的a(S)构型的氧，P为a(R)构型的氢或羟基，Q为氢，即如下通式(6)所示的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>7、如权利要求1所述的雷公藤二萜类内酯衍生物，其中，C14XY为c14(oh)ch=ch2,连接在Q4-位的羟基为(R)构型或为(S)构型，W与Z为分别连接在C,2和(:13位的a(S)构型的氧，P为a(R)构型的氬或羟基，Q为氢，即如下通式(7)所示的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>8、如权利要求1所述的雷公藤二萜类内酯衍生物，其中，W与Z为分别连接在Cu和Cu位的a(S)构型的氧，P为a(S)构型的氢，Q为氢，C14XY为C14(OH)CH2OH、CwOS(0)och2或C"os020ch2，<^14"立的构型为(R)构型或为(S)构型，即如下通式(8)所示的化合物(14S)-14-脱羟基-14,21-环氧雷公藤内酯醇;(14R)-14-脱羟基-14,21-环氧雷公藤内酯醇;(5R,14S)-5a-羟基-14-脱羟基-14，21-环氧雷公藤内酯醇;9.<image>imageseeoriginaldocumentpage6</image>(12R,13R,14S)-12(3-氯-13a-羟基-14-脱羟基-14，21-环氧雷公藤内酉l醇；(14S)-A^-脱氢-14-脱羟基-14，21-环氧雷公藤内酯醇;14-脱羟基-14-亚曱基雷公藤内酯醇;(14S，21R)-14卩-氧杂环丙基表雷公藤内酯醇;<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>(12S,13S,14S)-12a-羟基-13a,14a-环氧-14P-乙烯基表雷公籐内酯醇;(MS,硫S)-Ma,21-乙二醇环亚硫酸酯雷公藤内酯醇;(14S,硫R)-14a,21-乙二醇环亚硫酸酯雷公藤内酯醇;(14S)-14a，21-乙二醇环硫酸酯雷公藤内酯醇。10、权利要求1所述的雷公藤二碎类内酯衍生物在制备用于治疗包括前列腺癌、人卵巢癌、乳腺癌三种增生性肿瘤疾病药物中的应用。全文摘要本发明涉及式(1)所示雷公藤二萜类内酯衍生物、其光学异构体及其药学上可接受的盐及水合物(其中，C₅和C₆以碳碳单键或碳碳双键相连；当C₅和C₆以碳碳单键相连时，P和Q分别表示连接在C₅位和C₆位上的氢、氧、羟基、卤素、巯基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷胺基、或C1～C6烷巯基；C₁₄XY表示C₁₄位处的结构是(见上图)W和Z分别表示连接在C₁₂位和C₁₃位上的氧、羟基、卤素、巯基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷胺基或C1～C6烷巯基，式中连接X、Y、Z、W、P和Q的“——”可代表“”或者“”)，并涉及其合成方法及其在制备用于治疗增生性肿瘤疾病药物中的应用。文档编号A61P35/00GK101255186SQ20081003589公开日2008年9月3日申请日期2008年4月10日优先权日2008年4月10日发明者健丁,进任,冯慧瑾,周兆丽,川李,征李,李援朝,林莉萍,勇甘,缪泽宏申请人:中国科学院上海药物研究所