专利名称：直接榨汁与超声波结合提取仙人掌sod的方法
技术领域：
本发明属于生物工程与农产品精深加工技术领域，将果蔬榨汁技术、超声波处理技术与 生物工程下游加工技术有机结合，制备食用仙人掌超氧化物歧化酶(SOD)粗酶液的一种简便 易行的方法。二、 技术背景SOD是生物体内一种重要的超氧阴离子清除剂，具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作 用，对内风湿、关节炎、放射治疗后的皮肤炎有特别疗效，是生物体中不可缺少的保护酶。动物血液是提取SOD的主要原料，由于从动物血液中提取SOD,难以消除各种病源及外源污 染，欧盟已于1999年颁布法令，禁止从动物血液中提取的SOD用于人类。从植物中提取SOD 已成为国内外研究的热点。仙人掌中SOD活性与牛血红蛋白SOD活性相当，仙人掌SOD的 含量是牛血红蛋白SOD含量的2倍多、牛奶SOD含量的7倍多，具有明显的抗衰老和提高 机体免疫力作用。尽管已有大量关于植物组织中SOD提取的研究报道，其方法大多采用加缓冲液匀浆浸 提，然后以有机溶剂处理、热处理、等电点分离、硫酸铵盐析等方法单独或结合使用制备粗 酶液。还未见将果蔬榨汁技术、超声波处理技术与生物工程下游加工技术有机结合制备仙人 掌SOD粗酶液的方法报道。本发明以直接破碎压榨与超声波处理相结合，该技术不需要添 加任何缓冲液、水或溶剂，可以节省生产成本。仙人掌含有大量黏性多糖，直接破碎压榨出 来的仙人掌浆液黏稠度极高，对此进行直接提取SOD难度极大。通过超声波处理既能有效降 低或者消除浆液黏稠性，也能充分破碎细胞，有效提高SOD提取率。三、发明内容本发明以新鲜仙人掌茎片为原料，果蔬榨汁机直接搾汁，滤掉粗渣，再以20-25Mhz超 声波处理，450W/20min。制得仙人掌汁液，以55-60°C 20min加热变性处理，再以硫酸铵 分级盐析，去除杂蛋白，通过透析脱盐和高分子聚合物吸水浓縮，制得超氧化物歧化酶(SOD) 粗酶液。四具体实施方式
1. 以仙人掌茎片为原料，采用果蔬搾汁机直接破碎压搾取汁。将仙人掌清洗干净，晾干表面水分，根据榨汁机进料口对物料大小的要求，将茎片切分成 适当大小的块状，以具有破碎压榨功能的榨汁机压搾取汁，滤掉粗渣。2. 超声波处理破碎细胞 具有较高黏稠度的仙人掌浆液经处理后仙人掌浆黏稠性消失，出汁率和SOD提取率均提高。3. 离心分离经超声波处理后的浆液，以双层纱布滤除粗渣，再以5000rpm离心15min,去除沉淀，上 清液待后续处理。4. 加热除杂蛋白离心后的上清液加热到55-6CTC维持20min，产生大量絮状物，再次离心5000rpm 15min， 去除变性沉淀的杂蛋白，上清液等待硫酸铵盐析。5. 硫酸铵分步盐析第4步上清液中加入酸酸铵至30%饱和度，充分溶解后，4。C冷藏静置2h以上,4。C 8000rpm 离心15min ，去除沉淀；上清液中加酸酸铵至85%饱和度，4°C 10000rpm离心20min，去净 上清，以适量pH7.8磷酸盐缓冲液溶解沉淀。6. 透析脱盐以透过分子量为3500D的透析袋透析第5步得到的溶液，透析液为pH7. 8磷酸盐缓冲液， 透析时间24h，其间换液3-4次。7. 以聚乙二醇脱水浓縮经透析后的粗酶液在透析袋内，以聚乙二醇粉末或颗粒包埋透析袋，使袋内水分析出，直 至境合的浓度，以备进一步纯化。融化的聚乙二醇经热风干燥再粉碎后可以重复使用。
权利要求
1.以仙人掌茎片为原料，采用果蔬榨汁机直接破碎压榨取汁用于仙人掌SOD提取的方法。将仙人掌清洗干净，晾干表面水份，根据榨汁机进料口对物料大小的要求，将茎片切分成适当大小的块状，以具有破碎压榨功能的榨汁机压榨取汁，滤掉粗渣，得到高黏稠度的仙人掌浆液。直接破碎压榨技术不需要添加任何缓冲液、水或溶剂，可以节省提取液消耗的成本和后续生产成本。
2. 超声波处理降低浆液黏稠度并破碎细胞，提高出汁率和SOD提取率的方法。仙人掌含有大量黏性多糖，直接破碎压榨出来的仙人掌浆液黏稠度极高，对此进行直接 提取SOD难度极大。具有较高黏稠度的仙人掌浆液经20-25Mhz超声波处理，450W / 20min。 出汁率和S0D提取率均提高。
3. 加热变性与硫酸铵盐析相结合进行S0D粗分离的方法利用仙人掌SOD热稳定性高的特点，采用加热除变性与硫酸铵盐析相结合可以有效去除杂 蛋白。经超声波处理后的浆液，以双层纱布滤除粗渣，再以5000rpm离心15min,去除沉淀。 上清液加热到55-6(TC维持20min，产生大量絮状物，冷却后再次离心5000rpm 15min，去除 热变性的杂蛋白，上清液中加入硫酸铵至30%饱和度，充分溶解后，4。C冷藏静置2h以上， 4'C 8000rpm离心15min ，去除沉淀；上清液中加硫酸铵至85%饱和度，4°C 10000rpra离心 20min，去净上清，以适量pH7.8磷酸盐缓冲液溶解沉淀。溶液经透过分子量为3500D的透 析袋透析，透析液为pH7.8磷酸盐缓冲液，透析时间24h，其间换液3-4次。最后以聚乙二 醇脱水浓縮得粗酶液。
全文摘要
本发明以新鲜仙人掌茎片为原料，果蔬榨汁机直接破碎榨汁，滤掉粗渣，再以20-25Mhz超声波处理，450W/20min，制得仙人掌汁液。再以55-60℃20min加热变性处理，再以硫酸铵分级盐析，去除杂蛋白，通过透析脱盐和高分子聚合物吸水浓缩，制得超氧化物歧化酶(SOD)粗酶液。本发明在仙人掌SOD提取过程不需要添加缓冲液、水或溶剂，可以节省生产成本。同时，通过超声波处理既能有效降低或者消除浆液黏稠性，也能充分破碎细胞，有效提高SOD提取率。利用热变性原理和仙人掌SOD的耐热性，采用55-60℃20min加热除杂蛋白，简便易行高效。整个粗分离过程避免了有机溶剂的使用，有效降低生产成本、简化生产工艺、避免溶剂残留。
文档编号A61P17/16GK101279090SQ20081009948
公开日2008年10月8日 申请日期2008年5月19日 优先权日2008年5月19日
发明者洁 张, 红 杨, 王中凤, 肖厚荣 申请人:合肥学院