一种抗肿瘤的中药制品及其制备方法

专利名称：：一种抗肿瘤的中药制品及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及中药制品，特别是一种抗恶性肿瘤的中药制品及其制备方法，属于医药、食品、饮料
技术领域：
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背景技术：
：过去IO年来，癌症已悄然上升为人类第二大"杀手疾病"(死亡率仅次于心血管疾病)，而过去一度肆虐世界各地的感染性疾病则已退居第3位。据分析，癌发病率的急剧上升，与环境污染加剧、不科学的饮食习惯以及不健康的生活方式有关。癌症患病率的上升，促使抗癌药物市场不断扩大。过去几年来，各种抗癌药物的总销售额呈快速上升之势，如以美国抗癌药物市场为例1999年，全美10种主要抗肿瘤药物的总销售额为32亿美元，2000年为38亿。肿瘤药物市场另一引人注目的新变化是"天然抗癌药"的新崛起。从前抗肿瘤药物基本上都是以化学合成药(化疗药)一统天下，其中常用临床药包括烷化剂类、抗代谢剂和阿霉素、丝裂霉素等等。其药理作用基本上都是"杀细胞剂"，它们在杀死体内肿瘤细胞的同时也会伤及正常细胞。某些化疗药甚至有抑制骨髓细胞生长的毒副作用。所以肿瘤患者在做过几次化疗后常常会元气大伤，有些病人甚至无法经受化疗而无奈中止治疗过程。在天然植物中寻找具有抗癌活性的高效低毒药用物质，以期开发全新抗癌药物是药物学研究的一项重要课题。据统计，在美国10大畅销抗肿瘤药物中，天然药物已占"半壁江山"(其中包括紫杉醇、半合成紫杉醇、喜树碱、长春花碱及其衍生物和依托泊甙等产品)。研究表明，白桦酯酸(betuUnicacid)(3P-hydroxy-lup-20(29)-en-28-oicacid)具有多种显著的药理活性。1995年就有人报道了白桦酯酸可以选择性地抑制给色素瘤细胞的生长。2002年，Chowdhury等首次提出白桦酯酸抑制真核细胞生物的拓扑异构酶I，并确定了抑制反应的步骤和白桦酯酸不同碳位修饰后的衍生物的情况，认为可以用白桦酯酸进行抗肿瘤药的设计。除黑色素瘤细胞外，受白桦酯酸抑制的还有儿童恶性脑瘤细胞，多种神经瘤细胞和肉瘤细胞等。叶银英等考察了白桦酯酸及其衍生物23-羟基白桦酯酸，结果发现它们对黑色素瘤和其他7种恶性肿瘤细胞的生长有明显的抑制作用，并呈现出一定的剂量依赖关系，细胞生长周期被阻滞，最终导致了大量的细胞凋亡。,虽然白桦酯酸具有抗肿瘤的作用，但由于白桦酯酸的缺乏(量少，价位高，25mg需882元)直接影响了其作为临床用药的开发和研究；另一方面，白桦酯酸其本身作为临床用药存在水溶性差的弱点，也限制了它的临床应用。
发明内容中国中医药学具有悠久的历史，用中草药预防和治疗疾病方面也积累了丰富的经验，因此从中药中寻找有效的活性成分是一条有效的途径，也是中国创新药物研制的优势之所在。基于以上，本发明提供了一种抗肿瘤的中药制品及其制备方法，其技术方案是一种抗肿瘤的中药制品，包括药品、试剂、食品、饮料，其特征是中药制品的有效成分是含有白桦酯酸的白桦酯酸脂质体。该中药制品可以是单一的白桦酯酸脂质体或白桦酯酸脂质体与其它化学物质，包括医药学上可接受的载体、食品、天然产物、化学合成药物、人类用药的组合物。所述医药学上可接受的载体，包括赋形剂、润滑剂，、崩解剂、填充剂、粘接剂、渗透压调节剂、稀释剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂及包括香味剂、甜味剂在内的辅剂；制品剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂及注射剂。白桦酯酸脂质体的技术指标药物包封率达90%以上，粒径为IOO—IOOO纳米之间，无色透明液体。上述抗肿瘤的中药制品的制备方法，其特征是首先制备白桦酯酸脂质体，每1000ml白桦酯酸脂质体按照下列原料配比获取中性磷脂选自包括蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、双硬脂酸卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、双软脂酸卵磷脂或双豆蔻酸卵磷脂；有机溶剂包括乙醇、丙醇、丙二醇-,缓冲剂包括磷酸盐、左氨酸、组氨酸。具体方法是(1)采用薄膜法获取白桦酯酸脂质体称取白桦酯酸0.10.20g，卵磷脂0.1400.160g和胆固醇0.0100.025g与梨形瓶中，加入含有白桦酯酸0.005g的10ml乙醇振摇，加入数颗玻璃珠，于旋转蒸发仪上2832。C蒸干成膜，真空千燥，直到梨形瓶中无乙醇味，加入磷酸缓冲盐溶液715ml，将膜荡洗下来，在超声仪中超声1030min，使膜溶解，过0.45pm滤膜，得到无色透明液体，即得；(2)将单一的白桦酯酸脂质体或白桦酯酸脂质体与其它化学物质，包括医药学上可接受的载体、食品、天然产物、化学合成药物或人类用药的组合物，按照常规工艺制成药品、食品或饮料。以下对本发明作进一步阐述本发明的抗肿瘤的中药制品，包括药品、试剂、食品及饮料等，是指用于治疗或研究肿瘤及相关病症的产品，尤其是药物及其药物组合物；其中，所述的抗肿瘤产品是包括抗肿瘤药物、抗肿瘤试剂等中的一种或多种，最优选抗肿瘤药物。产品是包括药物、试剂、食品或饮料等中的一种或多种，优选药物。白桦酯酸在自然界中分布非常广泛，它在白桦树皮中(桦木科植物)含量最为丰富，存在于黄杞属、枣属(鼠李科)、蒲桃属(桃金娘科)、条纹乌木(柿科)、牡丹(牡丹科)白桦酯酸中性磷脂胆固醇抗氧化剂有机溶剂缓冲剂50—5000mg100—8000mg10—l0000mg0.25—450mg10—600ml0—400ml和夹竹桃(夹竹桃属)等植物中。白桦酯酸及其衍生物是一类五环三砲类化合物，其衍生物多在C2，C3，C17，C20，C23，C28位以及丙烯基的双键位置等有结构变化。它们具有化学结构简单，药理活性强，作用机制特异，相对分子质量较小等特点。白桦酯酸的化学结构<formula>complexformulaseeoriginaldocumentpage5</formula>脂质体是脂类分子(类脂)的自组装体，是一种由一个或多个脂双层中间包裹微水相结构。构成双分子层的类脂分为亲水的头部和亲油的尾部两部分，在脂质体的形成过程中，亲水的头部形成膜的内外表面层，而亲油性的尾部处于膜的中间。脂质体的这种结构使其能够携带各种亲水的、疏水的和两亲的物质，这些物质被包入脂质体内部水相，或插入类脂双分子层，或吸附连结在脂质体的表面。我们利用脂质体的这种特殊功能，就可以解决白桦酯酸溶解度差的难题。本发明制备的白桦酯酸脂质体，解决脂溶性药物不易溶于水的难题，为它的临床应用开辟了新的道路；同时，这种微粒具有类细胞结构，进入人体后主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物毒性。本发明所述的白桦酯酸脂质体可以单独或与其它活性组分联合使用，包括用于制备用于诊断、检测、预防、保护、治疗或研究相关疾病的产品，包括药物、试剂、食品或饮料等，尤其是药物。在具体使用方面，本发明所述的白桦酯酸脂质体能够单独使用，还能够与其他许多化学物质一起使用。无论这些化学物质是否具有生物活性或具有治疗疾病的功能，包括辅助功能如协同放大作用、拮抗或缓解白桦酯酸脂质体的副作^等，这些化学物质是包括医药学上可接受的载体、食品、天然产物、化学合成药物或人类用药等中的一种或多种；优选包括医药学上可接受的载体或者食品等中的一种或多种；进一步优选医药学上可接受的载体。本文使用的"医药学上可接受的载体"包括任何和所有的生理适用的溶剂、分散介质、胞衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂或吸收延迟剂等中的一种或多种。医药学上可接受载体的例子包括一种或多种的水、盐水、磷酸缓冲盐水、葡萄糖、甘油或乙醇等及其组合物中的一种或多种。医药学上可接受载体还可以包含少量的辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲液等中的一种或多种，它们增强了该白桦酯酸脂质体的有效期或效力。从具体的分类上看，所说的医药学上可接受的载体是指医药学领域常规的药物载体，包括赋形剂，如淀粉或水等中的一种或多种；润滑剂，如甘油或硬脂酸镁等中的一种或多种；崩解剂，如微晶纤维素、琼脂、碳酸钙或碳酸氢钠等；填充剂，如淀粉或乳糖等中的一种或多种；粘接剂，如预胶化淀粉、糊精、纤维素衍生物、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯垸酮等中的一种或多种；渗透压调节剂，如葡萄糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇等中的一种或多种；稀释剂，如水等；吸收促进剂，如季铵化合物等；表面活性剂，如十六垸醇等；吸附载体，如高岭土或皂粘土等中的一种或多种；润滑剂，如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁或聚乙二醇等中的一种或多种；另外，还可以在组合物中加入其它辅剂，如香味剂或甜味剂等中的一种或多种。本发明所述及的白桦酯酸脂质体还可以以组合物的形式联合使用，特别是与用其它化学物质如药物对动物尤其是哺乳动物包括人或其他动物进行治疗所用的组合物或者是类似的组合物。所述哺乳动物，包括人、小鼠、大鼠、羊、猴、牛、猪、马、兔、犬、黑猩猩、狒狒、狨、猕猴或恒河猴等中的一种或多种。例如，可以将本发明白桦酯酸脂质体加入适于给与受治疗者的药用组合物中。通常，该药用组合物包含本发明白桦酯酸脂质体和药学上可接受的载体。白桦酯酸脂质体的组合物特别是药物组合物可以有各种形式，包括例如液体、半固体和固体等剂量形式中的一种或多种；其中所说的药物组合物包括治疗有效量的白桦酯酸脂质体为活性成分，以及一种或多种医药学上可接受的载体。白桦酯酸脂质体的药物组合物可以采用本领域公知的常规生产方法制成各种剂型，例如使活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。所述的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂或注射剂等中的一种或多种，采取口服或注射(包括静脉注射、静脉滴注、肌肉注射或皮下注射等中的一种或多种)、粘膜透析等中的一种或多种给药途径进行以及肿瘤及相关病症的诊断、检测、治疗或科学研究。白桦酯酸脂质体的药物组合物一般必须无菌且在生产储存条件下稳定。通过将所需量的该白桦酯酸脂质体加入适当的溶剂中并接着进行除菌过滤制备无菌注射液。一般而言，通过将该白桦酯酸脂质体加入含有基本分散介质和所需的上述其它成分的无菌溶媒中制备分散液。在用于制备无菌注射液的无菌粉剂的情况下，推荐的制备方法是真空干燥和冷冻干燥剂。"治疗有效量"是指在必要的剂量和时间下有效达到所需治疗效果的量。白桦酯酸脂质体的治疗有效量可以根据诸如个体的病况、年龄、性别和体重以及该白桦酯酸脂质体在该个体引起所需反应的能力等因素而变化。治疗有效量亦指该白桦酯酸脂质体的有益治疗效果超过其任何毒性或有害效果的量。本发明白桦酯酸脂质体的治疗有效量的典型的非限制性范围是lmg40mg/kg，更优选为5mg20mg/kg。应注意，剂量值将根据欲减轻的疾病类型和严重性变化，也就是说用于患者时，本发明所述的白桦酯酸脂质体的剂量或用量，通常根据患者或使用者的年龄和体重以及身体状况或患者症状的状况来决定。另外，应理解，对于任何特定受治疗者，应随着时间根据个体需要和给与或监督给与所述组合物的人的专业判断调整特定剂量制度，并且本文设定的剂量范围仅为例证性的，并不会限制要求保护的组合物的范围或实践。本发明所述的白桦酯酸脂质体及其组合物制备抗肿瘤产品，能够治疗肿瘤及其相关病症；按照医药
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的要求制备的产品能够用于患者的治疗，既能够单独直接用于制备治疗的药物，也能够与许多化学物质进行混合或组合，直接或间接用于制备治疗或保健的药物。这里所述的化学物质与前述的相同。在本发明中，所需物料包括本发明的原料、上述配套使用的化学物质等，均应根据实际情况和需要，采用食品级或药用级的物料。白桦酯酸脂质体制备的药物及其药物组合物可以采用本领域公知的方法制成各种剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、注射剂等，采取口服或注射(包括静脉注射、静脉滴注、肌肉注射、皮下注射等)、粘膜透析等给药途径进行肿瘤的防治。用于注射时，可将其制成常规的注射制剂如冻干粉针。此外，白桦酯酸脂质体所使用的药材原料在某些情况下也能够单独直接用于制备抗肿瘤产品，也能够与许多化学物质进行混合或组合，以组合物的形式直接或间接用于制备抗肿瘤产品。这里所述的化学物质与前述的相同。本发明的优点及有益效果本发明有针对性地研究白桦酯酸脂质体，解决脂溶性药物不易溶于水的难题，拓展了医药用途，也为治疗和研究肿瘤提供了一种新的药物来源。该原料安全低毒，药理作用较强，其原料来源广泛、价廉，制备工艺简单、得率高，可用于制备治疗肿瘤的产品，易于推广应用。经文献检索，到目前为止，尚未发现有白桦酯酸脂质体具有防治肿瘤作用方面的报道。本发明的研究结果可被进一步深入开发为具有临床应用前景的防治肿瘤的产品尤其是新药。与中国国内、国际上的同类产品相比具有显著的优势。因此，本发明还可为后续的新药研究打下良好的基础，并进一步产生较大的经济效益和社会效益。本发明经过长期的药理学试验，白桦酯酸脂质体具有治疗肿瘤及其相关病症的活性，实验证明，本发明所述及的白桦酯酸脂质体以及组合物特别是药物组合物是一种安全、高效、稳定、价廉的防治肿瘤的药物，其制备成本低廉，活性成分明确。白拌酯酸脂质体性质稳定，治疗肿瘤及其相关病症的效果明显，使用白桦酯酸脂质体制备的制剂质量稳定，故其更适于治疗黑色素瘤及其相关病症药物的工业化生产。本发明研究了白桦酯酸脂质体的用途，提供了一种能够用于制备治疗肿瘤产品如药物等或者是抗肿瘤产品特别是药物的原料，便于医疗行业和相关行业如食品、饮料等领域的安全使用，包括疾病的诊断、检测、治疗或科学研究等。总之，本发明积极适应了现代医疗、食品、饮料和科研领域的工作需要和人性化服务的需要，是用于制备抗肿瘤产品的安全原料，可直接或间接治疗或研究肿瘤及其相关病症。具体实施方式实施例1.白桦酯酸脂质体粉针的制备1、白桦酯酸脂质体粉针的制备方法(一)白桦酯酸脂质体粉针的制备白桦酯酸0.15g卵磷脂0.15g胆固醇(U5g甘露醇0.30g薄膜法(TFV):称取白桦酯酸0.15g，卵磷脂0.15g和胆固醇0.15g与梨形瓶中，加入10ml乙醇，振摇，加入数颗玻璃珠，于旋转蒸发仪上2832。C蒸干成膜，真空干燥，直到梨形瓶中无乙醇味，加入磷酸缓冲盐溶液715ml，将膜荡洗下来，在超声仪中超声1030min，使膜溶解，过0.45pm滤膜，得到无色透明液体，药物包封率达90%以上。称取处方量甘露醇，以15ml水合介质加水溶解后，倒入1000ml茄形瓶中，轻摇，将类脂质膜洗脱并分散到水合介质溶解后，既得脂质体混悬液。将其倒入APV2000乳匀机(丹麦APV)，在一级阀1760Bar，二级阀270bar压力下，连续乳匀5次，既得，对其冷冻或喷雾干燥既得粉针。(二)白桦酯酸脂质体的含量测定(1)对照品溶液的制备精密称取白桦酯酸的对照品10mg，用无水乙醇定容于10ml容量瓶中，制成lmg'ml—'的对照品溶液，备用。(2)空白脂质体的制备按处方量称取PC、Ch，加入至500ml的梨形瓶中，加入无水乙醇10ml，超声溶解，加入10颗玻璃珠，摇均。3(TC减压蒸发至干，成膜，真空干燥至无乙醇味。加入PH值为6.8(0.05mol/L)的磷酸缓冲盐溶液5ml，超声荡洗，将膜完全洗脱下来。然后，水浴超声20min，0.45pm无机相滤膜过滤，得到空白脂质体溶液，备用。通过高效液相检验，卵磷脂和胆固醇与药物峰分离良好，不会对其有影响。(3)分析方法的建立将适量的白桦酯酸的无水乙醇溶液放置于紫外分光光度计中进行波长扫描，结果在212nm处，白桦酯酸有最大吸收，因此，确定白桦酯酸的检测波长为212nm。因此，分析方法采用KromasailC18柱(250X4.6mm，5pm);流动相为乙腈-水(85:15);流速为0.8ml.min:柱温为室温；检测波长为212nm。(4)标准曲线的制备精密量取制备好的对照品溶液稀释成五个不同浓度，再用流动相稀释，得到80ng.mr1、40昭.mr1、20吗-ml—1、10吗-mr1、5pLg'ml—1五个浓度的溶液，20^1进样，测定峰面积。以对照品峰面积(Y)对样品浓度(X叱'mr1)进行线形回归，回归方程为Y=9694.6X+5740.2(r=0.9999)，在5吗'mr180吗'mr1之间具有良好的线形关系。(5)精密度试验取浓度为20吗.mr'的对照品溶液一日之内连续测定5次，结果见下表精密度试验结果(n-5)次数峰面积RSD%1179234~218233231771341.7741850325178513结论仪器的精密度良好。(6)稳定性试验取浓度为20吗.mr1的对照品溶液进行五天连续测定，结果见下表:稳定性试验结果(11=5)天数峰面积RSD%1177134217636731751842.9041749165164835结论含量测定方法的稳定性良好。(7)空白回收率试验精密吸取三份lml空白脂质体溶液，分别加入lml对照品溶液20吗'mr1、10吗'mr1、5吗TnT1，2(Hd进样，测定峰面积，结果见下表回收率试验结果(n-5)加入量(吗)测定量(吗)回收率(％)RSD%20.49TM310.0010.26102.60.595細_5.075_101.5___结论表明本测定方法具有良好的回收率，方法可靠性强。(三)载药率的测定采用过膜法测定载药率。精密称取卵磷脂0.150g和胆固醇0.015g置于梨形瓶中，加入10ml乙醇(其中含有白桦酯酸0.005g)，振摇，加入10颗玻璃珠，于旋转蒸发仪上3(TC、50rpm旋转蒸干成膜，真空干燥，直到梨形瓶中无乙醇味，加入磷酸缓冲盐溶液5ml(pH=6.8、0.05moI/L)，将膜荡洗下来，在超声仪中超声20min，使膜乳化成脂质体，过0.45pm无机相滤膜，即得。应用过滤法测定载药率的公式为载药率(％)=(过膜后的药物峰面积/过膜前的药物峰面积)X100%测得3个批号脂质体的载药率分别为96.1%，97.0%,96.4%。实施例2.白桦酯酸及其脂质体对人黑色素瘤细胞株A375的影响1材料和方法1.1药物白桦酯酸脂质体参照实施例1制备。1.2瘤株人黑色素瘤细胞株A375由中科院细胞所提供。1.3试剂及仪器MTT(购于Sigma公司)；DMEM、胰蛋白酶、小牛血清(购于GIBCO公司)。MultiskanMK3型酶标仪(LabsystemsDragon公司)1.4MTT法测细胞增殖抑制率分别收集对数生长期的人黑色素瘤细胞株A375(2X104/ml)，种入96孔培养板，每孔100pl,分别按设计加入药液，阴性对照用相应培养液代之，置5%(302、37。C的培养箱中培养24h。处理后的细胞，移去DMEM培养基，D-Hank's液洗2次，每孔加入100^1DMEM培养基和10^1MTT(5mg/ml)，37。C孵育4h。弃去液体，每孔加入10(^1DMS0，放置数分钟，使MTT结晶溶解，在酶标仪上540nm处测吸收值。1.5统计学处理数据用x土S表示，显著性差异采用student's—t检验评价。2结果白桦酯酸脂质体的体外抑瘤作用基本上与白桦酯酸相似，在最低浓度和最高浓度时，比白桦酯酸稍微好些，但是差别不大。说明白桦酯酸脂质体对人黑色素瘤细胞A375有抑瘤作用，并且在与白桦酯酸同等浓度条件下，作用效果相当，那么，由脂质体包裹的PA-1的体外实验，即对人黑色素瘤细胞株A375是有效的。白桦酯酸脂质体与白桦酯酸对人黑色素瘤细胞A375的生长影响见下表。白桦酯酸及其脂质体对人黑色素瘤细胞株A375的影响(5±S，n=3)浓度(mg/ml)OD值抑瘤率(％)白桦酯酸脂质体白桦酯酸白桦酯酸脂质体白桦酯酸白桦酯酸脂质体白桦酯酸9<table>complextableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>实施例3.白桦酯酸脂质体对小鼠结肠癌细胞株(C26)移植性肿瘤的影响1材料和方法1.1实验动物小鼠结肠癌细胞株C26由上海市医工院提供；BABL/C+ICR-F1小鼠，1922克，购自由上海斯莱克实验动物有限公司提供，许可证号SCXK(沪)2003—0003。1.2试剂及仪器环磷酰胺(规格200mg/瓶，批号:050206，上海华联制药有限公司)；天平(JA2003A，上海精天电子仪器有限公司)1.3小鼠结肠癌(C26)移植性肿瘤模型建立及药物作用选生长旺盛之小鼠结肠癌(C26)瘤源，以匀浆法(1:8)制备成细胞悬液，每只小鼠右腋皮下接种0.2ml。同时每天腹腔注射白桦酯酸脂质体(lmg/kg、10mg/kg)，阳性对照药腹腔注射环磷酰胺(25mg/kg)，每天1次。接种后10天处死动物，解剖，取皮下小鼠肿瘤，称瘤重。1.4统计学处理数据用土S表示，显著性差异采用student's—t检验评价。2结果生理盐水组移植小鼠结肠癌细胞株(C26)荷瘤肿瘤重量可达1.675土0.217g，白桦酯酸脂质体可显著减小移植小鼠结肠癌(C26)荷瘤小鼠肿瘤，非常显著减轻肿瘤重量(PO.Ol)，低、高剂量组(lmg/kg、10mg/kg)抑制率分别为31.4%和54.5%，表明白桦酯酸脂质体对移植小鼠结肠癌(C26)荷瘤小鼠肿瘤有抑制作用。结果见下表。对移植小鼠结肠癌(C26)荷瘤小鼠肿瘤重量的影响(5±5,n=10)<table>complextableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>与生理盐水组比较，**P<0.01实施例4.对肝癌细胞株7721的影响1材料与方法1.1药物白桦酯酸脂质体参照实施例1制备。1.2瘤株及试剂人肝癌SMMC-7721细胞株、QSG-7701细胞株均由第二军医大学生化教研室提供；MTT(购于Sigma公司)；DMEM、胰蛋白酶、马血清(购于GIBCO公司)。1.3MTT法测细胞增殖抑制率[6]:分别收集对数生长期的人肝癌细胞株7721、7701(2X104/ml)，种入96孔培养板，每孔10(^1，分别按设计加入药液，阴性对照用相应培养液代之，置5。/。C02、37。C的培养箱中分别培养12、24、36h。处理后的细胞，移去DMEM培养基，D-Hank's液洗2次，每孔加入1OOplDMEM培养基和10|_dMTT(5mg/ml),37"孵育4h。弃去液体，每孔加入100W异丙醇(含0.1N盐酸)，放置数分钟，使MTT结晶溶解，在酶标仪上595nm处测吸收值。药物的剂量一效应关系通过与肝癌细胞共培养36h测定得出。1.4仪器MultiskanMK3型酶标仪(LabsystemsDragon公司)1.5统计学处理数据用^士S表示，显著性差异采用配对t检验评价。2.结果MTT法测细胞增殖抑制率白桦酯酸脂质体对SMMC-7721、QSG-7701肝癌肿瘤细胞的生长均有非常显著的抑制作用(PO.OOl)。结果见下表。白桦酯酸脂质体对人肝癌细胞株QSG-7701的生长影响(5±S，n=3)组别浓度A抑制率(mg/ml)(%)对照一0.389±0.034一0.10.277±0.019c28.36±8.50白桦酯酸脂质体10.187士0.013c51.82±3.24100.065士0.015c83.12±4.54与对照组比bpO.05,cpO.01白桦酯酸脂质体对人肝癌细胞株SMMC-7721的生长影响(5土SD，n-3)组别浓度A抑制率_(mg/ml)_(%)对照一0.355士0.013—10.211士0.022c40.57±5.46白桦酯酸脂质体20.151±0.031c57.53±7.38__^__0.033士0.009c90.67±2.31与对照组比cpO.Ol"结论经体外和体内试验表明白桦酯酸脂质体具有抗肿瘤作用。权利要求1、一种抗肿瘤的中药制品，包括药品、试剂、食品、饮料，其特征是中药制品的有效成分是含有白桦酯酸的白桦酯酸脂质体。全文摘要一种抗肿瘤的中药制品，包括药品、试剂、食品、饮料，其特征是中药制品的有效成分是含有白桦酯酸的白桦酯酸脂质体，白桦酯酸脂质体药物包封率达90％以上，粒径为100-1000纳米之间，无色透明液体。上述抗肿瘤的中药制品的制备方法，首先采用薄膜法获取白桦酯酸脂质体，然后将单一的白桦酯酸脂质体或白桦酯酸脂质体与其它化学物质，包括医药学上可接受的载体、食品、天然产物、化学合成药物或人类用药的组合物，按照常规工艺制成药品、食品或饮料。文档编号A61P35/00GK101342179SQ20081012446公开日2009年1月14日申请日期2008年7月8日优先权日2008年7月8日发明者刘静涵,司梁宏,朱昌罗,杨春华,赵伯诚,彦邱,瑜陆,黄大超申请人:中国人民解放军第四五四医院;南京博耀科技有限责任公司