专利名称：异亚丙基莽草酸粉针剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种单体化合物的粉针剂，特别涉及异亚丙基莽草酸的粉针剂及其制备方法。
背景技术：
莽草酸(Shikmicacid，SA-1，)，为中草药木兰科八角属多种植物果实中含有的药效成分，其来源由八角科多蕊红茴香Illiciumhenrvivar.multistamineum的果实及角属其它植物的成熟果实经甲醇等溶剂提取，精制而成。其分子式为C7H10O5，分子量为174.15。近年来，对血栓形成机制的研究及抗血栓药物的开发深受各国医药界的关注，并已有部分有效化合物处于临床和临床前研究阶段。
异亚丙基莽草酸(3，4-oxo-isopropylidene-shikimic acid，ISA)是从中药木兰科植物八角茴香(Fructus Anisi stellati)中提取的有效成分莽草酸的活性衍生物之一，中文名3，4-0-异亚丙基莽草酸，分子式及分子量C10H1405,214，化学名3，4-0-异亚丙基莽草酸英文化学名3，4-oxo-isopropylidene-shikimic acid。异亚丙基莽草酸用于治疗脑血栓、脑梗塞及抗血栓。
异亚丙基莽草酸主要用于血栓性疾病的治疗，在血栓性疾病的治疗中，采用非血管给药存在着吸收等过程，使得进入血液的药物浓度降低，加之异亚丙基莽草酸不稳定，故在制备口服制剂时，还存在着在胃中易分解的问题。由于异亚丙基莽草酸不稳定的特点，制备注射制剂存在更大的困难。
发明内容
本发明一个目的在于公开一种具有高稳定性的3，4-0-异亚丙基莽草酸的粉针剂。
本发明另一个目的在于公开一种具有高稳定性的3，4-0-异亚丙基莽草酸的粉针剂的制备方法。
本发明第一个目的是通过如下技术方案实现的 一种3，4-0-异亚丙基莽草酸的粉针剂，由如下重量比的原料及注射用水制成 3，4-0-异亚丙基莽草酸10重量份 氢氧化钠2-5重量份 磷酸二氢钠7-10重量份 磷酸氢二钠3-6重量份 注射用水100-1000重量份。
所述3，4-0-异亚丙基莽草酸的粉针剂由如下优选重量比的原料制成 3，4-0-异亚丙基莽草酸10重量份 氢氧化钠2.37重量份 磷酸二氢钠8.44重量份 磷酸氢二钠4.6重量份 注射用水300-900重量份。
本发明所述的3，4-0-异亚丙基莽草酸的粉针剂，是由如下方法制备的 取3，4-0-异亚丙基莽草酸10重量份，加注射用水溶解，按组方量加入氢氧化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠，110-140℃压力条件为0.2-1.4kg/cm2灭菌20-50分钟，微孔滤膜过滤后超滤，超滤液冷冻干燥。
所述灭菌条件优选121℃热压(0.7kg/cm2)，30分钟； 所述冷冻干燥的方法为在冷冻干燥箱中，冻至-35℃以下，保温3小时；开启真空泵，进入升华阶段，升华的最高温度控制在-14℃以下；待冰晶完全消失后，转入干燥阶段，最高温度不超过35℃。其中干燥温度最佳为30℃。
本发明第二个目的是通过如下技术方案实现的 一种具有高稳定性的3，4-0-异亚丙基莽草酸的粉针剂的制备方法，该方法包括如下步骤 取3，4-0-异亚丙基莽草酸10重量份，加注射用水100-1000重量份溶解，调节pH值5以上，在温度条件为110-140℃、压力条件为0.2-1.4kg/cm2灭菌20-50分钟，微孔滤膜过滤后超滤，超滤液冷冻干燥。
所述pH值优选5-8；pH值最优选7； 所述灭菌条件优选121℃热压(0.7kg/cm2)，30分钟； 所述冷冻干燥的方法为在冷冻干燥箱中，冻至-35℃以下，保温3小时；开启真空泵，进入升华阶段，升华的最高温度控制在-14℃以下；待冰晶完全消失后，转入干燥阶段，最高温度不超过35℃。其中干燥温度最佳为30℃。
调节pH值可以采用常规的加入碱进行调节，如加入氢氧化钠2-5重量份，也可以采用加入碱与缓冲盐；其中缓冲盐选自氢氧化钠-磷酸二氢钠；磷酸氢二钠-磷酸二氢钠；三羟甲基氨基甲烷缓冲液；巴比妥缓冲液、巴比妥-氯化钠缓冲液、氨-氯化铵缓冲液、硼砂-氯化钙缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾、磷酸二氢钾-磷酸氢二钾。优选磷酸氢二钠-磷酸二氢钠(pH 7)作为缓冲剂。其中缓冲盐用量可以通过渗透压原理计算得出，例如使用FM28型全自动冰点渗透压计(上海医科大学仪器厂)，精称100mg抗栓素，加入1mol·ml-1NaOH 590μl调节pH值为7，加入不同体积的pH值7的0.2mol·L的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液，以水定容至10ml；按照中国药典2005年二部附录IXG，采用渗透压摩尔浓度测定法，分别测定不同浓度缓冲液的抗栓素溶液的渗透压；以缓冲液加入量对渗透压作图，拟合方程为y＝39.13x+99.481，|r|＝0.9991，经测定，0.9％氯化钠注射液的渗透压为280mmol·L-1，计算调节等渗需要加入的缓冲盐体积为4.61ml。
所述3，4-0-异亚丙基莽草酸的合成可以根据专利号ZL02130773.3发明名称为一种ISA的制备方法及新用途所记载的方法制备。本发明中所述抗栓素即为3，4-0-异亚丙基莽草酸。
实验研究表明3，4-0-异亚丙基莽草酸在水溶液中不稳定，莽草酸衍生物在制备粉针剂的过程中，一直以来困扰的问题是解决活性成分的稳定性问题。本发明技术方案1通过特定比例的原料，控制了3，4-0-异亚丙基莽草酸溶液Ph值在5以上，同本发明第二个技术方案都有效解决了3，4-0-异亚丙基莽草酸制备成粉针剂的稳定性问题。同时意想不到的发现不使用任何注射剂骨架材料，3，4-0-异亚丙基莽草酸仍然符合粉针剂的制剂要求，从而更节约了生产成本，也避免因骨架材料的使用所可能导致的安全性问题。
下述实施例均能实现上述实验例所述的效果。
实验例1不同pH值条件下3，4-0-异亚丙基莽草酸溶液稳定性实验 (一)实验方法 1、原理在药物稳定性试验中，不仅要考虑H+或OH-的专属酸碱催化，还要考虑缓冲液组成，即一般酸碱催化对药物水解速率的影响。这两种催化类型结合可以将表观水解速率Kobs描述如下 (1-1) 式中，Kobs是实验测得的表观水解速率常数；K0是无催化作用时的(或溶剂催化)速率常数；KH+和KOH-分别是专属酸、碱催化速率常数；KHX和KX-是一般酸、碱催化速率常数；[HX]和[X-]是质子化和为质子化缓冲液浓度。为了完全评估药物稳定性，消除缓冲液的影响，测定在每个pH值下不同缓冲液中的水解速率常数K，以水解速率常数K对缓冲液浓度作图，将曲线外推至缓冲液浓度为0，求出此时的水解速率常数K，再将这些外推得到的速率绘制成pH值的函数，就得到了消除缓冲液影响的pH-速率曲线图。
2、实验溶液配制方法 各个pH值条件下缓冲液的配制方法 各pH值下稳定性实验用样品的配制方法 (二)各实验条件下的试验数据与结果 1.pH＝0，25℃条件下抗栓素稳定性试验数据与结果 pH＝0，25℃条件下的溶液中抗栓素表观水解速率常数测定结果
经测定，样品配制后10分钟，已经基本分解完毕。由两点回归得回归方程y＝-0.2126x+1.0026，相关系数|r|＝1，计算降解速率常数
2.pH＝1，25℃的条件下抗栓素稳定性试验数据与结果 pH＝1，25℃的条件下抗栓素表观水解速率常数测定结果
3.pH＝2，t＝25℃的条件下抗栓素稳定性试验数据与结果 pH＝2 t＝25℃不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数测定结果
pH＝2 t＝25℃时不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数
4.pH＝3，不同温度下抗栓素稳定性试验数据与结果 (1)pH＝3，t＝85℃的条件下抗栓素的稳定性试验 pH＝3 t＝85℃不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数测定结果
pH＝3 t＝85℃时不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数
(2)pH＝3，t＝70℃的条件下抗栓素的稳定性试验 pH＝3 t＝70℃不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数测定结果
pH＝3 t＝70℃时不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数
(3)pH＝3，t＝55℃的条件下抗栓素的稳定性试验 pH＝3 t＝55℃不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数测定结果
pH＝3 t＝55℃时不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数
(4)pH＝3，t＝40℃的条件下抗栓素的稳定性试验 pH＝3 t＝40℃不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数测定结果
pH＝3 t＝40℃时不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数
pH＝3 t＝40℃时缓冲液浓度对抗栓素表观水解速率影响 5.pH4的缓冲液中抗栓素稳定性试验 (1)pH＝4，t＝85℃的条件下抗栓素的稳定性试验 pH＝4 t＝85℃不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数测定结果
pH＝4 t＝85℃时不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数
(2)pH＝4，t＝80℃的条件下抗栓素的稳定性试验 H＝4 t＝80℃不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数测定结果
pH＝4 t＝80℃时不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数
(3)pH＝4，t＝55℃的条件下抗栓素的稳定性试验 pH＝4 t＝55℃不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数测定结果
pH＝4 t＝55℃时不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数
(4)pH＝4，t＝40℃的条件下抗栓素的稳定性试验 表2-1 pH＝4 t＝40℃不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数测定结果
pH＝4 t＝40℃时不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数
6.pH5的缓冲液中抗栓素稳定性试验 (1)pH＝5，t＝85℃的条件下抗栓素的稳定性试验 pH＝5 t＝85℃不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数测定结果
pH＝5 t＝85℃时不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数
(2)pH＝5，t＝80℃的条件下抗栓素的稳定性试验 pH＝5 t＝80℃不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数测定结果
pH＝5 t＝80℃时不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数
(3)pH＝5，t＝55℃的条件下抗栓素的稳定性试验 pH＝5 t＝55℃不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数测定结果
pH＝5 t＝55℃时不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数
(4)pH＝5，t＝40℃的条件下抗栓素的稳定性试验 pH＝5 t＝40℃不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数测定结果
pH＝5 t＝40℃时不同浓度缓冲液中抗栓素表观水解速率常数
(5)pH＝5，室温(t＝25℃)的条件下抗栓素的稳定性预测 (1)根据Arrhenius定律，以logK对1/T作线性回归根据各温度下水解的试验结果，速率常数的对数logK与热力学温度的倒数值1/T见表2-43。
表2-2 pH＝5时各试验温度下消除缓冲液影响的水解速率常数值 根据Arrhenius定律，以logK对1/T作线性回归，得直线方程 logK＝-3877.4 1/T+9.7091|r|＝0.9970 将室温(t＝25℃，298K)代入直线方程，得pH＝5时室温条件下的水解速率常数
求得pH＝5时室温(t＝25℃)条件下的有效期
7.不同实验条件下的水解速率常数 不同实验条件下的水解速率常数
实验结果表明pH值在5以上，3，4-0-异亚丙基莽草酸均具有较好的稳定性。
实验例2干燥温度的确定实验 照实施例1处方配制样品，放入冷冻干燥机中进行预冻，随后开启真空泵，进入升华阶段。待冰晶完全消失后，开始升温，每隔5℃为一个量程，以固型物的成型性为宏观考察指标，观察制剂升温阶段的最高温度。结果见表。
干燥温度的确定 由实验结果可知，温度高于35℃对制剂的成型性有影响。
实验例3冻干支撑剂的选择 以冻干后制品的外观和复溶为指标，对加入甘露醇作为支撑剂与不加支撑剂进行了比较，结果见下表。
支撑剂筛选实验 结论以上实验可以看出，加入甘露醇作为支撑剂与不加支撑剂直接冻干都可以得到外观均一的冻干制剂，复溶后溶液澄清。
下述实施例均能实现上述实验例的效果。
实施例1 3，4-0-异亚丙基莽草酸10g 氢氧化钠2.37g 磷酸二氢钠8.44g 磷酸氢二钠4.6g 取3，4-0-异亚丙基莽草酸，加注射用水1000g溶解，按组方量加入氢氧化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠，121℃热压0.7kg/cm2灭菌30分钟，微孔滤膜过滤后超滤，超滤液分装于西林瓶，在冷冻干燥箱中，冻至-35℃以下，保温3小时；开启真空泵，进入升华阶段，升华的最高温度控制在-14℃以下；待冰晶完全消失后，转入干燥阶段，干燥温度为30℃。制备成200瓶。
静脉滴注。一次1～2支，一日1次。用5％葡萄糖或0.9％氯化钠注射液稀释至250～500ml后使用。
实施例2 称取抗栓素10克，加入氢氧化钠、磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，调节ph值为7，稀配至1000毫升，微孔滤膜(孔径0.22μm)过滤，分装于西林瓶中，每支装5ml，冷冻干燥，即得。进行检验，制备工艺重现性良好，见下表。
检验结果 实施例3 取3，4-0-异亚丙基莽草酸5g，加注射用水250g溶解，加入氢氧化钠调节pH为7，121℃热压0.7kg/cm2灭菌30分钟，微孔滤膜过滤后超滤，超滤液分装于西林瓶，在冷冻干燥箱中，冻至-35℃以下，保温3小时；开启真空泵，进入升华阶段，升华的最高温度控制在-14℃以下；待冰晶完全消失后，转入干燥阶段，干燥温度为30℃。
权利要求
1、一种3，4-O-异亚丙基莽草酸的粉针剂，其特征在于由如下重量比的原料制成
3，4-0-异亚丙基莽草酸10重量份、氢氧化钠2-5重量份、
磷酸二氢钠7-10重量份、磷酸氢二钠3-6重量份
注射用水100-1000重量份。
2、如权利要求1所述的粉针剂，其特征在于由如下重量比的原料制成
3，4-0-异亚丙基莽草酸10重量份氢氧化钠2.37重量份
磷酸二氢钠8.44重量份磷酸氢二钠4.6重量份
注射用水300-900重量份。
3、如权利要求1或2所述的粉针剂的制备方法，其特征在于该方法为
取3，4-O-异亚丙基莽草酸10重量份，加注射用水溶解，按组方量加入氢氧化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠，110-140℃压力条件为0.2-1.4kg/cm2灭菌20-50分钟，微孔滤膜过滤后超滤，超滤液冷冻干燥。
4、如权利要求3所述的粉针剂的制备方法，其特征在于该制备方法中灭菌条件为121℃、压力为0.7kg/cm2，灭菌30分钟。
5、如权利要求3所述的粉针剂的制备方法，其特征在于该方法中冷冻干燥的方法为在冷冻干燥箱中，冻至-35℃以下，保温3小时；开启真空泵，进入升华阶段，升华的最高温度控制在-14℃以下；待冰晶完全消失后，转入干燥阶段，最高温度不超过35℃。
6、如权利要求5所述的粉针剂的制备方法，其特征在于干燥温度为30℃。
7、3，4-O-异亚丙基莽草酸的粉针剂的制备方法，该方法包括如下步骤
取3，4-0-异亚丙基莽草酸10重量份，加注射用水100-1000重量份溶解，调节pH值5以上，在温度条件为110-140℃、压力条件为0.2-1.4kg/cm2灭菌20-50分钟，微孔滤膜过滤后超滤，超滤液冷冻干燥。
8、如权利要求7所述的3，4-O-异亚丙基莽草酸的粉针剂的制备方法，其中调节pH值为5-8。
9、如权利要求8所述的粉针剂的制备方法，其中调节pH值为7。
10、如权利要求7所述的粉针剂的制备方法，其特征在于该制备方法中灭菌条件为121℃、压力为0.7kg/cm2，灭菌30分钟。
11、如权利要求7所述的粉针剂的制备方法，其特征在于该制备方法中冷冻干燥的方法为在冷冻干燥箱中，冻至-35℃以下，保温3小时；开启真空泵，进入升华阶段，升华的最高温度控制在-14℃以下；待冰晶完全消失后，转入干燥阶段，最高温度不超过35℃。
全文摘要
本发明公开了一种异亚丙基莽草酸的粉针剂，由如下方法制备3，4-O-异亚丙基莽草酸10重量份，加注射用水溶解，加入氢氧化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠，110-140℃压力条件为0.2-1.4kg/cm2灭菌20-50分钟，微孔滤膜过滤后超滤，超滤液冷冻干燥制的；本发明解决了3，4-O-异亚丙基莽草酸制备成粉针剂的稳定性问题，更节约了生产成本，也避免因骨架材料的使用所可能导致的安全性问题。
文档编号A61K9/14GK101342168SQ200810212048
公开日2009年1月14日 申请日期2008年9月16日 优先权日2008年9月16日
发明者健 倪, 孙建宁, 郭亚建 申请人:健 倪