专利名称：：含有黄芩苷和白术内酯的组合物及其制备方法^"有^^g^白术内酯的^a^b;^^:制^^方法
技术领域：
：本发明涉及一种含有黄*和白术内酯的药物组^^勿，以及其制备方法和在安胎保婴类中药的应用，尤其涉及该药物组合物在治疗和/或预防胎动不安及其保护婴儿中的应用。背景絲胎漏、胎动不安和滑胎，即西医的先兆性流产和习惯性流产。习惯性流产属于中医学"滑胎"范畴之内，指凡堕胎、小产连续鈔3次以上者，妇JcWl2周内，胚胎自然殒堕者，称为"堕胎"。12~28周内，胎儿巳成形而自然硕堕者，称其为"小产"。西医多是从了解卵巢和黄体的功*^、手，主张黄体期按黄体功能逐步给予黄^a术治疗，用黄体酮来改善内月級育，抑制子宫收缩、提高胚胎种植率禾v^i^率。但黄体治疗<碰用于单纯黄体功能不全的流产，对原发性孕激素分泌不M盲目<铜大量孕激素保胎,若胚胎有缺陷，则^f扰自然淘汰。而对黄体功肯tiE常者滥用孕激素，也会干扰内源性激素的生成而不利于保胎。另外,黄体酮保胎失I^还^f吏子宫收缩功能减弱，降^^说能力，致使死胎滞留宫内和胚胎组织粘连难以及时排出而增加手^^k度。还有报it^fcte^早期大量^^黄体酮^^I台儿产生心脏缺陷的危险性，对女婴，有可能引組殖器男性4线发育障碍,出现假两性i^^。因此，黄体酮并非为万4H呆胎药。还如，西药安胎素(绒^4^促性腺素)，用于不孕症、黄体功能不足、功能性子宫出血、隐睾症、男性性腺功能减退症、先兆流产或习惯性流产等，^4v品溶液极不稳定，而且不耐热，酉己#4日之内用完为宜；注射前需作过每文i&险。总之，目前^4f西药的应用尚不能完4^il使形成理想的内膜环嫂。而在协调内分泌功能，以期iii'j树细月辦间同步发育和平衡这一点上中医药的辨证治疗较化学激素类药相比具有明显的优势，可以提高孕期血清激素水平、改善盆腔内环嫂或调节神经体液内分泌功能。中药保胎作用是多因素多机制综^f乍用的结果，既可作用于受体调节性激素平#^和卵巢功能,又对子宫平滑月几的收缩频率、活动率均有显著抑制作用。中药黄茶、白术配伍，净^^Jl金、元时期的名医朱丹溪《丹溪心法》誉为"安胎圣药"。许多安胎方剂中均有黄茶、白术，其安胎效果已被千百年来的医疗实践所证明。云"产前安胎，白术黄茶为妙药也。黄茶，安胎圣药也，俗人不知，以为寒而不敢用，反谓温热之药可养胎，f林知产前宜清热，令血循经而不妄行，故能养胎"。黄^^安胎效用，古今絲书籍和医家多有i^L云"黄茶、白术安胎圣药，俗以黄茶为寒而不敢用，盖不知胎孕宜清热凉血，血不妄行，乃能养胎。黄茶乃上、中二焦药，能降火下行，白术能补月純。"明确提出了黄茶与白术同为安胎圣药之说。？"素也曾提出"黄茶凉心，治肺中湿热，泻火上逆，疗上热，目中肺赤，痴血壅盛，上部积血，补膀月錄水，安胎，养阴退阳。"《溪南本草》日"黄茶，上行渴肺火，下行泻膀胱火，(治)男子五淋，女子暴崩，调经清热，月台有火热不安，清胎热，经实火实热。"黄茶(Scutellariabaicalensi.sGeorgi)为常用中药之一，具有清热燥湿、泻;/Cif桊、jhA安胎等功效，其主要有岁械分为黄酮类^^物。目前，从黄茶中已发现41种黄酮类化合物，其中^i:较高并具有明显药理作用的是黄茶戒、黄茶素、汉黄茶素和汉黄^C现代药理研究证明黄茶不仅具有明显的抗菌消炎、抗过敏、抗氧化、抗致癌和抗病毒的作用，而，于心血管也具有一定作用。对其药理学的^W究如下1.抗氧化和清除自由基作用多数黄酮类^^4勿具有一定的抗氧化作用，黄酮结构中的2，3双键和4位l^以及3或5位雍勤于黄酮的抗氧化作用有重要贡献。黄茶中已知的黄酮大都具有酚鞋^U吉构，因此是较好的抗氧化剂。黄茶素可抑制由铁诱导的I^f线粒体脂质it^化，对前脑匀划旨质itll化水平的抑制能力及二苯基^^W(DPPH)诱导的自由基的清除能力与槲皮素相当。作为治疗癫痫的日#汉药TJ一960中的成分之一，黄茶素是其中已知主要成分中最强的自由基清除剂。在a^N斜立体脂质itll/f匕实验中，黄茶素减少了抗坏血酸与FeCL3体系中硫化巴比妥酸活性物质(TBARs)的产生(GaoD,Sakuraik，kotohM,《黄茶素4AI^^勿对4斜立体脂质ii^化反应的抑制作用》BiochemMolInt.1996,39(2):215),谭廷华等的研究表明(谭廷华、刘爰芳、王新英等，"黄孩与絲力十.OH的清除作用，，[J].《西安医科大学学船〉1997,18(1):41~43),黄;^纟合药剂量为50和100mg.kg时均可显著抑制cch所致小鼠肝脂质it^^i员伤作用。2.抗菌、抗病4#用黄茶具有广谱的抗菌和抗病_^卡用。吕小迅等(吕小迅，周玉珍,吕华冲"黄茶、黄精抗真菌作用活性部位实验研究，，[■!].《广东药学院学^)〉,1995，11(3):180~182)研究了黄茶醇溶f生部^^水溶性部分的抗真菌作用，发现黄茶的醇溶l"生部分对Tr的抑制作用较强，对^j緣试菌种抑制作用则较弱；其水溶性部分对Tr,Tg，Ef，Cn和Ca等5种供试菌种均有较强抑制作用；同时证明黄茶的有效成分主要存在于其水溶1"生部分。3.抗炎、抗变态作用致病菌激活宿主免疫细胞产生各种炎性介质，如IL-113、PGE2和LTB4，它们与牙龈炎和牙槽骨吸收有着非常密切的关系。Chungifl介了黄茶曱醇提取物及其黄酮类^^勿的消炎和激活龈成纤维细胞作用，提示黄茶曱S封是取物、黄M、黄茶素和汉黄茶素均无细月fe44生，可^^旨多^射秀导的IL-18的合成降低50%以上。4.抗胂瘤作用ShinichiI等(参见ShinichiIkemoto，kaiimobuSugimuka，NaomasaYoshida，etal.黄斜M^其主要成^^茶素、黄M、汉黄茶素对膀胱癌细月&朱的抗肿瘤作用[J].Urology,2000，55(6):951—955)研究了黄:f;^期^4勿^";^素、黄M、汉黄茶fl^十膀胱癌细胞链的抗肿瘤作用。结果证实，所有药物均可抑制癌细胞的增殖，在量效依赖关系，黄茶素表现出最大的抗增殖活性。5.安胎作用对该单味中药黄茶的安胎保胎才^t如下:研究黄M的促孕保胎作用及其对母胎界面细胞因子的影响。表明黄絲可剂量^i负性上调孕酮的转，^iit床期IFN一7分泌，胚泡附植后又lf^氐IFN—7的含量，调节着^^fe^期Thl/Th2细胞因子平衡，影响内分泌一免疫网络，有利于胚胎着^^P,持。[马爱团，钟秀会，孟立根等，"黄^^对小鼠的保胎作用及其对细胞因子的影响"，《畜牧兽医学^)〉2007，38(9):983-988]。黄茶在保胎安胎的作用错^il和研究，研究表明，黄絲的了解黄茶对sD大鼠胚胎的影响，表明，黄茶无母体毒f生、胚胎毒性、发育毒f生和致畸作用。[杨丽萍，杨幼明，杨钧等，"黄茶对大鼠胚胎致畸作用的观幕"，《中国比较医学杂志》，2003,13(3):155]白术系菊科植物Atractylodesmacroc印halaKoidz的干燥根茎，具有#^益气、燥湿利水、止汗安胎^#丈。主治脾虚食少、劇^世渴、痰饮睹悸、7jc肺、自汗、胎动不安等症。近年来的研究表明白术具有利尿、抗菌、抗衰老[白术可提高12月龄以上小鼠红细胞SOD洽法，抑制小鼠脑单胺氧化酶B的活性，对抗红细胞自氧^>容血，并有清除活性氧自由基的作用，白术水煎液可显著提高老年小鼠全#光甘肽:化物酶(GSH—PX)活力，显著P争低红细胞中丙二^J:],抗肺瘤[白^7ff續细胞的增值率,!^氐瘤组织的4ftil性,提高枳^^J中瘤反应能力A^瘤细胞的细^^作用，白P十小鼠S实体瘤有明显的抑瘤作用]、对肠胃运动[白术煎剂有明显佑i小鼠胃排空及小肠4M功能作用，大剂量白术煎剂能M小鼠的肠胃^i^运动，这种#纽主要通i^W成能受体介导，并与a—受体有关。小剂量白术煎剂对离体豚鼠回肠平滑肌收缩轻度抑制，较大剂量则作用相反，并呈量^^关系樣一定作用]，还能调节免疫功能。对白术的安胎研究表明白柏^是取物与石油醚提取物对未孕小鼠离体子宫的自发性收缩^十催产素、益母草引起的子宫兴奋性收缩均呈显著抑制作用，并随药物浓度增加而抑制作用增强，存在量效关系。白术醇提取物还能完全拮抗催产素对豚鼠在体怀孕子宫的紧张性收宿。白术拟是取物对离体子宫的抑制作用较弱。实验结果与传统应用白术安胎相吻合，并提示白^fO寸子宫平滑肌具有直發f乍用，且安胎成分可肯^i^^射容性的。[周海虹、4余兆兰、杨瑞琴，白术^^耳又物对子宫平滑月几作用的研究，安徵中医学院学报，1993,12(4):39]黄茶白术合用安胎的药理学研究:保胎中药黄茶白^^抑制母体子宫与胎JL^面TNF—a(肿瘤细月^不死因子，可导l媳胎死亡)分泌的作用。所用药材原料及工艺为黄茶、白术，按l:1混匀，切碎，加7jc浸泡lh。水煎2次，合并滤液，蒸发^i宿至每ml含生药lg。[钟秀会、周占祥、孙秉贵等，"黄茶白彰十LPS诱导流产小鼠的保胎作用及子宫内TNF—a賴的影响，，，《畜牧兽医学^)〉2000.31(5),430—435.],PXF和黄茶白术能够阻抑LPS诱发的流产，使子宫内IL一10水平上升，从而有利于正常妊娠。[钟秀会，史万玉，宫新城等，黄茶白术与PXF对LPS诱导流产小鼠的保胎作用及子宫内IL一10舍i:的变^^f究畜牧兽医学报，2005,36(5),517-520〗综上所述，黄茶、白术各自的安胎的药理学有很多初步的研究，而对二者合用的处方的安胎虽然传统方剂有l^ii，^x于二者药材的比例，二者真正的药理作用部分并不清楚，因此，本发明对传统中药复方进行了系统的筛选和研究，按现代制备工艺制备出有明确安胎疗效的药用部位，该方面的前期制备工艺研究和相关筛选尚为空白。
发明内容本发明目的是提供一种含有黄和白术内酯的组^4勿及其制备方法。该组^f勿是从药材黄茶、白术中提取而得，同时含有黄絲、白术内酉旨(I,II,III)，重量百分比为黄絲賴为13%~27%,白术内酯(I,II,111)总好为0.5~21上iiia^4勿制备方法，包iW。下步-骤1)"^茶、白术药才才用50~80%的乙醇7J^溶液热回:;;y是取2~3次，合并^是皿；2)减压絲步骤1)所得提耳^^原药材的6~10倍体积；3)以3~5倍体积的水稀释浓缩液，并作澄清处理，取上清液；4)取上清液，过大孑LM脂柱吸附，弃流出液；然后用1~5BV的水，以0.5~2.5BV/小时的流速洗涤所述吸附柱，弃水洗液；之后，以50~80%乙醇以0.5~2.5BV/小时的流速;舰吸附柱，收集该乙醇洗脱液；两次洗脱液合并；5)浓缩、干燥乙醇洗脱液，得到提取物。一种含有黄茶、白术的组^f勿的制备方法还可以为超临^a取方法，包:fe^口下步骤黄茶、白术药才杉艮茎烘干—粉碎—超临界二氧^^友萃取—一级减压分离—二级减压分离—提取物;所述的超临界二氧^/友萃取的分离罐中进行一级减压分离压力为5~10Mpa，温度为40°C~60°C;二IS;咸压分离压力为5~7Mpa,温度为35°C~50°C,所述的黄茶、白术药才村艮茎烘干温度为50°C~80°C,烘干时间为4~7小时。本发明进一步的目的是提#"~种含有黄*、白术内酯的组^4勿及药学上可接受的载体和/或赋形剂的药物组^f勿。本发明更进一步的目的是提^"种含有黄^g1、白术内酯的药物组^f勿在制M胎保婴类药物中的应用，尤其涉及该药物组^4勿在治疗和/或预防胎动不安及其保护婴儿中的应用。本发明实施例l、2和3观察了组合物的制备方法。该组合物即可通过实施例l和2的乙醇水溶液热回^i是M。大^LM脂制备方法，又可通过实施例3用超临界4C取方法制备工艺制备成。同时，在实施例4中，建立了7L^关4械分的分析方法和测定，通过研究表明，该组^f勿的主要有^^^"^和白术内酯在一定范围内。为了实现^^发明的另一目的，以黄^、白术内酯的组^4勿为药刻減分，添加药学上可接受的药用辅料并通ii^领域的常规方法可以制备成药物组合物或单体制备成药物制剂时，药物制剂的剂型可以是口月^合药的剂型诸如片剂、胶嚢(包括石划交嚢、软胶嚢、肠溶胶嚢和微嚢)、粉剂、颗粒剂和糖浆剂；非口力^合药的剂型诸如注射齐'J、栓剂、丸剂、；劍交剂和贴剂。^it些常规剂型夕卜，还可以将口服的速释固体制剂(例如片剂、颗粒剂等)和用于口服或非口Si合药的緩辨'j剂(片剂、颗粒、精细颗粒、丸剂、胶嚢、糖浆、乳剂、悬浮液、溶液)用于本发明。本发明中的制剂可以是包衣或未包衣的形式，浮见需要而定。本发明中的药用辅料包括用于固体制剂的赋形剂、润滑剂、津^'J、崩解剂、稳定剂、发泡剂、包衣剂等，或用于半固体制剂、液体制剂的溶剂、增溶剂、悬浮剂、等'斜'J、緩冲剂、润肤剂、乳化剂等，itb^卜，也可以根据需^^M其它药用添加剂诸如防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂禾"周味剂等。本发明实施例5邓LS了黄茶、白术方提取物对己烯#1^所致流产模型的保胎作用。结絲明，与对照组相比，含有黄茶、白术的提取物对己烯站峰所致流产模型具备显雜胎作用。4^发明的积^l^^:是，由于本发明选用组分比例合理的含有黄务昏、白术内酯的组合物，并通过大量"^睑实施例^4全i正，明确了安胎疗效的药用部位。为开发新的保胎类新药开辟了新路。为了更好;&里解发明的实质，下面用实施例来详细i兌明本发明的技术内容，{妹发明的内容并不局限于此。实施例1含有黄萃、白术的4是ipl物的制备取中药材黄茶、白#250/>斤，力口入1吨50°/。乙醇，加热回力^是耳又3h，滤过，药渣继续加1吨5°/。乙醇。回流提耳又2h，滤过，两次提耳)l^合并。减压回^i^剂，温度50-6(TC,^i宿到原药材的6^^i。、，将^i宿編口3倍热7]<:#释，离心，去沉淀，取上清液，上样于DIOI大:LM脂柱(在上样前分别用酸，碱，水，醇对树脂柱进行前处理)，上样后先用3BV纯水沖洗，水溶液弃除，改用3BV的50。/。乙醇洗脱，洗脱液济Lii为1.5BV/h，收集该乙醇洗脱液，继续减压回^)容剂，收集浸膏，喷雾干燥，即得。实施例2含有黄茶、白术的提取物的制备取中药材黄茶、白术各250公斤，力口入1吨80%乙醇，加热回i^是取2h，滤过，药渣继续加1吨80°/。乙醇。回;户d是取2h,滤过，两次提耳^^合并。减压回"t容剂，温度50-6(TC，j彭宿到原药材的10倍体积，将^^宿編口5倍热7財希释，离心，去沉淀，取上清液，上样于DIOI大3L4对脂柱(在上样前分别用酸，碱，水，醇对树脂柱进行前处理)，上样后先用3BV纯水冲洗，水溶液弃除，改用3BV的80。/。乙醇洗脱，洗脱液流速为l.5BV/h,收集该乙醇洗脱液，继续减压回jRi容剂，收集浸膏，喷雾干燥，即得。实施例3含有黄茶、白术的提取物的制备黄茶、白术药才杉艮茎各1000g，并分石卒至粒^70目，烘干后才^7v萃取斧内，萃取^f牛为萃職力为25Mpa，温颜50°C,分离^f牛为一M;咸压分离压力为8Mpa,温度为50。C,二欽咸压分离压力为7Mpa，温度为45。C,80%乙醇为夹带剂，动态运行5小时后，从一级離分离斧和二鉱扭分离斧得到总提城6500ml,萃取率为1.5%。实施例4含有黄茶、白术的^是fl物的质量分斗斤下列质量分析中所用样品包括样品l:按实施例1的方法得到提取物，共5个批号；样品2:按实施例3的方法得到5个批号。1.2黄*、白术内酯的^J:测定采用高效液相色谱法(HPLC)，以黄絲、白术内酯香为对照品，测定絲。1.2,1色"i输牛高效液相色谱仪HP1100系列(美国惠普公司)，用十7V^J^i^克健^^划交为填充剂，C18色谱柱，规4各为5jLim，4x250mm,柱温(30。C),水(A)和乙腈(B)为流动相，梯度;舰，；^41^为Omin时，A:B按梯度，lml/min，紫外4&则器(UV),;^则波长280nm,220nm。1.2.2标准品溶翻己制称JpO^照品黄絲、白术内西旨(I,II,m)约15mg，用适量60%乙醇溶解，定容于100ml的容量瓶中，摇匀，作储备液。精密吸取5ml储备液，60°/。乙醇定容于50ml的容量瓶中。分别吸取l,1.5,2,4,10mL，專^多到10mL容量瓶中，用60%乙醇定容至刻度。以对照品浓度(x)为横坐标，吸牝变(y)为纵坐标进行回归计算，1.2.3测定方法取样品适量，精密称定25mg左右，寿g多至50mL容量瓶中，力口60°/。乙醇40mL，常温下超声30min，取出冷却到室温，力口70°/。乙醇至刻度，摇匀，吸取2mL至10mL容量瓶中，60°/。乙醇定容至刻度，摇匀，即可测定。根据标准曲线即可计算二者的^1:。1.2.4结果样品1,样品2，其黄^^J:占总提取物重量比例为13%~27%;,白术内酯(I,II，III)占总提取物重量含量比例为0.5~2%。以上充^i兌明了黄茶、白^4是取物，可开J^j呆胎类新药。实施例5含有黄茶、白术的提取物制备力寸己烯#^所致流产模型的保胎作用。1.微材料(1)受试药物供试样品黄萃苦(大于95°/,HPLC法)，白术内酯(含量95%,HPLC法)，黄茶、白^4是取物I(实施例l的方法制备)，黄茶、白^I是取物I1(实施例3方法制备)，复方药材7j^是液(黄茶、白tM安1:l重量比混匀，切碎，加常水浸泡lh。水煎2次，合并滤液，蒸发^i宿至每ml含生药lg)，复方药材S封是液(黄茶、白^4安1:1重量比混匀，切碎，加乙醇回;jU是取2次，合并滤液，蒸发i^i宿至每ml含生药lg)，黄茶单方水提液(黄茶切碎，加常温水浸泡1h。水煎2次，合并滤液，蒸发浓缩至每ml含生药lg),黄茶单方S封是液(黄茶切碎，加乙醇回^t是取2次，合并滤液)，黄茶提取物I(按实施例l的制备工艺得来)、黄茶提取物II(按实施例3制备工艺得来的)、白术单方水提液(白术切碎，加常7JC浸泡1h。水煎2次，合并滤液，蒸发^i宿至每ml含生药lg),白林方Sf^是液(白术切碎，加乙醇回i^是取2次，合并滤液，蒸发;彭宿至每ml含生药lg),白t(C^取物I(按实施例1制备工艺得来的)，白7^是取物H(按实施例3制备工艺得来的)。4M^f牛、密闭。配制方法称取一定量待试样品，用1%羧曱基纤维素钠溶液制成混悬液。(2)实验方法取阴栓鼠340只，^^EL见下表，自絲第l日起连续IO日灌服以上各提取物；阳'^于照组灌服安宫黄体酮。以上各组与己烯#1^莫型组于第7~8日皮下注射己烯肚f敏、空白对照组灌服生理盐水连续10天，于第7~8天皮下注射生理盐7K，剂量与给药组等量。各组动物于第1日解剖。(3)实验结果结果见表l,充分i正明含有黄茶、白术的提取物对己烯辦敏\所致小鼠流产模型有显^H呆胎作用。可见含有黄茶、白术的提取物药J對t^最好，^^优于其#>^组别，优于复方的水，S封是m，优于各单药材不同制备方法的样品，可J^^发明的复方提取物I和II,可开发为新的有潜力的保胎药。表l各M^己烯对峰所致小鼠流产模型有保胎作用。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注意以上除空白对照组、己烯#1^莫型组、己烯^l^模型组外，其余各组均加己烯辦敏、(5iig/只，各组使用剂量均折算为原药材对应剂量)。AA与空白对照组比较，-0.01,**与模型对照组比较，01,*与模型对照组比较，AO.05。权利要求1、一种含有黄芩苷和白术内酯的组合物，含有黄芩苷、白术内酯(I，II，III)，其特征在于含有质量百分比为13％～27％的黄芩苷，以及质量百分比为0.5～2％的白术内酯(I，II，III)。2、一种权利要求1所述组合物的制备方法包括如下步骤l)药材黄芩、白术用50~80%的乙醇水溶液热回流提取2~3次，合并提取液；2)减压浓缩步骤1)所得提取液至原药材的6~10倍体积；3)以35倍体积的水稀释浓缩液，并作澄清处理，取上清液；4)取上清液，过大孔树脂柱吸附，弃流出液；然后用15BV的水，以0.5~2.5BV/小时的流速洗涤所述吸附柱，弃水洗液；之后，以50~80°/。乙醇以0.5~2.5BV/小时的流速洗脱吸附柱，收集该乙醇洗脱液；两次洗脱液合并；5)浓缩、干燥乙醇洗脱液，得到提取物。3、一种权利要求1所述的组合物的制备方法，为超临界提取方法，包括如下步骤黄茶、白术药材根茎烘干—粉碎—超临界二氧化碳萃取—一级减压分离—二级减压分离—提取物。4、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于所述的黄茶、白术药材根茎烘干，温度为50°C~80°C,烘干时间为47小时；所述的超临界二氧化碳萃取的分离罐中进行一级减压分离压力为5~10Mpa，温度为40。C60。C;二级减压分离压力为57Mpa,温度为35。C50。C。5、一种药物组合物，含有权利要求1所述的组合物，并进一步包含药学上可接受的载体和/或赋形剂。6、权利要求5所述的药物组合物在制备安胎保婴类药物中的应用。全文摘要本发明公开了一种含有黄芩和白术的组合物，该组合物是从药材黄芩、白术中提取而得，所述组合物同时含有黄芩苷、白术内酯(I，II，III)，黄芩苷含量质量百分比为13％～27％，白术内酯(I，II，III)总含量质量百分比为0.5～2％。所述的组合物的制备方法可以是乙醇水溶液热回流提取加大孔树脂制备方法，又可用超临界提取方法。以黄芩、白术提取物为药效成分，添加药学上可接受的药用辅料可以制备药物组合物或单体制备成药物制剂，用于治疗和/或预防胎动不安及其保护婴儿。文档编号A61P15/06GK101422507SQ20081021802公开日2009年5月6日申请日期2008年12月4日优先权日2008年12月4日发明者严启新,冯汉林,勇李,姿李,赵金华,萍陈,媛高申请人:深圳海王药业有限公司