一种玉屏风散有效成分组合物及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明属于中药制备【技术领域】。具体涉及一种玉屏风散有效成分组合物及其制备方法和应用。本发明所述由黄芪甲苷，白术内酯I，升麻素苷，三者按照不同的比例进行组合，产生玉屏风散有效成分组合物。本发明是将中药与现代科学技术相结合，将西药的标准用于中药的研究开发，将药效和化学成分予以标准化呈现，并研究开发出安全、稳定、质量可控的现代中药。即该组合物具备了药品的安全性、有效性和质量可控性三大要素。这有利于解决中药与国际医药发展趋势接轨问题，有助于实现中药的现代化和国际化。继承和发展传统中药，并与现代医药技术相结合，是中药步入国际市场的关键所在。
【专利说明】一、
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药制备【技术领域】。具体涉及一种玉屏风散有效成分组合物及其制备 方法和应用。 二、
【背景技术】
[0002] 正常的免疫应答是机体维持自身平衡、抵御外来侵略的主要机制，过剩的免疫应 答则会造成各种自身免疫性疾病、过敏及各种炎症反应等。以抑制过剩免疫应答为目的的 现有免疫抑制剂，由于其作用对细胞和组织缺乏选择性，往往造成免疫应答的全面抑制，因 而产生严重的毒副作用，如糖皮质激素、环磷酰胺等。环孢素A是在环孢霉菌的代谢产物中 发现的，通过和环亲和素结合形成复合体，进而抑制钙调蛋白磷酸酶的功能，进一步抑制炎 症早期被活化的基因（如IL-2)的转录，从而发挥免疫抑制作用。但是，环孢素A缺乏选择 性，对T细胞担负的机体正常免疫功能也有抑制作用。而且，长期使用环孢素A的病人，常 可观察到药物对肾脏和神经系统的毒性，且发生感染性疾病和肿瘤的风险增高。另外，分子 靶向类免疫抑制剂是近年来发展起来的以抗体类制剂为主的新型免疫抑制剂，但其对于免 疫应答的抑制仍往往是非选择性的，会造成严重的毒副作用。
[0003] 寻找能够选择性地抑制在疾病发生发展过程中扮演病理性角色的免疫细胞或分 子，而不影响或较少地影响其他正常的免疫细胞的分子，是实现选择性免疫抑制的重要环 节。从一系列清热中药中发现了能选择性地作用于免疫应答不同阶段的中药及其成分，这 些中药及成分对迟发型超敏反应（DTH)的不同时相有选择性的抑制作用。
[0004] 玉屏风散源于元代朱丹溪的《丹溪心法》，其功效为益气固表止汗，主治表虚不固、 恶风自汗、体虚易感风邪者。药物组成为黄芪、防风各一两，白术二两；可研末制丸开水送 月艮，或按相同比例以水煎服饮用。实验研究表明，玉屏风散具有调节人体免疫功能；近年来， 被广泛应用于临床，对小儿体虚多汗、预防体弱儿童反复呼吸道感染、荨麻疹、风湿性关节 炎、过敏性皮炎、肾炎、美尼尔氏综合征等病症均有良好疗效。
[0005] 中药是依照七情和合、君臣佐使的原则组成方剂的。现代研究中药方剂配伍组方 的方法，主要是在组分层次上研究中药有效成（组）分的配伍组方，能够实现药物配伍组方 的定量分析，有助于明确中药有效成（组）分的作用靶点，探讨中药方剂的可能作用机制， 为中药现代化研究奠定基础，为中药拓展国际市场提供依据。
[0006] 目前，海外中药市场上，中国拥有专利权的中药仅为0. 3% ;全球中药市场销售额 一年约800亿美元，中国仅占10%。日本汉药企业借组中医药占领了国际中成药市场的 80%，赚取高额利润。将西药的标准用于对中药的研究开发，将药效和化学成分予以标准化 呈现，这令全球各国更易接受日本生产的中成药，即"汉药"，这也是日本"汉药"走向世界的 根本。
[0007] 虽然中国有着丰厚的中药资源优势，但其复方成分极其复杂限制了在国际上的竞 争力，要改变现状，必需走现代化道路。而阐明复方配伍的化学物质成分以及多靶点效应机 制，是解决中药与国际医药发展趋势接轨问题的必经之路。必须运用传统中医药理论并结 三、
【发明内容】
[0008] 本发明需要解决的问题是：提供一种玉屏风散有效成分组合物及其制备方法和应 用。实现中药现代化。
[0009] 本发明的技术方案概括如下：
[0010] 1.玉屏风散有效成分组合物的组成
[0011] 本发明所述玉屏风散有效成分组合物由黄芪甲苷（即黄芪皂苷IV， AstragalosideIV，C41H68O14),白术内酯I(AtractylenolideI，C15H18O2),升麻素苷 (Prim-o-glucosylcimifugin,C22H28O11),三者按照不同的比例进行组合,产生玉屏风散有 效成分组合物。
[0012]黄芪的主要有效成分为黄芪甲苷（即黄芪皂苷IV，AstragalosideIV，C41H68O14)， 具有抗炎降压、镇痛镇静、改善心肌收缩及舒张、清除自由基等作用；并对迟发型超敏 反应（DTH)有抑制作用，可能与抑制IFN-Y有关。白术的主要有效成分为白术内酯 I(AtractylenolideI，C15H18O2)，具有抗炎、抗肿瘤、调节肠道功能和促进营养物质吸收的 功能。防风的主要有效成分为升麻素苷（Prim-o-glucosylcimifugin，C22H28O11),具有显著 的解热、镇痛、抗炎之功效。
[0013] 2.本发明所述玉屏风散有效成分组合物的制备方法：
[0014]分别称取黄苗甲苷（3mg-21mg)、白术内酯I(2mg-14mg)和升麻素苷（6mg-21mg)， 加入0. 5ml2%的吐温80 (Tween-80)和24. 5ml双蒸水，配制成黄芪甲苷、白术内酯I和升 麻素苷的混和溶液，混和溶液中各有效组分的终浓度分别为黄芪甲苷0. 12-1. 05mg/ml，白 术内醋I〇? 08-0. 7mg/ml，升麻素昔 0? 24-1. 05mg/ml。
[0015] 组合物I混和溶液中各有效组分的终浓度分别为〇? 12mg/ml黄芪甲苷、0? 08mg/ml 白术内酯I和〇. 24mg/ml升麻素苷。
[0016] 组合物II混和溶液中各有效组分的终浓度分别为I. 05mg/ml黄芪甲苷、0? 7mg/ml 白术内酯I和I. 〇5mg/ml升麻素苷。
[0017] 3?药理实验
[0018] 使用二硝基氟苯（DNFB)进行外源性刺激，并连续灌胃等量生理盐水5天后，使用 较低浓度DNFB进行激发，构建迟发型超敏反应的变应性接触性皮炎小鼠模型。
[0019]在此基础上，分别对模型组、地塞米松阳性药物组、玉屏风散（YPF)、YPF有效成分 组合物给药组的实验小鼠，于激发后6?8小时，分别对实验小鼠的耳厚度和体重变化进行 测量；于激发后12小时对小鼠进行摘眼球取血，取离心后得到的上层血清进行ELISA检测， 分别检测IL-4和IFN-Y含量并进行统计分析。
[0020] 小鼠处死后，取其脾脏称重，并计算脾脏指数。
[0021] 同时，对小鼠脾脏组织加入细胞裂解液和蛋白酶抑制剂，使用匀浆仪进行匀浆；离 心，取上清液，用BCA法测定组织蛋白原液蛋白浓度；然后，采用westernblotting方法检 测IL-6表达量。
[0022] 4?实验结果
[0023] 研究结果表明，玉屏风散有效成分组合物给药后，小鼠体重明显下降（P〈0.05); 与地塞米松和玉屏风散相比，组合物I的小鼠体重下降的差异不大；但与模型组小鼠比较， 组合物I的下降幅度明显减小（表1)。
[0024]玉屏风散有效成分组合物能够显著降低激发后小鼠耳肿胀程度（P〈0. 01)，而且， 组合物I和组合物II的抑制作用均高于地塞米松和玉屏风散（表1)。
[0025] 玉屏风散有效成分组合物能够显著降低脾脏指数（p〈0. 01)，具有一定的免疫抑制 作用（表1)。
[0026] 玉屏风散有效成分组合物都能够显著升高小鼠血清中IL-4的含量（p〈0. 001)，组 合物I和组合物II的活性与地塞米松相当（表1)。
[0027] 玉屏风散有效成分组合物能够显著降低小鼠血清中IFN-Y的含量（p〈〇.05)，组 合物I的活性更加接近地塞米松（表1)。
[0028] 从IFN-Y/IL-4的比值来看，模型组小鼠的比值显著高于正常小鼠，给药后该比 值又显著下降。玉屏风散有效成分组合物都能够显著降低IFN-Y/IL-4比值，其中组合物 I的比值更加接近地塞米松的比值（表1)。这表明，它们具有调节Thl/Th2失衡的功能。
[0029] 表1、玉屏风散复方及其有效成分复合物对DTH小鼠体重、耳肿胀度、脾脏指数、血 清中IFN-Y和IL-4水平以及脾脏中IL-6表达水平的影响
[0030]
【权利要求】
1. 一种玉屏风散有效成分组合物，其特征是由黄芪甲苷、白术内酯I和升麻素苷，按 照不同的比例进行组合，产生玉屏风散有效成分组合物。
2. 根据权利要求1所述玉屏风散有效成分组合物的制备方法，其特征是由以下步骤构 成： 分别称取黄苗甲苷3mg-21mg、白术内酯I 2mg-14mg和升麻素苷6mg-21m ; 加入0. 5ml 2%的吐温80和24. 5ml双蒸水，配制成黄芪甲苷、白术内酯I和升麻素苷 的混和溶液； 混和溶液中各有效组分的终浓度分别为黄芪甲苷〇. 12-1. 05mg/ml，白术内酯I 0? 08-0. 7mg/ml，升麻素昔 0? 24-1. 05mg/ml。
3. 权利要求1所述玉屏风散有效成分组合物在制备免疫调节药中的应用。
4. 权利要求1所述玉屏风散有效成分组合物在制备治疗呼吸道感染或支气管哮喘或 过敏性鼻炎或慢性荨麻疹或皮肤瘙痒症或过敏性皮炎或风湿性关节炎或肾炎药物中的应 用。
5. 权利要求1所述玉屏风散有效成分组合物在制备治疗恶性肿瘤、慢性肝炎、慢性支 气管炎辅助药物中的应用。
【文档编号】A61P11/02GK104473956SQ201410769104
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年12月12日 优先权日:2014年12月12日
【发明者】杨洁 申请人:南京大学