自身免疫病的治疗的制作方法

专利名称：自身免疫病的治疗的制作方法
自身免疫病的治疗相关申请本申请要求2007年3月15日提交的美国临时申请第60/918518的优先权，将其 完整并入本文。背景蛋白质异质性能够由一系列翻译后修饰引起。蛋白质异质性通常因不同类型的翻 译后修饰产生，所述修饰包括羧化、羟基化、蛋白酶解加工、硫酸化(sulflaion)和糖基化， 其中糖基化是最常见的修饰(Walsh和Jefferis (2006) Nat Biotech 24(10) :1241)。翻译 后修饰能够潜在影响产物生产水平(例如，通过影响正确的蛋白折叠的程度)、稳定性和一 系列药物代谢动力学和药物动力学参数，以及安全性和免疫原性。对治疗性生物产品或基 于蛋白质的生物药物进行的翻译后修饰可能影响与它们的治疗应用相关的蛋白质性质。N-末端和/或C-末端异质性是蛋白质异质性的实例，其是在基于蛋白质的生物药 物的制造中所必需考虑的。N-末端异质性是由在蛋白质的氨基末端部分进行蛋白酶解加工 而产生的，其中这样的加工可能导致具有不同大小的蛋白质的群体。N-末端蛋白酶解中的 变异可能在包含信号序列的蛋白质中发生。此外，N-末端谷氨酰胺残基能够进行自发环化 而形成焦谷氨酸。因此，要获得能够用于治疗目的的均质的蛋白质群体通常面临挑战。淋巴毒素β受体(LTBR)是肿瘤坏死因子受体(TNFR)家族成员。所述受体在大 多数淋巴器官的实质(parenchyma)和基质(stroma)中的细胞表面表达，但是在T淋巴细 胞和B淋巴细胞上不存在。通过LTa/β异源三聚体(LT)经由LTiiR的信号传导在淋巴 发育过程中很重要。还已知LTBR结合配体LIGHT (与淋巴毒素同源，呈现诱导型表达，并且 与单纯疱疹病毒糖蛋白D竞争HVEM，一种由T淋巴细胞表达的受体)，这已经在外周和胸腺 中的T细胞驱动的事件中得到了暗示。LT和LIGHT在活化的淋巴细胞表面表达。已经证明 了用可溶性诱饵LTBR阻断LT途径对治疗多种动物模型中的自身免疫病有效。开发异质性降低的LTBR可溶形式和用于施用这些分子的最佳给药方案将大有裨
■、Λ
frff. ο

发明内容
在一个方面本发明涉及包含淋巴毒素-β受体(LT-i3-R)_Ig-融合蛋白群体的组 合物，所述淋巴毒素_ β受体(LT- β -R) -Ig-融合蛋白包含长度为193或194个氨基酸的变 体LT- β -R胞外域和长度为227个氨基酸的变体Ig部分，其中至少90%的LT- β -R-Ig-融 合蛋白从SEQ ID NO :21中所示的野生型LT-β-R胞外域成熟形式的N-末端缺失不多于5 个氨基酸，并且其中所述LT- β -R-Ig-融合蛋白缺乏N-末端焦谷氨酸。在一种实施方案中，变体LT- β -R-Ig融合蛋白的N-末端氨基酸是非极性氨基酸。在一种实施方案中，所述非极性氨基酸是缬氨酸(SEQ ID Ν0:21的野生型 LT-β-R胞外域成熟形式的第六个氨基酸)或丙氨酸(SEQ ID Ν0:21的野生型LT-β-R胞 外域成熟形式的第五个氨基酸)。 在一种实施方案中，至少95 %的LT- β -R-Ig-融合蛋白的N-末端氨基酸是缬氨酸(SEQ ID NO 21的野生型LT-β-R胞外域成熟形式的第六个氨基酸)或丙氨酸(SEQ ID NO 21的野生型LT- β -R胞外域成熟形式的第五个氨基酸)。在一种实施方案中，所述组合物通过在哺乳动物细胞中表达核酸分子来制备，所 述核酸分子包含编码SEQ ID NO :4中所示的LTBR胞外域的核苷酸序列。在一种实施方案中，所述核酸分子包含SEQ ID NO 3中所示的序列。在一种实施方案中，变体Ig部分包含IgGl同种型的Fc区。在一种实施方案中，变体Ig部分包含SEQ ID NO 2中所示的氨基酸序列。在一种实施方案中，所述Ig部分是非糖基化的。在一种实施方案中，所述组合物通过在哺乳动物细胞中表达核酸分子来制备，所 述核酸分子编码SEQ ID NO 5中所示的LT-β -R-Ig融合蛋白。在一种实施方案中，所述核酸分子包含SEQ ID NO 7中所示的序列。在一种实施方案中，表达的步骤以制造业规模进行。在一个方面，本发明涉及包含淋巴毒素-β受体-免疫球蛋白(LT-i3-R-Ig)_融 合蛋白群体的组合物，所述淋巴毒素-β受体-免疫球蛋白(LT-i3-R-Ig)_融合蛋白 包含变体LT-β-R胞外域和变体Ig部分，其中所述变体LT-β-R胞外域是无糖基化的 (aglycosylated)。在一种实施方案中，所述无糖基化的LTBR胞外域包含SEQ ID N0:10的氨基酸 1-194。在另一个方面，本发明涉及包含淋巴毒素-β受体-免疫球蛋白(LT-i3-R-Ig)_融 合蛋白群体的组合物，所述淋巴毒素-β受体-免疫球蛋白(LT-i3-R_Ig)融合蛋白包含长 度为193或194个氨基酸的变体LT- β -R胞外域和变体Ig部分，其中所述群体与野生型 LT-β -R-Ig融合蛋白相比N-末端焦谷氨酸形成降低且C-末端异质性降低。在一种实施方案中，至少90%的LT-β-R-Ig-融合蛋白包含如SEQ ID NO :4或SEQ ID NO 23的氨基酸序列所示的变体LT- β -R胞外域。在一种实施方案中，所述变体Ig部分在铰链区(hinge region)中包含突变。在一个方面，本发明涉及包含淋巴毒素-β受体(LT-i3-R)_Ig-融合蛋白群体和 药学可接受的载体的药物组合物，所述淋巴毒素-β受体(LT-β-R)-Ig-融合蛋白包含长 度为193或194个氨基酸的变体LT- β -R胞外域和长度为227个氨基酸的变体Ig部分，其 中至少90%的LT-β-R-Ig-融合蛋白从SEQ ID NO :21中所示的野生型LT-β-R胞外域成 熟形式的N-末端缺失不多于5个氨基酸，并且其中所述LT- β -R-Ig-融合蛋白缺乏N-末 端焦谷氨酸。在一种实施方案中，所述变体LT-β -R-Ig融合蛋白的N-末端氨基酸是非极性氨基酸。在一种实施方案中，所述非极性氨基酸是缬氨酸(SEQ ID Ν0:21的野生型 LT-β-R胞外域成熟形式的第六个氨基酸)或丙氨酸(SEQ ID Ν0:21的野生型LT-β-R胞 外域成熟形式的第五个氨基酸)。在一种实施方案中，至少95%的LT-β -R-Ig-融合蛋白的N-末端氨基酸是缬氨 酸(SEQ ID NO 21的野生型LT-β-R胞外域成熟形式的第六个氨基酸)或丙氨酸(SEQ ID NO 21的野生型LT- β -R胞外域成熟形式的第五个氨基酸)。
在一种实施方案中，所述组合物通过在哺乳动物细胞中表达核酸分子来制备，所 述核酸分子包含编码SEQ ID NO :4中所示的LTBR胞外域的核苷酸序列。在一个方面，本发明涉及治疗自身免疫病的方法，该方法包括向需要的受试者施 用权利要求23的药物组合物。在一种实施方案中，所述自身免疫病选自下组类风湿性关节炎、克朗氏病 (Crohn，s disease)或系统性红斑狼疮(SLE)。在一种实施方案中，本发明涉及包含淋巴毒素-β受体-免疫球蛋白 (LT-β-R-Ig)-融合蛋白群体和药学可接受的载体的药物组合物，所述淋巴毒素-β受 体_免疫球蛋白(LT-β -R-Ig)-融合蛋白包含长度为193或194个氨基酸的变体LT-β -R 胞外域和变体Ig部分，其中所述群体与野生型LT- β -R-Ig融合蛋白相比N-末端焦谷氨酸 形成降低且C-末端异质性降低。在一种实施方案中，至少90%的LT-β-R-Ig-融合蛋白包含如SEQ ID NO :4或SEQ ID NO 23的氨基酸序列所示的变体LT- β -R胞外域。在一种实施方案中，所述变体Ig部分在铰链区中包含突变。在一种实施方案中，所述氨基酸序列示于SEQ ID NO :5。在一个方面，本发明涉及治疗自身免疫病的方法，该方法包括向需要的受试者施 用权利要求29的药物组合物。在一种实施方案中，所述自身免疫病选自下组类风湿性关节炎、克朗氏病或系统 性红斑狼疮(SLE)。在一种实施方案中，所述自身免疫病是类风湿性关节炎。在一种实施方案中，所述药物组合物以每两周(biweekly)大约0. 6_3mg/kg的剂 量向受试者施用。在一种实施方案中，皮下施用所述药物组合物。在一个方面，本发明涉及分离的多肽，所述分离的多肽包含长度为193或194个氨 基酸的变体LT- β -R胞外域和长度为227个氨基酸的变体Ig部分，其中所述多肽从SEQ ID NO :21中所示的野生型LT- β -R胞外域成熟形式的N-末端缺失不多于5个氨基酸，并且其 中所述多肽缺乏N-末端焦谷氨酸。在一种实施方案中，所述N-末端氨基酸是非极性氨基酸。在一种实施方案中，所述非极性氨基酸是缬氨酸(SEQ ID Ν0:21的野生型 LT-β-R胞外域成熟形式的第六个氨基酸)或丙氨酸(SEQ ID Ν0:21的野生型LT-β-R胞 外域成熟形式的第五个氨基酸)。在一种实施方案中，所述多肽通过在哺乳动物细胞中表达核酸分子来制备，所述 核酸分子包含编码SEQ ID NO :4中所示的LTBR胞外域的核苷酸序列。在一种实施方案中，本发明涉及分离的核酸分子，其编码本发明的多肽。在一种实施方案中，所述核酸分子包含(comprises of) SEQ ID NO :7中所示的核 苷酸序列。在一种实施方案中，本发明涉及包含本发明的核酸分子的载体。在一种实施方案中，本发明涉及表达本发明的载体的宿主细胞。在一种实施方案中，所述细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。
在一种实施方案中，本发明涉及用于制备包含淋巴毒素-β受体 (LT-i3-R)-Ig-融合蛋白群体的组合物的方法，所述淋巴毒素-β受体(LT-i3-R)-Ig-融 合蛋白包含变体LT-β -R胞外域和变体Ig部分，其中至少90%的LT-β -R-Ig-融合蛋 白从SEQ ID NO :21中所示的野生型LT-β-R胞外域成熟形式的N-末端缺失不多于5个 氨基酸，所述方法包括在哺乳动物细胞中表达编码SEQID NO 8中所示LT-β -R-Ig融 合蛋白的核酸分子，从培养物上清液获得群体，并且，任选地，纯化所述上清液，以由此获 得包含淋巴毒素-β受体(LT-i3-R)-Ig-融合蛋白群体的组合物，所述淋巴毒素-β受 体(LT- β -R) -Ig_融合蛋白包含变体LT- β -R胞外域和变体Ig部分，其中至少90 %的 LT-β -R-Ig-融合蛋白从SEQ IDNO 21中所示野生型LT-β -R部分的成熟形式的N-末端 缺失不多于5个氨基酸。在一种实施方案中，所述核酸分子包含SEQ ID NO 7中所示的核苷酸序列。在一种实施方案中，所述核酸分子由SEQ ID NO 7中所示的核苷酸序列组成。在一种实施方案中，本发明涉及治疗人受试者中类风湿性关节炎的方法，所述方 法包括向所述受试者施用LT-β-R-Ig融合蛋白的一种剂量，其中所述剂量足以在受试者 的血清中维持约0. 14ug/ml ( μ g/ml)至约3. 5ug/ml的平均浓度。在另一个方面，本发明涉及治疗人受试者中类风湿性关节炎的方法，所述方法包 括向所述受试者施用LT-β-R-Ig融合蛋白的一种剂量，其中所述剂量足以在受试者的血 清中维持约0. 6ug/ml的平均最小平均浓度。在一种实施方案中，所述LTBR-Ig融合蛋白包含SEQ ID NO 5中所示的氨基酸序 列。在一种实施方案中，所述浓度通过每7-60天一次以约0. 01至约5mg/kg的剂量施 用LT-β -R-Ig融合蛋白来实现。在一种实施方案中，本发明涉及治疗人受试者中类风湿性关节炎的方法，所述方 法包括向所述受试者每7-30天施用不超过两次大约0. 6-3mg/kg的LT-β -R-Ig融合蛋白剂量。在一种实施方案中，所述方法包括向受试者每7-14天施用一次大约0. 6-3mg/kg 的LT-β-R-Ig融合蛋白剂量。在一种实施方案中，施用为每14-30天一次。在一种实施方案中，施用为每28-60天一次。在一种实施方案中，施用为每7-30天一次。在一种实施方案中，本发明涉及治疗人受试者中自身免疫病的方法，所述方 法包括向受试者施用一种剂量的包含LT-β-R-Ig融合蛋白群体的药物组合物，所述 LT-β -R-Ig融合蛋白包含长度为193或194个氨基酸的变体LT-β -R胞外域，其中至少 90%的LT-β -R-Ig-融合蛋白从SEQ ID NO 21中所示的野生型LT-β -R胞外域成熟形式 的N-末端缺失不多于5个氨基酸，并且其中所述剂量足以在受试者的血清中维持约0. 6ug/ ml的最小平均浓度。在一种实施方案中，所述LT-β -R-Ig融合蛋白还包含变体Ig部分。在一种实施方案中，所述自身免疫病选自下组类风湿性关节炎、克朗氏病或系统 性红斑狼疮(SLE)。
在--种实施方案中，所述药物组合物包含SEQ ID NO :5中所示的氨基酸序列。
在--种实施方案中，施用为每月两次。
在--种实施方案中，施用为每月一次。
在--种实施方案中，施用为皮下施用。
在--种实施方案中，所述剂量为大约lmg/kg。
在--种实施方案中，所述剂量为大约3mg/kg。
在--种实施方案中，所述剂量为大约每7-20天施用约lmg/kg。
在--种实施方案中，所述剂量为大约每14-30天施用约3mg/kg。
在--种实施方案中，所述剂量为大约每14天施用约lmg/kg。
在--种实施方案中，所述自身免疫病是类风湿性关节炎，并且所述受试者在被诊
断患有类风湿性关节炎之后且在施用LT-β -R-Ig融合蛋白之前已经用类风湿性关节炎药 物治疗过。在一种实施方案中，所述类风湿性关节炎药物选自下组DMARD、NSAID和皮质类固醇。在一种实施方案中，人是DMARD不足反应者(DMARD-inadequateresponder)。在一种实施方案中，所述类风湿性关节炎药物是TNF抑制剂。在一种实施方案中，所述类风湿性关节炎药物是阿达木单抗 (adalimumab) (Humira )、依那西普(etanerc印t) (Enbrel )或英夫利昔单抗 (infliximab) (Remicade )。在一种实施方案中，将LT-β -R-Ig与类风湿性关节炎药物联合施用。在一种实施方案中，对人进行评估以测定在施用LT-β-R-Ig之前对类风湿性关 节炎药物的反应是否不足。在一种实施方案中，所述人被测定为对类风湿性关节炎药物的反应不足，然后对 该人施用LT-β-R-Ig。在一种实施方案中，所述人针对类风湿性关节炎的一种表现是无症状的，而针对 类风湿性关节炎的另一种表现是有症状的。在一种实施方案中，施用LT-β -R-Ig代替所述类风湿性关节炎药物。在一种实施方案中，将施用与肿瘤坏死因子(TNF)抑制剂组合。在一种实施方案中，TNF抑制剂是阿达木单抗(Humira )、依那西普(Enbrel )或 英夫利昔单抗(Remicade )。在一种实施方案中，人是抗TNF不足反应者(anti-TNF-inadequateresponder)。在一种实施方案中，将施用与非留类抗炎药(NSAID)、皮质类固醇或缓解病情抗风 湿药(disease modifying antirheumatic drug(DMARD))组合。在一种实施方案中，将施用与甲氨喋呤组合。在一种实施方案中，所述人是DMARD不足的反应者。附图简述

图1描述为了改善异质性而进行的从LTBROl到LTBR06的变化。粗体字指明了 分泌序列，而斜体/加下划线的字指明了相对于LTBROl在LTBR06中去除的氨基酸，即，氨 基酸1-4和最后的氨基酸(赖氨酸)。用于N联糖基化的三个共有位点位于Asnl3、150和
10276。氨基酸位置参考全长LTBR，即，氨基酸1-4是在LTBR06中去除的那些。图2提供对LTBROl、LTBR05、LTBR06和LTBR09的比对。将分泌序列从LTBR序列
中省略。图3描述与野生型比较的LTBR06，并提供所述蛋白质的示意图。图4描述LTBR06构建体的氨基酸序列(SEQ ID NO 5中所示的LTBR06的成熟形 式)。LTBR06是二硫键连接的、糖基化的、二聚体蛋白。具有28个半胱氨酸残基和6个糖 基化位点，后者用粗体指明。图5描述无糖基化的hLT β R hlgGl(蛋白质的成熟形式)。LT3R胞外域中天 冬酰胺到谷氨酰胺的突变以粗体显示。huLTi3R是残基1-204，hulgGI Fc是上述残基 205-431 (Fe的糖基化位点是完整的)。。图6描述可以在本发明的LTBR IgG融合蛋白中使用的铰链。图7描述的表格记载了铰链表达分析结果的概要。图8的图描述了在用LTBR-Fc处理后患者中的RA症状得分(触痛关节数(tender joint counts) (TJC)和肿胀关节数(swollen joint counts) (SJC))的百分比改进。图9提供的图描述了在用LTBR-Fc (LTBR06)处理之后患者中触痛关节数(TJC)的 降低。图10提供的图描述了在用LTBR-Fc(LTBROe)处理之后患者中肿胀关节数η (SJC) 的降低。图11提供的图描述了在用LTBR-Fc(LTBROe)处理之后患者中肿胀关节数η (SJC) 的中值％变化(median% change)。图12提供的图描述了在用LTBR-Fc (LTBR06)处理之后患者中的ACR20改善。图13图示了在小鼠中以IOOug/动物施用之后24小时差别唾液酸化的 (differentially sialylated) LFA3TIP 和 hu-LTBR-Ig(LTBR05)的血清水平。图14示例了 LTBR-Fc与典型抗体的比较，并显示在相同的给药中长时间观察到功 效上的显著差异。箭头A和B分别指明了抗体或Fc-融合蛋白的典型α和β期。就抗体 而言，箭头C指明的灰线显示的是典型的产生功效的下限浓度，而箭头D显示的是LTBR-Fc 在显著更低的浓度具有功效。发明详述为了使本发明更容易理解，首先定义某些术语。术语“融合蛋白”是指包含两种或更多种蛋白质或其片段的分子，所述蛋白质或其 片段通过共价键藉由它们单独的肽骨架连接，所述分子最优选通过遗传表达编码那些蛋白 质的多核苷酸分子生成。在优选的实施方案中，融合蛋白包括免疫球蛋白结构域。通用术语“免疫球蛋白”包含能够通过生物化学区分的五个不同的抗体类别。全 部五类抗体都无疑地属于本发明的范围，以下讨论将通常针对IgG类免疫球蛋白分子。术语“免疫球蛋白融合蛋白”是指多肽的功能性部分(通常包含细胞表面蛋白质 的胞外域)与免疫球蛋白恒定区的一个或多个部分(例如铰链、CHU CH2或CH3结构域或 其部分或组合)的融合物。在一种实施方案中，所述多肽是TNF家族受体成员。Ig分子的 部分可以源自多种免疫球蛋白同种型例如IgGl、IgG2、IgM、IgA等中的任一种。免疫球蛋 白融合蛋白在本文中称作Ig-Fc融合蛋白(Ig for Fc fusion proteins)。
在优选的实施方案中，在本发明的方法和组合物中使用的蛋白质是免疫球蛋白融 合蛋白。例如，所述融合蛋白可以包含受体或其配体结合部分，和二聚体化结构域，例如，Fc 结构域。如本文所使用的，术语“变体LTBR胞外域”是指具有与SEQ ID NO :1和SEQ ID NO 21(野生型hLTBR)中所示序列在一个或多个氨基酸位置处不同的氨基酸序列的多肽(或蛋 白质)的成熟部分。如本文所使用的，术语“变体Ig部分”是指具有与本领域已知的Fc区(包括在本 文中作为SEQ ID NO :22提供的序列)在一个或多个氨基酸位置处不同的氨基酸序列的多 肽(或蛋白质)。术语“降低的N-末端异质性”是指群体中具有不同N-末端氨基酸残基的蛋白质 的数目减少，或相对于对照蛋白质群体以不同形式产生的蛋白质的数目减少。例如，对照蛋 白质的表达可能导致这样的蛋白质群体，其包含缺失了范围从一个氨基酸至三个氨基酸的 N-末端氨基酸的蛋白质(相对于预期的翻译出的蛋白质)，也用N-l、N-2和N-3来描述。 在这种情况下，蛋白质群体将包括三种不同的类型，即，Ν-1、Ν-2和N-3。因此，N-末端异 质性降低的蛋白质群体将包括具有少于三种不同N-末端氨基酸残基的蛋白质群体，例如， N-I和N-2型蛋白质，N-2和N-3型蛋白质，或N-I和N-3型蛋白质，或者这些变体分子类 型中的一种或多种的百分比降低的蛋白质群体。应该注意的是，N-末端氨基酸本身可以是 相同的，例如，就相对于野生型形式具有N-I的N-末端的蛋白质而言，N-末端氨基酸可以 是丙氨酸，而就相对于野生型形式具有N-3的N-末端的蛋白质而言，N-末端氨基酸也可以 是丙氨酸。因此，在一种实施方案中，N-末端异质性必须是针对群体内多种蛋白质之间在 长度上的整体差异而言(相对于预期的翻译出的蛋白质表示)。同样，术语“N-#”是指从 野生型的翻译蛋白质的氨基末端缺失的氨基酸数目。例如，如果野生型预期蛋白质序列是 AAGTY，N-I蛋白将不包含最开始的A，取而代之将以AGTY开始，虽然两种蛋白都以A开始。 类似地，N-2蛋白将以GTY开始。在另一实施方案中，N-末端异质性可以通过减少蛋白质群体中变体形式的潜在数 目来降低。例如，N-末端谷氨酰胺残基可以经过自发环化形成焦谷氨酸，焦谷氨酸会导致 更进一步的异质性。在一种实施方案中，与野生型蛋白质中存在的相比使焦谷氨酸的形成 降低或将其消除。术语“降低的C末端异质性”也指群体中相对于对照蛋白质群体具有不同C-末端 氨基酸残基的蛋白质的数目减少。此外，术语“c-#”是指从蛋白质的羧基末端缺失的氨基 酸的数目。术语“糖基化”是指一种或多种糖与多肽的共价连接。通常，糖基化是翻译后事件， 其可以在细胞的胞内环境中发生或在来自细胞的提取物中发生。术语糖基化包括，例如，N 联糖基化(其中一种或多种糖与天冬酰胺残基连接)和/或0联糖基化(其中一种或多种 糖与具有羟基的氨基酸残基(例如，丝氨酸或苏氨酸)连接)。短语“TNF家族受体”是指具有规范的TNF家族半胱氨酸桥接模式的任何受体，无 论是天然的膜结合受体或分泌型受体(如护骨蛋白的情况)；或任何与定义的TNF家族配 体成员结合的受体(例如Banner等1993)。要求保护的本发明在另外的实施方案中涉及 TNF家族受体-Ig融合物，其通过本文讨论的方法获得，还涉及包含它们的药物制备物。
“信号肽”或“信号序列”是将所述信号肽与之连接的新合成的多肽导向内质网 (ER)用于进一步翻译后加工和分配的肽序列。蛋白质的成熟形式是指不含信号序列的蛋白 质。如本文所使用的，“可溶性LTBR”是包括人LTBR胞外区的全部或部分的多肽(例 如，LTBR免疫球蛋白融合物)。优选的可溶性LTBR是包括充分的LTBR胞外区序列的可溶 性分子，它们能够以SEQ ID NO 1的分子的亲和力的至少10%且优选至少50%与配体例如 LT或LIGHT结合。术语“配体结合结构域”或“配体结合部分”如用于本文是指任何天然受体(例如， 细胞表面受体)或其至少保持有定性(qualitative)配体结合能力且优选保持有相应天然 受体的生物活性的任意区域或衍生物。术语“大约”和“约”如用于本文涉及数字时通常包括落入该数任一侧(大于或小 于该数)10%范围内的数字，除非另有说明或从上下文显而易见其它含义(除了这样的数 字将超过100%的可能值的情况)。如本文所定义的，术语“保守取代”是指将一个氨基酸残基用另一个生物学上类似 的残基替代。例如，可以预期保守氨基酸取代对生物学活性影响很小或没有影响，特别是如 果它们占所述多肽或蛋白质中总残基数的少于10 %。优选地，保守氨基酸取代优选地，保守 氨基酸取代在少于所述多肽或蛋白质的5%中呈现变化，最优选少于所述多肽或蛋白质的 2% (例如，当按照SEQ ID NO 5计算时，最优选的保守取代将在野生型氨基酸序列中呈现 少于9个氨基酸取代)。在特别优选的实施方案中，序列中存在单一氨基酸取代，其中被取 代的氨基酸和替代用氨基酸均为非环状的。具体保守取代的其它实例包括用一种疏水残基如异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸或甲 硫氨酸取代另一种，或用一种极性残基取代另一种，例如用精氨酸取代赖氨酸，用谷氨酸取 代天冬氨酸，或用谷氨酰胺取代天冬酰胺，等等。遗传编码的氨基酸通常可以分成四个家族(1)酸性天冬酰胺、谷氨酰胺；(2)碱 性赖氨酸、精氨酸、组氨酸；(3)极性丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨 酸、甲硫氨酸、色氨酸；和(4)无电荷极性甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、 苏氨酸、酪氨酸。苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸可以共同归类为芳族氨基酸。在一种实施方案 中，本发明的多肽N-末端的氨基酸是非极性氨基酸(即，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨 酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、甘氨酸和半胱氨酸)，不包括亚氨基酸，即，脯氨酸。术语“治疗”是指以有效地以统计学上显著的程度或本领域技术人员能够检测的 程度改善或预防与疾病相关的状况、症状或参数或者预防疾病(包括由疾病引起的继发性 损伤(secondary damage))的发作、进展或恶化的量、方式和/或模式施用疗法。因此，治 疗能够实现治疗性和/或预防性效益。有效的量、方式或模式可以根据受试者变化或为受 试者量身定制。术语“不足反应”、“不足反应者”或“-IR”是指这样的患者，如由该患者或具有普 通技术的临床医师评估，该患者对于特定治疗展现出功效不足或不可耐受或不能接受的毒 性。功效不足可以指无法达到预定水平的治疗反应。例如，在类风湿性关节炎(RA)的情 况下，功效不足可以定义为在RA的临床参数上无法呈现至少10 %、20 %、25 %、30 %、40 %、 50%或更大的降低，所述参数例如触痛关节数(TJC)、肿胀关节数(SJC)、患者对疾病活性的总体评估(patient global assessment of disease activity) [PGA 直观类比标度 (VAS)O-IOcm]、医师对疾病活性的总体评估(MDGA VAS O-IOcm)和C反应蛋白(以mg/dl 为单位的CRP)。不可耐受毒性可以是对作用剂的不良反应，其导致产生中止使用第一作用 剂的医学需要或建议。不可耐受或不能接受的毒性的实例可以包括肝损伤或功能障碍、严 重变态反应、严重抑郁或自杀观念、过敏反应或注射部位反应。如本文所使用的，“联合施用”是指将两种或多种作用剂(例如，可溶性LTBR和第 二作用剂)同时或在一定间隔内施用给患者，从而使每种作用剂对患者的作用存在重叠。 优选第一和第二作用剂的施用相隔足够的靠近，由此获得组合作用，例如，叠加作用或协同 作用。所述间隔可以是数小时、数天或数周的间隔。所述作用剂在受试者中可以同时为生 物可用性的，例如，同时可检测的。在优选的实施方案中，所述作用剂之一(例如，第一作用 剂)的至少一次施用是在另一作用剂(例如，可溶性LTBR)仍以治疗水平存在于受试者中 时进行的。术语“每周”是指在特定的6-8天的时间内不多于一次，例如，每7天一次。术语“每两周”是指在特定的12-16天的时间内不多于一次，例如，每14天一次。 术语“每月”是指每月一次，例如，每28-31天一次。受试者通常是哺乳动物，例如，人、非人 灵长类(例如猴或猿)、狗、猫、兔或农业哺乳动物(例如，马、牛、猪等)。例如，受试者是人， 例如，人类男性或女性。受试者至少可以约18、25、30、45、50、55、60或70岁。如本文所述的，术语“最小平均浓度”是指受试者循环中或血清中存在的药物的平 均最小浓度。本发明的多个方面在下文多个小部分中进一步详细描述。I. LTBR-Ig融合蛋白及其组合物本发明涉及包含LBTR-Ig融合蛋白的组合物，其由于LTBR-Ig融合蛋白群体的分 子异质性降低而使治疗用途改进。本发明提供组合物，包括药物组合物，其包含LTBR-Ig融 合蛋白，以及蛋白质、核酸、载体、宿主细胞，和制备它们的方法。淋巴毒素-β受体-免疫球蛋白(LTiiR-Ig)融合蛋白能够阻断表面LT配体和 受体之间的信号传导，继而影响小结树突细胞的功能状态(Mackay和Browning 1998)。 这种阻断能够进一步导致啮齿动物模型中的自身免疫病减少(Mackay等，1998，于1995 年 7 月 21 日提交的 U. S. Ser. No. 08/505, 606 和于 1996 年 10 月 26 提交的 U. S. Ser. No.60/029,060)。通常，本发明优选的可溶性LTBR是融合蛋白。如本文所定义的，可溶性LTBR是包 括LTBR胞外域的LT结合片段的分子。例如，可溶性LTBR可以包括LTBR胞外域的全部或实 质性部分(substantial portion)(例如，其包括 SEQ ID NO 1 的 40-200、35-200、40_210 ； 35-220、32-225或28-225)。在一种实施方案中，可溶性LTBR包括SEQ ID NO :1的残基 32-225。在一些实施方案中，可溶性LTBR可以通过模块的共价连接来修饰，所述模块例如 异源多肽(例如，为了制备LTBR融合蛋白)或非多肽模块。在一些情况下，这样的模块能 够改进药物动力学或药物代谢动力学参数，例如溶解度或半衰期。LTBR融合蛋白可以包括 全部或部分的抗体恒定区(例如，Fc结构域)、运铁蛋白或白蛋白，如人血清白蛋白(HSA) 或牛血清白蛋白(BSA)。所述融合蛋白可以在LTBR序列和非LTBR蛋白结构域之间包括接 头区。在一些实施方案中，通过与聚合物如聚乙二醇(PEG)共价连接来修饰可溶性LTBR。
14同时不希望受到理论或机制的限制，这些可溶性LTBR可以发挥诱饵受体的功能以降低(阻 断)LTBR活性。示例性LTBR-Fc具有SEQ ID NO :5、6、8、9或10的氨基酸序列。可溶性LTBR可以包括与一种或多种异源蛋白结构域(所述结构域可以增加血液 中的溶解度或半衰期)融合的LTBR的全部或片段，例如，LTBR的可溶性片段。示例性LTBR 模块是SEQ ID NO 1的LTBR序列，或与该序列的差异不多于1、2、3、5或10个氨基酸残基 的序列。所述差异可以是任何差异，例如，取代、缺失或插入，但是优选是取代，例如保守取 代。保守取代通常用一个氨基酸交换另一个具有相似极性、空间排列或属于同一类(疏水、 酸性或碱性)的氨基酸。非LTBR蛋白或结构域的实例包括抗体恒定区的全部或部分，例如 Fc结构域，运铁蛋白，或白蛋白，例如人血清白蛋白(HSA)或牛血清白蛋白(BSA)。在优选的实施方案中，本发明的多肽是Fc融合蛋白，其含有多肽如抗体，并且优 选IgG免疫球蛋白，例如亚型IgGl、IgG2、IgG3或IgG4的IgG免疫球蛋白，并且优选亚型 IgGl或IgG4的IgG免疫球蛋白。在优选的实施方案中，前述多肽结合LTBR的配体。本文对 多肽Fc区中的部分的氨基酸编号对应于Kabat编号系统，如例如Kabat等在"Sequences of Proteins ofImmunological Interest" ,U. S. Dept. Health and Human Services,1983 and 1987中所述。在一些实施方案中，提供顺序氨基酸编号，例如，为序列表中出现的序列。在一种实施方案中，本发明的融合蛋白至少包含免疫球蛋白的铰链区的一部分、 CHU CH2 禾口 CH3 区。蛋白质群体内的异质性可以因翻译后修饰产生，所述修饰例如可变的糖基化 模式、N-末端蛋白酶解、C-末端蛋白酶解和焦谷氨酸形成(在本文中也称为焦谷形成 (pyroglu formation))。本发明提供包含具有降低的异质性的淋巴毒素-β受体-免疫球 蛋白(LTH-Ig)-融合蛋白群体的组合物，所述降低的异质性包括但不限于降低的N-末 端异质性(例如相对于分子大小的变化或分子形式的变化(例如，含焦谷氨酸的蛋白质)) 或降低的C-末端异质性，以及其组合。异质性方面的降低可以归因于LTBR-Ig蛋白序列内 产生的缺失和/或突变，使得异质性相对于野生型LTBR-Ig融合蛋白(即未突变的和/或 未缺失的LTBR-Ig)降低。野生型LTBR-Ig融合蛋白的实例记载在SEQ ID Ν0:11(蛋白质 的成熟形式)中，也称作LTBR01。应该注意的是，术语LT β R-Ig和LTBR-Fc在本文中可互 换使用。在优选的实施方案中，LT β R-Ig融合蛋白包含变体LTBR胞外域和/或变体Ig部 分，例如Ig的Fc部分。在本发明的一个实施方案中，LTBR-Ig融合蛋白包含LTBR胞外域 变体和/或变体Ig部分。野生型LTBR的氨基酸和核酸序列作为ΑΑΗ26262和Ρ36941记载在NCBI数据库 中。野生型的人LTBR的氨基酸序列也记载为SEQ ID NO :1。可溶性LTBR可以是具有SEQ ID NO :1的序列的LTBR-Fc多肽，或优选其变体。在优选的实施方案中，可溶性LTBR是与 SEQ ID NO 1的序列的差异不多于1、2、3、5或10个氨基酸的LTBR-Fc多肽。人LTBR 序列(GenPept ID No. Ρ36941)SEQ ID NO 1是不成熟的或未经加工的人LTBR序列，S卩，含有信号序列。斜体的 氨基酸指明了信号序列。氨基酸28-225是LTBR的胞外区。1 MLLPWATSAP GLAWGPLVLG LFGLLAASQl· QAVPPYASEN QTCRDQEKEY YEPQHRICCS61 RCPPGTYVSA KCSRIRDTVC ATCAENSYNE HWNYLTICQL CRPCDPVMGL EEIAPCTSKR
121 KTQCRCQPGM FCAAffALECT HCELLSDCPP GTEAELKDEV GKGNNHCVPC KAGHFQNTSS181 PSARCQPHTR CENQGLVEAA PGTAQSDTTC KNPLEPLPPE MSGTMLMLAV LLPLAFFLLL241 ATVFSCIffKS HPSLCRKLGS LLKRRPQGEG PNPVAGSffEP PKAHPYFPDL VQPLLPISGD301 VSPVSTGLPA APVLEAGVPQ QQSPLDLTRE PQLEPGEQSQ VAHGTNGIHV TGGSMTIFGN361 IYIYNGPVLG GPPGP⑶LPA TPEPPYPIPE E⑶PGPPGLS TPHQEDGKAff HLAETEHCGA421 TPSNRGPRNQ FITHD(SEQID NO 1)术语“野生型LTBR-Ig”如用于本文是指这样的融合蛋白，其包含人的野生型LTBR 胞外域，例如SEQ ID NO :1中所述LTBR序列的胞外域，和未经修饰的(例如通过突变、缺失 等)本领域已知的任何免疫球蛋白序列。示例性野生型Ig氨基酸序列在SEQ ID N0:22中 提供。没有修饰的野生型LTBR-Ig融合蛋白的实例记载在SEQ ID NO :6。在一个方面，本发明涉及包含变体LTBR胞外域的LTBR-Ig融合蛋白。例如，可以 将氨基酸"SQPQ"从野生型LTBR蛋白(成熟形式)的氨基末端缺失，如SEQ ID NO :4中 所示(LTBR06的LTBR胞外域的氨基酸序列)。如下文提供的实施例中所示，“SQPQ〃从 LTBR氨基末端的缺失改进了 LTBR-Ig蛋白群体内的整体异质性，包括N-末端异质性。如 实施例中所述，LTBR06的表达提供了这样一种LTBR-Ig融合蛋白群体，其中至少90%的 LT-β -R-Ig-融合蛋白从SEQ ID NO 21中所示野生型LT-β -R胞外域的成熟形式的N-末 端缺失不多于5个氨基酸。因此，LTBR06的表达产生这样的LTBR-Ig蛋白群体，其中所述 蛋白质的90 %是Ν-4或Ν-5。此外，LTBR06具有降低的焦谷氨酸形成。在另一实施方案中，本发明的LTBR-Ig可以包括变体Ig部分，该变体Ig部分在Fc 部分的C-末端氨基酸中具有缺失，S卩，“K"。如下文实施例中所述，LTBR-Ig融合蛋白的 Fc部分末尾氨基酸的缺失使C-末端异质性降低。变体Ig部分的实例在SEQ ID Ν0:2中 描述，其中已经将末尾氨基酸缺失而使C-末端异质性改进，即，降低。具有末尾氨基酸缺失 的变体Ig部分的LTBR-Ig融合蛋白的实例在SEQ ID NOs :5、8、9和12中描述。变体Ig部 分可以包含IgG同种型(包括但不限于IgGl同种型)的Fc区。本发明还包括同时具有变体LTBR胞外域和变体Ig部分的LTBR-Ig融合蛋白。 LTBR06是包含去除了前四个氨基酸的变体LTBR胞外域和变体Ig部分的LTBR-Ig融合蛋 白，其中将末尾的氨基酸(K)缺失。LTBR06的N-末端和C-末端缺失同时降低了 N-末端异 质性和C-末端异质性。下文的SEQ IDN0:8记载了 LTBR06的氨基酸序列，包括信号序列。 下文序列中斜体的氨基酸指出信号序列；标有下划线的氨基酸指出源自LTBR胞外区的序 列；而粗体氨基酸指出IgG Fc序列。在一种实施方案中，本发明的Ig融合蛋白的免疫球蛋白部分至少包含免疫球蛋 白铰链区的一部分。在一种实施方案中，变体Fc部分可以在铰链区包含至少一个突变，例 如，Ig上部铰链(upper hinge)的半胱氨酸(在氨基酸位置220 (Kabat编号方式)，也作 为SEQ ID NO 22的氨基酸位置1显示)成为缬氨酸突变。所述的缬氨酸在下文中为加粗 /标有下划线的/斜体。标有下划线的序列是LTBR胞外域的实质性部分且对应于SEQ ID N0:1(见上文)的氨基酸32-225。在蛋白酶解加工过程中，LTBR蛋白的信号序列被切下。 由此，LTBR06的最终LTBR蛋白产物在SEQ ID NO 5中描述。MLLPWATSAPGLAWGPLVLGLFGLLA ^AVPPYASE NQTCRDQEKEYYEPQHRICCSRCPPGTYVSAKCSRIRDTVCATCAENSYNEHffNYLTICQLCRPCDPVMGLEEIAPCTSK
R KTQCRCOPGMFCAAWALECTHCELLSDCPPGTEAELKDEVG KGNNHCVPCKAGHF0NTSSPSARC0PHTRCEN0GLVEM
PGTAQSDTTCKNPLEPLPPEMSGTMV dkthtcppcpap
ellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedp
evkfnwyvdgvevhnaktkpreeoynstyrvvsvltvlh
qdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvy
tlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpe NNYKTTPPVLDSDGSFFLySKLTVDKSRWQQGNVFSCSV
mhealhnhytqkslslspg 终止
(SEQ ID NO 8)除了 SEQ ID NO 8中描述的缬氨酸突变，也可以使用其它合适的氨基酸。例如，可 以使用包括丝氨酸、苏氨酸、丙氨酸、亮氨酸、甘氨酸或异亮氨酸等氨基酸替代LTBR06和本 文描述的其它LTBR-Ig融合蛋白的缬氨酸。在可选的实施方案中，使用免疫球蛋白铰链来连接LTBR胞外域与例如免疫球蛋 白分子的CHI、CH2和CH3结构域。例如，可以使用具有序列CDKTHTCPPCPAPELLGGP的IgG 铰链区。在一种实施方案中，可以使用具有序列VDKTHTCPPCPAPELLGGP的铰链区。其它示 例性上部和中部铰链构建体示于图6-8，以及SEQ ID NOs 13-20.因此，LTBR-Ig融合蛋白 的变体Ig部分可以包括与SEQ ID NOs :13-20中所述铰链包含至少90%-95%同一性的上 部和中部(middle)铰链区。将SEQ ID NO 13中所示的上和中铰链区使用在本文示例的变 体LTBR-Ig融合蛋白中。因此，包含变体铰链(例如，SEQ ID NOs 14-21中所述的那些) 的LTBR-Ig融合蛋白将通过用变体铰链替代SEQ ID NO :13中所示序列来构建。能够任选 地用于连接LTBR胞外域与例如免疫球蛋白分子的CHI、CH2和CH3结构域的其它变体铰链 分子在20050163782A1中披露，将其内容通过题述并入本文。当表达LTBR-Ig融合蛋白(例如LTBR06)时，产生的蛋白质群体包括多种全长，这 至少部分归因于N-末端和/或C-末端蛋白酶解以及焦谷氨酸形成的异质性。本发明的一 个重要方面是发现通过缺失LTBR-Ig融合蛋白的前四个氨基酸(具体而言LTBR胞外域的 前四个氨基酸)，能够降低异质性，包括N-末端异质性。因此，在一种实施方案中，本发明描 述了包含LT β R-Ig-融合蛋白群体的组合物，所述LT β R-Ig-融合蛋白包含长度为193或 194个氨基酸的变体LT β -R胞外域和长度为227个氨基酸的变体Ig部分，其中至少90% 的所述LT-β -R-Ig-融合蛋白从SEQ ID NO 21中所示野生型LT-β -R胞外域的成熟形式 的N-末端缺失不多于5个氨基酸，并且其中所述LT- β -R-Ig-融合蛋白缺乏焦谷氨酸。本 发明还描述了包含LT-β -R-Ig融合蛋白群体的组合物，所述LT-β -R-Ig融合蛋白包含长 度为193或194个氨基酸的变体LT- β -R胞外域和变体Ig部分，其中所述群体与野生型 LT-β -R-Ig融合蛋白相比具有降低的N-末端焦谷氨酸形成，和降低的C-末端异质性。变体LTBR-Ig融合蛋白的氨基末端氨基酸可以是丙氨酸，如SEQ ID NOs :5和12 中所示，或者，可供选择地，可以是非极性氨基酸。可以用作LTBR-Ig融合蛋白的第一个氨 基酸的非极性氨基酸的实例包括缬氨酸(野生型LT-β-R部分SEQ ID Ν0:1的成熟形式的
17第六个氨基酸)或丙氨酸(野生型LT-β-R部分SEQ ID NO :1的成熟形式的第五个氨基 酸)。此外，对于非极性氨基酸，可以使用丝氨酸或苏氨酸。在一种实施方案中，本发明的组 合物包含LTBR-Ig融合蛋白群体，其中至少95%的LT- β -R-Ig-融合蛋白的N-末端是缬氨 酸(野生型LT- β -R的成熟形式的第六个氨基酸)或丙氨酸(野生型LT- β -R的成熟形式 的第五个氨基酸)。除了 N-和/或C-末端异质性，异质性还可以因可变的糖基化产生。为了最小化 LTBR-Ig融合蛋白的蛋白质群体内因糖基化变异产生的异质性，可以改变LTBR和/或Ig以 降低糖基化的量。在一种实施方案中，LTBR-Ig融合蛋白的Ig部分是非糖基化的。本发明还考虑包含LT β R-Ig融合蛋白群体的组合物，所述LT β R-Ig融合蛋 白包含变体LT-β-R胞外域和变体Ig部分，其中变体LT-β-R胞外域是无糖基化的 (aglycosylated) 0 LTBR的无糖基化胞外域的实例在实施例中提供，并且还在SEQ ID NO: 10中描述(参见SEQ ID NO 10的氨基酸1-194)。因此，可以使用本文描述的方法和组合物来降低的翻译后异质性的实例包括 N-末端异质性、C-末端异质性和糖基化异质性。本发明的范围包括提供在这些参数的每 一个中以及它们的组合中具有降低的异质性的LTBR-Ig融合蛋白。例如，本发明包括包含 LT-β -R-Ig融合蛋白群体的组合物，其中所述群体与野生型LT-β -R-Ig融合蛋白群体相 比具有降低的N-末端异质性和降低的C-末端异质性。使用以上组合物和LTBR-Ig融合蛋白、以及包含它们的药物组合物治疗自身免疫 病的方法在下文第II和III部分中更详细地描述。本发明的LTBR-Ig融合多肽保留LTBR的配体结合活性，并且包括那些具有与SEQ ID NOs :5、6、8、9、10、11、12和23中所示LTBR-Ig多肽和前述各项中每一项的变体和衍生 物具有至少70%同源性的氨基酸序列的多肽。本发明还包括SEQ ID N0s:3、4和7中描述 的分离的多肽，其提供本发明的LTBR胞外域或本发明的Ig变体。优选所述LTBR-Ig多肽 (或其部分)具有与前述序列具有大于85 %同源性，更优选大于90%同源性，更优选大于 95 %同源性，最优选大于99 %同源性的氨基酸序列。在一种实施方案中，本发明描述了分离的多肽，所述分离的多肽包含与SEQ ID NO :8或SEQ ID NO :23的成熟形式的全长为至少90%相同的氨基酸序列，其中配体结合结 构域的氨基酸序列不变，所述多肽进一步包含截短的Fc区。在一种实施方案中，本发明的 多肽包含与SEQ ID NO 8.中所示多肽的成熟形式的全长为至少95%相同的氨基酸序列。 在一种实施方案中，本发明的多肽包含SEQ ID NO :8中所示多肽的成熟形式的氨基酸序列。 在一种实施方案中，本发明的多肽包含SEQ ID NO :5中所示的氨基酸序列。本发明也考虑本文描述的多肽的变体。由此，本发明包括具有如下氨基酸序列的 多肽的变体，所述氨基酸序列在一个或多个氨基酸位置处与SEQID N0:5、SEQ ID NO :6、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO 10,SEQ ID NO =IUSEQ ID N0:12 禾口 SEQ ID NO :23 中 所示序列、以及SEQ IDNO :3、SEQ ID NO :4和SEQ ID NO 7中描述的它们的部分不同。这 些变体多肽包括上述经修饰的多肽，以及保守取代、剪接变体、同种型(isoforms)、来自其 它物种的同源物、和多态性。对LTBR-1 g基本氨基酸序列的修饰可以产生与未经修饰的相应多肽相比具 有基本相当的活性的蛋白质，并因此可以将所述蛋白质认为是亲本蛋白的功能类似物(functional analogous)。这些修饰可以是有意进行的，例如，通过定点诱变，或者它们可 以自发发生，并且包括剪接变体、同种型、来自其它物种的同源物、和多态性。本发明也考虑 这些功能类似物。另外，对基本(primary)氨基酸序列的修饰可能导致不保留亲本蛋白的生物学 活性的蛋白质，包括显性失活形式等。显性失活蛋白可以通过结合，或以其它方式隔离 (sequester)常常与所述多肽进行功能上相互作用的调节剂(如上游或下游组分)来与野 生型蛋白进行相互作用。本发明也考虑这样的显性失活形式。本发明的LTBR-Ig蛋白可以按照本领域已知的标准方法制备。编码LTBR-Ig的核 酸分子可以用于表达LTBR-Ig多肽，例如，通过体内表达LTBR-Ig多肽，或通过向动物施用 编码LTBR-Ig的核酸分子用于体内表达。编码LTBR-Ig的核酸分子可以包括在核酸载体内， 例如，包括在表达载体或克隆载体内。编码LTBR-Ig的核酸分子可以，但不是必需，作为核 酸载体的一部分保持、复制、转移或表达。因此，本发明的另一方面是分离的核酸分子，其编 码本文描述的本发明的LTBR-Ig蛋白。本发明包括包含SEQ ID NO :7中所示核苷酸序列的 核酸分子(LTBR06的成熟形式)。可以将含有LTBR-Ig多核苷酸序列的重组表达载体引入细胞和/或保持在细胞 内。作为LTBR-Ig载体的宿主的细胞可以是原核的。可选地，可以将LTBR-Ig核酸引入真核 细胞，例如，含有用于将多肽翻译后加工成成熟蛋白的合适细胞器(apparati)和/或用于 将多肽分泌至细胞的胞外环境中的合适细胞器的真核细胞。本发明的范围中还包括载体， 所述载体包含编码本发明的LTBR-Ig融合蛋白的核酸分子。制备本发明的LTBR-Ig蛋白的合适方法是本领域已知的，并且在例如WO 97/03687,WO 98/17313,WO 00/21558,WO 99/38525,WO 00/36092 中描述。例如，可以在降 低的温度下在细胞培养物(例如，哺乳动物细胞培养物(如猴cos细胞或中国仓鼠卵巢细 胞)或酵母培养物)中表达LTBR免疫球蛋白融合蛋白，例如，以产生更大量的正确折叠的 融合蛋白。本发明的范围中还包括表达本发明的LTBR-Ig融合蛋白的宿主细胞，其中所述 宿主细胞包含载体，该载体包含编码LTBR-Ig融合蛋白的核酸。在一种实施方案中，所述宿 主细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。可以将表达的融合蛋白纯化，例如，通过亲和或常规层 析技术。参见WO 00/36092。LTBR-Ig融合蛋白的表达可以在规模上进行变化，包括制造规 模。本发明还提供制备包含LTiiR-Ig-融合蛋白群体的组合物的方法，所述 LT β R-I g-融合蛋白包含变体LT- β -R胞外域和变体I g部分，其中至少90 %的所述 LT β R-Ig-融合蛋白从SEQ ID NO :1中所示野生型LT-β-R部分的成熟形式的N-末端 缺失不多于5个氨基酸，所述方法包括，在哺乳动物细胞中表达编码SEQ ID Ν0:8中所示 LT- β -R-Ig融合蛋白的核酸分子，从培养物上清液获得群体，并且，任选地，纯化所述上清 液，以由此获得包含LT β R-Ig-融合蛋白群体的组合物，所述LT β R-Ig-融合蛋白包含变体 LT-i3-R胞外域和变体Ig部分，其中至少90%的LT-i3-R-Ig-融合蛋白从SEQ ID NO :1中 所示野生型LT- β -R部分的成熟形式的N-末端缺失不多于5个氨基酸。在一种实施方案 中，所述方法包括在哺乳动物细胞中表达SEQ ID NO :7中所示的核酸分子。在一种实施方 案中，所述方法包括在哺乳动物细胞中表达SEQ ID NO :7中所示的核酸分子。本发明还描 述了在哺乳动物细胞中表达核酸分子，所述核酸分子包含编码SEQ ID NO :4中所示LTBR胞外域的核苷酸序列，或SEQID NO :3中所示的核酸序列。本发明进一步描述了通过在哺乳 动物细胞中表达编码SEQ ID NO :8中所示的Lfl β-R-Ig融合蛋白的核酸分子，或SEQ ID
NO 7中所示的核酸序列而制备的组合物。II.本发明的LTBR-IgG用干治疗自身免,疮病的用涂可溶性LTBR是可用于治疗自身免疫病的淋巴毒素(LT)途径抑制剂。自身免 疫病包括，例如，自身免疫性关节炎(包括类风湿性关节炎(RA)和斯耶格伦氏综合征 (Sj6gren’s syndrome))、银屑病(psoriasis)、多发性硬化、炎性肠病(IBD)(包括溃疡性结 肠炎和克朗氏病)、胰岛素依赖性糖尿病、色素层炎(uveitis)、系统性红斑狼疮(SLE，或狼 疮)、多软骨炎(polychondritis)和移植排斥。本文描述的作用剂和方法尤其适用于RA的 治疗。类风湿性关节炎的标志为关节中的触痛。在大多数受影响的关节中最终发生滑 膜增厚(synovial thickening)。在早起时或长时间不活动后持续> 30分钟的强直是常 见的，还有下午早些时候的疲劳和不适。畸形，尤其是屈曲挛缩可能发展迅速。腕管综合 征(carpal tunnel syndrome)可能因腕部滑膜炎(wrist synovitis)而产生。X射线可 能在疾病的第一个月内揭示软组织肿胀，然后，可能出现动关节骨质疏松(perarticular osteoporosis)、关节腔收缩(jointspace narrowing)禾口边缘糜烂(marginal erosions)。可以采用多种测试来测定可溶性LTBR治疗自身免疫病的功效。例如，在类风湿 性关节炎(RA)的情况下，功效不足可以定义为无法在RA的临床参数方面展现至少10%、 20%,25%,30%,40%,50%或更大的降低，所述RA的临床参数例如触痛关节数(TJC)、肿 胀关节数(SJC)、患者对疾病活性的总体评估[PGA直观类比标度(VAS)O-lOcm，用于疼痛的 测量]、医师对疾病活性的总体评估(MDGA VAS O-lOcm)、C反应蛋白水平(以mg/dl为单 位的CRP)、和红细胞沉降速率(ESR)。C反应蛋白是在极性炎症或感染发作过程中由肝产生 的。血清中的CRP水平是RA严重性的指示物。CRP水平的降低，例如降低5 %、10 %、15 %、 20%或更多，可以作为响应于使用可溶性LTBR如LTBR-Fc的治疗而有效治疗自身免疫病如 RA的标志。红细胞沉降速率(ESR)在90%的RA病例中也有所升高。因此用可溶性LTBR 治疗后ESR的降低也可以作为有效治疗的标志。本文证明的可溶性LTBR的高效力指明，对于其它自身免疫病症的治疗低剂量方 案将同样有效。适合于本文所述的使用可溶性LTBR例如LTBR-Fc的治疗的自身免疫病症 包括，例如，自身免疫性关节炎(包括类风湿性关节炎(RA)和斯耶格伦氏综合征)、银屑病、 多发性硬化、炎性肠病(IBD)(包括溃疡性结肠炎和克朗氏病)、胰岛素依赖性糖尿病、色素 层炎、系统性红斑狼疮(SLE，或狼疮)、多软骨炎和移植排斥。示例性给药方案本发明部分基于如下发现，即LTBR可溶形式(例如，LTBR-Fc)的低剂量或频率给 药方案能够有效治疗自身免疫病的症状，特别是类风湿性关节炎(RA)的症状。因此，在一 个方面，本发明提供治疗受试者中自身免疫病的方法。所述方法包括向受试者以低剂量和 /或频率施用LTBR阻断剂(例如，可溶性LTBR融合蛋白，例如LTBR-Fc)。如图14中所示，LTBR-Fc和典型抗体的比较显示，在相同的给药中长时间观察到 功效上的显著差异。这是因为LTBR-Fc除了具有抗体样药物代谢动力学之外还对靶配体具 有高亲和力，并因此在非常低的剂量有效。箭头A和B分别指明了抗体或Fc-融合蛋白的α和β期。就抗体而言，箭头C指明的灰线显示的是典型的产生功效的下限浓度，而箭头 D显示的是LTBR-Fc在显著更低的浓度具有功效。在一种实施方案中，施用可溶性LTBR融合蛋白以达到约0. 14ug/ml至约3. 5ug/ ml的平均浓度。在一种实施方案中，施用可溶性LTBR融合蛋白以达到约0. 3至约1. Oug/ m，例如约0. 6-0. 7ug/ml的最低平均浓度。在另一实施方案中，可以施用更高剂量的所述融 合蛋白。例如，可以施用所述融合蛋白以达到约5-15ug/ml的平均浓度。在另一实施方案中，向重约75kg的平均受试者(to an average subjectweighing about 75kg)以约70至约200mg/月的剂量施用可溶性LTBR融合蛋白。在另一实施方案 中，向重约75kg的平均受试者以约100、约150、或约175mg/月的剂量施用可溶性LTBR融 合蛋白ο本发明的多个实施方案可以包括施用LTBR阻断剂的给药方案，用于治疗自身免 疫性关节炎(包括类风湿性关节炎(RA)和斯耶格伦氏综合征)、银屑病、多发性硬化、炎性 肠病(IBD)(包括溃疡性结肠炎和克朗氏病)、胰岛素依赖性糖尿病、色素层炎、系统性红斑 狼疮(SLE，或狼疮)、多软骨炎和移植排斥，所述LTBR阻断剂例如可溶性LTBR，如LTBR融合 蛋白(例如LTBR-Ig)。在一种实施方案中，用可溶性LTBR，例如LTBR免疫球蛋白融合物治疗受试者。示 例性LTBR-Ig融合蛋白在本文描述。在一种实施方案中，受试者具有一种或多种RA症状，例如，关节肿胀、关节疼痛、 关节强直(joint stiffness)或移动困难(difficulty moving)。例如，受试者患有活动性 RA疾病(例如，触痛关节数(TJC)或肿胀关节数(SJC) > 5或滑膜炎)。在另一实施方案 中，受试者有风险发展出RA，例如，家族史，或自身免疫病。在一种实施方案中，可溶性LTBR可以按照足以减轻与RA相关的症状的量和/或 时间来施用。在另一实施方案中，可溶性LTBR，例如LTBR-Fc，以足以改善一种或多种RA评估标 准中的症状的量施用，所述RA评估标准例如本文所述的标准。例如，以足以使症状得分改 善至少约10%、20%、25%、30%、40%、50%或更多的量施用所述可溶性LTBR。症状得分是 指，例如，TJC、SJC、患者对疾病活性的总体评估[PGA直观类比标度(VAS) O-IOcm]、医师对 疾病活性的总体评估(MDGA VAS O-IOcm)、C反应蛋白的量(以mg/dl为单位的CRP)、或疾 病活性得分28-关节版本(28-joint version) (DAS28)。症状得分可以根据由美国风湿病 学学会(ACR)提出的标准来报告。ACR得分是指RA症状的临床改善的百分数。例如，ACR20 是指TJC和SJC方面20%的临床改善，以及在以下五种参数中的三个中20%的改善(i)患 者的总体评估，( )医师的总体评估，(iii)患者对疼痛的评估，(iv)失能度(degree of disability)和(ν)急性期反应物水平。ACR50和ACR70的ACR得分也可分别用于表明50% 的改善，或70%的改善。在一种实施方案中，可溶性LTBR，例如，LTBR-Fc的施用多于一次，例如，每周一 次、两周一次或每月一次。治疗过程可以保持一段时间，例如1或2周或更久；1、2、3、4、5或 6个月或更久；1年；或更久。在某些实施方案中，将可溶性LTBR以大约0. 03-3mg/kg体重 每次施用的剂量施用，例如，约0. 6至约1. 4mg/kg每次施用。在另一实施方案中，将可溶性 LTBR以大约0. 3-3，例如，lmg/kg体重每次施用的剂量施用，例如，约0. 6至约1. 4mg/kg每次施用。在其它实施方案中，将可溶性LTBR以大约2. 5-3. 5mg/kg体重每次施用的剂量施 用，例如，约2. 8-3mg/kg每次施用。在另外的实施方案中，将可溶性LTBR以大约0. 01-3mg/ kg体重每次施用的剂量施用，例如，约0. 01至约0. 05mg/kg每次施用，约0. 01至约0. 3mg/ kg每次施用，约0. 01-0. 2mg/kg每次施用，或约0. 01至约0. lmg/kg每次施用。在一些实 施方案中，将可溶性LTBR以每次施用约0. 03mg/kg,每次施用约0. 05mg/kg,每次施用约 0. 07mg/kg，每次施用约0. lmg/kg，或每次施用约0. 2mg/kg来施用。在一些实施方案中，将 可溶性LTBR以表1中所示剂量施用。 表1. LTBR-Fc的示例t牛剂量(毎次施用毎kg等i式者体重的mg数)
权利要求
包含淋巴毒素 β受体(LT β R) Ig 融合蛋白群体的组合物，所述淋巴毒素 β受体(LT β R) Ig 融合蛋白包含长度为193或194个氨基酸的变体LT β R胞外域和长度为227个氨基酸的变体Ig部分，其中至少90％的所述LT β R Ig 融合蛋白从SEQ ID NO21中所示野生型LT β R胞外域的成熟形式的N 末端缺失不多于5个氨基酸，并且其中所述LT β R Ig 融合蛋白缺乏N 末端焦谷氨酸。
2.权利要求1的组合物，其中所述变体LT-β-R-Ig融合蛋白的N-末端氨基酸是非极 性氨基酸。
3.权利要求2的组合物，其中所述非极性氨基酸是缬氨酸(SEQIDN0:21的野生型 LT-β-R胞外域成熟形式的第六个氨基酸)或丙氨酸(SEQ IDNO 21的野生型LT-β-R胞 外域成熟形式的第五个氨基酸)。
4.权利要求1的组合物，其中至少95%的所述LT-β-R-Ig-融合蛋白的N-末端氨基 酸是缬氨酸(SEQ ID NO 21的野生型LT-β-R胞外域成熟形式的第六个氨基酸)或丙氨酸 (SEQ ID Ν0:21的野生型LT-β-R胞外域成熟形式的第五个氨基酸)。
5.权利要求1、3或4中任一项的组合物，其是通过在哺乳动物细胞中表达核酸分子来 制备的，所述核酸分子包含编码SEQ ID NO :4中所示的LTBR胞外域的核苷酸序列。
6.权利要求5的组合物，其中所述核酸分子包含SEQID NO :3中所示的序列。
7.权利要求5的组合物，其中所述变体Ig部分包含IgGl同种型的Fc区。
8.权利要求5的组合物，其中所述变体Ig部分包含SEQID NO :2中所示的氨基酸序列。
9.权利要求5的组合物，其中所述Ig部分是非糖基化的。
10.权利要求5的组合物，其是通过在哺乳动物细胞中表达核酸分子来制备的，所述核 酸分子编码SEQ ID NO 5中所示的LT-β -R-Ig融合蛋白。
11.权利要求10的组合物，其中所述核酸分子包含SEQID NO :7中所示的序列。
12.权利要求11的组合物，其中所述表达的步骤以制造业规模进行。
13.包含淋巴毒素-β受体-免疫球蛋白(LT-β-R-Ig)-融合蛋白群体的组合物，所述 淋巴毒素-β受体-免疫球蛋白(LT-i3-R-Ig)_融合蛋白包含变体LT-i3_R胞外域和变体 Ig部分，其中所述变体LT-β -R胞外域是无糖基化的。
14.权利要求13的组合物，其中所述无糖基化的LTBR胞外域包含SEQIDNO 10的氨 基酸1-194。
15.包含淋巴毒素-β受体-免疫球蛋白(LT-β-R-Ig)-融合蛋白群体的组合物，所述 融合蛋白包含长度为193或194个氨基酸的变体LT-β-R胞外域和变体Ig部分，其中所述 群体与野生型LT-β-R-Ig融合蛋白相比N-末端焦谷氨酸形成降低且C-末端异质性降低。
16.权利要求15的组合物，其中至少90%的所述LT-β-R-Ig-融合蛋白包含如SEQID NO 4或SEQ ID NO 23的氨基酸序列所示的变体LT- β -R胞外域。
17.权利要求15的组合物，其中所述变体Ig部分在铰链区中包含突变。
18.包含淋巴毒素-β受体(LT-i3-R)-Ig-融合蛋白群体和药学可接受的载体的 药物组合物，所述淋巴毒素-β受体(LT-i3-R)-Ig-融合蛋白包含长度为193或194个 氨基酸的变体LT-β -R胞外域和长度为227个氨基酸的变体Ig部分，其中至少90 %的 LT-β-R-Ig-融合蛋白从SEQ ID NO :21中所示野生型LT-β-R胞外域的成熟形式的N-末端缺失不多于5个氨基酸，并且其中所述LT- β -R-Ig-融合蛋白缺乏N-末端焦谷氨酸。
19.
20.权利要求19的组合物，其中所述变体LT-β-R-Ig融合蛋白的N-末端氨基酸是非 极性氨基酸。
21.权利要求20的组合物，其中所述非极性氨基酸是缬氨酸(SEQIDN0:21的野生型 LT-β-R胞外域成熟形式的第六个氨基酸)或丙氨酸(SEQ IDNO 21的野生型LT-β-R胞 外域成熟形式的第五个氨基酸)。
22.权利要求19的组合物，其中至少95%的所述LT-β-R-Ig-融合蛋白的N-末端氨 基酸是缬氨酸(SEQ ID NO 21的野生型LT-β -R胞外域成熟形式的第六个氨基酸)或丙氨 酸(SEQ ID NO 21的野生型LT-β -R胞外域成熟形式的第五个氨基酸)。
23.权利要求19、21或22，其是通过在哺乳动物细胞中表达核酸分子来制备的，所述核 酸分子包含编码SEQ ID NO :4中所示的LTBR胞外域的核苷酸序列。
24.治疗自身免疫病的方法，该方法包括向需要的受试者施用权利要求23的药物组合物。
25.权利要求24的方法，其中所述自身免疫病选自下组类风湿性关节炎、克朗氏病或 系统性红斑狼疮(SLE)。
26.包含淋巴毒素-β受体-免疫球蛋白(LT-β-R-Ig)-融合蛋白群体和药学可接受 的载体的药物组合物，所述融合蛋白包含长度为193或194个氨基酸的变体LT- β -R胞外 域和变体Ig部分，其中所述群体与野生型LT- β -R-Ig融合蛋白相比N-末端焦谷氨酸形成 降低且C-末端异质性降低。
27.权利要求26的药物组合物，其中至少90%的所述LT-β-R-Ig-融合蛋白包含如 SEQ ID NO :4或SEQ ID NO :23的氨基酸序列所示的变体LT-β-R胞外域。
28.权利要求26的药物组合物，其中所述变体Ig部分在铰链区中包含突变。
29.药物组合物，其包含SEQID NO :5中所示的氨基酸序列。
30.治疗自身免疫病的方法，该方法包括向需要的受试者施用权利要求29的药物组合物。
31.权利要求30的方法，其中所述自身免疫病选自下组类风湿性关节炎、克朗氏病或 系统性红斑狼疮(SLE)。
32.权利要求30的方法，其中所述自身免疫病是类风湿性关节炎。
33.权利要求32的方法，其中所述药物组合物以每两周一次大约0.6-3mg/kg的剂量向 受试者施用。
34.权利要求30的方法，其中所述药物组合物是皮下施用的。
35.分离的多肽，所述分离的多肽包含长度为193或194个氨基酸的变体LT-β-R胞 外域和长度为227个氨基酸的变体Ig部分，其中所述多肽从SEQID NO 21中所示的野生型 LT- β -R胞外域成熟形式的N-末端缺失不多于5个氨基酸，并且其中所述多肽缺乏N-末端 焦谷氨酸。
36.权利要求35的分离的多肽，其中所述N-末端氨基酸是非极性氨基酸。
37.权利要求36的分离的多肽，其中所述非极性氨基酸是缬氨酸(SEQIDNO 21的野 生型LT-β -R胞外域成熟形式的第六个氨基酸)或丙氨酸(SEQID Ν0:21的野生型LT-β -R 胞外域成熟形式的第五个氨基酸)。
38.权利要求35的分离的多肽，其是通过在哺乳动物细胞中表达核酸分子来制备的， 所述核酸分子包含编码SEQ ID NO :4中所示的LTBR胞外域的核苷酸序列。
39.分离的核酸分子，其编码权利要求35-39中任一项的多肽。
40.权利要求39的分离的核酸分子，所述核酸分子包含SEQID NO :7中所示的核苷酸 序列。
41.载体，其包含权利要求40的核酸分子。
42.宿主细胞，其表达权利要求41的载体。
43.权利要求42的细胞，其是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。
44.用于制备包含淋巴毒素-β受体(LT-i3-R)-Ig-融合蛋白群体的组合物的方法， 所述淋巴毒素-β受体(LT-i3-R)-Ig-融合蛋白包含变体LT-i3-R胞外域和变体Ig部分， 其中至少90%的所述LT-β-R-Ig-融合蛋白从SEQ ID NO :21中所示野生型LT-β-R胞外 域的成熟形式的N-末端缺失不多于5个氨基酸，所述方法包括在哺乳动物细胞中表达编 码SEQ ID NO :8中所示LT-β-R-Ig融合蛋白的核酸分子，从培养物上清液获得群体，并且， 任选地，纯化所述上清液，以由此获得包含淋巴毒素-β受体(LT-β-R)-Ig-融合蛋白群 体的组合物，所述淋巴毒素-β受体(LT-i3-R)_Ig-融合蛋白包含变体LT-i3_R胞外域和 变体Ig部分，其中至少90%的所述LT-β-R-Ig-融合蛋白从SEQ ID NO :21中所示野生型 LT-β -R部分的成熟形式的N-末端缺失不多于5个氨基酸。
45.权利要求44的方法，其中所述核酸分子包含SEQID NO :7中所示的核苷酸序列。
46.权利要求44的方法，其中所述核酸分子由SEQID NO :7中所示的核苷酸序列组成。
47.治疗人受试者中类风湿性关节炎的方法，所述方法包括向所述受试者施用 LT-β -R-Ig融合蛋白的一种剂量，其中所述剂量足以在受试者的血清中维持约0. 14ug/ml 至约3. 5ug/ml的平均浓度。
48.治疗人受试者中类风湿性关节炎的方法，所述方法包括向所述受试者施用 LT-β -R-Ig融合蛋白的一种剂量，其中所述剂量足以在受试者的血清中维持约0. 6ug/ml 的平均最小平均浓度。
49.权利要求48的方法，其中所述LTBR-Ig融合蛋白包含SEQID NO :5中所示的氨基 酸序列。
50.权利要求48的方法，其中所述浓度通过每7-60天一次以约0.01至约5mg/kg的剂 量施用LT-β -R-Ig融合蛋白来实现。
51.治疗人受试者中类风湿性关节炎的方法，所述方法包括向所述受试者每7-30天施 用不超过两次大约0. 6-3mg/kg的LT-β -R-Ig融合蛋白剂量。
52.权利要求51的方法，所述方法包括向受试者每7-14天施用一次大约0.6-3mg/kg 的LT-β-R-Ig融合蛋白剂量。
53.权利要求51的方法，其中施用为每14-30天一次。
54.权利要求51的方法，其中施用为每28-60天一次。
55.权利要求51的方法，其中施用为每7-30天一次。
56.治疗人受试者中自身免疫病的方法，所述方法包括向受试者施用一种剂量的包含 LT-β-R-Ig融合蛋白群体的药物组合物，所述LT-β-R-Ig融合蛋白包含长度为193或194 个氨基酸的变体LT-β -R胞外域，其中至少90%的所述LT-β -R-Ig-融合蛋白从SEQ IDNO :21中所示野生型LT- β -R胞外域的成熟形式的N-末端缺失不多于5个氨基酸，并且其 中所述剂量足以在受试者的血清中维持约0. 6ug/ml的最小平均浓度。
57.权利要求56的方法，其中所述LT-β-R-Ig融合蛋白还包含变体Ig部分。
58.权利要求56的方法，其中所述自身免疫病选自下组类风湿性关节炎、克朗氏病或 系统性红斑狼疮(SLE)。
59.权利要求56的方法，其中所述药物组合物包含SEQID NO :5中所示的氨基酸序列。
60.权利要求59的方法，其中施用为每月两次。
61.权利要求59的方法，其中施用为每月一次。
62.权利要求59的方法，其中施用为皮下的。
63.权利要求59的方法，其中所述剂量为大约lmg/kg。
64.权利要求59的方法，其中所述剂量为大约3mg/kg。
65.权利要求59的方法，其中所述剂量为大约每7-20天施用约lmg/kg。
66.权利要求59的方法，其中所述剂量为大约每14-30天施用约3mg/kg。
67.权利要求59的方法，其中所述剂量为大约每14天施用约lmg/kg。
68.权利要求59的方法，其中所述自身免疫病是类风湿性关节炎，并且所述受试者在 被诊断患有类风湿性关节炎之后且在施用LT-β -R-Ig融合蛋白之前已经用类风湿性关节 炎药物治疗过。
69.权利要求68的方法，其中所述类风湿性关节炎药物选自下组DMARD、NSAID和皮质类固醇。
70.权利要求68的方法，其中所述人是DMARD不足反应者。
71.权利要求68的方法，其中所述类风湿性关节炎药物是TNF抑制剂。
72.权利要求68的方法，其中所述类风湿性关节炎药物是阿达木单抗(Humira )、依 那西普(Enbrel )或英夫利昔单抗(Remicade )。
73.权利要求68的方法，其中将LT-β-R-Ig与类风湿性关节炎药物联合施用。
74.权利要求68的方法，其中对人进行评估以确定在施用LT-β-R-Ig之前对类风湿性 关节炎药物的反应是否不足。
75.权利要求74的方法，其中所述人被确定为对所述类风湿性关节炎药物的反应不 足，然后对该人施用LT-β -R-Ig。
76.权利要求68的方法，其中所述人针对类风湿性关节炎的一种表现是无症状的，而 针对类风湿性关节炎的另一种表现是有症状的。
77.权利要求68的方法，其中施用LT-β-R-Ig代替所述类风湿性关节炎药物。
78.权利要求68的方法，其中将施用与肿瘤坏死因子(TNF)抑制剂组合。
79.权利要求78的方法，其中所述TNF抑制剂是阿达木单抗(Humim )、依那西普 (Enbrel )或英夫利昔单抗(Remicade )。
80.权利要求68的方法，其中所述人是抗TNF不足反应者。
81.权利要求68的方法，其中将施用与非留类抗炎药(NSAID)、皮质类固醇或缓解病情 抗风湿药(DMARD)组合。
82.权利要求68的方法，其中将施用与甲氨喋呤组合。
83.权利要求81的方法，其中所述人是DMARD不足反应者。
全文摘要
用性质改进的淋巴毒素途径的可溶性抑制剂治疗疾病的方法。还描述了改进的LTBR-Ig融合蛋白及其药物组合物。
文档编号A61K38/17GK101951940SQ200880016341
公开日2011年1月19日 申请日期2008年3月17日 优先权日2007年3月15日
发明者埃文·贝克曼, 杰弗里·L·布朗宁, 格雷厄姆·K·法林顿, 沃纳·迈耶 申请人:比奥根艾迪克Ma公司