专利名称：：色满类化合物hef-05的医药新用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及医药
技术领域：
，主要涉及色满类化合物HEF-05的医药新用途,具体涉及色满类化合物HEF-05用于制备肠管平滑肌解痉剂及作为钾离子通道开放剂的用途。技术背景肠痉挛是由于肠壁平滑肌阵阵强烈收缩而引起的阵发性腹痛，发病人群包括成人和婴儿，并且是小儿急性腹痛中最常见的情况。引起胃肠痉挛性疼痛的原因有许多，但大多数是由于胃肠功能失调所致，部分是由胃肠道器质性病变所致。当胃肠痉挛所致的疼痛确为功能性，诊断明确时，一般首选抗胆碱药。它通过选择性地阻断胃肠平滑肌M胆碱受体，而使平滑肌松弛，故又称为平滑肌解痉药。这类药物包括阿托品、东莨菪碱、山賓菪碱(654-2),以及合成解痉药，如普鲁本辛、胃复康等。但是一般剂量的抗胆碱药便会伴有常见的副作用，包括鼻干、口干、怕光、尿闭、近距离视力模糊、心悸、抑制出汗、皮肤干燥潮红等。大剂量使用时，会产生中枢兴奋症状，如烦躁不安、幻觉谵妄、运动失调，甚至昏迷惊厥。而且青光眼、虹膜和晶状体粘连、胃肠梗阻性病变，以及前列腺肥大者忌用此类药。另外，在针对婴儿治疗中，至今尚无一种完全有效的药物来治疗肠痉挛。功能性胃肠道动力异常可引起多种消化系统或其他系统疾病，这些动力的异常，最终总要通过胃肠道的平滑肌细胞的收缩来体现，而平滑肌细胞膜离子通道的开放和关闭则是平滑肌收缩的关键和重点。钾通道是细胞膜上偶联细胞兴奋性和能量代谢的一类重要分子,广泛分布于心肌、血管平滑肌、胃肠道平滑肌等众多组织中,参与调节各种平滑肌的收缩和神经递质的分泌等多种生理过程;同时也是治疗药物作用的重要靶标之一。作用于钾通道的开放剂具有舒张平滑肌、缓解疼痛等作用，并且能作为研究钾离子通道不同亚型的工具药。HEF-05不仅能够舒张肠管平滑肌，而且通过机制研究发现其通过开放钾通道而发挥解痉作用，所以不会具有抗胆碱药一样的副作用，还有望成为新的钾通道开放剂。目前尚无此方面的文献报道。
发明内容本发明的目的是提供色满类化合物HEF-05的医药新用途，即色满类化合物HEF-05治疗肠管平滑肌痉挛及作为钾离子通道开放剂的用途。研究表明肠管平滑肌强烈收缩致痉挛可引起多种疾病，如腹痛、腹鸣、腹胀、腹泻，所以研究肠平滑肌解痉药有很大的现实意义，对治疗胃肠痉挛性绞痛，溃疡性结肠炎等引起的胃肠功能紊乱，及由于胃肠道的离子通道失调所导致的疾病如肠易激综合症等疾病均有指导意义和参考价值。我们的研究表明HEF-05能够降低家兔离体小肠自发活动的张力和振3幅，不仅能够舒张家兔离体肠管平滑肌自发活动的振幅和张力，而且能够舒张由氯化乙酰胆碱、氯化钡、氯化钾引起的小肠平滑肌收缩。另外在对其舒张机制的初步研究中发现，小肠平滑肌经ATP-敏感性钾通道阻断剂格列苯脲孵育过后，HEF-05的舒张作用被抑制。因此，HEF-05可以用于制备治疗肠管平滑肌痉挛的解痉剂和ATP-敏感性钾离子通道引起的胃肠疾病。离体实验中，其最小有效剂量为1.0*10-6mol/L图1为HEF-05对家兔离体小肠平滑肌自主收縮活动的影响(11=7)图2为HEF-05对致痉剂收缩的家兔离体小肠舒张作用的量效曲线(n=7)图3为HEF-05对BaC12收缩的家兔离体小肠舒张作用的量效曲线图4为HEF-05对高钾收缩的家兔离体小肠舒张作用的量效曲线(n=7)图5为HEF-05对乙酰胆碱收缩的家兔离体小肠舒张作用的量效曲线(n=7)具体实施方式实施例1:HEF-05的合成色满类化合物HEF-05的化学名称是7-[2-(二乙氨基)乙氧基]色满盐酸盐，其合成方法如下室温搅拌下，将70%的高氯酸溶液66mL滴加到2'，4'-二羟基苯乙酮100g与580mL原甲酸三乙酯的混悬溶液中。反应液颜色逐渐加深为棕红色，并且大量放热。反应液冷却至室温后，加入无水乙醚1750mL，立即产生大量沉淀，抽滤，滤饼挥干乙醚，加热水1000mL回流5分钟后，冷却，析出大量沉淀，静置过夜，得到红色粗品31.5g，乙醇500mL重结晶，得到7-羟基色酮浅粉色晶体16.7g,收率15.7%。mp212國214。C。将7-羟基色酮16.94g(O.lmol)，溶于无水乙醇300mL,加入10%Pd/C1.75g，充氢气至3.5MPa,在7(TC加热搅拌，当压力低于2.5MPa时补充氢气，反应6小时后，不再吸氢，冷却，过滤，蒸去乙醇得棕色油状物，用环己烷萃取，蒸干溶剂得到7-羟基色满白色固体8.73g,收率55.64%。mp87画89。C。将7-羟基色满0.75g(5mmol)、溴乙基二乙胺氢溴酸盐1.32g(5mmol)、碘化钾0.85g(5mmol)、无水碳酸钾6.67g(0.05mol)混合，加入干燥丙酮2011^,按通法111,硅胶柱层析分离(石油醚:乙酸乙酯-l:2)得白色固体0.25g，收率:17.5%。mp136-138。C。HEF-05结构式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>MS:42,56,65,77,86,99，249。工H-NMR(CDCl3)5(ppm):L46(6H,t),1.98(2H,m),2.72(2H,t)，3.24(4H,m)，3.42(2H,m)，4.16(2H，t),4.45(2H,m)，6.32(1H,d，《/=2.3Hz),6.40(1H,dd,/尸2.4Hz，J产8.3Hz)，6.94(1H，d,J:8.3Hz)，12.56(1H，s)。实施例2:HEF-05对家兔离体小肠平滑肌的舒张作用一、实验材料1、动物新西兰兔，雌雄兼用，体重2.0~2.5kg,沈阳药科大学实验动物中心提供，合格证号辽实动字033号。2、仪器HSS-1(B)型恒温浴槽、RM6240B型多道生理信号采集处理系统、JZJ01型肌肉张力换能器、TG-328A电光分析天平、T-500型电子天平、医用供氧器(95%02+5%C02)、微量移液器IIlWKY型50-250iLi13、药品与试剂氯化钠(NaCl):、氯化钾(KC1)、硫酸镁(MgS(V7H20)、磷酸二氢钠(NaH2P04)、无水氯化钙(CaCl2)、碳酸氢钠(NaHC03)、葡萄糖(Glucose)、氯化钡(BaCl2)、磷酸二氩钾(KH2P04)、氯化乙酰胆碱(ACh)二、实验方法1、标本制备选健康普通家兔，体重2.03.0kg，雌雄兼用。实验前动物禁食24h,自由饮水。将动物击昏后迅速剖开腹腔找到胃，以胃幽门与十二指肠交界处为起点，先将肠系膜沿肠缘剪去，再剪取10cm15cm肠管，迅速放入盛有Tyrode's液的平皿中洗净并浸洛，当肠管活动明显时，将其剪成约lcm的肠段标本，两端细线结扎，一端固定在通气钩上，置于盛有Tyrode，s液的浴管中(定容15ml);另一端连于张力换能器上，调节标本基本张力为lg左右，由恒温洛槽提供恒温(37士0.5t:沐浴，通气管以每秒l~2个气泡的速度持续通空气。小肠平滑肌自发收缩活动及变化信号经张力换能器引至RM6240多道生理信号采集处理系统，每隔20分钟换一次营养液，标本平衡l小时。2、HEF-05对家兔离体小肠自发活动的作用待标本张力稳定后，向洛管中分别加入不同终浓度的HEF-05(3xl(r6mol/L、3xl(T5mol/L、3xl(r4mol/L)O.lml和溶剂，观察并记录每种浓度下小肠收缩曲线的变化，记录给药前、给药后的张力、振幅的变化。实验数据以均值士标准差表示，并作配对f检验，判定差异的显著性。3、HEF-05对致痉剂引起的家兔离体小肠收缩的作用待标本张力稳定后，向洛管中加入致痉剂(氯化钡2mg/ml，氯化钾60mmol/L,氯化乙酰胆碱10-4mol/L)，获得最大收缩后，充分冲洗组织，加入同浓度的致痉剂再次诱导对照收缩，当与前一次收缩基本一致后，分别累计加入HEF-05(l(T6mol/L~l(r3mol/L)，记录量效曲线。以致痉剂的最大收缩幅度为100%,绘制量效曲线，数据以平均值士标准误表示，并求出EC50。三、实验结果1、HEF^05对家兔离体小肠自发活动的作用由表和图(表1~表2，图1),可知HEF-05能够降低家兔离体小肠的张力和振幅。2、HEF-05对致痉剂引起的家兔离体小肠和结肠收缩的作用由表和图(表3，图2)，可知HEF-05能够舒张乙酰胆碱、氯化钡、氯化钾收缩的家兔离体小肠。实施例3:HEF-05对小肠平滑肌的舒张作用机制与ATP-敏感性K+通道的关系一、实验材料同实施例2。二、实验方法1、标本制备同实施例2。2、格列苯脲对HEF-05舒张BaCl2收缩的家兔离体小肠平滑肌的影响待家兔小肠标本张力稳定后,将基线调节到零，记录一段波形，向洛管中加入BaCl2(2mg/ml),获得稳定的收缩后，累积加入HEF-05(l(T6mol/L~10-3mol/L)，得到HEF-05舒张BaCl2收缩的量效曲线；充分冲洗组织，标本恢复活性后，加入格列苯脲溶液(l(rSmol/L),孵育IO分钟阻断ATP敏感性K+通道，再次向浴管中加入BaCl2(2mg/ml),获得稳定的收缩后，累积加入HEF-05(l(T6mol/L~l()-3mol/L),重新建立HEF-05舒张BaCl2收缩的量效曲线。比较两次获得的量效曲线图形，对ECs。值进行统计学检验，判定差异显著性以确定HEF-05的舒张作用与ATP-敏感性K+通道的关系。3、格列苯脲对HEF-05舒张高钾液收缩的家兔离体小肠平滑肌的影响待家兔小肠标本张力稳定后,将基线调节到零，记录一段波形，向洛管中加入高钾液(60mmol/L),获得稳定的收缩后，累积加入HEF-05(10—6mol/L~10—3mol/L),得到HEF-05舒张高钾液收缩的量效曲线；充分冲洗组织，标本恢复活性后,加入格列苯脲溶液(10-Smol/L),孵育10分钟阻断ATP敏感性K+通道，再次向浴管中加入高钾液(60mmol/L),获得稳定的收缩后，累积加入HEF-05(l(T6mol/L~l(T3mol/L),重新建立HEF-05舒张高钾液收缩的量效曲线。比较两次获得的量效曲线图形，对EC5o值进行统计学检验，判定差异显著性以确定HEF-05的舒张作用与ATP-敏感性K+通道的关系。4、格列苯脲对HEF-05舒张氯化乙酰胆碱收缩的家兔离体小肠平滑肌的影响待家兔小肠标本张力稳定后,将基线调节到零，记录一段波形，向浴管中加入氯化乙酰胆碱(10'4mol/L)，获得稳定的收缩后，累积加入HEF-05(10—6mol/L~1(^mol/L),得到HEF-05舒张氯化乙酰胆碱收缩的量效曲线；充分冲洗组织，标本恢复活性后，加入格列苯脲溶液(l(rSmol/L)，孵育10分钟阻断ATP敏感性K+通道，再次向浴管中加入氯化乙酰胆碱(l(T4mol/L)，获得稳定的收缩后，累积加入HEF-05(10-6mol/L~l(T3mol/L)，重新建立HEF-05舒张氯化乙酰胆碱收缩的量效曲线。比较两次获得的量效曲线图形，对ECs。值进行统计学检验，判定差异显著性以确定HEF-05的舒张作用与ATP-敏感性K+通道的关系。三、实验结果由表和图(表4,图3~图5),可知小肠平滑肌加入ATP-敏感性钾通道阻断剂格列苯脲(10一Smol丄-"孵育后，分别由氯化钡、高钾液和乙酰胆碱引起收缩的HEF-05的舒张量效曲线均发生明显变化，HEF-05的舒张作用被抑制。表l.HEF-05对家兔离体小肠自发活动振幅(g)的影响(7iS)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>**p<0.01同给药前相比，Student'sWest表2.HEF-05对家兔离体小肠自发活动张力(g)的影响(7土S)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表3.HEF-05对致痉剂引起小肠平滑肌痉挛的舒张作用的EC^值(7iS.E.M)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表4.HEF-05对给予格列苯脲前后致痉剂引起小肠平滑肌痉挛的舒张作用EC^值(7士S.E.M)致痉剂格列苯脲剂量n无格列苯脲有格列苯脲(mol/L)-logEC5o(mol/L)—logEC50(mol/L)BaCl2l.Oxl(T574.83±0.114.30土0.18'KC1l.Oxl(T5了4.35±0.034.28±0.03**Ach1.0x10—574.49±0.034.21士0.06"*p<0.05**p<0.01同无格列苯脲相比，Student'sWest以上实验结果说明HEF-05能够降低家兔离体小肠自发活动的张力和振幅，舒张氯化钡、氯化钾、乙酰胆碱收缩的家兔离体小肠。小肠平滑肌经ATP-敏感性钾通道阻断剂格列苯脲孵育过后，HEF-05的舒张作用被抑制，提示HEF-05通过开放钾通道使肠平滑肌舒张。因此，HEF-05可以用于制备治疗肠管平滑肌痉挛的解痉剂及作为钾离子通道开放剂。权利要求1.色满类化合物HEF-05在制备治疗肠管平滑肌痉挛性疾病药物应用。2.色满类化合物HEF-05在制备治疗ATP-敏感性钾离子通道引起的胃肠疾病药物中的应用。3.色满类化合物HEF-05在制备ATP-敏感性钾离子通道开放剂工具药中的应用。4.根据权利要求l所述的用途，其特征在于所述的肠管平滑肌痉挛性疾病为各种原因引起的胃肠痉挛性绞痛，肠易激综合症等引起的胃肠功能斋舌L5.i艮据权利要求4所述的用途，其特征在于所述的肠管平滑肌痉挛性疾病包括高渗性腹泻、吸收不良性腹泻、分泌性腹湾、渗出性腹泻、运动性腹泻o6.根据权^要求l-5任何一项所述的用途，其特征在于所述的色满类化合物HEF-05的化学制备方法包括(l)在室温搅拌下，将高氯酸溶液、2，,4，-二羟基苯乙酮与原甲酸三乙酯混悬溶液混合反应，反应液冷却至室温后，加入无水乙醚，立即产生大量沉淀，抽滤，滤饼干燥，加热水回流后，冷却，析出大量沉淀，静置过夜，得到固体，乙醇重结晶，得到7-羟基色酮晶体；(2)将7-羟基色酮溶于无水乙醇，加入Pd/C，充入氢气，加热搅拌，反应后，冷却，过滤，蒸去乙醇得到棕色油状物，用环己烷萃取，蒸馏后得到7-羟基色满白色固体；(3)将7-羟基色满、溴乙基二乙胺氢溴酸盐、碘化钾、无水碳酸钾混合，加入干燥丙酮，加热搅拌，反应后，冷却，过滤，滤液蒸馏后得到固体，经硅胶柱层析分离得到HEF-05白色固体。全文摘要本发明涉及医药
技术领域：
，主要涉及色满类化合物HEF-05用于制备肠管平滑肌解痉剂及作为钾离子通道开放剂的用途，并包括本发明中被考察对象HEF-05的制备方法。在动物离体实验中HEF-05不仅能够舒张家兔离体肠管平滑肌自发活动的振幅和张力，而且能够舒张由氯化乙酰胆碱、氯化钡、氯化钾引起的小肠平滑肌收缩。另外在对其舒张机制的初步研究中发现，小肠平滑肌经ATP-敏感性钾通道阻断剂格列苯脲孵育过后，HEF-05的舒张作用被抑制。因此，HEF-05可以用于制备治疗肠管平滑肌痉挛的解痉剂及作为钾离子通道开放剂。文档编号A61K31/352GK101618033SQ20091001276公开日2010年1月6日申请日期2009年7月28日优先权日2009年7月28日发明者付守廷,兰惠瑜,汪慧慧,春胡,黄二芳申请人:沈阳药科大学