专利名称：：一种二氢黄酮类化合物在制备防治糖尿病药物中的应用的制作方法
技术领域：
：
背景技术：
：3至今未见有关异奥卡宁或异奥卡宁-7-0-P-D-葡萄糖苷具有防治糖尿病活性的报道。
发明内容本发明对异奥卡宁或异奥卡宁-7-0-(3-D-吡喃葡萄糖苷提供一种制备防治糖尿病药物的用途。本发明通过实验证明，异奥卡宁或异奥卡宁-7-0-P-D-吡喃葡萄糖苷具有明显的抑制a-淀粉酶的活性。因此可用于制备防治糖尿病药物。'本发明采用碘法，选用葡萄糖检测试剂盒(葡萄糖氧化酶一过氧化物酶法，.上海荣盛生物技术有限公司，20070722)，检测异奥卡宁或异奥卡宁-7-ap—D-吡喃葡萄糖苷对a-淀粉酶的抑制作用，以显示其降糖活性。方法如下将异奥卡宁或异奥卡宁-7-0-(3-D-吡喃葡萄糖苷配制成一定浓度的溶液，向待测样品溶液中分别加入27.8mg/L的a-淀粉酶溶液，37。C温孵10min，再加入0.16°/。的淀粉溶液，37。C温孵10min后加500ML显色试剂，同时反应终止，在630nm波长下测定吸光度(A),吸光度A所反映的是被酶水解的淀粉的量，直接反映淀粉酶的活性。实验结果表明，异奥卡宁或异奥卡宁-7-0-p-D-吡喃葡萄糖苷具有显著的抑制a-淀粉酶的活性，亦即能抑制ci-淀粉酶将淀粉分解为糖，显示了其降糖活性，因此可用于制备防治糖尿病药物。本发明为寻找防治糖尿病药物提供了一种新的来源。具体实施例方式下面通过体外实验，对本发明作详细描述。异奥卡宁体外降糖活性试验1、试验药物异奥卡宁或异奥卡宁-7-0-p-D-吡喃葡萄糖苷从鬼针草中分离得到，制备方法详见MeeJungJung,etal.ArchPharmRes，2004，27(6):593-599;Dziedzic,etal"JournalofAgriculturalandFoodChemistry,1985,33(2)，244;王建平，等，中草药，'1992,23(5):229-231。2试剂和材料葡萄糖检测试剂盒(葡萄糖氧化酶—过氧化物酶法，上海荣盛生物技术有限公司，20070722);阿卡波糖(BayerAG,Wuppertal,German);a-淀粉酶(WakoPureChemicalsInd.,Ltd.，Osaka,Japan);其他试剂(分析纯)。3实验仪器酶标仪(Elx800，Biotek);96孔细胞培养板(Corning/Costar)4、实验方法将异奥卡宁和异奥卡宁-7-0-P-D-吡喃葡萄糖苷分别用DMSO配制成10mg/ml的溶液，再用水逐级稀释成高、中、低三个浓度，依次为0.062mg/ml、0.185mg/ml、0.556mg/ml;将阿卡波糖用蒸馏水配制成浓度为0.556mg/ml溶液；将a-淀粉酶用25mM的PIPES缓冲液配制成浓度为27.8mg/L溶液，PH6.9;将淀粉用蒸馏水配制成浓度为0.16%的淀粉溶液。显色剂先将苯甲酸钠10.8克，碘化钾5克溶于400ml水中，然后定溶至500mL。用96孔细胞培养板，实验分5组，空白对照组、阳性对照组(阿卡波糖组)、异奥卡宁或异奥卡宁-7-0-^-D-吡喃葡萄糖苷高(0.556mg/ml)、中(0.185mg/ml)、低(0.062mg/ml)剂量组。分别将上述异奥卡宁或异奥卡宁-7-0-0-D-吡喃葡萄糖苷高、中、低三个浓度的溶液及阿卡波糖溶液加入96孔细胞培养板上编组的相应各孔，每孔25pl样品溶液，空白对照组加等量蒸馏水，每组各设6个复孔，分别于其中三个孔中加入12.5^ilcx-淀粉酶溶液，另三个孔加12.5pl蒸馏水，然后于每个孔中加入12.5(il淀粉溶液，于37r温孵10min，再分别于各孔加入500pL显色试剂，反应同时被终止，按常规在630nm波长下测定吸光度(J)，抑制率(％)计算公式如下抑制率(％)=[1-(样品不加酶-样品加酶)/(空白对照小細-空白对照加酶)&100%5、实验结果异奧卡宁试验结果见表l。6表1异奥卡宁对a-淀粉酶的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>由表1可见，异奥卡宁高剂量组对a-淀粉酶具有明显的抑制作用，其抑制率接近阳性对照组。因此异奥卡宁可用于制备防治糖尿病药物。异奥卡宁-7-0-f3-D-吡喃葡萄糖苷的实验结果见表2。表2异奥卡宁-7-0-(3-D-葡萄糖苷对a-淀粉酶的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>由表2可见，异奥卡宁-7-0-P-D-吡喃葡萄糖苷高剂量组对a-淀粉酶的抑制率接近阳性对照组。因此也可用于制备防治糖尿病药物。权利要求1、一种二氢黄酮类化合物在制备防治糖尿病药物中的应用，其特征在于所说二氢黄酮类化合物的化学结构通式如下其中，R基团表示H或C6H11O5。全文摘要本发明涉及医药
技术领域：
，是鬼针草中二氢黄酮类化合物异奥卡宁或异奥卡宁-7-O-β-D-葡萄糖苷用于制备防治糖尿病药物的用途。本发明通过建立α-淀粉酶反应体系，对异奥卡宁或异奥卡宁-7-O-β-D-葡萄糖苷单体化合物进行了体外降糖活性实验，结果表明，它们均具有显著降糖活性，因此可用于制备防治糖尿病药物。本发明为寻找防治糖尿病药物提供了一种新的来源。文档编号A61K31/7048GK101548982SQ20091005100公开日2009年10月7日申请日期2009年5月12日优先权日2009年5月12日发明者刘建国,孙连娜,杨小唯,赵卫权,金永生,陈海生,黄敏珠申请人:中国人民解放军第二军医大学