一种药用仿真牛黄及其制备方法

专利名称：：一种药用仿真牛黄及其制备方法
技术领域：
：本发明属于中药
技术领域：
，涉及天然中药材的仿制技术，具体涉及天然牛黄的仿制。
背景技术：
：牛黄及其代用研发概况[参见参考文献1-9]1.牛黄的用途及其化学成分牛黄(bezoar)或称天然牛黄(Naturalbezoar)系病牛的胆囊或胆管结石，具有清心开窍、清热解毒、抗炎镇惊、镇静安眠等功效。据我国医药文献记载，约有160多个中药名方把牛黄作为主要组方成分，制成临床应用的中成药。所以，牛黄在我国制药工业上是一种重要的原料药，为主要名贵药材之一。牛黄是一种天然混合物，主含胆红素和胆汁酸，并含少量胆固醇、卵磷脂和较丰富的蛋白质(包括粘蛋白、多肽及氨基酸)及无机盐等。现已证实，天然牛黄中的胆红素绝大部分是以钙盐形式存在(即两分子胆红素与一分子钙离子结合，称其为胆红素钙盐)，总含量大多在35%50%范围内；而胆汁酸多半是与牛磺酸和甘氨酸结合形式存在，总含量都在14%以上。按我国传统观念，牛黄中的胆红素比胆汁酸更受重视，认为胆红素含量越高越好，并以胆红素含量高低作为评价牛黄品质的主要指标。但国外有不少药理学家对此持反对意见，其理由是(1)胆红素是人类和动物体内血红蛋白代谢的最终产物，是一种该排出体外的“废物”，把它返回体内作为药物是不科学的；(2)胆红素及其钙盐是难溶于水的物质(游离胆红素在37°C水中的溶解度为3X10-15mol/L)，在体内蓄积过多，可导致“高胆红素症”或沉积在机体组织中等副作用；(3)现在还无法证实，牛黄的多种药理效应是其中的胆红素起主要作用。可见，牛黄中的胆红素作用及评价牛黄品质的指标有待进一步研究。但牛黄在我国作为一种名贵药材将永远为多数国人所认同2.牛黄代用品研发及主要品种[参见参考文献2、3、4、7、8、10]我国制药工业所需的牛黄用量很大，据说上世纪八九十年代，我国每年约需5060吨牛黄做制药工业原料，而国产天然牛黄每年只有100多公斤。所以需要大量进口(从澳大利亚、印度、阿根廷等国)。由于牛黄药用价值较高、资源稀少，因而价格昂贵(几乎与黄金价格相当)。为了节约外汇和解决国内牛黄短缺，从上世纪50年代中期开始，我国药学家们着手研制牛黄代用品。最初是天津市药学会郭巩等人提出的，以新鲜牛胆汁为原料，用乙醚、氯仿、乙醇等有机溶剂提取，将提取物制成固体混合物，经初步药理实验，发现有类似于牛黄的药理作用，于是在天津、上海等地进行试产。从此，在全国各地掀起了“人造牛黄”的热潮。1971年，我国卫生部召开了“人工牛黄”生产专题会议，统一了配方和工艺，并颁布了人工牛黄质量标准。后来，在此基础上又开发了一些新品种，诸如贝斯欧人工牛黄、体内培植牛黄、体外培育牛黄等等。2.1部颁人工牛黄配方胆红素(纯度彡60%)，折合100%计算0.7%胆固醇(mp≥140°C)2%胆酸(纯度≥80%)，折合100%计算12.5%猪去氧胆酸(mp≥150°C)15%无机盐(硫酸镁1.5%、硫酸亚铁0.5%、磷酸氢钙3%)5%淀粉加至100%工艺按配方量称取各原料药，胆红素先用少量有机溶剂溶解，再加入胆酸、胆固醇、无机盐及赋形剂等，混合均勻，真空干燥、球磨(粉碎)，过80目药筛，即得“人工牛黄”(呈土黄色粉末)。这种“人工牛黄”的主要缺点是⑴配方过于简化、组方物质的纯度较低；(2)胆红素用量太低，且全是游离胆红素；(3)配方中有些成分在天然牛黄中实际不存在(如猪去氧胆酸和淀粉)；(4)组方物质的种类及存在状态或形式，与天然牛黄的实际状况不符；(5)药效低于天然牛黄。2.2“新标准人工牛黄”(或称贝斯欧人工牛黄)[参见参考文献4]上世纪90年代，上海贝斯欧药业有限公司在部颁人工牛黄配方的基础上作了改进，革除了部颁配方中的硫酸镁、硫酸亚铁两种组方物质，增加了所谓“贝斯素”(卫生部批准的保密成分)和硫酸锌，并以葡萄糖酸钙代替了原配方中的磷酸氢钙。产品中还含有部颁配方中不存在的一些成分，如结合型胆汁酸及氨基酸、脂肪酸(主要是棕榈酸和硬脂酸)等，而胆红素的用量保持原有水平(0.7%)。这种人工牛黄虽有进步，但不是真正意义上的天然牛黄模拟品，只是一种有一定药效的牛黄代用品。其配方如下胆红素(游离型)0.7%胆酸5%猪去氧胆酸10%胆固醇2%葡萄糖酸钙30%硫酸锌贝斯素30%淀粉加至100%2.3牛体内“培植牛黄”[参见参考文献9、11]上世纪七八十年代，广东、吉林、内蒙古等地开展了牛体内“培植牛黄”的研究，借助于外科手术在健康牛的胆囊中植入异物(如塑料管)和注入一定量的大肠杆菌，引起炎症而使部分结合胆酸降解和脱羟生成次级胆酸，同时使结合胆红素游离，从而改变胆汁的组成，生长出牛黄(称此为“培植牛黄”)，约经1年时间可得到一定量的牛黄(一般仅7克以下)。这种牛黄与天然牛黄较相似，但其胆红素含量普遍较低(约28%)，而胆汁酸的含量略高于20%。实施该法付出的代价很大，而收获不大，可谓得不偿失，导致耕牛失去劳动力或死亡。所以这项试验很快被禁止，产品还没有投放市场就夭折了。2.4体外“培育牛黄”[参见参考文献8、11]上世纪80年代中期，武汉等地，开展了体外“培育牛黄”研究。在新鲜牛胆汁中接种大肠杆菌使其发酵，加入石灰水使胆红素形成钙盐，再加入一定比例的牛磺酸、胆酸、去氧胆酸、猪去氧胆酸及胆红素钙盐、胆固醇等成分。调整酸度后用偏轴离心装置定向转动，直至析出固体物为止。除去溶剂，干燥后得到产品。称为体外“培育牛黄”。其工艺特点是(1)用了新鲜牛胆汁做“底物”，且经发酵处理；(2)加入的胆汁酸均为胆酸、去氧胆酸和猪去氧胆酸等游离胆留酸，而结合胆汁酸(盐)含量极低或无；(3)胆红素比例大大超过部颁人工牛黄，高达60%以上，而且游离胆红素占的比例较大。武汉的牛黄代用品研发是较成功的，已获新药证书，并正式投产。但生产成本较高，其主要原因在于价格昂贵的胆红素用量太大；另一缺点是，产品中的化学成分、组成比例及组分存在形式，与天然牛黄有较显著的差异(尤其是结合型胆汁酸种类及含量明显低于天然牛黄)。再一缺点是，和部颁处方一样，把猪去氧胆酸作为一种组方成分。实际上，天然牛黄中不存在这种胆留酸。由此可见，体外“培育牛黄”与天然牛黄在化学组成上存在明显差异，只是药效相近，其药理作用的物质基础也不完全相同。
发明内容本发明的任务是提供一种药用仿真牛黄，使其配方中的组分比例及存在形式与天然牛黄具有显著相似性，达到更好的药效，以克服现有技术的不足。同时，本发明还将提供这种药用仿真牛黄的制备方法。本发明药用仿真牛黄配方设计配方依据和设计理念(1)从大量的文献报道得知，牛黄的基本成分是胆红素钙盐和胆汁酸(盐)、粘蛋白及多肽、氨基酸、胆固醇、卵磷脂、无机盐等。按其含量高低和生物活性强弱，胆红素和胆汁酸是牛黄的主要有效成分，一是因为它们占的比例大，二是因为它们都具有广泛的药理作用(尤其是胆汁酸)。无疑，它们是牛黄药理作用的主要物质基础。而含量低的一些成分，诸如粘蛋白、氨基酸、卵磷脂、胆固醇等成分起着协同作用或稳定作用，是一类辅助成分。(2)近数十年，人们特别关注牛黄中的胆红素。一是因为它是牛黄的一种主要成分；二是因为它显示的水溶度特别小，与其直链四吡咯结构不符。后来证实胆红素由于分子内氢作用，形成“屋脊瓦”(ridge-roof)型构象所致。众所周知，凡水溶度很小的药物，其吸收率和药效更明显受溶解度的制约。如果它在人工牛黄中配比过大，未必能明显提高吸收率和药效，相反会增加制剂工艺的难度和毒副作用(如高胆红素症或在机体组织中沉积等)，也造成浪费。按我国药典规定天然牛黄胆红素含量下限为35%，上限未作明确规定。若人工牛黄胆红素含量上限控制在40%左右是较适中的。据张能荣等人报告，京牛黄胆红素含量为25.2242.93%，金山牛黄为32.1142.09%，印度牛黄为39.4240.24%；日人西村报告天然牛黄的胆红素含量可高达7276%。尽管各家报告的结果相差较大，但天然牛黄中的胆红素含量高于60%以上者不一定有代表性。所以我们设计的仿真牛黄，胆红素含量在35%39%范围内。其优点是①能保证人工牛黄具有天然牛黄的基本特征和活性；②可以从源头上避免毒副作用或造成浪费；③可较大幅度降低配方中胆红素配比和适当增大胆汁酸比例，使之更接近于天然牛黄的组成，并能使成本降低。(3)以往，国内制备“体内培植牛黄”和“体外培育牛黄”，大多采用了接种大肠杆菌使牛胆汁发生病理变化，以改变胆汁的组成。这种作用是一种酶促反应，使初级胆酸发生脱羟和降解，并使结合胆红素游离，生成相应的次级胆酸和游离胆红素。从作用机制看，在牛胆囊中接种大肠杆菌，主要是引起胆囊炎症，增大3-葡萄糖醛酸酯酶的活性，促进胆汁酸代谢，并加快结合胆红素游离，但不是体外制备胆红素钙盐和次级胆酸必不可少的条件。据此，制备“体外培育牛黄”所需的配方成分，不一定要模拟这个代谢过程或套用这个操作，因为体外不存胆囊，也就无所谓“炎症”，而人们关注的是代谢产物的组成和结构，而不是这个过程或途径。从化学观点看，初级胆酸转变为次级胆酸和使结合胆红素游离在体外可以不借助于酶促反应。例如由胆酸制备去氧胆酸或脱氢胆酸，加适当氧化剂就能实现，而结合胆红素加碱处理可使之游离，再与钙盐反应可得胆红素钙。(4)人工牛黄配方，如果完全仿照西药制剂处方模式(用各种纯组分组方)，不仅不符合中医中药的精神和制备中药复方制剂的传统做法，而且会增加工业生产的难度和成本。所以用了牛胆汁作为一种配方物质(底物)，这不仅能使生产工艺简化，还能增加人工牛黄中的天然成分。但按配方要求，组方物质无论是单一纯品或多组分混合物，其含量应是可控的。实践表明①直接用牛胆汁作底物不太合适，因为质量不易控制，并由于胆汁新鲜度不好掌握而影响组分含量准确性；②用定型工艺制备的牛胆汁干浸膏(浸膏粉)做底物较好，因其组成相对恒定，经过质量检测后可按需要比例加入；③牛黄中的主要成分(含量高或配比大的组分)是无法单独用牛胆汁或牛胆汁浸膏完全代替，因为牛胆汁中的这类成分含量毕竟很低，达不到应有的配比。由此提示制备某些高纯度胆汁性组分是生产人工牛黄必要的，若从动物胆汁中提取则难以达到药用纯度，如果用半合成方法制备就容易得多(纯度可达>95%，并可工业化生产)。(5)天然牛黄中的胆留酸和胆汁酸盐是一类复杂多样的有效组分群，并以结合胆汁酸为主。据李良铸等人汇总的资料表明常见的天然牛黄中的胆酸、去氧胆酸和鹅去氧胆酸等胆留酸总量平均约2.7%；而牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸、甘氨胆酸等结合胆汁酸总量平均约7.7%。(其中牛磺胆酸和甘氨胆酸约占结合胆汁酸总量的3/4或2/3)。所以设计人工牛黄配方时，游离胆留酸和结合胆汁酸配比应接近13。由于它们的生物活性相差甚远，若配比不同，对产品的药效有明显影响。以往的人工牛黄，其主要缺点之一就是结合胆汁酸的配比普遍偏低。(6)药学家们都知道，模拟或“克隆”天然药物最基本的要求，就是要忠实于天然药物(“样板”)的化学成分，不仅主要成分不能“遗漏”，组分相对含量也要基本一致，还要重视组分存在形式、结构和构型或构象。鉴于上述依据和理念，为使本发明药用仿真牛黄的化学组成和结构具有与天然牛黄显著相似性，我们摆脱了以往人工牛黄以游离胆红素为中心的组方思路，设计出了更为合理的本发明药用仿真牛黄配方。本发明提供的这种药用仿真牛黄由下述重量％含量的原料制成胆红素钙盐36.038.0%游离胆红素0.81.2%牛胆汁浸膏粉26.030.0%粘蛋白6.08.0%甘氨胆酸钠4.06.0%牛磺胆酸钠3.05.0%明胶水解蛋白2.53.5%去氧胆酸2.53.5%卵磷脂2.03.0%硬脂酸镁4.55.5%牛磺去氧胆酸钠1.21.8%胆固醇0.81.2%硫酸锌ZnSO4·7Η200.81.2%本发明药用仿真牛黄的配方优选重量％含量是胆红素钙盐38.0%游离胆红素1.0%牛胆汁浸膏粉28.0%粘蛋白7.%甘氨胆酸钠5.0%牛磺胆酸钠4.0%明胶水解蛋白3.0%去氧胆酸3.0%卵磷脂2.5%硬脂酸镁5.0%牛磺去氧胆酸钠1.5%胆固醇1.0%硫酸锌ZnSO4·7H201.0%本发明药用仿真牛黄可以是固体产品、粉状产品或成型块状产品。固体产品的制备方法包括以下步骤A.按配方量取胆红素钙盐细粉、粘蛋白、去氧胆酸、甘氨胆酸钠、牛磺胆酸钠、牛磺去氧胆酸钠和牛胆汁浸膏粉及硫酸锌ZnSO4·7H20，在研钵中用0.2%亚硫酸氢钠水溶液研磨并调成糊状；B.再加配方量的游离胆红素、卵磷脂、胆固醇，用无水热乙醇搅拌均勻，减压蒸去溶剂，真空干燥，得橙红色固体，即得本发明药用仿真牛黄固体产品。粉状产品的制备方法包括以下步骤A.按配方量取胆红素钙盐细粉、粘蛋白、去氧胆酸、甘氨胆酸钠、牛磺胆酸钠、牛磺去氧胆酸钠和牛胆汁浸膏粉及硫酸锌ZnSO4·7H20，在研钵中用0.2%亚硫酸氢钠水溶液研磨并调成糊状；B.再加配方量的游离胆红素、卵磷脂、胆固醇，用无水热乙醇搅拌均勻，减压蒸去溶剂，真空干燥，得橙红色固体；C.将步骤B所得橙红色固体研成细粉，即得本发明药用仿真牛黄粉状产品。成型块状产品的制备方法包括以下步骤A.按配方量取胆红素钙盐细粉、粘蛋白、去氧胆酸、甘氨胆酸钠、牛磺胆酸钠、牛磺去氧胆酸钠和牛胆汁浸膏粉及硫酸锌ZnSO4·7H20，在研钵中用0.2%亚硫酸氢钠水溶液研磨并调成糊状；B.再加配方量的游离胆红素、卵磷脂、胆固醇，用无水热乙醇搅拌均勻，减压蒸去溶剂，真空干燥，得橙红色固体；C.将步骤B所得橙红色固体研成细粉，用50%乙醇分散，再按配方量加明胶水解蛋白液，在避光下用稀盐酸调节PH值56，搅拌成糊状物，再按配方量加入粉状硬脂酸镁，搅拌均勻后将其压入模具中成型，干燥，灭菌，即得本发明药用仿真牛黄成型块状产品。本发明药用仿真牛黄中所用的胆红素钙盐可以按以下方法制备令胆红素在碱性条件下和有抗氧化剂存在的条件下与钙离子结合形成胆红素钙盐。所述的与胆红素结合的钙离子来源于氯化钙；所述的抗氧化剂是亚硫酸氢钠或亚硫酸钠。本发明提供的药用仿真牛黄可以作为药物制剂原料用于生产含有牛黄的药物制剂。本发明药用仿真牛黄配方与现有技术中的其他人工牛黄配方不同之处在于(1)以胆红素钙盐为主组方；(2)加入了较大量的结合胆汁酸(甘氨胆酸和牛磺胆酸等)；(3)把蛋白质(包括粘蛋白、多肽等)及卵磷脂作为组方物质；(4)删除了人工牛黄传统配方中的猪去氧胆酸，并降低了游离胆留酸的配比；(5)革除了细菌发酵法制备胆红素钙盐的工艺，并去除了淀粉做辅料；(6)配方中的组分比例及存在形式与天然牛黄几乎完全一致。本发明药用仿真牛黄的药效优于现有的其他人工牛黄。本发明药用仿真牛黄主要组方成分的制备1.甘氨胆酸钠的合成[参见参考文献6]称取IOg胆酸置于0.5L三颈烧瓶中，加入60ml二氧六环和6ml三乙胺，搅拌至固体物料全溶后，置于5°10°C冰水浴中，加入2.5ml氯甲酸乙酯，搅拌15min后滴加25ml甘氨酸钠溶液(由9.4g甘氨酸与25mllmol/LNaOH配成)，继续搅拌反应20min，加IOOml水稀释，减压浓缩至干。加200ml水溶解稠状物，用6mol/L盐酸调PH值约2，析出白色沉淀，放置30miη后过滤，沉淀用水反复洗涤至近于中性，干燥后得白色固体(甘氨胆酸粗品)。粗品用热乙醇溶解(按每克粗品加5ml乙醇计)，全溶后加沸水稀释至乙醇浓度约为5%，置于0°2°C冰箱中过夜。第二天滤取沉淀或结晶，用蒸馏水洗涤至近于中性，干燥后用乙醇-乙酸乙酯混合液结晶，得甘氨胆酸纯品约7.6g，mpl61-163°C(若熔点偏低，用相同方法重结晶或过硅胶柱)。2.牛磺胆酸钠和牛磺去氧胆酸钠的合成[参见参考文献6]以胆酸(或去氧胆酸)为起始原料，与三正丁胺反应生成胺盐，再与氯甲酸乙酯反应生成胆酸甲酰酐乙酯，而后与牛磺酸缩合而得目标化合物。以合成牛磺胆酸钠为例，其操作如下在IL三颈烧瓶中依次加入106g胆酸、62ml三正丁胺及320ml四氢呋喃，温热搅拌使溶，冷却至8°10°C时加入30ml氯甲酸乙酯，搅拌15min后滴加150ml牛磺酸钠溶液(由36g牛磺酸与150ml1.5mol/LNaOH溶液配成)，滴完后调节PH值89，继续反应30min,分出上层液体(三正丁胺)，收集下层水溶液，减压浓缩至糖浆状，加入约0.8L无水乙醇回流30min，冷至室温后过滤，弃去滤渣，收集滤液，适当浓缩后加入足量的乙酸乙酯沉淀。冷冻过夜，滤取沉淀或结晶，用适量乙醚洗涤，再用乙醇_乙醚混合液进行重结晶，真空干燥后得产品约95g，mp.230(分解)，IR数据与Sigma公司生产的TCNa对照品一致。3.牛胆汁浸膏粉的制备[参见参考文献12]取IL新鲜牛胆汁，浓缩至1/4体积时加入0.5L乙醇，密闭静置5_8h，过滤，收集滤液，滤渣用少量乙醇洗涤，将洗液与滤液合并，减压蒸干，真空干燥(70°C)5h，得8590克棕褐色或棕黄色固体，研碎，过60目筛，总胆酸含量不低于45%。用棕色玻瓶密封包装、备用。本发明药用仿真牛黄的制备取配方的物质及数量，按如下三步制得成品第一步，胆红素钙盐的制备胆红素含有2个丙酸基侧链，在碱性溶液中二分子胆红素能与一分子钙离子反应生成不溶于水的钙盐。如下式所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>上式中^㈨表示胆红素。在IL烧杯中加入500ml蒸馏水及2g亚硫酸氢钠，在避光下加入纯度>90%胆红素45g和适量NaOH，使混合液PH达1112，当胆红素全溶后逐步滴加6mol/LCaCl2溶液，直至沉淀完全为止。置于70°C水浴中加热搅拌lOmin，冷至室温后移置0°5°C冰箱中过夜。第二天，滤取桔红色结晶，用蒸馏水洗涤至无氯离子为止，再用无水乙醇和丙酮分别洗涤12次、抽干，置于盛有P2O5真空干燥器中减压干燥23天，得桔红色胆红素钙盐约39g，纯度彡95%。第二步，成品配制取38g胆红素钙盐细粉，按配方量加入粘蛋白、去氧胆酸、甘氨胆酸钠、牛磺胆酸钠、牛磺去氧胆酸钠和牛胆汁浸膏粉及硫酸锌。在研钵中和0.2%亚硫酸氢钠水溶液IOOml研磨并调成糊状，再加配方量的游离胆红素、卵磷脂、胆固醇及150ml无水热乙醇，搅拌均勻，减压蒸去溶剂，再真空干燥，得橙红色固体，用棕色瓶密封包装、备用。第三步，成型将固体混合物研成细粉，加入IOOml50%乙醇分散，再加3%明胶水解液100ml，在避光下用稀盐酸调节PH值56，定向搅拌，使成糊状物，加入5g硬脂酸镁，搅拌均勻后将其压入一个有多孔筛板(孔径约0.81.Ocm)模具中，压成条状(每条约23cm长)，用瓷盘装盛，置于盛有无水氯化钙干燥器中干燥2天，再移至真空干燥箱中于60°C缓慢减压干燥至水分含量<9%，用紫外线法灭菌后密封包装，即得本发明药用仿真牛黄成型块状产品。本品为棕黄色或橙黄色脆性固体。在乙醇、乙醚中微溶，其粉末用乙醇回流或浸渍12h，滤液用硅胶G薄层检查[参见参考文献9、10]，可检出游离胆红素、牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸、甘氨胆酸等结合胆酸和胆酸、去氧胆酸等游离胆留酸。其固体粉末与KBr压片，IR扫描所得叠加图谱与天然牛黄基本一致。药效学试验1.抗炎作用(角叉菜胶致足肿胀模型)选择健康雄性大鼠(120150g)共70只，随机均分为7组。第1组为空白对照组；第26组分别为天然牛黄及不同剂量的仿真牛黄和体外培育牛黄，第7组为地塞米松对照组。各组连续ig，5d给药，末次给药后lh，每只大鼠右后跖注射角叉菜胶0.Iml0致炎后，每隔Ih测量足爪肿胀度。结果见表1表1本发明仿真牛黄及对照品对角叉菜胶引起大鼠足肿胀的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>结果表明本发明仿真牛黄、天然牛黄和体外培育牛黄均能抑制角叉菜胶对大鼠足跖肿胀，但各牛黄之间没有显著性差异。2.镇静作用(戊巴比妥钠致眠模型)选择健康小鼠(昆明种)120只，(每只18_22g)，雌雄各半，随机均分为6组(第1组为空白对照组)，其他各组为给药组，分别ig不同剂量的仿真牛黄；阳性药物对照组ig同剂量的天然牛黄或体外培育牛黄。给药后30min，均iv戊巴比妥钠20mg/kg，记录15min内各组的睡眠鼠数。结果见表2。表2本发明仿真牛黄和其它牛黄与戊巴比妥钠的协同作用<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>结果显示，仿真牛黄和戊巴比妥钠有协同催眠作用，并呈现一定的量效关系；但同剂量下仿真牛黄与天然牛黄没有显著性差异，仅与其他人工牛黄有较明显差别。3.抗惊厥作用(戊四氮致惊厥模型)选择健康小鼠(昆明种)80只，雌雄各半，随机均分为4组，每天以2000mg/kg灌胃给药1次，连续5d，末次给药后lh，各组小鼠均ip戊四氮100mg/kg，记录30min内各组小鼠出现惊厥的潜伏时间和惊厥的鼠数，结果见表3。表3本发明仿真牛黄对戊四氮惊厥的保护作用<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>结论本发明仿真牛黄和天然牛黄及体外培育牛黄对戊四氮所致小鼠惊厥均有一定抑制作用，其抑制活性本发明仿真牛黄>天然牛黄>体外培育牛黄。4.解热作用(酵母致热模型)取健康雄性大鼠40只(体重160_180g)，随机均分成4组，分别测量肛温1次，皮下注射7%酵母混悬液3ml/kg致热。当大鼠体温升高后，ig给药(400mg/kg)，4h后开始测量实验大鼠肛温(每隔Ih测1次，共测3次)。结果列入表4。表4本发明仿真牛黄及其它牛黄对大鼠解热效果比较<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>结论各种牛黄均有一定的解热效果，其解热活性天然牛黄与本发明仿真牛黄没有显著性差异，而体外牛黄略弱。参考文献[1]张能荣天然牛黄种类及其所含成分，中成药研究，1979，⑴43_97[2]张能荣人工牛黄的再研究，生化药物杂志，1986，(2):78_81[3]冯文莉等关于第二代人工牛黄的管见，沈阳药学院学报，1990，7(20151[4]龚逸民等新部颁标准人工牛黄的特点，中成药，1998，20(2):44_45[5]杨明珍等中国牛黄43年研究动态，中国民族民间医药，1996，(18):27_34[6]Norman,A:Preparationofconjugatedbileacids,Ark.Kemi.1995(8)331-342[7]李良铸、李明晔《最新生化药物制备技术》，2000年，中国医药科技出版社[8]蔡红娇一种人工体外制作牛胆结石的方法[P]，CN89100505.6[9]俞长芳《胆汁·牛黄与动物结石》，1991年，中国医药科技出版社[10]张豁中、温玉麟《动物活性成分化学》，1995年，天津科技出版社[11]张保国、张大禄《动物药》，2003年，中国医药科技出版社[12]南京药学院编《药剂学》，1960年，P.605及曹春林编著《中药药剂学》P.19具体实施例方式实施例1本发明药用仿真牛黄配方本发明药用仿真牛黄配方组成及组分来源和配比如下<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>折合纯组分优选用量组方成分来源纯度用量(重量％)(重量％)范围按现有技1.2-1.8牛磺去氧胆酸钠彡95%1.5术半合成胆固醇市售药用品mp彡140C0.8-1.2Τθ硫酸锌(ZnSO4·7Η20)市售药用品^98%0.8-1.276^Mr代表相对分子质量；PI代表等电点；CA代表总胆酸。实施例2制备胆红素钙盐在IL烧杯中加入500ml蒸馏水及2g亚硫酸氢钠，在避光下加入纯度>90%胆红素45g和适量NaOH，使混合液PH达1112，当胆红素全溶后逐步滴加6mol/LCaCl2溶液，直至沉淀完全为止。置于70°C水浴中加热搅拌lOmin，冷至室温后移置0°5°C冰箱中过夜。第二天，滤取桔红色结晶，用蒸馏水洗涤至无氯离子为止，再用无水乙醇和丙酮分别洗涤12次、抽干，置于盛有P2O5真空干燥器中减压干燥23天，得桔红色胆红素钙盐约39g，纯度彡95%。实施例3制备本发明药用仿真牛黄固体产品取38g胆红素钙盐细粉，按配方量加入粘蛋白、去氧胆酸、甘氨胆酸钠、牛磺胆酸钠、牛磺去氧胆酸钠和牛胆汁浸膏粉及硫酸锌。在研钵中和0.2%亚硫酸氢钠水溶液IOOml研磨并调成糊状，再加配方量的游离胆红素、卵磷脂、胆固醇及150ml无水热乙醇，搅拌均勻，减压蒸去溶剂，再真空干燥，得橙红色固体，即得本发明药用仿真牛黄固体产品，用棕色瓶密封包装、备用。实施例4制备本发明药用仿真牛黄粉状产品按上述实施例3所述方法制备本发明药用仿真牛黄固体产品，将所得橙红色固体产品研成细粉，即得本发明药用仿真牛黄粉状产品。实施例5制备本发明药用仿真牛黄成型块状产品按上述实施例3所述方法制备发明药用仿真牛黄固体产品，将所得橙红色固体产品研成细粉，加入浓度为50%的乙醇IOOml分散，再加3%明胶水解蛋白液100ml，在避光下用稀盐酸调节PH值56，搅拌使成糊状物，再加入5g硬脂酸镁，搅拌均勻后将其压入筛孔孔径为0.81.Ocm的多孔筛板模具中，压成条状，每条约23cm长，用瓷盘装盛，置于盛有无水氯化钙干燥器中干燥2天，再移至真空干燥箱中于60°C缓慢减压干燥至水分含量<9%，用紫外线法灭菌后密封包装，即得本发明药用仿真牛黄成型块状产品。权利要求一种药用仿真牛黄，其特征在于它由下述重量％含量的原料制成胆红素钙盐36.0～38.0％游离胆红素0.8～1.2％牛胆汁浸膏粉26.0～30.0％粘蛋白6.0～8.0％甘氨胆酸钠4.0～6.0％牛磺胆酸钠3.0～5.0％明胶水解蛋白2.5～3.5％去氧胆酸2.5～3.5％卵磷脂2.0～3.0％硬脂酸镁4.5～5.5％牛磺去氧胆酸钠1.2～1.8％胆固醇0.8～1.2％硫酸锌ZnSO4·7H2O0.8～1.2％2.根据权利要求1所述的药用仿真牛黄，其中各原料的重量％含量为胆红素钙盐38.0%游离胆红素1.0%牛胆汁浸膏粉28.0%粘蛋白7.%甘氨胆酸钠5.0%牛磺胆酸钠4.0%明胶水解蛋白3.0%去氧胆酸3.0%卵磷脂2.5%硬脂酸镁5.0%牛磺去氧胆酸钠1.5%胆固醇1.0%硫酸锌ZnS047H201.0%3.根据权利要求1或2所述的药用仿真牛黄，其特征在于它是由所述原料制成的固体产品、粉状产品或成型块状产品。4.权利要求3所述药用仿真牛黄的制备方法，其特征在于所述的固体产品的制备方法包括以下步骤A.按配方量取胆红素钙盐细粉、粘蛋白、去氧胆酸、甘氨胆酸钠、牛磺胆酸钠、牛磺去氧胆酸钠和牛胆汁浸膏粉及硫酸锌ZnS047H20，在研钵中用0.2%亚硫酸氢钠水溶液研磨并调成糊状；B.再加配方量的游离胆红素、卵磷脂、胆固醇，用无水热乙醇搅拌均勻，减压蒸去溶剂，真空干燥，得橙红色固体，即得本发明药用仿真牛黄固体产品。5.权利要求3所述的药用仿真牛的制备方法，其特征在于所述的粉状产品的制备方法包括以下步骤A.按配方量取胆红素钙盐细粉、粘蛋白、去氧胆酸、甘氨胆酸钠、牛磺胆酸钠、牛磺去氧胆酸钠和牛胆汁浸膏粉及硫酸锌ZnS047H20，在研钵中用0.2%亚硫酸氢钠水溶液研磨并调成糊状；B.再加配方量的游离胆红素、卵磷脂、胆固醇，用无水热乙醇搅拌均勻，减压蒸去溶剂，真空干燥，得橙红色固体；C.将步骤B所得橙红色固体研成细粉，即得本发明药用仿真牛黄粉状产品。6.权利要求3所述药用仿真牛黄的制备方法，其特征在于所述的成型块状产品的制备方法包括以下步骤A.按配方量取胆红素钙盐细粉、粘蛋白、去氧胆酸、甘氨胆酸钠、牛磺胆酸钠、牛磺去氧胆酸钠和牛胆汁浸膏粉及硫酸锌ZnS047H20，在研钵中用0.2%亚硫酸氢钠水溶液研磨并调成糊状；B.再加配方量的游离胆红素、卵磷脂、胆固醇，用无水热乙醇搅拌均勻，减压蒸去溶剂，真空干燥，得橙红色固体；C.将步骤B所得橙红色固体研成细粉，用50%乙醇分散，再按配方量加明胶水解蛋白液，在避光下用稀盐酸调节PH值56，搅拌成糊状物，再按配方量加入粉状硬脂酸镁，搅拌均勻后将其压入模具中成型，干燥，灭菌，即得本发明药用仿真牛黄成型块状产品。7.权利要求4至6中任一项所述的药用仿真牛黄的制备方法，其特征在于所述的胆红素钙盐是按以下方法制备的令胆红素在碱性条件下和有抗氧化剂存在的条件下与钙离子结合形成胆红素钙盐。8.根据权利要求7所述的药用仿真牛黄的制备方法，其特征在于所述的与胆红素结合的钙离子来源于氯化钙。9.根据权利要求7所述的药用仿真牛黄的制备方法，其特征在于所述的抗氧化剂是亚硫酸氢钠或亚硫酸钠。10.权利要求1至3中任一项所述的药用仿真牛黄或权利要求4至9中任一项所述方法制备的药用仿真牛黄作为药物制剂原料的应用。全文摘要本发明提供了一种药用仿真牛黄，其与现有其他人工牛黄不同之处在于(1)药用仿真牛黄以胆红素钙盐为主组方；(2)加入了较大量的结合胆汁酸(甘氨胆酸和牛磺胆酸等)；(3)把蛋白质(包括粘蛋白、多肽等)及卵磷脂作为组方物质；(4)删除了人工牛黄传统配方中的猪去氧胆酸，并降低了游离胆甾酸的配比；(5)革除了细菌发酵法制备胆红素钙盐的工艺，并去除了淀粉做辅料；(6)配方中的组分比例及存在形式与天然牛黄几乎完全一致。本发明药用仿真牛黄的药效优于现有的其他人工牛黄。文档编号A61K35/413GK101804195SQ200910060779公开日2010年8月18日申请日期2009年2月18日优先权日2009年2月18日发明者石朝周申请人:石朝周