专利名称：黄芪皂苷的制备方法及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，涉及一种黄芪皂苷的制备方法及其用途，特别涉及一 种具有舒张血管作用的黄芪皂苷的制备方法及其用途。
背景技术：
高血压病为我国人口的常见病、多发病之一，也是形成心脑血管疾病的重要因素， 这是因为血管收缩与舒张功能的失调对心血管疾病的早期发生、发展及并发症起着主导作 用。高血压的发病率日趋增高，对人类健康危害极大。目前，治疗高血压的药物主要以西药 为主，虽然起效迅速，但其药物依赖性强，需长期用药，且会产生一些毒副作用。而对于中药 在治疗高血压疾病方面的研究却甚少。黄芪为最常用的中药材之一，具有补气升阳、利水消肿、益气固表之功效，在心血 管疾病防治方面应用广泛。现代药理学研究表明黄芪具有改善心功能、扩张血管、保护缺血 心肌、提高机体的抗氧化能力、改善血流动力学指标、抑制血小板聚集以及抗血栓形成等作 用，常用于冠心病、高血压、心力衰竭、病毒性心肌炎等病症的治疗。虽然黄芪具有舒张血管 的作用，但是其作用还很有限且活性成分尚不十分明确，针对黄芪中舒张血管的活性成分 的研究工作一直是中药学领域中重要的研究课题之一。
发明内容
因此，本发明的目的是提供一种来自黄芪且具有更强效舒张血管的作用的药物。用于实现上述目的的技术方案如下一种黄芪皂苷的制备方法，其包括以下步骤(1)黄芪加水煎煮提取，过滤，浓缩滤液；(2)加入乙醇进行沉淀，静置；(3)上清液回收乙醇后加水稀释，注入大孔吸附树脂柱，依次用水、20% (体积/体 积)乙醇水溶液和70% (体积/体积)乙醇水溶液洗脱；(4)除去70% (体积/体积)乙醇水溶液的洗脱液中的乙醇，干燥即得。在上述制备方法的步骤(1)中，煎煮提取的次数可以为3 5次；加水的重量与黄 芪的重量之比为可以6 8 ；提取时间可以为1. 5 3小时。在上述制备方法的步骤(2)中，在加入乙醇的溶液中，乙醇体积占溶液总体积的 80%。在上述制备方法的步骤(3)中，大孔吸附树脂优选为非极性或弱极性大孔树脂， 更优选为HPD600型大孔吸附树脂。在本发明的一个具体实施方案中，上述黄芪皂苷的制备方法为黄芪饮片加10倍 重量的去离子水加热煎煮提取3小时，过滤，滤液备用；药渣再煎煮提取2次，其加水重量 分别为黄芪饮片重量的8倍和6倍，提取时间分别为2. 5小时和1. 5小时，过滤，合并滤液， 加乙醇至乙醇体积占溶液体积的80%进行醇沉，静置12小时。将上清液减压回收乙醇至无醇味，所得浓缩液加0. 5倍重量的水稀释，过滤，滤液徐徐注入已处理好的大孔吸附树脂 柱内，先用去离子水洗脱，再用2倍柱体积量的20% (体积/体积)乙醇水溶液洗脱，弃去 20% (体积/体积)乙醇水溶液的洗脱液，再用4倍重量的70% (体积/体积)乙醇水溶 液洗脱，收集70% (体积/体积)乙醇水溶液的洗脱液，回收乙醇至无醇味，60°C真空干燥， 粉碎，即得黄芪皂苷提取物。本发明还提供了上述制备方法制备的黄芪皂苷。其中，按照黄芪皂苷总重量计，黄 芪皂苷包含13.61% (重量)的黄芪甲苷、0.8% (重量)的黄芪皂苷Ι、3·71% (重量)的 黄芪皂苷II和0. 97% (重量)的黄芪皂苷III。本发明还提供了上述黄芪皂苷在制备舒张血管的药物中的用途。其中，舒张血管 的药物优选为治疗和/或预防心血管疾病的药物，例如治疗和/或预防高血压和/或心绞 痛的药物。优选地，舒张血管的药物能够激活血管内皮细胞NO-cGMP系统；舒张血管的药物 能够抑制血管平滑肌细胞外钙内流；或者舒张血管的药物能够实现K。a和Katp通道的开放。本发明还提供了一种用于舒张血管的药物组合物，其包含上述黄芪皂苷，以及药 学上可接受的载体和/或赋形剂。本发明还提供了一种用于治疗高血压的药物组合物，其包含上述黄芪皂苷，以及 药学上可接受的载体和/或赋形剂。上述药物组合物优选为口服制剂。本发明以已知的具有舒张血管作用的传统中药黄芪为研究对象，对其活性成分进 行了系统的筛选和追踪。本发明的研究结果表明以黄芪为原药材经过提取和纯化制得的 黄芪皂苷具有更强的舒张血管活性，是黄芪中最重要的具有舒张血管作用的有效成分。鉴 于此，本发明进一步研究并探讨了黄芪皂苷舒张血管的作用机制以及其在制备用于舒张血 管等的药物中的应用。迄今为止，有关黄芪皂苷对血管的药理作用及其作用机制尚未见报 道。为了观察黄芪皂苷对血管的调节作用，本发明采用大鼠离体胸主动脉环灌流模 型，以排除活体实验中循环激素、神经递质、内皮源性血管活性因子等对其扩张血管作用的 影响。结果发现，黄芪皂苷对基础状态的血管环张力无作用，而对于苯肾上腺素(ΡΕ) (ΙμΜ) 和KCl(35，60mM)预收缩的内皮完整及内皮去除的大鼠胸主动脉血管环均具有显著的舒张 作用，且对于内皮完整血管环的作用强于内皮去除的血管环。表明黄芪皂苷舒张血管的作 用是部分依赖于内皮的，可能与内皮源性的血管舒张因子，如一氧化氮、前列环素等有关; 除此而外，还可能是直接作用于血管平滑肌而导致血管舒张。上述研究结果表明血管内皮 细胞NO-cGMP系统的激活、血管平滑肌细胞外钙内流的抑制，以及Kca和Katp通道的开放共 同参与了黄芪总皂苷的血管舒张作用，基于黄芪总皂苷的上述药理作用特点，其可松弛平 滑肌，特别是血管平滑肌，适用于降低血压、抗心绞痛等血管性疾病。综上所述，本发明成功地开发了传统中药黄芪中的黄芪皂苷类成分在制备舒张血 管药物中的新用途，阐明了血管内皮细胞NO-cGMP系统的激活、血管平滑肌细胞外钙内流 的抑制，以及K。a和Katp通道的开放是黄芪皂苷舒张血管的重要作用机理之一，从而利用黄 芪皂苷的直接舒张血管的作用，将其用于各类相关血管性疾病的治疗之中。相对于黄芪而 言，黄芪皂苷的疗效更强，而且更有利于各类心血管疾病的临床治疗。
图1显示了黄芪皂苷(EAM)对KCl预收缩的内皮完整(E+)的大鼠离体胸主动脉 环张力的影响；图2显示了黄芪皂苷(EAM)对KCl预收缩的内皮去除(E_)的大鼠离体胸主动脉 环张力的影响；图3显示了黄芪皂苷(EAM)对PE预收缩的内皮完整的大鼠离体胸主动脉环张力 的影响；图4显示了黄芪皂苷(EAM)对PE预收缩的内皮去除的大鼠离体胸主动脉环张力 的影响；图5显示了 N-硝基左旋精氨酸(L-NNA)、亚甲兰(Methylene blue)、吲哚美辛 (Indomethacin)预处理后对黄芪皂苷(EAM)使PE预收缩的内皮完整的大鼠离体胸主动脉 环产生的舒张效应的影响；图 6 显示了 四乙胺(tetraethylammonium，TEA)、格列本脲(Glibenclamide)预处 理后对黄芪皂苷(EAM)使PE预收缩的内皮去除的大鼠离体胸主动脉环产生的舒张效应的 影响；图7显示了无钙液处理后黄芪皂苷(EAM)对使PE预收缩的内皮去除的大鼠离体 胸主动脉环产生的舒张效应的影响；图8显示了无钙液处理后对黄芪皂苷(EAM)使KCl预收缩的内皮去除的大鼠离体 胸主动脉环产生的舒张效应的影响。
具体实施例方式下面结合具体实施例详细描述本发明，但这些实施例仅是示例性的，并不对本发 明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下 可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的 保护范围内。实施例1 黄芪皂苷的制备黄芪饮片加10倍重量去离子水加热煎煮提取3小时，过滤，滤液备用；药渣再煎煮 提取2次，其加水重量分别为黄芪饮片重量的8倍和6倍，提取时间分别为2. 5小时和1. 5 小时，过滤，合并滤液，加乙醇调节至乙醇体积占溶液体积的80%进行醇沉，静置12小时。 将上清液减压回收乙醇至无醇味，所得浓缩液加0. 5倍重量的水稀释，过滤，滤液徐徐注入 已处理好的HPD600型大孔吸附树脂柱内，先用去离子水洗脱，再用2倍柱体积量的20% (体积/体积)乙醇水溶液洗脱，弃去20% (体积/体积)乙醇水溶液的洗脱液，再用4倍 重量的70% (体积/体积)乙醇水溶液洗脱，收集70% (体积/体积)乙醇水溶液的洗脱 液，回收乙醇至无醇味，真空干燥(60°C )，粉碎，即得黄芪皂苷提取物。上述黄芪皂苷提取物中4个主要活性成分的含量测定方法如下采用高效液相色谱法进行测定。混合对照品溶液的制备精确称取4种对照品适量，甲醇溶解，定容至5ml的容量 瓶中。各对照品的浓度分别是黄芪甲苷0.4mg/ml，黄芪皂苷I 0. 25mg/ml，黄芪皂苷II 0. 3mg/ml，黄芪皂苷 III 0. 27mg/ml。
供试品溶液的制备取上述黄芪总皂苷提取物100g，以流动相乙腈_水(体积比 为1 4)溶解，定容至IOml的容量瓶中，配置浓度为10mg/ml的供试品溶液，用0.45μπι 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动 相Α，以水为流动相B，按表1中的洗脱条件进行梯度洗脱；流速为1. Oml/min ；采用蒸发光 检测器(ELSD)检测，柱温为30°C。表1 HPLC指纹图谱检测的流动相梯度条件
权利要求
1.一种黄芪皂苷的制备方法，其包括以下步骤(1)黄芪加水煎煮提取，过滤，浓缩滤液；(2)加入乙醇进行沉淀，静置；(3)上清液回收乙醇后加水稀释，注入大孔吸附树脂柱，依次用水、20%(体积/体积) 乙醇水溶液和70% (体积/体积)乙醇水溶液洗脱；(4)除去70%(体积/体积)乙醇水溶液的洗脱液中的乙醇，干燥即得。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述煎煮提取的次数 为3 5次。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述加水的重量 与黄芪的重量之比为6 10 1。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述提 取时间为1. 5 3小时。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，在加入 乙醇的溶液中，乙醇体积占溶液总体积的80%。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述大 孔吸附树脂为非极性或弱极性大孔树脂，优选为HPD600型大孔吸附树脂。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的制备方法制备的黄芪皂苷。
8.根据权利要求7所述的黄芪皂苷，其特征在于，按照黄芪皂苷的总重量计，所述黄芪 皂苷包含13.61% (重量)的黄芪甲苷、0.8% (重量)的黄芪皂苷Ι、3·71% (重量)的黄 芪皂苷II和0. 97% (重量)的黄芪皂苷III。
9.根据权利要求7或8所述的黄芪皂苷在制备舒张血管的药物中的用途。
10.根据权利要求9所述的用途，所述舒张血管的药物为治疗和/或预防心血管疾病的 药物，例如治疗和/或预防高血压和/或心绞痛的药物。
11.根据权利要求9或10所述的用途，所述舒张血管的药物能够激活血管内皮细胞 NO-cGMP 系统。
12.根据权利要求9或10所述的用途，所述舒张血管的药物能够抑制血管平滑肌细胞 外钙内流。
13.根据权利要求9或10所述的用途，所述舒张血管的药物能够实现Kca和Katp通道的 开放。
14.一种用于舒张血管的药物组合物，其包含根据权利要求7或8所述的黄芪皂苷，以 及药学上可接受的载体和/或赋形剂。
15.一种用于治疗高血压的药物组合物，其包含根据权利要求7或8所述的黄芪皂苷， 以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。
16.根据权利要求14或15所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为口服制剂。
全文摘要
本发明提供一种黄芪皂苷的制备方法及其用途，该黄芪皂苷的制备方法包括(1)黄芪加水煎煮提取，过滤，浓缩滤液；(2)加入乙醇进行沉淀，静置；(3)上清液回收乙醇后加水稀释，注入大孔吸附树脂柱，依次用水、20％(体积/体积)乙醇水溶液和70％(体积/体积)乙醇水溶液洗脱；(4)除去70％(体积/体积)乙醇水溶液的洗脱液中的乙醇，干燥即得。研究表明上述黄芪皂苷能够激活血管内皮细胞NO-cGMP系统，抑制血管平滑肌细胞外钙内流，以及实现KCa和KATP通道的开放，进而可以松弛平滑肌，特别是血管平滑肌，因此具有显著的血管舒张作用，适用于降低血压、抗心绞痛等心血管疾病的预防和治疗。
文档编号A61P9/12GK102101880SQ20091024252
公开日2011年6月22日 申请日期2009年12月17日 优先权日2009年12月17日
发明者屠鹏飞, 张可, 马旭, 马治中 申请人:北京大学