黄连提取物及其治疗呼吸道疾病的新用途的制作方法

专利名称：黄连提取物及其治疗呼吸道疾病的新用途的制作方法
技术领域：
本发明提供一种用于祛痰、止咳和/或具有抗组胺活性的黄连(Coptidis rhizoma)提取物或黄连和常春藤(ivy)的组合提取物。具体地，本发明提供一种含有黄连 提取物或黄连和常春藤叶的组合提取物作为活性成分的止咳和/或祛痰组合物并且/或者 用于预防和治疗呼吸道疾病的组合物，及其制备方法。
背景技术：
已知咳嗽和痰是由物理或化学因素——例如冷空气，外来物质包括致病微生物、 空气污染物、变应原等——引起的，并且可根据原因分类如下第一，如果喉(arynx)、气管、支气管、咽、鼻旁窦和膈等中的咳嗽受体被物理化学 因素刺激，所述刺激将被传至脑髓质的咳嗽中心，由此产生咳嗽反射。第二，如果副交感神经系统被物理或化学因素激活，支气管的平滑肌收缩，由此可 能出现诸如支气管痉挛和支气管收缩的症状。第三，由物理或化学因素将炎性介质等从肥大细胞中释放。因此，去除上述因素可抑制咳嗽和痰。但是，至今为止开发的大部分药物主要是合 成的化学物质，因此可引起各种副作用。开发的用于补偿这些缺陷的天然药物不能表现出 对咳嗽和痰很好的抑制作用。同时，哮喘——一种代表性呼吸道疾病——反复而间歇性地表现为诸如呼吸困 难、咳嗽和喘鸣性呼吸(stridulous breathing)等的症状。哮喘可分作心源性哮喘和支气 管哮喘。尽管哮喘的发生率根据国家、人种和年龄等而变化，报道称2007年在英国7. 9%的 成人、13. 7%的儿童和9. 4%的老人患有哮喘。在韩国，由于生活方式的改变、环境污染和压 力增大等原因，哮喘的发生率已经升高。近来，由于环境污染变得严重，哮喘的严重程度已 最大化，发生哮喘的年龄变小并且症状持续时间变长。呼吸道阻塞是哮喘的特征，其通过三步发生。具体地，支气管的平滑肌收缩，肺部 粘膜变厚，支气管和细支气管中的粘液聚积，从而成阻塞呼吸道。在这几步中，只有支气管 平滑肌的收缩可容易地恢复。在外因性(过敏性)哮喘的发生机制中，IgE非常重要，IgG部分地与之相关。IgE 释放激活肥大细胞而引起超敏反应的介质，例如组胺、SRS-A、ECF-A、NCF、PAF、激肽(Kinin) 和Pk等。内因性(非过敏性)哮喘——尽管其机制还不清楚——看起来是由自主神经 介导的。对内因性哮喘患者的胆碱刺激引起一种介质(如组胺)直接通过终末器官(end organs)从肥大细胞中分离，杯状细胞分泌增加，肺部血管扩张，气管、支气管和细支气管收 缩，从而增加支气管痉挛和粘液分泌。尚未开发出根本性治疗哮喘的方法，但研制了预防痉挛和并发症的各种方法和药 物；然而，它们仅仅是改善症状而不能从根本上治疗疾病，而且它们可能引起严重的副作用。为了克服已有药物的局限性，需要开发能够从根本上治疗病因并有效地改善疾病症状的新药。但是，呼吸道疾病涉及从中分离的各种白细胞、细胞因子和炎性介质，因此仅 凭单一组分化合物很难实现有效治疗。因此，具有各种成分和作用机制的天然提取物可成 为有效的药物，因此，需要开发一种基于天然提取物的药物。

发明内容
技术问题对止咳药和祛痰药的研究结果使本发明人发现了黄连提取物或黄连和常春藤叶 的组合提取物有极好的止咳、祛痰和抗组胺活性，从而完成本发明。一个实施方案提供了黄连提取物或黄连和常春藤叶的组合提取物用于祛痰、止咳 并且/或者治疗和/或预防呼吸道疾病的新用途。另一个实施方案提供了含有黄连提取物或黄连和常春藤叶的组合提取物作为活 性成分的止咳或祛痰组合物并且/或者用于预防和/或治疗呼吸道疾病的组合物，和制备 所述组合物的方法。另一个实施方案还提供了用来止咳、祛痰并且/或者治疗和/或预防呼吸道疾病 的方法，包括将含有黄连提取物或黄连和常春藤叶的组合提取物作为活性成分的组合物给 予需要止咳、祛痰并且/或者治疗和/或预防呼吸道疾病的患者的步骤。技术方案一个实施方案涉及黄连提取物或黄连和常春藤叶的组合提取物用于祛痰、止咳并 且/或者治疗和/或预防呼吸道疾病的新用途。另一个实施方案涉及含有黄连提取物或黄连和常春藤叶的组合提取物作为活性 成分的止咳或祛痰组合物并且/或者用于预防和/或治疗呼吸道疾病的组合物。黄连是一种属于毛茛科(Rarumculaceae family)的多年生草本植物，主要用其 根茎部分。已知黄连包含生物碱黄连素(berberine)、非洲防己碱(palmatine)、黄连碱 (coptisine)、5-羟(基)小檗碱(berberastine)和兰花碱(magnoflorine)等作为主要药 物成分。但是，尚未研究黄连提取物和含有黄连提取物的组合物的止咳、祛痰和抗组胺活 性。本发明人发现黄连的提取物有止咳、祛痰和抗组胺活性，并且对治疗和/或预防 呼吸道疾病有效，从而完成本发明。常春藤属于五加科(Araliaceae family)，其含义是属于常春藤属(Hedera spp.) 的植物。例如，它可包括但不局限于阿尔及利亚常春藤(Hedera algeriensis)、亚速尔群岛 胃(Hedera azorica)、 β禾(Hedera canariensis)(Hedera colchica)、洋常春藤(Hedera helix)、大西洋常春藤(Hedera hibernica)、马德拉岛常春 藤(Hedera maderensis)、尼泊尔常春藤(Hederanepalensis)、Hedera pastuchowii 禾口菱 叶常春藤(Hedera rhombea)等。干燥常春藤叶的提取物的止咳和祛痰作用已被公布；但是 仍无报道称当常春藤叶与其他草药提取物一起施用时可获得显著的协同用作，而同时无副 作用。本发明人发现与每种提取物单独使用相比，黄连提取物和常春藤提取物的组合显 著地增强止咳效果、祛痰效果、抗组胺效果、抑制支气管收缩的效果、抑制气道超敏的效果、
5抑制肺组织支气管阻塞的效果和抑制炎症细胞浸润的效果。此外，在本发明中，提供了药理 活性表现出最佳协同效果的黄连提取物和常春藤叶提取物的最佳混合比例。为了通过混合黄连提取物和常春藤叶提取物来使止咳、祛痰、抗组胺、抑制支气 管收缩、抑制气道超敏、抑制肺组织的支气管阻塞和抑制炎症细胞浸润的活性协同效果最 大化，常春藤叶提取物和黄连提取物的混合比例基于固体内容物(solid content)重量计 (常春藤叶提取物重量黄连提取物重量)为0.1 1至10 1，优选0.2 1至5 1， 更优选1 1至4 1，更优选1.5 1至3. 5 1，最优选2. 5 1至3. 5 1。术语“固 体内容物”是指用来制备提取物的溶剂被移除后的那些物质。本文中的术语“提取物”是指黄连和/或常春藤叶的粗提取物并且/或者所述粗 提取物的特定溶剂-可溶提取物(solvent-soluble extract)或级分，其可以是以溶液、浓 缩物和粉末的形式。术语“黄连和常春藤叶的组合提取物”既指分别通过提取常春藤叶和 提取黄连得到的常春藤叶提取物和黄连提取物的混合物，又指通过提取常春藤叶和黄连的 混合物而得到的提取物。所述黄连提取物可以是通过用一种或多种选自水、具有1-4个碳原子的直链或支 链醇的溶剂提取黄连、特别是黄连的根茎部分而得到的粗提取物，或者是通过所述向粗提 取物加入一种或多种溶剂而得到的一种溶剂可溶的提取物，其中所述溶剂选自具有1-6个 碳原子的直连或支链醇的水溶液，优选丙醇水溶液、异丙醇水溶液和水饱和丁醇。所述常春藤叶提取物可以是通过用一种或多种选自水、具有1-4个碳原子的直链 或支链醇的溶剂提取干燥常春藤叶而得到的一种粗提取物，或者是通过向所述粗提取物加 入一种或多种溶剂而得到的一种溶剂可溶的提取物，其中所述溶剂选自具有1-6个碳原子 的直连或支链醇的水溶液，优选丙醇水溶液、异丙醇水溶液和水饱和丁醇。用于制备常春藤 叶提取物的常春藤可以是常春藤属，例如，其可以是一种或多种选自以下的常春藤阿尔及 利亚常春藤、亚速尔群岛常春藤、坎那利岛常春藤、波斯常春藤、洋常春藤、大西洋常春藤、 马德拉岛常春藤、尼泊尔常春藤、Hedera pastuchowii和菱叶常春藤等，但不限于此。在一个优选实施方案中，用于制备黄连或常春藤叶粗提取物的溶剂可以是一种或 多种选自以下物质的溶剂水；10至70% (ν/ν)、优选20至60% (ν/ν)、更优选25至55% (ν/ν)的具有1-4个碳原子的直链或支链醇，优选甲醇水溶液和乙醇水溶液，还有水饱和丁用于制备黄连或常春藤叶的溶剂可溶的提取物的溶剂可以是一种或多种选自以 下物质的溶剂10至70% (ν/ν)、优选20至60% (ν/ν)、更优选25至55% (ν/ν)的具有 1-6个碳原子的直链或支链醇，优选丙醇水溶液和异丙醇水溶液，还有水饱和丁醇。黄连和常春藤叶的组合提取物可以是黄连提取物和常春藤叶提取物的混合物，或 者是黄连和常春藤叶混合物的提取物。例如，所述组合提取物可以是通过将黄连和常春藤 叶混合，然后用一种或多种选自水和具有1-4个碳原子的直链或支链醇的溶剂提取混合物 而得到的一种粗提取物；或者是通过向所述粗提取物加入一种或多种选自具有1-6个碳原 子的低级醇的水溶液的溶剂(优选丙醇水溶液和异丙醇水溶液还有水饱和丁醇)而得到的 一种溶剂可溶的提取物。优选地，用于制备黄连和常春藤叶的粗提取物的溶剂可以是水；10至70% (ν/ν)、 优选20至60% (ν/ν)、更优选约25至55% (ν/ν)的甲醇水溶液或乙醇水溶液，或水饱和丁
6醇。用于制备所述溶剂可溶的提取物的溶剂可以是一种或多种选自以下物质的溶剂10至 70% (ν/ν)、优选20至60% (ν/ν)、更优选约25至55% (ν/ν)的具有1_6个碳原子的低级 醇的水溶液，优选丙醇水溶液和异丙醇水溶液，还有水饱和丁醇。“级分”可以是通过用二氯甲烷和甲醇(30 1至7 1 (ν/ν))的混合溶剂对所述 溶剂可溶的提取物进行硅胶柱层析而得到。所述黄连提取物、溶剂可溶提取物或级分包含黄连素、非洲防己碱、黄连碱、非洲 防己胺(columbamine)和药根碱(jatrorrhizine)，优选黄连素(0. 5至47. 0重量份)非 洲防己碱(0. 2至21. 4重量份)黄连碱(0. 1至18. 0重量份)非洲防己胺(0. 1至3. 2重 量份)药根碱(0. 1至2. 6重量份)。在另一方面，本发明涉及一种制备有止咳、祛痰、抗组胺、抑制支气管收缩、抑制气 道超敏、抑制肺组织的支气管阻塞和抑制炎症细胞浸润活性的黄连和常春藤叶的组合提取 物的方法。所述方法包括用一种或多种溶剂提取黄连、优选黄连的根茎部分的步骤，所述溶 剂选自水和有1-4个碳原子的直链或支链醇，例如水，10至70% (ν/ν)、优选20至60% (ν/ ν)、更优选约25至55% (ν/ν)的甲醇水溶液或乙醇水溶液，或水饱和丁醇。所述制备黄连和常春藤叶的组合提取物的方法可包括以下步骤用一种或多种溶剂提取干燥的常春藤叶来获取常春藤叶提取物，其中所述溶剂选 自水和有1-4个碳原子的直链或支链醇，例如水，10至70% (ν/ν)、优选20至60% (ν/ν)、 更优选25至55% (ν/ν)的甲醇水溶液或乙醇水溶液，或水饱和丁醇；用一种或多种溶剂提取黄连、优选黄连的根茎部分来获取黄连提取物，其中所述 溶剂选自水和有1-4个碳原子的直链或支链醇，例如水，10至70% (ν/ν)、优选20至60% (ν/ν)、更优选25至55% (ν/ν)的甲醇水溶液或乙醇水溶液，或水饱和丁醇；和将所得常春藤叶提取物和黄连提取物以基于固体内容物计以0.1 1至 10 1(常春藤叶提取物的重量黄连提取物的重量)、优选0.2 1至5 1、更优选1 1 至4 1、更优选1.5 1至3. 5 1、最优选2. 5 1至3. 5 1的比例混合。制备常春藤叶提取物的步骤和制备黄连提取物的步骤还可以包括向所得提取物 加入一种或多种选自有1-6个碳原子的直链或支链醇的溶剂(优选水饱和丁醇、丙醇和异 丙醇)来获取溶剂可溶的提取物的步骤。将详细解释制备常春藤叶提取物的步骤切下常春藤叶并用水清洗来除去杂质， 将叶片干燥，然后用一种或多种选自水和有1-4个碳原子的直链或支链醇(例如水、10至 70% (ν/ν)、优选20至60% (ν/ν)、更优选25至55% (ν/ν)的甲醇水溶液或乙醇水溶液， 或水饱和丁醇)的溶剂以约5至20倍、优选7至15倍于所述干燥常春藤叶体积的量对叶 片进行回流提取。提取温度是40至110°C，优选55至90°C。提取后，将所得提取物过滤，收集滤液，然后用一种或多种选自水和有1-4个碳原 子的直链或支链醇(例如水，10至70% (ν/ν)、优选20至60% (ν/ν)、更优选25至55% (ν/ν)的甲醇水溶液或乙醇水溶液，或水饱和丁醇)的溶剂以约5至15倍，优选8至12倍 的体积量回流提取所得残渣。提取温度是——但并不具体地限定于——40至110°C，优选 55至90°C。提取后，将所得提取物过滤，将滤液与先前获得的滤液合并，在真空下将其浓缩 来制备常春藤叶提取物。两次提取和每次提取后合并获取的滤液可提高提取效率，但是提取次数不局限于此。将详细解释制备黄连提取物的步骤将黄连的根茎部分切成小块，然后以约3至 20倍、优选5至15倍于原材料体积的量向其加入一种或多种选自水和有1-4个碳原子的 直链或支链醇的溶剂(例如水，10至70% (ν/ν)、优选20至60% (ν/ν)、更优选25至55% (ν/ν)的甲醇水溶液或乙醇水溶液，或水饱和丁醇)来提取0. 5至20小时，优选1至10小 时，更优选2至5小时。提取温度是——但不局限于——40至110°C，优选55至90°C。优 选地，将所得提取物过滤，收集滤液，以约5至15倍、优选8至12倍体积的量向残渣加入一 种或多种选自水和有1-4个碳原子的直链或支链醇(例如水，10至70% (ν/ν)、优选20至 60% (ν/ν)、更优选25至55% (ν/ν)的甲醇水溶液或乙醇水溶液，或水饱和丁醇)的溶剂， 然后提高温度再提取1至10小时、优选2至5小时，然后将所得提取物过滤并在真空下浓 缩以获取黄连提取物。将所得提取物和先前得到的滤液合并可提高提取效率。两次提取和将每次提取后获得的滤液合并可提高提取效率，但提取次数不局限于 此。如果用来制备黄连提取物和/或常春藤提取物的溶剂的量太少，会很难搅拌并且 提取物的溶解性降低导致提取效率下降。如果用来制备黄连提取物和/或常春藤提取物的 溶剂的量太多，用于接下来纯化步骤的低级醇的量会增加而引起经济问题和处理问题。因 此，优选在上述范围内调整溶剂的量。根据本发明的一个优选实施方案，再提取可在初次提取后进行，这可以防止由仅 进行初次提取而带来的提取效率下降，因为在大量制取草药提取物的情况下，即使进行有 效地过滤，由于草药提取物的量很大从而产生损失，因此当仅进行初次提取时提取效率会 降低。因此，根据本发明的一个优选实施方案，初次提取后可进行再提取。此外，在每个步 骤中检测提取效率发现总提取量的约80%至90%是通过二次提取得到的，从而表明两步 提取与多于三次提取的多次提取相比可有显著的经济效益。溶剂可溶的提取物可通过将所获粗提取物悬浮于2至10倍、优选3至7倍体积的 水中，并且向其中以0. 5至3倍、优选2倍当量于悬浮液的量分1次到5次，优选2到3次 加入一种或多种选自有1-6个碳原子的直链或支链醇的水溶液的溶剂(优选丙醇水溶液或 异丙醇水溶液，还有水饱和丁醇)来提取溶剂可溶层，然后在真空下浓缩。使用低级醇的溶剂可溶的提取步骤是为了去除不必要的杂质例如蛋白质、多糖和 脂肪酸等。因此如果使用的低级醇的量比滤液少，不必要的成分例如脂肪酸就形成微粒，从 而使分层不光滑并且减少活性成分的提取量。因此，优选在上述范围内调整低级醇的量。将分层后获得的低级醇级分于50至60°C在真空下浓缩以除去样本中残留的溶 剂。为了控制所得浓缩物中残留的低级醇的含量以便于使其适用作药物原材料，可所 得浓缩物与基于所得浓缩物的总量计10至30倍、优选15至25倍、更优选约20倍重量的 水共沸浓缩1到5次，优选2到3次，并且向其加入等量水对其进行均勻悬浮，然后将所得 悬浮液冻干来制备粉末形式的黄连提取物和/或常春藤叶提取物。优选地，为了均勻地合并组合提取物中的每种提取物，向所得组合提取物加入2 至3倍重量的水，然后于50至60°C在真空下浓缩，向所得浓缩物中加入等量水来对其进行 均勻悬浮，然后将所得悬浮液冻干来制备粉末形式的组合物。
根据另一个实施方案，制备黄连和常春藤叶的组合提取物的方法可包括以下步 骤将干燥的常春藤叶和黄连(优选黄连的根茎部分)以1 4至7 1(常春藤叶 的重量黄连的重量)、优选1 1至6 1、更优选2 1至5 1的重量比混合来制备常 春藤叶和黄连的混合物；和用一种或多种选自水和有1-4个碳原子的直链或支链醇的溶剂(例如水，10至 70% (ν/ν)、优选20至60% (ν/ν)、更优选约25至55% (ν/ν)的甲醇水溶液或乙醇水溶液， 或水饱和丁醇)提取所得混合物。上述方法还可包括在制取常春藤叶和黄连的混合物的提取物步骤后加入一种或 多种溶剂来获取溶剂可溶的提取物的步骤，其中所述溶剂选自有1-6个碳原子的直链或支 链低级醇，优选丙醇和异丙醇和水饱和丁醇。制备粗提取物和溶剂可溶的提取物步骤的细节和在制备每种草药提取物中描述
的一样。作为本发明中使用的提取方法，可使用任何常规使用的方法。例如，可通过在室温 下提取、热水提取、超声波提取、回流提取或冷却提取来进行所述提取，但不限于此。在另一方面，本发明提供一种包含黄连提取物或黄连和常春藤叶的组合提取物作 为一种活性成分的止咳组合物。另一方面，本发明还提供一种包含黄连提取物或黄连和常 春藤叶的组合提取物作为一种活性成分的祛痰组合物。在另一方面，本发明还提供一种包 含黄连提取物或黄连和常春藤叶的组合提取物作为一种活性成分的用于预防和/或治疗 呼吸道疾病的组合物。在另一方面，本发明提供一种止咳的方法，包含向患者施用治疗有效量的黄连提 取物或黄连和常春藤叶的组合提取物这一步骤。在另一方面，本发明还提供一种祛痰的方 法，包括向患者施用治疗有效量的黄连提取物或黄连和常春藤叶的组合提取物这一步骤。 在另一方面，本发明还提供一种预防和/或治疗呼吸道疾病的方法，包括向患者施用治疗 有效量的黄连提取物或黄连和常春藤叶的组合提取物这一步骤。所述患者可以是需要止 咳、祛痰或治疗和/或预防呼吸道疾病的哺乳动物，优选人类。所述治疗有效量是为得到所需疗效确定的剂量。其可根据年龄、体重、性别、剂型、 健康状况和疾病严重程度而不同，其还可根据医师或药剂师的判断而不同。例如，每日剂量 基于活性成分含量计可以是0. 5至500mg/kg，优选1至300mg/kg，但不局限于此。所述剂 量可一日一次或一日多次地施用。所述剂量说明一般情况，其可以依个别情况而更高或更 低。如果含有本发明组合提取物的组合物的每日剂量比上述范围低，不能获得显著的效果； 而如果其超出了上述范围，经济功效下降，并且剂量超出了常规剂量因而引起不良副作用。 因此，每日剂量优选在上述范围内。所述黄连提取物或黄连和常春藤叶的组合提取物表现出止咳、祛痰、抗组胺、抑制 支气管收缩、抑制气道超敏、抑制肺组织支气管阻塞和抑制炎症细胞浸润活性，因此它们可 用于治疗、预防或减轻相关的呼吸道疾病。并且，优选所述黄连和常春藤叶的组合提取物， 因为与每种单独提取物相比可获得协同作用。所述呼吸道疾病可以是有关咳嗽和痰的全部疾病，例如选自普通咳嗽或痰；带 有咳嗽和痰的肺气肿(pulmonary emphysema)；支气管炎例如慢性支气管炎、急性支气管炎、卡他性支气管炎(catarrhalbronchitis)、阻塞性支气管疾病或炎性支气管疾病 (obstructive orinflammatory bronchial disease)等；哮喘例如支气管哮喘、变应性 气喘(atopic asthma)、IgE 介导的支气管变应性哮喘(atopic bronchialIgE-mediated asthma)、非变应性哮喘(non-atopic asthma)、过敏性哮喘(allergic asthma)和非过敏性 哮喘(non-allergic asthma)等；慢性或急性支气管收缩；喘鸣性婴儿综合征(stridulus infant syndrome)；个曼性阻塞性月市病(chronic obstructive pulmonary disease)；支 气管腺瘤(bronchial adenoma)；孤立性月市结节(solitary pulmonarynodule)；肺结核 (pulmonary tuberculosis)；月农胸(pyothorax)；月市月农月中(pulmonary abscess)；普通感冒； 流行性感冒和肺组织细胞增多病(pulmonary histiocytosis)。可以以多种途径将本发明的组合物施用于哺乳动物，包括人。本发明的组合物可 以通过通常使用的方法施用，例如，其可通过口服、直肠内给药或通过静脉、肌肉、皮下、子 宫内或脑室内注射给药。本发明的组合物可被配制为口服剂型例如粉剂、颗粒剂、片剂、胶 囊剂、悬浮剂、乳剂、糖浆、气雾剂等，或肠胃外剂型例如经皮给药剂(transdermal agent)、 栓剂和灭菌的注射溶液等。本发明的组合物还可以包括制药学适用且生理可耐受的佐剂例如载体、赋形剂和 稀释剂。本发明的组合物可单独施用；但是，一般考虑到给药路线和标准药学实践 (standard pharmaceutical practice)，所述组合物可与选择的药用载体一同施用。例如， 可以以口服、直肠内或舌下方式将所述组合物以含有乳糖或淀粉的片剂形式、单独地以胶 囊剂的形式或含有赋形剂的胶囊剂的形式、含有调味剂或着色剂的酏剂的形式或悬浮剂的 形式给药。液体剂型可与药用添加剂例如悬浮剂(例如甲基纤维素；半合成的甘油酯例如 witepsol ；或甘油酯混合物例如杏仁油和PEG-6酯的混合物，或PEG-8和辛酸甘油酯/癸酸 甘油酯的混合物)一起配制。在另一方面，本发明提供了一种含有黄连提取物或黄连和常春藤叶的组合物提取 物的用于止咳、祛痰或预防或改善呼吸道疾病例如哮喘的健康功能性食物。所述健康功能 性食物可以是食物、饮料或食品添加剂等。在健康功能性食物中作为活性成分的提取物的含量可以根据食物形式和所需用 途等适当改变，没有特定的限制。例如，其可以以总食物的0.01至15重量％的量加入，对 于健康饮料组合物，其可以基于IOOml组合物计以0. 02至10g、优选0. 3至Ig的量加入。在将本发明的草药组合物施用于人体的情况下，考虑到天然提取物的一般性质， 认为与其他合成药物相比不必担心副作用，并且实际毒性试验结果证明其对活体没有影 响。


图1在小鼠模型中通过酚红排泌法(phenol red secretion method)示出了黄连 提取物及其活性级分和代表成分的祛痰活性。图2示出了在实施例2中制备的提取物的祛痰活性，示出了通过用小鼠进行酚红 排泌法所测量的结果。图3示出了在实施例2中制备的提取物的止咳活性，示出了用豚鼠进行止咳试验
10的结果。图4示出了在实施例2中制备的提取物的抑制支气管收缩活性，示出了使用豚鼠 的离体支气管时对收缩诱导物(constriction inducer)的松弛程度(％ )。图5示出了在实施例2-7的提取物对肺组织中支气管阻塞的作用，以及对卵白蛋 白致敏(OVA-sensitized)的试验小鼠的肺组织中炎症细胞浸润的抑制活性((a)正常组， (b)诱发组，(c)阳性对照，(d)实施例2-7)。
具体实施例方式实施例将参照以下实施例和实验详细地解释本发明。但是，以下实施例和实验只是示例性地说明本发明，本发明的范围并不限于此。实施例1.制备黄连提取物1-1.用水制备黄连提取物1-1-1.制备黄连耜提取物(CR-GA)用水清洗从京东市场(Kyungdong market)购买的黄连以除去杂质，用1. 5L水 在80°C下对250g干燥黄连进行两次热水提取，每次持续3小时，然后对所得提取物进行 过滤并在真空下浓缩得到62. 5g粗提取物(相对于原料草药的产率为25% )，将其命名为 “CR-GA”，并用于下面的实施例1-2。1-1-2.制备黄连的溶剂可溶提取物(CR-GA-I)向实施例1-1-1获取的62. 5g CR-GA加入0. 5L水以使其悬浮，并向其中加入IL水 饱和丁醇以进行两次分层，然后只收集水饱和丁醇级分并将其在真空下浓缩直至干燥。当 大部分丁醇和水蒸发后，加入0.4L水对其进行共沸浓缩，重复两次。最后，加入0. IL蒸馏 水来悬浮所得浓缩物，然后冻干所得悬浮液得到19. 8g粉末形式的黄连提取物(相对于原 料草药的产率为7. 92% )，将其命名为“CR-GA-1”在以下实验中用作样本。1-2.用50% (ν/ν)乙醇制备黄连提取物1-2-1.制备粗黄连提取物(CR-GB)用水清洗从京东市场购买的黄连以除去杂质，用2.0L 50% (ν/ν)的乙醇水溶 液在80°C下对250g干燥黄连进行两次回流提取，每次持续3小时，然后将所得提取物过 滤并在真空下浓缩得到57. 5g粗提取物(相对于原料草药的产率为23% )，将其命名为 “CR-GB”，并用于以下实施例2-2。1-2-2.制备黄连的溶剂可溶提取物(CR-GB-I)向实施例1-2-1获取的57. 5g CR-GB中加入0. 3L水以使其悬浮，向其中加入0. 6L 水饱和丁醇以进行两次分层，然后只收集丁醇级分并将其在真空下浓缩直至干燥。当大部 分丁醇和水蒸发后，向其中加入0. 2L水来对其进行共沸浓缩，重复两次。最后加入0. 2L蒸 馏水来悬浮所得浓缩物，然后将所得悬浮液冻干得到31. Sg粉末形式的黄连提取物(相对 于原料草药的产率为12.7%)，将其并命为“0 -68-1”，并在以下实验中用作样本。1-3.用水饱和丁醇制备黄连提取物1-3-1.制备黄连提取物(CR-GC)用水清洗从京东市场购买的黄连以除去杂质，用2. 5L水饱和正丁醇在85°C下对250g干燥黄连进行两次回流提取，每次持续3小时，然后将所得提取物过滤并在真空下浓 缩。当大部分丁醇蒸发后，向其中加入0.2L水对其进行共沸浓缩，重复两次。最后向其中 加入0. 2L蒸馏水以使其悬浮，然后将所得悬浮液冻干得到32. 8g粉末形式的提取物(相对 于原料草药的产率为13. )，将其命名为“CR-GC”，并用于以下实验。1-4.分离黄连提取物用二氯甲烷和甲醇(30 1-7 1 (ν/ν))的混合溶剂通过硅胶柱色谱将实施例 1-2-2中获取的20g CR-GB-I分为5个级分。Fr. 1为0. 8g(在下文中称作“Fr. 1”)，Fr. 2 为2. 6g (在下文中称作“Fr. 2”)，Fr. 3为5. 5g (在下文中称作“Fr. 3”)，Fr. 4为2. 8g (在 下文中称作“Fr. 4”)，Fr. 5为6. 5g(在下文中称作“Fr. 5”)，其在以下实验中均用为样本。实施例2制备黄连和常春藤叶的组合提取物制备常春藤叶提取物用水清洗常春藤(洋常春藤(Hedera helix))叶以除去杂质，并将其完全干燥。将 3L 30% (ν/ν)乙醇水溶液加入到250g所制备的常春藤叶中，并回流提取6小时，然后将所 得提取物过滤，收集滤液。将2.5L 30% (ν/ν)乙醇水溶液加入到残渣中，在80°C下回流提 取3小时，然后将所得滤液与先前所得滤液合并，在真空下浓缩。当大部分溶剂蒸发后，加 入0.2L水对其进行共沸浓缩，重复两次。然后加入等量水将其均勻悬浮，然后将所得悬浮 液冻干得到42. 4g粉末形式的常春藤叶提取物。所得常春藤叶提取物被用来制备下面的实 施例2-1至2-11的组合提取物。制备黄连提取物用水清黄连以除去杂质，并将其完全干燥。将2. OL 50% (ν/ν)乙醇水溶液加入到 250g所制备的黄连中，并在80°C下回流提取3小时。然后将所得提取物过滤并在真空下浓 缩得到57. 5g粗提取物。向其中加入0. 3L水将其悬浮，然后加入0. 6L水饱和丁醇以进行 两次分层。然后，只收集丁醇级分并在真空下将其浓缩直至干燥。当大部分丁醇和水蒸发 后，加入0.2L水对其进行共沸浓缩，重复两次。最后，向其中加入等量水将其悬浮，将所得 悬浮液冻干得到31. 8g黄连，所得黄连在下面的实施例2-1至2-11中被用来制备组合提取 物。2-1.制备组合提取物(0. 2 1)将以上制备的常春藤叶提取物和黄连提取物以重量比例0.2 1(常春藤叶提取 物的重量黄连提取物的重量)混合。为了均勻混合，向合并的提取物中加入约2至3倍重 量的水，然后将其于50-60°C在真空下浓缩。然后，向所得浓缩物中再次加入等量水对其进 行均勻悬浮，将所得悬浮液冻干来制备粉末形式的组合提取物。2-2.制备组合提取物(0. 4 1)用与上述制备实施例1相同的方法制备组合提取物，除了将所制备的常春藤叶提 取物和黄连提取物的比例改变为0.4 1(常春藤叶提取物的重量黄连提取物的重量)。2-3.制备组合提取物(1:1)用与上述制备实施例1相同的方法制备组合提取物，除了将所制备的常春藤叶提 取物和黄连提取物的比例改变为1 1(常春藤叶提取物的重量黄连提取物的重量)。2-4.制备组合提取物(1. 5 1)用与上述制备实施例1相同的方法制备组合提取物，除了将所制备的常春藤叶提取物和黄连提取物的比例改变为1.5 1(常春藤叶提取物的重量黄连提取物的重量)。2-5.制备组合提取物U 1)用与上述制备实施例1相同的方法制备组合提取物，除了将所制备的常春藤叶提 取物和黄连提取物的比例改变为2 1(常春藤叶提取物的重量黄连提取物的重量)。2-6.制备组合提取物(2. 5 1)用与上述制备实施例1相同的方法制备组合提取物，除了将所制备的常春藤叶提 取物和黄连提取物的比例改变为2. 5 1(常春藤叶提取物的重量黄连提取物的重量)。2-7.制备组合提取物(3 1)用与上述制备实施例1相同的方法制备组合提取物，除了将所制备的常春藤叶提 取物和黄连提取物的比例改变为3 1(常春藤叶提取物的重量黄连提取物的重量)。2-8.制备组合提取物(3. 5 1)用与上述制备实施例1相同的方法制备组合提取物，除了将所制备的常春藤叶提 取物和黄连提取物的比例改变为3. 5 1(常春藤叶提取物的重量黄连提取物的重量)。2-9.制备组合提取物Q 1)用与上述制备实施例1相同的方法制备组合提取物，除了将所制备的常春藤叶提 取物和黄连提取物的比例改变为4 1(常春藤叶提取物的重量黄连提取物的重量)。2-10.制备组合提取物(4. 5 1)用与上述制备实施例1相同的方法制备组合提取物，除了将所制备的常春藤叶提 取物和黄连提取物的比例改变为4. 5 1(常春藤叶提取物的重量黄连提取物的重量)。2-11.制备组合提取物(5 1)用与上述制备实施例1相同的方法制备组合提取物，除了将所制备的常春藤叶提 取物和黄连提取物的比例改变为5 1(常春藤叶提取物的重量黄连提取物的重量)。实施例3.黄连提取物活性实验3-1.黄连提取物祛痰活性测定[实验方法]为了测定实施例1-1至1-3的黄连提取物的祛痰活性，在以下步骤中使用Engler 等人的方法(Engler H, Szelenyi I, J. Pharmacol. Moth. 11,151-157,1984,, ；Bao-quin Lin et. , Pulmonary Pharmacology&Therapeutics 21，259-263，2008.)来进行实验。对雄性小鼠(8周龄，Sam tako BioKorea)经口服给予阳性对照药(氨溴素 (ambroxol), Sigma)和测试药(实施例1_1到1_3的黄连提取物)，30分钟后，经腹膜内注 射500mg/kg酚红(酚红溶解在盐水中)。30分钟后，用二乙醚麻醉鼠，切断腹部大动脉取 血，然后切下整个气管。将离体的气管置于Iml盐水中清洗30分钟，在室温下以10，OOOrpm 离心5分钟，向上清液加入IN氢氧化钠(NaOH)(每Iml上清液加入0. Iml的IN NaOH)，然 后测量在M6nm下的吸光度来测定酚红浓度作为祛痰活性。[实验结果]所获结果在下表1中示出。[表1]
13.剂量(mg/kg)分泌痰液能力(％)实施例1-1CR-GA50029CR-GA-I50036实施例1-2CR-GB50032CR-GB-I50041实施例1-3CR-GC50038阳性对照(氨溴素)25032如上表1所示，实验结果为所述提取物整体上具有极好的活性，特别是实施例2的 CR-GB-I显示出最佳痰液分泌活性。并且，测定了实施例2的CR-GC-I各种剂量(50、100、150、200、500mg/kg)的活性， 其结果在下表2中示出。[表 2]
剂量(mg/kg )分泌痰液能力 (%)实施例1-2CR-GB-I50410022150322003350041阳性对照(氨溴素)25030如上表2所示，实验结果为实施例1-2的CR-GB-I在剂量为500mg/kg时显示最佳 痰液分泌活性。3-2.黄连提取物的止咳活性测定[实验方法]为测定实施例1-1至1-3的黄连提取物的止咳活性，在以下步骤中用Tanaka等人 的方法(Motomu Tanaka and Kei Maruyama. ,J. Pharmacol. Sci. 93,465-470,2003. ,Daoui, Cognon, Naline et.，Am. J. Respir. Crit. Care. Med. 158，42-48，1998)进行实验。对雄性豚鼠(6周龄，Sam tako BioKorea)经口服给予测试药物，一小时后，将所 述豚鼠置于体积描记器室(plethysmograph chamber,Buxco,U. S. A.)中，然后，将咳嗽诱导物柠檬酸(Sigma)喷雾以引起咳嗽。使用用作止咳药的可可碱(Sigma)作为阳性对照。并 且，将所述豚鼠暴露于0. 2M柠檬酸10分钟，记录15分钟内的咳嗽次数。[实验结果]结果在下表3中示出。[表3]
权利要求
1.包含黄连提取物作为活性成分的止咳或祛痰组合物。
2.权利要求1的组合物，其中所述组合物还包含常春藤叶提取物，并且所述提取物是 黄连和常春藤叶的组合提取物的形式。
3.权利要求2的组合物，其中常春藤叶提取物和黄连提取物的重量比例是0.1 1至 10 1(常春藤叶提取物的重量黄连提取物的重量)。
4.权利要求3的组合物，其中常春藤叶提取物和黄连提取物的重量比例是0.2 1至 5 1(常春藤叶提取物的重量黄连提取物的重量)。
5.包含黄连提取物作为活性成分的预防或治疗呼吸道疾病的组合物。
6.权利要求5的组合物，其中所述组合物还包含常春藤叶提取物，并且所述组合物是 黄连和常春藤叶的组合提取物的形式。
7.权利要求6的组合物，其中常春藤叶提取物和黄连提取物的重量比例是0.1 1至 10 1(常春藤叶提取物的重量黄连提取物的重量)。
8.权利要求7的组合物，其中常春藤叶提取物和黄连提取物的重量比例是0.2 1至 5 1(常春藤叶提取物的重量黄连提取物的重量)。
9.权利要求5至8中任一项的组合物，其中所述呼吸道疾病选自肺气肿、支气管炎、哮 喘、慢性或急性支气管收缩、喘鸣性婴儿综合征、慢性阻塞性肺病、支气管腺瘤、孤立性肺结 节、肺结核、脓胸、肺脓肿、普通感冒、流行性感冒和肺组织细胞增多病。
10.权利要求1至8中任一项的组合物，其中所述提取物是使用一种或多种选自水和具 有1-4个碳原子的直链或支链醇的溶剂作为提取溶剂而获取的粗提取物，或者是通过向所 述粗提取物加入一种具有1-6个碳原子的直连或支链醇的水溶液而得到的一种溶剂可溶 的提取物。
11.权利要求1至8中任一项的组合物，其中所述组合物被配制为粉剂、颗粒剂、片剂、 胶囊剂、悬浮剂、乳剂、糖浆、气雾剂、经皮给药剂、栓剂或灭菌的注射溶液。
12.包含权利要求1至8中任一项的组合物的用于预防或改善呼吸道疾病的健康功能 性食物。
13.—种止咳或祛痰的方法，包括向需要止咳或祛痰的患者给予含有黄连提取物作为 活性成分的组合物这一步骤。
14.权利要求13的方法，其中所述组合物还包含常春藤叶提取物，并且所述组合物是 以黄连和常春藤叶的组合提取物的形式给药。
15.权利要求14的组合物，其中常春藤叶提取物和黄连提取物的重量比例是0.1 1 至10 1 (常春藤叶提取物的重量黄连提取物的重量)。
16.权利要求15的组合物，其中常春藤叶提取物和黄连提取物的重量比例是0.2 1 至5 1(常春藤叶提取物的重量黄连提取物的重量)。
17.权利要求13或14的方法，其中所述组合物的每日剂量基于活性成分的量计为0.5 至 500mg/kgo
18.一种预防或治疗呼吸道疾病的方法，包括向需要治疗或预防呼吸道疾病的患者给 予含有黄连提取物作为活性成分的组合物这一步骤。
19.权利要求18的方法，其中所述组合物还包含常春藤叶的提取物，并且所述提取物 是以黄连和常春藤叶的组合提取物的形式给药。
20.权利要求19的组合物，其中常春藤叶提取物和黄连提取物的重量比例是0.1 1 至10 1(常春藤叶提取物的重量黄连提取物的重量)。
21.权利要求20的组合物，其中常春藤叶提取物和黄连提取物的重量比例是0.2 1 至5 1(常春藤叶提取物的重量黄连提取物的重量)。
22.权利要求18的方法，其中所述呼吸道疾病选自肺气肿、支气管炎、哮喘、慢性或急 性支气管收缩、喘鸣性婴儿综合征、慢性阻塞性肺病、支气管腺瘤、孤立性肺结节、肺结核、 脓胸、肺脓肿、普通感冒、流行性感冒和肺组织细胞增多病。
23.权利要求18或19的方法，其中所述组合物的每日剂量基于活性成分的量计为0.5 至 500mg/kgo
全文摘要
本发明提供了一种包含黄连提取物或者黄连和常春藤叶的组合提取物作为活性成分的用于止咳、祛痰、预防和/或治疗呼吸道疾病的组合物，和一种使用所述组合物来止咳、祛痰，和/或预防和/或治疗呼吸道疾病的方法。
文档编号A61K36/25GK102065876SQ200980122243
公开日2011年5月18日 申请日期2009年6月12日 优先权日2008年6月13日
发明者延成钦, 张守任, 愼珉奇, 渔津, 辛荣埈, 金昌焕, 韩昌均 申请人:韩国安国药品株式会社