Cd37免疫治疗剂及其与双功能化学治疗剂的联合的制作方法

专利名称：Cd37免疫治疗剂及其与双功能化学治疗剂的联合的制作方法
技术领域：
本公开内容一般地提供了用于治疗B细胞病症的组合物和方法，并且更具体地， 提供了用于治疗或预防B细胞相关的自身免疫、炎症或过度增殖性疾病的人源化抗CD37小 模块化免疫药物(SMIP)分子以及CD37特异性结合分子与双功能化学治疗剂的协同联合治疗。相关领域描述人免疫系统通常保护机体免受外源物质和病原体侵袭。免疫系统的一个组分是B 淋巴细胞，也称为B细胞，其产生抗体，所述抗体通过与外源物质或病原体结合并且在某些 情况下介导外源物质或病原体的破坏来保护机体。但是，在某些情况下，免疫系统功能可能 出错并引起疾病。例如，存在很多涉及B细胞不受控制的增殖的癌症、自身免疫性疾病和炎 症疾病。B细胞可以通过其细胞表面上的分子例如⑶37进行鉴定。⑶37是大量糖基化的 40-52kDa蛋白，属于四次跨膜蛋白的细胞表面抗原家族，其在正常产生抗体的B细胞上高 表达，但不在前B细胞或浆细胞上表达。除正常B细胞以外，几乎所有B细胞来源的恶性肿 瘤的⑶37表达也都是阳性的，包括慢性淋巴细胞白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和多 毛细胞性白血病(Moore et al.，J.Pathol. 152 :13(1987) ；Merson 禾口 Brochier，Immunol. Lett. 19 269 (1988)；以及 Faure etal.，Am. J. Dermatopathol. 12 122 (1990))。已经开发出一些⑶37特异性免疫疗法。特异性针对⑶37的IgGl鼠源性单克隆抗 体MB-I用131I进行标记并在在治疗NHL的临床试验中测试(参见，Press et al.，J. Clin. Oncol. 7 :1027(1989) ；Bernstein et al.,Cancer Res. (Suppl. )50 :1017(1990) ；Press et al.，Front. Radiat. Ther. Oncol. 24 :204 (1990) ；Press et al.，Adv. Exp. Med. Biol. 303 91(1991)和 Brown et al.，Nucl. Med. Biol. 24 :657 (1997))。MB_1 抗体缺乏 Fc 效应功能，例 如抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)，以及在体内异种移植物模型中，裸露的MB-I抗体不 抑制肿瘤生长(Buchsbaum et al.，CancerRes. 52 :6476(1992))。此外，具有连接到另一鼠 源性单克隆抗⑶37，G28-1的阿霉素的免疫偶联物(immunoconjugate)被给予小鼠并且表 现出被内化，阿霉素细胞内在细胞内被释放(参见，Braslawsky et al.，Cancer Immunol.Immunother. 33 :367(1991))。目前，在人体中测试了针对CD37的经改造的融合蛋白，其被 称为小模块化免疫药物(SMIP )产品(参见，例如美国专利申请公布第2003/0133939号和 第 2007/0059306 号)。尽管对基于抗体的治疗已经进行了大量的研究，但本领域仍需要用于治疗B细胞 相关病症或疾病的可选的或改进的组合物和方法。概述在一方面中，本公开内容提供了人源化CD37特异性结合分子和减少B细胞或治疗 与异常B细胞活性相关的疾病的方法，所述方法包括给予个体有效量的本文提供的人源化 CD37特异性结合分子，所述个体需要减少B细胞或治疗与异常B细胞活性相关的疾病。在某些实施方案中，本公开内容提供了人源化CD37特异性结合分子，其从氨基末 端到羧基末端包含(i)人源化重链可变区、(ii)如SEQ ID NO :2 所示的连接子、(iii) 人源化轻链可变区、(iv) IgGl铰链、(ν)人IgGlCH2区和(vi)人IgGlCH3区，其中(a)人源 化重链可变区从氨基末端到羧基末端包含人源化重链FRl JBSEQ ID N0:63所示的重链 CDR1、人源化重链FR2、如SEQ ID NO 65所示的重链CDR2、人源化重链FR3、如SEQ ID NO 67、68或69所示的重链⑶R3和人源化重链FR4，并且(b)人源化轻链可变区从氨基末端到 羧基末端包含人源化轻链FRlJn SEQ ID NO 61或62所示的轻链⑶R1、人源化轻链FR2、 如SEQ ID N0:64所示的轻链CDR2、人源化轻链FR3和如SEQ ID NO :66所示的轻链CDR3， 以及人源化轻链FR4。在上述人源化⑶37特异性结合分子的某些实施方案中，人源化重链FRl包含SEQ ID NO 144，人源化重链FR2包含SEQ ID NO :151，重链FR3包含SEQ ID NO :158以及重链 FR4 包含 SEQ ID NO :161 或 162。在上述人源化CD37特异性结合分子的任何一个的某些实施方案中，人源化轻链 FRl 包含 SEQ ID NO :171，轻链 FR2 包含 SEQ IDNO 182，轻链 FR3 包含 SEQ ID NO :195 以及 轻链 FR4 包含 SEQ IDNO :206。在相关方面中，本公开内容提供了包含如SEQ ID NO :253所示的氨基酸序列的 ⑶37特异性结合分子。在某些实施方案中，⑶37特异性结合分子基本上由如SEQ IDNO :253所示的氨基 酸序列组成。在某些实施方案中，⑶37特异性结合分子由如SEQ ID NO :253所示的氨基酸序列 组成。在相关方面中，本公开内容还提供了包含编码本文提供的人源化CD37特异性结 合分子的核苷酸序列的分离的核酸分子。在另一相关方面中，本公开内容提供包含编码本文提供的人源化CD37特异性结 合分子的分离的核酸分子的载体。在另一相关方面中，本公开内容提供包含上述载体的宿主细胞。本公开内容还提供包含本文提供的人源化CD37特异性结合分子和药学上可接受 的载体的组合物。在另一方面中，本公开内容提供了用于减少B细胞或治疗与异常B细胞活性相关 的疾病的方法，所述方法包括给予个体有效量的本文提供的人源化CD37特异性结合分子，所述个体需要减少B细胞或治疗与异常B细胞活性相关的疾病。在某些实施方案中，与异常B细胞活性相关的疾病是B细胞淋巴瘤、B细胞白血病、 B细胞骨髓瘤、特征为自身抗体产生的疾病或特征为与B细胞途径相关的不适当T细胞激活 的疾病。在某些实施方案中，特征为自身抗体产生的疾病是特发性炎症性肌病、类风湿性 关节炎、重症肌无力、格雷夫斯氏病(Grave’ sdisease)、1型糖尿病、多发性硬化、自身免疫 性疾病、皮肌炎、多肌炎或Waldenstrom巨球蛋白血症。在某些实施方案中，与异常B细胞活性相关的疾病是慢性淋巴细胞白血病(CLL)。在另一方面中，本公开内容提供了用于CD37特异性结合分子和双功能化学治疗 剂的联合使用以减少B细胞或治疗与异常B细胞活性相关的疾病的组合物和方法。该组合 的令人意想不到的结果是这些化合物协同作用，这导致了增加的B细胞减少。例如，本公开内容提供了包含⑶37特异性结合分子和苯达莫司汀 (bendamustine)的组合物。在某些实施方案中，⑶37特异性结合分子是⑶37特异性抗体或SMIP，例如人源化 抗体或人源化SMIP。 在某些实施方案中，⑶37特异性结合分子在⑶37特异性结合中与G28_lmAb竞争。在某些实施方案中，CD37特异性结合分子是本文提供的人源化CD37特异性结合 分子，例如包含SEQ ID NO :253所示的氨基酸序列的、基本上由SEQ ID NO :253所示的氨基 酸序列组成的或由SEQ IDNO 253所示的氨基酸序列组成的人源化CD37特异性结合分子。在相关方面中，本公开内容提供了减少B细胞或治疗与异常B细胞活性相关的疾 病的方法，所述方法包括给予个体有效量的CD37特异性结合分子和苯达莫司汀，所述个体 需要减少B细胞或治疗与异常B细胞活性相关的疾病。在某些实施方案中，与异常B细胞活性相关的疾病是B细胞淋巴瘤、B细胞白血病、 B细胞骨髓瘤、特征为自身抗体产生的疾病或特征为与B细胞途径相关的不适当的T细胞激 活的疾病。在某些其他实施方案中，特征为自身抗体产生的疾病是特发性炎症性肌病、风湿 性关节炎、重症肌无力、格雷夫斯氏病病、I型糖尿病、多发性硬化、自身免疫性疾病、皮肌 炎、多肌炎或Waldenstrom巨球蛋白血症。在某些其他实施方案中，与异常B细胞活性相关的疾病是慢性淋巴细胞白血病 (CLL)。在某些实施方案中，⑶37特异性结合分子和苯达莫司汀是同时给药。在某些其他实施方案中，⑶37特异性结合分子和苯达莫司汀是相继给药。在某些实施方案中，⑶37特异性结合分子和苯达莫司汀一起配制。在某些实施方案中，⑶37特异性结合分子是⑶37特异性抗体或SMIP，例如人源化 抗体或人源化SMIP。 在某些实施方案中，⑶37特异性结合分子在⑶37特异性结合中与G28_lmAb竞争。
在某些实施方案中，CD37特异性结合分子是本文提供的人源化CD37特异性结合 分子，例如包含SEQ ID NO :253所示的氨基酸序列的、基本上由SEQ ID NO :253所示的氨基 酸序列组成的或由SEQ IDNO 253所示的氨基酸序列组成的人源化CD37特异性结合分子。
附图简要说明

图1显示小鼠G28. 1和CAS-OM序列的重和轻链可变区氨基酸序列比对，以及共 有的同一性序列。图 2A-2D 显示 CAS-001、CAS-002、CAS_003 和 CAS-024 的尺寸排阻色谱法(SEC)色 谱图。目的峰(POI)具有98-99%的被纯化的SMIP分子。CAS-OM具有非常尖锐的并且对 称的峰(表明同质性)，而CAS-OO1、CAS-002和CAS-003的峰具有缓的肩部(通过积分运 算，肩部占有约35%的Ρ0Ι)，这表明异质的分子群体。图3是显示多种抗⑶37特异性SMIP蛋白如何与母体CAS-006分子(嵌合抗 ⑶37SMIP蛋白，mVLmVH)竞争结合Ramos细胞上的⑶37的图，其提供与母体分子相比的结 合的亲和力的指示。CAS-024(hVHhVL)与CAS-006具有基本相同的对于⑶37的亲和力，然 而其他分子(CAS-001、CAS-002和CAS-003，都是hVLhVH)的亲和力降低2至4倍。图4A和4B是相对于CAS_006(在这些图中标为SMIP-016)的另外的结合竞争检测 的图。这里，小鼠-人杂交SMIP分子(CAS-0HmVHhVL和CAS-017hVLmVH)具有高于CAS-006 的亲和力，然而CAS-OM显示出与CAS-006相同的结合亲和力并且CAS-003 (hVLhVH)具有 更低的结合亲和力。图5A-5E显示出多种不同抗CD37抗体和CAS_006(嵌合的抗CD37SMIP分子)之
间的竞争性结合。图6A和6B显示在滤泡性淋巴瘤的动物模型的体内治疗中，CAS-OM在统计学上 优于利妥昔单抗乂^^!^^!! )，正如通过(A)存活率和(B)无肿瘤百分比所示出。图7显示出CAS-OM与化学治疗剂氟达拉滨(fludarabine)和长春新碱协同作用 杀死套细胞淋巴瘤(MCL)细胞Rec-I细胞。图8是显示用本公开内容的抗⑶37SMIP分子治疗的人患者外周血淋巴细胞的消 减水平的柱形图。图9显示出淋巴细胞消减和患者BJB的治疗进程。在第一周期中，在第一周的第 1天、第3天和第5天以3. Omg/kg治疗BJB (队列7的部分)，然后是3次每周一次的给药； 并且在第二周期中给予相同的治疗。患者BJB表现出淋巴细胞的显著减少(48小时内)，到 第4天表现出可触淋巴结的减少，并持续响应于治疗。图10显示出淋巴细胞消减和患者GRP的治疗进程。以每周一次的1. Omg/kg持续 4周治疗GRP (队列4的部分)作为第一周期；然后在两个月后，第二周期中以相同方式进行 治疗。患者GRP表现出淋巴细胞显著减少O周内)，淋巴结大小通过CT扫描表现出36% 的降低、脾体积降低、血红蛋白水平升高，并且持续响应于治疗。图11显示出CAS-OM和苯达莫司汀对Rec-I细胞生长的抑制作用的联合指数 (Cl)图。图12显示出单独的苯丁酸氮芥(chlorambucil)和与CAS-OM联合的苯丁酸氮芥 对SU-DHL-6细胞生长的抑制作用。图13显示出CAS-OM和苯丁酸氮芥对SU_DHL_6细胞生长的抑制作用的联合指数 图。图14A显示出荷瘤小鼠中肿瘤体积的比较，所述荷瘤小鼠由注射D0HH2细胞导致 并随后用hulgG (人IgG，R&D Systems)、CAS-024、苯达莫司汀以及CAS-OM与苯达莫司汀的组合治疗。图14B显示出第13天相对于第0天的个体小鼠的肿瘤体积。图15显示出荷瘤小鼠随时间变化的平均肿瘤体积，所述荷瘤小鼠由注射D0HH2细 胞导致并随后用hulgG、CAS-024、苯达莫司汀以及CAS-024与苯达莫司汀的组合治疗。值 为每个测量日的平均值士平均值标准误差。对每组内一只或多只小鼠实施安乐死后，结束 该组的曲线。图16显示出荷瘤小鼠随时间变化的存活百分比，所述荷瘤小鼠由注射D0HH2细胞 导致并随后用hulgG、CAS-024、苯达莫司汀以及CAS-024与苯达莫司汀的组合治疗。图17显示出用huIgG、CAS-024、苯达莫司汀以及CAS-024与苯达莫司汀的组合治 疗后，无肿瘤小鼠随时间变化的发生率。详细描述在一方面，本公开内容提供了 CD37特异性结合分子CAS-024 (SEQ ID NO :253)，其 是人源化形式的CAS-006 (具有来自小鼠抗人CD37单克隆抗体G28-1的免疫球蛋白可变区 的小模块化免疫药物(SMIP)蛋白)。出乎意料地，CAS-024SMIP蛋白(1)以高于其他人源 化形式的CAS-006(例如CAS-002，CAS-003 ；参见实施例2和5)高达约25倍的水平表达， ⑵能够结合CD37以及CAS-006，而其他人源化形式则不能(参见实施例4和5)，以及(3) 与其他人源化形式的异质性相比，是以同质的分子群体产生(参见实施例幻。此外，本公开 内容提供⑶37特异性结合分子CAS-024 (SEQ ID NO :253)用于减少B细胞或治疗与异常B 细胞活性相关的疾病的方法，所述方法包括给予个体有效量的本文提供的CAS-024，所述个 体需要减少B细胞或治疗与异常B细胞活性相关的疾病。在另一方面，本公开内容提供了用于任何CD37特异性结合分子和双功能化学治 疗剂(例如苯达莫司汀)的联合使用以减少B细胞或治疗与异常B细胞活性相关的疾病的 组合物和方法。该组合出人意料的结果是，化合物的这种联合协同作用并产生了本质上更 有效的治疗方案。更详细地阐明本公开内容之前，提供本文使用的某些术语的定义对于本公开内容 的理解是有帮助的。其他定义在本公开内容各处阐明。在本说明书中，任何浓度范围、百分比范围、比例范围或整数范围应理解为包括所 列举的范围中的任何整数的值，以及如果适当，包括其分数(例如整数的1/10和1/100)，除 非另作说明。此外，除非另作说明，本文列举的涉及任何物理特征例如聚合物亚基、大小或 厚度的任何数值范围应理解为包括所列举的范围中的任何整数。如本文使用，“约”或“基 本上由…组成”表示所指出的范围、值或结构的士20%，除非另作说明。应当理解，如本文使 用的术语“a”和“an" ”是指“一个或多个”所列举的组分。可选的使用(例如“或”)应理 解为表示供替代的选择中的一个、两者或其任何组合。如本文使用，术语“包括(include)” 和“包含(comprise)”是同义使用的。此外，应当理解，本文所述的源自结构和取代基的不 同组合的个体化合物或化合物组被本申请公开的程度如同每个化合物或化合物组被单独 地展示的程度。因此，特定结构或特定取代基的选择在本公开内容的范围内。按照本公开内容，“结合结构域”或“结合区”可以是，例如具有以下能力的任何蛋 白、多肽、寡肽或肽特异性地识别和结合生物分子(例如CD37)或多于一个的相同或不同 分子的复合物或组装体(assembly)或聚集体(aggregate)，无论是稳定的或瞬时的。结合 区包括任何天然存在的、合成的、半合成的或重组产生的生物分子或其他目的靶标的结合伴侣。已知有多种用于鉴定特异性地结合特定靶标的本公开内容的结合结构域的检测，包 括 Western 印迹、ELISA 或 Biacore 分析。本公开内容的结合结构域及其融合蛋白能够结合至所需的程度，包括“特异性地 或选择地结合”靶标，而不显著结合测试样品中存在的其他组分，如果它们以例如大于或等 于约 IO5IT1UO6IT1UO7IT1UO8IT1UO9IT1 UOiqIT1 UO11Ir1 UO12IT1 或 IO13IT1 的亲和力或 Ka(即特 定结合相互作用的平衡结合常数，单位为1/M)结合靶分子。“高亲和力”结合结构域是指具 有至少IO7M-1、至少盧1、至少愈1、至少IOicT1、至少IOnM-1、至少IO12IT1、至少IO13M"1或 更高的Ka的那些结合结构域。“低亲和力”结合结构域是指具有高达5X 107M_\高达IO7M-1, 高达IO6M^高达IO5M4或更低的Ka的那些结合结构域。可选地，亲和力可以定义为特定结 合相互作用的平衡解离常数(Kd)，单位为M (例如101至I(T13M)。按照本公开内容，结合 结构域多肽和融合蛋白的亲和力可以使用常规技术容易地确定(参见，例如katchard et al. (1949) Ann. N. Y. Acad. Sci. 51 :660 ；和美国专利第 5，283，173 号、第 5，468，614 号，或等 同的)。术语“CD37特异性结合分子”是指以至少约IO6Ml例如至少约IOl1、IO8M4、 IO9M-1UOiqM-1UO11M-1UO12M-1或IO13M-1)的Ka特异性地结合CD37的蛋白、多肽、寡肽或肽。术语“CD37特异性结合结构域”是指CD37特异性结合分子的部分或结构域，所 述部分或结构域负责该分子的特异性CD37结合。CD37特异性结合结构域自身(即没有 CD37特异性结合分子的任何其他部分)以至少约ΚΛΓΥ例如至少约IO7M-1UO8M-1UO9M^ IOiqM-1UO11M-1UO12M-1或IO13M-1)的Ka结合CD37。CD37特异性结合结构域自身可以足以作 为⑶37特异性结合分子。示例性的⑶37特异性结合结构域包括⑶37特异性scFv和Fab 片段，其可以来自例如单克隆抗体G28-1的抗CD37抗体。本领域技术人员所理解的关于抗体技术的术语每个都按照该领域内获得的含义， 除非本文特别限定。例如，术语“VJ和“VH”分别指来自抗体轻和重链的可变结合区。可变 结合区是由称为“互补决定区“(CDR)和“框架区”(FR)的分离的、明确界定的亚区所组成。 术语“CJ和“CH”是指“免疫球蛋白恒定区”，即分别来自抗体轻和重链的恒定区，重链恒定 区被理解为进一步分为CH1、CH2、CH3和Ch4恒定区结构域，这取决于该区所源自的抗体同种型 (IgA、IgD、IgE、IgG、IgM)。部分的恒定区结构域组成Fc区(“可结晶段”区)，其含有负责 诸如ADCC(抗体依赖性细胞介导的细胞毒性)、CDC(补体依赖性细胞毒性)和补体结合的 免疫球蛋白的效应功能、结合Fc受体、相对于缺乏Fc区的多肽有更长的体内半衰期、蛋白A 结合以及甚至可能胎盘转移(参见Capon et al. , Nature, 337 :525(1989))的结构域。此 外，含有Fc区的多肽允许多肽的二聚化和多聚化。“铰链区”是在融合蛋白中插入⑶37特异性结合结构域和另一区(例如CH2区) 之间并连接它们的氨基酸序列，以致所述融合蛋白仍能够特异性结合CD37(即以至少约 IO6IT1UO7IT1UO8IT1UO9IT1 UOicT1 UO11Ir1 UO12IT1 或 IO13M-1 的 Ka)。在某些实施方案中，铰链 区是免疫球蛋白铰链区。“免疫球蛋白铰链区”是指野生型免疫球蛋白铰链区或改变的野生型免疫球蛋白 铰链区。按照晶体学研究，免疫球蛋白铰链区可以在功能上进一步再分为三个区上游铰 链区、核心区和下游铰链区。上游铰链区包括从CHl的羧基末端至铰链中限制运动的第一个残基的氨基酸，所述第一个残基通常是在两条重链之间形成链间二硫键的第一个半胱氨 酸残基。上游铰链区的长度与抗体的节段柔性有关。核心铰链区含有重链间二硫桥，以及 下游铰链区连接CH2结构域的氨基末端并且包括CH2中的残基。同上。人IgGl的核心铰 链区含有序列Cys-Pro-Pro-Cys (SEQ IDNO 264)，当通过二硫键形成而成为二聚体时，该序 列形成被认为作为轴的环状八肽，从而提供柔性。如本文使用的“野生型免疫球蛋白铰链区”是指天然存在的插入抗体单链的CHl 和CH2区之间并连接CHl和CH2区的氨基酸序列。它含有上游铰链区、核心铰链区和非CH2 区的部分的下游铰链区的部分。示例性的野生型免疫球蛋白铰链区是如SEQ ID N0:90所 示的人IgGl铰链区，其中从它的氨基末端至它的羧基末端，前10个氨基酸(EPKSCDKTHT， SEQ ID NO 263)形成上游铰链区，接下去的4个氨基酸(CPPC，SEQ ID NO 264)形成核心 铰链区并且最后的氨基酸(即脯氨酸)是下游铰链区中的第一个氨基酸并且不是CH2的部 分。“改变的野生型免疫球蛋白铰链区”或“改变的免疫球蛋白铰链区”是指(a)具有多 达30%的氨基酸改变的野生型免疫球蛋白铰链区(例如多达25%、20%、15%、10%或5% 氨基酸取代或缺失)，(b)长度至少为10个氨基酸(例如至少12、13、14或15个氨基酸) 的野生型免疫球蛋白铰链区的部分，具有多达30%的氨基酸改变(例如多达25%、20%、 15%、10%或5%氨基酸取代或缺失)，或(c)包含核心铰链区的野生型免疫球蛋白铰链区 的部分(其长度可以是4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14 或 15，或至少 4、5、6、7、8、9、10、11、 12、13、14或15个氨基酸)。当改变的野生型免疫球蛋白铰链区被插入融合蛋白中CD37特 异性结合结构域和另一区(例如CH2区)之间并连接它们时，它允许所述融合蛋白特异性 地结合 CD37(即具有至少约 IO6IT1UO7IT1UO8IT1UO9IT1 UOiciIT1 UO11ITiUO12IT1 或 IO13M"1 的 Ka)。在某些实施方案中，野生型免疫球蛋白铰链区中的一个或多个半胱氨酸残基可以被一 个或多个其他氨基酸残基(例如一个或多个丝氨酸残基)所取代。改变的免疫球蛋白铰链 区可以可选地或另外地使野生型免疫球蛋白铰链区的脯氨酸残基被另一氨基酸残基(例 如丝氨酸残基)所取代。“连接子(linker)，，是指将重链可变区和轻链可变区连接在一起并提供与两个亚 结合结构域的相互作用相容的间隔子功能的氨基酸序列，这样使得到的多肽能够特异性结 合 CD37。如本文使用“衍生物(derivative) ”是指化合物的以化学或生物方式修饰的形式， 其在结构上与母体化合物相似并且(实际上或理论上)可以从母体化合物获得。通常，“衍 生物”与“类似物(analogue)，，的不同在于，母体化合物可以是生成“衍生物”的起始原料， 然而母体化合物不必用作生成“类似物”的起始原料。衍生物可以具有不同于母体化合物 的化学或物理性质。例如，与母体化合物或序列相比，衍生物可以是更亲水的或其可以是具 有改变的反应性的突变的序列(例如具有氨基酸改变的CDR，所述氨基酸改变改变其对于 靶标的亲和力)。“B细胞相关的病症或疾病”是指异常的B细胞活性或偏离正常的、合适的或预期 的进程的活性。例如，B细胞相关的病症或疾病可以包括具有受损的或缺陷的DNA或其他 细胞组分的细胞的不适当增殖。异常的B细胞活性可以包括特征在于不适当高水平的细胞 分裂、不适当低水平的凋亡或两者的细胞增殖。这些疾病可以具有例如细胞、细胞群或组织的单一或多重局部异常增殖，无论癌性或非癌性，良性的或恶性的。B细胞相关的病症或疾 病还可以包括异常的抗体产生，例如自身抗体的产生或更希望以正常水平产生的抗体的过 度产生。本文还考虑到异常的B细胞活性可以发生在B细胞的某些亚群中并不发生在其他 亚群中，或可以包括T细胞的不适当的激活，例如通过将不适当的抗原呈递给T细胞或通过 其他B细胞途径。“治疗(Treatment) ”或“治疗(treating) ” 是指治疗性(therapeutic)治疗或预 防性(prophylactic/preventative)治疗。治疗性治疗可以改善接受治疗的个体的至少一 个疾病症状或可以延缓个体进行性疾病的恶化，或预防其他相关疾病的发作。特异性结合分子或化合物的“治疗有效量(或剂量)”或“有效量(或剂量)”是指 足以引起正被治疗的疾病的一个或多个症状的改善的化合物的量。当用于单独活性成分， 单独给药时，治疗有效剂量是指单独的该成分。当用于组合时，治疗有效剂量是指引起治疗 效果的活性成分的组合量，无论是连续给药或同时给药。本发明特别考虑到，一个或多个特 异性结合分子可以按照本发明的方法进行给药，每个都以有效剂量。“具有或疑似具有与异常B细胞活性相关的疾病的个体”是个体，所述个体中的疾 病或病症症状可以由异常的B细胞活性或B细胞增殖所导致，可以通过异常的B细胞活性 而恶化，或可以通过B细胞活性的调节而减轻。这些疾病的实例是B细胞恶性肿瘤或B细 胞癌(例如B细胞淋巴瘤、B细胞白血病或B细胞骨髓瘤)、以自身抗体产生为特征的疾病 或以由不适当的B细胞抗原呈递给T细胞所导致或由其他涉及B细胞的途径所导致的不适 当的T细胞刺激为特征的疾病。其他定义提供在本公开内容的以下详细描述中。人源化CD37特异性结合分子在一方面中，本公开内容提供人源化⑶37特异性结合分子。这些分子可以是含 有人源化CD37特异性结合结构域的任何形式，包括人源化抗CD37抗体、人源化抗CD37抗 体的Fab片段、人源化CD37特异性单链Fv (scFv)、人源化CD37特异性SMIP蛋白、人源 化⑶37特异性PIMS蛋白(在反方向包含SMIP组分的融合蛋白)、人源化⑶37特异性 SCORPION蛋白和包含至少一个人源化CD37特异性结合结构域的其他双特异性或多特异性 结合蛋白。SMIP蛋白和制备SMIP蛋白的方法的详细描述可以见于，例如美国专利公布第 2003/0133939 号、第 2003/0118592 号和第 2005/0136049 号以及 WO 2005017148。制备 PIMS 蛋白的构建体和方法描述于美国申请第12/168，875号中。制备SCORPION蛋白的方法可以 见于，例如PCT申请公布第W02007/146968号。其他示例性的多功能融合蛋白可以见于，例 如美国专利申请公布第2006/0051844号和美国专利第7，166，707号。某些双特异性或多 特异性结合蛋白可以包含CD37特异性scFv和一个或多个不是源自免疫球蛋白的其他结合 结构域。人源化⑶37特异性结合结构域示例性的“人源化CD37特异性结合结构域”是特异性针对CD37的免疫球蛋白可 变区，其包含至少一个人框架区。“人框架区”是指人免疫球蛋白可变区的野生型(即天然存在的)框架区，具有该 区内少于约50% (例如优选地少于约45%、40%、30%、25%、20%、15%、10%、5%或) 的氨基酸缺失或被取代(例如在对应位置用一个或多个非人免疫球蛋白框架区的氨基酸残基进行取代)的人免疫球蛋白可变区的改变的框架区，或具有该区内少于约50% (例如 少于45%、40%、30%、25%、20%，15%、10%或5%)的氨基酸缺失或被取代(例如在暴露 的残基位置的和/或在对应位置用一个或多个人免疫球蛋白框架区的氨基酸残基进行取 代)的非人免疫球蛋白可变区的改变的框架区，这样，在一方面中，降低了免疫原性。在某些实施方案中，人框架区是人免疫球蛋白可变区的野生型框架区。在某些其 他实施方案中，人框架区是具有在1个、2个、3个、4个或5个位置的氨基酸缺失或取代的 人免疫球蛋白可变区的改变的框架区。在某些实施方案中，人框架区是具有在1个、2个、3 个、4个或5个位置的氨基酸缺失或取代的非人免疫球蛋白可变区的改变的框架区。在某些实施方案中，人源化⑶37特异性结合结构域包含至少1个、2个、3个、4个、 5个，6个，7个或8个选自人轻链FRl、人重链FRl、人轻链FR2、人重链FR2、人轻链FR3、人 重链FR3、人轻链FR4和人重链FR4的人框架区(FR)。示例性的人FR如以下所示=SEQID NOS :140-146 (人重链FRl)、SEQ ID NOS :147、 150 和 151(人重链 FR2)、SEQ ID NO :154-160 (人重链 FR3)、SEQ ID NOS 161-163、168 和 169 (人重链 FR4)、SEQ IDNOS 170-172、175 和 177-181 (人轻链 FRl)、SEQ ID NOS 182、 184-188 和 191(人轻链 FI^)、SEQ ID NOS 194_198、203 和 205 (人轻链 FR3)和 SEQ ID NOS =206-210 (人轻链FR4)。其他示例性的人FR区可以见于本文提供的CD37特异性SMIP 蛋白中的 FR 区，所述 SMIP 蛋白例如 CAS-001、CAS-002、CAS-003 或 CAS-OM。可能存在于CD37特异性结合结构域的人FR还包括本文提供的示例性的FR的变 体，其中示例性的FR的1个或2个氨基酸被取代或缺失。在某些实施方案中，人源化⑶37特异性结合结构域包含(a)包含人轻链FR1、人轻 链FR2、人轻链FR3和人轻链FR4的人源化轻链可变区，和(b)包含人重链FR1、人重链FR2、 人重链FR3和人重链FR4的人源化重链可变区。本文提供的⑶37特异性结合结构域还包含1个、2个、3个、4个、5个或6个⑶R。 这些⑶R可以是选自轻链的CDRl、⑶R2和⑶R3以及重链的CDRl、⑶R2和⑶R3的非人⑶R 或改变的非人⑶R。在某些实施方案中，⑶37特异性结合结构域包含(a)包含轻链⑶R1、 轻链⑶R2和轻链⑶R3的轻链可变区，和(b)包含重链⑶Rl、重链⑶R2和重链⑶R3的重链
可变区。示例性的CDR包括如 SEQ ID NO 61 (RASENVYSYLA)或SEQ IDNO 62 (RTSENVYSYLA) 所示的轻链的CDRl、如SEQ ID NO 63 (GYMNM)所示的重链的CDRl、如SEQ ID NO 64 (FAKTLAE)所示的轻链的 CDR2、如 SEQ ID NO 65 (NIDPYYGGTTYNRKFKG)所示的重链的 CDR2、如 SEQ ID NO :66 (QHHSDNPWT)所示的轻链的 CDR3、如 SEQ ID NO :67 (SVGPFDY)所示的 重链的 CDR3 JBSEQ ID NO :68 (SVGPFDS)所示的重链的 CDR3 和如 SEQ ID NO 69 (SVGPMDY) 所示的重链的⑶R3。优选的轻链⑶Rl是SEQ ID NO 61 (RASENVYSYLA)并且优选的重链 CDR3 包括 SEQ ID NO 68 (SVGPFDS)或 SEQ IDNO 69 (SVGPMDY)。其他示例性的CDR 包括如 SEQ ID NO 128 (RTSQNVYSYLA)、129 (RTSESVYSYLA)、 130(RASQSVYSYLA),131(RASQSVSSYLA)和 132(RASQSVSYYLA)所示的轻链的 CDRl， 如 SEQ ID NOS 133 (SYMNM)和 134 (SYffIG)所示的重链的 CDRl，如 SEQ ID NOS 135 (AASSLQS), 136 (GASTRAT)和 137(DASNRAT)所示的轻链的 CDR2,如 SEQ ID NOS 138 (IIYPGDSDTRYSPSFQG)和 139 (RIDPSDSYTNYSPSFQG)所示的重链的 CDR2，如 SEQ ID NO:220 (QHHSDNPffT)所示的轻链的 CDR3 以及如 SEQ ID NOS 211 (SVGPMDY)、212 (SVGPFDY)、 213 (SVGPMDV) ,214 (SVGPFDS) ,215 (SVGPFDP) ,216 (SVGPFQH) ,217 (SVGPFDV) ,218 (SVGPFDI) 和219 (SVGPFDL)所示的重链的⑶R3。其他示例性的⑶R包括本文提供的⑶37特异性SMIP 蛋白中的⑶R。在某些实施方案中，CD37特异性结合结构域包含人源化轻链可变区，所述人源化 轻链可变区从其氨基末端至羧基末端包含人轻链FR1、轻链⑶R1、人轻链FR2、轻链⑶R2、 人轻链FR3、轻链CDR3和人轻链FR4。在某些实施方案中，CD37特异性结合结构域包含人源化轻链可变区，所述人源化 轻链可变区从其氨基末端至羧基末端包含人轻链FRl JBSEQ ID NO :61或62所示的轻链 CDRl、人轻链FR2 JnSEQID NO :64所示的轻链CDR2、人轻链FR3、如SEQ ID N0:66所示的轻 链CDR3和人轻链FR4。在其他实施方案中，CD37特异性结合结构域包含以下人源化轻链可 变区，基本上由以下人源化轻链可变区组成或由以下人源化轻链可变区组成，所述人源化 轻链可变区从其氨基末端至羧基末端包含如SEQ ID NO 171所示的人轻链FRlJn SEQID NO 61所示的轻链CDRlJn SEQ ID NO :182所示的人轻链FR2、如SEQ ID NO 64所示的轻 链CDR2、如SEQ ID NO 195所示的人轻链FR3、如SEQ ID NO :66所示的轻链CDR3、和如SEQ ID NO :206所示的人轻链FR4。其他示例性的人源化轻链如SEQ ID NOS :237-240所示并且 包括本文提供的人源化CD37特异性SMIP蛋白中的轻链。在某些实施方案中，CD37特异性结合结构域包含人源化重链可变区，所述人源化 重链可变区从其氨基末端至羧基末端包含人重链FR1、重链⑶R1、人重链FR2、重链⑶R2、 人重链FR3、重链CDR3和人重链FR4。在某些实施方案中，CD37特异性结合结构域包含人源化重链可变区，所述人源化 重链可变区从其氨基末端至羧基末端包含人重链FRl JBSEQ ID N0:63所示的重链⑶R1、 人重链FR2 JBSEQ IDNO :65所示的重链CDR2、人重链FR3、如SEQ ID NO :67、68或69所示 的重链CDR3和人重链FR4。在其他实施方案中，CD37特异性结合结构域包含以下人源化重 链可变区，基本上由以下人源化重链可变区组成或由以下人源化重链可变区组成，所述人 源化重链可变区包含从其氨基末端至羧基末端包含如SEQ ID NO :144所示的人重链FR1、 如SEQ ID NO :63所示的重链CDR1、如SEQ ID NO 151所示的人重链FR2、如SEQ ID NO: 65所示的重链CDR2、如SEQ ID NO 158所示的人重链FR3、如SEQ ID NO :67、68或69所示 的重链⑶R3和如SEQ ID NO :161所示的人重链FR4。其他示例性的人源化轻链如SEQ ID NOS =242-245所示并且包括本文提供的人源化⑶37特异性SMIP蛋白中的轻链。在某些实施方案中，⑶37特异性结合结构域可以是Fab或SCFv片段的形式。在 优选的实施方案中，⑶37特异性结合结构域是人源化⑶37特异性scFv，所述scFv包含通 过连接子连接在一起的轻链可变区和重链可变区。在其他实施方案中，轻和重链可变区是 人源化的，并且可以包含如SEQ ID NO :238所示的人源化轻链可变区和如SEQID NO :245所 示的人源化重链可变区两者。在其他实施方案中，仅轻或重链可变区是人源化的。例如，CD37特异性结合结构 域可以包含人源化轻链可变区(即包含至少1个人FR的轻链可变区)和非人重链可变链 区(例如小鼠或大鼠)。可选地，CD37特异性结合结构域可以包含非人轻链可变区(例如 小鼠或大鼠)和人源化重链可变链区(即包含至少1个人FR的重链可变区)。两种类型的CD37特异性结合结构域都可以称为“杂交的人-非人CD37特异性结合结构域”或“嵌合的 CD37特异性结合结构域”。在某些实施方案中，人源化⑶37特异性scFv中轻链可变区的羧基末端通过连接 子连接到重链可变区的氨基末端。因此，得到的scFv从其氨基末端至其羧基末端具有轻 链可变区、连接子和重链可变区。在某些其他实施方案中，人源化CD37特异性scFv中重链 可变区的羧基末端通过连接子连接到轻链可变区的氨基末端。因此，得到的scFv从其氨基 末端至其羧基末端具有重链可变区、连接子和重链可变区。在某些实施方案中，连接子具有5-30个氨基酸，例如15-25个氨基酸。在某些实 施方案中，连接子包含(GlynSer)m，其中η和m可以是独立选自1至5的整数。例如，在某些 实施方案中，η为4并且m为1、2、3、4或5。在某些实施方案中，1个或2个除了 Gly或kr 的氨基酸可以存在于氨基末端、羧基末端或两个末端。在某些其他实施方案中，1或2个除 了 Gly或kr的氨基酸可以用于取代连接子中的Gly或Ser,所述连接子包含(GlynSer)m, m和η如上文所述。示例性的连接子具有如SEQ ID NO :2 所示的序列(Gly4S) 5。其他示 例性的连接子序列展示在SEQ ID NOS =225-228中。在某些实施方案中，人源化CD37特异性结合结构域或CD37特异性结合分子与 G28-lmAb竞争对⑶37的结合。换言之，在这些实施方案中，与⑶37特异性结合结构域或 CD37特异性结合分子不存在时的G28-lmAb的CD37结合相比，在其他CD37特异性结合结构 域(例如抗CD37单克隆抗体)或CD37特异性结合分子存在时，G28-lmAb的CD37结合减 少。竞争性结合检测是本领域内已知的，诸如实施例4-6中描述的那些，并且可以用于确定 给定的CD37特异性结合结构域或CD37特异性结合分子是否能够与G28_lmAb竞争对CD37 的结合。人源化CD37特异性SMIP多肽在某些实施方案中，CD37特异性结合分子是CD37特异性小模块化免疫药物 (SMIP)多肽。SMIP蛋白是结合结构域-免疫球蛋白融合蛋白，所述SMIP蛋白通常从其氨 基末端至羧基末端包含源自免疫球蛋白的结合结构域(例如scFv)、铰链区和效应结构域 (例如IgG CH2和CH3区)。在优选的实施方案中，所述CD37特异性结合SMIP多肽是人源 化的。人源化CD37特异性结合SMIP多肽的铰链区可以是免疫球蛋白铰链区。在某些实 施方案中，所述铰链区是野生型免疫球蛋白铰链区，诸如IgG铰链、IgA铰链、IgD铰链、IgE 铰链或其包含核心铰链区的片段(例如长度为4至20或5至15个氨基酸)。在某些优选 的实施方案中，铰链区可以是选自人IgGl、人IgG2、人IgG3、人IgG4或其片段或变体的抗 体铰链区。在一些实施方案中，所述铰链区是野生型免疫球蛋白铰链区或其部分，例如人免 疫球蛋白铰链区。这些实施方案的示例性的铰链是如SEQ ID NO :90所示的野生型人IgGI 铰链区、如SEQ ID NO :115所示的野生型人IgAl铰链、如SEQ ID NO :116所示的野生型人 IgA2铰链、如SEQ ID NO :118所示的野生型人IgG3铰链、如SEQ ID NO :258所示的人IgG3 铰链的部分和如SEQ ID NO :127所示的人IgD铰链。在某些实施方案中，可以将一个或多 个氨基酸残基添加到野生型免疫球蛋白铰链区的氨基或羧基末端作为融合蛋白构建体设 计的部分。这些氨基酸残基被称为“接头(junction)氨基酸”(参见表4)。在某些实施方案中，所述铰链区是改变的(突变的)野生型免疫球蛋白铰链区，诸如改变的野生型IgG免疫球蛋白铰链区或野生型免疫球蛋白铰链区的改变的部分。例如， 所述野生型人IgGl铰链区含有3个半胱氨酸残基-最N末端的半胱氨酸被称为第一半胱 氨酸，而铰链区中最C末端的半胱氨酸是第三半胱氨酸。在某些实施方案中，突变的人IgGl 铰链区仅具有两个半胱氨酸残基，例如第一半胱氨酸被丝氨酸取代的人IgGl铰链区。在某 些其他实施方案中，突变的人IgGl铰链区仅具有一个半胱氨酸残基。在某些实施方案中， 人IgGl铰链区中的第三半胱氨酸C-末端的脯氨酸被例如丝氨酸取代。示例性的突变的人 IgGl 铰链区如 SEQ ID NOS :92、94、102、104、255、256、106、108、257、96、110、112、98 和 100 所示。示例性的突变的部分的人IgG3铰链区如SEQ ID NOS :120,126,259-261,122和124 所示。在某些实施方案中，可以将一个或多个氨基酸残基添加到突变的免疫球蛋白铰链区 的氨基或羧基末端作为融合蛋白构建体设计的部分。这些修饰的铰链区的实例在SEQ ID NOS =231-235中以斜体字表示。在某些实施方案中，铰链区包含或具有与野生型免疫球蛋白铰链区至少80%，至 少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至 少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少 97%、至少98%、至少99%同一的序列，所述野生型免疫球蛋白铰链区例如野生型人IgGl、 IgG2、IgG3、IgG4、IgAl、IgA2、IgD 和 IgE 铰链。在其他实施方案中，改变的铰链区可以基于野生型免疫球蛋白铰链区(例如IgGl 铰链区)并且当与野生型免疫球蛋白铰链区相比，含有一个或多个(例如1、2、3或4)插入、 一个或多个(例如1、2、3或4)缺失、一个或多个(例如1、2、3或4)氨基酸取代(例如保守 型氨基酸取代或非保守型氨基酸取代)，或上述突变的组合，但前提是修饰的铰链保留适于 使融合结合蛋白的结合结构域正确定向以与其靶标相互作用的柔性或刚性。所述插入、缺 失或取代可以在野生型免疫球蛋白铰链区的任何位置，包括位于氨基或羧基末端或两者。如本文所述，⑶37特异性SMIP多肽可以包含免疫球蛋白Ch2区。在某些实施方案 中，所述免疫球蛋白Ch2区是野生型免疫球蛋白Ch2区，诸如野生型人免疫球蛋白Ch2区，包括 野生型人IgAl、IgA2、IgD、IgE、IgGl、IgG2、IgG3、IgG4和IgM C02 区。在某些实施方案中， 所述免疫球蛋白Ch2区是人IgGlC112区。在某些其他实施方案中，所述免疫球蛋白Ch2区是改变的野生型免疫球蛋白Ch2区。 例如，所述改变的野生型免疫球蛋白Ch2区可以是人IgGlC112区，但在位置234至238、253、 279、310、318、320、322 和 331 具有 1 个、2 个、3 个、4 个或 5 个突变(EU 编号，Ward etal.， 1995 Therap. Immunol. 2 :77-94)。这些位置的突变降低或消除抗体依赖性细胞介导的细胞 毒性(ADCC)活性，Fc受体结合能力和/或补体结合。如本文所述，人源化⑶37特异性SMIP多肽可以包含免疫球蛋白Ch3区。在某些实 施方案中，免疫球蛋白Ch3区多肽是野生型免疫球蛋白Ch3区多肽，包括来自不同物种(即 人、小鼠、大鼠或其他哺乳动物)的不同免疫球蛋白同种型(例如IgA, IgD, IgGU IgG2、 IgG3、IgG4、IgE或IgM)的任何一个的野生型CH3区。在其他实施方案中，免疫球蛋白Ch3区 多肽是突变的免疫球蛋白Ch3区多肽。免疫球蛋白Ch3区中的突变可以在一个或多个参与补 体结合的位置，例如位于H433或N434。在某些实施方案中，人源化⑶37特异性SMIP多肽可以含有一个或多个其他区。这 些其他区可以是位于氨基末端用于表达的SMIP多肽的分泌的前导序列、其他Fc亚区(例如IgM或IgE的野生型或突变的Ch4区)、位于其羧基末端用于鉴定或纯化用途的尾部序列 (例如用于检测或纯化的表位标签，包括6组氨酸标签或FLAG表位)或由特异性表达系统 的使用产生的其他氨基酸残基。本公开内容的示例性的前导肽包括天然前导序列或其他， 例如如SEQ ID NOS 223和224所示的那些序列。本公开内容包括表现出与SEQ ID NO :2中所示的多肽至少80%同一性(例如 82%、84%、85%、86%、88%、90%、92%、94%、95%、96%、97%、98% 或 99% )的 CD37 特 异性SMIP多肽，其中所述CD37特异性SMIP多肽结合CD37。在其他实施方案中，与SEQ ID NO 2具有至少80%同一性的这些多肽还可以被人源化。示例性的人源化⑶37特异性SMIP 多肽包含选自以下的任何氨基酸序列、基本上由选自以下的任何氨基酸序列组成或由选自 以下的任何氨基酸序列组成:SEQ ID NOS :6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、洸、28、30、32、 34、36、38、40、42、44、46、48、52、80、82、84、86、88 和 222，其中所述前导序列是缺失的，以及 SEQ ID NOS :247-254 和 266-269。如本文所用的“序列同一性”是指在比对序列并且如果需要的话引入空位以达到 最大序列同一性百分比后，并且不将任何保守型取代视为序列同一性的部分，一个序列中 的氨基酸残基与另一参考多肽序列中的氨基酸残基一致的百分比。通过NCBI BLAST2. 0 软件，如 Altschul et al. (1997)" Gapped BLAST and PSI-BLAST :a new generationof protein database search programs" , Nucleic Acids Res. 25 :3389-3402 所定义的，使 用设定为默认值的参数，生成所述序列同一性百分比值。在优选的实施方案中，本公开内容提供了人源化CD37特异性SMIP多肽，其从氨基 末端至羧基末端包含人源化重链可变区(Vh)、(G4S)5连接子(SEQ ID NO :2 )、人源化轻 链可变区、改变的IgGl铰链、人IgGlCH2区和人IgGlCH3区。所述人源化重链可变区 从其氨基末端至其羧基末端包含人重链FRl^ SEQ ID NO 63所示的重链⑶Rl、人重链 FR2、如 SEQ ID NO 65 所示的 CDR2、人重链 FR3、如 SEQ ID NO :67、68 或 69 所示的 CDR3 和 人重链FR4。所述人源化轻链可变区从其氨基末端至其羧基末端包含人轻链FRlJn SEQ IDNO :61或62所示的轻链CDR1、人轻链FR2、如SEQ ID NO :64所示的轻链CDR2、人轻链FR3 和如SEQ ID NO 66所示的轻链CDR3和人轻链FR4。在某些以上优选的实施方案中，人重链FR1、FR2和FR3分别包含SEQ ID NOS 144、 151和158，并且所述重链FR4包含SEQ IDNO :161或162。在其他优选的实施方案中，人轻 链FR1、FR2、FR3和FR4分别包含SEQ ID NOS :171、182、195和206。可选地，所述重链和轻 链都含有这些序列。出人意料地，CAS-024SMIP蛋白(1)以比其他人源化形式的CAS-006 (例如 CAS-002、CAS-003 ；参见实施例2和5)高达约25倍的水平表达，(2)能够结合⑶37以及 CAS-006，而其他人源化形式则不能(参见实施例4和幻，和C3)相比于其他人源化形式的 异质性，以同质的分子群产生(参见实施例3)。在优选的实施方案中，本公开内容提供了 CD37 特异性结合蛋白，其包含 CAS-024(SEQ ID NO :253)或由 CAS-024 (SEQ ID NO :253) 组成。特别是，该人源化CD37特异性结合分子与其他人源化分子相反，与其母体嵌合分子 (CAS-006，具有来自小鼠抗人⑶37单克隆抗体G28-1的免疫球蛋白可变区的SMIP蛋白) 具有基本相同的CD37结合亲和力，与其他人源化分子相比，以高水平表达，和/或与其他人 源化分子相反，当例如通过尺寸排阻色谱法(SEC)纯化时，显示出高度的同质性。此外，该CAS-024CD37特异性结合分子已显示出在抑制肿瘤生长和导致长期肿瘤消退中是有效的。本公开内容还包括分离的核酸分子，其包含编码人源化⑶37特异性结合分子及 其组分的核苷酸序列，所述组分包括人或人源化FR、CDR、人源化轻链可变区、人源化重链可 变区、人源化scFv和人源化SMIP多肽。编码人源化CD37特异性SMIP多肽的示例性的分 离的核酸分子包括包含 SEQ ID NOS :5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、四、31、33、35、 37、39、41、43、45、47、51、79、81、83、85、87和221的那些核酸分子。在一个实施方案中，本公 开内容包括包含这些核酸分子的载体和包含所述载体的宿主细胞。本公开内容还包括产生本文所述的多肽的过程，其包括在适合的条件下培养所述 宿主细胞以表达所述多肽，并任选地从培养物分离所述多肽。用于联合治疗的化合物本公开内容还提供了使用本领域已知的或本文公开的任何CD37特异性结合分子 和双功能化学治疗剂的联合治疗(例如苯达莫司汀)。用于联合治疗的CD37特异性结合分子可以是含有CD37特异性结合结构域的任何 形式，包括抗⑶37抗体、抗⑶37抗体的Fab片段、⑶37特异性单链Fv (scFv)、⑶37特异性 SMIP、⑶37特异性PIMS、⑶37特异性SCORPION和其他包含至少一种⑶37特异性结合蛋白 的双特异性或多特异性结合蛋白。在某些实施方案中，用于与双功能化学治疗剂的联合治疗的CD37特异性结合 分子是CD37特异性抗体。这种抗体包括在第3届人类白细胞分化抗原国际会议(Thrid HLDA Workshop)中用于表征 CD37 抗原的那些抗体，即 HD28、G^_l、HH1、BI14、WR17 禾口 F93G6 (参见，Ling and MacLennan, pp. 302-335 于 Leucocyte Typing III. White CellDifferentiation Antigens (III 型白细胞.白细胞分化抗原)，OxfordUniversity Press (1987))。其他用于联合治疗的CD37特异性抗体包括RFB-7、Y29/55, MB-I、 M-B371、M-B372 禾口 IP0_24(参见，Moldenhaurer, J.Biol·，Regul. Homeost. Agents, 14 281-283 0000)，说明了所有这些抗体仅识别一个CD37表位，和^Awartz-Albiez et al.， 14 :905-914 (1988)，指出了所述表位位于CD37的糖类部分中)。可以用于联合治疗的另一 CD37特异性抗体是S-B3 (Biosys)。在某些实施方案中，用于与双功能化学治疗剂的联合治疗的CD37特异性结合分 子是CD37特异性SMIP多肽。示例性的SMIP多肽包含SEQ ID NO :2。其他示例性的SMIP 多肽包括WO 2005017148中描述的那些多肽，诸如(1)包含G28_lSCFv、改变的人IgGl铰 链和野生型人IgGlCH2和CH3结构域的G28_lscFv (SSS-S)H WCH2WCH3，在所述改变的人 IgGl铰链中，人IgGl铰链区中所有三个半胱氨酸残基和第三半胱氨酸羧基末端的脯氨酸 被突变为丝氨酸残基；⑵包含G28-lscFV、人IgA铰链的部分和人IgGlCH2和CH3结构域 的(^8-lscFv IgAH WCH2WCH3 ； (3)包含G28_lscFv、改变的人 IgGl 铰链和人 IgGlCH2 和 CH3 结构域的G28-lscFv VHLlIS (SSS-S) H WCH2CH3，其中位于重链可变区的位置11的亮氨酸 被丝氨酸取代，在所述改变的人IgGl铰链中，铰链区中所有三个半胱氨酸残基和第三半胱 氨酸羧基末端的脯氨酸被突变为丝氨酸残基；(4)包含G28-lscFV、改变的人IgGl铰链和人 IgGlCH2和CH3结构域的G^-IscFv VHLlIS(CSS-S)H WCH2CH3，其中位于重链可变区的位 置11的亮氨酸被丝氨酸取代，在所述改变的人IgGl铰链中，位于第二和第三位置的半胱氨 酸残基和第三半胱氨酸羧基末端的脯氨酸被丝氨酸残基取代；( 包含G28-lscFV、改变的人 IgGl 铰链和人 IgGlCH2 和 CH3 结构域的 G^-IscFv VHLllS (CSC-S) H WCH2CH3，其中位于 重链可变区的位置11的亮氨酸被丝氨酸取代，在所述改变的人IgGl铰链中，位于第二位置 的半胱氨酸残基和位于第三位置的半胱氨酸羧基末端的脯氨酸被丝氨酸残基取代；(6)包 含 G^-lscFv、改变的人 IgGl 铰链和人 IgGlCH2 和 CH3 结构域的 G^-IscFv VHlIS (SSC-P) H WCH2WCH3，其中位于重链可变区的位置11的亮氨酸被丝氨酸取代，在所述改变的人IgGl 铰链中，铰链区中第一和第二半胱氨酸残基被突变为丝氨酸残基；(7)包含G28-lscFV、改 变的人 IgGl 铰链和人 IgGlCH2 和 CH3 结构域的 G^-IscFv VHllS (SCS-S) H WCH2WCH3，其中 位于重链可变区的位置11的亮氨酸被丝氨酸取代，在所述改变的人IgGl铰链中，铰链区中 第一和第三半胱氨酸残基和第三半胱氨酸羧基末端的脯氨酸被突变为丝氨酸残基；(8)包 含(^8-lscFv、改变的人 IgGl 铰链和人 IgGlCH2 和 CH3 结构域的(^8_lscFv VHLllS (CCS-P) H WCH2WCH3，其中位于重链可变区的位置11的亮氨酸被丝氨酸取代，在所述改变的人IgGl 铰链中，铰链区中第三半胱氨酸残基被丝氨酸取代；(9)包含G28-lscFV、改变的人IgGl铰 链和人CH2和CH3结构域的G^-IscFv VHLlIS(SCC-P)H WCH2WCH3，其中位于重链可变区 的位置11的亮氨酸被丝氨酸取代，在所述改变的人IgGl铰链中，第一半胱氨酸残基被丝氨 酸取代；(IO)G^-IscFv VHLllS mlgE CH2CH3CH4，其包含以8_1 scFv 和小鼠 IgE CH2、CH3 和CH4区，其中位于重链可变区的位置11的亮氨酸被丝氨酸取代；(Il)G^-IscFv VHLllS mlgA WIgACH2T4CH3，其包含G28_lscFv、小鼠IgA铰链和野生型IgA CH2和缺乏4个羧基 氨基酸 GTCY 的截短的 IgA CH3 结构域(SEQ ID NO :265) ； (12) G28_lscFv VHLllS hlgE CH2CH3CH4，其包含G^-IscFv和人IgE CH2、CH3和CH4区；其中位于重链可变区的位置11 的亮氨酸被丝氨酸取代；和(13)G28-lscFv VHLllS hIgAHWIgACH2TCH3，其包含G28_lscFv、 人IgA铰链的部分、野生型IgACH2和缺乏4个羧基氨基酸GTCY的截短的IgA CH3结构域 (SEQ IDNO :265)，其中位于重链可变区的位置11的亮氨酸被丝氨酸取代。在某些实施方案中，用于与双功能化学治疗剂的联合治疗的CD37特异性结合分 子是本文所述的人源化CD37特异性结合分子，包括人源化抗CD37抗体、人源化抗CD37抗 体的Fab片段、人源化⑶37特异性PIMS蛋白、人源化⑶37特异性SCORPION蛋白和其他包 含至少一种人源化CD37特异性结合蛋白的双特异性或多特异性结合蛋白，特别是人源化 CD37特异性单链Fv (scFv)和人源化CD37特异性SMIP多肽。本公开内容中考虑的某些⑶37特异性结合分子具有对于⑶37的约0. 5至约IOnM 的亲和力。本公开内容中考虑的某些⑶37结合分子的另一特征是它们表现出约5至约30 天的循环半衰期。在某些实施方案中，⑶37特异性结合分子能够在⑶37特异性结合中与G28_lmAb竞争。苯达莫司汀(4-[5-[双(2-氯乙基)氨基]-1-甲基苯并咪唑-2-基]丁酸)是具 有烷化剂(alkylator)和抗代谢物活性的氮芥。苯达莫司汀具有烷化基团和苯并咪唑环。 该烷化基团允许苯达莫司汀代谢产物烷基化和交联大分子，这导致DNA、RNA和蛋白合成抑 制，以及随后的凋亡。苯并咪唑环可以允许苯达莫司汀作为嘌呤类似物。盐酸苯达莫司汀
具有商品名 TRE AND A 和 RIBOMUSTIN 。尽管苯达莫司汀或其盐类是可以与CD37特异性结合分子联合使用的优选的治疗 剂，但包含一个或多个烷化基团并能够作为嘌呤类似物发挥功能的其他治疗剂也可以与按照本公开内容的CD37特异性结合分子联合使用。如本文所用的术语“烷化基团”是指能够使包含该基团的化合物将烷基基团连接 到DNA的基团。所述包含烷化基团的化合物可以被称为“烷化剂”。在某些实施方案中，烷 化剂是氮芥。术语“嘌呤类似物”是指抗代谢物，其模拟代谢嘌呤(例如腺嘌呤和鸟嘌呤)的结 构并在嘌呤环具有不同于代谢嘌呤的1个、2个、3个或4个取代基。示例性的嘌呤类似物 包括硫唑嘌呤、疏基嘌呤、硫鸟嘌呤、氟达拉滨、喷司他丁和克拉曲滨。治疗剂“能够作为嘌呤类似物发挥功能”，如果其具有嘌呤类似物的至少一个功 能。示例性的嘌呤类似物的功能包括干扰或抑制嘌呤核苷酸合成、嘌呤核苷酸代谢、核酸合 成、核酸加工或核酸功能，诸如抑制核糖核苷酸还原酶、DNA聚合酶、腺苷脱氨酶，和被合并 入 DNA 或 RNA。组合物和方法在一方面中，本公开内容提供了减少B细胞或治疗与异常的B细胞活性相关的疾 病的方法，所述方法包括给予个体(即具有或疑似具有与异常的B细胞活性相关的疾病的 个体)有效量的本文提供的人源化CD37特异性结合分子(例如CAS-024)，所述个体需要减 少B细胞或治疗与异常的B细胞活性相关的疾病。在另一方面，本公开内容提供了减少B细胞或治疗与异常的B细胞活性相关的疾 病的方法，所述方法包括给予个体有效量的CD37特异性结合分子(例如CAS-024)和双功 能化学治疗剂(例如苯达莫司汀)，所述个体需要减少B细胞或治疗与异常的B细胞活性相 关的疾病。如上文所述，用于与双功能化学治疗剂的联合治疗的CD37特异性结合分子不限 于人源化CD37特异性结合分子，还包括其他未被人源化的CD37特异性结合分子。在一个实施方案中，包含⑶37治疗剂和双功能化学治疗剂的组合物在减少B细胞 或治疗与异常的B细胞活性相关的疾病中协同作用。协同作用的2种或更多化合物相互 作用，这样使得化合物的联合效应大于每种化合物单独给药时的个别效应之和(参见，例 如Berenbaum，Pharmacol. Rev. 41 :93，1989)。例如，可以通过多种机械和经验模型分析靶 向CD37的小模块化免疫药物和另一试剂或化合物之间的相互作用(参见，例如Ouzoimov et al.，Antivir. Res. 55 =425,2002)。分析试剂组合之间相互作用的常用方法采用构建等 效图(等效曲线，也称为等效线图解法)，其中所述试剂组合(da、db)在图上由点表示，所 述图的轴是个别试剂的剂量轴(参见，例如Ouzoimov et al.，同上；也可参见hllarida， J. Pharmacol. Exp. Therap. 298 :865,2001)。本领域已知的用于分析药物-药物相互作用的另一方法(拮抗作用、相加作用、 协同作用)包括按照中效原理测定联合指数(Cl)，从而提供化合物单独给药和联合给药 的 IC50 值的估计(参见，例如 Chou. InSynergism and Antagonism Chemotherapy (协同作 用禾口拮抗作用化学治疗)· Eds. Chou and Rideout. Academic Press, San Diego Calif., pages61-102,1991 ；CalcuSyn 软件)。小于1的CI值代表协同活性，等于1代表相加活 性，并且大于1代表拮抗作用。仍然另一示例性的方法是独立效应法(Pritchard and Shipman, Antiviral Res. 14 :181,1990 ；Pritchard and Shipman, Antiviral Therapyl 9,1996 ；MACSYNERGY II 软件，University of Michigan, Ann Arbor，Mich.)。MACSYNERGY II 软件通过将计算的相加表面与观察到的数据比较以生成显示统计学上大于预期(协同)或小于预期(拮抗) 的化合物相互作用的区(以体积的形式)的差异绘图，允许化合物相互作用的3维(3-D) 检测。例如，包含CD37特异性结合分子和改变病毒复制的双功能化学治疗剂的组合物会被 视为具有协同活性或具有协同效应，当通过协同峰的体积计算而产生的协同的体积优选地 大于相加效应(即，每种试剂单独的效应加在一起)约15%，或优选地大于相加效应约2倍 至10倍，或优选地约大于相加效应3倍至5倍或更多倍。在其他实施方案中，可以给予CD37特异性结合分子和双功能化学治疗剂，从而在 B细胞恶性肿瘤或B细胞癌症的治疗中协同作用。B细胞恶性肿瘤或B细胞癌症包括B细 胞淋巴瘤[诸如不同形式的霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤(NHL)或中枢神经系统淋巴瘤]、白 血病[诸如急性成淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、多毛细胞性白血病 和慢性成髓细胞白血病]和骨髓瘤(诸如多发性骨髓瘤)。其他B细胞癌症包括小淋巴细 胞淋巴瘤、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、血浆细胞骨髓 瘤，骨的孤立性浆细胞瘤、骨外浆细胞瘤、粘膜相关(MALT)淋巴样组织的结外边缘区B细胞 淋巴瘤，结边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔 (胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤，原发性渗出性淋巴瘤、伯基特(Burkitt) 淋巴瘤/白血病，不确定恶性潜能的B细胞增殖、淋巴瘤样肉芽肿病和移植后淋巴增殖性病 症。伯基特淋巴瘤(或“伯基特B细胞恶性肿瘤”或“伯基特肿瘤”或“恶性淋巴瘤，伯 基特型”)是淋巴系统癌症(特别是B淋巴细胞)。其可以分为三种主要临床变异型地方 性、散发性和免疫缺陷相关变异型。非伯基特B细胞恶性肿瘤包括但不限于，B-细胞慢性淋巴细胞白血病(CLL)/小 淋巴细胞淋巴瘤、B细胞幼淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病(ALL)、淋巴浆细胞淋 巴瘤(包括但不限于，Waldenstrom巨球蛋白血症)、边缘区淋巴瘤(包括但不限于，脾边缘 区B细胞淋巴瘤、结边缘区淋巴瘤和粘膜相关淋巴组织(MALT)的结外边缘区B细胞淋巴瘤 型)，多毛细胞性白血病、浆细胞骨髓瘤/浆细胞瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、弥 散性大细胞B细胞淋巴瘤、转化性大B细胞淋巴瘤、纵隔大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞 淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤和非伯基特非霍奇金淋巴瘤(NHL)。以自身抗体产生为特征的病症通常视为自身免疫性疾病。自身免疫性疾病包括 但不限于关节炎、类风湿性关节炎、青少年类风湿性关节炎、骨关节炎、多软骨炎、牛皮癣 性关节炎、牛皮癣、皮炎、多肌炎/皮肌炎、包涵体肌炎、炎性肌炎、中毒性表皮坏死松解症、 系统性硬皮病和硬化症、CREST综合征、炎性肠病相关应答、克罗恩病、溃疡性结肠炎、呼吸 窘迫综合征、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、脑(脊)膜炎、脑炎、眼色素层炎、结肠炎、肾小 球肾炎、变应性疾病状态、湿疹、哮喘、涉及T细胞浸润和慢性炎症应答的疾病状态、动脉 粥样硬化、自身免疫性心肌炎、白细胞粘附缺陷、系统性红斑狼疮(SLE)、亚急性皮肤红斑 狼疮、盘状狼疮、狼疮脊髓炎、狼疮脑炎、青少年发作型糖尿病、多发性硬化、变应性脑脊髓 炎、视神经脊髓炎、风湿热、小舞蹈病(Sydenham’ s chorea)、细胞因子和T淋巴细胞介导 的急性和延迟性超敏反应相关的免疫应答、结核病、结节病、包括韦格纳(氏)肉芽肿病 和Churg-Mrauss病在内的肉芽肿病、粒细胞缺乏症、血管炎(包括超敏反应血管炎/脉 管炎、ANCA和类风湿性脉管炎)、再生障碍性贫血、戴-布二氏贫血(Diamond Blackfananemia)、包括自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的免疫性溶血性贫血、恶性贫血、纯红细胞再 生障碍(PRCA)、因子VIII缺陷、血友病A、自身免疫性嗜中性白血球减少症、全血细胞减少 症、白血球减少症、涉及白细胞血细胞渗出的疾病、中枢神经系统(CNS)炎症病症、多器官 损伤综合征、重症肌无力、抗原-抗体复合物介导的疾病、抗肾小球基底膜病、抗磷脂抗体 综合征、变应性神经炎、白塞氏病、Cast 1 eman综合征、Goodpasture综合征、Lambert-Eaton 肌无力综合征、Reynaud综合征、Sjorgen综合征、Stevens-Johnson综合征、实体器官移植 排斥、移植物抗宿主病(GVHD)、大疱性类天疱疮、天疱疮、自身免疫性多内分泌腺病、血清阴 性脊柱关节病、Reiter病、僵人综合征、巨细胞动脉炎、免疫复合物肾炎、IgA肾病、IgM多 神经病或IgM介导的神经病、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、血栓性血小板减少性紫癜 (TTP)、亨-舍二氏紫癜(Henoch-khonlein purpura)、自身免疫性血小板减少症、包括自 身免疫性睾丸炎和卵巢炎的睾丸和卵巢的自身免疫性疾病、原发性甲状腺机能低下；自身 免疫性内分泌疾病，包括自身免疫性甲状腺炎、慢性甲状腺炎(桥本甲状腺炎)、亚急性甲 状腺炎、特发性甲状腺机能减退(症)、爱迪生氏病(Addison' s disease)、格雷夫斯氏病 (Grave' s disease)、自身免疫性多腺体综合征(或多腺体内分泌病综合征)、也称为胰岛 素依赖性糖尿病(IDDM)的I型糖尿病和Sheehan综合征；自身免疫性肝炎、淋巴细胞间质 性肺炎(HIV)、梗阻性细支气管炎(非移植)vs NSIP、Guillain-Barre综合征、大血管血管 炎(包括风湿性多肌病和巨细胞(高安氏(Takayasu' s))动脉炎)、中血管血管炎(包括 川崎氏病(Kawasaki' sdisease)和结节性多动脉炎)、结节性多动脉炎(PAN)强直性脊 柱炎、伯格氏病(IgA肾病)、急进性肾小球性肾炎、原发性胆汁性肝硬变、乳糜泻(麸质肠 病)、冷球蛋白血症、肝炎相关的冷球蛋白血症、肌萎缩侧索硬化(ALS)、冠状动脉病、家族 性地中海热、显微镜下多血管炎、Cogan综合征、Whiskott-Aldrich综合征和血栓闭塞性血 管炎、自身免疫性甲状腺疾病(例如格雷夫斯氏病病和桥本甲状腺炎)、Sjogren综合征和 特发性炎症性肌病(MM)、包括皮肌炎(DM)和多肌炎(PM)。也可以用人源化CD37特异性结 合分子或CD37特异性结合分子和双功能化学治疗剂的组合治疗以上自身免疫性疾病。在本公开内容的一方面，人源化CD37特异性结合分子或CD37特异性结合分子与 双功能化学治疗剂的组合在药物组合物中给药。为了将人源化CD37特异性结合分子或 CD37特异性结合分子与双功能化学治疗剂的组合给予人或测试动物，优选将所述结合分子 或所述组合配制在包含一个或多个药学上可接受的载体的组合物中。短语“药学上或药理 学上可接受的”如下文所述，是指当使用本领域熟知的途径给药时，不产生变应性或其他不 利反应的分子实体和组分。“药学上可接受的载体”包括任何和全部临床上有用的溶剂、分 散介质、包被、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。此外，化合物可以与水或常见有机 溶剂形成溶剂化物。也包括这些溶剂化物。取决于给药途径，含有本公开内容方法中使用的人源化CD37特异性结合分子或 CD37特异性结合分子与双功能化学治疗剂的组合本公开内容的药物组合物可以含有药学 上可接受的载体或添加剂。这些载体或添加剂的实例包括水、药学可接受的有机溶剂、胶 原、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯酮、羧基乙烯聚合物、羧甲基纤维素钠、丙烯酸钠、藻酸钠、水溶葡 聚糖、羧甲基淀粉钠、果胶、甲基纤维素、乙基纤维素、黄胞胶、阿拉伯胶、酪素、明胶、琼脂、 双甘油、甘油、丙二醇、聚乙二醇、凡士林、石蜡、硬脂醇、硬脂酸、人血清白蛋白(HSA)、甘露 醇、山梨醇、乳糖、药学可接受的表面活性剂等。取决于本公开内容的剂型，使用的添加剂选自，但不限于以上的物质或其组合，视情况而定。药物组合物的剂型根据选择的给药途径会不同(例如溶液、乳状液)。包含待给予 的抗体的合适的组合物可以在生理上可接受的媒介或载体中制备。对于溶液或乳状液，合 适的载体包括，例如，水溶液或醇/水溶液、乳状液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。胃肠外 媒介可以包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡糖糖和氯化钠、乳酸林格氏或不挥发性油。静 脉内媒介可以包括各种添加剂、防腐剂或流体、营养素或电解质补充剂。多种水性载体，例如水、缓冲水、0. 4%盐水、0. 3%甘氨酸或水性悬浮液可以含有 与适于制备水性悬浮液的赋形剂混合的活性化合物。这种赋形剂是悬浮剂，例如羧甲基纤 维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯酮、西黄蓍胶和阿拉伯胶；分 散剂或润湿剂可以是天然存在的磷脂，例如卵磷脂，或烯烃氧化物与脂肪酸的缩合产物， 例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或氧化乙烯与长链脂肪醇的缩合产物，例如十七乙烯氧基十六醇 (h印tadecaethyl-eneoxycetanol)，或氧化乙烯与源自脂肪酸和己糖醇的部分酯类的缩合 产物，例如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯，或氧化乙烯与源自脂肪酸和己糖醇酸酐的部分酯类 的缩合产物，例如聚乙烯去水山梨糖醇单油酸酯。所述水性悬浮液还可以含有一种或多种 防腐剂，例如乙基、或正丙基、对羟基苯甲酸酯。CD37特异性结合分子、CD37特异性结合分子与双功能化学治疗剂的组合或包含 所述结合分子或所述组合的组合物可以冻干用于储存，并且使用前在合适的载体中复原 (reconstitution)。该技术已显示出对于常规免疫球蛋白有效。可以使用任何合适的冻干 和复原技术。本领域技术人员应当理解到，冻干和复原可能导致不同程度的活性丢失，因此 可能需要调整使用水平来补偿。适于通过添加水制备水性悬浮液的可分散的粉末和颗粒提供活性化合物，与分散 剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂形成混合物。合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂由 上文已提及的那些作为举例说明。这些制剂中CD37特异性结合分子或双功能化学治疗剂的浓度可以广泛变化，例 如按重量计从少于约0.5%，通常为或至少约到多至15或20%，主要根据液体体 积、粘度等，按照选择的特定给药模式进行选择。因此，用于胃肠外注射的典型药物组合 物可以配制为含有Iml无菌缓冲水和50mg抗体。用于静脉内输注的典型组合物可以配 制为含有250ml无菌林格氏液和150mg抗体。制备胃肠外可给药的组合物的实际方法 对于本领域技术人员是已知的或显而易见的，并且更详细地描述于，例如Remington' s Pharmaceutical Science (雷明顿 ·禾斗学)，15th ed. , Mack Publishing Company, Easton,Pa. (1980)中。每次给药的有效剂量的⑶37特异性结合分子(包括人源化⑶37特 异性结合分子)在0. Olmg至IOOOmg每公斤体重的范围内。所述药物组合物可以是以下形式无菌可注射的水性、油状悬液，用于临时制备无 菌可注射溶液或分散剂的分散剂或无菌粉末。可以按照已知领域，使用上文提及的那些合 适的分散剂或润湿剂和悬浮剂配制所述悬液。所述无菌可注射制剂也可以是无毒的胃肠外 可接受稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬液，例如1，3_ 丁二醇中的溶液。所述载体可 以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)，其合适的混合物， 植物油，林格氏液和等渗氯化钠溶液的溶剂或分散介质。此外，无菌、不挥发性油常规作为 溶剂或悬浮介质。为此目的，可以使用任何温和的不挥发性油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，例如油酸的脂肪酸可用于制备可注射剂。在所有情况下，所述剂型必须是无菌的并且必须流动的，流动的程度是存在易注 射性。例如，通过使用例如卵磷脂的包被、通过在分散的情况下保持所需颗粒的大小和通过 使用表面活性剂，可以保持适当的流动性。所述剂型在生产和储存条件下必须是稳定的并 且必须针对例如细菌和真菌的微生物的污染作用进行防腐。通过各种抗细菌剂或抗真菌 剂，例如对羟苯甲酸酯，氯丁醇，苯酚，山梨酸，硫柳汞等，实现微生物作用的预防。在很多情 况下，包括例如糖类或氯化钠的等渗剂是理想的。通过在组合物中使用例如单硬脂酸铝和 明胶的延迟吸收的试剂可以实现可注射组合物的延长的吸收。用于给药的组合物可以与摄取或吸收增强剂配制以增加其功效。这些增强剂包 括，例如水杨酸盐、甘氨胆酸盐/亚油酸盐、乙醇酸盐、抑酞酶、杆菌肽、SDS、葵酸盐等。参 见，例如 J. Wiarm. Sci. ,85 :1282-1285,1996)和 Oliyai and Stella (Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol.，32 :521-544,1993)。此外，使考虑在本公开内容中使用的组合物的亲水性和疏水性性质良好平衡，从 而增强其体外并且特别是体内用途的效用，而缺乏此平衡的其他组合物具有显著降低的效 用。具体而言，考虑在本公开内容中使用的组合物在水性介质中具有合适程度的可溶性，这 允许体内的吸收和生物利用度；在脂质中也具有一定程度的可溶性，这允许所述化合物穿 过细胞细胞膜到达推定的作用位点。因此，所考虑的抗体组合物，当它们可以被递送到靶抗 原活性的位点时，是最大程度上有效的。在一方面中，本公开内容的方法包括CD37特异性结合分子组合物的给药的步骤。 在某些实施方案中，所述化合物的组合可以同时给药，在同一药学上可接受的载体一起给 药或分别地(但同时)给药。在其他实施方案中，CD37免疫治疗剂(即CD37特异性结合 分子)和双功能化学治疗剂可以以任何顺序以及任何组合相继给药。结合分子、双功能化学治疗剂或联合组合物可以口服给药、局部给药、经皮给药、 胃肠外给药、通过吸入喷雾给药、阴道给药、经直肠给药或通过颅内注射给药或其任何组合 进行给药。在一个实施方案中，所述CD37特异性结合分子和双功能化学治疗剂经胃肠外同 时或相继给药。如本文使用的术语胃肠外包括皮下注射、静脉内注射、肌肉内注射、脑池内 注射或输注技术。也考虑通过静脉内注射、真皮内注射、肌肉内注射、乳房内注射、腹膜内注 射、鞘内注射、眼球后注射、肺内注射和或在特定部位的手术植入的给药。通常，组合物基本 上无热原质以及可能对接受体有害的其他杂质。优选为注射，特别是静脉内注射。在一个实施方案中，通过直接注射入所述部位或通过可以内部递送制剂的持续递 送或持续释放机制，在癌症部位或需要治疗的受侵袭的组织进行给药。例如，生物可降解微 球或胶囊或能够持续递送组合物的其他生物可降解聚合物构型(例如可溶多肽、抗体或小 分子)可以包括在癌症附近植入的本公开内容的制剂中。还可以将治疗组合物递送到患者多个部位。所述多重给药可以同时给予或在一段 时间给药。在某些情况下，提供治疗组合物的连续供给是有利的。可以周期性给予其他治 疗，例如每小时、每天、每周或每月。结合分子、双功能化学治疗剂或本公开内容的联合组合物可以包含一个或多个结 合分子、双功能化学治疗剂或其任何组合。本公开内容也考虑的是结合分子、双功能化学治 疗剂或联合组合物与其他治疗剂的联合给药。本公开内容考虑的其他治疗在下文段落中列出。其他治疗剂可以是B细胞相关分子。本公开内容考虑的其他B细胞相关分子 包括与不是CD37的B细胞表面分子结合的结合分子。B细胞相关分子包括CD19 (B淋巴 细胞抗原⑶19，也称为B淋巴细胞表面抗原B4或Leu-12)、⑶20、⑶21、⑶22 (B细胞受 体⑶22，也称为Leu-14、B淋巴细胞细胞粘附分子或BL-CAM)、⑶23、⑶40 (B细胞表面抗 原⑶40，也称为肿瘤坏死因子受体超家族成员5、⑶40L受体或Bp50)、⑶80 (T淋巴细胞活 化抗原⑶80，也称为活化B7-1抗原、B7、B7-1或BBl)、⑶86 (T淋巴细胞活化抗原⑶86， 也称为活化B7-2抗原、B70、FUN-I或BU63)、⑶137(也称为肿瘤坏死因子受体超家族成 员9)、⑶152(也称为细胞毒性T淋巴细胞蛋白4或CTLA-4)、L6(肿瘤相关抗原L6，也 称为跨膜4超家族成员1，膜组分表面标记1或M3S1)、⑶30 (淋巴细胞活化抗原⑶30， 也称为肿瘤坏死因子受体超家族成员8、CD30L受体或Ki-1)、CD50(也称为细胞间粘附 分子3(ICAM3)或ICAM-R)、⑶讨(也称为细胞间粘附分子I(ICAMl)，或主要类别鼻病毒 属受体)、B7-H1 (活化的T细胞、B细胞和骨髓细胞表达的免疫抑制受体的配体，也称为 PD-Ll ；参见 Dong, etal. , “ B7-H1, a third member of the B7 family, co-stimulates T-cel!proliferation and interleukin-lOsecretion, " Nat. Med. , 5 1365-1369(1999), ⑶134 (也称为肿瘤坏死因子受体超家族成员4、0X40、0X40L受体、ACT35抗原或TAX转录活 化糖蛋白1受体)、41BB(4-1BB配体受体、T细胞抗原4-1BB或T细胞抗原ILA)、⑶153(也 称为肿瘤坏死因子配体超家族成员8、⑶30配体或⑶30-L)、⑶1 (也称为肿瘤坏死因子配 体超家族成员5、TNF相关活化蛋白、TRAP或T细胞抗原Gp39)、Toll受体等。考虑为其他治疗剂的化学治疗剂的实例包括烷化剂，例如氮芥(例如二氯甲基二 乙胺(mechlorethamine)、环磷酰胺、异磷酰胺、美法仑和苯丁酸氮芥)；亚硝基脲(例如卡 莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)和司莫司汀(甲基CCNU))；乙撑亚胺和甲基氰尿酰胺(例 如三亚胺嗪(TEM)、三亚乙基硫代磷酰胺(塞替派)和六甲密胺(hexamethylmelamine) (HMM、六甲密胺(altretamine))；烷基磺酸盐(例如白消安)；和三嗪(例如达卡巴嗪 (dacabazine) (DTIC))；抗代谢物、例如叶酸类似物(例如甲氨喋呤、曲美沙特和培美曲 塞(多靶向抗叶酸剂))；嘧啶类似物(例如5-氟尿嘧啶(5-FU)、氟尿嘧啶脱氧核苷、吉 西他滨、阿糖胞苷(cytosine arabinoside) (AraC、阿糖胞苷(cytarabine))、5_ 氮胞苷 和2，2' -二氟脱氧胞苷酸)；和嘌呤类似物(例如、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、硫唑嘌 呤、2'-脱氧柯福霉素(喷司他丁)、赤羟基壬基腺嘌呤(erythrohydroxynonyladenine) (EHNA)、磷酸氟达拉滨、2-氯脱氧腺苷(克拉屈滨、2-CdA)) ；I型拓扑异构酶抑制剂，例如 喜树碱(CPT)、托泊替康和伊立替康；天然产物、例如表鬼白毒素(例如依托泊苷和替尼泊 苷)；和长春花生物碱(例如长春碱、长春新碱和长春瑞滨)；抗肿瘤抗生素，例如放线菌素 D、阿霉素和博来霉素；放射增敏剂，例如5-溴脱氧尿苷、5-碘去氧尿苷和溴脱氧胞苷；钼配 位络合物，例如顺钼、碳钼和奥沙利钼；取代脲，例如羟基脲；和甲基胼衍生物，例如N-甲基 胼(MIH)和丙卡巴胼。本公开内容考虑的用于自身免疫性疾病治疗的其他治疗剂称为免疫抑制剂，其 作用为抑制或屏蔽所治疗的个体的免疫系统。免疫抑制剂包括，例如，非留体抗炎症药物 (NSAID)、镇痛药、糖皮质激素、用于关节炎治疗的缓解疾病的抗风湿性药物(DMARD)或生 物反应调节剂。DMARD说明中的组分还可以用于治疗除RA之外的许多其他自身免疫性疾病。示例性的NSAID选自布洛芬、甲氧萘丙酸、甲氧萘丙酸钠、例如万络(Vioxx)和西 乐葆(Celebrex)的Cox_2抑制剂和唾液酸化剂(sialylates)。示例性的镇痛药选自对乙 酰氨基酚、羟考酮、盐酸丙氧芬的曲马多。示例性的糖皮质激素选自可的松、地塞米松、氢 化可的松、甲基氢化泼尼松、泼尼松龙或泼尼松。示例性的生物反应调节剂包括针对细胞 表面标记(例如CD4，CD5等)的分子，细胞因子抑制剂，例如TNF拮抗剂(例如依那西普 (Enbrel)，阿达木单抗(Humira)和英夫利昔单抗(Remicade))，化学因子抑制剂和粘附分 子抑制剂。生物反应调节剂包括单克隆抗体以及重组形式分子。示例性的DMARD包括硫唑 嘌呤、环磷酰胺、环孢霉素、甲氨喋呤、青霉胺、来氟米特、柳氮磺吡啶、羟氯喹、金(口服(金 诺芬)和肌肉内)和米诺环素。考虑到结合分子组合物和其他治疗剂可以在同一制剂中同时给药。可选地，药剂 在分别的制剂中同时给药，同时是指例如药剂彼此在数分钟内、数小时内或数天内给药。在另一方面，在结合分子、双功能化学治疗剂或联合组合物给药前，给予所述其他 治疗剂。在先给药是指在用所述结合分子、双功能化学治疗剂或联合组合物治疗之前数分 钟、数小时或一周的范围内给予所述其他治疗剂。还考虑到在所述结合分子组合物的给药 之后给予所述其他治疗剂。在后给药意在描述结合分子、双功能化学治疗剂或联合组合物 治疗或给药后多于数分钟、数小时或数周的给药。还考虑到当结合分子与其他治疗剂联合给药时，其中所述其他治疗剂是细胞因子 或生长因子或化学治疗剂，所述给药还可以包括使用放射治疗剂或放射疗法。与抗体组合 物联合给予的放射疗法按照治疗医师决定的给予，剂量为通常给予治疗癌症的患者的剂量。可以以单一剂量或多剂量给予这些组合物。首先在动物模型中并且然后在临床试 验中的标准剂量反应研究揭示对于特定疾病状态和患者群体的的最佳剂量。单一剂量治疗后，结合分子、双功能化学治疗剂或联合组合物的给药减少了至少 20%的B细胞群体。在一个实施方案中，B细胞群体减少了至少约20、约30、约40、约50、约 60、约70、约80、约90或约100%。B细胞减少定义为绝对B细胞计数减少至低于正常范围 的下限。B细胞恢复定义为绝对B细胞计数恢复至个体的基线值或正常范围的例如70%、 80%、90%。此外，本公开内容的结合分子、双功能化学治疗剂或联合组合物的给药带来接 受治疗的疾病或病症中的理想临床效应。在一些实施方案中，根据本领域内熟知的并常用的临床标准以及如下文所述的临 床标准，接受按照本公开内容的治疗的患有异常的B细胞活性相关疾病的患者可以表现出 对于所述治疗的总体有益反应。例如，在受累于风湿性关节炎的患者中，所述给药可以以临床显著程度改善患者 的疾病状态[例如达到 American College ofRheumatology Preliminary Detection of Improvement (美国风湿病学院改善的初步检测)(ACR20)]，和/或触痛的和肿胀的关节中 20% 的改善和 3/5 其他 ACR 测量中 20% 的改善(Felson et al.，Arthritis Rheum. 1995， 38 :727-35)。在⑶37特异性和⑶20特异性结合分子的给药后，RA患者中对于改善的生物 测量包括通过蛋白或RNA水平测量的细胞因子水平的测量改变。感兴趣的细胞因子包括但 不限于，TNF-α、IL-1、干扰素、Blys和APRIL。细胞因子改变可以是由于减少的B细胞数或减少的活化的T细胞。在RA患者中，在CD20特异性结合分子的给药之前和之后，测量骨 更新(骨再吸收或侵蚀)相关的标记。相关的标记包括但不限于，碱性磷酸酶、骨钙蛋白、 胶原分解片段、羟基脯氨酸、耐酒石酸盐酸性磷酸酶，和RANK配体(RANKL)。RA的改善相关 的其他指标包括C反应蛋白(CRP)水平、红细胞沉降率(ESI )、类风湿因子、CCP(瓜氨酸环 肽)抗体的测量和通过流式细胞仪的系统B细胞水平和淋巴细胞计数的评价。也可以从RA 患者的滑膜测量特异性因子，包括来自滑膜活检的滑膜中B细胞水平、RANKL和上文列出的 其他骨因子和细胞因子的水平的评价。在相关方面，可以按照本领域内已知标准测量联合给药对于其他疾病的效果。例 如，考虑到按照本发明治疗的克罗恩病患者实现克罗恩病活动指数(Crohn’ s Disease Activity Index) (CDAI)中的约50至约70单位的范围的改善，其中缓解是在150单位 (Simonis et al, Scand. JGastroent. 1998,33:283-8)。150 或 200 的评分视为正常，而 450 的评分视为严重疾病评分。更理想的是CD37特异性和CD20特异性结合分子的给药导致受 累于炎性肠病的个体中核周抗嗜中性粒细胞抗体(PANCA)和抗酿酒酵母抗体(ASCA)的减 少。还考虑到按照本公开内容治疗的成年和青少年肌炎患者可以实现核心系列评价 的改善，例如所测量的核心系列的6个中的3个改善约20%，伴随不多于2个核心测量值恶 化约 25% (参见 Rider et al. , Arthritis Rheum. 2004，50 :2281-90)。还考虑到按照本公开内容治疗的SLE患者可以实现至少1分的系统性红斑狼疮活 动测定(Systemic Lupus Activity Measure) (SLAM)或系统性红斑狼疮疾病活动性指标 (SLE Disease Activity hdex) (SLEDAI)评分的改善(Gladman et al，J Rheumatol 1994， 21 :1468-71) (Tan et al.，Arthritis Rheum. 1982,25 :1271-7)。> 5 的 SLAM 评分或> 2 的SLEDAI评分被视为临床活动性疾病。对于治疗的反应可以定义为2种疾病活动性测量 (SLE疾病活动性指标[SLEDAI]和系统性红斑狼疮活动测定)和2种生活质量测量(患者整 体评价和Krupp疲劳程度量表(KruppFatigue Severity kale))的改善或稳定(Petri et al.，Arthritis Rheum. 2004,50 :2858-68.)。还考虑到将结合分子给予SLE患者导致抗双 链DNA抗体的减少。可选地，可以使用使用大不列颠群岛狼疮评估组标准(British Isles Lupus AssessmentGroup Criteria (BILAG))评估改善。还考虑到按照本公开内容治疗的多发性硬化症患者可以实现至少0. 5的Kurtzke 扩充致残量表(Kurtzke Expanded Disability status scale) (EDSS) (Kurtzke, F.， Neurology 1983，33 :1444-52)上的临床评分的改善，或 Kurtzke 量表(Rudick et al.， Neurology 1997,49 :358-63)上至少1. 0的临床疾病恶化的延迟。还考虑到按照本公开内容治疗的患有IIM的患者可以实现特发性炎症性肌病标 准(IIMC) (Miller,F.，同上)评价中列出的5个标准中的至少1个的减少。还考虑到对于 IIM患者的给药可以导致选自以下的IIM相关因子的减少肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶、醛 缩酶，C反应蛋白，天门冬氨酸氨基转移酶(AST)，丙氨酸氨基转移酶(ALT)，和抗细胞核自 身抗体(ANA)、肌炎特异性抗体(MSA)和对于可提取核抗原的抗体。可选地，患者满足Rider et al.，Arthritis Rheum.，50 (7) :2281-2290(2004)中列出 6 个标准中的 3 个，而有不超 过2个的标准恶化。在一些实施方案中，根据本领域内熟知的和常用的临床标准以及如下文所述的临床标准，接受按照本公开内容的治疗的患有B细胞癌症的患者可以表现出对于所述治疗的 总体有益的反应，例如肿瘤体积的减小、肿瘤数量的减少和/或疾病症状的改善。示例性的临床标准由美国国立癌症研究所(U. S. National CancerInstitute(NCI))提供，美国国立癌症研究所已将某些种类的癌症分为“惰性 (indolent)”和“侵略性(aggressive) ”淋巴瘤的临床类别。惰性淋巴瘤包括滤泡细胞 淋巴瘤，其被分为细胞学“等级(grades)”，弥散小淋巴细胞淋巴瘤/慢性淋巴细胞白血 病(CLL)、淋巴浆细胞样/Waldenstrom巨球蛋白血症、边缘区淋巴瘤和多毛细胞性白血 病。侵略性淋巴瘤包括弥散混合和大细胞淋巴瘤，伯基特淋巴瘤/弥散小无核裂细胞淋巴 瘤、成淋巴细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤和AIDS相关淋巴瘤。在某些情况下，国际预后指数 (International Prognostic Index(IPI))被用于侵略性和滤泡性淋巴瘤的情况。IPI中 考虑的因素包括年龄(< 60岁的年龄对> 60岁的年龄)、血清乳酸脱氢酶(正常水平对升 高水平)、体力状况(0或1对2-4)(参见下文定义)、疾病阶段(I或II对III或IV)和结 外部位受累(0或1对2-4)。具有2种或更多风险因素的患者具有少于50%的无复发和5 年的总存活时间的机会。侵略性IPI中的表现状态按照以下定义分级描述0活动能力完全正常，能够进 行所有疾病前活动而不受限制；1身体重体力活动受限，但能够走动并且能够进行轻松性 质或坐式性质的工作，例如轻家务劳动、办公室工作；2能够走动并且能够全部自理但不能 进行任何工作活动，达到和约大于50%的清醒时间；3仅能够有限的自理，受限于床或椅 子，大于50%的清醒时间；4完全丧失劳动力，不能进行任何自理，完全受限于床或椅子；以 及 5 死亡。(参见，The InternationalNon-Hodgkin' s Lymphoma Prognostic Factors Project. A predictive model for aggressive non-Hodgkin，s lymphoma (国际非霍奇金 淋巴瘤预后因素计划·侵略性非霍奇金淋巴瘤的预测模型).N. Engl. J. Med. 329 :987-94, 1993.)通常，使用以下标准在临床上评估淋巴瘤的分级低分级淋巴瘤通常表现为结节 性疾病并且通常为惰性的或缓慢生长的。中分级和高分级疾病通常表现为更具侵略性的疾 病，伴随大的结外大块肿瘤。Ann Arbor分类系统也用于测量肿瘤的进展，特别是非霍奇金淋巴瘤。在该系统 中，根据患者具有(B)还是不具有(A)界定明确的全身症状，成人NHL的阶段I、II、III 和IV可以被分为A和B类别。具有以下症状的患者指定为B 诊断前的6个月中不明原 因的大于10%的体重丢失、不明原因的温度高于38°C的发热和湿透性盗汗。阶段的定义 如下阶段I-单一淋巴结区的受累或单一淋巴外器官或部位的的局部受累。阶段II-膈 膜同侧2个或更多淋巴结区域的受累或单一相关淋巴外器官或部位及其区域性淋巴结的 局部受累，伴随或不伴随膈膜同侧的其他淋巴结区域。阶段III-膈膜双侧的淋巴结区域 的受累，可能伴随淋巴外器官或部位的局部受累、脾的受累或以上两者。阶段IV-—个或 多个淋巴外部位的散布的(多病灶)受累，伴随或不伴随相关淋巴结受累或伴随远处(非 区域性)结节受累的孤立的淋巴外器官受累。对于更多细节，参见The International Non-Hodgkin' s LymphomaPrognostic Factors Project. A predictive model for aggressivenon-Hodgkin's lymphoma(国际非霍奇金淋巴瘤预后因素计划.侵略性非霍奇 金淋巴瘤的预测模型).N. Engl. J.Med. (1993)329 :987_994。
在一方面中，通过反应水平测定按照本公开内容的方法的治疗效果，例如，部分反 应被定义为肿瘤减小至小于其原始大小的1/2。完全反应被定义为通过临床或放射学评价 的疾病的全部根除。在一个实施方案中，接受按照本发明的治疗的个体表现出至少对于治 疗的部分反应。按照与国家癌症研究所(National Cancer Institute)合作开发的用于评价NHL 的 Cheson 标准(Cheson et al.，J Clin Oncol. 1999,17 :1244 ；GriIlo-Lopez et al.，Ann Oncol. 2000,11 :399-408)，当疾病和疾病相关症状的所有可检测的临床和放射照相证据完 全消失、所有淋巴结恢复正常大小、脾体积退回和骨髓清除淋巴瘤时，获得完全反应。当患者显示出疾病的完全消失和脾体积退回，但淋巴结退回大于75%并且骨髓不 确定时，获得未经确认的完全反应。未经确认的完全反应满足并超出用于部分反应的标准。 全部反应被定义为全部肿瘤负担的至少50%的减少。已经开发用于各种其他形式的癌症或过度增殖性疾病的相似的标准并且对于本 领域技术人员是可容易获得的。参见，例如Cheson et al. ,Clin Adv Hematol Oncol. 2006， 4 :4-5，其描述了用于评估 CLL 的标准；Cheson et al.，J Clin Oncol. 2003,21 :4642_9，其 描述了用于AML的标准；Cheson et al. , Blood 2000，96 :3671_4，其描述了用于骨髓发育 不良综合征的标准。在另一方面，与未接受治疗的患者相比，患有B细胞癌症的患者中的治疗反应显 示为疾病进展的减缓。可以使用本领域熟知的技术进行减缓的疾病进展或任何以上因素的 测量，包括骨扫描、CT扫描、镓扫描、淋巴管造影照片、MRI、PET扫描、超声等。作为其他方面，本公开内容包括试剂盒，其包含一种或多中在本公开内容的方法 中有用的化合物或组合物，所述化合物或组合物按照便于其用于实践本公开内容的方法的 方式进行包装。在最简单的实施方案中，该试剂盒包括本文所述的用于实践本公开内容的 方法的化合物或组合物，其包装在例如密封瓶或容器的容器中，具有附着在所述容器的标 签或包括在所述包装内的标签，所述标签描述所述化合物或组合物以实践本公开内容的方 法的用途。优选地，所述化合物或组合物被包装在单位剂型中。所述试剂盒还可以包括适 于按照优选的给药途径给予所述组合物或适于实践筛选检测的装置。所述试剂盒可以包括 描述结合分子组合物在本公开内容的方法中的用途的标签。
实施例实施例1⑶37特异性结合分子可以用表2-4中提供的示例性的组分制备多种CD37特异性结合蛋白。例如，可 以制备抗体或SMIP分子，并且这些分子可以是嵌合的、人源化的或人的。更具体地，优选 的轻链可变区⑶R见于SEQ IDNOS :236-240和247-2M并且优选的重链可变结构域⑶R 包括SEQ IDNOS J41-245和M7-254。同样，优选的轻和重链可变区分别提供在SEQ ID NOS :236-240和SEQ ID NOS :241-245中。优选的轻和重链可变区还可以见于SEQ ID NOS 247-2540优选的可变结构域连接子包括SEQ ID NOS :225_229，同时优选的铰链包括SEQ ID NOS :230-235。特别优选的实施方案是CAS-024 [G28-1VH (M99F, Y102S) -VL (T25A) scFv (SSC-P)H WCH2WCH3]，其是结合人CD37的重组的483个氨基酸单链融合蛋白。该结合结构域包含 基于G28-1抗体可变区⑶R的人源化scFv，包括重链⑶R3和轻链⑶Rl中的突变。所述可 变结构域由(G4S)5(25个氨基酸)序列(SEQ ID NO :229)连接，其通过三个氨基酸的接头 (GDQ)连接到修饰的上游和核心IgGl铰链区的氨基末端(其中存在于这些铰链区的3个半 胱氨酸的前2个每个都被丝氨酸取代)。该铰链的羧基末端融合到包含IgGl的CH2和CH3 结构域的效应结构域。CAS-OM的氨基酸序列在SEQ ID NO :253中列出。图1显示出小鼠 G28. 1和CAS-OM序列的重链和轻链可变区氨基酸序列比对，以及共有的同一性序列。表1.示例性的CD-37特异性SMIP构建体
权利要求
1.人源化⑶37特异性结合分子，其从氨基末端至羧基末端包含(i)人源化重链可变区，(ii)如SEQID NO :229所示的连接子，(iii)人源化轻链可变区，(iv)IgGl 铰链，(ν)人 IgGlCH2 区，和(vi)人 IgGlCH3 区，其中(a)所述人源化重链可变区从氨基末端至羧基末端包含人重链FRlJnSEQ ID NO 63 所示的重链CDRl、人重链FR2 JBSEQ IDNO :65所示的重链CDR2、人重链FR3、如SEQ ID NO: 67,68或69所示的重链CDR3和人重链FR4，并且(b)所述人源化轻链可变区从氨基末端至羧基末端包含人轻链FRlJBSEQ ID NO 61 或62所示的轻链CDRl、人轻链FR2、如SEQID NO 64所示的轻链CDR2、人轻链FR3和如SEQ ID NO 66所示的轻链⑶R3以及人轻链FR4。
2.如权利要求1所述的人源化CD37特异性结合分子，其中所述人重链FRl包含SEQID NO 144，所述人重链FR2包含SEQ IDNO 151，所述重链FR3包含SEQ ID NO 158，以及所述 重链 FR4 包含 SEQ ID NO :161 或 162。
3.如权利要求1-3中任一项所述的人源化CD37特异性结合分子，其中所述人轻链FRl 包含SEQ ID NO :171，所述轻链FR2包含SEQ IDNO 182，所述轻链FR3包含SEQ ID NO :195 以及所述轻链FR4包含SEQ ID NO :206。
4.⑶37特异性结合分子，其包含如SEQID NO :253所示的氨基酸序列。
5.如权利要求4所述的CD37特异性结合分子，其由SEQIDNO :253中所示的氨基酸序 列组成。
6.分离的核酸分子，其包含编码权利要求1-5中任一项所述的人源化CD37特异性结合 分子的核苷酸序列。
7.包含如权利要求6所述的核酸分子的载体。
8.包含如权利要求7所述的载体的宿主细胞。
9.组合物，其包含权利要求1-5中任一项所述的人源化⑶37特异性结合分子和药学上 可接受的载体。
10.减少B细胞或治疗与异常的B细胞活性相关的疾病的方法，其包括给予个体有效量 的权利要求1-5中任一项所述的人源化CD37特异性结合分子，所述个体需要减少B细胞或 治疗与异常的B细胞活性相关的疾病。
11.如权利要求10所述的方法，其中所述与异常的B细胞活性相关的疾病是B细胞淋 巴瘤、B细胞白血病、B细胞骨髓瘤、特征为自身抗体产生的疾病或特征为与B细胞途径相关 的不适当T细胞激活的疾病。
12.如权利要求10所述的方法，其中所述特征为自身抗体产生的疾病是特发性炎症性 肌病、类风湿性关节炎、重症肌无力、格雷夫斯氏病、I型糖尿病、多发性硬化、自身免疫性疾 病、皮肌炎、多肌炎或Waldenstrom巨球蛋白血症。
13.如权利要求10所述的方法，其中所述与异常的B细胞活性相关的疾病是慢性淋巴细胞白血病(CLL)。
14.包含⑶37特异性结合分子和苯达莫司汀的组合物。
15.如权利要求14所述的组合物，其中所述CD37特异性结合分子是CD37特异性抗体 或 SMIP。
16.如权利要求14所述的组合物，其中所述CD37特异性分子是人源化抗体或人源化 SMIP。
17.如权利要求14-16中任一项所述的组合物，其中所述⑶37特异性结合分子在⑶37 特异性结合中与G^-ImAb竞争。
18.如权利要求14所述的组合物，其中所述CD37特异性结合分子是权利要求1-5中任 一项所述的人源化CD37特异性结合分子。
19.减少B细胞或治疗与异常的B细胞活性相关的疾病的方法，其包括给予个体有效 量的CD37特异性结合分子和苯达莫司汀，其中所述个体需要减少B细胞或治疗与异常的B 细胞活性相关的疾病。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述与异常的B细胞活性相关的疾病是B细胞淋 巴瘤、B细胞白血病、B细胞骨髓瘤、特征为自身抗体产生的疾病或特征为与B细胞途径相关 的不适当T细胞激活的疾病。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述特征为自身抗体产生的疾病是特发性炎症性 肌病、类风湿性关节炎、重症肌无力、格雷夫斯氏病、I型糖尿病、多发性硬化、自身免疫性疾 病、皮肌炎、多肌炎或Waldenstrom巨球蛋白血症。
22.如权利要求20所述的方法，其中所述与异常的B细胞活性相关的疾病是慢性淋巴 细胞白血病(CLL)。
23.如权利要求19-22中任一项所述的方法，其中所述CD37特异性结合分子和苯达莫 司汀是同时给药。
24.如权利要求19-22中任一项所述的方法，其中所述CD37特异性结合分子和苯达莫 司汀是相继给药。
25.如权利要求19-22中任一项所述的方法，其中所述CD37特异性结合分子和苯达莫 司汀一起配制。
26.如权利要求19-25中任一项所述的方法，其中所述CD37特异性结合分子是CD37特 异性抗体或SMIP。
27.如权利要求19-26中任一项所述的方法，其中所述CD37特异性分子是人源化抗体 或人源化SMIP。
28.如权利要求19-27中任一项所述的方法，其中所述CD37特异性结合分子在CD37特 异性结合中与G28-lmAb竞争。
29.如权利要求19-28中任一项所述的方法，其中所述CD37特异性结合分子是权利要 求1-5中任一项所述的人源化CD37特异性结合分子。全文摘要
本公开内容提供了用于治疗或预防B细胞相关的自身免疫、炎症或过度增殖性疾病的人源化抗CD37小模块化免疫药物(SMIP)分子以及可以同时给药或相继给药的CD37特异性结合分子(例如抗CD37SMIP蛋白或抗体)与双功能化学治疗剂(例如苯达莫司汀)的协同联合治疗。
文档编号A61K31/4184GK102099377SQ200980122105
公开日2011年6月15日 申请日期2009年4月11日 优先权日2008年4月11日
发明者克里斯蒂·安妮·尼尔桑, 塞西尔·莫拉莱斯, 威廉·布莱蒂, 彼得·阿姆斯壮·汤普森, 杰弗里·A·莱德佰特, 查尔斯·G·塞尔维尼, 桑迪·亚历山大·西蒙, 菲利普·塔恩, 马萨·苏珊·海登-莱德佰特 申请人:新兴产品开发西雅图有限公司