用于前列腺癌的免疫治疗和免疫诊断的化合物及方法

专利名称：用于前列腺癌的免疫治疗和免疫诊断的化合物及方法
技术领域：
本发明总体上涉及前列腺癌的治疗、诊断和监视。更具体地本发明涉及至少含有前列腺蛋白质的一部分的多肽。这样的多肽可以用于治疗前列腺癌的疫苗和药物组合物。该多肽也可以用来制备如抗体等用于前列腺癌和病人的其它可能类型的肿瘤的诊断和进程监视的化合物。
前列腺癌是男性中最常见的癌症类型，在50岁以上的男性中估计发病率为30％。大量的临床证据显示人前列腺癌有转移到骨中的倾向，并且该疾病似不可避免地从雄激素依赖型发展为雄激素不应型，从而导致病人死亡率的增加。目前这一普遍性疾病在美国男性中导致癌症死亡的原因中列第二位。
虽然有相当多的研究用于此疾病的治疗，前列腺癌仍旧难以治疗。通常，治疗基于手术和/或放疗，但这些方法在相当百分数的病例中无效。三种前列腺特异性蛋白质前列腺特异性抗原(PSA)和前列腺酸磷酸酶(PAP)限制了诊断和治疗的能力。PSA的水平并不总与前列腺癌的存在相一致，它可以在一定百分数的非前列腺癌病例包括良性前列腺增生(BPH)中呈阳性。此外，PSA的测量值与前列腺的体积相关但不指示转移的水平。
因此，本领域仍需要用于前列腺癌的改良的疫苗和诊断方法。
本发明提供用于前列腺癌的免疫治疗和诊断的化合物和方法。一方面，提供了包含有如SEQ ID No.2和4-8列出的部分序列的前列腺蛋白质或是一种仅有保守性替换和/或修饰的差异的该蛋白质的变体的至少一个免疫原性部分的多肽。
在相关方面，也提供了编码上面多肽的DNA序列、含有这些DNA序列的表达载体以及用这些表达载体转染或转化的宿主细胞。在优选的实施方案中，从由大肠杆菌(E.coli)、酵母和哺乳动物细胞组成的组中选择宿主细胞。
本发明也提供了包含有一个或多个SEQ ID No.1-8,20,21,25-31或44-57的多肽、或者SEQ ID NO.9-19,22-24或32-43的核酸以及生理学可接受的载体的药物组合物。本发明也提供了包含有一种或多种这样的多肽或核酸以及非特异性免疫反应增强剂的疫苗。
在另一方面，提供了抑制病人中前列腺癌发展的方法，包括给所需的病人使用有效剂量的一种或多种SEQ ID No.1-8,20,21,25-31或44-57的多肽或是SEQ ID No.9-19,22-24或32-43的核酸。
在又一方面，提供了检测病人中前列腺癌的方法，包括(a)获自病人的生物学样品与能结合到SEQ ID No 1-8,20,21,25-31或44-57的多肽上的结合试剂接触；和(b)检测样品中与结合试剂结合的蛋白质或多肽。
在相关方面，提供了监视病人中前列腺癌发展的方法，包括(a)获自病人的生物学样品与能结合到SEQ ID No 1-8,20,21,25-31或44-57的多肽上的结合试剂接触；(b)确定样品中与结合试剂结合的蛋白质或多肽的数量；(c)重复步骤(a)和(b)；并比较在步骤(b)和(c)中检测到的多肽的量。
在相关范围内，本发明提供了与上述多肽结合的抗体，优选单克隆抗体以及含有这样的抗体的诊断试剂盒和利用这样的抗体抑制前列腺癌发展的方法。
本发明也提供了检测前列腺癌的方法，包括(a)从病人获得生物学样品；(b)用聚合酶链式反应中的至少两个寡核苷酸引物接触该样品，至少有一个寡核苷酸引物特异于选自SEQ ID No 9-19,22-24和32-43的一个DNA序列；和(c)检测样品中在有该寡核苷酸引物存在时扩增的DNA序列。在一个实施方案中，寡核苷酸引物包含有选自SEQ ID No 9-19,22-24和32-43的一种DNA序列的至少约10个连续的核苷酸。
在另一方面，本发明提供了检测病人的前列腺癌的方法，包括(a)从病人获得生物学样品；(b)用特异于选自SEQ ID No.9-19,22-24和32-43的一个DNA序列的寡核苷酸探针接触该样品；(c)检测样品中与该寡核苷酸探针杂交的DNA序列。在一个实施方案中，该寡核苷酸探针包括选自SEQ ID No.9-19,22-24和32-43的一个DNA序列的至少约15个连续的核苷酸。
一旦参考下面详细的说明和附图，本发明的这些或其他方面将显而易见。所有此处公开的文献均以各自独立的方式全文引用作为参考。


图1显示获自用大鼠前列腺提取物免疫的大鼠血清的Western杂交分析。
图2显示图1的大鼠免疫制品的非还原性SDS-PAGE。
图3显示一种大鼠类固醇结合蛋白的推测的人对应同源物与孕酮和雌莫司汀的结合。
如上所述，本发明总体上涉及用于前列腺癌的免疫治疗、诊断和监视的物质和方法。发明的物质总体上讲是含有至少为一种显示与人前列腺血清有免疫反应性的人前列腺蛋白质的一部分的多肽。本发明也包括与本发明的多肽结合的分子(如抗体或其片段)。这样的分子此处称为“结合试剂”。
具体的，本发明公开了包含由SEQ ID No.2和4-8提供的人前列腺蛋白质或者是与该蛋白质仅有保守性替换和/或修饰差异的变体的至少一部分的多肽。此处所用“多肽”一词包括任何长度(含全长蛋白质)的氨基酸链，其中氨基酸残基通过共价肽键相连。因此，包含有一种上述前列腺蛋白质中的一部分的多肽可以完全由该部分组成，或是该部分包含在带有附加序列的较大的多肽中。附加序列可以源自天然蛋白质或异源蛋白质，且这样的序列可以是免疫反应性和/或抗原性的。
此处所用人前列腺蛋白质“免疫原性部分”是与源自患自身免疫前列腺炎的人的血清反应或者能与源自自身免疫前列腺炎的大鼠模型的血清反应的部分。换言之，一个免疫原性部分能引发一种免疫反应并能结合到前列腺炎血清中存在的抗体上。自身免疫前列腺炎可以在，例如，通过注射卡介苗(BCG)(一种无致病力的牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis))治疗膀胱癌之后发生。在自身免疫前列腺炎的大鼠模型中，用大鼠前列腺的去污剂提取物免疫大鼠。这些来源中任一来源的血清可以用于和此处所述的人前列腺衍生多肽反应。抗体结合测定可以利用如本领域普通技术人员已知的任一方法来进行，例如，在Harlow和Lane，《抗体实验室手册》(Antibody:A Laboratory Manual)冷泉港实验室，冷泉港，纽约，1988中所述。例如，多肽可以固定在固相支持物(如下述)并和病人血清接触以使血清内的抗体与固定化的多肽结合。除去未结合的血清，用如125I标记的蛋白A检测结合的抗体。
此处所述的“变体”是与所述多肽仅有保守性替换和/或修饰差异的多肽，因而该多肽或与该多肽结合的分子的免疫治疗性、抗原性和/或诊断性质均保留。对于有免疫反应性质的前列腺蛋白质，通常通过修饰上述多肽序列之一并评价该修饰过的多肽的免疫反应性而识别变体。对用于产生诊断性结合试剂的前列腺蛋白质，可以通过评价修饰过的多肽的产生检测有无前列腺癌的抗体的能力来识别一种变体。例如，可以用此处所述的代表性方法制备和测试这种修饰过的序列。
此处所用“保守性替换”一词是指一种氨基酸由有相近性质的另一种氨基酸取代，因而肽化学领域普通技术人员可预期到该多肽的二级结构和亲水性质基本上未改变。一般地，下列氨基酸组代表保守性改变(1)ala,pro,gly,glu,asp,gln,asn,ser,thr；(2)cys,ser,tyr,thr；3)val,ile,leu,met,ala,phe；(4)lys,arg,his和(5)phe,tyr,trp,his。
此外，变体也可以含有其他修饰，包括对该多肽的抗原性质、二级结构和亲水性质有最小影响的氨基酸的删除或添加。例如，一个多肽可以偶连到该蛋白质的N端的信号(或先导)序列上，其在翻译同时或翻译后指导该蛋白质的转移。此多肽也可以偶连到一个接头或便于该多肽的合成、纯化或识别的其它序列上(如聚组氨酸)上，或被偶连到增加该多肽结合到固相支持物的序列上。例如，一个多肽可被偶连到一个免疫球蛋白Fc区域上。
可以从合适的人前列腺癌细胞系如Ln Cap.fgc(ATCC No.1740-CRL)中分离具有由SEQ ID No 1-8,20,21和25-31提供的序列之一的多肽。Ln Cap.fgc是一种特别好的人前列腺癌的代表性前列腺癌细胞系。如人癌一样，Ln Cap.fgc细胞在SCID小鼠中异种移植形成不断生长的肿瘤，应答睾酮，分泌PSA且应答骨髓成分(如转铁蛋白)的存在。具体地，该多肽可以用如Sambrook等人《分子克隆》(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)冷泉港实验室，冷泉港，纽约(和其中所引用的文的以及下面详细叙述的方法，通过表达用人前列腺炎血清筛选Ln Cap.fgc cDNA文库分离。SEQ ID No.48和49的多肽可以通过用上面讨论过的自身免疫前列腺炎的大鼠模型中的血清筛选从Ln Cap/fgc细胞系分离到。SEQ ID No.50-56的多肽可以用如实施例4中详述的方法通过人前列腺炎血清筛选从Ln Cap/fgc细胞系中分离。SEQ ID No.44-47的多肽可以如实施例2详述的方法从人精液中分离。一旦获得编码多肽的DNA序列，任何上述修饰均可利用如寡核苷酸导向的位点特异性突变的标准突变技术而方便地引入。
此处公开的多肽也可以通过合成或重组方法来产生。小于约100个氨基酸的一般地小于50个氨基酸的多肽的合成可以用本领域普通技术人员周知的技术来产生。例如，这样的多肽合成可以用任一商业上可能的固相技术如Merrifield固相合成法来完成，其中氨基酸被顺序加入到生长的氨基酸链上。见Merrifield美国化学协会杂志(J.Am.Chem.Soc.)85:2149-2146,1963。多肽的自动合成设备可从如AppliedBioSysterms公司(Foster City,CA)的供应商获得，且按制造商指示操作。
此外，任何上述多肽均可以通过将编码该多肽的DNA序列插入到表达载体并且在合适的宿主中表达该蛋白的方法重组生产。任何本领域普通技术人员知晓的表达载体均可用于表达本发明的重组多肽。表达可以在任何合适的用含有编码重组多肽的DNA分子的表达载体转化或转染的宿主细胞中来实现。合适的宿主细胞包括原核细胞、酵母和高等真核细胞。优选利用的宿主细胞为大肠杆菌、酵母或者是如CHO细胞的哺乳动物细胞系。以这种方式表达的DNA序列可以编码天然存在的多肽、天然存在的多肽的一部分或是它的其它变体。
一般地，不论其制备方法如何，此处公开的多肽以基本上纯的形式制得(即用氨基酸组成和一级结构分析该多肽是均质的)。优选的，该多肽纯度至少为90％，更优选的纯度为至少95％，最优选的为纯度至少99％。在特定的优选的实施方案中(在下面进一步详述)，基本上纯的多肽加入在药物组合物或疫苗中用于此处公开的一种或多种方法中。
含有前列腺蛋白的一个免疫原性部分的本发明的多肽可以用于前列腺癌的免疫治疗，其中该多肽刺激病人自身的针对前列腺肿瘤细胞的免疫应答。另一方面，本发明提供了利用SEQ ID No.1-8,20,21,25-31和44-57的一种或多种免疫反应性多肽(或编码这样的多肽的DNA)用于病人中前列腺癌的免疫治疗的方法。此处所用“病人”是指任何温血动物，优选人。病人可以受到一种疾病的困扰，也可以没有可检测到的疾病。因此，上述免疫反应性多肽可用于治疗前列腺癌或抑制前列腺癌的发展。可在手术除去原发肿瘤和/或用放疗及传统化疗药物治疗之前或之后使用该多肽。
在这些方面，该多肽通常包含在药物组合物和/或疫苗之中。药物组合物可以包含一种或多种多肽，每种均含有一个或多个上述序列(或其变体)以及生理学可接受的载体。疫苗可以包含一种或多种这样的多肽以及非特异性免疫反应增强剂如一种佐剂，生物可降解的微球体(如聚乳酸乙交脂)或脂质体(该多肽整合于其中)。药物组合物或疫苗也可以含有前列腺细胞抗原的其他表位，这些表位或整合成组合多肽(即含有多个表位的单一多肽)或为分离的多肽形式。
此外，药物组合物或疫苗可以含有编码一种或多种上述多肽的DNA，因而该多肽就地产生。在这样的药物组合物和疫苗中，该DNA可以在任何本领域技术人员知晓的给药体系中存在，包括核酸表达体系、细菌和病毒表达体系。合适的核酸表达体系包含在病人中表达所必需的DNA序列(如合适的启动子)。细菌给药体系包括使用一种在其细胞表面表达前列腺细胞抗原的一个表位的细菌(如卡介菌)。在优选的实施方案中，可以利用病毒表达体系(如牛痘或其它痘病毒，反转录病毒或腺病毒)，其中包括利用非致病性(缺陷型)、有复制能力的病毒导入该DNA。已公开了合适的体系，如在Fisher-Hoch等人，PNAS 86:317-321,1989；Flexner等人，Ann.N.Y.Acad.Sci.569:86-103,1989；Flexner等人，疫苗(Vaccine)8:17-21,1990；美国专利No.4,603,112、4,769,330和5,017,487；WO 89/01973；美国专利No.4,777,127；GB2,200,651；EP0,345,242；WO 91/02805；Berkner，生物技术(Biotechniques)6:616-627,1988；Rosenfeld等人，科学252:431-434,1991；Kolls等人，PNAS 91:215-219,1994；Kass-Eisler等人，PNAS 90:11498-11502,1993；Guzman等人，循环(Circulation)88:2838-2848,1993和Guzman等人，Cir.Res.73:1202-1207,1993。将DNA整合到这些表达体系中的方案为本领域普通技术人员知晓。该DNA也可以是“裸露”的，如公开的PCT申请WO 90/11092和Ulmer等人，科学259:1745-1749所述以及Cohen科学259:1691-1692,1993综述。将DNA包被到能有效转移入细胞的生物可降解的珠上可以增加裸露DNA的吸收。
用药的途径、次数和剂量可以随个体不同而变化，也可以参照目前在其它疾病的免疾治疗中使用的方法。一般地，药物组合物和疫苗可以通过注射(如皮内、肌内、静脉内或皮下)、鼻腔内(如通过吸气)或口服给药。第1到第10剂的给药可持续长于3-24周时间。优选使用4剂，每剂间隔3个月，其后可定期加强用药。对于单个病人也可以用其它方案。合适的剂量是在受治疗的病人中能有效提高针对前列腺肿瘤细胞的免疫应答的多肽或DNA的量。合适的免疫应答至少比基线水平(如未处理的)要高10-50％。一般地，一剂中多肽的量的(或由一剂中DNA就地生产的)范围从约1pg到约100mg每公斤宿主，典型地从约10pg到约1mg，优选从约100pg到约1μg。合适的剂量的体积随病人的大小而变化，典型地范围从约0.01毫升到约5毫升。
虽然任何本领域普通技术人员知晓的合适的载体均可用在本发明的药物组合物中，载体的类型则依给药方式的不同而不同。对于非肠道给药，如皮下注射，优选的载体包括水、生理盐水、乙醇、脂肪、蜡和/或缓冲液。对于口服给药，任何上述载体或固相载体诸如甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖和/或碳酸镁均可以使用。生物可降解的微球体(如聚乳酸乙交脂)也可以用作本发明的药物组合物的载体。合适的生物可降解的微球体已公开于如美国专利No.4,897,268和5,075,109中。
许多非特异性免疫反应增强剂均可用于本发明的疫苗。例如可以包括一种佐剂。大多数佐剂中包含用于防止抗原迅速分解的物质，如氢氧化铝或矿物油以及如脂质体A、百日咳博德特氏菌(Bordella pertussis)或结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)的非特异性免疫反应刺激物。这样的佐剂可购买到，如福氏不完全佐剂和完全佐剂(Difco Laboratories,Detroit,MI)和Merck佐剂65(Merck and Company公司，Rathway,NJ)。
此处公开的多肽也可用于前列腺癌的离体治疗。例如，可以利用商业化的细胞分离系统如CellPro Incorporated＇s(Bothell,WA)CEPRATETM系统(见美国专利No.5,240,856；5,215,926；WO89/06280；91/16116和92/07243)从病人的外周血中分离诸如T细胞的免疫系统细胞。分离的细胞用包含在如微球体中的一种或多种免疫活性多肽刺激以提供抗原特异性T细胞。利用标准技术使肿瘤抗原特异性T细胞群扩增并将这些细胞给回到病人中。
此外，本发明的多肽也可以用于产生诸如抗体或是其片段的能检测转移性人前列腺肿瘤的结合试剂。
本发明的结合试剂可以通过包括此处描述的代表性方法在内的本领域普通技术人员已知的方法制得。结合试剂能利用此处所述的代表性鉴定方法区分有和没有前列腺癌的病人。换言之，针对前列腺蛋白或其合适的部分的抗体或其它结合试剂的出现将产生一个指示受该疾病困扰的至少约20％的病人中原发或转移性前列腺癌存在的信号，并且产生一个指示在没有原发或转移性前列腺癌的至少约90％的个体中无该疾病存在的信号。这种前列腺蛋白的合适片段是指这样的片段，它能产生一种在基本上所有的(至少约80％，优选至少约90％)利用全长蛋白质能指示前列腺癌的病人中指示原发或转移性前列腺癌存在的结合试剂，还能在基本上所有用全长蛋白质测试时为阴性的样品中指示不存在前列腺癌。下面叙述的代表性鉴定(如双抗夹心鉴定)可用于评价结合试剂检测转移性人前列腺肿瘤的能力。
如此处所述制备的多肽产生能检测原发或转移性人前列腺肿瘤的能力一般可以通过产生针对该多肽的一种或多种抗体(如利用此处所述的代表性的方法)以及测定这种抗体在病人中检测这种肿瘤的能力来评价。这种测定可以通过鉴定源自有和没有原发或转移性前列腺癌的病人的生物学样品中与所产生的抗体结合的多肽的存在来完成。这样的鉴定可以如利用下面叙述的代表性方法来完成。产生用这种方法能检测出至少20％原发或转移性前列腺肿瘤的抗体的多肽被认为是能够产生可检测原发或转移性人前列腺肿瘤的抗体。多肽特异性抗体可以单独或联合使用以增加敏感性。
能检测原发或转移性人前列腺肿瘤的多肽可以用作诊断病人前列腺癌或监视病人的疾病进展的标记。在一实施方案中，病人的前列腺癌可以通过评价获自病人的生物学样品中一种或多种上述多肽相对于预先确定的阈值的水平来诊断。如此处所用，合适的“生物学样品”包括血液、血清、尿和/或前列腺分泌物。
可以利用任何特异于这种(些)多肽的结合试剂来评价一种或多种上述多肽的水平。在本发明中一种“结合试剂”是与上述的多肽结合的任何试剂(如一种化合物或细胞)。此处所用“结合”是指两个分离的分子(每个均是游离的(即在溶液中)或是在细胞或固相支持物表面)之间的非共价结合，于是形成“复合物”。这样的复合物可以是游离的或(共价地或非共价地)固定在支持材料的表面。结合的能力一般通过测定形成的复合物的结合常数来评价。结合常数是复合物浓度除以组分浓度的乘积获得的数值。一般地，在本发明中当形成的复合物的结合常数超过103L/mol时这两种化合物称为“结合”。可以利用本领域普通技术人员周知的方法测定结合常数。
任何满足上述要求的试剂均可以是结合试剂。例如，结合试剂可以是带有或不带有肽组分的核糖体、一种RNA分子或是肽。在一优选的实施方案中，结合配体是一种抗体或其片段。这种(些)抗体可以是多克隆或单克隆的。此外，抗体可以是单链的、嵌合的、CDR移植的或是人源化的。可以用此处叙述的或其它本领域普通技术人员知晓的方法制备抗体。
有许多本领域普通技术人员知晓的鉴定方法用于以结合配体检测样品中的多肽标记。见如Harlow和Lane，抗体实验室手册(Antibodies:A Laboratory Manual)冷泉港实验室，1988。在一优选的实施方案中，该鉴定包括使用固定在固相支持物上的结合配体去结合多肽并与样品的其余部分分离。结合的多肽可以再用含有报告基团的二级结合配体检测。合适的二级结合配体包括与结合配体/多肽复合物结合的抗体。此外，可以利用竞争性鉴定，其中用一报告基因标记多肽并在结合配体与样品孵育后将其结合到固定化的结合配体上。样品成分抑制标记多肽与结合配体结合的程度是该样品与固定化结合配体的反应性的指示。
固相支持物可以是本领域普通技术人员知晓的抗原可以附着的任何材料。例如固相支持物可以是微孔板中的样品孔或是硝酸纤维膜或其它合适的膜。此外，支持物可以是一个珠子或园盘，如玻璃、玻璃纤维、胶乳或如聚苯乙烯或聚氯乙烯的塑料材料。该支持物也可以是磁性颗粒或光纤传感器，如美国专利No.5,359,681所公开的。可以利用本领域技术人员知晓的在专利和科学文献中详细叙述的多种方法将结合试剂固定到固相支持物上。在本发明中，“固定”一词指非共价结合(如吸附)和共价连接(可以是抗原和支持物上的功能基团直接连接或者可以是通过交联剂方式的连接)。优选通过吸附到微孔板的孔上或膜上的固定。在这种情况下，吸附可以通过在合适的缓冲液中接触在固相支持物上的结合试剂一段合适的时间来完成。接触时间随着温度变化而变化，但典型地在约1小时到约1天之间。一般地，用范围从约10ng到约10μg优选约100ng到约1μg量的结合试剂接触塑料微孔板的孔(如聚苯乙烯或聚氯乙烯)就足以将足够量的结合试剂固定。
一般地，通过首先用可以与支持物和如羟基或氨基的结合试剂上的功能基团反应的双官能试剂与支持物反应来实现结合试剂在固相支持物上的共价连接。例如，结合试剂可以利用苯醌共价地连接到有适当的聚合物包被的支持物上，也可以通过用结合配体上的氨基和活性氢与支持物上的醛基缩合来完成共价连接(见，如Pierce免疫技术目录和手册，1991,A12-A13)在特定实施方案中，鉴定是双抗夹心鉴定。此鉴定方法首先用样品接触已固定在固相支持物(通常为微孔板的孔)上的抗体，使样品中的多肽结合到固定化的抗体上。未结合的样品与固定化的多肽-抗体复合物分离，再加入能结合该多肽的另外位点的二抗(含有报告基团)。利用适于特异性报告基团的方法检测保留在固相支持物上的二抗的量。
更具体的，一旦如上述将抗体固定在支持物上，支持物上其余的蛋白质结合位点将被封闭。任何本领域普通技术人员知晓的适宜的封闭剂如牛血清白蛋白或Tween 20TM(Sigma化学公司，St.Louis,MO)均可使用。固定化的抗体和样品一起孵育，使多肽结合到抗体上。可以在孵育前用合适的稀释剂如磷酸缓冲盐水(PBS)稀释样品。一般地，合适的接触时间(即孵育时间)是足以检测出获自前列腺癌病人的样品中该多肽的存在的时间。优选的，接触时间是足以实现至少达到结合和未结合的多肽之间的平衡水平的95％的结合水平。本领域普通技术人员知道达到平衡所需的时间可以通过鉴定经过一段时间而发生的结合水平容易地检测到。室温下，一般约30分钟的孵育时间就足够了。
可以通过用合适的如含有0.1％Tween20TM的PBS的缓冲液洗涤固相支持物除去未结合的样品。然后将含有报告基团的二抗加入到固相支持物上。优选的报告基团包括酶(如辣根过氧化物酶)、底物、辅助因子、抑制剂、染料、放射性核素、发光基团、荧光基团和生物素。可以用本领域普通技术人员知晓的标准方法实现抗体与报告基团的偶联。
二抗与固定化抗体-多肽复合物孵育足以检测结合的多肽的一段时间。可以通过检测一段时间后发生的结合水平确定合适的时间。除去未结合的二抗并用报告基团检测结合的二抗。用于检测报告基团的方法取决于报告基团的性质。对于放射性基团一般适于用闪烁计数或放射自显影方法。可以利用光学方法检测染料、发光基团和荧光基团。可以用偶联到不同的报告基团(通常为放射性或荧光基团或酶)的抗生物素蛋白检测生物素。一般通过加入底物(一般经过一段时间)随后用光学或其它方法分析反应产物来检测酶报告基团。
为检测前列腺癌的存在与否，检测自保留在固相支持物上的报告基团的信号一般可与预先确定的阈值相应的信号相比较。在一优选的实施方案中，阈值是当固定化抗体与来自无前列腺癌的病人的样品一起孵育时测得的信号的平均值。一般地，产生高于预先确定的阈值三个标准偏差的信号的样品认为是前列腺癌阳性。在另一优选的实施方案中，利用接收操纵曲线(Receiver Operator Curve)按照Sackett等人的方法(临床流行病学临床药物的基础科学(Clinical Epidemiology:A Basic Science for ClinicalMedicine)Little Brown and Co.,1985,106-7页)确定阈值。简言之，在此实施方案中，可以从成对的对应于每一用于诊断测试结果的可能阈值的真阳性率(即敏感性)和假阳性率(100％-特异性)的曲线中测出。最接近左上角(即包含最大的面积的值)的曲线中的阈值是最准确的阈值，产生高于此方法测得的阈值的信号的样品可以认为是阳性。此外，阈值可以沿着曲线向左移动，以减少假阳性率或向右移，以减少假阴性率。一般地，产生高于此方法测得的阈值的信号的样品可以认为是前列腺癌阳性。
在相关的实施方案中，可以用流动或条带测试法，其中抗体固定在如硝酸纤维素膜上。在流动测试中，当样品穿过膜时，样品中的多肽结合到固定化的抗体上。当含有二抗的溶液流过膜时标记过的二抗就结合到抗体-多肽复合物上。可以用上述方法检测结合的二抗。在条带测试法中，结合有抗体的膜的一端浸入到含有样品的溶液中。样品沿着膜穿过含有二抗的区域移动到固定化抗体的区域。在固定化抗体区域的二抗的浓度指示前列腺癌的浓度。典型地，在那样的位点二抗的浓度产生一种如可用肉眼看到的线性的样式。无这样的样式指示阴性结果。一般地，选择固定在膜上的抗体的量使之可以在含有用前面讨论过的方法在双抗夹心鉴定中足以产生阳性信号的多肽水平的生物样品中产生可用肉眼辨别出的样式。优选地，固定在膜上的抗体的量的范围从约25ng到约1μg，更优选的从约50ng到约500ng。典型地用非常少量的生物学样品即可完成这样的测试。
当然，本发明的抗原和抗体适用于现有的各种其它鉴定方法中。上面的描述仅仅意在举例。
在另一实施方案中，上面的多肽可以用作前列腺癌发展的标记。在此实施方案中，上述用于前列腺癌的诊断的鉴定方法进行一段时间后，评价反应性多肽的水平的变化。例如，可以每24-72小时测定一次，持续6个月到1年，其后在必要时进行。一般地，在那些经结合试剂检测的多肽水平每次均增加的病人中前列腺癌是发展的。相反，当反应性多肽的水平持平或随时间而下降时前列腺癌不发展。
用于上面方法的抗体可以用本领域普通技术人员已知的各种方法的任一种制得。见如Harlow和Lane，《抗体实验室手册》，冷泉港实验室，1988。在一种这样的技术中，将包含有抗原性多肽的免疫原初始注射到多种哺乳动物的任一种中(如小鼠、大鼠、兔、绵羊和山羊)。在此步骤中，本发明的多肽可以不经修饰用作免疫原。此外，对于相对短的多肽，如果该多肽与载体蛋白(如牛血清血蛋白或匙孔血蓝蛋白)联合使用可以引发较强的免疫反应。将免疫原注射到动物宿主中，优选根据与一次或多次加强免疫联合的预先确定的方案，定期对动物取血。通过如利用偶联到合适固相支持物上的多肽的亲和层析的方法从抗血清中纯化特异于该多肽的多克隆抗体。
可以例如利用Kohler和Milstein，欧洲免疫学杂志(Fur.J.Immunol.)6:511-519,1976的方法及其改进方法制备特异于目标抗原性多肽的单克隆抗体。简言之，这些方法包括制备能产生具有期望的特异性抗体的永生细胞系。这种细胞系可以从例如获自经如上所述免疫的动物的脾细胞中产生。脾细胞通过如与优选跟所免疫的动物同源的骨髓瘤细胞融合伴侣融合而永生化。可以利用多种融合技术。例如可以将脾细胞和骨髓瘤细胞与一种非离子型去污剂混合几分钟后以低浓度接种到支持杂合细胞生长但不支持骨髓瘤细胞生长的选择性培养基上。优选的选择技术是利用HAT(次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸苷)选择。经过足够的时间后，通常为约1到2周，可观察到杂交的克隆。挑选和测试单个克隆的针对该多肽的结合活性。优选有高反应性和特异性的杂交瘤。
可以从生长杂交瘤克隆的上清液中分离单克隆抗体。此外，可以利用不同技术增加产量，如将杂交瘤细胞系注射到合适的脊椎动物如鼠的腹腔中。然后可以从腹水或血中收获单克隆抗体。可以通过常规技术如层析、凝胶过滤、沉淀和萃取除去抗体中的污染物。本发明的多肽也可以用于如亲和层析步骤的纯化方法中。
本发明的单克隆抗体也可以用作治疗剂以缩小或消除前列腺肿瘤。抗体可以单独使用(例如抑制转移)也可以和一种或多种治疗剂一起使用。此处所述合适的治疗剂包括放射性核素、分化诱导剂、药物、毒素及其衍生物。优选的核素包括90Y123I、125I、131I、186Re、188Re、211At和212Bi。优选的药物包括氨甲蝶呤及嘧啶与嘌呤类似物，优选的分化诱导剂包括佛波酯和丁酸。优选的毒素包括蓖麻毒蛋白、相思豆毒蛋白、白喉毒素(diptheria toxin)、霍乱毒素、gelonin、假单胞外毒素、志贺菌毒素和美洲商陆抗病毒蛋白。
治疗剂可以与合适的单克隆抗体直接或间接(如通过连接基团)偶联(如共价连接)。当都具有一种取代基能与其它取代基反应时就可能在抗原和抗体之间直接反应。例如一种亲核基团如氨基或巯基，一方面可以与含有羰基的基团如一种酸酐或酰卤反应；另一方面可以与含有良好的离去基团的烷基(如卤化物)反应。
此外，可以期望治疗剂和抗体之间通过连接基团偶联。连接基团可以作为间隔基使抗体与试剂间隔一定距离从而避免对结合能力的干扰。连接基团也可用于增加取代基在试剂或抗体上的化学反应性，从而增加偶联的效率。化学反应性的增加也可以促进使用原来不可能利用的试剂或试剂上的功能性基团。
对于本领域技术人员而言显而易见的有不同的双功能或多功能试剂，包括同种或异种功能的(如Pierce化学公司，Rockford,IL的目录中所述)，可以用作连接基团。例如可以通过氨基、羧基、巯基或氧化的糖残基进行偶联。有大量的参考文献描述这种方法，如Rodwell等人的美国专利No.4,671,958。
对于在没有本发明的免疫偶联的抗体部分时更为有效的治疗剂，可以期望使用一种在进入细胞过程中或一进入细胞后就可切割的连接基团。已有一系列不同的可切割的连接基团被描述。试剂从这些连接基团胞内释放的机理包括通过二硫键的还原(如Spitler的美国专利No.4,489,710)，光不稳定键的照射(如Senter等人的美国专利No.4,625,014)，衍生氨基酸侧链的水解(如Kohn等人的美国专利No.4,638,045)，血浆补体介导的水解(如Rodwell等人的美国专利No.4,671,958)和酸催化的水解(如Blattler等人的美国专利No.4,569,789)的方法切割。
有时期望将多种试剂偶联到抗体上。在一实施方案中，一种试剂的多个分子偶联到一个抗体分子上。在另一实施方案中，可以将多种类型的试剂偶联到一种抗体上。不论具体的实施方案如何，可以通过不同方法制备与多种试剂的免疫偶联物。例如多种试剂可以直接和一种抗体分子偶联，或者可以利用可提供多个附着位点的接头。此外，也可以利用载体。
载体可以多种形成包含试剂，包括直接或通过连接基团的共价键结合。合适的载体包括蛋白质如白蛋白(如Kato等人的美国专利No.4,507,234)、肽和多糖如氨基葡聚糖(如Shih等人的美国专利No.4,699,784)。载体也可以通过非共价键或通过胶囊化如在脂质体囊泡中(如美国专利No.4,429,008和4,873,088)等方法包含试剂。特异于放射性核素的载体包括放射性卤化的小分子和鳌合化合物。例如美国专利No.4,735,792公开了代表性放射性卤化的小分子和它们的合成。放射性核素的鳌合物可以从包括含有氮和硫原子作为用于结合金属或金属氧化物、核素的供体原子的鳌合复合物中形成。例如Davison等人的美国专利No.4,673,562公开的代表性鳌合化合物和它们的合成。
可以使用不同的路线用于抗体和免疫偶联物的给药。典型地，给药采用静脉内、肌内、皮下方式或在切除的肿瘤的着床部位给药。显然，抗体/免疫偶联物的精确剂量依赖于所使用的抗体、肿瘤上抗原的密度和抗体的清除速率。
本发明的诊断性试剂也可以包括编码一种或多种上述多肽或其一个或多个部分的DNA序列。例如至少在基于聚合酶链式反应(PCR)的鉴定中可以利用两个寡核苷酸引物以扩增源自生物样品的前列腺肿瘤特异性cDNA，其中至少一个该寡核苷酸引物特异于编码本发明多肽的DNA分子。利用本领域周知的技术如凝胶电泳检测扩增的cDNA的存在。类似地，在杂交鉴定中可以利用特异于编码本发明多肽的DNA分子的寡核苷酸探针以检测生物性样品中发明多肽的存在。
此处所用“特异于DNA分子的寡核苷酸引物/探针”是指与目的DNA分子至少有约80％同源性的寡核苷酸序列，优选地至少约90％，更优选地至少约95％同源性。可以用于本发明诊断方法的寡核苷酸引物和/或探针优选地含有至少约10-40个核苷酸。在一优选的实施方案中，寡核苷酸引物包含编码此处公开的一种多肽的DNA分子至少约10个连续的核苷酸。优选地，用于本发明诊断方法的寡核苷酸探针包含编码此处公开的一种多肽的DNA分子的至少约15个连续的核苷酸。用于基于PCR的鉴定和杂交鉴定的技术均为本领域周知(见如Mullis等人，出处同前；Ehrlich，出处同前)。引物和探针因而可以用于在生物样品优选地为血液、精液或前列腺和/或前列腺肿瘤组织中检测前列腺和/或前列腺肿瘤序列。
提供下列实施例用以阐明而非限制。实施例1A．利用人前列腺炎血清从Ln Cap.fgc中分离多肽通过利用人前列腺炎血清以下列方法筛选人前列腺癌细胞系分离本发明的代表性多肽。通过从纯化自人前列腺癌细胞系Ln Cap.fgc(ATCCNo.1740-CRL)的mRNA反转录合成，再将所得的cDNA克隆插入到λZAPⅡ(Stratagene,La Jolla,CA)的方法构建人前列腺癌cDNA表达文库。
人前列腺炎血清获自一诊断为服用BCG治疗膀胱癌后患自身免疫前列腺炎的病人。用如Sambrook等人，《分子克隆》(Molecular Cloning:A laboratory Manual)，冷泉港实验室，冷泉港，NY,1989中所述的方法用此血清筛选Ln Cap cDNA文库。具体地，用约104pfu的Ln CapcDNA文库涂布LB平板，42℃下培养4小时后获得在异丙基硫代-β-半乳糖苷(IPTG)浸透的硝酸纤维素滤膜上的首次噬菌斑印模。平板42℃下继续培养5小时且通过37℃下过夜培养获得第二次噬菌斑印模。滤膜用PBS-T洗涤3次，用PBS(含有1％Tween20TM)封闭1小时，再次用PBS-T洗涤3次，然后在搅拌下同以1∶200稀释的人前列腺炎血清一起培养过夜。然后用PBS-T洗涤滤膜3次，并与125I标记的蛋白A(1μl/15ml PBS-T)在搅拌下培养1小时。滤膜对胶片曝光从16小时到7天范围内的不同时间。在复制印模上有信号的噬菌斑被重新接种到LB平板上。所得噬菌斑在复制的滤膜上，用同上方法处理滤膜。将这些滤膜4℃下与人前列腺炎血清(1∶200稀释)搅拌培养过夜。通过将滤膜对胶片曝光从16小时到11天的范围内不同的时间用如上述125I标记的蛋白A观察阳性噬菌斑。按照制造商指示完成阳性人前列腺炎抗原cDNA克隆的体内切出。B．多肽的表征在Applied Biosystems公司自动测序仪373A型(Foster City,CA)上利用正向和反向引物获得阳性克隆的DNA序列。编码所分离多肽的cDNA序列，此后称作HPA8,HPA13,HPA15～HPA17,HPA20,HPA25,HPA28,HPA29,HPA32～HPA38和HPA41，分别列在SEQ ID No.32和33,34和35,36,9和10,11,12,13和14,15,37和38,16,39,22和23,17和18,19,24,40和41,42和43中。HPA16和HPA20的3＇序列是相同的。HPA13,HPA16,HPA20,HPA29和HPA33被认为是带有新的5＇端点的重叠的克隆。两个阳性克隆被确认同HPA15相同。同样，HPA15,HPA34和HPA37也发现是重叠克隆。基于与β-半乳糖苷酶(LacZ)的N-端部分在同框架中确定的cDNA序列，分离的多肽HPA16,HPA17,HPA20,HPA25,HPA28,HPA32,HPA35,HPA36,HPA34,HPA37,HPA8,HPA13,HPA15,HPA29,HPA33,HPA38和HPA41的预期的N-端氨基酸序列分别列于SEQ ID No.1-8,20,21和25-31。
利用EMBL和GenBank(Release 91)以及DNA STAR系统将所分离多肽的确定的cDNA序列和预期的氨基酸序列与基因库中已知的序列相比较。DNA STAR系统是Swiss、PIR数据库以及翻译的蛋白质序列(Release 91)的联合体。未发现与HPA17,HPA25,HPA28,HPA32,HPA35和HPA36显著同源的。
发现HPA8确定的cDNA序列与人原癌基因BMI-1(Alkema,M.J.等人，人类分子遗传学(Hum.Mol.Gen.)2:1597-1603,1993)有约100％的同一性。用编码HPA13的5＇和3＇cDNA序列检索DNA数据库发现与来源于人未成熟髓细胞系的已知cDNA 100％相同(GenBank检索号D63880)。用HPA13推测出的氨基酸序列检索蛋白质数据库发现与编码上述相同人cDNA序列的开放阅读框架100％相同。用HPA15预期的氨基酸序列检索蛋白质数据库，发现与酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)预见的开放阅读框架有高同源性(60％相同)(Swiss/PIR登记号S46677)，且与来源于调节肠液分泌的垂体腺的一种人蛋白100％相同(Lonnroth,I.，生物化学杂志(J.Bio.Chem.)35:20615-20620,1995)。发现HPA38推定的氨基酸序列与人热休克因子蛋白2(Schuetz,T.J.等人，美国国家科学院院报88:6911-6915,1991)100％相同。用HPA415＇DNA序列检索DNA数据库并用推定的氨基酸序列检索蛋白质数据库发现与人LIM蛋白质(Rearden,A.，生物化学与生物物理学研究通讯(Biochem.Biophys.Res.Commun.)201:1124-1131,1994)100％相同。穷尽发明者所知，除去LIM蛋白质，没有任何本发明的多肽已被显示存在于人前列腺中。
应用阳性噬菌粒的病毒颗粒感染大肠杆菌XL-1 Blue MRF＇，如Sambrook等人所述，同前。通过加入IPTG诱导重组蛋白。诱导过的和未经诱导的细胞裂解液以相同的形式进行SDS-PAGE电泳并转移到硝酸纤维素滤膜上。滤膜分别与人前列腺炎血清(1∶200稀释)和有LacZ N端4Kd部分反应活性的免血清(1∶200或1∶250稀释)反应。室温下血清孵育2小时。通过加入125I标记的蛋白A后对胶片曝光从16小时到11天范围内的不同时间检测结合的抗体。免疫杂交的结果总结于表Ⅰ，其中(+)表示阳性反应，(-)表示无反应。
表Ⅰ抗原人前列腺炎血清抗-lacZ血清蛋白质分子量/KdHPA8 (-) (-)HPA13(+) (+)HPA15(+) (+) 50HPA16(+) (+) 40HPA17(+) (-) 40HPA20(+) (+) 38HPA25(-) (+) 32HPA28(-) (-)HPA29(+) (+)HPA32(-) (-)HPA33(+) (+)HPA34未测 (+) 50HPA35(-) (-)HPA36(-) (-)HPA37未测 (+) 50HPA38(-) (-)HPA41未测 (+)重组人前列腺炎抗原与人前列腺炎血清和抗LacZ血清均有阳性反应表明人前列腺炎血清的反应性针对该融合蛋白。克隆的抗原显示与人前列腺炎血清的反应性而不与抗LacZ血清反应，表明反应性蛋白可能起源于克隆内部。抗原与抗LacZ血清反应但不与人前列腺炎血清反应可能是人前列腺炎血清识别构象性表位的结果或是抗原-抗体结合动力学中免疫杂交暴露2小时尚不足够。与两种血清均不反应的抗原不由大肠杆菌表达，反应性表位可以在融合蛋白或内部开放阅读框架之内。由于来自HPA13,HPA29和HPA33的重组抗原的不稳定性，无法确定重组抗原的大小。
用RT-PCR在4种不同的人细胞系(包括两个转移性前列腺肿瘤系LNCaP和DU145)，正常前列腺、乳房、结肠、肾、胃、肺和骨骼肌组织，9种不同的前列腺肿瘤样本和3种不同的乳房肿瘤样本中探查代表性人前列腺炎抗原的表达。研究结果见表Ⅱ。
表Ⅱ通过RT-PCR方法对人细胞系、正常组织和肿瘤中HPA克隆mRNA表达的分析克隆 LNCaP DU145 MCF- HBL- 前列腺 乳腺 结肠 肾 胃 肺 骨骼肌12A100hpa-17 + ++ + + + -± - - + +hpa-20 +++++++NT NT ± NT NT - NT + NThpa-28 + +++ + ++ -± + - + ±前列腺肿瘤(n=9)乳腺肿瘤(n=3)克隆 肿瘤1 肿瘤2 肿瘤3 肿瘤4 肿瘤5 肿瘤6 肿瘤7 肿瘤8 肿瘤9 肿瘤1 肿瘤2 肿瘤3hpa-17 + + + - + + ±- - + ++++hpa-20 + + NT NT NT NT NT NT NT+++++hpa-28 + + ± - + + ++ ±- ++ ++++通过RNase保护也探查了在LNCaP和正常前列腺、肾、肝、胃、肺和胰中代表性抗原的mRNA表达。研究结果见表Ⅲ。
表Ⅲ通过RNase保护对LNCaP和正常人组织中HPA克隆mRNA表达的分析克隆LNCaP前列腺肾肝胃肺胰hpa-15 + - +++++ - ++hpa-20 +++++ + + + + NTNThpa-25 + + + + ++++NThpa-32 NT +++ + NT++NThpa-35 +++ +++ NT+ + +++ +hpa-36 + + NTNT+ + +实施例2A．大鼠类固醇结合蛋白质的分离及鉴定免疫血清获自用大鼠前列腺提取物免疫以产生针对自身前列腺抗原的抗体的大鼠。具体的，大鼠在用弗氏完全佐剂中的大鼠前列腺去污剂提取物(含有0.1％Triton的PBS)免疫之前预取血获得对照血清。初次免疫3周后进行不完全弗氏佐剂加强免疫，6周时采血清。
用制造商的方案将上述获得的血清进行ECL Western杂交分析，确认了一种如图1所示的大鼠前列腺蛋白质。还原后，经SDS-PAGE发现迁移在7kD处的宽银染色带。不经还原，在24kD处可见强带(图2)。通过离子交换层析纯化此蛋白并经还原条件下的凝胶电泳。可见三个带，表明蛋白质中有三个链6-8kD链(C1),8-10kD链(C2)和10-12kD链(C3)。利用反相HPLC在DeltaTMC18 3005μm柱(柱尺寸3.9×300mm)(Waters-Millipore,Milford,MA)上进一步纯化此蛋白。含有100μg蛋白的样品溶于0.1％三氟乙酸(TFA),pH1.9，并且多肽在0.1％TFA(pH1.9)的乙腈线性梯度(0-60％)条件下以0.5ml/min的速度洗脱1小时。在214nm处监视洗脱液。获得了C1-C3二聚体和C2-C3二聚体的2个峰。发现C2链的氨基末端是被封闭的。在Perkin Elmer/AppliedBiosysterms公司Procise Model 494蛋白质测序仪上测定C1和C3链的序列，发现具有下列氨基末端序列(分别为Seq ID No.44和45)(a)Ser-Gln-Ile-Cys-Glu-Leu-Val-Ala-His-Glu-Thr-Ile-Ser-Phe-Leu；和(b)Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Ser-Ile-Leu-asp-Glu-Val-Ile-Arg-Gly-Thr，其中Xaa可以是任何氨基酸。
利用实施例1中讨论过的数据库将这些序列同基因库中的已知序列比较，发现与鼠类固醇结合蛋白(也称为雌莫司汀结合蛋白(EMBP))(Forsgren,B.等人，临床生物学研究进展(Prog.Clin.Biol.Res.)75A:391-407,1981；Forsgren,B.等人，美国国家科学院院报76:3149-53,1979)相同。此蛋白是在大鼠精液中主要的分泌蛋白且已显示与类固醇、胆甾醇和脯氨酸富含蛋白结合。EMBP已显示结合雌莫司汀和estromustine、雌莫司汀磷酸盐的活性代谢产物。已报道雌莫司汀磷酸盐用于临床上治疗对标准激素脱离治疗不应答的病人的晚期前列腺癌(见例Van Poppel,H.等人，临床生物学研究进展370:323-41,1991)。B．推测的与大鼠同源的人类固醇结合蛋白的分离从新鲜切除的大鼠前列腺中获得纯化的类固醇结合蛋白且用于皮下免疫新西兰白色纯的雌性兔(150μg纯化的大鼠类固醇结合蛋白于1mlPBS和1ml含有100μg胞壁酰二肽(辅助肽，Calbiochem,La Jolla,CA)的弗氏不完全佐剂。6周后对兔用弗氏不完全佐剂中同样的蛋白质剂量皮下加强免疫。最后，2周后用100μg蛋白质的PBS静脉内对兔加强免疫，在最后一次免疫两周后采血清。
用所得兔抗血清筛选Ln Cap.fgc细胞系失败。随后用该兔抗血清筛选用下面实施例3详述方案的人精液的阴离子交换层析收集液。这个分析揭示了一种约18-22kD交叉反应性蛋白。目的精液部分(部分1)在非还原性条件下通过SDS-PAGE分离成单个组分，杂交到PVDF膜上，于70％甲酸中用CNBr切割和消化。所得的CNBr片段在Tris-甘氨酸(tricine)凝胶系统上分离，再次电杂交到PVDF且被切割。一个肽的序列确定如下Val-Val-Lys-Thr-Tyr-Leu-Ile-Ser-Ser-Ile-Pro-Leu-Gln-Gly-Ala-Phe-Asn-Tyr-Lys-Tyr-Thr-Ala(SEQ.ID No.46).
利用与前面相同的数据库将这些序列与基因库中已知序列相比较，意外发现与粗大胆囊疾病液蛋白质(gross cystic disease fluid protein)相同，该蛋白质已被发现与转移性乳腺癌相关(Murphy,L.C.等人，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)262:15236-15241,1987)。就发明者所知，此蛋白此前未被在雄性组织中发现。
如上述部分1的与类固醇结合的能力用下面方法研究。纯化的大鼠类固醇结合蛋白(RSBP)和部分1经过SDS-PAGE后转移到硝酸纤维素滤膜上。具体地，1.5μg RSBP/凝胶泳道和4μg部分1/凝胶泳道在4-20％梯度Laemmli胶(BioRad)上平行地电泳后，再电泳转移到硝酸纤维素滤膜上。蛋白质转移后，滤膜室温下于1％Tween20的PBS中封闭1小时，每次用含0.1％Tween20另加0.5M NaCl的PBS10ml洗涤3次，每次10分钟，再用1)0.87μM偶联到辣根过氧化物酶(HRP)的稀释在洗涤液中的孕酮；2)0.87μM孕酮HRP和200μM雌莫司汀；或3)0.87μM孕酮HRP加上400μM未标记的孕酮和200μM的雌莫司汀进行探查。每一反应混合物均在室温下孵育1小时且用0.1％Tween20,PBS和0.5M NaCl洗涤3次，每次10分钟。对杂交显色(ECL systerm,Amersham)以显示也能结合雌莫司汀的孕酮HRP结合蛋白。
对于大鼠类固醇结合蛋白和部分1，均获得三个带，即结合HRP-孕酮的带和用未标记的孕酮和雌莫司汀竞争结合的带(Fig.3)。这些结果表明从如上述人精液中分离的三个带结合激素且在多肽的数量上对应于大鼠类固醇结合蛋白的C1,C2和C3链，虽然或由于一级序列或者二级翻译后的修饰使其分子量略大了一些。
此推测的大鼠类固醇结合蛋白的同源物也在随后用上述兔抗血清筛选人精液时发现。具体地获得了一种疏水性22kD/65kD聚集蛋白质，经CNBr消化22kD带后，其提供了具有下列序列的肽Val-Val-Lys-Thr-Tyr-Leu-Ile-Ser-Ser-Ile-Pro-Leu-Gln-Ala-Phe-Asn-Tyr-Lys-Tyr-Thr-Ala(SEQ.ID No.47).发现此肽与粗大胆囊疾病液蛋白的第67残基到第87残基对应，且利用人自身免疫前列腺炎血清再次鉴定，如下面实施例4所讨论。实施例3利用大鼠前列腺炎血清从Ln Cap.fgc中分离的多肽的分离及鉴定通过将Ln Cap.fgc细胞沉淀重悬于PBS,1％NP-40和60μg/ml苯甲基磺酰氟(PMSF)(Sigma,St.Louis,MO)后在Dounce匀浆机中经10次处理后被匀浆化(10gm细胞沉淀/10ml)。随后为30秒探头超声处理和在Dounce匀浆机中再经10次处理。所得匀浆以10,000×G的速度离心，上清液用0.45μm滤膜过滤(Amicon,Beverly,MA)后用于BioRad PrepQ-20阴离子交换树脂。蛋白质用20mM tris,pH7.5中70分钟内0到0.8M的NaCl梯度以8ml/min的速度洗脱。收集组分冷却后用10kD MWCO的离心型(centriprep)浓缩仪(Amicon)浓缩并在有60μg/ml PMSF存在的条件下-20℃贮存。离子交换收集液随后用4-20％tris甘氨酸Ready-Gels(BioRad)电泳检测后转移到硝酸纤维素滤膜上。利用上述实施例3A中的大鼠血清通过ECL(Amersham International)Western分析鉴定目标离子交换收集液。这种分析表明一种约65kD的蛋白质在0.08到0.13MNaCl处洗脱。有大鼠血清反应性的离子交换收集液先后用HPLC和Western分析以鉴定目标蛋白部分。此蛋白质再用以在甲硫氨酸残基处切割的CNBr饱和的70％甲酸中消化24小时。
所得CNBr片段用微孔HPLC纯化，所用为Vydac C18柱(Hesperia,CA)，柱尺寸1×150mm,Perkin Elmer/Applied Biosysterms公司(Foster City,CA)的Division Model 172 HPLC。用0-60％乙腈梯度以40μl/min的速度从柱上洗脱样品。在214nm处监测洗脱液。所得级份直接上到Perkin Elmer/Applied Biosysterms公司Procise 494蛋白质测序仪上且用标准的Edman化学法从氨基端测序。获得了两个具有下列序列的不同的肽(a)Xaa-Ala-Lys-Lys-Phe-Leu-Asp-Ala-Glu-His-Lys-Leu-Asn-Phe-Ala(SEQ.ID No.48)；和(b)Xaa-Xaa-Xaa-Lys-Ile-Lys-Lys-Phe-Ile-Gln-Glu-Asn-Ile-Phe-Gly，其中Xaa可以是任何氨基酸(SEQ ID No.49)利用前面同样的数据库将这些序列与基因库中已知的序列相比较，分别鉴定为可能的蛋白质二硫键异构酶ER-60前体的第286残基到第300残基和第228残基到第242残基，该前体此处以后称作ER-60(Bado,R.J.等人，内分泌学(Endocrinology)123:1264-1273,1988)。此抗原也已知为磷脂酶C-α(见PCT WO 95/08624)。ER-60的285和227残基为甲硫氨酸，与上述溴化氰片段的序列一致。
ER-60是具有多种生物学活性的驻留内质蛋白，包括二硫键异构酶和限制性半胱氨酸蛋白酶活性。具体的，ER-60已表现出优先降解钙联接蛋白，后者是一种参与通过Ⅰ类(ClassⅠ)主要组织相容性复合物(MHC)途径的抗原提呈的蛋白质。ER-60和相关家族成员ER-72已被发现在结肠癌中过度表达，且截短形式的ER-60表现出增强的酶学活性(Egea,G.等人，细胞科学杂志(J.Cell.Sci.)(英国)105:819-30,1993)。然而，就发明者所知，这种多肽此前尚不知在人前列腺中出现或过度表达。最近，ER-60基因表达已被与诱导细胞增殖的接触抑制相关联(Greene,J.J.等人，细胞分子生物学(Cell.Mol.Biol.)41:473-80,1995)。因此，如果ER-60在前列腺癌中也被截短且是非功能性的，如其在结肠癌中那样，缺乏接触抑制的产物将导致致瘤性转化和肿瘤发展。实施例4利用人前列腺炎血清从Ln CaP.fgc中分离的多肽的分离及鉴定利用如实施例3所述离子交换技术用实施例1中所述人前列腺炎血清筛选Ln CaP.fgc细胞系。用如前述的反相HPLC纯化反应性离子交换收集液，利用与所述抗血清的交叉反应作为选择标准，分离了示于SEQ IDNo.50-51的多肽。用上述数据库将这些序列与基因库中已知序列的比较发现如表Ⅱ所示的同源物。然而，任何这些多肽此前从未被与人前列腺相关联。
表ⅣSEQ ID No.数据库检索鉴定53甘油醛-3-磷酸脱氢酶54α-人果糖二磷酸醛缩酶55钙网蛋白56钙网蛋白57苹果酸脱氢酶58胆囊疾病液蛋白59胆囊疾病液蛋白实施例5源自人精液的多肽的分离和鉴定通过阴离子交换层析纯化源自人精液的多肽达到同质。具体地，用0.1mM Bis-Tris丙烷缓冲液(pH7)将精液样品稀释10倍后上柱。利用凝胶灌注层析(gel profusion chromatography)在由0.01mM Bis-Tris丙烷缓冲液(pH7.5)平衡的Poros(Perseptive Biosysterms)146ⅡQ/M阴离子交换柱4.6mm×10mm上分部收集多肽。蛋白质以上述缓冲液中0～0.5MNaCl线性梯度洗脱。在220nm波长处监测柱洗脱液。各个流份进一步由反相HPLC在Vydac(Hesperia,CA)C18柱上纯化。
如上述实施例3测定所得部分的序列。获得了一个具有如下N-端序列的肽(c)Met-Asp-Ile-Pro-Gln-Thr-Lys-Gln-Asp-Leu-Glu-Leu-Pro-Lys-Leu(SEQ ID NO:57).如上述将这些序列与那些基因库中已知的序列相比较发现与人胎盘蛋白14(PP14)100％相同。实施例6多肽的合成利用由HPTU(0-苯并三唑-N,N,N＇,N＇-四甲基尿鎓六氟磷酸盐)活化的FMOC化学法在Applied Biosysterms 430A肽合成仪上合成多肽。可以在该肽的氨基端加上一个Gly-Cys-Gly序列以提供偶联、结合到固定化的表面或标记该肽的方法。可以用下列切割混合物将该肽从固相支持物上切割下来三氟乙酸∶乙二硫醇∶苯硫基甲烷∶水∶苯酚(40∶1∶2∶2∶3)。切割2小时后，该肽可以用冷的甲基叔丁基醚沉淀。沉淀再用含有0.1％三氟乙酸(TFA)的水溶解并冷干后，用C18反相HPLC纯化。可以利用水中(含0.1％TFA)的0％-60％乙腈(含0.1％TFA)梯度洗脱该肽。冷干纯的级份后，利用电喷射质谱或其它类型的质谱和氨基酸分析确定该肽的特性。
从前文叙述中应当理解，虽然此处已出于说明的目的描述了本发明的具体实施方案，但可以有多种修改而不偏离本发明的精神和范围。
序列表(1)一般信息(ⅰ)申请人Corixa公司(ⅱ)发明题目用于前列腺癌的免疫治疗和免疫诊断的化合物及方法(ⅲ)序列数57(ⅳ)通讯地址(A)地址SEED and BERRY LLP(B)街道6300 Columbia Center,701 Fifth Avenue(C)城市Seattle(D)州Washington(E)国家美国(F)邮编代码98104-7092(ⅴ)计算机可读形式(A)介质类型软盘(B)计算机IBM PC兼容机(C)操作系统PC-DOS/MS-DOS(D)软件Patent In Release#1.0,Version# 1.30(ⅵ)当前申请数据(A)申请号(B)递交日1997-5-14(C)分类(ⅷ)律师/代理人信息(A)姓名Maki,David J.
(B)注册号31,392(C)参考/卷号210121.424PC(ⅸ)通讯信息(A)电话(206)622-4900(B)电传(206)682-6031(2)SEQ ID No.1的信息(ⅰ)序列特征(A)长度89氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:1的序列描述Ala Arg Ala Ser Val Met Leu Leu Gly Met Met Ala Arg Gly Lys Pro1 5 10 15Glu Ile Val Gly Ser Asn Leu Asp Thr Leu Met Ser Ile Gly Leu Asp20 25 30Glu Lys Phe Pro Gln Asp Tyr Arg Leu Ala Gln Gln Val Cys His Ala35 40 45Ile Ala Asn Ile Ser Asp Arg Arg Lys Pro Ser Leu Gly Lys Arg His50 55 60Pro Pro Phe Arg Leu Pro Gln Glu His Arg Leu Phe Glu Arg Leu Arg65 70 75 80Glu Thr Val Thr Lys Gly Phe Val His85(2)SEQ ID No.2的信息(ⅰ)序列特征(A)长度89氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:2的序列描述Ala Arg Gly Arg Phe Gly Arg Leu Gly Val Gly Gly Glu Pro His Pro1 5 10 15Arg Arg Asn Pro Ala Leu Pro Thr Glu Leu Ala Glu Leu Thr Pro Gln20 25 30Val Arg Arg Ala Ala Xaa Lys Thr Gln Arg Ser Gln Val Lys Pro Arg35 40 45His Arg Arg Gly Trp Pro Pro Thr Val Pro Leu Ala Gly Arg Leu Glu50 55 60Glu Leu Lys Thr Pro Arg Ser Pro Arg Pro Pro Glu Gln Gly Leu Asp65 70 75 80Pro Ser Pro Cys Ser Leu Pro Ser Pro85(2)SEQ ID No.3的信息
(ⅰ)序列特征(A)长度858氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:3的序列描述Gln Glu Ser Glu Pro Phe Ser His Ile Asp Pro Glu Glu Ser Glu Glu1 5 10 15Thr Arg Leu Leu Asn Ile Leu Gly Leu Ile Phe Lys Gly Pro Ala Ala20 25 30Ser Thr Gln Glu Lys Asn Pro Arg Glu Ser Thr Gly Asn Met Val Thr35 40 45Gly Gln Thr Val Cys Lys Asn Lys Pro Asn Met Ser Asp Pro Glu Glu50 55 60Ser Arg Gly Asn Asp Glu Leu Val Lys Gln Glu Met Leu Val Gln Tyr65 70 75 80Leu Gln Asp Ala Tyr Ser Phe Ser Arg Lys Ile Thr Glu Ala Ile Gly85 90 95Ile Ile Ser Lys Met Met Tyr Glu Asn Thr Thr Thr Val Val Gln Glu100 105 110Val Ile Glu Xaa Phe Val Met Val Phe Gln Phe Gly Val Pro Gln Ala115 120 125Leu Phe Gly Val Arg Arg Met Leu Pro Leu Ile Trp Ser Lys Glu Pro130 135 140Gly Val Arg Glu Ala Val Leu Asn Ala Tyr Arg Gln Leu Tyr Leu Asn145 150 155 160Pro Lys Gly Asp Ser Ala Arg Ala Lys Ala Gln Ala Leu Ile Gln Asn165 170 175Leu Ser Leu Leu Leu Val Asp Ala Ser Val Gly Thr Ile Gln Cys Leu180 185 190Glu Glu Ile Leu Cys Glu Phe Val Gln Lys Asp Glu Leu Lys Pro Ala195 200 205Val Thr His Leu Leu Trp Glu Arg Ala Thr Glu Lys Val Ala Cys Cys210 215 220Pro Leu Glu Arg Cys Ser Ser Val Met Leu Leu Gly Met Met Ala Arg225 230 235 240Arg Lys Pro Glu Ile Val Gly Ser Asn Leu Asp Thr Leu Met Ser Ile245 250 255Gly Leu Asp Glu Lys Phe Pro Gln Asp Tyr Arg Leu Ala Gln Gln Val260 265 270Cys His Ala Ile Ala Asn Ile Ser Asp Arg Arg Lys Pro Ser Leu Gly275 280 285Lys Arg His Pro Pro Phe Arg Leu Pro Gln Glu His Arg Leu Phe Glu290 295 300Arg Leu Arg Glu Thr Val Thr Lys Gly Phe Val His Pro Asp Pro Leu305 310 315 320Trp Ile Pro Phe Lys Glu Val Ala Val Thr Leu Ile Tyr Gln Leu Ala325 330 335Glu Gly Pro Glu Val Ile Cys Ala Gln Ile Leu Gln Gly Cys Ala Lys340 345 350Gln Ala Leu Glu Lys Leu Glu Glu Lys Arg Thr Ser Gln Glu Asp Pro355 360 365Lys Glu Ser Pro Ala Met Leu Pro Thr Phe Leu Leu Met Asn Leu Leu370 375 380Ser Leu Ala Gly Asp Val Ala Leu Gln Gln Leu Val His Leu Glu Gln385 390 395 400Ala Val Ser Gly Glu Leu Cys Arg Arg Arg Val Leu Arg Glu Glu Gln405 410 415Glu His Lys Thr Lys Asp Pro Lys Glu Lys Asn Thr Ser Ser Glu Thr420 425 430Thr Met Glu Glu Glu Leu Gly Leu Val Gly Ala Thr Ala Asp Asp Thr435 440 445Glu Ala Glu Leu Ile Arg Gly Ile Cys Glu Met Glu Leu Leu Asp Gly450 455 460Lys Gln Thr Leu Ala Ala Phe Val Pro Leu Leu Leu Lys Val Cys Asn465 470 475 480Asn Pro Gly Leu Tyr Ser Asn Pro Asp Leu Ser Ala Ala Ala Ser Leu485 490 495Ala Leu Gly Lys Phe Cys Met Ile Ser Ala Thr Phe Cys Asp Ser Gln500 505 510Leu Arg Leu Leu Phe Thr Met Leu Glu Lys Ser Pro Leu Pro Ile Val515 520 525Arg Ser Asn Leu Met Val Ala Thr Gly Asp Leu Ala Ile Arg Phe Pro530 535 540Asn Leu Val Asp Pro Trp Thr Pro His Leu Tyr Ala Arg Leu Arg Asp545 550 555 560Pro Ala Gln Gln Val Arg Lys Thr Ala Gly Leu Val Met Thr His Leu565 570 575Ile Leu Lys Asp Met Val Lys Val Lys Gly Gln Val Ser Glu Met Ala580 585 590Val Leu Leu Ile Asp Pro Glu Pro Gln Ile Ala Ala Leu Ala Lys Asn595 600 605Phe Phe Asn Glu Leu Ser His Lys Gly Asn Ala Ile Tyr Asn Leu Leu610 615 620Pro Asp Ile Ile Ser Arg Leu Ser Asp Pro Glu Leu Gly Val Glu Glu625 630 635 640Glu Pro Phe His Thr Ile Met Lys Gln Leu Leu Ser Tyr Ile Thr Lys645 650 655Asp Lys Gln Thr Glu Ser Leu Val Glu Lys Leu Cys Gln Arg Phe Arg660 665 670Thr Ser Arg Thr Glu Arg Gln Gln Arg Asp Leu Ala Tyr Cys Val Ser675 680 685Gln Leu Pro Leu Thr Glu Arg Gly Leu Arg Lys Met Leu Asp Asn Phe690 695 700Asp Cys Phe Gly Asp Lys Leu Ser Asp Glu Ser Ile Phe Ser Ala Phe705 710 715 720Leu Ser Val Val Gly Lys Leu Arg Arg Gly Ala Lys Pro Glu Gly Lys725 730 735Ala Ile Ile Asp Glu Phe Glu Gln Lys Leu Arg Ala Cys His Thr Arg740 745 750Gly Leu Asp Gly Ile Lys Glu Leu Glu Ile Gly Gln Ala Gly Ser Gln755 760 765Arg Ala Pro Ser Ala Lys Lys Pro Ser Thr Gly Ser Arg Tyr Gln Pro770 775 780Leu Ala Ser Thr Ala Ser Asp Asn Asp Phe Val Thr Pro Glu Pro Arg785 790 795 800Arg Thr Thr Arg Arg His Pro Asn Thr Gln Gln Arg Ala Ser Lys Lys805 810 815Lys Pro Lys Val Val Phe Ser Ser Asp Glu Ser Ser Glu Glu Asp Leu820 825 830Ser Ala Glu Met Thr Glu Asp Glu Thr Pro Lys Lys Thr Thr Pro Ile835 840 845Leu Arg Ala Ser Ala Arg Arg His Arg Ser850 855(2)SEQ ID No.4的信息(ⅰ)序列特征(A)长度127氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:4的序列描述Ala Arg Asp Arg Leu Val Ala Ser Lys Thr Asp Gly Lys Ile Val Gln1 5 10 15Tyr Glu Cys Glu Gly Asp Thr Cys Gln Glu Glu Lys Ile Asp Ala Leu20 25 30Gln Leu Glu Tyr Ser Tyr Leu Leu Thr Ser Gln Leu Glu Ser Gln Arg35 40 45Ile Tyr Trp Glu Asn Lys Ile Val Arg Ile Glu Lys Asp Thr Ala Glu50 55 60Glu Ile Asn Asn Met Lys Thr Lys Phe Lys Glu Thr Ile Xaa Xaa Cys65 70 75 80Asp Asn Leu Glu His Xaa Leu Asn Asp Leu Leu Lys Glu Lys Gln Ser85 90 95Val Glu Arg Lys Cys Thr Gln Leu Asn Thr Lys Val Ala Lys Leu Thr100 105 110Asn Glu Leu Lys Glu Glu Gln Glu Met Asn Lys Cys Leu Arg Ala115 120 125(2)SEQ ID No.5的信息(ⅰ)序列特征(A)长度43氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:5的序列描述Ala Arg Ala Glu Val Gln Arg Trp Arg Arg Leu Val Ala Gly Arg Arg1 5 10 15Arg Ala Gly Gly Asp Gly Gly Asn Ser Gly Ser Cys Ser Arg Trp Gly20 25 30Gly Phe Thr Ser Tyr Pro Trp Asp Arg Glu Ile35 40(2)SEQ ID No.6的信息
(ⅰ)序列特征(A)长度751氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:6的序列描述Pro Ala Glu Ala His Ser Asp Ser Leu Ile Asp Thr Phe Pro Glu Cys1 5 10 15Ser Thr Glu Gly Phe Ser Ser Asp Ser Asp Leu Val Ser Leu Thr Val20 25 30Asp Val Asp Ser Leu Ala Glu Leu Asp Asp Gly Met Ala Ser Asn Gln35 40 45Asn Ser Pro Ile Arg Thr Phe Gly Leu Asn Leu Ser Ser Asp Ser Ser50 55 60Ala Leu Gly Ala Val Ala Ser Asp Ser Glu Gln Ser Lys Thr Glu Glu65 70 75 80Glu Arg Glu Ser Arg Ser Leu Phe Pro Gly Ser Leu Lys Pro Lys Leu85 90 95Gly Lys Arg Asp Tyr Leu Glu Lys Ala Gly Glu Leu Ile Lys Leu Ala100 105 110Leu Lys Lys Glu Glu Glu Asp Asp Tyr Glu Ala Ala Ser Asp Phe Tyr115 120 125Arg Lys Gly Val Asp Leu Leu Leu Glu Gly Val Gln Gly Glu Ser Ser130 135 140Pro Thr Arg Arg Glu Ala Val Lys Arg Arg Thr Ala Glu Tyr Leu Met145 150 155 160Arg Ala Glu Ser Ile Ser Ser Leu Tyr Gly Lys Pro Gln Leu Asp Asp165 170 175Val Ser Gln Pro Pro Gly Ser Leu Ser Ser Arg Pro Leu Trp Asn Leu180 185 190Arg Ser Pro Ala Glu Glu Leu Lys Ala Phe Arg Val Leu Gly Val Ile195 200 205Asp Lys Val Leu Leu Val Met Asp Thr Arg Thr Glu His Thr Phe Ile210 215 220Leu Xaa Gly Leu Arg Lys Ser Ser Glu Tyr Ser Arg Asn Arg Lys Thr225 230 235 240Ile Xaa Pro Arg Cys Val Pro Xaa Met Val Cys Leu His Lys Tyr Ile245 250 255Ile Ser Glu Glu Ser Xaa Phe Leu Val Leu Gln His Ala Glu Xaa Gly260 265 270Lys Leu Trp Ser Tyr Ile Ser Lys Phe Leu Asn Arg Ser Pro Glu Glu275 280 285Ser Phe Asp Ile Lys Glu Val Lys Lys Pro Thr Leu Ala Lys Val His290 295 300Leu Gln Gln Pro Thr Ser Ser Pro Gln Asp Ser Ser Ser Phe Glu Ser305 310 315 320Arg Gly Ser Asp Gly Gly Ser Met Leu Lys Ala Leu Pro Leu Lys Ser325 330 335Ser Leu Thr Pro Ser Ser Gln Asp Asp Ser Asn Gln Glu Asp Asp Gly340 345 350Gln Asp Ser Ser Pro Lys Trp Pro Asp Ser Gly Ser Ser Ser Glu Glu355 360 365Glu Cys Thr Thr Ser Tyr Leu Thr Leu Cys Asn Glu Tyr Gly Gln Glu370 375 380Lys Ile Glu Pro Gly Ser Leu Asn Glu Glu Pro Phe Met Lys Thr Glu385 390 395 400Gly Asn Gly Val Asp Thr Lys Ala Ile Lys Ser Phe Pro Ala His Leu405 410 415Ala Ala Asp Ser Asp Ser Pro Ser Thr Gln Leu Arg Ala His Glu Leu420 425 430Lys Phe Phe Pro Asn Asp Asp Pro Glu Ala Val Ser Ser Pro Arg Thr435 440 445Ser Asp Ser Leu Ser Arg Ser Lys Asn Ser Pro Met Glu Phe Phe Arg450 455 460Ile Asp Ser Lys Asp Ser Ala Ser Glu Leu Leu Gly Leu Asp Phe Gly465 470 475 480Glu Lys Leu Tyr Ser Leu Lys Ser Glu Pro Leu Lys Pro Phe Phe Thr485 490 495Leu Pro Asp Gly Asp Ser Ala Ser Arg Ser Phe Asn Thr Ser Glu Ser500 505 510Lys Val Glu Phe Lys Ala Gln Asp Thr Ile Ser Arg Gly Ser Asp Asp515 520 525Ser Val Pro Val Ile Ser Phe Lys Asp Ala Ala Phe Asp Asp Val Ser530 535 540Gly Thr Asp Glu Gly Arg Pro Asp Leu Leu Val Asn Leu Pro Gly Glu545 550 555 560Leu Glu Ser Thr Arg Glu Ala Ala Ala Met Gly Pro Thr Lys Phe Thr565 570 575Gln Thr Asn Ile Gly Ile Ile Glu Asn Lys Leu Leu Glu Ala Pro Asp580 585 590Val Leu Cys Leu Arg Leu Ser Thr Glu Gln Cys Gln Ala His Glu Glu595 600 605Lys Gly Ile Glu Glu Leu Ser Asp Pro Set Gly Pro Lys Set Tyr Ser610 615 620Ile Thr Glu Lys His Tyr Ala Gln Glu Asp Pro Arg Met Leu Phe Val625 630 635 640Ala Xaa Val Asp His Ser Ser Ser Gly Asp Met Ser Leu Leu Pro Ser645 650 655Ser Asp Pro Lys Phe Gln Gly Leu Gly Val Val Glu Ser Xaa Val Thr660 665 670Ala Asn Asn Thr Glu Glu Ser Leu Phe Arg Ile Cys Ser Pro Leu Ser675 680 685Gly Ala Asn Glu Tyr Ile Ala Ser Thr Asp Thr Leu Lys Thr Glu Glu690 695 700Val Leu Leu Phe Thr Asp Gln Thr Asp Asp Leu Ala Lys Glu Glu Pro705 710 715 720Thr Ser Leu Phe Xaa Arg Asp Ser Glu Thr Lys Gly Glu Ser Gly Leu725 730 735Val Leu Glu Gly Asp Lys Glu Ile His Gln Ile Phe Glu Gly Pro740 745 750(2)SEQ ID No.7的信息(ⅰ)序列特征(A)长度6氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:7的序列描述Ala Arg Gly Ser Thr Gln1 5(2)SEQ ID No.8的信息(ⅰ)序列特征(A)长度16氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:8的序列描述Ala Arg Gly Ser Ser Gln Val Arg Val Lys Ser Trp Arg Gly Asp Met1 5 10 15(2)SEQ ID No.9的信息(ⅰ)序列特征(A)长度271碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:9的序列描述CCGCACGAGC CTCTGTCATG CTTCTTGGCA TGATGGCACG AGGAAAGCCA GAAATTGTGG 60GAAGCAATTT AGACACACTG ATGAGCATAG GGCTGGATGA GAAGTTTCCA CAGGACTACA 120GGCTGGCCCA GCAGGTGTGC CATGCCATTG CCAACATCTC GGACAGGAGA AAGCCTTCTC 180TGGGCAAACG TCACCCCCCC TTCCGGCTGC CTCAGGAACA CAGGTTGTTT GAGCGACTGC 240GGGAGACAGT CACAAAAGGC TTTGTCCACC C 271(2)SEQ ID No.10的信息(ⅰ)序列特征(A)长度403碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:10的序列描述GGGTGGATAA CCTGAGGTAG GGAGTTCGAG ACCAGCCTGA CCAACATGGA GAAACCCCAT60CTCTACTAAA AATAAAAAAT TAGCCGGCGT ATTGGCGTGC GCCTGTAATC CCAGCTACTC 120AAGAGGCTGA GGCAGGAGAA TCGCCTGAAC CCAGAGGCGG AGGTTGTAGT GAGCCGAAAT 180CACACCATTG CACTCCAGCT TGGGCAACAA TAGCGAACCT CCATCTCAAA TTAAAAAAAA 240AATGCCTACA CGCTTCTTTA AAATGCAAGG CTTTCTCTTA AATTAGCCTA ACTGAACTGC 300GTTGAGCTGC TTCAACTTTG GAATATATGT TTGCCAATCT CCTTGTTTTC TAATGAATAA 360ATGTTTTTAT ATACTTTTAA AAAAAAAAAA AAAAAAACTC GAG 403(2)SEQ ID No.11的信息(ⅰ)序列特征(A)长度2276碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:11的序列描述GGAGGTTTGG GCGGCTTGGC GTCGGAGGAG AGCCCCACCC GCGGAGGAAC CCAGCCTTGC 60CAACGGAGCT GGCGGAGCTC ACTCCTCAGG TCAGGCGGGC GGCGTANAAA ACGCAGCGGA 120GCCAGGTGAA ACCAAGGCAC CGCCGTGGCT GGCCCCCGAC AGTTCCTCTA GCCGGGAGGT 180TGGAGGAGCT GAAAACGCCG CGGAGCCCTC GGCCGCCCGA GCAGGGGCTG GACCCCAGCC 240CTTGCAGCCT CCCTTCTCCT GGCACCCAAG TGCAGTCCTG GCTGCAGAAG GGGCCGCGGG 300CGCACTGAGT TTCCAACCTC CGTTCAGCCT GTCTGTCTCA GGGTGCAGCC TTAATGAGAG 360GTGATTCCTA AGCTGCTGGG AACCTGAGGT TGTCAAAGGG GCGGCAGGAA ATGGACAGCA 420GTATAAAACC CAGAAGCAGA ACTTGAAGGT TAAACCACTA GCCCATTTCA CAGAATGTTT 480CATCCATTTG TGGACCAAAA GATGGAGTTG GTTTTTATTT TTAAAAAGAT AATGTTAATG 540ATCTGATACC ACTACAAATA TTTACGTGAG AAGATTCATG GACTTGTCTT TTGGTTGGAC 600TGTCACTCAT TTCTGAAAGT TTCTTCAGCC ACAATTTCTA TTTGAAAATT CAAGTATCAA 660AGGATACCAG GTTTAGAATG GTATAATGAT GTATTTTGTC TGAGGACTGC AAATTTTATA 720GAGACCACAG TTGGATTCCA GTGATATTCT GCAATCAAAG TGATTTGATA AACCTAATTT 780TGAAGCATTT TATATTTATA AGCGACATCA AAAGATGGGA GAAAAAAATG GCGATGCAAA 840AACTTTCTGG ATGGAGCTAG AAGATGATGG AAAAGTGGAC TTCATTTTTG AACAAGTACA 900AAATGTGCTG CAGTCACTGA AACAAAAGAT CAAAGATGGG TCTGCCACCA ATAAAGAATA 960CATCCAAGCA ATGATTCTAG TGAATGAAGC AACTATAATT AACAGTTCAA CATCAATAAA1020GGATCCTATG CCTGTGACTC AGAAGGAACA GGAAAACAAA TCCAATGCAT TTCCCTCTAC1080ATCATGTGAA AACTCCTTTC CAGAAGACTG TACATTTCTA ACAACAGGAA ATAAGGAAAT1140TCTCTCTCTT GAAGATAAAG TTGTAGACTT TAGAGAAAAA GACTCATCTT CGAATTTATC1200TTACCAAAGT CATGACTGCT CTGGTGCTTG TCTGATGAAA ATGCCACTGA ACTTGAAGGG1260AGAAAACCCT CTGCAGCTGC CAATCAAATG TCACTTCCAA AGACGACATG CAAAGACAAA1320CTCTCATTCT TCAGCACTCC ACGTGAGTTA TAAAACCCCT TGTGGAAGGA GTCTACGAAA1380CGTGGAGGAA GTTTTTCGTT ACCTGCTTGA GACAGAGTGT AACTTTTTAT TTACAGATAA1440CTTTTCTTTC AATACCTATG TTCAGTTGGC TCGGAATTAC CCAAAGCAAA AAGAAGTTGT1500TTCTGATGTG GATATTAGCA ATGGAGTGGA ATCAGTGCCC ATTTCTTTCT GTAATGAAAT1560TGACAGTAGA AAGCTCCCAC AGTTTAAGTA CAGAAAGACT GTGTGGCCTC GAGCATATAA1620TCTAACCAAC TTTTCCAGCA TGTTTACTGA TTCCTGTGAC TGCTCTGAGG GCTGCATAGA1680CATAACAAAA TGTGCATGTC TTCAACTGAC AGCAAGGAAT GCCAAAACTT CCCCCTTGTC1740AAGTGACAAA ATAACCACTG GATATAAATA TAAAAGACTA CAGAGACAGA TTCCTACTGG1800CATTTATGAA TGCAGCCTTT TGTGCAAATG TAATCGACAA TTGTGTCAAA ACCGAGTTGT1860CCAACATGGT CCTCAAGTGA GGTTACAGGT GTTCAAAACT GAGCAGAAGG GATGGGGTGT1920ACGCTGTCTA GATGACATTG ACAGAGGGAC ATTTGTTTGC ATTTATTCAG GAAGATTACT1980AAGCAGAGCT AACACTGAAA AATCTTATGG TATTGATGAA AACGGGAGAG ATGAGAATAC2040TATGAAAAAT ATATTTTCAA AAAAGAGGAA ATTAGAAGTT GCATGTTCAG ATTGTGAAGT2100TGAAGTTCTC CCATTAGGAT TGGAAACACA TCCTAGAACT GCTAAAACTG AGAAATGTCC2160ACCAAAGTTC AGTAATAATC CCAAGGAGCT TACTATGGAA ACGAAATATG ATAATATTTC2220AAGAATTCAG TATCATTCAG TTATTAGAGA TCCTGAATCC AAGACAGCCA TTTTTC2276(2)SEQ ID No.12的信息(ⅰ)序列特征(A)长度3114碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:12的序列描述CAGGAGTCCG AACCCTTCAG TCATATAGAC CCAGAGGAGT CAGAGGAGAC CAGGCTCTTG60AATATCTTAG GACTTATCTT CAAAGGCCCA GCAGCTTCCA CACAAGAAAA GAATCCCCGG 120GAGTCTACAG GAAACATGGT CACAGGACAG ACTGTCTGTA AAAATAAACC CAATATGTCG 180GATCCTGAGG AATCCAGGGG AAATGATGAA CTAGTGAAGC AGGAGATGCT GGTACAGTAT 240CTGCAGGATG CCTACAGCTT CTCCCGGAAG ATTACAGAGG CCATTGGCAT CATCAGCAAG 300ATGATGTATG AAAACACAAC TACAGTGGTG CAGGAGGTGA TTGAATNCTT TGTGATGGTC 360TTCCAATTTG GGGTACCCCA GGCCCTGTTT GGGGTGCGCC GTATGCTGCC TCTCATCTGG 420TCTAAGGAGC CTGGTGTCCG GGAAGCCGTG CTTAATGCCT ACCGCCAACT CTACCTCAAC 480CCCAAAGGGG ACTCTGCCAG AGCCAAGGCC CAGGCTTTGA TTCAGAATCT CTCTCTGCTG 540CTAGTGGATG CCTCGGTTGG GACCATTCAG TGTCTTGAGG AAATTCTCTG TGAGTTTGTG 600CAGAAGGATG AGTTGAAACC AGCAGTGACC CATCTGCTGT GGGAGCGGGC CACCGAGAAG 660GTCGCCTGCT GTCCTCTGGA GCGCTGTTCC TCTGTCATGC TTCTTGGCAT GATGGCACGA 720AGAAAGCCAG AAATTGTGGG AAGCAATTTA GACACACTGA TGAGCATAGG GCTGGATGAG 780AAGTTTCCAC AGGACTACAG GCTGGCCCAG CAGGTGTGCC ATGCCATTGC CAACATCTCG 840GACAGGAGAA AGCCTTCTCT GGGCAAACGT CACCCCCCCT TCCGGCTGCC TCAGGAACAC 900AGGTTGTTTG AGCGACTGCG GGAGACAGTC ACAAAAGGCT TTGTCCACCC AGACCCACTC 960TGGATCCCAT TCAAAGAGGT GGCAGTGACC CTCATTTACC AACTGGCAGA GGGCCCCGAA1020GTGATCTGTG CCCAGATATT GCAGGGCTGT GCAAAACAGG CCCTGGAGAA GCTAGAAGAG1080AAGAGAACCA GTCAGGAGGA CCCGAAGGAG TCCCCCGCAA TGCTCCCCAC TTTCCTGTTG1140ATGAACCTGC TGTCCCTGGC TGGGGATGTG GCTCTGCAGC AGCTGGTCCA CTTGGAGCAG1200GCAGTGAGTG GAGAGCTCTG CCGGCGCCGA GTTCTCCGGG AAGAACAGGA 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TTATTTAACA TTATGCAATG1140AATATGGGCA AGAAAAGATT GAACCAGGGT CTTTGAATGA GGAGCCCTTC ATGAAGACTG1200AAGGGAATGG TGTTGATACA AAAGCTATTA AAAGCTTCCC AGCACACCTT GCTGCTGACA1260GTGACAGCCC CAGCACACAG CTGAGAGCTC ACGAGCTGAA GTTCTTCCCC AACGATGACC1320CAGAAGCAGT TAGTTCTCCA AGAACATCAG ATTCCCTCAG TAGATCAAAA AATAGCCCCA1380TGGAATTCTT TAGGATAGAC AGTAAGGATA GCGCAAGTGA ACTCCTGGGA CTTGACTTTG1440GAGAAAAATT GTATAGTCTA AAATCAGAAC CTTTGAAACC ATTCTTTACT CTTCCAGATG1500GAGACAGTGC TTCTAGGAGT TTTAATACTA GTGAAAGCAA GGTAGAGTTT AAAGCTCAGG1560ACACCATTAG CAGGGGCTCA GATGACTCAG TGCCAGTTAT TTCATTTAAA GATGCTGCTT1620TTGATGATGT CAGTGGTACT GATGAAGGAA GACCTGATCT TCTTGTAAAT TTACCTGGTG1680AATTGGAGTC AACAAGAGAA GCTGCAGCAA TGGGACCTAC TAAGTTTACA CAAACTAATA1740TAGGGATAAT AGAAAATAAA CTCTTGGAAG CCCCTGATGT TTTATGCCTC AGGCTTAGTA1800CTGAACAATG CCAAGCACAT GAGGAGAAAG GCATAGAGGA ACTGAGTGAT CCCTCTGGGC1860CCAAATCCTA TAGTATAACA GAGAAACACT ATGCACAGGA GGATCCCAGG ATGTTATTTG1920TAGCANCTGT TGATCATAGT AGTTCAGGAG ATATGTCTTT GTTACCCAGC 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No.17的信息(ⅰ)序列特征(A)长度1397碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:17的序列描述GTTCAACTCA ATAGAAGATG ACGTTTGCCA GCTAGTGTAT GTGGAAAGAG CTGAAGTGCT60CAAATCTGAA GATGGCGCCA GCCTCCCAGT GATGGACCTG ACTGAACTCC CCAAGTGCAC 120GGTGTGTCTG GAGCGCATGG ACGAGTCTGT GAATGGCATC CTCACAACGT TATGTAACCA 180CATCTTCCAC AGCCAGTGTC TACAGCGCTG GGACGATACC ACGTGTCCTG TTTGCCGGTA 240CTGTCAAACG CCCGAGCCAG TAGAAGAAAA TAAGTGTTTT GAGTGTGGTG TTCAGGAAAA 300TCTTTGGATT TGTTTAATAT GCGGCCACAT AGGATGTGGA CGGTATGTCA GTCGACATGC 360TTATAAGCAC TTTGAGGAAA CGCAGCACAC GTATGCCATG CAGCTTACCA ACCATCGAGT 420CTGGGACTAT GCTGGAGATA ACTATGTTCA TCGACTGGTT GCAAGTAAAA CAGATGGAAA 480AATAGTACAG TATGAATGTG AGGGGGATAC TTGCCAGGAA GAGAAAATAG ATGCCTTACA 540GTTAGAGTAT TCATATTTAC TAACAAGCCA GCTGGAATCT CAGCGAATCT ACTGGGAAAA 600CAAGATAGTT CGGATAGAGA AGGACACAGC AGAGGAAATT AACAACATGA AGACCAAGTT 660TAAAGAAACA ATTGAGAAGT GTGATAATCT AGAGCACAAA CTAAATGATC TCCTAAAAGA 720AAAGCAGTCT GTGGAAAGAA AGTGCACTCA GCTAAACACA AAAGTGGCCA AACTCACCAA 780CGAGCTCAAA GAGGAGCAGG AAATGAACAA 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ATCTGAAATC TGAAATGCTC CAAAATCCTA AACTTTTTGA 240GTGCTGACAT TATGCCACAA ATGGAAAATT TCATACCTGA CCTTATGTGG GTTGCANTCA 300AAACACAGGT GCACAACACC CAGTTCATGC AACATCCCCA ATGGGAAAAA AGACCCCCCC 360AGCTCTCTTC TGCTGCAGTT TTTCTGCTCA CACCTGGATT TCCCCATGCA TTCCCACAAA 420AAGTAATTAA ATGGCATGCG TGCAGGCTGG ACACGCCAAC AACAGGTTTC CCACAATGCC 480CCACATGGGG CCAAGACCTG TGTGCATTAC TCATTGCATT TTTTTGCTTA TTCTCTGCTG 540TGTGGTATAA ATATATTGTT GAAAATGTCA AAAAGACCTA AAGATACCCC TGTGAATATC 600AGTGATAAGA AAAAGAGGAA GCATTTATGT TTATCTATAG CACAGAAAGT CAAGTTGTTG 660GAGAAACTGG ACAGTGGTGT AAGTGTGAAA CATCTTACAG AAGAGTATGG TGTTGGAATG 720ACCACCATAT ATGACCTGAA GAAACAGAAG GATAAACTGT TGAAGTTTTA TGCTGAAAGT 780GATGAGCAGA TATTAATGAA AAATAGAAAA ACACTTCATA AAGCTAAAAA TGAAGATCTT 840GATCGTGTAT TGAAAGAGTG GATCCGTCAG CGTCGCAGTG AACACATGCC ACTTAATGGT 900ATGCTGATCA TGAAACAAGC AAAGATATAT CACAATGAAC TAAAAATTGA GGGGAACTGT 960GAATATTCAA CAGGCTGGTT GCAGAAATTT AAGAAAAGAC ATGGCATTAA ATTTTTAAAG1020ACTTGTGGCA ATAAAGCATC TGCTGGTCAT GAAGCAACAG AGAAGTTTAC TGGCAATTTC1080AGTAATGATG ATGAACAAGA TGGTAACTTT GAAGGATTCA NTATGTCAAG TGAGAAAAAA1140ATAATGTCTG ACCTCCTTAC ATATACAAAA AATATACATC CAGAGACTGT CAGTAAGCTG1200GAAGAAGAGG ATATCTTTNA TGTTTTTAAC AGTAATAATG AGGCTCCAGT TGTTCATTCA1260TTGTCCAATG GTGAAGTAAC AAAAATGGTT CTGAATCAAG ATGATCATGA TGATAATGAT1320AATGAAGATG ATGTTAACAC TGCAGAAAAA GTGCCTATAG ACGACATGGT AAAAATGTGT1380GATGGGCTTA TTAAAGGACT AGAGCAGCAT GCATTCATAA CAGAGCAAGA AATCATGTCA1440GTTTATAAAA TCAAAGAGAG ACTTCTAAGA CAAAAAGCAT CATTAATGAG GCAGATGACT1500CTGAAAGAAA CATTTAAAAA AGCCATCCAG AGGAATGCTT CTTCCTCTCT ACAGGACCCA1560CTTCTTGGTC CCTCAACTGC TTCTGATGCT TCTTCTCACC TAAAAATAAA ATAAAATACA1620GTGTACAGTA ACCTTTTAGT CAAAACAGCA TCATACTTGG AAACTGAAAG CCTACTGTTA1680TTTGTTATTG TTGCTTAACA GCTGATACAG GTATTCTGGT GACACTACTG TGCTGGCTTA1740CTTAACCTGA ATACACTATT TTTTTCGTTG TAAAAAAAAA AAAAAAANAA NAAAAAAAAA1800AAAAAANANA 1810(2)SEQ ID No.20的信息(ⅰ)序列特征(A)长度70氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:20的序列描述Ala Arg Glu Gly Gly Lys Met Val Leu Glu Ser Thr Met Val Cys Val1 5 10 15Asp Asn Ser Glu Tyr Met Arg Asn Gly Asp Phe Leu Pro Thr Arg Leu20 25 30Gln Ala Gln Gln Asp Ala Val Asn Ile Xaa Cys His Ser Lys Thr Arg35 40 45Ser Asn Pro Glu Asn Asn Val Gly Leu Ile Thr Leu Ala Asn Asp Cys50 55 60Glu Val Leu Thr Thr Leu65 70(2)SEQ ID No.21的信息(ⅰ)序列特征(A)长度100氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:21的序列描述Ala Arg Glu Ser Thr Met Val Cys Val Asp Asn Ser Glu Tyr Met Arg1 5 10 15Asn Gly Asp Phe Leu Pro Thr Arg Leu Gln Ala Gln Gln Asp Ala Val20 25 30Asn Ile Val Cys His Ser Lys Thr Arg Ser Asn Pro Glu Asn Asn Val35 40 45Gly Leu Ile Thr Leu Ala Asn Asp Cys Glu Val Leu Thr Thr Leu Thr50 55 60Pro Asp Thr Gly Arg Ile Leu Ser Lys Leu His Thr Val Gln Pro Lys65 70 75 80Gly Lys Ile Thr Phe Cys Thr Gly Ile Arg Val Ala His Leu Ala Leu85 90 95Lys His Arg Gln100(2)SEQ ID No.22的信息(ⅰ)序列特征(A)长度214碱基对
(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:22的序列描述CGGCACGAGA AGGTGGCAAG ATGGTGTTGG AAAGCACTAT GGTGTGTGTG GACAACAGTG60AGTATATGCG GAATGGAGAC TTCTTACCCA CCAGGCTGCA GGCCCAGCAG GATGCTGTCA 120ACATANTTTG TCATTCAAAG ACCCGCAGCA ACCCTGAGAA CAACGTGGGC CTTATCACAC 180TGGCTAATGA CTGTGAAGTG CTGACCACAC TCAC 214(2)SEQ ID No.23的信息(ⅰ)序列特征(A)长度375碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:23的序列描述TATGGACACA TTTGAGCCAG CCAAGGAGGA GGATGATTAC GACGTGATGC AGGACCCCGA60GTTCCTTCAG AGTGTCCTAG AGAACCTCCC AGGTGTGGAT CCCAACAATG AAGCCATTCG 120AAATGNTATG GGCTCCCTGG CCTCCCAGGC CACCAAGGAC GGCAAGAAGG ACAAGAAGGA 180GGAAGACAAG AAGTGAGACT GGAGGGAAAG GGTAGCTGAG TCTGCTTAGG GGACTGCATG 240GGAAGCACGG AATATAGGGT TAGATGTGTG TTATCTGTAA CCATTACAGC CTAAATAAAG 300CTTGGCAACT TTTTAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA 360AAAAAAAAAC TCGAG375(2)SEQ ID No.24的信息(ⅰ)序列特征(A)长度304碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:24的序列描述CGGCACGAGA AAGCACTATG GTGTGTGTGG ACAACAGTGA GTATATGCGG AATGGAGACT60TCTTACCCAC CAGGCTGCAG GCCCAGCAGG ATGCTGTCAA CATAGTTTGT CATTCAAAGA 120CCCGCAGCAA CCCTGAGAAC AACGTGGGCC TTATCACACT GGCTAATGAC TGTGAAGTGC 180TGACCACACT CACCCCAGAC ACTGGCCGTA TCCTGTCCAA GCTACATACT GTCCAACCCA 240AGGGCAAGAT CACCTTCTGC ACGGGCATCC GCGTTGCCCA TCTGGCTCTG AAGCACCGAC 300AAGG304(2)SEQ ID No.25的信息(ⅰ)序列特征(A)长度22氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:25的序列描述Val Arg Gly Gly Gly Gly Gly Gly Pro Gly Gly Gly Gly Val Gly Gly1 5 10 15Arg Cys Gly Gly Gly Gly20(2)SEQ ID No.26的信息(ⅰ)序列特征(A)长度78氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:26的序列描述Ala Arg Ala Ala Arg Ala Lys Ala Gln Ala Leu Ile Gln Asn Leu Ser1 5 10 15Leu Leu Leu Val Asp Ala Ser Val Gly Thr Ile Gln Cys Leu Glu Glu20 25 30Ile Leu Cys Glu Phe Val Gln Lys Asp Glu Leu Lys Pro Ala Val Thr35 40 45Xaa Leu Leu Trp Glu Arg Ala Thr Glu Lys Val Ala Cys Cys Pro Leu50 55 60Glu Arg Cys Ser Ser Val Met Leu Leu Gly Met Met Ala Arg65 70 75(2)SEQ ID No.27的信息(ⅰ)序列特征(A)长度384氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:27的序列描述Lys Met Val Leu Glu Ser Thr Met Val Cys Val Asp Asn Ser Glu Tyr1 5 10 15Met Arg Asn Gly Asp Phe Leu Pro Thr Arg Leu Gln Ala Gln Gln Asp20 25 30Ala Val Asn Ile Val Cys His Ser Lys Thr Arg Ser Asn Pro Glu Asn35 40 45Asn Val Gly Leu Ile Thr Leu Ala Asn Asp Cys Glu Val Leu Thr Thr50 55 60Leu Thr Pro Asp Thr Gly Arg Ile Leu Ser Lys Leu His Thr Val Gln65 70 75 80Pro Lys Gly Lys Ile Thr Phe Cys Thr Gly Ile Arg Val Ala His Leu85 90 95Ala Leu Lys His Arg Gln Gly Lys Asn His Lys Met Arg Ile Ile Ala100 105 110Phe Val Gly Ser Pro Val Glu Asp Asn Glu Lys Asp Leu Val Lys Leu115 120 125Ala Lys Arg Leu Lys Lys Glu Lys Val Asn Val Asp Ile Ile Asn Phe130 135 140Gly Glu Glu Glu Val Asn Thr Glu Lys Leu Thr Ala Phe Val Asn Thr145 150 155 160Leu Asn Gly Lys Asp Gly Thr Gly Ser His Leu Val Thr Val Pro Pro165 170 175Gly Pro Ser Leu Ala Asp Ala Leu Ile Ser Ser Pro Ile Leu Ala Gly180 185 190Glu Gly Gly Ala Met Leu Gly Leu Gly Ala Ser Asp Phe Glu Phe Gly195 200 205Val Asp Pro Ser Ala Asp Pro Glu Leu Ala Leu Ala Leu Arg Val Ser210 215 220Met Glu Glu Gln Arg Gln Arg Gln Glu Glu Glu Ala Arg Arg Ala Ala225 230 235 240Ala Ala Ser Ala Ala Glu Ala Gly Ile Ala Thr Thr Gly Thr Glu Asp245 250 255Ser Asp Asp Ala Leu Leu Lys Met Thr Ile Ser Gln Gln Glu Phe Gly260 265 270Arg Thr Gly Leu Pro Asp Leu Ser Ser Met Thr Glu Glu Glu Gln Ile275 280 285Ala Tyr Ala Met Gln Met Ser Leu Gln Gly Ala Glu Phe Gly Gln Ala290 295 300Glu Ser Ala Asp Ile Asp Ala Ser Ser Ala Met Asp Thr Ser Glu Pro305 310 315 320Ala Lys Glu Glu Asp Asp Tyr Asp Val Met Gln Asp Pro Glu Phe Leu325 330 335Gln Ser Val Leu Glu Asn Leu Pro Gly Val Asp Pro Asn Asn Glu Ala340 345 350Ile Arg Asn Ala Met Gly Ser Leu Pro Pro Arg Pro Pro Arg Thr Ala355 360 365Arg Arg Thr Arg Arg Arg Lys Thr Arg Ser Glu Thr Gly Gly Lys Gly370 375 380(2)SEQ ID No.28的信息(ⅰ)序列特征(A)长度68氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:28的序列描述Ala Arg Asp Ala Tyr Ser Phe Ser Arg Lys Ile Thr Glu Ala Ile Gly1 5 10 15Ile Ile Ser Lys Met Met Tyr Glu Asn Thr Thr Thr Val Val Gln Glu20 25 30Val Ile Glu Phe Phe Val Met Val Phe Gln Phe Gly Val Pro Gln Ala35 40 45Leu Phe Gly Val Arg Arg Met Leu Pro Leu Ile Trp Ser Lys Glu Pro50 55 60Gly Val Arg Glu65(2)SEQ ID No.29的信息(ⅰ)序列特征(A)长度97氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:29的序列描述Ala Arg Ala Gln Ala Leu Phe Gly Val Arg Arg Met Leu Pro Leu Ile1 5 10 15Trp Ser Lys Glu Pro Gly Val Arg Glu Ala Val Leu Asn Ala Tyr Arg20 25 30Gln Leu Tyr Leu Ash Pro Lys Gly Asp Ser Ala Arg Ala Lys Ala Gln35 40 45Ala Leu Ile Gln Asn Leu Ser Leu Leu Leu Val Asp Ala Ser Val Gly50 55 60Thr Ile Gln Cys Leu Glu Glu Ile Leu Cys Glu Phe Val Gln Lys Asp65 70 75 80Glu Leu Lys Pro Ala Val Thr Gln Leu Leu Trp Glu Pro Ala Thr Glu85 90 95Lys(2)SEQ ID No.30的信息
(ⅰ)序列特征(A)长度116氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:30的序列描述Ala Arg Ala Thr Thr Ala Phe Gly Cys Arg Ile Trp Asn Pro Cys Ala1 5 10 15Ala Leu Thr Met Lys Gln Ser Ser Asn Val Pro Ala Phe Leu Ser Lys20 25 30Leu Trp Thr Leu Val Glu Glu Thr His Thr Asn Glu Phe Ile Thr Trp35 40 45Ser Gln Asn Gly Gln Ser Phe Leu Val Leu Asp Glu Gln Arg Phe Ala50 55 60Lys Glu Ile Leu Pro Lys Tyr Phe Lys His Asn Asn Met Ala Ser Phe65 70 75 80Val Arg Gln Leu Asn Met Tyr Gly Phe Arg Lys Val Ile His Ile Asp85 90 95Ser Gly Ile Val Lys Gln Glu Arg Asp Gly Pro Val Glu Phe Gln His100 105 110Pro Tyr Phe Gln115(2)SEQ ID No.31的信息(ⅰ)序列特征(A)长度124氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:31的序列描述Ala Arg Gly Ala Thr Cys Glu Arg Cys Lys Gly Gly Phe Ala Pro Ala1 5 10 15Glu Lys Ile Val Asn Ser Asn Gly Glu Leu Tyr His Glu Gln Cys Phe20 25 30Val Cys Ala Gln Cys Phe Gln Gln Phe Pro Glu Gly Leu Phe Tyr Glu35 40 45Phe Glu Gly Arg Lys Tyr Cys Glu His Asp Phe Gln Met Leu Phe Ala50 55 60Pro Cys Cys His Gln Cys Gty Glu Phe Ile Ile Gly Arg Val Ile Lys65 70 75 80Ala Met Asn Asn Ser Trp His Pro Glu Cys Phe Arg Cys Asp Leu Cys85 90 95Gln Glu Val Leu Ala Asp Ile Gly Phe Val Lys Asn Ala Gly Arg His100 105 110Leu Cys Arg Pro Cys His Asn Arg Glu Lys Ala Arg115 120(2)SEQ ID No.32的信息(ⅰ)序列特征(A)长度768碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:32的序列描述TACGAGGAGG AGGAGGAGGA GGCCCCGGAG GAGGAGGCGT TGGAGGTCGA TGCGGAGGCG60GAGGATGAGG AGGCCGAGGC GCCGGAGGAG GCCGAGGCGC CGGAGCAGGA GGAGGCCGGC 120CGGAGGCGGC ATGAGACGAG CGTGGCGGCC GCGGCTGCTC GGGGCCGCGC TGGTTGCCCA 180TTGACAGCGG CGTCTGCAGC TCGCTTCAAG ATGGCCGCTT GGCTCGCATT CATTTTCTGC 240TGAACGACTT TTAACTTTCA TTGTCTTTTC CGCCCGCTTC GATCGCCTCG CGCCGGCTGC 300TCTTTCCGGG ATTTTTTATC AAGCAGAAAT GCATCGAACA ACGAGAATCA AGATCACTGA 360GCTAAATCCC CACCTGATGT GTGTGCTTTG TGGAGGGTAC TTCATTGATG CCACAACCAT 420AATAGAATGT CTACATTCCT TCTGTAAAAC GTGTATTGTT CGTTACCTGG AGACCAGCAA 480GTATTGTCCT ATTTGTGATG TCCAAGTTCA CAAGACCAGA CCACTACTGA ATATAAGGTC 540AGATAAAACT CTCCAAGATA TTGTATACAA ATTAGTTCCA GGGCTTTTCA AAAATGAAAT 600GAAGAGAAGA AGGGATTTTT ATGCAGCTCA TCCTTCTGCT GATGCTGCCA ATGGCTCTAA 660TGAAGATNGA GGAGAGGTTG CAGATGAAGA TAAGAGAATT ATAACTGATG ATGAGATAAT 720AAGCTTATCC ATTGAATTCT TTGACCAGAA CAGATTGGAT CGGAAAGT768(2)SEQ ID No.33的信息(ⅰ)序列特征(A)长度642碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:33的序列描述TTTAAATAAA CCAGCAGGTT GCTAAAAGAA GGCATTTTAT CTAAAGTTAT TTTAATAGGT60GGTATAGCAG TAATTTTAAA TTTAAGAGTT GCTTTTACAG TTAACAATGG AATATGCCTT 120CTCTGCTATG TCTGAAAATA GAAGNTATTT ATTATGAGCT TNTACAGGTA TTTTTAAATA 180GAGCAAGCAT GTTGAATTTA AAATATGAAT AACCCCACCC AACAATTTTC AGTTTATTTT 240TTGCTTTGGT CGAACTTGGT GTGTGTTCAT CACCCATCAG TTATTTGTGA GGGTGTTTAT 300TCTATATGAA TATTGTTTCA TGTTTGTATG GGAAAATTGT AGCTAAACAT TTCATTGTCC 360CCAGTCTGCA AAAGAAGCAC AATTCTATTG CTTTGTCTTG CTTATAGTCA TTAAATCATT 420ACTTTTACAT ATATTGCTGT TACTTCTGCT TTCTTTAAAA ATATAGTAAA GGATGTTTTA 480TGAAGTCACA AGATACATAT ATTTTTATTT TGACCTAAAT TTGTACAGTC CCATTGTAAG 540TGTTGTTTCT AATTATAGAT GTAAAATGAA ATTTCATTTG TAATTGGAAA AAATCCAATA 600AAAAGGATAT TCATTTAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AA 642(2)SEQ ID No.34的信息(ⅰ)序列特征(A)长度236碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:34的序列描述CGGCACGAGC TGCCAGAGCC AAGGCCCAGG CTTTGATTCA GAATCTCTCT CTGCTGCTAG 60TGGATGCCTC GGTTGGGACC ATTCAGTGTC TTGAGGAAAT TCTCTGTGAG TTTGTGCAGA120AGGATGAGTT GAAACCAGCA GTGACCCANC TGCTGTGGGA GCGGGCCACC GAGAAAGTCG180CCTGCTGTCC TCTGGAACGC TGTTCCTCTG TCATGCTTCT TGGCATGATG GCACGA236(2)SEQ ID No.35的信息(ⅰ)序列特征(A)长度333碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:35的序列描述CCGGGCGTAT TGGCGTGCGC CTGTAATCCC AGCTAACTCA AGAGGCTGAG GCAGGAGAAT60CGCCTGAACC CAGAGGCGGA GGTTGTAGTG AGCCGAAATC ACACCATTGC ACTCCAGCTT 120GGGCAACAAT AGCGAACCTC CATCTCAAAT TAAAAAAAAA AATGCCTACA CGCTCTTTAA 180AATGCAAGGC TTTCTCTTAA ATTAGCCTAA CTGAACTGCG TTGAGCTGCT TCAACTTTGG 240AATATATGTT TGCCAATCTC CTTGTTTTCT AATGAATAAA TGTTTTTATA TACTTTTAGA 300AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAACTC GAG333(2)SEQ ID No.36的信息(ⅰ)序列特征(A)长度1272碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:36的序列描述GCAAGATGGT GTTGGAAAGC ACTATGGTGT GTGTGGACAA CAGTGAGTAT ATGCGGAATG60GAGACTTCTT ACCCACCAGG CTGCAGGCCC AGCAGGATGC TGTCAACATA GTTTGTCATT 120CAAAGACCCG CAGCAACCCT GAGAACAACG TGGGCCTTAT CACACTGGCT AATGACTGTG 180AAGTGCTGAC CACACTCACC CCAGACACTG GCCGTATCCT GTCCAAGCTA CATACTGTCC 240AACCCAAGGG CAAGATCACC TTCTGCACGG GCATCCGCGT GGCCCATCTG GCTCTGAAGC 300ACCGACAAGG CAAGAATCAC AAGATGCGCA TCATTGCCTT TGTGGGAAGC CCAGTGGAGG 360ACAATGAGAA GGATCTGGTG AAACTGGCTA AACGCCTCAA GAAGGAGAAA GTAAATGTTG 420ACATTATCAA TTTTGGGGAA GAGGAGGTGA ACACAGAAAA GCTGACAGCC TTTGTAAACA 480CGTTGAATGG CAAAGATGGA ACCGGTTCTC ATCTGGTGAC AGTGCCTCCT GGGCCCAGTT 540TGGCTGATGC TCTCATCAGT TCTCCGATTT TGGCTGGTGA AGGTGGTGCC ATGCTGGGTC 600TTGGTGCCAG TGACTTTGAA TTTGGAGTAG ATCCCAGTGC TGATCCTGAG CTGGCCTTGG 660CCCTTCGTGT ATCTATGGAA GAGCAGCGGC AGCGGCAGGA GGAGGAGGCC CGGCGGGCAG 720CTGCAGCTTC TGCTGCTGAG GCCGGGATTG CTACGACTGG GACTGAAGAC TCAGACGATG 780CCCTGCTGAA GATGACCATC AGCCAGCAAG AGTTTGGCCG CACTGGGCTT CCTGACCTAA 840GCAGTATGAC TGAGGAAGAG CAGATTGCTT ATGCCATGCA GATGTCCCTG CAGGGAGCAG 900AGTTTGGCCA GGCGGAATCA GCAGACATTG ATGCCAGCTC AGCTATGGAC ACATCTGAGC 960CAGCCAAGGA GGAGGATGAT TACGACGTGA TGCAGGACCC CGAGTTCCTT CAGAGTGTCC 1020TAGAGAACCT CCCAGGTGTG GATCCCAACA ATGAAGCCAT TCGAAATGCT ATGGGCTCCC 1080TGCCTCCCAG GCCACCAAGG ACGGCAAGAA GGACAAGAAG GAGGAAGACA AGAAGTGAGA1140CTGGAGGGAA AGGGTAGCTG AGTCTGCTTA GGGGACTGCA TGGGAAGCAC GGAATATAGG1200GTTAGATGTG TGTTATCTGT AACCATTACA GCCTAAATAA AGCTTGGCAA CTTTTAAAAA1260AAAAAAAAAA AA1272(2)SEQ ID No.37的信息(ⅰ)序列特征(A)长度206碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:37的序列描述CGGCACGAGA TGCCTACAGC TTCTCCCGGA AGATTACAGA GGCCATTGGC ATCATCAGCA60AGATGATGTA TGAAAACACA ACTACAGTGG TGCAGGAGGT GATTGAATTC TTTGTGATGG 120TCTTCCAATT TGGGGTACCC CAGGCCCTGT TTGGGGTGCG CCGTATGCTG CCTCTCATCT 180GGTCTAAGGA GCCTGGTGTC CGGGAA206(2)SEQ ID No.38的信息(ⅰ)序列特征(A)长度341碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:38的序列描述TACTAAAAAT AAAAAATTAG CCGGGCGTAT TGGCGTGCGC CTGTAATCCC AGCTACTCAA60GAGGCTGAGG CAGGAGAATC GCCTGAACCC AGAGGCGGAG GTTGTAGTGA GCCGAAATCA 120CACCATTGCA CTCCAGCTTG GGCAACAATA GCGAACCTCC ATCTCAAATT AAAAAAAAAA 180TGCCTACACG CTCTTTAAAA TGCAAGGCTT TCTCTTAAAT TAGCCTAACT GAACTGCGTT 240GAGCTGCTTC AACTTTGGAA TATATGTTTG CCAATCTCCT TGTTTTCTAA TGAATAAATG 300TTTTTATATA CTTTTAANGA GAGAAAAAAA ANAAACTCGA G 341(2)SEQ ID No.39的信息(ⅰ)序列特征(A)长度293碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:39的序列描述CGGCACGAGC CCAGGCCCTG TTTGGGGTGC GCCGTATGCT GCCTCTCATC TGGTCTAAGG60AGCCTGGTGT CCGGGAAGCC GTGCTTAATG CCTACCGCCA ACTCTACCTC AACCCCAAAG 120GGGACTCTGC CAGAGCCAAG GCCCAGGCTT TGATTCAGAA TCTCTCTCTG CTGCTAGTGG 180ATGCCTCGGT TGGGACCATT CAGTGTCTTG AGGAAATTCT CTGTGAGTTT GTGCAGAAGG 240ATGAGTTGAA ACCAGCAGTG ACCCAGCTGC TGTGGGAACC GGCCACCGAG AAA 293(2)SEQ ID No.40的信息(ⅰ)序列特征(A)长度350碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:40的序列描述CGGCACGAGC TACCACCGCG TTCGGGTGTA GAATTTGGAA TCCCTGCGCC GCGTTAACAA60TGAAGCAGAG TTCGAACGTG CCGGCTTTCC TCAGCAAGCT GTGGACGCTT GTGGAGGAAA 120CCCACACTAA CGAGTTCATC ACCTGGAGCC AGAATGGCCA AAGTTTTCTG GTCTTGGATG 180AGCAACGATT TGCAAAAGAA ATTCTTCCCA AATATTTCAA GCACAATAAT ATGGCAAGCT 240TTGTGAGGCA ACTGAATATG TATGGTTTCC GTAAAGTAAT ACATATCGAC TCTGGAATTG 300TTAAGCAAGA AAGAGATGGT CCTGTAGAAT TTCAGCATCC TTACTTCCAA 350(2)SEQ ID No.41的信息(ⅰ)序列特征(A)长度377碱基对
(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:41的序列描述TCCTAAAGCT TTCTCTGCTC CAGTTATTTT TATTAAATAT TTTTCACTTG GCTTATTTTT60AAAACTGGGA ACATAAAGTG CCTGTATCTT GTAAAACTTC ATTTGTTTCT TTTGGTTCAG 120AGAAGTTCAT TTATGTTCAA AGACGTTTAT TCATGTTCAA CAGGAAAGAC AAAGTGTACG 180TGAATGCTCG CTGTCTGATA GGGTTCCAGC TCCATATATA TAGAAAGATC GGGGGTGGGA 240TGGGATGGAG TGAGCCCCAT CCAGTTAGTT GGACTAGTTT TAAATAAAGG TTTTCCGGTT 300TGTGTTTTTT TGAACCATAC TGTTTAGTAA AATAAATACA ATGAATGTTG NAAAAAAAAA 360AAAAAAAAAA ACTCGAG 377(2)SEQ ID No.42的信息(ⅰ)序列特征(A)长度374碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:42的序列描述CGGCACGAGG CGCCACTTGC GAGCGCTGCA AGGGCGGCTT TGCGCCCGCT GAGAAGATCG60TGAACAGTAA TGGGGAGCTG TACCATGAGC AGTGTTTCGT GTGCGCTCAG TGCTTCCAGC 120AGTTCCCAGA AGGACTCTTC TATGAGTTTG AAGGAAGAAA GTACTGTGAA CATGACTTTC 180AGATGCTCTT TGCCCCTTGC TGTCATCAGT GTGGTGAATT CATCATTGGC CGAGTTATCA 240AAGCCATGAA TAACAGCTGG CATCCGGAGT GCTTCCGCTG TGACCTCTGC CAGGAAGTTC 300TGGCAGATAT CGGGTTTGTC AAGAATGCTG GGAGACACCT GTGTCGCCCC TGTCATAATC 360GTGAGAAAGC CAGA 374(2)SEQ ID No.43的信息(ⅰ)序列特征(A)长度492碱基对(B)类型核酸
(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:43的序列描述CTTTGCATTT TACAGTAAGA ATCAAAGTCC CTTCAGTGTG CCTTTGTCAG CTAATATGTG60ACCAGCAATG ACAACCTTGG GAGTATTTAT TAAATATTAT GCTATGAATA TAGGCAACAC 120AGAACAGGGT TTGCAGTATA GCGTCTTGAT GCTAAATTCT CATATACCTC TACACGAGAA 180ATATGGAGGA GAAAAACAAG CATTTACATA TATTCTTCGT CACTTTGAAG ATGCATGACC 240TGAACTCGAC TGCTTGTGTT TGTTTACATA TCAGGCATAC CCAGGCATCT CCTGCAGCCA 300GAGGTTCCAT TGCTGTCTTT GCTCAGTCCT CTTTTAAAAT ATGAATTAGT GGACAGGCAC 360GGTGCCTCAC ACCTGTAATC CCAGCACTTT GGGAGGTCGA GGCAGGTGGA TCACGAGGTC 420AGGAGATCAA GACCATCCTG GCTACCACTG AAACCCCATC TCTACTACAA AAAAAAAAAA 480AAAAAACTCG AG 492(2)SEQ ID No.44的信息(ⅰ)序列特征(A)长度15氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:44的序列描述Ser Gln Ile Cys Glu Leu Val Ala His Glu Thr Ile Ser Phe Leu1 5 10 15(2)SEQ ID No.45的信息(ⅰ)序列特征(A)长度15氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:45的序列描述Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Ile Leu Asp Glu Val Ile Arg Gly Thr1 5 10 15(2)SEQ ID No.46的信息(ⅰ)序列特征(A)长度21氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:46的序列描述Val Val Lys Thr Tyr Leu Ile Ser Ser Ile Pro Gln Gly Ala Phe Asn1 5 10 15Tyr Lys Tyr Thr Ala20(2)SEQ ID No.47的信息(ⅰ)序列特征(A)长度21氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:47的序列描述Val Val Lys Thr Tyr Leu Ile Ser Ser Ile Pro Leu Gln Ala Phe Asn1 5 10 15Tyr Lys Tyr Thr Ala20(2)SEQ ID No.48的信息(ⅰ)序列特征(A)长度15氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:48的序列描述Xaa Ala Lys Lys Phe Leu Asp Ala Glu His Lys Leu Asn Phe Ala1 5 10 15(2)SEQ ID No.49的信息(ⅰ)序列特征(A)长度15氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:49的序列描述Xaa Xaa Xaa Lys Ile Lys Lys Phe Ile Gln Glu Asn Ile Phe Gly1 5 10 15(2)SEQ ID No.50的信息(ⅰ)序列特征(A)长度18氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:50的序列描述Xaa Lys Val Lys Val Gly Val Asn Gly Phe Gly Arg Ile Gly Arg Leu1 5 10 15Val Thr(2)SEQ ID No.51的信息(ⅰ)序列特征(A)长度15氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:51的序列描述Xaa Tyr Gln Tyr Pro Ala Leu Thr Xaa Glu Gln Lys Lys Glu Leu1 5 10 15(2)SEQ ID No.52的信息(ⅰ)序列特征(A)长度14氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:52的序列描述Xaa Pro Ala Val Tyr Phe Lys Xaa Xaa Phe Leu Asp Xaa Asp1 5 10(2)SEQ ID No.53的信息(ⅰ)序列特征(A)长度15氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:53的序列描述Xaa Pro Ala Val Tyr Phe Lys Glu Gln Phe Leu Asp Gly Asp Gly1 5 10 15(2)SEQ ID No.54的信息(ⅰ)序列特征(A)长度18氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:54的序列描述Xaa Xaa Val Ala Val Leu Xaa Ala Ser Xaa Xaa Ile Gly Gln Pro Leu1 5 10 15Ser Leu(2)SEQ ID No.55的信息(ⅰ)序列特征(A)长度15氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:55的序列描述Val Val Lys Thr Tyr Leu Ile Ser Xaa Ile Pro Leu Gln Gly Ala1 5 10 15(2)SEQ ID No.56的信息(ⅰ)序列特征(A)长度15氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:56的序列描述Xaa Xaa Lys Thr Tyr Leu Ile Ser Ser Ile Pro Leu Gln Gly Ala1 5 10 15(2)SEQ ID No.57的信息(ⅰ)序列特征(A)长度15氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑类型线性(ⅹⅰ)SEQ ID NO:57的序列描述Met Asp Ile Pro Gln Thr Lys Gln Asp Leu Glu Leu Pro Lys Leu1 5 10 1权利要求
1．一种多肽，其包含具有选自SEQ ID No.2,4,5,6,7和8的部分序列的一种前列腺蛋白质或是与该蛋白质仅在保守性替换和/或修饰上有差别的变体的免疫原性部分。
2．一种多肽，其包含有一种前列腺蛋白质或者与该蛋白质仅在保守性替换和/或修饰上有差别的变体的一个免疫原性部分，其中该蛋白质包含有选自SEQ ID No.11和13-19中列出的序列、这些序列的互补序列以及在中度严格条件下与SEQ ID No.11和13-19列出的序列或其互补序列杂交的DNA序列的DNA序列编码的氨基酸序列或其部分。
3．一种含有编码权利要求1或2的多肽的核苷酸序列的DNA分子。
4．一种含有权利要求3的DNA分子的表达载体。
5．一种用权利要求4的表达载体转化的宿主细胞。
6．权利要求5的宿主细胞，其中该宿主细胞选自大肠杆菌、酵母和哺乳动物细胞。
7．一种包含有权利要求1或2的多肽及生理上可接受的载体的药物组合物。
8．一种包含有权利要求1或2的多肽及一种非特异性免疫反应增强剂的疫苗。
9．权利要求8的疫苗，其中非特异性免疫反应增强剂是一种佐剂。
10．一种含有一种DNA分子和一种非特异性免疫反应增强剂的疫苗，该DNA分子包含有编码权利要求1或2的多肽的核苷酸序列。
11．权利要求10的疫苗，其中非特异性免疫反应增强剂是一种佐剂。
12．一种用于前列腺癌治疗的药物组合物，其包含一种多肽和一种生理上可接受的载体，该多肽含有一种前列腺蛋白的具有选自SEQ ID No.1,3,20,21,25-31和44-57的部分序列的免疫原性部分。
13．一种用于前列腺癌治疗的疫苗，其包含有一种多肽和一种非特异性免疫反应增强剂，该多肽包含有一种前列腺蛋白的具有选自SEQ IDNo.1,3,20,21,25-31和44-57的部分序列的免疫原性部分。
14．权利要求13的疫苗，其中非特异性免疫反应增强剂是一种佐剂。
15．一种根据权利要求7的药物组合物，其用于抑制前列腺癌发展的药物的制造。
16．一种根据权利要求8的疫苗，其用于抑制前列腺癌的发展的药物的制造。
17．一种检测病人中前列腺癌的方法，包括(a)获自病人的生物学样品与能结合权利要求1或2的多肽的结合试剂接触；且(b)检测样品中结合到结合试剂上的蛋白质或多肽从而检测病人中的前列腺癌。
18．权利要求17的方法，其中结合试剂是一种单克隆抗体。
19．权利要求17的方法，其中结合试剂是一种多克隆抗体。
20．一种监视病人中前列腺癌发展的方法，包括(a)获自病人的生物学样品与能结合权利要求1或2的多肽的结合试剂接触；(b)检测样品中结合到结合试剂上的蛋白质或多肽的量；(c)重复步骤(a)和(b)；且(d)比较步骤(b)和(c)中检测到的多肽的量以监视病人中前列腺癌的发展。
21．一种检测病人中前列腺癌的方法，包括(a)获自病人的生物学样品与能结合一种多肽的结合试剂接触，该多肽含有一种前列腺蛋白质的具有选自SEQ ID No.1,3,20,21,25-31和44-57的部分序列的免疫原性部分；且(b)检测样品中结合到结合试剂上的蛋白质或多肽从而检测病人中的前列腺癌。
22．权利要求21的方法，其中结合试剂是一种单克隆抗体。
23．权利要求21的方法，其中结合试剂是一种多克隆抗体。
24．一种监视病人中前列腺癌发展的方法，包括(a)获自病人的生物学样品与能结合一种多肽的结合试剂接触，该多肽含有一种前列腺蛋白质的具有选自SEQ ID No.1,3,20,21,25-31和44-57的部分序列的免疫原性部分；(b)检测样品中结合到结合试剂上的蛋白质或多肽的量；(c)重复步骤(a)和(b)；且(d)比较步骤(b)和(c)中检测到的多肽的量以监视病人中前列腺癌的发展。
25．一种与权利要求1或2的多肽结合的单克隆抗体。
26．一种根据权利要求25的单克隆抗体，其用于抑制前列腺癌的发展的药物的制造。
27．权利要求26的单克隆抗体，其中的单克隆抗体与一种治疗剂相偶联。
28．一种检测病人中前列腺癌的方法，包括(a)获自病人的生物学样品与聚合酶链式反应中的至少两条寡核苷酸引物接触，其中至少一条寡聚核苷酸引物特异于选自SEQ ID No.9-19,22-24和32-43的一种DNA分子；且(b)检测样品中在该寡核苷酸引物存在时扩增的DNA序列从而检测前列腺癌。
29．权利要求28的方法，其中至少一个寡核苷酸引物包含选自SEQID No.9-19,22-24和32-43的一种DNA分子的至少约10个连续核苷酸。
30．一种检测病人中前列腺癌的方法，包括(a)获自病人的生物学样品与至少一个特异于选自SEQ ID No.9-19,22-24和32-43的一种DNA分子的寡核苷酸探针接触；且(b)检测样品中与寡核苷酸探针杂交的DNA序列从而检测前列腺癌。
31．权利要求30的方法，其中的探针包含选自SEQ ID No.9-19,22-24和32-43的一种DNA分子的至少约15个连续核苷酸。
全文摘要
提供了用于治疗和诊断前列腺癌的化合物和方法。发明的化合物包括含有一种前列腺蛋白质的至少一部分的多肽。也提供了用于前列腺癌的免疫治疗的包含这种多肽或编码这种多肽的DNA分子的疫苗和药物组合物。发明的多肽也可以用来产生用于前列腺癌的诊断和监视的抗体。也提供了用于制备探针、引物和多肽的核苷酸序列。
文档编号C07K14/47GK1222935SQ97194019
公开日1999年7月14日 申请日期1997年3月14日 优先权日1997年3月14日
发明者S·G·里德, D·C·狄尔顿, D·R·特瓦德兹 申请人:科里克萨有限公司