专利名称：具有糖胺聚糖的药物组合物及其在治疗慢性溃疡中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于治疗慢性溃疡、特别是糖尿病足部溃疡(diabetic foot ulcers)和压力性溃疡(pressure ulcers)的糖胺聚糖组合物。更具体地，涉及治疗慢性溃疡、更特别地制备用于治疗慢性溃疡的医药产品的低分子量肝素(LMWHs)和极低分子量肝素(VLMWHs)的组合物。技术状况糖尿病(Diabetes Mellitus) (DM)是一种代谢疾病，其特征在于血浆葡萄糖水平持续不变的增加，其有助于外周神经病和大血管以及微血管并发症的发作。根据世界卫生组织(WHO)公布的数据，DM的发病率以令人担忧的方式递增，在2000年在世界人口中发病率为2. 8%，并且估计在2030年该数字将增加至4. 4%。因此，在2000年，患有DM的患者数目约为一亿七千一百万，并且估计在2030年这一数目将增加至三亿六千六百万。在其它因素中，DM发病率的增加已经与人口的普遍老龄化相关，因为在年龄和该疾病的发病率之间存在直接的关系。在这种意义上，已经预计，DM在西班牙的发病率可能为2% -6%
将对应是1型DM，患有2型DM的患者中有50%未被确诊。考虑到已公布的关于在西班牙不同地区DM发病率的研究是在2002年之前的以及发病率增加的趋势，预计目前在西班牙有超过两百五十万糖尿病病人。神经损害，外周系统和自主系统的神经损害，可能代表最常见的DM并发症。其可能在两种类型的DM中发生，并且其发病率和严重性与糖尿病发展的年数相关，和肝抗胰岛素物质控制的程度相关。估计这种并发症影响60%的DM受试者，这是糖尿病受试者足部溃疡发作的主要原因。在这一点上，美国糖尿病协会(American Diabetes Association)在其第十六次科学会议上确定15%的DM患者在其整个一生中发展足部溃疡，并且足部溃疡是在糖尿病受试者中发生的6%的住院治疗的原因。在糖尿病患者中发生的所有溃疡中的 15%最终导致截肢，与DM相关的并发症是非外伤性截肢的主要原因(40-70% )，糖尿病患者中发生的85%的截肢又与足部溃疡相关。在美国，每年进行100，000例截肢，这极大地影响卫生保健成本，据计算，在2001年，在美国溃疡和截肢大约花费10亿美元，而在英国这笔费用为四亿五千六百万美元。这些源于糖尿病足部溃疡的花费取决于是否进行截肢而在很大程度上不同，并且因此，在1990年在瑞士进行的研究中，观察到在治愈且没有局部缺血成分的那些溃疡的情形中，相关的费用为16，500美元。相反，在必须进行较轻微的截肢的情形中，花费达到27，000美元，在发生严重截肢的事件中费用总计63，000美元。由西班牙血管学和血管手术学会的Grupo de Consenso sobre Pie Diab6tico (关于糖尿病足合意的组(Group of Consensus on Diabetic Foot))提议的糖尿病足的定义为“由持续的高血糖症诱发的具有神经病疾病发生学基础的临床改变，其中，伴有或不伴有缺血的共存，并且在外伤引发后，发生足部损害和/或溃疡”。足部溃疡是疾病如糖尿病的显著并发症，每年的发病率略微高于2% (Abbott C. Α·,等(2002)The North-ffest Diabetes Foot Care Study :incidence of, and risk factors for,new diabetic foot ulceration in a community-based patient cohort(西北糖尿病性足护理研究基于社团的患者群体中新的糖尿病足部溃疡的发病率、和危险因素).Diabet. Med.(糖尿病医学)19 (5) :377_84)。据估计15%的患有糖尿病的患者将在他们生命中的某个时间发展溃荡(Reiber G. E. (1996) The epidemiology of diabetic foot problems (糖尿病足问题的流行病学).Diabet. Med.(糖尿病医学)13增刊1 :S6_11)，并且约10% -30%的具有溃疡的那些患者将发展为肢体的截肢(Lipsky B. A. (2004)Medical treatment of diabetic foot infections ( H^^f^^^ ^ E). Clin. Infect
Dis.(临床传染病)39增刊2 :S104-14)。此外，这在该事件中是复杂的，在出现溃疡的下肢中存在局部缺血，在大部分病例中是由于因高的血栓形成发生率导致的血液供应不足而发生的。关于已经进行了下肢截肢的患者的5年的死亡率，为50-60 % (Reiber G.E. (1996) The epidemiology of diabetic foot problems (糖尿病足问题的流行病学).Diabet. Med.(糖尿病医学)13增刊1 :S6_11)。已经使用了多种用于治疗患有糖尿病足的患者的方法，包括严格的代谢控制，预防可缓和的危险因素，清创术，使用敷料，感染的抗微生物治疗，消除损害区域的压力，使用皮肤移植，施用生长因子和在存在适应证的情形中使用血管再造法(revascularization)。在大部分病例中，对这种类型的慢性溃疡的治疗通过局部途径进行的，例如，在溃疡处如在糖尿病足部溃疡处使用敷料剂是常用的。在受控的临床试验中研究的新型敷料剂包括基于半透性聚合物膜、Promogran(胶原基质)、藻酸盐、羧甲基纤维素、透明质烷(hyaluronan)和低于大气压的敷料(Eldor R.等(2004)New and experimental approaches to treatment of diabetic foot ulcers :a comprehensive review of emerging treatment strategies (糖尿病足部溃疡的新的和实验治疗方法新现治疗策略的综合评论).Diabet. Med.(糖尿病医药)21 (11) :1161_73)。还开发了置于溃疡损害处产生皮肤替代品的方法。Dermagraft: 是通过将人皮肤成纤维细胞接种在合成的生物可吸收材料的构架上而生成的，已证明其在低等溃疡中是有效的，在较短时间中具有较大的治愈比例(M(Marston W. A.，等(2003)Dermagraft Diabetic Foot Ulcer Study Group(Dermagraft 糖尿病足部溃疡研究组)· The efficacy and safety of Dermagraf in improving the healing of chronic diabetic foot ulcers :results of a prospective randomized trial (Dermagraft在提高慢性糖尿病足部溃疡的治愈中的功效和安全性预期的随机化试验的结果).Diabetes Care (糖尿病护理)26 :1701_5)。 Apligrat 由下列各项组成由人成纤维细胞在牛I型胶原基质上形成的皮肤层和之后由人角质形成细胞形成的表皮。类似地，已经证明，当这一皮肤替代物应用在低级和非感染性神经病性溃疡时，其显著地与损害的更大更快的愈合相关(Veves A.，等(2001) Graftskin,a human skin equivalent,is effective in the management of noninfected neuropathic diabetic foot ulcers :a prospective randomized multicenter clinical trial (Graftskin，一种人皮肤等价物，有效护理非感染性神经病性糖尿病足部溃疡预期的随机化多中心临床试验).Diabetes Care (糖尿病护理)24 :290_5)。在III期随机化双盲安慰剂对照的临床试验中，证明凝胶形式的血小板来源的生长因子(PDGF)对于治疗具有良好的血液灌注的患有神经病性溃疡的糖尿病患者的治疗是有效和安全的(Wieman TJ.，等(1998) Clinical efficacy of beclapermin (rh PDGF-BB) gel (贝卡普勒明(rhPDGF-BB)凝胶的临床功效).Diabetes Care (糖尿病护理)21 (5) :822_7)。依据测面积学评估，该研究中所包括的大部分患者(95% )具有面积< IOcm2的溃疡。与安慰剂相比较，100 μ g/g的贝卡普勒明凝胶，显著增加完全的损害闭合比例43% (50相对35%，ρ = 0. 007)，并且缩短获得所述作用的时间32% (86相对127天，ρ = 0. 013)。使用PDGF或贝卡普勒明(Regranex. )的令人满意的结果致使它们被核准用于治疗糖尿病患者下肢的神经病性溃疡，所述溃疡延伸到皮下组织或更深层，并且具有适当的血液流动(Brem H.， Sheehan P. ,Boulton AJ. (2004) Protocol for treatment of diabetic foot ulcers (糖尿病足部溃疡的治疗方法).Am. J.Surg.(美国手术杂志)187 (5A) =IS-IOS) 0然而，几个月后，FDA在接收到表明在将强生(Johnson&Johnson)的局部生长因子Regranex . 直接应用到糖尿病足部和腿部溃疡上的糖尿病患者中存在较高的癌症危险的研究数据后进行了安全性评估，因此，这种治疗性备选物目前处于评估中，并且限制性用于不具有易患任何类型的肿瘤的倾向的患者。关于通过局部的肠胃外途径的治疗，几年前公开了施用修补剂(healing agent) 如表皮生长因子(EGF)的方法，其由通过几次注射的方式将生物分子溶液渗透至损害中组成(W0 03053458)。已经证明这种治疗有效用于防止糖尿病足的截肢，但是由于将注射施用到损害中非常痛，并且每次治疗必须施用几次注射持续几周，其具有对于患者是创伤性的缺点。此外，文献EP 1499317公布了使用1型钠-氢交换剂(NHE-I)抑制剂治疗糖尿病并发症如糖尿病足的方法，国际公布WO 02077155描述了角质形成细胞生长因子(KGF-2)促进或者加速损害的愈合。最后，国际公布W02007087759涉及一种用于肠胃外施用给具有慢性皮肤病症如糖尿病足部溃疡的患者的药物组合物，其包含具有表皮生长因子的微球体。许多其它专利已经集中在加速愈合范围的其它方法上。然而，这些方法无一证明是广泛有效的。另外，非专利文献中已经公开了一些研究，其公开了基于肝素是已知的抗血栓形成剂和消炎剂，可以改善血管微循环，使用低分子量肝素(LMWHs)治疗的糖尿病足患者的某些有希望白勺结果。在"Effect ofDalteparin of healing of chronic foot ulcers in diabetic patients with peripheral arterial occlusive disease (达月干素治愈具有外周动脉闭塞疾病的糖尿病患者的慢性足部溃疡中的作用)”，Diabetes Care(糖尿病护理)，卷26 (9)，2003年9月中，以及在M. Kalani，A.等同组的公布中，题目为“Beneficial effects of dalteparin on haemostatic function and local tissue oxygenation in patients with diabetes，severe vascular disease and foot ulcers (达月干素对具有糖尿病、严重血管疾病和足部溃疡的患者中的止血功能和局部组织氧化的有益作用)”， Thrombosis Research.(血栓形成研究)120，653-661，2007中，描述了证明低分子量肝素 (LMWH)如达肝素(dalteparin)改善具有外周动脉闭塞疾病的患者的糖尿病足部溃疡的进展的临床试验。然而，令人吃惊的是，在这些文献中，患者用乙酰水杨酸联合治疗，即， 暗示联合具有抗凝集作用的两种活性成分如何协同性地有助于具有外周动脉闭塞疾病的患者的糖尿病足部溃疡的进展。“Low molecular weight heparin seem to improve local capillary circulation and healing of chronic foot ulcers in diabetic patients (低分子量肝素似乎改善局部毛细循环和糖尿病患者中慢性足部溃疡的治愈)”， VASA, Brand 22，1993，FET 2也公开了评估达肝素在具有糖尿病足部溃疡的患者中的功效的双盲安慰剂对照的临床试验。该研究的初步结果表明，达肝素可能对预防这种类型的伤口具有有益的作用，尽管总是以预防剂量，即，由于在以较高剂量的治疗过程中预见到出血，决不使用大于2500IU/天的达肝素剂量，而在具有糖尿病足部溃疡的患者的情形中，这一增加，并不包括更大的功效。这是由于在现有技术领域中通常相信糖尿病患者比不具有该疾病的患者具有更高的出血危险(Adverse impact of bleeding on prognosis in patients with acute coronary syndromes (出血对具有急性冠状动脉综合征的患者预后的不利影响)，Eikelboom JW等.Circulation(循环).2006年8 月 22 日；114(8) :774_82)。发明简述在慢性溃疡、特别是糖尿病足部溃疡的治疗中使用糖胺聚糖，并且特别是使用一些低分子量肝素用于这一目的，目前已经概略地描述用于具有严重循环病症的患者，因为这些低分子量肝素具有抗血栓形成和抗凝集活性，表示为抗激活的因子X(Xa)作用和抗因子IIa作用。然而，因为在以较高剂量的治疗中包含的出血危险，它们通常不用于患有糖尿病足部溃疡但无外周动脉闭塞疾病的糖尿病患者。这是由于这种类型的化合物的抗因子Xa 作用，其转化为抗血栓形成作用，并且其与在形成低分子量和极低分子量肝素的糖结构中存在的特异性五糖的类肝素结构内的含量具有直接关系，并且由于抗因子Xa/抗因子IIa 作用比例。因为在总结构中的五糖的量越大，抗因子Xa活性越大，合成的五糖(磺达肝素 (fondaparinux))成为最有选择性的因子Xa抑制剂，并且因此成为以选择性方式具有最大抗血栓形成能力的分子，确定这一比例。因此，磺达肝素的抗血栓形成活性是对因子Xa的选择性抑制的结果，该选择性抑制由抗凝血酶III (ATIII)介导。由于其与ATIII的选择性结合，磺达肝素将ATIII对因子 Xa固有的中和提高300倍。因子Xa的中和中断血液凝集级联，并且抑制凝血酶形成和血栓发展(参见
图1)。考虑到技术现状，开始可能认为结构中的大量五糖对于获得治愈(非减轻)作用是必需的。然而，如上文所示，由于在以较大剂量的治疗中包括的出血危险，没有进行这一方法。本发明的发明人已经克服了现有技术的偏见，因为他们设法证实了，尽管五糖处于较小的比例或以选择性方式被化学或酶学改变，但治愈和再生作用不受影响，因为在糖胺聚糖结构中真正重要的是不包含五糖的多糖链的比例。此外，本发明的研究者已经能够实验确定，在认为是慢性的任何类型的溃疡中一一不仅是在糖尿病足部溃疡中一一施用具有较少量的五糖的糖胺聚糖的有益治愈作用，并且所述施用通过三种主要施用途径是有效的肠胃外，口服和局部途径。由于Lindahl和Choay小组在20世纪八十年代初期进行的工作(Choay J，Lormeau JC,Petitou M, Sinag P 和 Fareed J.Ann NY Acad Sci (纽约科学学会年度杂志)1981 ；370 644-649 ；Thunberg L，Backstr5mG和 Lindahl U. Carbohydr Res (碳水化合物研究)1982 ； 100 :393-410)，提出了这样的假说在肝素链内存在与五糖对应的特异性序列，其与抗凝血酶III选择性相互作用。这种五糖的结构如下(式1):式权利要求
1.用于治疗慢性溃疡的糖胺聚糖药物组合物，所述药物组合物在药用介质中包括至少下列单糖，其中百分数为占所述组合物总单糖百分数的百分数a)N-磺基-D-葡糖胺25-50%b)D-葡糖醛酸3-25%其特征在于，与N-磺基-3-磺基-D-葡糖胺结合的二糖单元D-葡糖醛酸的比例不大于 20%。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，与N-磺基-3-磺基-D-葡糖胺结合的二糖单元D-葡糖醛酸的比例不大于所述组合物总单糖百分数的10%。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，与N-磺基-3-磺基-D-葡糖胺结合的二糖单元D-葡糖醛酸的比例不大于所述组合物总单糖百分数的5%。
4.根据前述权利要求1-3中任一项所述的组合物，其特征在于，其还包括多至占所述组合物总单糖百分数的10%的N-乙酰-D-葡糖胺比例。
5.根据前述权利要求1-4中任一项所述的组合物，其特征在于，其还包括多至占所述组合物总单糖百分数的35%的L-艾杜糖醛酸比例。
6.根据前述权利要求5所述的组合物，其特征在于，L-艾杜糖醛酸的比例占所述组合物总单糖百分数的多至10%。
7.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，其还包括占所述组合物总单糖百分数的多至50%比例的2-硫酸化L-艾杜糖醛酸。
8.根据权利要求7所述的组合物，其特征在于，2-硫酸化L-艾杜糖醛酸的比例处于占所述组合物总单糖百分数的15-50%范围内。
9.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，其包括低分子量肝素。
10.根据前述权利要求9所述的组合物，其中所述低分子量肝素是平均分子量小于 8,000道尔顿的肝素。
11.根据前述权利要求1-8中任一项所述的组合物，其特征在于，其包括极低分子量的肝素。
12.根据前述权利要求1-8中任一项所述的组合物，其特征在于，其包括未分级分离的肝素。
13.根据前述权利要求1-12中任一项的组合物在制备用于治疗慢性溃疡的医药产品中的应用。
14.根据权利要求13所述的应用，其中所述慢性溃疡是糖尿病足部溃疡。
15.根据权利要求13所述的应用，其中所述慢性溃疡是压力性溃疡。
16.根据权利要求13-15中任一项所述的应用，其特征在于，所述组合物包括低分子量肝素，并且特征在于，所提及的肝素的血浆半衰期和以IU为单位的剂量之间的比例为 1 800-1 5000。
17.根据权利要求13-15中任一项所述的应用，其特征在于，所述组合物包括具有 5. 2-5. 4小时的血浆半衰期的低分子量肝素，并且特征在于，所提及的肝素的血浆半衰期和以IU为单位的剂量之间的比例为1 900-1 1200。
18.根据权利要求13-15中任一项所述的应用，其特征在于，所述组合物包括具有 4. 0-4. 4小时的血浆半衰期的低分子量肝素，并且特征在于，所提及的低分子量肝素的血浆半衰期和以IU为单位的剂量之间的比例为1 1000-1 2500。
19.根据权利要求18所述的应用，其特征在于，所提及的低分子量肝素的血浆半衰期和以IU为单位的剂量之间的比例约为1 2000。
20.根据前述权利要求13-19中任一项所述的应用，其中所述低分子量肝素通过静脉内途径施用。
21.根据前述权利要求13-19中任一项所述的应用，其中所述低分子量肝素通过皮下途径施用。
22.根据前述权利要求13-19中任一项所述的应用，其中所述低分子量肝素通过口服途径施用。
23.根据前述权利要求13-19中任一项所述的应用，其中所述低分子量肝素通过局部途径施用。
全文摘要
本发明涉及用于治疗糖尿病足部溃疡的糖胺聚糖组合物。更具体地，本发明涉及低分子量肝素(LMWHs)和极低分子量肝素(VLMWHs)用于治疗慢性溃疡、特别是糖尿病足部溃疡，并且更特别用于制备治疗慢性溃疡、特别是糖尿病足部溃疡和压力性溃疡的药物。
文档编号A61K9/08GK102176915SQ200980133863
公开日2011年9月7日 申请日期2009年6月30日 优先权日2008年7月1日
发明者伊万·洛佩斯-贝尔蒙特·恩西纳, 埃莱娜·塞瓦德拉·米兰达, 玛丽亚德洛斯·安赫莱斯·卡纳莱斯·马约多莫 申请人:罗维实验室制药股份公司