专利名称：杯状病毒灭活方法
技术领域：
本发明涉及灭活猫杯状病毒、诺如病毒等属于杯状病毒科的病毒(以下称为杯状病毒)的方法。
背景技术：
日本厚生劳动省指出，十分之一的冬季急性胃肠炎患者是由于感染了诺如病毒。 诺如病毒的感染途径基本为经口感染，从防止来自食品处理者、烹调器具的二次污染的观点来看，诺如病毒的失活或灭活方法是很重要的。日本厚生劳动省指出，消毒用乙醇、逆化皂对于使诺如病毒失活是无效的，次氯酸钠水溶液对于使诺如病毒失活是有效的(参照厚生劳动省“7 π々4 (二関寸3 Q&A Q16”(关于诺如病毒的 Q&A Q16)、http//www. mhlw. go. jp/topics/syokuchu/03. html#3-3)(非专利文献1)。但是，次氯酸钠水溶液也存在如下问题具有特有的强烈臭气、附着于皮肤而引起皮肤粗糙、使衣服和绒毯脱色，等。此外，与酸混合时会产生氯气，有时会引起中毒症状，有时还会出现危险的情况。另一方面，对于乙醇而言，其为酒类等食品中所含的成分，因此安全性高，但如上所述单独使用时不具有使诺如病毒失活的效果。与此相对，有文献报道了组合使用乙醇、天然提取物(葡萄柚种子提取液)和植酸的杯状病毒用除菌液(专利文献1)。此外，已知为了抑制或消除常见的细菌而组合使用乙醇和有机酸作为食品用防腐剂(专利文献2)，但其对诺如病毒的效果是未知的。与此相对，最近公开的专利文献3中公开了一种消毒剂，其含有以下的(a)、(b)、 (c)和(d)，且不含其它的用于杀菌消毒的杀菌消毒剂。其中还记载了该消毒剂能够适用于手指、皮肤，并且用于杀病毒。(a)相对于全部消毒剂为40 90% (w/w)的乙醇、异丙醇或它们的混合物(b)相对于全部消毒剂为0. 1 2% (w/w)的乳酸(c)相对于全部消毒剂为0. 01 2% (w/w)的柠檬酸(d)相对于全部消毒剂为0. 001 0. (w/w)的在溶液中游离出锌离子的含锌化合物专利文献专利文献1 日本特开2007-320924号公报
专利文献2 日本特公昭60-35106号公报专利文献3 日本专利4163249号公报非专利文献非专利文献 1 :http //www. mhlw. go. jp/topics/syokuchu/03. html#3_3上述专利文献和非专利文献的所有记载特此作为公开援引于此。
发明内容
如上所述，厚生劳动省所指出的对诺如病毒失活有效的次氯酸钠水溶液存在若干问题，此外，乙醇在单独使用时对诺如病毒失活无效，只不过是通过与特殊的天然提取物 (葡萄柚种子提取液)和植酸组合使用才能作为杯状病毒用除菌液。根据说明书的记载，专利文献3所记载的消毒剂对诺如病毒等无包被病毒具有较高的有效性。但是，该消毒剂的适用对象主要限于手指、皮肤。与此相对，虽然手指、皮肤的消毒也是必要的，但与其同样重要的是在医疗、护理现场所必须的对含有诺如病毒等无包被病毒的吐泻物、粪尿等物质的病毒进行灭活的方法。在医疗、护理现场，感染或疑似感染无包被病毒的患者所排泄的吐泻物、粪尿等有时会散布在地板等上，迫切需要对其进行安全处理。迄今为止，均是使用一次性片或纸将这样的排泄物擦去，然后用次氯酸钠水溶液进行处理。但是，次氯酸钠水溶液除了存在上述那样的问题之外，还存在如下问题在吐泻物、粪尿等中，除病毒外还含有以蛋白质为主要成分的有机物，在灭活病毒之前次氯酸已被消耗，灭活效果显著降低。因此，本发明的目的在于提供不具有次氯酸钠水溶液那样的危险性，并且即使在以蛋白质为主要成分的有机物的共存下，也能够有效地使被消毒物中所含的诺如病毒等杯状病毒失活或灭活的方法。本发明人发现，通过使用在乙醇水溶液中共存有酸以显示特定范围的pH的乙醇制剂(组合物)，能够将以蛋白质为主要成分的有机物共存下的杯状病毒灭活，从而完成了本发明。需要说明的是，本说明书中，杯状病毒的灭活和失活具有相同的含义，杯状病毒灭活或失活的状态是指病毒基本上失去感染力的无毒化的状态，具体而言，是指病毒的感染滴度与对照相比为10_4以下的情况。用于解决上述课题的本发明如下所述。[1] 一种使蛋白质共存下的杯状病毒灭活的方法，其中，包括使疑似存在杯状病毒且含有蛋白质的物质与包含含有乙醇和酸作为有效成分、PH在2. 5 5. 0的范围内的水溶液的组合物接触。[2]如[1]所述的方法，其中，所述疑似存在杯状病毒且含有蛋白质的物质存在于设施或物品表面，所述方法包括下述步骤在所述设施或物品表面的至少一部分或全部上覆盖透水性和/或保水性片的步骤；将所述组合物供给到所述片上，使所述组合物与片下的所述表面接触的步骤；和在接触后放置规定时间的步骤。[3]如[2]所述的方法，其中，将所述表面上存在的所述物质的至少一部分擦去，在擦去所述物质后的设施或物品表面覆盖所述片。[4]如[2]或[3]所述的方法，其中，所述片预先含有所述组合物。[5]如[1] [4]中任一项所述的方法，其中，所述疑似存在杯状病毒且含有蛋白质的物质是吐泻物或粪尿。[6]如[1] [4]中任一项所述的方法，其中，所述疑似存在杯状病毒且含有蛋白质的物质是杯状病毒感染者的吐泻物或粪尿。[7]如[1] [6]中任一项所述的方法，其中，所述组合物中的乙醇的浓度为40 85% (w/w)的范围。[8]如[1] [7]中任一项所述的方法，其中，所述酸为有机酸或无机酸。[9]如[1] [8]中任一项所述的方法，其中，所述酸的浓度为1 10%的范围。[10]如[1] [9]中任一项所述的方法，其中，所述酸是在1 10%的浓度下使所述水溶液显示2. 5 5. 0的范围的pH的酸。[11]如[8]所述的方法，其中，所述酸为柠檬酸、乳酸或磷酸。[12]如[1] [11]中任一项所述的方法，其中，所述组合物还含有聚甘油脂肪酸[13]如[1] [12]中任一项所述的方法，其中，所述杯状病毒为诺如病毒。[14]如[1] [13]中任一项所述的方法，其中，相对于1体积的所述疑似存在杯状病毒且含有蛋白质的物质，以体积比计，所述组合物的供给量为0. 5 100的范围。发明效果根据本发明，可以提供能够使用乙醇制剂(组合物)而使与蛋白质共存的杯状病毒灭活的方法，对抑制诺如病毒的蔓延特别有效。并且，根据本发明，可以提供在医疗、护理现场所必须的对含有诺如病毒等无包被病毒的吐泻物、粪尿等的病毒进行有效且安全的灭活的方法。
具体实施例方式本发明涉及一种使蛋白质共存下的杯状病毒灭活的方法，其中，包括使疑似存在杯状病毒且含有蛋白质的物质与包含含有乙醇和酸作为有效成分、PH在2. 5 5. 0的范围内的水溶液的组合物接触。本发明中使用的组合物含有乙醇和酸作为有效成分。如上所述，据报道单独使用乙醇时对诺如病毒不具有失活或灭活效果。与此相对，本发明人发现，通过将酸与乙醇组合使用且使PH为2. 5 5. 0的范围，对使用次氯酸钠水溶液无法获得灭活效果的、蛋白质共存下的诺如病毒也显示出灭活效果。本发明中使用的组合物中的乙醇浓度可根据组合物的使用方法(以原液状态直接使用、或适当稀释后使用等)而适当选择，例如从可靠地获得杯状病毒的灭活效果的观点来看，乙醇浓度为40 85% (w/w)的范围是合适的。乙醇浓度为该范围时，多可同时期待对细菌的效果，据称通常该浓度对杀灭细菌也具有很高的效果。此外，乙醇浓度低时，应用喷雾等后的干燥变慢，至开始下一作业为止需要较多时间，因此设定为一定程度以上的浓度是合适的。乙醇的更优选的浓度为40 59% (w/w) 0这是由于，超过60%时，为消防法规定的危险物，在处理方面产生限制。此外，乙醇浓度变高时，作为酸和盐的柠檬酸、柠檬酸盐等的溶解性降低，因此有时在制造方面、制品的稳定性方面不易处理。与乙醇组合使用的酸例如可以是有机酸或无机酸，有机酸可以举出醋酸、酒石酸、 琥珀酸、苹果酸、富马酸、植酸，无机酸可以举出硫酸、盐酸、硝酸、磷酸等。酸的浓度可考虑组合物的PH而适当决定，例如可为1 10%的范围。酸的浓度过低时，可能会由于吐泻物等使用对象中所含的蛋白质的缓冲能力而使灭活效果变差，另一方面酸的浓度过高时，在使用乙醇制剂后，水、乙醇挥发之后会残留固体成分，有时需要通过洗涤等将其除去，因而优选上述范围。此外，根据酸的种类的不同，有时还存在酸被浓缩而促进金属腐蚀的可能。 酸的优选浓度为约 约5%。这是由于，比5%更浓的情况下，使用组合物后，水、乙醇挥发之后容易残留固体成分，有时外观上会很醒目。酸的更优选浓度为约 约3%。上述组合物的pH设定为2. 5 5. 0的范围。pH过低而小于2. 5时，金属腐蚀等不良影响会更为严重，因而PH优选为2. 5以上。从可靠地获得杯状病毒的灭活效果的观点出发，PH的更优选范围为2. 5 4. 5的范围，进一步优选2. 8 4. 0的范围、更优选3. 0 3. 5的范围。如果为该范围则基本能够可靠地灭活病毒，但超过3. 5时根据使用条件的不同有时灭活效果会变差。例如，在吐泻物等使用对象具有缓冲能力的情况下，存在灭活效果变差的倾向。但只要pH为4. 0以下，则多数情况下能够发挥病毒灭活效果。作为酸，在上述1 10%的浓度范围内使作为组合物的水溶液显示2. 5 5. 0的范围的PH的酸是合适的。作为这样的酸的具体例子，可以举出上述的柠檬酸、乳酸和磷酸。 此外，酸既可以单独使用，也可以组合使用多种酸，只要组合物的PH范围在上述范围内即可。此外，上述酸的至少一部分也可以为盐，有时通过成盐还可以发挥缓冲作用，从而易于调节pH。作为盐，可以举出例如乳酸、柠檬酸等有机酸或磷酸等无机酸的碱金属(锂、钠、 钾)盐。上述组合物可通过将水溶性的酸、酸的金属盐溶解于水中后加入乙醇而制备。上述组合物中，除上述乙醇和酸以外，通过混合例如甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯或甘氨酸、植物提取物或植物浸膏等抗菌成分，强化对细菌、真菌的杀菌效果，能够制备在卫生方面综合功能好的乙醇制剂。其中，聚甘油脂肪酸酯能够通过降低乙醇制剂的表面张力而增大接触面积，此外，还易于渗透到细小的间隙中，因此能够提高上述组合物对杯状病毒的灭活效果的有效性。作为聚甘油脂肪酸酯的优选例子，可以举出四甘油月桂酸酯、五甘油月桂酸酯、六甘油月桂酸酯等。此外，本发明的上述组合物不含有含锌化合物。这是由于，添加较多有机酸、无机酸的情况下，会与锌离子形成盐，有溶解性变差的可能。本发明的方法包括使上述组合物与疑似存在杯状病毒且含有蛋白质的物质接触的步骤。疑似存在杯状病毒且含有蛋白质的物质例如可以是吐泻物或粪尿，进而可以是杯状病毒感染者或疑似感染者的吐泻物或粪尿。吐泻物或粪尿中含有大量蛋白质，当其中存在杯状病毒的情况下，难以通过通常所使用的浓度的次氯酸钠水溶液使杯状病毒灭活。与此相对，即使是这样的吐泻物或粪尿，通过本发明中使用的上述组合物也能够使杯状病毒灭活。如上所述，疑似存在杯状病毒且含有蛋白质的物质为吐泻物或粪尿的情况下，有时这些物质被排泄在地板、床等上，需要在医疗现场、护理现场对其进行适当且安全的处理的方法。本发明的方法中，在吐泻物或粪尿被排泄而存在于地板、床等设施或物品表面的情况下，即，疑似存在杯状病毒且含有蛋白质的物质存在于地板、床等设施或物品表面的情况下，在所述设施或物品表面的至少一部分或全部上覆盖透水性和/或保水性片。优选将存在于所述表面上的所述物质的至少一部分擦去，在擦去所述物质后的设施或物品表面覆盖所述片。接着，将所述组合物供给到所述片上，使所述组合物与片下的所述表面接触，接触后放置规定时间。规定时间例如可以为1 10分钟、优选3 5分钟。通过放置上述规定时间，在存在于设施或物品表面的物质中存在杯状病毒的情况下，不论是否有蛋白质共存均能灭活杯状病毒。所述组合物的供给量可根据存在于地板、床等设施或物品表面的、疑似存在杯状病毒且含有蛋白质的物质的量而适当决定。如后述的实施例所示，所述组合物根据其组成，在组合物被供给于所述含有蛋白质的物质的状态(混杂存在状态)下，当蛋白质的量为40mg/ml以下时，能发挥杯状病毒灭活效果。因此，所述组合物的供给量可考虑该点而适当决定，当疑似存在杯状病毒且含有蛋白质的物质的量较多时，可供给与其相应的量的所述组合物。相对于1体积的疑似存在杯状病毒且含有蛋白质的物质，所述组合物的供给量(体积比)可为例如0. 5 100的范围、优选1 20的范围。也可以不覆盖上述片而将上述组合物供给至存在于设施或物品表面的、疑似存在杯状病毒且含有蛋白质的物质， 并使二者接触。但是，由于疑似存在杯状病毒，为防止飞散，优选覆盖上述片。并且，通过覆盖片且进行上述接触，还具有能够抑制组合物中所含的乙醇蒸发从而使灭活效果持续较长时间的效果。从保持较多量的组合物以获得对杯状病毒的较高灭活效果的观点出发，优选覆盖用的片具有较高的液体保持力。作为这样的液体保持力高的片，可以举出吸水性片 (内含吸水性树脂的片)、无纺布等。擦去所述物质后的设施或物品表面上覆盖的所述片也可以预先含有所述组合物。 此外，擦去所述表面上存在的所述物质的至少一部分时所使用的物品例如无纺布等中，可以预先含有所述组合物。使所述片等中含有(向所述片等供给)所述组合物，可以在即将使用前使其含有，也可以预先使片等中含有所述组合物并将其以密闭状态保存在密闭容器 (例如袋)中。接触时将上述组合物供给至上述片的方法没有特别限制，例如，可以注入组合物或进行喷雾。 本发明的方法中，还可以对上述方法处置后的设施或物品的表面进一步喷雾上述组合物，以彻底灭活杯状病毒。本发明的组合物对杯状病毒中的诺如病毒的灭活有效。本发明方法的具体方法的一个示例如下所述。在处理飞散在地板等上的患者吐泻物、粪便时，适当的方式是穿戴一次性的罩衣 (围裙)、口罩和手套，用纸巾等轻轻擦去粪便、吐泻物以避免污物中的病毒飞散。擦去后， 用片覆盖地板，向覆盖后的片上供给所述组合物，对片下的地板进行消毒。另外，优选的是 为保险起见，对未用片覆盖的地板也喷雾所述组合物等，对可能飞散的飞沫也进行处理。或者也可以在擦去后不用片覆盖，而是进一步擦拭地板以使所述组合物浸入。不使用片的方法适合于飞散的吐泻物等量少的情况。进行上述处理后，也可以根据需要用水擦拭。此外，上述组合物不仅能够用于含有蛋白质的疑似存在杯状病毒的物质，而且能够用于灭活例如餐具类、食品用机械、食品用设备、手套、手指等的皮肤、餐桌、菜板、抹布等上附着的病毒。为了灭活餐具类、食品用机械器具的病毒，将其浸渍后使用是有效的。无法浸渍的情况下，也可以对这些物品进行喷雾然后使用。无法浸渍、喷雾的情况下，也可以在擦尘器(夕‘7夕一)中渗入本发明的组合物，将对象表面进行擦拭后使用。这种情况下，优选酸、乙醇的浓度较高。[实施例]以下基于实施例进一步详细说明本发明。例1 (参考例)对猫杯状病毒的感染性灭活效果试验(乙醇浓度依赖性)用M/100磷酸缓冲液pH7.2(以下简称PBS)将99. 5%的特级乙醇试剂稀释成以计为80 %、70 %、60 %、50 %、40 %、30 %、20 %，从而制备样品，通过以下所示的试验方
法测定样品的消毒效果(病毒灭活效果)。结果如表1所示。试验方法1)作为用于测定样品的消毒效果(病毒灭活效果)所使用的病毒，使用猫杯状病毒F9株。2)使用样品1和样品2的原液以及2倍稀释液(用M/100磷酸盐缓冲液pH7. 2即 PBS稀释)。未获得消毒效果的终点时，将样品进一步进行稀释。3)在各个样品液900 μ 1中加入100 μ 1病毒液，在室温下作用1分钟和30分钟。反应后采集100μ 1，加入到含有大量蛋白质的日水制药公司制造的肉汤液(肉浸膏5mg、蛋白胨15mg/ml)900y 1中。使用日水制药公司制造的肉汤是为了抑制作用后试验样品的消毒效果的持续。4)对于所用病毒的病毒对照组，用肉汤液代替消毒剂样品进行稀释并测定感染滴度。5)对于用肉汤液稀释至10倍的病毒液，用肉汤液进一步稀释至KT1 10_4 (连续稀释液)。6)用抽吸器除去在6孔板上培养了 4天的CrfK细胞的细胞增殖用培养基(含 10%胎牛血清的MEM培养基)，对于各连续稀释的病毒液，使用3孔细胞，在其中各接种 100 μ 1各连续稀释的病毒液。7)在培养箱内进行1小时病毒吸附后，每孔中加入3ml不含胎牛血清的组织培养液(将MEM培养基(含Earle，s盐的改良MEMEAGLE) (MIP Biomedicals公司)用碳酸氢钠调节至PH7. 1)，然后将培养基除去，从而洗涤细胞。(以除去检查样品对细胞的毒性)8)在孔板的每个孔中加入3ml含有0. 7%琼脂的MEM琼脂培养基(含有0. 03% L-谷氨酰胺、0. 22%碳酸氢钠)(40°C )，待琼脂培养基固化后将6孔板翻转并用5% CO2培养箱培养72小时。9)培养结束后，在6孔板的每个孔中加入1. 5ml的10%福尔马林PBS液，在室温下放置1小时将细胞固定，然后用流水除去琼脂培养基，并进行亚甲蓝染色。通过该方法， 能够用空斑计数病毒数。10)通过将未加入消毒剂样品的病毒的感染滴度与加入有消毒剂的病毒的感染滴度进行比较来评价消毒效果。表 1试验结果1
乙醇浓度病毒感染滴度(PFULog 10/0.1 ml)(%W/W)猫杯状病毒806.4706.6606.7507.1407.1307.1207.2对照病毒7.2总结由上述结果可知，单独使用乙醇时对于灭活猫杯状病毒是无效的。例2 (参考例)对猫杯状病毒的感染性灭活效果试验(含乙醇液的PH依赖性)1制备具有表2所示的组成的样品，按照例1所述的试验方法测定样品的消毒效果 (病毒灭活效果)。结果如表3所示。表 2样品1和2的组成(％ W/W)
样品ι样品2乙醇50. 068. 0甘油脂肪酸酯《2. 05. 0乳酸10. 0聚赖氨酸2. 0水46. 017. 0※甘油脂肪酸酯甘油(单)癸酸酯表3试验结果权利要求
1.一种使蛋白质共存下的杯状病毒灭活的方法，其中，包括使疑似存在杯状病毒且含有蛋白质的物质与包含含有乙醇和酸作为有效成分、PH在2. 5 5. 0的范围内的水溶液的组合物接触。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述疑似存在杯状病毒且含有蛋白质的物质存在于设施或物品表面，所述方法包括下述步骤在所述设施或物品表面的至少一部分或全部上覆盖透水性和/或保水性片的步骤；将所述组合物供给到所述片上，使所述组合物与片下的所述表面接触的步骤；和在接触后放置规定时间的步骤。
3.如权利要求2所述的方法，其中，将所述表面上存在的所述物质的至少一部分擦去， 在擦去所述物质后的设施或物品表面覆盖所述片。
4.如权利要求2或3所述的方法，其中，所述片预先含有所述组合物。
5.如权利要求1 4中任一项所述的方法，其中，所述疑似存在杯状病毒且含有蛋白质的物质是吐泻物或粪尿。
6.如权利要求1 4中任一项所述的方法，其中，所述疑似存在杯状病毒且含有蛋白质的物质是杯状病毒感染者的吐泻物或粪尿。
7.如权利要求1 6中任一项所述的方法，其中，所述组合物中的乙醇的浓度为40 85% (w/w)的范围。
8.如权利要求1 7中任一项所述的方法，其中，所述酸为有机酸或无机酸。
9.如权利要求1 8中任一项所述的方法，其中，所述酸的浓度为1 10%的范围。
10.如权利要求1 9中任一项所述的方法，其中，所述酸是在1 10%的浓度下使所述水溶液显示2. 5 5. 0的范围的pH的酸。
11.如权利要求8所述的方法，其中，所述酸为柠檬酸、乳酸或磷酸。
12.如权利要求1 11中任一项所述的方法，其中，所述组合物还含有聚甘油脂肪酸
13.如权利要求1 12中任一项所述的方法，其中，所述杯状病毒为诺如病毒。
14.如权利要求1 13中任一项所述的方法，其中，相对于1体积的所述疑似存在杯状病毒且含有蛋白质的物质，以体积比计，所述组合物的供给量为0. 5 100的范围。
全文摘要
本发明提供不具有次氯酸钠水溶液那样的危险性，并且即使在以蛋白质为主要成分的有机物的共存下，也能够有效地使被消毒物中所含的诺如病毒等杯状病毒失活或灭活的方法。一种使蛋白质共存下的杯状病毒灭活的方法，其中，包括使疑似存在杯状病毒且含有蛋白质的物质与包含含有乙醇和酸作为有效成分、pH在2.5～5.0的范围内的水溶液的组合物接触。所述杯状病毒例如为诺如病毒。
文档编号A61K9/08GK102196724SQ200980142440
公开日2011年9月21日 申请日期2009年10月21日 优先权日2008年10月24日
发明者小田秀树, 殿川隆志, 石桥敦 申请人:麒麟协和食品株式会社