专利名称：C10orf116基因在制备改善脂肪组织胰岛素敏感性药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于基因工程领域，涉及ClOorflie基因在制备改善脂肪组织胰岛素敏感性的药物中的应用。
背景技术：
糖尿病是严重危害人类身体健康和生活质量的一种代谢性疾病。目前，我国糖尿病构成以2型糖尿病为主，占糖尿病人群的90%以上，而且该病年轻化趋势日渐明显。其严重的危害性及在青年、儿童中不断增高的发病率引起了全球学者的广泛关注，已经成为医学领域中的重要研究方向。糖尿病的发病机制主要有两个方面一是胰岛素分泌不足，二是胰岛素抵抗。而肥胖，尤其是中心型肥胖是产生胰岛素抵抗的一个重要危险因素。脂肪细胞是胰岛素作用的经典靶细胞，其对葡萄糖摄取障碍是胰岛素抵抗产生的重要因素。因此，从脂肪组织中筛选出与胰岛素抵抗相关基因作为2型糖尿病防治的靶标业已成为研究热点之一。C10orfll6基因是我们在前期研究工作中以抑制性差减杂交(suppressive subtractivehybridization, SSH)技术筛选肥胖与正常人网膜脂肪组织中的差异表达基因获得的一条新基因，该基因cDNA全长67^p(SEQ ID NO :1，匪_006拟9. 2)，开放阅读框长 221bp，编码76个氨基酸。该基因特异高表达于脂肪组织，在肥胖患者脂肪组织中表达显著上调，可促进脂肪细胞增殖、抑制脂肪细胞凋亡。但该基因与胰岛素敏感性之间的关系如何尚无知晓。
发明内容
本发明的目的是提供ClOorflie基因在制备改善胰岛素敏感性的药物中的应用。发明人检测了 ClOorflie基因过表达对成熟脂肪细胞葡萄糖摄取功能及其对葡萄糖转运蛋白(GLUT4)基因mRNA表达水平的影响。结果发现，脂肪细胞在没有胰岛素作用的基础状态下对葡萄糖仅有低水平的摄取，clOorflie基因过表达虽不显著影响脂肪细胞在此基础状态下的葡萄糖摄取量，但却能显著提高成熟脂肪细胞胰岛素刺激状态下的葡萄糖摄取，同时发现GLUT4的表达在clOorflie基因过表达的成熟脂肪细胞中也呈明显上调趋势。提示clOorflie基因与胰岛素抵抗可能密切相关，可用于开发改善胰岛素敏感性药物，另外，ClOorflie基因也能促进脂肪组织摄取葡萄糖，因而提出“ClOorflie基因在制备改善脂肪组织胰岛素敏感性和/或促进脂肪组织摄取葡萄糖的药物中的应用”的技术方案。本发明的有益效果本发明检测了 clOorflie基因过表达对成熟脂肪细胞葡萄糖摄取功能，考虑到葡萄糖转运体4(GLUT4)是胰岛素敏感葡萄糖摄取作用的重要功能执行者，GLUT4数量减少与转位障碍被认为是产生外周胰岛素抵抗或敏感性降低的重要机制之一，本发明同时检测了 clOorfl 16基因过表达对GLUT4的影响。显示ClOorfl 16基因能改善脂肪组织对胰岛素敏感性，同时也能促进脂肪组织摄取葡萄糖。本发明公开了 ClOorflie基因在制备改善脂肪组织胰岛素敏感性和/或促进脂肪组织摄取葡萄糖的药物中的应用，为制备改善脂肪组织胰岛素敏感性的药物及制备促进脂肪组织摄取葡萄糖的药物提供了新的技术方案。
图IpcDNA. 3. 1/myC-His (_) A载体图谱及插入位点图2cl0orfll6基因稳定转染3T3-L1前体脂肪细胞株的鉴定图3cl0orfll6基因过表达对成熟脂肪细胞糖摄取功能的影响。Γ，与 pcDNA3. IInsulin 相比 P < 0. 05)图如10虹打16基因过表达对脂肪细胞中GLUT4基因表达的影响。(*，与第4天 pcDNA3. 1 相比 P < 0. 05 ；#，与第 8 天 pcDNA3. 1 相比 P < 0. 001)图3、4中□代表pcDNA3. 1空载质粒的3T3-L1前体脂肪细胞(即pcDNA3. 1-3T3L1 细胞)，■代表转染clOorf 116-pcDNATM3. 1/myc-His (-)A质粒的3T3-L1前体脂肪细胞(即 clOorfl 16-pcDNA3. 1-3T3L1 细胞)
具体实施例方式以下通过实施例对本发明作进一步的阐述。实施例11材料和方法1.1试验材料1.1试验材料本试验所需的pcDNA 3. 1/myc-His (_) A质粒购自美国hvitrogen公司； hCIOorfl 16-pcDNA 3. 1/myc-His (-) A真核表达载体由本实验小组自行构建；pGEM -T Easy购自美国！Iomega公司；hC10orfll6-pGEM -T Easy质粒载体由本实验小组自行构建；2-deoxy-D-3[H]Glucose 购自英国 Amersham 公司；RNA 提取剂 TRIzoL Reagent 购自美国hvitrogen公司；反转录试剂购自美国Promega公司；Advantage 2PCR试剂盒购自日本Takara公司；TA载体购自美国Promega公司；实时荧光定量PCR中Master Mix购自美国ABI公司；引物由美国^witrogen公司合成。1. 2( —)hC10orfll6基因全编码区cDNA片段获取及TA克隆1.总RNA抽提采用Trizol法从人脂肪组织中抽提总RNA。2. 1. 5%琼脂糖/溴化乙锭凝胶电泳鉴定RNA完整性，利用紫外分光光度计完成总 RNA定量和纯度分析。3.反转录反应1)照下表，将试剂加入0. 2ml去核酸酶处理过的离心管，混勻并短暂离心。
权利要求
1. ClOorflie基因在制备改善脂肪组织胰岛素敏感性和/或促进脂肪组织摄取葡萄糖的药物中的应用。
全文摘要
本发明属于基因工程领域，公开了C10orfl16基因在制备改善脂肪组织胰岛素敏感性药物中的应用。本发明提出的C10orfl16基因在制备改善脂肪组织胰岛素敏感性和/或促进脂肪组织摄取葡萄糖的药物中的应用，为制备改善脂肪组织胰岛素敏感性的药物及制备促进脂肪组织摄取葡萄糖的药物提供了新的技术方案。
文档编号A61K48/00GK102210873SQ201010139449
公开日2011年10月12日 申请日期2010年4月2日 优先权日2010年4月2日
发明者倪毓辉, 刘晓梅, 彭宇竹, 曹新国, 朱春, 池霞, 王欣, 邱洁, 郭锡熔 申请人:倪毓辉, 刘晓梅, 彭宇竹, 曹新国, 朱春, 池霞, 王欣, 邱洁, 郭锡熔