专利名称：用于治疗过敏的乳酸菌菌株的食品组合物以及医药组合物的制作方法
技术领域：
本发明是有关一种食品组合物以及医药组合物，特别是一种包含抗过敏的乳酸菌菌株的食品组合物以及医药组合物。
背景技术：
一般食用含乳酸菌(LAB)的产品仅具有调整肠道的健康效果，虽然有数以万计的乳酸菌菌株存在于自然界，但仅有少数乳酸菌株具有抗过敏的特质。少数这些细菌株所具有的耐酸与耐胆盐能力、吸附黏膜表皮细胞的能力以及在通过肠胃道后仍可存活的能力等特性，是筛选有促进健康效果的菌株时的重要依据。时至今日，仅有少数几株经证明其具有抗过敏健康效果的乳酸菌菌株被确认出来，而乳酸菌对身体健康的功能在于菌株(strain) 的特异性而非菌种(species)，此种对于人的身体健康有特殊功效的菌株称为功能性益生菌(Guidelines for the evaluation of probiotics in food ；Report of j oint FAO/ WHOworking group on drafting guidelines for the evaluation of probiotics in food ；London Ontario，Canada April 30and May l，2002:l_7)o国内外有许多乳酸菌与过敏反应有关的文献报导。在针对乳酸菌减低过敏的能力进行动物试验的研究方面，热致死的乳酸菌L. plantarum L-137所作的动物试验能够诱导 DBA/2鼠的巨噬细胞与脾脏细胞产生IL-12及IFN-Y，并且能抑制已具酪蛋白(casein)专一性的IgE，增加对酪蛋白专一性的IgGl抗体(Murosaki，1998)。针对OVA-TCR-Tg鼠喂食 L. casei Shirota四周，增加脾脏细胞分泌IFN-γ和IL-12，降低分泌IL-4和IL-5 (Shida et al.，2002)。OVA致敏BALB/c鼠喂食乳酸菌Lactobacillus发酵奶27天，可降低血清中具有 OVA 特异性 IgE(Ishida et al. ,2003) C3H/Hej 鼠经 OVA 与霍乱毒素(cholera toxin)致敏，喂食B. bifidum BGN4、L. casei 911，可使血清中具OVA特异性IgE、IgA及总 IgE、IgGl降低(Kim et al.，2005)，这些文献证实在过敏模式的动物试验上，喂食乳酸菌能够降低血清中IgE的含量，藉此改善过敏的情形。乳酸菌在临床实验上，具有过敏疾病的患者确实能改善过敏反应，合并服用干燥的乳酸菌L. rhamnosus及L. reuteri六周，对过敏疾病有益处，以问卷调查家长评估益生菌对一至十三岁儿童异位性皮肤炎，发现56%的儿童异位性皮肤炎有改善(Rosenfeldt et al.，2003)。Ishida (2005)学者针对四十九位过敏性鼻炎患者，饮用L. acidophilus strain L-92，也发现过敏症状获得改善。服用L. fermentum VRI 003 PCCTM八周，五十三位具有异位性皮肤炎症状的小孩可以增加PBMC细胞产生IFN- γ，并改善过敏情形(Prescott et al.，2005)。Foster-Hoist (2006)等学者研究指出针对五十四位具有异位性皮肤炎患者所作的试验，给予服用L. rhamnosus strain GG及安慰剂后，能有效改善过敏症状。研究指出乳酸菌细胞壁成分具有免疫调节能力，包括P印tidoglycans (PG)、 Lipoteichoic acids (LTA)、Phosphopolysaccharide。例如 L. Iactis 细胞壁中的 Phosphopolysaccharide 能刺激小鼠白血球产生 IFN- y , Teichoic acid 禾口 Muramyl dip印tide 增加刺激 PBMC 产生 IFN-Y (Cross et al. ,2001) ；L. paracasei KW3110 细胞
3壁成分LTA可影响NF-κ B讯号传递途径，具有很强的免疫调控能力(Fujiwara et al., 2004)。益生菌株对于人体具有良好功效性，且有许多可能的机制被提出说明为何益生菌株对人体有良好的影响。这些机制大都集中在改善肠道黏膜细胞屏蔽功能来直接影响人体的免疫系统，例如抑制前发炎细胞激素的分泌、影响调节型τ细胞的活性以及调整Thl/Th2 之间的平衡。在婴幼儿时期改善调整肠胃道共生菌的菌相是十分重要的，许多过敏的婴幼儿肠道缺乏益生菌菌丛，且肠道菌丛皆存在有较多的产气夹膜梭菌及较少的双歧乳杆菌菌丛。因此益生菌丛存在肠道，对于人体的免疫能力建构及具备健全的免疫调控能力是十分重要的关键。然而，对于益生菌影响人体的机制依旧尚未有定论，针对此点，在未来的发展上，仍需更多的体外及体内试验去说明，对人体有如此良好影响的机制为何以及研究应用于人体上最佳的条件(Michael et al. ,2008)
发明内容
本发明一方面广义的包括由下列任一种生物性培养物罗伊氏乳酸杆菌 (Lactobacillus reuteri)GL_104菌株，中国典型培养物保藏中心保藏号M 209138菌株， 以及生理上可接受的赋形剂或稀释剂所组成的食品组合物或医药组合物。在另一项具体实施例中，包括增强抗过敏能力的生理上可接受的下列任一种菌株的同种或突变种的生物性培养物罗伊氏乳酸杆菌(Lactobacillus reuteri)GL-104菌株，中国典型培养物保藏中心保藏号M 209138。又，另一项具体实施例中，本发明可广义的包括经由促进细胞白介素-12 (IL-12) 或干扰素Y (IFN-gamma)调控Thl型免疫反应而抑制免疫球蛋白IgE，改善Th2型过度免疫反应的过敏现象，其是对哺乳动物给予可达到刺激Thl型免疫效果剂量的任一种前述生物性培养物。本发明亦可广义的包括本申请案说明书中分开或总合说明的部分、构成要件与特征，及任何包含这些部分、构成要件与特征中任何一种或多种的任何或全部组合，且若本文所述及的明确完整事物已于与本发明有关的相关技艺中出现已知的同等物时，这些已知的同等物将如同独立事项并入本文中。
图1显示，当分别以IO6至IO8Cfu的罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株M 209138与 IO5至IO7个小鼠脾脏细胞(Splenocyte)共同培养48小时，收取细胞上清液，以酶联免疫分析法侦测干扰素Y (IFN-gamma)在上清液中的含量。其中以无抗过敏功能乳酸菌 (Lactobacillus casei BCRC17001)及实验背景值(Cell only)为负对照组，以发表多数文献证明其有抗过敏功效的乳酸菌(Lactobacillusrhamnosus GG BCRC 16000)及PHA 为正对照组，侦测干扰素Y受刺激浓度。结果显示试验组可以显著的刺激小鼠脾脏细胞 (Splenocyte)分泌干扰素Y与负对照组(Lactobacillus casei BCRC17001)有显著性差异并比正对照组(Lactobacillusrhamnosus GG BCRC 16000)的刺激量高出近4倍。图2显示，当分别以IO6至IO8Cfu的罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株M 209138与 IO5至IO7个人类外周血单个核细胞(PBMC)共同培养48小时，收取细胞上清液，以酶联免疫分析法侦测干扰素Y (IFN-gamma)在上清液中的含量。其中以无抗过敏功能乳酸菌 (Lactobacillus casei BCRC17001)及实验背景值(Cell only)为负对照组，以发表多数文献证明其有抗过敏功效的乳酸菌(Lactobacillusrhamnosus GG BCRC 16000)及PHA为正对照组，侦测干扰素Y受刺激浓度。结果显示试验组可以显著的刺激人类外周血单个核细胞(PBMC)分泌干扰素Y与负对照组(Lactobacillus casei BCRC17001)有显著性差异并比正对照组(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)的刺激量高出 2. 2 倍。图3显示，当分别以热致死IO6至IO8Cfu的罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株M 209138 与IO5至IO7个人类树突状细胞(dendritic cell)共同培养48小时，收取细胞上清液，以酶联免疫分析法侦测细胞白介素12p40在上清液中的含量。其中以无抗过敏功能乳酸菌 (Lactobacillus casei BCRC17001)及实验背景值(Cell only)为负对照组，以发表多数文献证明其有抗过敏功效的乳酸菌(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)及LPS为正对照组，侦测细胞白介素12p40(IL-12p40)受刺激浓度。结果显示试验组可以显著的刺激人类树突状细胞分泌细胞白介素12p40(IL-12p40)与负对照组(Lactobacillus casei BCRC17001)有显著性差异，并比正对照组(Lactobacillus rhamnosus GG BCRC 16000)的刺激量高出2倍。图4显示，罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株M 209138在培养基的活化后，总菌数经由模拟胃酸溶液及胆盐溶液处理不同时间，罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株M 209138的菌数并不受胃酸及胆盐影响而急剧下降，证明本发明的抗过敏乳酸菌菌株可以通过人体消化系统严格环境的考验。图5显示，依据Jacobsen等学者(1999)的分析方法，当每个视野的平均菌数少于 40时，判定为不附着(nonadhesive)；当每个视野的平均菌数介于41至100时，判定为附着 (adhesive)；当每个视野的平均菌数大于100时，判定为强烈附着(strongly adhesive) 0 显示罗伊氏乳酸杆菌GL-104菌株M 209138判定为“强烈附着”。
具体实施例方式本发明一方面广义的包括下列生物性培养物罗伊氏乳酸杆菌(Lactobacillus reuteri) GL-104菌株，中国典型培养物保藏中心保藏号M 209138，以及生理上可接受的赋形剂或稀释剂所组成的食品组合物或医药组合物。许多文献指出增加第一型T细胞细胞激素包括细胞白介素(IL-12)、干扰素 Y (IFN-gamma)的分泌增加，可以有效改善过敏症状；进一步的研究也指出特定的乳酸菌株和树突状细胞上类铎受体(Toll-like receptor)结合，活化细胞内的转译蛋白移至核内而释放大量细胞激素，属于先天免疫的一环，因此某些特定的乳酸菌菌株藉由其细胞壁多糖类物质如肽聚糖(peptidoglycan)、多聚糖(polysaccharide)等，经先天免疫系统，确实能活化体内T细胞的发育。本发明所述的菌株的冷冻干燥培养物已保藏在中国典型培养物保藏中心，地址为中国，武汉，武汉大学430072。保藏的详细资料如表1所示表 权利要求
1.一种食品组合物，包含刺激免疫细胞分泌抗过敏相关细胞激素的乳酸菌菌株罗伊氏乳酸杆菌 (Lactobacillus reuteri) GL-104菌株，中国典型培养物保藏中心保藏号M 209138;以及生理上可接受的赋形剂或稀释剂。
2.如权利要求1所述的食品组合物，其中该赋形剂或稀释剂为一种食品。
3.如权利要求2所述的食品组合物，其中该食品包含发酵乳、酸奶、奶酪、乳制饮品乳粉、茶、咖啡或以上的组合。
4.如权利要求1所述的食品组合物，其中该乳酸菌菌株为具有活性或去活性 (inactivated)的菌株。
5.一种用于治疗过敏的医药组合物，包含刺激免疫细胞分泌抗过敏相关细胞激素的乳酸菌菌株罗伊氏乳酸杆菌 (Lactobacillus reuteri) GL-104菌株，中国典型培养物保藏中心保藏号M 209138;以及医药上可接受的赋形剂或稀释剂。
6.如权利要求5所述的医药组合物，其中该乳酸菌菌株为具有活性或去活性 (inactivated)的菌株。
全文摘要
本发明是有关新颖的乳酸菌菌株及含过去未知可用于增进它抗过敏能力的该菌株的新颖组合物，该组合物可呈食品或医药组合物形式存在。其中亦说明如何筛选测定该乳酸菌株组合物而增进Th1型免疫能力藉此调控因过敏而反应过度的Th2型的免疫反应的方法。
文档编号A61P37/08GK102309001SQ20101022673
公开日2012年1月11日 申请日期2010年7月1日 优先权日2010年7月1日
发明者蔡宜钧, 谢佩珊, 郭仲伟 申请人:丰华生物科技股份有限公司