专利名称：磷酸锌疫苗佐剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种疫苗佐剂，尤其涉及一种磷酸锌疫苗佐剂，以及该磷酸锌疫苗佐 剂在制备疫苗中的应用，属于免疫学领域。
背景技术：
锌是人体中不可缺少的元素。锌有着重要的生理功能锌是人体中100多种酶的 组成部分；锌是DNA聚合酶的必需组成部分；锌参加唾液蛋白构成；锌参加维生素A还原酶 和视黄醇结合蛋白的合成；锌能够促进性器官正常发育，以保持正常的性功能；锌能够保 护皮肤健康，维护免疫功能；锌有助于清除体内胆固醇，防治动脉粥样硬化；锌有助于抑制 癌症的发生等。人体的生长发育离不开锌，体内锌水平的高低会对神经、生殖和免疫系统产 生影响。锌是所有生物体必需的微量元素。锌制剂已广泛应用于感染性疾病、自身免疫病 等多种疾病的辅助治疗当中。疫苗佐剂是当今疫苗研究开发的热点，理想的疫苗佐剂需要具备安全、有效、靶向 和经济的特点。现有的铝佐剂是使用时间最长且应用最为广泛的被批准用于人体的疫苗 佐剂，它主要依靠储存库效应和免疫刺激效应两种机制来显著提高机体的免疫应答。但作 为佐剂，它在安全性和靶向性方面仍存在缺陷，原因是近年来经许多科学家研究发现，老 年性痴呆症与铝有密切关系，同时还发现，铝对人体的脑、心、肝、肾功能和免疫功能都有损 害。因此，世界卫生组织于1989年正式将铝确定为食品污染物而加以控制，并规定成年人 每天允许摄入的铝量不超过60mg。其他一些正在研究或已证实有佐剂作用的物质，由于安 全性、有效性或经济性等方面的原因，尚未批准用于人体。磷酸锌无毒，在物理、化学等方面与磷酸铝具有较高的相似性，而且应用广泛、来 源普遍、成本低廉。用磷酸锌作为疫苗佐剂与铝佐剂类似，均为颗粒佐剂，该类佐剂的作用是吸附抗 原后能形成凝聚性大颗粒，从而容易被巨噬细胞吞噬而增强抗原的免疫原性，此外，它还可 以减慢抗原的降解速度，延长抗原在体内的停留时间，延长刺激机体的时间，从而提高抗体 的滴度。为此，我们将磷酸锌这一含锌的化合物作为免疫佐剂，应用于疫苗的制备，并在动 物实验中检验其免疫增强作用，结果显示磷酸锌作为佐剂与疫苗联合应用，能够有效增强 疫苗的体液免疫应答，其免疫增强效果优于铝佐剂和氢氧化锌佐剂，并且其致敏性低于铝 佐剂和氢氧化锌佐剂。
发明内容
为解决现有疫苗铝佐剂在安全性等方面的缺陷，以及其它佐剂尚未批准用于人 体，从而制约着疫苗研究及发展，本发明提供一种安全，有效，稳定，价廉，并具有免疫增强 作用的磷酸锌疫苗佐剂。本发明提供磷酸锌作为疫苗佐剂的应用。本发明提供磷酸锌在制备疫苗佐剂中的应用。
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本发明提供磷酸锌疫苗佐剂在制备疫苗中的应用。本发明提供磷酸锌疫苗佐剂在制备甲肝疫苗中的应用。所述磷酸锌的水合物化学式为Zn3(P04)2 *2H20，化学式量为422. 08，当其失去两个 结晶水后，无水物化学式为Zn3(P04)2，化学式量为386. 08。所述磷酸锌作为疫苗佐剂应用于人体的推荐剂量为lmg。所述磷酸锌为市购的分析纯Zn3(P04)2 *2H20粉末，或者市购的分析纯Zn3(P04)2粉 末。所述磷酸锌疫苗佐剂的制备将所需剂量的分析纯的Zn3(P04)2 2H20粉末或者分 析纯的Zn3(P04)2粉末加入到适量注射用水中混悬，即得磷酸锌佐剂。本发明与现有技术相比具有下列优点和效果采用上述方案，使磷酸锌疫苗佐剂 安全、无毒，由于磷酸锌来源广泛、成本低廉，非常适合于疫苗佐剂，磷酸锌疫苗佐剂能够高 效刺激机体免疫应答，免疫增强效果优于铝佐剂和氢氧化锌佐剂；磷酸锌疫苗佐剂具有低 致敏性的特点，因此，在这一方面也优于铝佐剂和氢氧化锌佐剂。磷酸锌疫苗佐剂与灭活的 甲肝病毒抗原混合免疫动物后，能够显著增强抗原特异性的体液免疫应答。
图1为28周内，使用不同剂量的磷酸锌对小鼠血清特异性抗HAV IgG抗体水平的影响。图2为35天内，磷酸锌对小鼠血清特异性抗OVA IgE抗体水平的影响。图3为28周内，使用不同剂量的磷酸锌对小鼠血清特异性抗HBV IgG抗体水平的影响。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步描述。实施例1A、磷酸锌作为甲肝疫苗佐剂的免疫效果观察磷酸锌作为疫苗佐剂与灭活的甲肝病毒抗原在动物实验中，每只小鼠的应用剂量 为磷酸锌0. 5 1. 5mg，灭活甲肝病毒抗原12. 8EU。a、磷酸锌佐剂母液的配制al、精密称取分析纯的Zn3(P04)2 2H20粉末0. 1093g，加入到10ml注射用水中混 悬，制成Zn3(P04)2浓度为10mg/ml的磷酸锌佐剂；a2、精密称取分析纯的Zn3(P04)2粉末0. 1000g，加入到10ml注射用水中混悬，制成 Zn3(P04)2浓度为10mg/ml的磷酸锌佐剂；b、动物免疫将42只ICR小鼠分为六组、每组7只进行分组免疫，方案如下①HAV组每只小鼠腹腔注射灭活甲肝病毒抗原12. 8EU ；②HAV+A1 (0H) 3组每只小鼠腹腔注射灭活甲肝病毒抗原12. 8EU及在适量注射用 水中溶有lmg氢氧化铝的佐剂；③HAV+Zn (0H) 2组每只小鼠腹腔注射灭活甲肝病毒抗原12. 8EU及在适量注射用水中溶有lmg氢氧化锌的佐剂； ④HAV+Zn3 (P04) 20. 5mg组每只小鼠腹腔注射灭活甲肝病毒抗原12. 8EU及a步骤 中al的磷酸锌佐剂0. 05ml (0. 5mg)；⑤HAV+Zn3 (P04) 2 lmg组每只小鼠腹腔注射灭活甲肝病毒抗原12. 8EU及a步骤 中al的磷酸锌佐剂0. lml (lmg)；⑥HAV+Zn3 (P04) 2 1. 5mg组每只小鼠腹腔注射灭活甲肝病毒抗原12. 8EU及a步 骤中al的磷酸锌佐剂0. 15ml (1. 5mg)；c、小鼠血清的采集分别于步骤b中所述分组免疫后，第4、8、12、16、20、24、28周采取小鼠尾静脉血， 每只采取全血约lOOiil，置于高压灭菌过的Eppendorf管中，37°C静置1小时，之后4°C静 置过夜，次日离心后取上层血清，置于高压灭菌过的Eppendorf管中-20°C中保存待检；d、ELISA法测定步骤c中所取小鼠血清中抗_HAV IgG的抗体滴度用常规的ELISA商品试剂盒按说明书所述方法测定c步骤中所取小鼠血清中 抗-HAV IgG的抗体滴度。其中包被96孔酶标板的抗原为纯化的灭活甲肝病毒抗原，待测 样品为c步骤中所取的各组小鼠血清，其中的阳性参照品为小鼠抗-HAV IgG阳性的血清， 阴性参照为未接触过甲肝病毒抗原的小鼠的抗-HAV IgG为阴性的血清；e、数据分析对所获得的实验数据以SPSS11. 5统计软件进行单因素方差分析，P < 0. 05具有 统计学意义。表1为28周内，使用灭活HAV抗原与不同剂量磷酸锌疫苗佐剂免疫获得的小鼠血 清IgG水平(1 N)。表 权利要求
磷酸锌作为疫苗佐剂的应用。
2.磷酸锌在制备疫苗佐剂中的应用。
3.磷酸锌疫苗佐剂在制备疫苗中的应用。
4.磷酸锌疫苗佐剂在制备甲肝疫苗中的应用。
5.如权利要求1-4中的任何一种，其特征在于所述磷酸锌的水合物化学式为 Zn3(P04)2 *2H20，化学式量为422. 08，当其失去两个结晶水后，无水物化学式为Zn3(P04)2，化 学式量为386. 08。
6.如权利要求1-4中的任何一种，其特征在于所述磷酸锌作为疫苗佐剂应用于人体的 推荐剂量为lmg。
全文摘要
本发明涉及一种磷酸锌疫苗佐剂，尤其涉及磷酸锌作为疫苗佐剂的应用，以及磷酸锌疫苗佐剂在制备疫苗中的应用。所述磷酸锌作为疫苗佐剂与疫苗联合应用，能够有效增强疫苗的体液免疫应答，其免疫增强效果优于铝佐剂和氢氧化锌佐剂，并且经动物试验结果显示磷酸锌作为疫苗佐剂其致敏性和安全性均优于铝佐剂和氢氧化锌佐剂。
文档编号A61K39/39GK101972477SQ20101051341
公开日2011年2月16日 申请日期2010年10月21日 优先权日2010年10月21日
发明者王海漩, 胡云章, 胡凝珠 申请人:中国医学科学院医学生物学研究所