治疗与成孔毒素的暴露相关的疾病、病症和综合征的含锌组合物的制作方法

专利名称：治疗与成孔毒素的暴露相关的疾病、病症和综合征的含锌组合物的制作方法
技术领域：
在此披露的本发明总体上涉及组合物以及使用该组合物治疗由暴露于成孔毒素引起的症状的方法。
背景技术：
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每年有成百上千的海滩游客被刺胞动物科成员刺伤，这些成员包括珊瑚虫(银莲花、珊瑚)、水螅虫类、钵水母类(普通水母)、以及立方水母(cubozoan)(具有毒液的热带立方形胶状物，导致高发病率和死亡率)。例如，威胁生命的澳洲箱形水母(Chironexfleckeri)毒液注入每年都发生，在澳大利亚北昆士兰从十一月到五月。没有可用的明显有效的特定疗法；现在使用的“抗-毒液”没有经过临床证实并且与负结果相关。当前治疗是针对症状的减轻或者在严重情况下毒液注入后的心血管完整的支持。一些当前可用的“刺痛减轻”型喷雾剂典型地包括多种成分如醋、利多卡因、木瓜蛋白酶、芦荟、桉树油以及薄荷脑。因此，存在降低对于刺胞动物毒液注入的发病率和死亡率的有效疗法的需要，包括解决与刺胞动物毒液注入相关的炎症、疼痛、以及全身性和心血管后果。此外，成孔毒素或孔蛋白代表大多数病原菌(包括葡萄球菌、链球菌、炭疽、梭菌、以及大肠杆菌)的古老并保守的有毒分泌液，并且是蜜蜂和某些蜘蛛毒液的主要组分。强有力的膜破坏性孔蛋白允许回避在细菌性感染中的宿主吞噬作用以及在无脊椎动物毒液注入中快速猎物细胞溶解。因此，它们构成了对于感染和猎物捕食的基本机制。因此，对于治疗刺胞动物毒液注入的有效疗法将对所有与成孔毒素相关的症状具有普遍适用性。
发明概述本发明的实施方案包括用于治疗遭受由一种成孔毒素的作用导致的疾病、病症、综合征或症状的哺乳动物的方法，包括向该哺乳动物给予治疗有效剂量的一种含锌化合物。在一些实施方案中，该含锌化合物是静脉内给药的。在一些实施方案中，该锌化合物是通过透皮贴剂来给药的。在一些实施方案中，该含锌化合物是醋酸锌。在一些实施方案中，该含锌化合物是苹果酸锌。在一些实施方案中，该含锌化合物是氯化锌。在一些实施方案中，该含锌化合物是硫酸锌。在一些实施方案中，该含锌化合物是丙酸锌。在一些实施方案中，该含锌化合物是丁酸锌。在一些实施方案中，该含锌化合物是草酸锌。在一些实施方案中，该含锌化合物是丙二酸锌。在一些实施方案中，该含锌化合物是琥珀酸锌。在一些实施方案中，该含锌化合物是葡萄糖酸锌。在一些实施方案中，该疾病或症状可以是例如细菌性败血症(bacterialsepsis)、伊鲁康吉综合征(Irukandji syndrome)、心血管崩溃(cardiovascularcollapse)、无脉搏电活性(pulseless electrical activity,PEA)高钾血症、溶血、细胞因子和组胺释放、以及儿茶酹胺激增(catecholamine surge)等等。在一些实施方案中，该方法额外地包括向该哺乳动物给予治疗有效剂量的一种包括碳水化合物的组合物。在一些实施方案中，该碳水化合物包括D-乳果糖。在本发明的实施方案中，提供了一种用于治疗遭受由成孔毒素的作用导致的疾病的哺乳动物的方法，包括向该哺乳动物给予治疗有效剂量的一种包括碳水化合物的组合物。在一些实施方案中，该碳水化合物是D-乳果糖。本发明的实施方案还针对一种含锌的组合物用于制造用于治疗与一种成孔毒素相关的疾病的药物的用途。 在本发明的实施方案中，提供了一种包括碳水化合物的组合物用于治疗与一种成孔毒素相关的疾病的药物的用途。
附图简要说明图I是剂量反应曲线的XY绘图，阐明了葡萄糖酸锌在分离的红细胞(2% RBC)中完全抑制了由夏威夷箱形水母(Carybdea alata)毒液诱导的钾流出。图2是剂量反应曲线的XY绘图，表明葡萄糖酸锌在分离的红细胞(2% RBC)中完全抑制了由澳洲箱形水母(Chironex fleckeri)毒液诱导的钾流出。图3是剂量反应曲线的XY绘图，阐明了葡萄糖酸锌在全血中抑制了由澳洲箱形水母毒液诱导的钾流出。图4是剂量反应曲线的XY绘图，表明葡萄糖酸锌在分离的红细胞(2% RBC)中抑制了由来自夏威夷箱形水母的纯化的溶血素诱导的钾流出。图5A是阐述了葡萄糖酸锌在分离的红细胞(2% RBC)中抑制了由夏威夷箱形水母毒液暴露诱导的溶血的图。数据提供为在特定时间点血浆小份的吸光度(在405nm波长)。图5B是数据的半对数绘图，表明在暴露于夏威夷箱形水母毒液之后增加量的葡萄糖酸锌延迟了分离的红细胞(2% RBC)中发生的溶血半衰期。数据提供为对于范围从O. 62mM到5mM的不同浓度的葡萄糖酸锌在特定时间点取得的血浆小份的吸光度(在405nm波长)作为夏威夷箱形水母毒液的剂量的函数。图5C是代表性96孔板,描述了根据图5B所述的反应的溶血。图6是阐明了葡萄糖酸锌在全血中抑制了由澳洲箱形水母毒液诱导的溶血的图。图7是阐明了葡萄糖酸锌在全血中降低了强有力的促炎性细胞因子TOGF-AA、EGF、G-CSF, GRO、IFNa2、以及TNFa的产生的条形图，这些细胞因子响应于澳洲箱形水母毒液而出现。图8是表明了葡萄糖酸锌降低了响应于澳洲箱形水母毒液而增加的全血儿茶酚胺和组胺血浆释放的条形图。图9是对于注射了澳洲箱形水母毒液的小鼠记录的同时超声波心动图/心电图的代表性读数。

图10是对于注射了澳洲箱形水母毒液并且用葡萄糖酸锌处理的小鼠记录的同时超声波心动图/心电图的代表性读数。图11是Kaplan-Meier绘图，阐明了在小鼠研究中对于所有小鼠(未处理的或用葡萄糖酸锌处理的)的存活率以及毒液注入后的存活时间。
本发明详细说明成孔毒素或孔蛋白代表大多数刺胞动物毒液的古老并保守的有毒分泌液。除了表征刺胞动物科成员的毒液之外，孔蛋白还是大多数病原菌(包括葡萄球菌、链球菌、炭疽、梭菌、以及大肠杆菌)所使用的感染工具。强有力的膜破坏性孔蛋白允许回避在细菌性感染中的宿主吞噬作用以及在无脊椎动物毒液注入中快速猎物细胞溶解。它们构成了对于感染和猎物捕食的基本机制。孔蛋白结构和孔形成已经由负染色电镜以及证明了血浆可溶的、单体形式的这些毒素到单体的转变或多聚化以形成寡聚跨膜孔的其他生化技术进行了表征，与寡聚形式的人类补体C9 (Borsos等人· 1964. Lesions in erythrocyte membranes causedby immune haemolysis. Nature 202 :251-252 ;Bhakdi，S.和 Tranum-Jensen，J. 1985.·Membrane damage by channel-forming proteins staphylococcal alpha—toxin，streptolysin-0 and the C5b_9 complement complex.Biochem. Soc. Symp. 50 :221-233,上述每一个都通过引用以其整体结合在此)，以及人孔蛋白，细胞毒性T细胞的溶细胞蛋白(Young 等人.1986. The ninth component of complement and the pore-formingprotein (perforin I)from cytotoxic T cells !structural, immunological, andfunctional similarities. Science 233 :184-190,上述每一个都通过引用以其整体结合在此)显著可比。P如果孔允许了单价离子通过，孔插入牺牲了细胞膜的渗透屏障(Bashford等A- 1985. Sequential onset of permeability changes in mouse ascites cellsinducedby Sendai virus. Biochim. Biophys. Acta 814 :247-255 ；Bashford 等人.1986. Membranedamage by hemolytic viruses, toxins, complement, and other cytotoxic agents.Acommon mechanism blocked by divalent cations. J. Biol. Chem. 261 :9300-9308)从而导致了膜去极化。具体地，随着内部和外部离子溶液快速平衡，K+的流出，Na+的流入，Ca2+的流入，以及Cl—的流出一起导致了细胞的去极化。足够大小和开放时间的孔将同样允许更大分子如代谢中间产物(例如核苷酸和糖磷酸盐)的扩散损失从而导致细胞功能的丧失，称为促炎性细胞程序性死亡(pyroptosis)。最终，大蛋白如血红蛋白(在红细胞(RBC)的情况下)以及溶酶体酶泄露从而导致溶血和组织坏死。在进行刺胞动物科的立方水母成员的毒液的系统性生化表征的研究中，发现锌是若干特定孔蛋白相关病原性症状(包括但不局限于高钾血症、溶血、细胞因子和组胺释放、以及儿茶酚胺激增)的一种快速并有效的抑制剂。此外，在小鼠中，锌增加了澳洲箱形水母(澳大利亚箱水母)毒液的致命剂量之后的存活时间。箱形酵母毒液，与迄今为止研究的所有立方水母毒液一样，含有一种极其有力的孔形成毒素(PFT,还称为孔蛋白、细胞溶素或溶血素)。这些溶血素不被认为是致命的，因为死后临床表现不展示致命水平的溶血。然而，发现一种灾难性的高血钾状态在临床上先于可测量的溶血，此外，这种灾难性的高血钾状态是由立方水母毒液PFT特定引起的。发现含锌化合物如葡萄糖酸盐抑制了溶血和溶血之前的高血钾。成孔毒素展示出一般级别的保守结构同源性，一些钙似乎牵涉在聚合作用中以形成跨膜孔。因此，一些二价阳离子如Zn2+和Mg2+能够竞争性地结合到钙结合位点上并且抑制孔蛋白自组装以形成功能性多聚孔。因此，在本发明的实施方案中，提供了使用一种包括含锌化合物的组合物治疗由孔蛋白暴露引起的疾病或症状的方法。在本发明的一些实施方案中，提供了用于治疗由刺胞动物毒素中毒引起的症状的方法，其中该方法包括向遭受该症状的受试者给予治疗有效剂量的一种包括含锌化合物的组合物。在一些实施方案中，该组合物是静脉内给药的。在一些实施方案中，该含锌化合物是葡萄糖酸锌。
与暴露于成孔毒素相关的症状和疾病在本发明的一些实施方案中，成孔毒素相关病症和症状可以包括但不局限于高钾血症、血容量减少、低血钙症、有毒的钙流入、溶血、细胞因子和组胺释放、伊鲁康吉综合征、儿茶酚胺激增、细菌性败血症、心血管崩溃、无脉搏电活性(PEA)以及由刺胞动物的毒·液注入，伴随心血管崩溃、呼吸窘迫、炎症和/或伊鲁康吉综合征。例如，由灯水母科(刺胞动物门的一种立方水母成员)的严重毒液注入可以导致伊鲁康吉综合征，这与“儿茶酚胺激增”与“细胞因子风暴”型综合征相关，包括疼痛、出汗、急性焦虑、以及威胁生命的心血管影响。另外的症状包括与孔蛋白介导的细胞和组织损伤相关的疾病、病症或综合征，包括但不局限于由细菌感染、病毒感染、对于昆虫刺伤和蛛形纲动物咬伤的反应、以及对于刺胞动物门的生物的刺伤的反应引起的那些。产生突出健康重要性的PFT的示例性细菌包括但不局限于葡萄球菌、梭菌、链球囷、牙抱杆囷、气单胞囷、埃希氏囷、以及奈瑟氏囷。产生突出健康重要性的PFT的示例性病毒包括但不局限于来自呼肠病毒科、副黏液病毒科以及正黏液病毒科的病毒。产生突出健康重要性的刺胞动物门成员包括但不局限于立方水母(或箱形水母)、僧帽水母、大荨麻、银莲花、珊瑚、火珊瑚和水螅。与疾病和症状相关的成孔毒素可以由表I中列出的示例性媒介物引起。
表I.形成二价阳离子敏感性孔的媒介物(来自Bashford,C. L. Membrane Pores-FromBiology to Track-EtchedMembranes. Biosci. Rep. 15(1995)553-565.)
媒介物__实例_
病毒__仙台病毒，新城疫，流感_
细菌毒素金黄色葡萄球菌Ot和δ毒素，链球菌溶血素O、产气荚
膜梭菌q毒素、肺炎链球菌溶血素、大肠杆菌溶血素、
嗜水气孽胞菌溶血素、乳白海兔螺细胞溶素、苏云金
__芽孢杆菌δ内毒素_
动物毒素峰毒肽(蜜蜂)、细胞溶素(珊瑚虫、立方水母)、
__虫朱毒素(越口蛛毒)_
免疫蛋白__激活的才卜体、细跑^溶素(穿孑L素)_
合成的4匕合物聚阳离子、曲拉通Χ-100_成孔毒素相关疾病和症状还可以由成孔蘑菇毒素家族引起。该家族中的示例性毒素包括但不局限于热敏毒素(phallolysin)、金针菇毒素(fIammutoxin)、珍菇毒蛋白(ostreolysin)以及 Berheinmer(Bemheimer, LI , and B. Rudy. 1986. Biochim BiophysActa 864 :123-141,which is incorporated herein by reference in its entirety)中鉴定的溶细胞蛋白。孔蛋白暴露的其他医学相关的孔蛋白介导的症状或来源对于本领域的普通技术人员是显而易见的。
含锌化合物在本发明的实施方案中，含锌化合物可以包括对于锌的任何无毒抗衡离子。例如，抗衡离子可以是任何基于糖的抗衡离子，包括但不局限于醋酸盐、苹果酸盐或基于D-乳果糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖、蔗糖、戊糖、以及果糖的剂型。在一些实施方案中，抗衡离子可以是任何阴离子，包括但不局限于氯化物、硫酸盐、磷酸盐、醋酸盐、丙酸盐、丁酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、或一种复杂聚阴离子。在一些实施方案中，含锌化合物可以是葡萄糖酸锌。
在一些实施方案中，抗衡离子可以是满足以下需要来选择的任何离子1)防止放置额外的离子负荷在血浆中和/或2)防止受到孔蛋白介导的疾病或症状的折磨的受试者负担肾清除负荷。满足这些标准的可适用的抗衡离子对于本领域的普通技术人员是显而易见的。
剂暈给予的剂量将根据已知因素而改变，如特定试剂的药效特征；接受者的年龄、健康状况和体重；症状的性质和程度；联合治疗；治疗频率；以及所希望的效果。此外，包括一种含锌化合物的组合物的有效量将至少基于具体使用方法、受治疗的受试者、折磨程度、以及组合物给予方式而改变。“治疗有效量”的一种组合物是足以在受治疗的受试者(宿主)中达到所希望的效果的具体化合物的量。例如，这可以是对于预防、抑制、降低或缓解由在此披露的成孔毒素引起的病症必需的含锌化合物的量。一种披露的含锌化合物或含有它的药物组合物的治疗有效量可以由本领域的普通技术人员确定。在治疗或预防与成孔毒素相关的症状中有效的化合物或含有它的组合物的量可以由本领域普通技术人员熟知的标准临床技术来确定。另外，可以任选地采用体外或体内测试以帮助鉴定最佳剂量范围。本领域的普通技术人员能够容易地确定所采用的精确剂量。然而，合适的每日有效剂量典型地在从约0. OOlmg/kg体重到约250mg/kg体重、从约0. 01mg/kg体重到约100mg/kg体重、从约0. lmg/kg体重到约50mg/kg体重、或从约Img/kg体重到约25mg/kg体重的范围内。在此所述的有效剂量是指所给予的含锌化合物的总量。在一些实施方案中，所披露的含锌化合物或包含它的药物组合物的治疗有效剂量是在约ImM与约IOmM之间、在约2mM与约8mM之间、在约4mM与6mM之间的循环剂量。在一些实施方案中，一个治疗有效剂量是约5mM的循环剂量。
药物制剂在本发明的一个实施方案中，提供了一种治疗性治疗，该治疗包括使用一种如在此所述的含锌化合物、含有该化合物或其一种药学上可接受的盐或溶剂化物以及至少一种药物载体或稀释液的药物组合物或治疗剂。该化合物或组合物可以用在预防和/或治疗上述疾病或症状中并且用在此处所述的治疗中。在一些实施方案中，该载体是一种药学上可接受的载体并且与组合物中的其他成分相容，即对其他成分不具有有害影响。该载体可以是固体或液体并且可以配制为单位剂量制剂，例如配制为含有按重量计从O. 05到95%的活性成分的片剂。在一些实施方案中，在药物组合物中存在的含锌化合物的量值范围是药物组合物的按重量计从约O. 5%到约90%。在一些实施方案中，在药物组合物中存在的含锌化合物的量值范围是药物组合物的按重量计从约1%到约85%。在一些实施方案中，在药物组合物中存在的含锌化合物的量值范围是药物组合物的按重量计从约5%到约80%。在一些实施方案中，在药物组合物中存在的含锌化合物的量值范围是药物组合物的按重量计从约10%到约75%。在一些实施方案中，在 药物组合物中存在的含锌化合物的量值范围是药物组合物的按重量计从约15%到约50%。在一些实施方案中，在药物组合物中存在的含锌化合物的量值范围是药物组合物的按重量计从约25%到约35%。在一些实施方案中，在药物组合物中存在的含锌化合物的量值范围是药物组合物的按重量计从约2%到约25%。在一些实施方案中，在药物组合物中存在的含锌化合物的量值范围是药物组合物的按重量计从约2%到约20%。在一些实施方案中，在药物组合物中存在的含锌化合物的量值范围是药物组合物的按重量计从约2%到约10%。在一些实施方案中，在药物组合物中存在的含锌化合物的量值范围是药物组合物的按重量计从约5%到约15%。在一些实施方案中，在药物组合物中存在的含锌化合物的量值范围是药物组合物的按重量计从约5%到约10%。在一些实施方案中，该药物组合物是溶液。在一些实施方案中，该药物组合物是可注射的。 在一些实施方案中，该药物组合物可以不经肠道给予。在一些实施方案中，该药物组合物可以局部给予，例如通过溶液、喷雾、乳液或药膏。在一些实施方案中，该药物组合物可以皮下给予。在一些实施方案中，该药物组合物可以静脉内给予。在一些实施方案中，该药物组合物可以口服给予。在一些实施方案中，该药物组合物可以肌内给予。在一些实施方案中，该药物组合物可以腹腔内给予。在一些实施方案中，该药物组合物可以透皮给予，例如通过透皮贴剂。在一些实施方案中，这种治疗性锌组合物制剂可以包含至少一种附加剂，包括但不局限于载体、佐剂、乳化剂、悬浮剂、甜味剂、调味剂、香料、粘合剂等。如在此使用的“药学上可接受的载体”和“载体”通常是指无毒的惰性固体或非惰性半固体或液体填充剂、稀释剂，包封任何类型的材料或药剂辅助物。可以充当药学上可接受的载体的材料的一些非限制性实例是糖类如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；粉末黄芪胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂如可可脂和栓剂蜡；油类如花生油、棉籽油；红花油；芝麻油；橄榄油；玉米油；夏威夷果油，樟脑油；以及大豆油；二醇，如丙二醇；酯类如油酸乙酯以及月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏液；乙醇、和磷酸缓冲液，以及其他无毒的相容性润滑剂如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂、释放剂、涂层剂、甜味剂、调味剂、薄荷脑和芳香剂，根据配方设计师的判断，防腐剂和抗氧化剂也可用在该组合物中。在此所述的药学上可接受的载体如运载体、佐剂、赋形剂、或稀释剂对于本领域的普通技术人员是熟知的。典型地，药学上可接受的载体对于治疗剂是化学上惰性的并且在使用情况下没有毒副作用或毒性。药学上可接受的载体可以包括聚合物和聚合物基质、纳米颗粒、微泡等。治疗还可以进一步包括惰性稀释剂如水或其他溶剂、增溶剂和乳化剂如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(具体是棉籽油、落花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油、以及芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇以及脱水山梨糖醇的脂肪酸酯、及其混合物)。
给药途径和形式含锌化合物、或含有该化合物的一种治疗组合物可以通过多种途径递送，包括但不局限于静脉内、肌内、局部和口服，可以对于临床方案进行优化。给药途径的其他途径 包括舌下、口腔、肠胃外(包括如皮下、肌内、动脉内、腹膜内、脑池内、膀胱内、囊内、或静脉内)、透皮、和进入直肠点。在一些实施方案中，该含锌化合物是透皮给予的。典型地，将该化合物施加到离子电渗单元的药物电极，并且药物电极和接地体应用到需要治疗的受试者的皮肤上。施加电压，将该化合物透皮递送到该受试者。应用到药物电极上的典型化合物浓度范围是从约O. ImM到约250mM、从约O. 5mM到约200mM、从约ImM到约100mM、从约2. 5mM到约50mM、或从约5mM到约25mM。施加到受试者皮肤上的典型电压范围是从约O. ImAmp/min到约80mAmp/min0合适的电压是减轻了与暴露于成孔毒素相关的症状并且改进了对于受试者的医学效果同时维持了受试者的舒适水平的电压。本发明的治疗方法包括给予有需要的受试者的方法。如在此所使用的“受试者”可以指任何活体，典型是动物，优选哺乳动物，更优选是人。适合口服给药的制剂可以作为离散单元来提供，如片剂、胶囊、扁囊剂、糖浆、酏齐U、口香糖、“棒棒糖”制剂、微乳液、溶液、悬浮液、锭剂、或凝胶包被的安瓶，每种都含有预定量值的活性化合物；作为粉末或颗粒；作为水性或非水性液体中的溶液或悬浮液；或作为水包油或油包水乳液。适合用于经粘膜法如通过舌下腺或口腔给予的制剂包括锭剂贴片、片剂等(包括活性化合物和典型地一种调味品，如糖或阿拉伯胶)或黄芪胶和软锭剂(包括处于惰性基质如明胶和甘油或蔗糖或阿拉伯胶中的活性化合物)。适合用于肠胃外给药的制剂典型地包括无菌水溶液，含有预定浓度的锌化合物并且可能还含有另一种治疗剂；该溶液优选是与预期的接受者的血液等渗的。适合用于肠胃外给药的其他制剂包括含有生理上合适的共溶剂和/或络合剂如表面活性剂和环糊精的制剂。水包油乳液也可能适合用于制剂，用于肠胃外给予富含气体的流体。虽然这些溶液优选静脉注射给药，它们还可以通过皮下或肌内注射来给药。可以制备适合用于透皮给药的制剂用于通过透皮贴剂来递送从而扩大扩散或递送试剂，存在或不存在电泳电流。透皮给药还可以通过使用“纳米针”(参见Escobar-ChavezJJ, BoniIIa-Martinez D，ViIIegas-Gonzalez MA, Revilla-Vazquez AL. J Clin.Pharm (2009)，将其通过弓I用以其整体结合在此)。本发明的制剂可以通过任何合适的方法来制备，典型地通过均匀地并且深入地混合含锌化合物，任选地与液体或细分的固体载体或两者一起混合，以所要求的比例，然后如果需要的话使得到的混合物成形为所希望的形状。例如，片剂可以通过将包括含锌化合物和一种或多种可选成分的粉末或颗粒的紧密混合物进行压制来制备，这些可选成分如粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、或表面活性分散齐U，或通过将本发明的粉末化的含锌化合物的紧密混合物进行模制来制备。除了以上特别提到的成分之外，考虑到制剂类型，本发明的制剂还可 以包括本领域普通技术人员所知的其他试剂。例如，适合用于口服给药的制剂可以包括调味剂，适合用于鼻内给药的制剂可以包括香料。在一些实施方案中，在受试者与弓I起在此所述的反应、症状或病症的媒介物接触之前，含锌化合物用作预防性治疗。在一些实施方案中，在受试者遇到刺胞动物之前，含锌化合物用作预防性治疗。在 Remington' s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company (本令页域的标准参考文本)中描述了合适的药物载体。
联合治疗在本发明的实施方案中，在此所述的方法进一步包括联合疗法，其中向受试者给予至少一种额外的治疗剂。在一些实施方案中，这至少一种额外的治疗剂是选自下组，该组的构成为控制感染的抗生素(如青霉素、四环素和妥布霉素)、D-乳果糖、在某些类型的毒液注入中有用的特定磷脂酶抑制剂、类固醇、以及止痛片/消炎药(如布洛芬)。本发明的治疗法可以通过对于与药物一起使用可行的任何常规方法来给予，作为单独的治疗剂或多种治疗剂的组合。将理解到，将葡萄糖酸锌与一种另外的治疗进行组合的方法可以通过以下各项来给药(1)同时给药，通过在一种共剂型中结合这些化合物或(2)通过以分开的药物制剂轮流即连续地、顺序地、并列地或同时地递送这些化合物。在轮流治疗中，给予第二种、任选的第三种活性成分的给药时间是这样的，使得不丢失这些活性成分的组合的任何协同治疗效果的益处。在一些实施方案中，通过给药方法(I)和(2)，优选地给予组合从而达到最有效的效果。在一些实施方案中，通过给药方法(I)和(2)，给予组合从而达到每个活性成分的峰血浆浓度。在一些实施方案中，D-乳果糖可以实质上抑制溶血毒素。具体地，在IOmM D-乳果糖的存在下，观察到溶血的引人注目的缺乏。(Chung, J. J. , Ratnapala, L. A. , Cooke, I. Μ.,Yanagihara, A. A. ,Toxicon 39 (2001) 981-990，将其通过引用以其整体结合在此)。在一些实施方案中，一种含锌组合物与D-乳果糖组合使用，其中D-乳果糖的存在增强了对于成孔毒素的抑制，因此实质上降低了发病率和死亡率。在一些实施方案中，向遭受孔蛋白介导的症状的受试者给予的D-乳果糖的量是在约ImM与约50mM之间、在约2mM与约25mM之间、在约5mM与约15mM之间、或在约7. 5mM与约12.5mM之间。在一些实施方案中，向遭受孔蛋白介导的症状的受试者给予的D-乳果糖的量是约10mM。
实例
提供以下非限制性实例来进一步阐述在此披露的本发明的实施方案。本领域的普通技术人员应理解到，以下实例中披露的技术代表了被发现在本发明的实践中良好地起作用的方法，因此可以被考虑为构成了对于其实践的方法实例。然而，鉴于本披露，本领域的普通技术人员应理解到，在披露的具体实施方案中可以作出改变，仍然得到类似或相似的效果，而不偏离本发明的精神和范围。
实例I
在全血和分离的红细胞中，含锌化合物抑制了刺胞动物毒液的作用浓度梯度驱动的单价离子流，或更确切地说，钾(K+)流出到血浆中，同时钠(Na+)流入，氯离子(Cl—)流出，二价阳离子有毒的流入(Ca2+)，可以发生在立方水母毒液注入中，具有足够快的动力学，这可以导致心脏毒钙流入，具有致命血浆高钾血，在受影响的受试者中超过肾脏清除率。人类全血的体外测试证明了，血钾过高由立方水母PFT暴露于致死水平的游离血浆钾(> IOmM)导致。含有碳水化合物平衡离子的锌离子化合物用于研究立方 水母PFT抑制，在刺胞动物孔蛋白相关的致病过程中，测试了锌抑制效果。
葡萄糖酸锌
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mm使全血或人洗涤过的红细胞(RBC)经受夏威夷箱形水母(CA)或澳洲箱形水母(CF)毒液或来自夏威夷箱形水母(CA)或澳洲箱形水母(CF)的纯化的孔蛋白。将这些细胞同时用1/20总体积剂量的IOOmM葡萄糖酸锌处理从而达到5mM的最终浓度，通过离子选择性特效电极连续测定钾流出时间。图I和2展示了这些实验的结果。毒液量以U/ml/%提供，其中一个单位等效于在37°C在I小时溶解1% RBC溶液的毒液的量。如图I中所示，在21 (%中，葡萄糖酸锌完全抑制了由夏威夷箱形水母毒液诱导的钾流出。如图2中所示，在2RBC%中，葡萄糖酸锌完全抑制了由澳洲箱形水母毒液诱导的钾流出。如图3中所示，在全血中，葡萄糖酸锌抑制了由澳洲箱形水母毒液诱导的钾流出。这些结果因此表明，一种含锌化合物有效抵抗了由暴露于成孔毒素引起的离子流动。
实例2
在全血和分离的红细胞中，含锌化合物降低了孔蛋白介导的溶血使全血或人洗涤过的红细胞(RBC)经受夏威夷箱形水母(CA)毒液或纯化的溶血素。将这些细胞同时用1/20总体积剂量的IOOmM葡萄糖酸锌处理从而达到5mM的最终浓度。在每个时间点去除等分部分，脉冲微量离心机自转用于分离血浆。用分光法测定每个时间点处的血浆血红蛋白水平。如图4中所示，在2RBC%中，葡萄糖酸锌实质上抑制了由夏威夷箱形水母毒液引起的溶血。如图5中所示，在2RBC%中，葡萄糖酸锌实质上抑制了由夏威夷箱形水母溶血素引起的溶血。具体地讲，葡萄糖酸锌减慢了溶解的T1/2，从10分钟到40分钟，将毒液剂量(6. 4U/ml)的总溶血能力降低了对于10倍。因此，这些结果表明含锌化合物有效抑制或延缓了由暴露于一种成孔毒素引起的溶血的发作。
实例3含锌化合物改进了全血的孔蛋白介导的细胞因子响应在这个实例中，在5mM葡萄糖酸锌的存在或不存在下，使全血经受澳洲箱形水母(CF)毒液，测定这些细胞中的细胞因子的产生。如图6中所示，与未处理的细胞相比，用葡萄糖酸锌处理的细胞实质上展示出较不严重的溶血。如图7中所示，在全血样品中，葡萄糖酸锌实质上改变了由澳洲箱形水母(CF)毒液诱导的细胞因子的产生。具体地讲，降低了强有力的促炎性细胞因子TOGF-AA、EGF、G-CSF、GRO、IFNa 2、以及TNFa的产生。在CF毒液暴露的血液中，葡萄糖酸锌的加入使得这些强有力的炎性化学诱导剂的释放显著降低，表明了在立方水母毒液注入伊鲁康吉综合征相关的“细胞因子风暴”响应的治疗中一种锌化合物的效果。
实例4
在全血中，含锌化合物降低了孔蛋白介导的儿茶酚胺和组胺响应使全血经受澳洲箱形水母(CF)毒液。然后同时用5mM葡萄糖酸锌处理毒素暴露的细胞，测定儿茶酚胺和组胺响应。如图8中所示，在全血样品中，葡萄糖酸锌降低了由澳洲箱形水母(CF)毒液诱导的儿茶酚胺和组胺响应。因此，这些结果表明，含锌化合物可以改善与暴露于成孔毒素相关的儿茶酚胺和组胺响应。这些结果表明，当向遭受由孔蛋白暴露引起的症状的受试者给予葡萄糖酸锌时，改进了临床效果。
实例5
在暴露于成孔毒素的小鼠中，含锌化合物增加了存活时间用葡萄糖酸锌通过静脉注射处理鼠类受试者，同时向这些受试者注入澳洲箱形水母毒液。在处理过的小鼠中，在毒液注入之前两分钟以及在毒液注入之后一分钟给予葡萄糖酸锌，为一种单药丸，未处理的小鼠不接受任何葡萄糖酸锌。用没有触须的高度纯化的鞭毛虫总海峰水母的隔离种群，向所有小鼠注入毒液。然后观察这些小鼠，确定葡萄糖酸锌给药的效果。表2表明，在葡萄糖酸锌的存在和不存在下，小鼠静脉尾静脉响应于澳洲箱形水母毒液。如表2中所展示的，葡萄糖酸锌的使用将鼠类受试者的存活时间增加了 12小时。在缺乏葡萄糖酸锌处理下，小鼠在毒液注入几分钟内死亡。这些结果表明，含锌化合物的给药可以在暴露于成孔毒素的小鼠中提高存活时间。
表2.在IV尾静脉注入澳洲箱形水母毒液的小鼠中，在处理前和处理后葡萄糖酸锌对于存活时间的影响
权利要求
1.一种含锌组合物用于制造用于治疗与一种成孔毒素相关的疾病或症状的药物的用途。
2.如权利要求I所述的用途，其中该含锌化合物是葡萄糖酸锌。
3.如权利要求I或权利要求2所述的用途，其中该疾病或症状是选自下组，该组的构成为细菌性败血症(bacterial sepsis)、伊鲁康吉综合征(Irukandji syndrome)、心血管崩溃(cardiovascular collapse)、无脉搏电活性(pulseless electrical activity,PEA)高钾血症、溶血、细胞因子和组胺释放、以及儿茶酹胺激增(catecholamine surge)。
4.如权利要求I或权利要求2所述的用途，其中该组合物额外包括治疗有效剂量的一种碳水化合物。
5.如权利要求4所述的用途，其中该碳水化合物包括D-乳果糖。
6.一种包括碳水化合物的组合物用于制造用于治疗与一种成孔毒素相关的疾病的药物的用途。
7.一种用于治疗遭受由成孔毒素的作用导致的疾病或症状的哺乳动物的方法，包括向该哺乳动物给予治疗有效剂量的一种含锌化合物。
8.如权利要求7所述的方法，其中该含锌化合物是静脉内给药的。
9.如权利要求7或权利要求8所述的方法，额外地包括向该哺乳动物给予治疗有效剂量的一种包括碳水化合物的组合物。
10.一种用于治疗遭受由成孔毒素的作用导致的疾病的哺乳动物的方法，包括向该哺乳动物给予治疗有效剂量的一种包括碳水化合物的组合物。
11.如权利要求10所述的方法，其中该碳水化合物是D-乳果糖。
全文摘要
本发明的实施方案涉及组合物以及使用该组合物治疗由暴露于成孔毒素引起的症状的方法。
文档编号A61P9/00GK102917702SQ201080046915
公开日2013年2月6日 申请日期2010年9月23日 优先权日2009年9月23日
发明者安琪儿·安妮·柳原 申请人:夏威夷大学