减少抗-抗体反应的方法、组合物和试剂盒的制作方法

专利名称：减少抗-抗体反应的方法、组合物和试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明总体上涉及免疫学、抗体(Ab)和医学领域。更特别地，本发明涉及基于同种异型表型来选择预防性或治疗性的抗体，以减少与抗-抗体反应相关的不良反应。
背景技术：
治疗性单克隆抗体(mAb)是医药行业发展最快的部分。至今，有超过20种mAb已经被FDA批准用作药物，还有很多在开发中。尽管现已有方法可创造完全人类mAb，但是几乎全部FDA批准的治疗性mAb都来源于啮齿类动物。不幸的是，使用非人类mAb可能引起严重的，有时是致命的反应。人们对将非人类抗体给予人类受试者而引起的超敏反应已了解几十年。与对抗某种产生微生物的疾病的疫苗非常相似，给予非人类抗体可将人体免疫来对抗这些外源糖蛋白。尽管使用一次非人类抗体通常不会产生强烈的抗-抗体反应，但是重复使用非人类抗体治疗慢性疾病可能导致由于随之发生的抗-抗体反应而引起严重副作用(包括死亡)。这个问题在早期基于抗体的治疗中特别严重，这些治疗使用马抗血清或鼠类mAb。 近年来，人们已经尝试通过改变非人类抗体来减少抗-抗体反应，以便使它们显得更像人类来源物质。例如，“人源化”鼠类抗体的常见操作包括将一个单克隆抗体的互补性决定区(CDR)以外的鼠类序列替换成实际的人类序列。尽管此类CDR-移植技术已帮助减少人-抗-鼠抗体(HAMA)反应，但是由于它们没有消除所有鼠序列，所以它们还没有消除这个问题。人们已使用多种方法来开发所谓的“人类”抗体。这些方法包括使用经遗传工程处理的小鼠来产生来自人类基因序列的抗体，以及使用采用DNA文库的体外组合方法。临床研究清楚地显示，衍生自与人类抗体更相似的序列的治疗性抗体会使抗-抗体相关副作用的发作时间或强度延迟。使用完全人类抗体在未来将几乎可以成为标准性的实践。尽管如此，由于人类大量的遗传变异，人-抗-人抗体(HAHA)反应将很难被消除。

发明内容
总结本发明涉及发展可减少受试者对所给予的抗体形成抗-抗体反应可能性的方法和组合物。人类有五种不同的抗体(或免疫球蛋白；Ig)，称为IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。 单一种类内的不同抗体具有不同的可变区、而结构相似的恒定区。在一类Ig内，还可以有亚类。例如，IgG类的人Ig可以是以下四种IgG亚类之一 IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。任何给定亚类的恒定区具有几乎相同的氨基酸序列，而那些不同的亚类具有较少相似的氨基酸序列。尽管所有正常的人类都具有全部Ig类和亚类，但相同种类和亚类的Ig可能存在两种或多种等位基因形式(同种异型)，其中一些等位基因形式存在于一些人的体内而不再其他人的体内。例如，在IgGl亚类中，有四个重链等位基因(或同种异型)Glml、Glm2、 Glm3和Glml7 ；以及三个轻(κ)链等位基因Kml、Kml，2和Km3。不同的IgGl等位基因根
5据恒定区内小氨基酸序列的变化而定义。例如，序列中其他都相等，Glm3和Glm2同种异型的恒定区之间的差异总计四个氨基酸。常规治疗性抗体方法的主要缺点在于它们没有考虑受试者内源性抗体的同种异型表型。因此，如果给定的单克隆抗体具有未在特定受试者体内表达的同种异型决定簇，该受试者的免疫系统很可能产生了对抗该治疗性单克隆抗体的抗-同种异型抗体(AAAb)反应，这个反应可能导致副作用，例如超敏反应，或者中和单克隆抗体的治疗效果。即使该受试者之前未被给予该治疗性单克隆抗体，AAAb反应也可能发生，例如当该受试者具有(i) 自然发生的AAAb，(ii)与高效价抗Ab相关的病况(例如风湿性关节炎)，(iii)由于输血而产生的AAAb，(iv)母源衍生的AAAb，(ν)由于怀孕而产生的AAAb，和/或(vi)由于另一种治疗性单克隆抗体而产生的AAAb。本发明涉及选择一种有待给予受试者的抗体以匹配、或至少更像该受试者内源性抗体的同种异型表型，以减少抗体诱导的副作用以及中和作用。因为免疫系统不断适应而不产生自身抗原反应，所以给予从免疫系统角度更像自身抗体的抗体不太可能引起抗-抗体反应。因此，本发明使用某种特定抗体的时间会比其他可能的抗体时间更长、和/或不伴随使用免疫抑制药物(例如，甲氨蝶呤或留类)更长。因此，本发明的特征在于一组含单克隆抗体的药物组合物。该组包括至少一种第一药物组合物，包括(a) —种第一人类或人源化单克隆抗体和一种药学上可接受的载体， 以及(b) —种第二人类或人源化单克隆抗体和一种药学上可接受的载体，其中该第一单克隆抗体是一个第一同种型并且包括一个第一可变区，并且该第二单克隆抗体是该第一同种型并且包括该第一可变区，并且其中该第一单克隆抗体包括一个第一重链同种异型表型， 该第二单克隆抗体包括不同于该第一重链同种异型表型的一个第二重链同种异型表型。该组可能进一步包括(C) 一种第三人类或人源化单克隆抗体和一种药学上可接受的载体，其中该第三单克隆抗体是该第一同种型，包括该第一可变区，并且包括不同于该第一和第二重链同种异型表型的一个第三重链同种异型表型；以及在一些情况下，(d) — 种第四人类或人源化单克隆抗体和一种药学上可接受的载体，其中该第四单克隆抗体是该第一同种型，包括该第一可变区，并且包括不同于该第一、第二和第三重链同种异型表型的一个第四重链同种异型表型。该组中，该第一同种型可以是Y 1，并且例如该第一重链同种异型表型可能包括人 Glm3同种异型，并且该第二重链同种异型表型可能包括人Glml7同种异型。该第一同种型还可能包括Y 3，并且例如该第一重链同种异型表型可能包括人G3m5同种异型，并且该第二重链同种异型表型可能包括人G3m21同种异型。该第一重链同种异型表型和该第二重链可能还包括不同的同种异型表型，这些表型选自下组，其构成为G3m5、10、ll、13、14、26、 27 ；G3m21、26、27、28 ；G3ml0、11、13、15、27 ；G3ml0、11、13、15、16、27 ；G3m5、6、10、11、14、26、 27 ；和 G3m5、6、ll、24、26另一方面，本发明的特征是一种修改人类或人源化单克隆抗体的方法。这个方法可能包括修改该单克隆抗体的重链恒定区氨基酸序列的步骤，以便将其表型从一个第一自然发生的同种异型表型改变至一个第二自然发生的同种异型表型，其中该单克隆抗体中不编码同种异型表型的氨基酸序列没有被修改。在这个方法中，该单克隆抗体可以是从Glml 同种异型被变至nGlml同种异型的一个IgGl ；和/或从Glm3同种异型被变至Glml7同种异型的一个IgGl。在此方法中，该第二自然发生的同种异型表型可能是同族同种异型 (isoallotype)或非标记物。例如，如果该单克隆抗体是IgG2，它可以从G2m23同种异型被变至nGaii23异同种异型。本发明还包括一种选择人类或人源化单克隆抗体用于给予人类受试者的方法。这个方法可能包括以下步骤(a)确定该受试者体内存在一个第一抗体同种异型表型；以及
(b)从一组人类或人源化的单克隆抗体中选择一种有待给予该受试者的单克隆抗体，这组单克隆抗体包括至少具有该第一同种异型表型的一种第一单克隆抗体以及含有并未内源性存在于该受试者体内的一个第二同种异型表型的一种第二单克隆抗体；以及(c)将该第一单克隆抗体给予该受试者。在此方法中，该第一单克隆抗体可能是不包括非内源性存在于该受试者体内的同种异型表型的任何抗体。该第一单克隆抗体可能具有一个第一同种型并且包括一个第一可变区，并且该第二单克隆抗体可能具有该第一同种型并且包括该第一可变区。这个方法中的受试者可能患有风湿性关节炎；之前已进行过异源输血；可能是已怀孕的女性；小于1岁的儿童；和/或之前给予过具有该第二同种异型表型的抗体。本发明进一步的特征是选择一种单克隆抗体用于给予属于某种特定人群(例如， 白人，黑人，或亚洲人群)的人类受试者的方法。这个方法可能包括以下步骤(a)确定包括该受试者的一个特定人群；(b)从一组人类或人源化单克隆抗体选择一种单克隆抗体用于给予该受试者，这组单克隆抗体包括至少具有在该特定人群中更为普遍的一个第一同种异型表型的一个第一单克隆抗体、以及具有在该特定人群中不如该第一同种异型表型普遍的一个第二同种异型表型的一种第二单克隆抗体；并且(c)将该第一单克隆抗体给予该受试者。在这个方法中，该第一单克隆抗体可能包括在该特定人群中更加普遍的一个第一单倍型，并且该第二单克隆抗体可能包括在该特定人群中不如该第一单倍型普遍的一个第二单倍型。该特定人群是白人人群。在这个方法中，该受试者可能患有风湿性关节炎；之前已进行过异源输血；可能是已怀孕的女性；小于1岁的儿童；和/或之前给予了包括该第二同种异型表型的抗体。另一方面，本发明的特征是治疗已发展为对抗一种第一人类或人源化单克隆抗体的抗-抗体反应的受试者的方法。这个方法可能包括将一种第二人类或人源化单克隆抗体给予该受试者的步骤，该单克隆抗体具有与该第一单克隆抗体相同的可变区、而不同于该第一单克隆抗体的同种异型表型。该抗-抗体反应可能是一种特征为受试者体内存在一些抗体，这些抗体特异性地结合至该第一单克隆抗体的同种异型决定簇上。该第二单克隆抗体可以是不包括非内源性存在于受试者体内的同种异型表型的单克隆抗体。本发明中还包括一种筛选存在抗体的受试者的方法，这些抗体特异性地结合至并非由该受试者内源性表达的同种异型决定簇。这个方法可能包括以下步骤(a)从该受试者获得一个生物样本；(b)用一个对该同种异型决定簇特异的探针接触该生物样本；并且
(c)检测该探针与该生物样本可能含有的抗体的结合，作为该受试者含有特异性地结合并非受试者内源性表达的同种异型决定簇的抗体的指示。这个探针可以是包含并非由该受试者内源性表达的同种异型决定簇的一种抗体。本发明还进一步包括一种用于表征受试者的同种异型表型的试剂盒。该试剂盒可能包括至少一种第一探针，该探针特异性地识别一个第一抗体同种异型决定簇，以及一个第二探针，该探针特异性地识别不同于该第一抗体同种异型决定簇的一个第二抗体同种异型决定簇；至少一个第一正控制，该正控制包括含有或编码该第一同种异型决定簇的一个第一分子，以及一个第二正控制，该正控制包括含有或编码该第二同种异型决定簇的一个第二分子；至少一个第一负控制，该负控制包括不含有或编码该第一同种异型决定簇的一个第三分子，以及一个第二正控制，该正控制包括不含有或编码该第二同种异型决定簇的一个第四分子；以及打印出的指示用于使用该试剂盒。该第一和第二探针可能是特异性地结合一个不同的同种异型决定簇的抗体，这些抗体选自下组，其构成为Glml、Glm2、Glm3、 Glml7、G3m5、G3m6、G3ml0、G3mll、G3ml3、G3ml4、G3ml5、G3ml6、G3m21、G3m24、G3m26、G3m27 和G3m28。该试剂盒可以进一步包括多个聚合酶链反应引物，这些引物特异性地扩增不同的同种异型决定簇，这些同种异型决定簇选自下组，其构成为Glml、Glm2、Glm3、Glml7、G;3m5、 G3m6、G3ml0、G3mll、G3ml3、G3ml4、G3ml5、G3ml6、G3m21、G3m24、G3m26、G3m27 和 G3m28。除非另外定义，此处所用的全部技术术语与本发明所属领域的一般技术人员通常理解的含义相同。通常所理解的生物学术语定义可见于Rieger等人的《遗传学词典标准和分子》第5版本，Springer-Verlag 纽约，1991 ；以及Lewin, Genes V，牛津大学出版社 纽约，1994。如在此所用，“抗体”或“Ab”是一个Ig，一种由相同或不同的Ig所组成的溶液，或 Ig的混合物。工程化处理的Ig，例如包含至少一个Ig同种异型决定簇的双体和免疫粘附素，也被称为“Ab”。“单克隆抗体”或“mAb”是由一种克隆B细胞系所表达的Ab。如此处所用，该术语指一类Ab分子，该类型包含唯一一种能够与一种特定抗原的特定表位发生免疫反应的抗原结合位点。“多克隆抗体”或“多克隆Ab”是不同Ab的混合物。典型地，多克隆 Ab可包括大量不同的Ab分子，它们将一种特定抗原或特定有机体与这些不同Ab中的至少一些相结合，这些Ab与该抗原或有机体的一个不同的表位发生免疫反应。如此处所用，多克隆Ab可以是两种或多种mAb的混合物。提及短语“同种异型决定簇”，是指位于一个Ig位置上的内源性氨基酸序列，该Ig 位置对应于定义一个同种异型的位置。0}如此处所用，短语“同种异型表型”是指定义一个同种异型的Ab的氨基酸序列、或者与定义一个Ab同种异型的氨基酸序列处于相同位置上的氨基酸序列。短语“同种异型表型”可以包括一种抗体，该抗体具有一个单一同种异型、异同种异型或非标记物；或者超过一种(例如2、3、4、5、6或更多)的同种异型、异同种异型或非标记物。Ab的“抗原结合部分”包含在一个Ab的Fab部分的可变区内，并且是将抗原特异性地赋予Ab的Ab部分(即典型地是由Ab的重链和轻链的⑶R形成的三维口袋)。"Fab 部分”或“Fab区域”是木瓜蛋白酶消化的Ig的蛋白分解片段，该片段包括该Ig的抗原结合部分。“F(ab’)2部分是胃蛋白酶消化的Ig的蛋白分解片段。“Fab’部分”“是从减少 F(ab' ) 2部分的二硫键得到的产品。“非Fab部分”是不在Fab部分内的Ab的部分，例如 “Fe部分“或“Fe区域”。Ab的“恒定区”是可变区以外的Ab部分。通常涵盖于恒定区内的是指Ab的“效应物部分”，它是负责结合促进免疫反应的其他免疫系统组分的Ab部分。因此，例如在Ab上结合补体组分或Fc受体的位置(并未通过它的抗原结合部分)通常是该 Ab的效应物部分。当提及一个蛋白质分子，例如Ab时，“纯化的”是指从自发伴随物例如分子的组分中分离。典型地，一个Ab或蛋白质被分离，条件是当是至少大约10% (例如9%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%、99%、99· 9% 和 100 (按重
量)不含有非Ab蛋白质、或其他自然发生的与该Ab或蛋白质自然结合的有机分子。纯度可以通过任何合适的方法来测量，例如柱色谱法、聚丙烯凝胶电泳法、或HPLC分析。在不同于自然发生的细胞类型的一个细胞类型中产生的化学合成的蛋白质或其他重组蛋白是“纯化”的。当Ab的治疗产生所希望的Ig与不希望的Ig的比例在治疗后比治疗前高时，含有一个所希望的Ig类型和一个不希望的Ig类型的Ab被“富集”得到所希望的Ig类型。例如，含有同种异型为Glm3和Glml7的IgG的Ab溶液被富集稍后使用，条件是当同种异型为 Glm3的一些或全部IgG从该溶液中被移除。提及“结合”、“结合”或“与之反应”是指一个分子识别并粘附至一个样本中的一个特定第二分子，而并不实质地识别或粘附该样本中的其他分子。一般而言，“特异性结合” 另一个分子的Ab具有的Kd高于其他分子的大约105、106、107、108、109、1010、1011或1012
升/摩尔。如在此所用，术语“多肽”包括天然或人工的蛋白质、蛋白质片段和蛋白质序列的多肽类似物。多肽可以是单体或聚合物。“人类Ab”是具有衍生自人种系Ig序列的可变区和恒定区的Ab。人类抗体可以包括未被人种系Ig序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或定点诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)，例如在⑶R并且特别在⑶R3中。然而，“人类Ab”不包括具有衍生自非人种的种系并且移植到人类框架序列上的CDR序列的Ab (它是“人源化Ab”)。术语“重组Ab”旨在包括通过重组方式制备、表达、产生或分离的所有Ab，例如使用感染至一个宿主细胞内的重组表达载体而表达的Ab、从一个重组体分离的Ab、组合型Ab 文库、从对于人类Ig基因而言为转基因的动物(例如小鼠)中分离的Ab (请见例如Taylor， L. D.等人，(1992) Nucl. Acids Res. 20 :6沘7_6四5)请见例如 Taylor，L. D.等人，(1992) Nucl. Acids Res. 20 :6观7_6295)，或通过任何其他方式制备、表达、产生或分离的Ab，这些方式涉及将Ig基因序列剪接至其他DNA序列。术语“表位”包括能够特异性结合一个Ig的任何抗原决定簇。0}“治疗有效量”是一个量值，它能够在一个接受治疗的动物或人体内产生医学上希望的效果(例如改善或预防一种疾病)。如此处所用，术语“受试者“是指任何含有抗体的动物，包括哺乳动物，例如人、狗、 牛、马、猪、绵羊、山羊、猫、小鼠、兔子、大鼠和转基因非人动物。术语“药学组合物”或“药剂”是指处于某种形式的制剂，该形式可允许活性成分的生物活性有效。“药学上可接受的辅剂”或“药学上可接受的载体”是一些物质，这些物质可以与一种或多种活性成分混合以形成一种药物，这种药物可以合理地(即安全地)给予受试者以提供所用活性成分的有效剂量。当提及特定人群时，术语“白人”指具有欧洲、中东或北非原住民血统的人；术语 “黑人”指具有非洲黑人种族血统的人；术语“美洲印第安人和阿拉斯加本地人”指具有北美和南美(包括中美)原住民血统的人；并且术语“亚洲人”指具有远东、东南亚或印度次大陆原住民血统的人。尽管与此处所描述的方法和材料相似或等同的方法和材料可以用于实践或测试本发明，以下描述了合适的方法和材料。所有在此提及的公开、专利申请、专利和其他参考文献的全部内容通过引用结合在此。当出现矛盾时，本说明书，包括定义，将起主导作用。另外，材料、方法和实例仅是说明行动，并且并不旨在限制于此。本发明的其他特征和优点从以下详细描述中以及从权利要求中非常明显。


具体实施例方式详细描述本发明涵盖多种方法、组合物和试剂盒，这些方法、组合物和试剂盒涉及选择一种预防性或治疗性Ab，这种Ab不太可能诱导或加重给予该Ab的受试者体内的抗-抗体反应。 可以选择用于给予受试者的Ab来匹配、或者至少更像该受试者内源性Ab的同种异型表型。 以下描述的优选的实施方式说明了这些组合物和方法的改写。尽管如此，从这些实施方式的描述中，可以基于以下提供的描述做出和/或实践本发明的其他方面。生物学方法在此说明了涉及常规免疫学和分子生物技术的方法。免疫学方法(例如，检测和定位抗原-Ab复合物的测定、免疫沉淀法、蛋白质印迹法等等)通常是本领域所已知的，并且在方法学论文中已有说明，例如《现代免疫学方案》(Current Protocols in Immunology), Coligan等人编辑，JohnWiley&Sons，纽约。分子生物技术在一些论文中进行了说明，例如，《分子克隆实验室手册》，第2版，第1-3卷，Sambrook等人编辑，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约，2001 ；以及《当代分子生物方案》，Ansubel等人编辑，Greene出版社和Wi ley-Inter science，纽约。Ab方法在《治疗性抗体手册》Dubel，S.编辑，Wiley-VCH， 2007中有所说明。细胞培养技术是通常本领域所已知的，并且在方法学论文中进行了说明， 例如《动物细胞培养基础技术手册》，第4版，R Ian Freshney.ffiley-Liss,Hoboken,N. J.， 2000 ；以及《细胞培养的综合技术》，Maureen A Harrison和Ian F Rae，剑桥大学出版社， 英国剑桥，1994。蛋白质纯化方法在《蛋白质纯化指南酶学方法》，第182卷，Deutscher M P编辑，学术出版社，加州圣地亚哥，1990，进行了讨论。受试者本发明的方法、组合物和试剂盒用于动物受试者，包括人和其他哺乳动物，例如猫、狗、小鼠、大鼠、兔子、绵羊、牛、马、山羊、猪、猴子和猿类。本发明对于以下受试者尤其有用，这些受试者具有可测量效价的AAAb (例如，大于每ml血清0.001、0.01、0.05、0. 1、0. 2、 0. 5或1 μ g的Ab)或具有发展成AAAb的高风险的受试者，例如受试者患有HAMA、HAHA、或与高效价的抗-抗体相关的病况(例如自身免疫性疾病，例如风湿性关节炎)；是怀孕的受试者；具有母源Ab的儿童(例如小于1岁的儿童)；已进行过输血的受试者；具有自然发生的AAAb的受试者；以及患有由于另一种治疗性Ab而产生的AAAb的受试者。抗体在此所说明的方法、组合物和试剂盒可以使用或包括各种不同类型的Ab，包括 mAb、多克隆Ab、以及各种Ab片段(例如Fab片段、Fab，片段、和F(ab，)2片段)、或者工程化处理的Ab (例如单链抗体、和使用Fab表达文库产生的分子)，这些Ab (i)在至少一个 (例如2、3、4、5或更多)同种异型决定簇的位置保留了一个内源性氨基酸序列，(ii)包括来自不具有同种异型变体的重链和/或轻链Ig的氨基酸序列，和/或(iii)包括来自定义一个同族同种异型或非标记物的重链和/或轻链Ig的氨基酸序列。W040]MAb是对抗一种特定抗原的同一种抗体，可以使用标准杂交瘤技术制备 (参见例如 Kohler et al.，Nature 256 :495，1975 ；Kohler et al. ；Eur. J. Immunol. 6 511,1976 ；Kohle et al. ,Eur. J. Immunol. 6 :292,1976 ；Hammerling et al. ,“ Monoclonal Antibodies and T Cell Hybridomas, “ Elsevier，N. Y.，1981 ;Ausubel 等人，同上)。尤其是，MAb可以通过以下技术来获得由培养的连续细胞系生产抗体分子的任何技术，例如在以下文献中所说明KohIer et al.，Nature 256 :495，1975，以及美国专利号4，376，110 ； 人B-细胞杂交瘤技术(Kosbor et al. , Immunology Today 4:72,1983 ；Cole et al. ,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80 :2026,1983)，以及 EBV-杂交瘤技术(Cole et al.，“ Monoclonal Antibodies and Cancer Therap y, “ Alan R. Liss， Inc. ，pp. 77—96，1983) 。 MAbiS^T以使用 Clackson，et al. ,Nature 352 :624-628(1991)以及 Marks，et al. ,J. Mol. Biol. 222 581-597(1991)中说明的技术从噬菌体抗体文库分离得到。产生mAb的细胞系可以在体外或在体内培养以产生大量mAb。多克隆Ab是经免疫的受试者的血清中所含有的不同Ab分子的群体、或不同mAb 的组合。多克隆抗体可以根据常规方法从经免疫的宿主动物收集血清来分离。从血清收集的多克隆抗体在同种异型方面通常是不同的，但是可用来制备具有同一同种异型决定簇的多克隆抗体，例如通过使用对同种异型决定簇具有特异性的已固定的Ab进行免疫亲和纯化。对抗一种目标抗原的单链Ab可以通过常规方法制备(例如美国专利号 4，946，778,4, 946，778和4，704, 692)，例如通过将一个Fv区域的重链和轻链片段经一个氨基酸桥而连接，得到一种单链多肽(scFv)。特异性地结合一个目标抗原的Ab片段还可以通过常规技术制备。例如，Fab片段可以通过木瓜蛋白酶消化一种全长Ig产生，F (ab’)2片段可以通过胃蛋白酶消化一种全长Ig分子产生，并且Fab’片段可以通过减少F(ab’ ) 2片段的二硫键产生。Fab表达文库可以通过已知的方法构建和筛选(例如Huse et al. ,Science 246:1275,1989)以产生具有所希望的特异性的单克隆Fab片段。双体(即二价Ab，其中 VH和VL结构域在一个单一多肽链上)可以通过已知的方法制备(例如Holliger P. et al.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA90 :6444-6448 (1993)禾口 Poljak R. J. et al.，Structure 2 1121-1123(1994))。包含与一个非抗体分子(例如一个细胞因子或细胞因子受体)融合的抗体部分(例如Ig重链部分)的免疫粘附素也可以在本发明中使用。Ab可以通过常规技术纯化，这些技术包括盐切(例如饱和硫酸铵沉淀法)、冷乙醇分馏(例如Cohn-Oncley冷乙醇分馏方法)、尺寸排阻色谱法、离子交换色谱法、免疫亲和层析法(例如，偶合了抗人Ig抗体的色谱珠可以用来分离人Ig)、蛋白A或蛋白G色谱法、 以及抗原亲和层析法。参见，例如Coligan等人，同上。免疫学和蛋白质化学的标准技术可以用于分析和处理Ab。例如，透析可以用来改变溶解Ab的媒介。Ab还可以被冻干用于保存。还可以使用几种标准方法中的任何一个来测试Ab结合特异性抗原的能力，这些方法例如蛋白质印迹法、免疫沉淀分析、酶联免疫吸附测定(ELISA)和放射性免疫测定(RIA)。参见例如Coligan等人，同上。在此说明的各种Ab可以与另一种分子(例如可检测的标签、细胞毒素剂或放射性同位素)偶联。可检测的标签的实例可以包括生色酶(例如过氧化物酶和碱性磷酸酶)、 放射性同位素(例如124I、125I、lllIn、99mTc、32P和35S)、生色团，生物素和发光或荧光染料(例如FITC、RITC、罗丹明、德克萨斯红、荧光素、藻红蛋白、掺杂染料的纳米微粒、以及量子点)，MR造影剂(例如超顺磁三氧化二铁(SPIO)和过超顺磁三氧化二铁(USPIO)。 细胞毒素剂的实例包括并不限于，放射性同位素(例如，35S、14C、32P、125I ；131I、90Y、 89Zr,201T, l、186Re、188Re、57Cu、213Bi和211At)，已偶联的放射性同位素，抗代谢药(例如5-氟尿嘧啶(5-FU)，甲氨蝶呤(MTX)、氟达拉滨等)，抗微管制剂(例如长春新碱，、长春碱，、秋水仙碱和紫杉烷类(例如紫杉醇和多西紫杉醇))，烷化剂(例如环磷酰胺、美法仑， 和卡氮芥(BCNU)，钼制剂(例如顺钼(也被称为cDDP)、卡钼、以及奥沙利钼)，蒽环类(例如多柔比星和柔红霉素)，抗生素制剂(例如丝裂霉素-C)，拓扑异构酶抑制剂(例如依托泊甙、替尼泊苷和喜树碱)，或其他细胞毒素剂，例如蓖麻蛋白、白喉毒素(DT)、假细胞菌外毒素(PE)A、PE40、相思豆毒蛋白、皂草素、美洲商陆病毒蛋白、溴化乙啶、糖皮质激素、炭疽毒素和其他物质。参见例如美国专利号5，932，188。靶抗原在此说明的Ab通常被选择来特异性地结合一种靶抗原，尽管非抗原特异性抗体， 例如所制备的静脉免疫球蛋白组合物匹配、或至少更像受试者内源抗体的同种异型表型， 也是在本发明的范围内。靶抗原的实例包括在一个细胞表面表达的分子；在一个细胞内表达的分子；存在于体液或组织内的分子；通过细菌、病毒或寄生虫表达的分子；药物；和毒物。这些包括但不限于粘附分子、⑶抗原，受体，细胞因子类，细胞因子受体，酶类，酶辅因素，或DNA结合蛋白，例如ApoE、Apo-SAA、BDNF、β淀粉样蛋白、CA125、心肌肌凝蛋白、 心脏营养素-1、癌症相关抗原、0)1(3-(3、认、10、比)、0)2、0)3(￥、δ、ε )、CD4、CD5、CD6、 CD7、CD8、CD9、CD10、CDll (a、b、c)、CD13、CD14、CD15、CD16 (A、B)、CD18、CD19、CD20、CD21、 CD22、CD23、CD24、CD25、CD26、CD27、CD28、CD29、CD30、CD31、CD32 (A、B)、CD33、CD34、CD35、 CD36、CD37、CD38、CD39、CD40、CD41、CD42 (a、b、c、d)、CD43、CD44、CD45、CD46、CD47、CD48、 CD49 (a、b、c、d、e、f)、CD50、CD51、CD52、CD53、CD54、CD55、CD56、CD57、CD58、CD59、CD61、 CD62 (E、L、P)、CD63、CD64 (A、B、C)、CD66 (a、b、c、d、e、f)、CD68、CD69、CD70、CD71、CD72、 CD73、CD74、CD78、CD79 (a、b)、CD80、CD81、CD82、CD83、CD84、CD85 (a、d、e、h、j、k)、CD86、 CD87、CD88、CD89、CD90、CD91、CD92、CD93、CD94、CD95、CD97、CD98、CD99、CD100、CDlOl、 CD102、CD103、CD104、CD105、CD106、CD107(a、b)、CD108、CD109、CD110、CD111、CD112、CD113、 CD114、CD115、CD116、CD117、CD118、CD119、CD120(a、b)、CD121(a、b)、CD122、CD123、CD124、 CD125、CD126、CD127、CD129、CD130、CD131、CD132、CD133、CD134、CD135、CD136、CD137、 CD138、CD 140b, CD141、CD142、CD143、CD144、CD146、CD147、CD148、CD150、CD151、CD152、 CD153、CD154、CD155、CD156(a、b、c)、CD157、CD158(a、d、e、i、k)、CD159(a、c)、CD160、 CD161、CD162、CD163、CD164、CD166、CD167 (a、b)、CD168、CD169、CD170、CD171、CD172 (a、b、 g)、CD174、CD177、CD178、CD 179 (a、b)、CD181、CD182、CD183、CD184、CD185、CD186、CD191、 CD192、CD193、CD194、CD195、CD196、CD197、CDw 198, CDw 199, CD200、CD201、CD202b、CD204、 CD205、CD206、CD207、CD208、CD209、CDw210 (a、b)、CD212、CD213a (1、2)、CD217、CD218 (a、 b)、CD220、CD221、CD222、CD222、CD224、CD225、CD226、CD227、CD228、CD229、CD230、CD233、 CD234、CD235(a、b)、CD236、CD238、CD239、CD240CE、CD241、CD243、CD244、CD246、CD247、CD248、CD249、CD252、CD253、CD254、CD256、CD257、CD258、CD261、CD262、CD264、CD265、 CD266、CD267、CD268、CD269、CD27、CD272、CD273、CD274、CD275、CD276、CD278、CD279、CD280、 CD281、CD282、CD283、CD284、CD286、CD288、CD289、CD290、CD292、CDw293、CD294、CD295、 CD297、CD298、CD299、CD300A、CD301、CD302、CD303、CD304、CD305、CD306、CD30、CD309、 CD312、CD314、CD315、CD316、CD317、CD318、CD320、CD321、CD322、CD324、CD325、CD326、 CD328、CD329、CD331、CD332、CD333、CD334、CD335、CD336、CD337、CD338、CD339、CD340、 CD344、CD349、CD350, CEACAM3、CGMU CMV 抗原，、补体(例如 C5)、CTLA4、地高辛、EGF、EGF 受体、ENA-78、内毒素、嗜酸细胞活化趋化因子、嗜酸细胞活化趋化因子-2、重组人次级非淋巴组织趋化因子(Exodus-幻、VII因子、FGF-酸性、FGF-碱性、纤维蛋白、成纤维细胞生长因子-10、FLT3 配体、FOLRl、趋化因子 CX3 (CX3C)、GCP-2、GD2 神经节苷脂、GDNF, G-CSF, GM-CSF、GF- β 1、GRO/MGSA、GRO- β、GRO- γ、HBV 抗原、HCV 抗原、HCCl、1-309、热激蛋白质、 HER1、HER2、HER3、HER4、疱疹病毒抗原、HIV 抗原、HLA、HMW-MAA, HSV 抗原、胰岛素、IFN- γ、 IgE、IGF-I、IGF-II、IGF-1R、IL-I α、IL_1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8 (72a. a.)、IL-8 (77a.a.)、IL-9、IL-10、IL-II、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18(IGIF)、 抑制素α、抑制素β、IP-IO、IRP-2、角化蛋白生长因子-2(KGF_2)、KGF、Lewis Y，、脂磷壁酸、瘦素、LIF、淋巴细胞趋化蛋白、溶菌酶、穆勒抑制物、单核细胞集落抑制因子、单核细胞吸引剂蛋白、M-CSF、MDC (67a. a.)、MDC (69a. a.)、MCP-I (MCAF)、MCP-2、MCP-3、MCP-4、 MDC (67a. a.)、MDC (69a. a.)、MIG、MIP-I α、MIP-I β、MIP—3 α、MIP—3 β、MIP—4、MUCl、骨髓祖代抑制因子-1 (MPIF-I)、NAP-2、NCA 90、神经生长因子(Neurturin)、神经生长因子、 β -NGF, ΝΤ-3、ΝΤ-4、制癌蛋白 M、PDGF-AA, PDGF-AB, PDGF-BB, PF-4、磷脂酰丝氨酸、PSA、 PSCA、PSMA、狂犬病病毒抗原、RANTES, RSV, SDFl α、SDFl β、SCF, SCGF、干细胞因子(SCF)、 TACSTDU TAG 72、TARC, TACE 识另Ij位点、、TGF-α、TGF-β、TGF-β 2、TGF-β 3、月中瘤坏死因子(TNF)、TNF-α、TNF-β、TNF 受体 I (p55)、TNF 受体 II、TNIL-U TPO, TRAIL-Rl、VEGF、 VEGF-A, VEGF受体1、VEGF受体2、VEGF受体3、以及前述的受体。莫罗单抗-CD3、依决洛单抗、托西莫单抗、阿昔单抗、利妥昔单抗、巴利昔单抗、英夫利昔单抗、西妥昔单抗、达珠单抗、帕利珠单抗、曲妥珠单抗、吉姆单抗、阿仑珠单抗、奥马佐单抗、依法珠单抗、贝伐单抗、 那他珠单抗、雷珠单抗、艾库组单抗、赛妥珠单抗、阿达木单抗、帕尼单抗、依那西普、阿来法塞、阿巴他塞、以及列洛西普也限定了本发明中有用的Ab的表位。Ig同种异型本发明的方法和组合物涉及特异性地匹配、或至少部分匹配(例如至少超过 50%、60%、70%、80%、90%、95%匹配)治疗性mAb的同种异型表型与受试者的同种异型表型。各种同种异型在本领域是已知的。表1(下面)列出了不同的人Ig等位基因。表 权利要求
1.一组含单克隆抗体的药物组合物，该组包括至少一个第一药物组合物，包括(a) — 种第一人类或人源化单克隆抗体和一种药学上可接受的载体以及(b) —种第二人类或人源化单克隆抗体和一种药学上可接受的载体，其中该第一单克隆抗体是一个第一同种型并且包括一个第一可变区，并且该第二单克隆抗体是该第一同种型并且包括该第一可变区， 并且其中该第一单克隆抗体包括一个第一重链同种异型表型并且该第二单克隆抗体包括不同于该第一重链同种异型表型的一个第二重链同种异型表型。
2.如权利要求1所述的含单克隆抗体的药物组合物的组，其中该组进一步包括(c)一种第三人类或人源化单克隆抗体和一种药学上可接受的载体，其中该第三单克隆抗体是该第一同种型，包括该第一可变区，并且包括不同于该第一和第二重链同种异型表型的一个第三重链同种异型表型。
3.如权利要求2所述的含单克隆抗体的药物组合物的组，其中该组进一步包括(d)— 种第四人类或人源化单克隆抗体和一种药学上可接受的载体，其中该第四单克隆抗体是该第一同种型，包括该第一可变区，并且包括不同于该第一、第二和第三重链同种异型表型的一个第四重链同种异型表型。
4.如权利要求1所述的单克隆抗体的组，其中该第一同种型是Yl。
5.如权利要求4所述的单克隆抗体的组，其中该第一重链同种异型表型包括人Glm3同种异型，并且该第二重链同种异型表型包括人Glml7同种异型。
6.如权利要求1所述的单克隆抗体的组，其中该第一同种型是Y3。
7.如权利要求6所述的单克隆抗体的组，其中该第一重链同种异型表型包括人G3m5同种异型，并且该第二重链同种异型表型包括人G3m21同种异型。
8.如权利要求6所述的单克隆抗体的组，其中该第一重链同种异型表型和该第二重链包括不同的同种异型表型，这些表型选自下组，其构成为G;3m5、10、ll、13、14J6、27 ； G3m21、26、27、28 ；G3ml0、11、13、15、27 ；G3ml0、11、13、15、16、27 ；G3m5、6、10、ll、14、26、27 ；和 G3m5、6、11、24、26。
9.一种修改人类或人源化单克隆抗体的方法，该方法包括修改该单克隆抗体的重链恒定区氨基酸序列的步骤，以便将其表型从一个第一自然发生的同种异型表型变为一个第二自然发生的同种异型表型，其中该单克隆抗体中不编码同种异型表型的氨基酸序列没有被修改。
10.如权利要求9所述的方法，其中该单克隆抗体是从Glml同种异型被变为nGlml同种异型的一种IgGl。
11.如权利要求9所述的方法，其中该单克隆抗体是从Glm3同种异型被变为Glml7同种异型的一种IgGl。
12.如权利要求9所述的方法，其中该第二自然发生的同种异型表型是一种同族同种异型或非标记物。
13.如权利要求9所述的方法，其中该单克隆抗体是从G2m23同种异型被变为nGaii23 同种异型的一种IgG2。
14.一种选择人类或人源化单克隆抗体用于给予人类受试者的方法，该方法包括以下步骤(a)确定该受试者内一种第一抗体同种异型表型的存在；并且(b)从一组人类或人源化单克隆抗体中选择一种有待给予至该受试者的单克隆抗体， 该组单克隆抗体包括至少含有该第一同种异型表型的一种第一单克隆抗体、以及含有一种并非内源性存在于该受试者体内的第二同种异型表型的一种第二单克隆抗体；并且(C)将该第一单克隆抗体给予该受试者。
15.如权利要求14所述的方法，其中该第一单克隆抗体不包含一种并非内源性存在于该受试者体内的同种异型表型。
16.如权利要求14所述的方法，其中该第一单克隆抗体是一种第一同种型并且包含一个第一可变区，并且该第二单克隆抗体是该第一表型并且包含该第一可变区。
17.如权利要求14所述的方法，其中该受试者患有风湿性关节炎。
18.如权利要求14所述的方法，其中该受试者之前已进行过异源输血。
19.如权利要求14所述的方法，其中该受试者是一位已经怀孕的女性。
20.如权利要求14所述的方法，其中该受试者是一位小于一岁的儿童。
21.如权利要求14所述的方法，其中该受试者之前已被给予一种包含该第二同种异型表型的抗体。
22.一种选择单克隆抗体用于给予至属于特定人群的人类受试者的方法，该方法包括以下步骤(a)确定包括该受试者的一个特定人群；(b)从一组人类或人源化单克隆抗体中选择一种单克隆抗体用于给予至该受试者，该组单克隆抗体包括至少含有在该特定人群中更加普遍的第一同种异型表型的一个第一单克隆抗体、以及在该特定人群中不如该第一同种异型表型普遍的第二同种异型表型的一个第二单克隆抗体；并且(c)将该第一单克隆抗体给予至该受试者。
23.如权利要求22所述的方法，其中该第一单克隆抗体包含在该特定人群中更加普遍的一个第一单倍型，并且该第二单克隆抗体包含在该特定人群中不如该第一单倍型普遍的一个第二单倍型。
24.如权利要求22所述的方法，其中该特定人群是白人人群。
25.如权利要求22所述的方法，其中该特定人群是黑人人群。
26.如权利要求22所述的方法，其中该特定人群是亚洲人群。
27.如权利要求22所述的方法，其中该受试者患有风湿性关节炎；之前已进行过异源输血；是一位已经怀孕的女性；或者是一位小于一岁的儿重。
28.如权利要求22所述的方法，其中该受试者之前已被给予一种包含该第二同种异型表型的抗体。
29.治疗已发展为针对一种第一人类或人源化单克隆抗体的抗-抗体反应的受试者的方法，该方法包括给予该受试者一种第二人类或人源化单克隆抗体，该单克隆抗体具有与该第一单克隆抗体相同的一个可变区、但是不同于该第一单克隆抗体的同种异型表型。
30.如权利要求四所述的方法，其中该抗-抗体反应的特征是在该受试者体内存在抗体，这些抗体特异性地结合至该第一单克隆抗体的同种异型决定簇上。
31.如权利要求四所述的方法，其中该第二单克隆抗体不包含并非内源性存在于该受试者体内的同种异型表型。
32.一种对受试者筛选存在抗体的方法，这些抗体特异性地结合至并非由该受试者内源性表达的一种同种异型决定簇上，该方法包括以下步骤(a)从该受试者获得一个生物样本；(b)用一个对该抗-同种异型决定簇具有特异性的探针接触该生物样本；并且(c)检测该探针与可能包含在该生物样本中的抗体的结合，作为该受试者含有特异性地结合并非由该受试者内源性表达的同种异型决定簇的抗体的指示。
33.如权利要求32所述的方法，其中该探针是包含并被由该受试者内源性表达的同种异型决定簇的一种抗体。
34.一种用于表征受试者同种异型表型的试剂盒，该试剂盒包括至少一种第一探针，该探针特异性地识别一个第一抗体同种异型决定簇，以及一个第二探针，该探针特异性地识别不同于该第一抗体同种异型决定簇的一个第二抗体同种异型决定簇；至少一个第一正控制，该正控制包括含有或编码该第一同种异型决定簇的一个第一分子，以及一个第二正控制，该正控制包括含有或编码该第二同种异型决定簇的一个第二分子；至少一个第一负控制，该负控制包括不含有或编码该第一同种异型决定簇的一个第三分子，以及一个第二正控制，该正控制包括不含有或编码该第二同种异型决定簇的一个第四分子；以及打印出的指示用于是用该试剂盒。
35.如权利要求34所述的试剂盒，其中该第一和第二探针是特异性地结合一个不同的同种异型决定簇的抗体，这些抗体选自下组，其构成为Glml、Glm2、Glm3、Glml7、G3m5, G3m6、G3ml0、G3mll、G3ml3、G3ml4、G3ml5、G3ml6、G3m21、G3m24、G3m26、G3m27、和 G3m28。
36.如权利要求35所述的试剂盒，其中该试剂盒进一步包括多个聚合酶链反应引物， 这些引物特异性地扩增不同的同种异型决定簇，这些不同的同种异型决定簇选自下组，其构成为Glml、Glm2、Glm3、Glml7、G3m5、G3m6、G3ml0、G3mll、G3ml3、G3ml4、G3ml5、G3ml6、 G3m21、G3m24、G3m26、G3m27、禾口 G3m28。
全文摘要
涉及选择一种预防性或治疗性抗体的方法、组合物和试剂盒，这些抗体不太可能诱导或加剧使用抗体的受试者的抗-抗体反应的。可以选择用于受试者的抗体来匹配，或者至少更加紧密地类似，受试者的内源抗体的同种异型表型。
文档编号A61K39/00GK102573895SQ201080046826
公开日2012年7月11日 申请日期2010年9月23日 优先权日2009年9月24日
发明者J·西马德 申请人:埃克斯生物科技公司